A dengue é uma doença infecciosa viral transmitida pela picada de mosquitos do gênero Aedes e é um importante problema de saúde pública mundial. A infecção por qualquer um dos quatro sorotipos (DENV 1-4) pode apresentar diferentes quadros clínicos: pode ser assintomática, causar uma síndrome febril indiferenciada, ou a febre da dengue (DF), a evolução do quadro clínico pode levar a dengue hemorrágica com ou sem choque (DHF/DSS). Um número crescente de casos de infecção por dengue em crianças têm sido observados nos últimos anos. Estudos de prevalência da dengue em regiões endêmicas são importantes para avaliar a incidência da infecção por dengue em crianças. Assim, o objetivo deste estudo é investigar a prevalência de anticorpos anti-dengue IgM e IgG em crianças atendidas no Centro de Saúde Escola Dr. Edgard Aché, localizado na região oeste de Ribeirão Preto-SP. Crianças (n = 271) de 1-15 anos de idade foram recrutadas de março de 2010 até maio de 2011. Depois de um termo de consentimento ter sido assinado pelo responsável, uma amostra de sangue das crianças, participantes deste estudo, foi coletada. As crianças foram classificadas em assintomáticas (n= 174) ou sintomáticas (n = 97), quando estas apresentavam um ou mais de um sintoma sugestivo de dengue, de acordo com critérios da Organização Mundial de Saúde. Anticorpos IgM e IgG anti-dengue foram detectado nas amostras de soro por um ELISA de captura padronizado em nosso laboratório. O ELISA de captura para IgG mostrou uma positividade de 9,23% (25/271) e o ELISA de captura para IgM de 8,49% (23/271). O ELISA de captura para IgG foi positivo em 10,31% (10/97) das crianças sintomáticas e 8,62% (15/174) das crianças assintomáticas, enquanto que o ELISA de captura para IgM foi positivo em 15,46% (15/97) das crianças sintomáticas e 4,6% (8/174) em crianças assintomáticas. Este estudo mostrou a alta prevalência de anticorpos anti-dengue em crianças da região oeste do município de Ribeirão Preto; mostrou também que a infecção pode ser causada de forma assintomática, e que a infecção por este vírus pode ser um grave problema de saúde nesta população, servindo como um alerta às autoridades de saúde. / Dengue is an infectious viral disease transmitted by the biting of mosquitoes of Aedes genus and it is an important public health problem worldwide. Infection with any of the four serotypes (DENV 1-4) may be asymptomatic or causes illness ranging from mild viral syndrome, dengue fever (DF) to dengue hemorrhagic fever (DHF). An increasing number of dengue infection cases in children have been noted in the last years. A dengue surveillance study might be an important tool in endemic region to evaluate the incidence of dengue infection in children. Thus, the aim of this study was to investigate the prevalence of anti-dengue IgM and IgG antibodies in children in the Primary Health Care Center, Dr. Edgard Aché, located in the west region of Ribeirão Preto-SP. Children (n=271) from 1 to 15 years old were recruited during March 2010 until May 2011. After a signed consent by the person responsible for the children to participate in this study, a blood sample was collected. The children were classified in asymptomatic (n=174) or symptomatic (n=97) when they had more than one symptom suggestive of dengue according to the World Health Organization criterions. Anti-dengue IgM and IgG were detected in serum samples by a capture ELISA standardized in our laboratory. IgG capture ELISA was positive in 9,23% (25/271) and IgM capture ELISA in 8,49% (23/271) of the children. IgG capture ELISA was positive in 10,31% (10/97) of the symptomatic children and 8,62% (15/174) in asymptomatic children; while IgM capture ELISA was positive in 15,46% (15/97) of symptomatic children and 4,6% (8/174) in asymptomatic children. This study showed the high prevalence of anti-dengue antibodies in children in the west region of Ribeirão Preto. In addition, a high prevalence of dengue-infected children without symptoms was observed. The present survey demonstrated that dengue virus infection might be a problem in children\'s from Ribeirão Preto city and serve as an alert to the health authorities.

