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Extração de genipina a partir do jenipapo (genipa americana linnaeus) para imobilização de enzimas / Extraction of genipin from genipap (genipa americana linnaeus) for enzymes immobilizationBellé, Anelise Stein January 2017 (has links)
O consumo e a utilização de produtos naturais, tanto para a alimentação quanto para utilização industrial é cada vez mais frequente. Assim, este trabalho teve como objetivo principal extrair um iridoide natural a partir do jenipapo, a genipina, a fim de empregá-la como agente de ativação em suportes de quitosana para imobilização de enzimas. Já que, dentre os agentes conhecidos este é o menos tóxico para este tipo de aplicação. Adicionalmente, foi iniciado um estudo para a construção de uma lactase recombinante visando a sua imobilização e síntese de prebióticos. Inicialmente, o jenipapo (Genipa americana L.), que pode possuir até 3 % de genipina disponível em seu fruto, foi submetido a diferentes condições de extração enzimática em um sistema aquoso bifásico (SAB). Com o intuito de compará-la com seu possível substituinte, o glutaraldeído, géis de quitosana foram produzidos e reticulados tanto com genipina quanto com glutaraldeído para avaliação das suas propriedades texturais e reológicas. Após, duas β-galactosidases modelos, de Kluyveromyces lactis e de Aspergillus oryzae, foram imobilizadas nos suportes de quitosana preparados a fim de avaliar a capacidade catalítica das enzimas imobilizadas O tratamento com a enzima comercial Celluclast à 10 % (v/v), a 36 °C e pH 3,7, promoveu a obtenção de 196 mg de genipina por grama de jenipapo – a maior concentração descrita na literatura. Quanto aos géis de quitosana reticulados, a utilização de 0,5 % de genipina (m/v) resultou em géis com propriedades texturais superiores e propriedades reológicas similares aos géis reticulados com 3 % de glutaraldeído (v/v). No geral, a hidrólise da lactose com a β-galactosidase de K. lactis imobilizada em quitosana ativada com 0,5 % de genipina (m/v) foi superior ao grau de hidrólise alcançada com as β-galactosidases imobilizadas em quitosana ativada com 3 % de glutaraldeído (v/v) (87 % e 9 %, respectivamente). Assim, a genipina extraída mostrou ser uma excelente substituta do glutaraldeído na ativação da quitosana e para utilização na imobilização de enzimas. Por fim, foi realizado o estudo para obtenção de uma β-galactosidase recombinante visando a síntese de galacto-oligossacarídeos (GOS). / The consumption and use of natural products, both for food or for industrial use is increasingly common. Thus, the main objective of this work was to extract a natural iridoid from genipap, genipin, in order to use it as an crosslinking agent in chitosan supports for immobilization of enzymes. Since, among the known agents, it is the least toxic for this type of application. In addition, a study was started for a construction of a recombinant lactase aiming at its immobilization and synthesis of prebiotics. Initially, which may have up to 3% genipin available in its fruit, was submitted to different enzyme-assisted extractions in an aqueous biphasic system (ABS). Moreover, in order to compare it with its possible substituent, glutaraldehyde, chitosan gels were prepared and crosslinked with genipin and glutaraldehyde for evaluation of their textural and rheological properties. Lastly, the crosslinked chitosan was used as support for the immobilization of two model β-galactosidases from Kluyveromyces lactis and Aspergillus oryzae, in order to evaluate their catalytic capacities. The treatment carried out with Celluclast 10 % (v/v), at 36 °C and pH 3.7, provided an extraction of 196 mg of genipin per gram of genipap - the highest genipin concentration found in literature until now Chitosan gels crosslinked with genipin 0.5 % (w/v) showed better textural and similar rheological properties when compared to the chitosan crosslinked with glutaraldehyde 3 % (v/v). In general, the percentage of lactose hydrolysis by the β-galactosidases from K. lactis immobilized using genipin as a crosslinker was higher than when glutaraldehyde was used (87 % and 9 %, respectively). Therefore, genipin proves to be an excellent alternative for the use of glutaraldehyde in chitosan crosslinking studies. Finally, a study was carried out to obtain a recombinant β-galactosidase for the synthesis of galactooligosaccharides (GOS).
