Köln, Univ., Diss., 2004. / Dateiformat: tgz, Dateien im PDF-Format. Computerdatei im Fernzugriff.

Köln, Universiẗat, Diss., 2004. / Dateiformat: tgz, Dateien im PDF-Format.

La capture d'oligonucléotides (ON) par les cellules eucaryotes, considérée comme une étape limitante de leur efficacité, implique leur endocytose. Plusieurs publications ont rapporté une capture sélective d'ON, suggérant l'intervention de récepteurs de transport. Ma thèse de doctorat a donc visé à rechercher et à caractériser d'éventuelles protéines réceptrices pour les ON qui pourraient faciliter leur endocytose. Nous avons choisi dans ce but la lignée d'hépatocarcinome différencié HepG2, où l'endocytose d'ON a été démontrée par d'autres auteurs. J'ai d'abord développé une nouvelle méthode, le « ligand blotting », et identifié une protéine transmembranaire, qui lie spécifiquement les ON, et est partiellement exposée à la surface de la cellule, trois conditions nécessaires pour un candidat-récepteur. La purification de cette protéine a donc été entreprise et une séquence partielle a pu être obtenue, mais aucune homologie n'a été trouvée dans les banques de données et il n'a pas été possible de la cloner. J'ai ensuite étudié les propriétés de l'endocytose d'ON à faible concentration, pour éviter la confusion avec l'endocytose non spécifique, appelée endocytose fluide. Dans ces conditions, l'endocytose est saturable en fonction de la concentration du traceur, atteint un plateau après environ deux heures de capture, et est sensible aux mêmes compétiteurs que la liaison d'ON à la protéine « réceptrice » identifiée en « ligand blotting ». Ces propriétés sont compatibles avec celles de l'endocytose par récepteurs. Toutefois, après intériorisation, l'ON se retrouve essentiellement à la périphérie des cellules et ne co-localise pas avec la transferrine et le dextran, marqueurs classiques des endosomes et s'accumule dans des structures denses qui ne sont pas des lysosomes. Vers la fin de mon doctorat, j'ai mis en évidence, de manière tout à fait inattendue, que la présence de la protéine « réceptrice d'ON » est liée à une infection systématique de la lignée HepG2 par M. hyorhinis ; que cette protéine n'est autre que la protéine transmembranaire invariante (p70) de cette bactérie ; et que l'infection intentionnelle par M. hyorhinis d'une autre lignée cellulaire suffit à y augmenter fortement la capture d'ON. En conclusion, je propose l'hypothèse que la capture d'ON reflète la phagocytose de M. hyorhinis ayant fixé l'ON, et discute la signification de ces observations pour la biologie de l'infection non conventionnelle par cette bactérie.

Stuttgart, Univ., Diss., 2004.

Thesis (doctoral)--Rijksuniversiteit te Groningen. / Description based on print version record.

Universiẗat, Diss., 2003--Kassel.

Universiẗat, Diss., 2004--Bonn.

Techn. University, Diss., 2004--Dresden.

Techn. Hochsch., Diss., 2005--Aachen.

EGFR est un récepteur tyrosine kinase important dans la survie cellulaire et souvent impliqué dans différents cancers. Il a été montré que le calcium pouvait jouer un rôle dans la régulation de l'endocytose d'EGFR via la protéine à mains EF calmoduline. Calnuc est une protéine ubiquitaire possédant des mains EF et qui pourrait agir comme senseur de calcium. De plus, Calnuc pourrait être impliquée dans le cancer. Le but de l'étude était donc de déterminer si Calnuc joue un rôle dans l'endocytose d'EGFR. Le niveau d'expression de Calnuc a donc été modulé par surexpression ou par ARN interférence afin d'observer ses effets sur la dégradation et le triage intracellulaire d'EGFR. Des études d'immunobuvardage et d'immunofluorescence ont démontré que Calnuc module la dégradation d'EGFR suite à son endocytose. La diminution d'expression de Calnuc accélère le trafic intracellulaire d'EGFR vers les lysosomes, alors que la surexpression de Calnuc retarde EGFR au niveau des endosomes précoces. Des études de co-immunoprécipitation ont démontré que Calnuc interagit avec GGA2 et GGA3 et que l'interaction avec GGA3, une protéine clé dans la régulation d'EGFR, est inhibée par le calcium. Une étude d'immunofluorescence démontre que Calnuc régule le recrutement de GGA3 à EGFR aux endosomes précoces. Ces résultats démontrent que Calnuc est impliquée dans l'endocytose d'EGFR via une modulation de GGA3.