Arboviroses são grave problema de saúde pública no Brasil e destas destacam-se aquelas causadas por Flavivírus, dos quais onze já foram descritos no Brasil. Destes, dois importantes em saúde pública, e que pertencem ao sorocomplexo da Encefalite Japonesa, são o vírus da encefalite de Saint Louis (SLEV) e o Rocio (ROCV). O vírus Oeste do Nilo (WNV), introduzido no continente americano em 1999, ainda não foi detectado no Brasil, contudo sua introdução é muito provável. Neste estudo, avaliou-se a circulação de SLEV, ROCV e WNV em cavalos, por tentativas de isolamento viral e inquérito soro-epidemiológico. As tentativas de isolamento viral, em 11 tecidos cerebrais de cavalos do estado da Paraíba, resultaram negativas. O inquérito sorológico, por IgG-ELISA tendo como antígeno peptídeos recombinantes do domínio III da proteína de envelope de SLEV, WNV e ROCV, foi utilizado em 753 soros de animais dos estados de São Paulo, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Rio de Janeiro e Paraíba. Soros de 271 cavalos foram positivos para SLEV (35,98%), 254 para WNV (33,73%) e 144 para ROCV (19,12%). Portanto, o ELISA mostrou-se adequado, diagnosticando infecções prévias por estes Flavivírus. Também, observou-se intensa circulação destes vírus infectando cavalos nos locais de estudo. Ainda, obteve-se, pela primeira vez, evidencia de que WNV foi introduzido no Brasil e encontra-se a infectar cavalos nos estados pesquisados exceto Minas Gerais. Finalmente, o inquérito sorológico em cavalos mostrou-se uma abordagem adequada à vigilância das flaviviroses por SLEV, ROCV e WNV no Brasil. / Arboviruses are a serious public health problem in Brazil and, from these, the most important are caused by Flavivirus. Eleven Flavivirus have been described in Brazil. Of these, Saint Louis Encephalitis Virus (SLEV) and Rocio Virus (ROCV) are major public health problems and belongs to the Japanese Encephalitis Serocomplex. West Nile Virus (WNV), introduced in the American continent in 1999, has not yet been detected in Brazil. In this study, it was evaluated the circulation of SLEV, WNV and ROCV in horses, by viral isolation attempts and a serosurvey. Viral isolation attempts were performed in 11 brain tissues of horses from Paraíba state with negative results. It was used for the serosurvey, an IgG-ELISA with recombinant peptides of domain III of SLEV, WNV and ROCV envelope protein as antigens. Sera from 753 animals from São Paulo, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Rio de Janeiro and Paraíba states were tested, and 271 of them were positive for SLEV (35,98%), 254 for WNV (33,73%) and 144 for ROCV (19,12%). Therefore, this ELISA has been a suitable approach for diagnosis of ancient infections by these viruses. An intense circulation of flaviviruses infecting horses was observed in the study sites. Besides, it was found, for the first time, the presence of WNV in Brazil, infecting horses from all the studied states with the only exception of Minas Gerais. Finally, serosurvey in horses proved to be an appropriate approach for surveillance of Flavivirus infections by SLEV, WNV and ROCV.

CAVALHEIRO, N.P. Análise dos sorotipos do VHC identificados em pacientes da cidade de São Paulo, através de método imunoenzimático. São Paulo, 1999. 97p. Dissertação de mestrado - Faculdade de Medicina, Universidade de São Paulo. Com o objetivo de analisar a prevalência dos diferentes tipos do vírus da Hepatite C (VHC) em uma população de pacientes portadores crônicos do VHC, através de um método sorológico (MUREX HCV Serotyping Assay), foram estudados 219 pacientes, que apresentaram positiva a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), nested-PCR. Estes soros foram submetidos ao teste imunoenzimático para detecção dos anticorpos contra os tipos 1,2,3,4,5,6 do VHC. As amostras foram diluídas e incubadas na presença de peptídeos heterólogos de competição, com antígenos sorotipo-específicos do VHC. Dos 219 pacientes, foi possível detectar o sorotipo do VHC em 166, revelando uma sensibilidade de 75,8%. Os resultados apresentaram a predominância do tipo 1 (70,0%) em nosso meio, seguido pelo tipo 3 (22,3%) e tipo 2 (4,2%). Os sorotipos 4 e 5 estiveram presentes para 1,8% dos pacientes, sempre associados com o sorotipo 1. Estas amostras, apesar de cumprirem os quesitos de validade do teste, apresentaram leituras de Densidade Ótica muito altas para todos os tipos virais testados, inclusive controles positivo e negativo e a possibilidade de reações cruzadas, nestes casos, deve ser considerada. A confirmação por genotipagem e uma investigação mais detalhada sobre a procedência e formas de aquisição do VHC destes pacientes devem ser pesquisados. O