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Fitase e fontes minerais para frangos de corte / Phytase and mineral sources to broiler chickensSerafini, Natália Chaves January 2018 (has links)
Um estudo foi realizado para avaliar os efeitos da suplementação de uma fitase e duas fontes de Zinco (Zn), Cobre (Cu) e Manganês (Mn) sobre o desempenho produtivo e a digestibilidade de nutrientes em frangos de corte. Um total de 528 pintos da linhagem Cobb 500, machos com um dia (d) de idade foram distribuídos em 4 tratamentos com 12 repetições de 11 aves cada. Um arranjo fatorial 2 x 2 foi utilizado, sendo duas suplementações de fitase (com ou sem) e duas fontes minerais (inorgânica ou orgânica). A suplementação de fitase foi de 500 unidades de fitase (FTU)/kg, enquanto Zn-Cu-Mn foram suplementados em concentrações de 32-30-32 ou 100-120-100 ppm para as formas orgânica e inorgânica, respectivamente. Foi utilizado um programa alimentar de duas fases: inicial (1 a 12 d) e crescimento (12 a 25 d). As dietas foram formuladas de forma a atender as exigências nutricionais dos animais de acordo com a idade, exceto para Fósforo (P) disponível (Pd) e Cálcio (Ca), que tiveram níveis reduzidos (0,32% e 0,77 % na dieta inicial e 0,23% e 0,71 % na dieta crescimento para Pd e Ca, respectivamente). Os níveis de metionina nas dietas foram reduzidos conforme a adição de minerais orgânicos, que tinham como agente quelante metionina hidróxi-análoga (HMTBA). As tíbias das aves foram coletadas aos 12 e aos 25 dias de idade para determinação do teor de cinzas, Ca e P Aos 25 dias, também, foi coletado conteúdo ileal para determinação da digestibilidade ileal aparente da matéria seca (MS), Ca e P. A suplementação de fitase aumentou o ganho de peso (GP) e a conversão alimentar (CA) dos frangos dos 12 aos 25 dias e também no período acumulado (1 a 25 d). Foi observada interação entre fontes minerais e as fitases para digestibilidade de MS e P (P<0,05). A digestibilidade ileal da matéria seca foi maior nos frangos alimentados com dietas suplementadas com fitase, e também naqueles que receberam fontes inorgânicas de Zn-Cu-Mn. Os frangos que receberam dietas com fitase tiveram melhores coeficientes de digestibilidade de Ca e P (P<0,05). A fonte orgânica de microminerais resultou em maior o conteúdo de tíbia em percentual aos 12 dias. A suplementação de 500 FTU/kg de fitase nas dietas à base de milho e soja também levou a um aumento no conteúdo de cinzas das tíbias aos 12 e 25 dias, mas não houveram diferenças entre o conteúdo de Ca e P entre os animais alimentados com e sem fitase. Conclui-se que a suplementação de fitase melhora o desempenho produtivo, digestibilidade ileal de Ca e P e a mineralização óssea, e que concentrações mais baixas de minerais, através do uso de fontes orgânicas, podem ser utilizadas sem prejuízos ao desempenho animal. / A study was conducted to evaluate the effects of dietary supplementation of phytase and mineral sources of zinc (Zn), copper (Cu) and manganese (Mn) on growth performance and nutrient digestibility of broiler chickens. A total of 528 Cobb x Cobb 500 male chicks were distributed into 4 treatments with 12 replicates of 11 birds each. A 2 x 2 factorial arrangement was used with two enzyme supplementation (with or without) and two mineral sources (inorganic or organic). Phytase supplementation were 500 phytase units (FTU)/kg whereas Zn-Cu-Mn were supplemented in a concentration of 32-30-32 or 100-120-100 ppm in organic and inorganic forms, respectively. A two-phase feeding program was used, from 1 to 12 (starter) and from 12 to 25 d (grower). Diets were formulated to meet bird’s nutritional requirements according to age, except for Available Phosphorus (Av.P) and Calcium (Ca), that were formulated at 0,32% and 0,77% in starter and 0,23% and 0,71% in grower, to Av P and Ca, respectively. Methionine levels were reduced according to organic minerals supplementation, that had hydroxy-analogue methionine (HMTBA) as the chelating agent. Tibiae were collected at 12 and 25 d to measure ash, Ca and P content Also, at 25 d, ileal contents were collected to determine apparent ileal digestibility of dry matter (DM), Ca and P. Body weight gain (BWG) and feed conversion ratio (FCR) was higher with phytase supplementation from 12 to 25 d and 1 to 25 d. Dry matter (DM) digestibility was higher in animals fed diets with phytase and also in those receiving inorganic minerals. Ca and P digestibility were improved by phytase. Interactions between mineral sources and enzyme were observed to DM and P digestibility. Treatment consisting of inorganic minerals and phytase was associated with higher values of P and DM digestibility. Organic mineral source improved ash content in percentage at 12 d. Supplementing phytase to the diets led to an increase in the percentage of ash content at 12 and 25 d, but there were no statistical differences in Ca and P content between animals receiving diets with or without the enzyme. In conclusion, phytase has benefitial impacts on performance, digestibility and bone mineralisation, and lower concentrations of minerals, with organic source, can be supplied without losses to animal performance.