tipo 6 não foi confirmado em nenhuma das amostras testadas e provavelmente não estava presente nesta coleção de amostras avaliadas. Os parâmetros epidemiológicos avaliados foram: idade, sexo e vias de transmissão. Dos 166 pacientes com diagnóstico para o tipo do VHC, 108 (65,1%) eram homens e 58 (34,9%) mulheres. A idade dos pacientes variou de 12 a 73 anos (média 41,1). As formas de transmissão mencionadas foram 52 (31,3%) transfusão de sangue, 18 (10,8%) uso de drogas injetáveis, 8 (4,8%) tatuagens, 6 (3,6%) provável via sexual, 3 (1,8%) acidente com agulha, 2 (1,2%) trabalho em área de saúde, 1 (0,6%) acupuntura, 1 (0,6%) hemofílico. Sessenta e um pacientes (36,7%) não apresentaram fatores de risco que justificassem a aquisição da infecção pelo VHC. Não foi verificada diferença significativa entre os tipos do VHC encontrados e os parâmetros epidemiológicos estudados. A predominância dos tipos 1, 3 e 2 é compatível com outros estudos, de genotipagem, que envolveram amostras brasileiras, particularmente da cidade de São Paulo. As amostras que apresentaram leituras de Densidade Ótica altas ou baixas, para todos os poços de uma mesma amostra testada, inclusive controles positivo e negativo, sugerem a possibilidade de reações inespecíficas ou cruzadas e devem ser confirmadas por outras técnicas de genotipagem ou seqüenciamento. A praticidade oferecida pelo teste de sorotipagem do VHC, apesar de não identificar os subtipos, pode ser útil na prática clínica e auxiliar no prognóstico da doença, não necessitando da tecnologia exigida pelos testes que envolvem biologia molecular. / CAVALHEIRO, N.P. Analysis of serotypes of HCV in patients from the city of São Paulo, by means of a enzyme-immunoassay method. São Paulo, 1999. 97p. Dissertação de Mestrado - Faculdade de Medicina, Universidade de São Paulo. With the objetive of analysing the prevalence of the different types of Hepatitis C Virus (HCV) in a population of chronic carriers of HCV, through a sorologic method (MUREX HCV Serotyping Assay), 219 patients were studied who showed a positive polymerase chain reaction. This sera were submitted to immunoenzimatic tests for the detection of antibodies in relation to HCV types 1, 2,3,4,5 and 6. The samples were diluted and incubated in the presence of heterologous competing peptides, with microwells coated with serotype-specific antigens of HCV. Of the 219 patients, it was possible to detect the HCV serotype in 166, revealing a sensitivity of 75.8%. The results showed a predominance of type 1 (70.0%) in our medium, followed by type 3 (22.3%) and type 2 (4.2%). Serotypes 4 and 5 were present in 1.8% of the patients, but always associated with serotype 1. These samples, in spite of fulfilling the prerequisites of validity for testing, showed a very high optical density reading for all types of viruses tested, including positive and negative controls. The possibility of cross reactions in these cases should be considered. Confirmation by genotyping and a more detailed investigation on the origin and mode of acquisition of the HCV of these patients should be researched. Type 6 was not confirmed in any of the samples tested and probably was not present in this particular collection. The epidemiological parameters evaluated were: age, sex and means of transmission. Of the 166 patients diagnosed with the HCV, 108 (65.1%) were men and 58 (34.9%) were women. The age of the patients varied from 12 to 73 years, the average being 41.1 years. The means of transmission mentioned were blood transfusion in 52 (31.3%) cases, intravenous drug use in 18 (10.8%) cases, by tatoos in 8 (4.8%) cases, 6 (3.6%) cases were sexually transmitted, 3 (1.8%) were by accident with a needle, 2 (1.2%) through work in the health field, one (0.6%) through acupunture and one by being hemophiliac. Sixty one (36.7%) patients were not able to offer any risk factor which justified the acquisition of the HCV infection. No significant difference was verified among the different types of HCV found and the different epidemiological parameters studied. The predominance of types 1, 3 and 2 is compatible with other genotyping studies which involved Brazilian samples, particularly in the city of São Paulo. The samples which showed high or low dense optical reading for all the wells of the same samples tested even the positive or negative controls, suggested confirmation by sequecing or genotyping. The praticality obtained by the HCV serotyping test, in spite of the fact that it does not identify the sub type, can be useful in clinical pratice and helpful in the prognostication of the disease, not needing the tecnology demanded by the tests which involve molecular biology.

Os leucotrienos (LTs) e as citocinas são mediadores inflamatórios produzidos durante a sepse e que podem apresentar uma tarefa moduladora na secreção de arginina-vasopressina (AVP). Na fase aguda da sepse as concentrações plasmáticas de AVP encontram-se aumentadas e na fase tardia em níveis basais, apesar da hipotensão progressiva. Nosso objetivo foi analisar o efeito da injeção intraperitoneal de MK-886, (inibidor da síntese de leucotrienos), sobre a produção de LTs e de citocinas no sítio infeccioso e plasma de animais sépticos. Foram usados ratos Wistar que receberam injeções intraperitoneais de MK-886 (4mg/kg) ou veículo (DMSO 5%) 1h antes da indução de sepse experimental por ligadura e perfuração cecal (CLP) ou da operação fictícia (OF). Os animais foram decapitados 0, 4 e 24h após CLP ou OF. O sangue foi coletado para a determinação do sódio sérico, hematócrito, citocinas, LTB4. O lavado peritoneal foi coletado para dosagem de citocinas. O hipotálamo foi removido e incubado para a análise de cis-LTs. O sódio sérico diminuiu, o hematócrito aumentou e os cis-leucotrienos hipotalâmicos não apresentaram alterações significantes após 4 horas de CLP. A sepse provocou um aumento nas concentrações de TNF-a, no sítio infeccioso, mas não foi detectada no plasma. As citocinas IL-1b e a IL-6 aumentaram em 4 horas tanto no sítio infeccioso como no plasma. A análise dos resultados de LTB4 plasmático mostrou uma diminuição das concentrações 24 horas após o CLP. A administração do MK-886 não modificou o sódio, o hematócrito e aparentemente nem os cis-leucotrienos hipotalâmicos. No sítio infeccioso a droga causou um aumento nas concentrações de TNF-a 4 e 24 horas enquanto as de IL-1b não se modificaram e as de IL-6 aumentaram apenas 4 horas após o CLP. Entretanto, no plasma, a droga diminuiu acentuadamente as concentrações tanto de IL-1b como de IL-6. A análise do LTB4 plasmático mostrou efeito da droga em 4 horas, mas não em 24 horas da sepse. Os resultados deste estudo sugerem que os LTS regulam de maneira diferente a produção de citocinas no plasma e no foco infeccioso e podem explicar os efeitos destes mediadores sobre a secreção de AVP durante a sepse. / Leukotrienes (LTs) and cytokines are inflammatory mediators produced during sepsis and may have a task in modulating the secretion of vasopressin (VP). In the acute phase of sepsis, the plasma AVP concentrations are increased and in the late stage at basal levels, despite the progressive hypotension. Our goal was to analyze the effect of intraperitoneal injection of MK-886 (leukotriene synthesis inhibitor) on the production of LTs and cytokines in the infectious site and plasma of septic animals. We used Wistar rats that received intraperitoneal injection of MK-886 (4.0mg/kg) or vehicle (DMSO 5%) 1 h before induction of experimental sepsis by cecal ligation and puncture (CLP) or sham operation (OF).The animals were decapitated at 0, 4 and 24 h after surgeries and blood was collected for determination of serum sodium, hematocrit, cytokines and LTB4. The peritoneal fluid was collected for cytokine assay. The hypothalamus was removed and incubated for the analysis of cis-LTs. Serum sodium decreased, hematocrit increased and hypothalamic cis-leukotrienes did not show significant changes after 4 hours of CLP. Sepsis caused increase in the TNF-a concentrations in the site of infection, but was not detected in plasma. The cytokines IL-1b and IL-6 increased by 4 hours both in the plasma as in the site of infection. The results of LTB4 showed a decrease in plasma concentrations 24 hours after CLP. The administration of MK-886 did not alter sodium, hematocrit, and apparently neither the cis-hypothalamic leukotrienes. At the site of infection the drug caused an increase in the concentrations of TNF-a 4 and 24 hours while IL-1b remained unchanged and IL-6 increased only 4 hours after CLP. However, in the plasma the drug markedly diminished the concentrations of IL-1b and IL-6. The analysis of LTB4 in plasma showed effects of the drug in 4 hours but not 24 hours of sepsis. The results of this study suggest that LTs differentially regulate the cytokine production in the plasma and in the site of infection, and may explain the effects of these mediators in AVP secretion during sepsis.

Pasteurella multocida é um importante patógeno para suínos, causando rinite atrófica progressiva, pneumonia, pleurite, e septicemia. Para implantação de estratégias de controle e prevenção desta infecção, torna-se necessário o conhecimento a respeito do perfil de disseminação do agente em condições naturais e em diferentes tipos de sistema de produção. Tendo em vista a inexistência de técnicas sorológicas padronizadas para esta finalidade na espécie suína, o presente estudo teve por objetivos avaliar em um grupo de 90 animais a influência de diferentes sítios de coleta de amostra na detecção de animais portadores de P. multocida através da PCR e comparar estes dados a detecção de anticorpos na espécie suína através de um kit de ELISA comercial registrado para detecção de anticorpos contra P. multocida em aves. Foram coletados suabes de cavidade nasal, suabes de tonsila e sangue de 90 animais em idade de abate provenientes de dois sistemas de produção de suínos. Dentre os 90 animais, 14 (15,55%) foram positivos para detecção de P. multocida em suabes nasais e nenhum foi positivo em suabe de tonsila. Através do ELISA, 25 (27,77%) animais apresentaram anticorpos contra o agente. Através da análise de comparação de proporção, houve diferença significativa em relação à metodologia de diagnóstico nos diferentes testes realizados considerando-se valor de p < 0,0001 e intervalo de confiança de 95%. Ou seja, a freqüência de positivos foi significativamente maior no teste de ELISA, seguido pela reação em cadeia pela polimerase em suabes nasais, sugerindo que a cavidade nasal é o sitio primário de colonização dos animais por este agente e que o ELISA testado pode ser facilmente adaptado para avaliação do perfil sorológico do agente na espécie suína. / Pasteurella multocida is an important pathogen for pigs, causing progressive atrophic rhinitis, pneumonia, pleurisy, and septicemia. For implementation of strategies to control and prevent infections, it is necessary to know about the profile of agent spread in natural conditions and in different types of production system. Given the lack of standardized serological techniques for this purpose, this study aims to evaluate the influence of different methods and sites of sample collection in the detection of animals with P. multocida by polymerase chain reaction (PCR) and ELISA. We evaluated different pairs of primers specific for the agent and the reaction that have lower detection threshold will be used in the evaluation of the study sites. Swabs were collected from the nasal cavity, tonsil and also blood of 90 animals. Among these, 14 (15.55%) were positive for Pasteurella multocida by polymerase chain reaction (PCR), all of which were nasal swabs. There are no positive animals among the tonsil swabs. In the ELISA, 25 (27.77%) were positive, and of these, three (3.33%) were positive in both the polymerase chain reaction and the ELISA and the remaining 22 (24.44%) was positive by ELISA and negative by polymerase chain reaction. Using comparison of proportion analysis, was observed a significant differences in the methodology of diagnosis in different tests considering p-value <0.0001 and a confidence interval of 95%. Concluding, the frequency of positives was significantly higher in ELISA than by the polymerase chain reaction.

O gênero Candida acomete cerca de 80% das infecções fúngicas no ambiente hospitalar e constitui causa relevante de infecções na corrente sangüínea. Espécies de Candida não-albicans respondem atualmente por pelo menos 50% das infecções invasivas por Candida spp, apresentando peculiaridades em termos clínicos e suscetibilidade a drogas antifúngicas. A mortalidade geral de fugemias por Candida spp é da ordem de 40-60%, tornando esta complicação infecciosa um grande desafio aos clínicos. O objetivo deste estudo foi a padronização de um ensaio imuno-enzimático (ELISA) para o diagnóstico de infecções hematogênicas devido a Candida spp. Vinte e cinco soros de pacientes com candidemia obtidos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e trinta e dois soros de indivíduos hígidos obtidos do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisados. Foram utilizados os extratos protéicos totais de Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis e Candida krusei como antígenos. Nossos resultados demonstraram reatividade cruzada entre as espécies bem como alguns resultados falsonegativos. Estes resultados falso-negativos podem ser devido a resposta imune do paciente estar atrasada, diminuída ou ausente. Isto pode ser melhorado com amostras seriadas do mesmo paciente. Os resultados falso-positivos podem ser minimizados selecionando-se antígenos específicos apropriados, moléculas purificadas ou antígenos recombinantes. / Candida spp is associated to almost 80% of all nosocomial fungal infections and is considered a major cause of blood stream infections. This yeast is the fourth most common cause of blood stream infections in the United States, where this agent is responsible for 8% of all invasive infections documented in this site and the crude mortality rate is between 40 and 60%. At the present, non-albicans species are related to at least 50% of all invasive infections due to Candida spp and they present differences in terms of clinical outcome as well as susceptibility to antifungal drugs. Nevertheless, the hematogenous infections due to Candida spp diagnosis remain an important challenge for all clinicians. The objective of this study was the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to diagnose hematogenous infections due to Candida spp. Twenty five sera of patients with candidaemia from Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a general tertiary care hospital in Southern Brazil and thirty two sera from healthy people from Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul were analyzed. As antigens for ELISA, protein extracts from Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis and Candida krusei were used. Our results had demonstrated cross-reactivity between species as well as some false-negatives. These false-negatives may be due to a delayed, reduced or absent antibody response, which might be improved increasing the number of samples tested. The false-positives can be improved by selecting more appropriate specific antigens, as purified molecules or recombinant antigens.

O gênero Candida acomete cerca de 80% das infecções fúngicas no ambiente hospitalar e constitui causa relevante de infecções na corrente sangüínea. Espécies de Candida não-albicans respondem atualmente por pelo menos 50% das infecções invasivas por Candida spp, apresentando peculiaridades em termos clínicos e suscetibilidade a drogas antifúngicas. A mortalidade geral de fugemias por Candida spp é da ordem de 40-60%, tornando esta complicação infecciosa um grande desafio aos clínicos. O objetivo deste estudo foi a padronização de um ensaio imuno-enzimático (ELISA) para o diagnóstico de infecções hematogênicas devido a Candida spp. Vinte e cinco soros de pacientes com candidemia obtidos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e trinta e dois soros de indivíduos hígidos obtidos do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisados. Foram utilizados os extratos protéicos totais de Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis e Candida krusei como antígenos. Nossos resultados demonstraram reatividade cruzada entre as espécies bem como alguns resultados falsonegativos. Estes resultados falso-negativos podem ser devido a resposta imune do paciente estar atrasada, diminuída ou ausente. Isto pode ser melhorado com amostras seriadas do mesmo paciente. Os resultados falso-positivos podem ser minimizados selecionando-se antígenos específicos apropriados, moléculas purificadas ou antígenos recombinantes. / Candida spp is associated to almost 80% of all nosocomial fungal infections and is considered a major cause of blood stream infections. This yeast is the fourth most common cause of blood stream infections in the United States, where this agent is responsible for 8% of all invasive infections documented in this site and the crude mortality rate is between 40 and 60%. At the present, non-albicans species are related to at least 50% of all invasive infections due to Candida spp and they present differences in terms of clinical outcome as well as susceptibility to antifungal drugs. Nevertheless, the hematogenous infections due to Candida spp diagnosis remain an important challenge for all clinicians. The objective of this study was the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to diagnose hematogenous infections due to Candida spp. Twenty five sera of patients with candidaemia from Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a general tertiary care hospital in Southern Brazil and thirty two sera from healthy people from Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul were analyzed. As antigens for ELISA, protein extracts from Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis and Candida krusei were used. Our results had demonstrated cross-reactivity between species as well as some false-negatives. These false-negatives may be due to a delayed, reduced or absent antibody response, which might be improved increasing the number of samples tested. The false-positives can be improved by selecting more appropriate specific antigens, as purified molecules or recombinant antigens.

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They are notifiable diseases and according to estimates, billions of people have had contact with the hepatitis and millions are chronic carriers. Infection with hepatitis C virus (VHC) is a major problem worldwide public health due to the high rate of progression to chronicity, the evolutionary potential for cirrhosis and hepatocellular carcinoma, major complications leading to death. In general it can be said that in the last decade there have been major advances in the diagnosis of hepatitis C. In this period there was progressive improvement in sensitivity and specificity of the tests used to detect antibodies against the VHC virus. However, it is necessary that more accurate tests are developed. Thus, considering that the concern for the detection of hepatitis C increases every day, especially in blood banks; the diagnostic methods of this infection are of great clinical relevance and may be used as markers chronicity and indicative of therapeutic efficacy. Therefore, this work proposed to evaluate the connection and recognition of anti-VHC antibody positive and positive genotyped samples in patients with hepatitis C through the standardization of procedures and solutions used in qualitative ELISA. There was the process of awareness of microplates with recombinant chimeric protein, made the analysis of sensitivity, specificity, reproducibility and validity of the method. We obtained from ELISA assays with standardized recombinant proteins a protocol able to have a good performance of the main components of the reaction, and antigens conjugated with good resolution. This study presented ELISA results valid 95.69%, 100% reproducibility, 94.5% sensitivity and specificity 99.3%, higher than the ELISA performed with multiepitopo protein MEHCV who presented with sensitivity (92.86%) and specificity (82.89%). The standard ELISA can be used as a qualitative serological technique aimed at detection of anti-VHC antibodies, as demonstrated with great reactivity in patients infected with VHC. / As hepatites virais são um grave problema de saúde pública no mundo e no Brasil. São doenças de notificação compulsória e segundo estimativas, bilhões de pessoas já tiveram contato com vírus das hepatites e milhões são portadores crônicos. A infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) constitui um grave problema de saúde pública mundial devido à elevada taxa de progressão para cronicidade, ao potencial evolutivo para cirrose e carcinoma hepatocelular, principais complicações conducentes à morte. Em geral, pode-se dizer que na última década houve grandes avanços no diagnóstico da hepatite C. Nesse período houve progressiva melhora na sensibilidade e especificidade dos testes utilizados para detecção de anticorpos contra o vírus HCV. Contudo, é necessário que sejam desenvolvidos testes de maior acurácia. Assim, considerando que a preocupação com a detecção da hepatite C aumenta a cada dia, principalmente em bancos de sangue; os métodos diagnósticos desta infecção são de grande relevância clínica e podem ser utilizados como marcadores de cronicidade e indicativos da eficácia terapêutica. Portanto, esse trabalho propôs avaliar a ligação e reconhecimento dos anticorpos anti-HCV de amostras positivas e positivas genotipadas de pacientes portadores de Hepatite C, através da padronização dos procedimentos e soluções utilizadas no ELISA qualitativo. Realizou-se o processo de sensibilização das microplacas com proteína recombinante quimérica, fez-se a análise da sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade e validade do método. Obtivemos a partir dos ensaios de padronização do ELISA com proteínas recombinantes um protocolo capaz de ter um bom rendimento dos principais componentes da reação, antígenos e conjugado, com boa resolução. O presente estudo apresentou-se resultados do ELISA com validade 95,69% , reprodutibilidade 100%, sensibilidade 94,5% e especificidade 99,3%, superior ao ELISA realizado com a proteína multiepitopo MEHCV que apresentaram com sensibilidade (92,86%) e especificidade (82,89%). O ELISA padronizado pode ser utilizado como uma técnica sorológica qualitativa, visando a detecção de anticorpos anti-HCV, pois mostrou-se com ótima reatividade nos soros pacientes infectados com HCV.

Os leucotrienos (LTs) e as citocinas são mediadores inflamatórios produzidos durante a sepse e que podem apresentar uma tarefa moduladora na secreção de arginina-vasopressina (AVP). Na fase aguda da sepse as concentrações plasmáticas de AVP encontram-se aumentadas e na fase tardia em níveis basais, apesar da hipotensão progressiva. Nosso objetivo foi analisar o efeito da injeção intraperitoneal de MK-886, (inibidor da síntese de leucotrienos), sobre a produção de LTs e de citocinas no sítio infeccioso e plasma de animais sépticos. Foram usados ratos Wistar que receberam injeções intraperitoneais de MK-886 (4mg/kg) ou veículo (DMSO 5%) 1h antes da indução de sepse experimental por ligadura e perfuração cecal (CLP) ou da operação fictícia (OF). Os animais foram decapitados 0, 4 e 24h após CLP ou OF. O sangue foi coletado para a determinação do sódio sérico, hematócrito, citocinas, LTB4. O lavado peritoneal foi coletado para dosagem de citocinas. O hipotálamo foi removido e incubado para a análise de cis-LTs. O sódio sérico diminuiu, o hematócrito aumentou e os cis-leucotrienos hipotalâmicos não apresentaram alterações significantes após 4 horas de CLP. A sepse provocou um aumento nas concentrações de TNF-a, no sítio infeccioso, mas não foi detectada no plasma. As citocinas IL-1b e a IL-6 aumentaram em 4 horas tanto no sítio infeccioso como no plasma. A análise dos resultados de LTB4 plasmático mostrou uma diminuição das concentrações 24 horas após o CLP. A administração do MK-886 não modificou o sódio, o hematócrito e aparentemente nem os cis-leucotrienos hipotalâmicos. No sítio infeccioso a droga causou um aumento nas concentrações de TNF-a 4 e 24 horas enquanto as de IL-1b não se modificaram e as de IL-6 aumentaram apenas 4 horas após o CLP. Entretanto, no plasma, a droga diminuiu acentuadamente as concentrações tanto de IL-1b como de IL-6. A análise do LTB4 plasmático mostrou efeito da droga em 4 horas, mas não em 24 horas da sepse. Os resultados deste estudo sugerem que os LTS regulam de maneira diferente a produção de citocinas no plasma e no foco infeccioso e podem explicar os efeitos destes mediadores sobre a secreção de AVP durante a sepse. / Leukotrienes (LTs) and cytokines are inflammatory mediators produced during sepsis and may have a task in modulating the secretion of vasopressin (VP). In the acute phase of sepsis, the plasma AVP concentrations are increased and in the late stage at basal levels, despite the progressive hypotension. Our goal was to analyze the effect of intraperitoneal injection of MK-886 (leukotriene synthesis inhibitor) on the production of LTs and cytokines in the infectious site and plasma of septic animals. We used Wistar rats that received intraperitoneal injection of MK-886 (4.0mg/kg) or vehicle (DMSO 5%) 1 h before induction of experimental sepsis by cecal ligation and puncture (CLP) or sham operation (OF).The animals were decapitated at 0, 4 and 24 h after surgeries and blood was collected for determination of serum sodium, hematocrit, cytokines and LTB4. The peritoneal fluid was collected for cytokine assay. The hypothalamus was removed and incubated for the analysis of cis-LTs. Serum sodium decreased, hematocrit increased and hypothalamic cis-leukotrienes did not show significant changes after 4 hours of CLP. Sepsis caused increase in the TNF-a concentrations in the site of infection, but was not detected in plasma. The cytokines IL-1b and IL-6 increased by 4 hours both in the plasma as in the site of infection. The results of LTB4 showed a decrease in plasma concentrations 24 hours after CLP. The administration of MK-886 did not alter sodium, hematocrit, and apparently neither the cis-hypothalamic leukotrienes. At the site of infection the drug caused an increase in the concentrations of TNF-a 4 and 24 hours while IL-1b remained unchanged and IL-6 increased only 4 hours after CLP. However, in the plasma the drug markedly diminished the concentrations of IL-1b and IL-6. The analysis of LTB4 in plasma showed effects of the drug in 4 hours but not 24 hours of sepsis. The results of this study suggest that LTs differentially regulate the cytokine production in the plasma and in the site of infection, and may explain the effects of these mediators in AVP secretion during sepsis.

Arboviroses são grave problema de saúde pública no Brasil e destas destacam-se aquelas causadas por Flavivírus, dos quais onze já foram descritos no Brasil. Destes, dois importantes em saúde pública, e que pertencem ao sorocomplexo da Encefalite Japonesa, são o vírus da encefalite de Saint Louis (SLEV) e o Rocio (ROCV). O vírus Oeste do Nilo (WNV), introduzido no continente americano em 1999, ainda não foi detectado no Brasil, contudo sua introdução é muito provável. Neste estudo, avaliou-se a circulação de SLEV, ROCV e WNV em cavalos, por tentativas de isolamento viral e inquérito soro-epidemiológico. As tentativas de isolamento viral, em 11 tecidos cerebrais de cavalos do estado da Paraíba, resultaram negativas. O inquérito sorológico, por IgG-ELISA tendo como antígeno peptídeos recombinantes do domínio III da proteína de envelope de SLEV, WNV e ROCV, foi utilizado em 753 soros de animais dos estados de São Paulo, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Rio de Janeiro e Paraíba. Soros de 271 cavalos foram positivos para SLEV (35,98%), 254 para WNV (33,73%) e 144 para ROCV (19,12%). Portanto, o ELISA mostrou-se adequado, diagnosticando infecções prévias por estes Flavivírus. Também, observou-se intensa circulação destes vírus infectando cavalos nos locais de estudo. Ainda, obteve-se, pela primeira vez, evidencia de que WNV foi introduzido no Brasil e encontra-se a infectar cavalos nos estados pesquisados exceto Minas Gerais. Finalmente, o inquérito sorológico em cavalos mostrou-se uma abordagem adequada à vigilância das flaviviroses por SLEV, ROCV e WNV no Brasil. / Arboviruses are a serious public health problem in Brazil and, from these, the most important are caused by Flavivirus. Eleven Flavivirus have been described in Brazil. Of these, Saint Louis Encephalitis Virus (SLEV) and Rocio Virus (ROCV) are major public health problems and belongs to the Japanese Encephalitis Serocomplex. West Nile Virus (WNV), introduced in the American continent in 1999, has not yet been detected in Brazil. In this study, it was evaluated the circulation of SLEV, WNV and ROCV in horses, by viral isolation attempts and a serosurvey. Viral isolation attempts were performed in 11 brain tissues of horses from Paraíba state with negative results. It was used for the serosurvey, an IgG-ELISA with recombinant peptides of domain III of SLEV, WNV and ROCV envelope protein as antigens. Sera from 753 animals from São Paulo, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Rio de Janeiro and Paraíba states were tested, and 271 of them were positive for SLEV (35,98%), 254 for WNV (33,73%) and 144 for ROCV (19,12%). Therefore, this ELISA has been a suitable approach for diagnosis of ancient infections by these viruses. An intense circulation of flaviviruses infecting horses was observed in the study sites. Besides, it was found, for the first time, the presence of WNV in Brazil, infecting horses from all the studied states with the only exception of Minas Gerais. Finally, serosurvey in horses proved to be an appropriate approach for surveillance of Flavivirus infections by SLEV, WNV and ROCV.