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Síntese de análogos da Licarina A para investigação da atividade tripanocidaNelo, Romeu de Andrade January 2016 (has links)
Orientadora: Profª Drª Mirela Inês de Sairre / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2016. / In 1999, the natural product (-)-licarina A neolignan was isolated. Neolignans comprise a class of natural products with a great diversity of chemical structures and pharmacological activities, it is formed by coupling two units phenylpropanoids. This natural product has promising biological activity against the Trypanosoma cruzi and on the results, structure-activity relationship studies indicated the importance of obtaining new neolignans for investigation.
This work describes the synthesis of neolignan (±)-licarina A through the oxidative coupling reaction catalyzed by the enzyme horseradish peroxidase (horseradish peroxidase - HRP). The reactions were performed using a methodology focused on "Green Chemistry", using green coconut water (Cocos nucifera L.) as a natural source of HRP enzyme. The phenylpropanoids substrates, isoeugenol, ferulic acid and nitrostyrene were prepared. Initially extraction was performed eugenol from clove, followed by isomerization in methanol and catalytic amount of palladium chloride (PdCl2) for obtaining isoeugenol in 90% yield. The Knoevenagel reaction of vanillin and malonic acid afforded the ferulic acid in 72% yield. The phenylpropanoid nitrostyrene was obtained from 4-hydroxybenzaldehyde, ammonium acetate and nitromethane, using micro-wave with 70% yield. Then the compounds isoeugenol, ferulic acid and nitrostyrene were subjected to oxidative coupling, using hydrogen peroxide and coconut water as a source of HRP. In all reactions, coconut has been opened for the use of water at the time of the experiments, and the end of the process, excess water was removed by lyophilization, which afforded minor amount of solvent for extraction. The results were promising in the search for new molecules obtained by this methodology. Neolignans were obtained with gross revenues of 30%, 85% and 78%, respectively, and will later be submitted to biological tests in order to evaluate the trypanocidal activity. / Em 1999, o produto natural (-)-licarina A, uma neolignana, foi isolada. As neolignanas compreendem uma classe de produtos naturais com uma grande diversidade de estruturas químicas e atividades farmacológicas, sendo formadas pelo acoplamento de duas unidades fenilpropanoides. Este produto natural apresentou atividade biológica promissora frente ao Trypanosoma cruzi e, diante dos resultados, estudos de relação estrutura-atividade indicaram a importância de obtenção de novas neolignanas para serem investigadas. Este trabalho descreve a síntese da neolignana (±)-licarina A através da reação de acoplamento oxidativo catalisada pela enzima peroxidase de raiz forte (horseradish peroxidase ¿ HRP). As reações foram realizadas empregando uma metodologia voltada para a "Química Verde", utilizando a água de coco verde (Cocos nucifera L.) como fonte natural da enzima HRP. Os substratos fenilpropanoides, isoeugenol, ácido ferúlico e nitroestireno foram preparados. Inicialmente foi realizada a extração do eugenol a partir do cravo-da-índia, seguida de isomerização em metanol e quantidade catalítica de cloreto de paládio (PdCl2), para obtenção do isoeugenol com 90% de rendimento. A reação de Knoevenagel entre a vanilina e o ácido malônico permitiu obter o ácido ferúlico com 72% de rendimento. O fenilpropanoide nitroestireno foi obtido a partir do 4-hidroxibenzaldeído, acetato de amônio e nitrometano, utilizando micro ondas com 70% de rendimento. Em seguida, os compostos isoeugenol, ácido ferúlico e nitroestireno, foram submetidos ao acoplamento oxidativo, utilizando peróxido de hidrogênio e água de coco como fonte de HRP. Em todas as reações, o coco foi aberto para a utilização da água no momento da realização dos experimentos e, ao final do processo, o excesso de água foi removido por liofilização, o que proporcionou menor quantidade de solvente para extração. Os resultados mostraram-se promissores para a busca de novas moléculas obtidas por esta metodologia. As neolignanas foram obtidas com rendimentos brutos de 30%, 85% e 78%, respectivamente e posteriormente, serão submetidas aos ensaios biológicos com o intuito de avaliar a atividade tripanocida.
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Atividade plasmática da enzima conversora de angiotensina em equinos puro sangue árabe em treinamento e durante prova de resistênciaSilva, Ana Maria Guerreiro Braga da [UNESP] 27 July 2012 (has links) (PDF)
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silva_amgb_me_jabo.pdf: 455415 bytes, checksum: 9edee21da274e963cf80807ae32f169a (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudos com cavalos de enduro submetidos a exercícios de resistência enfocam o desempenho individual. Na medicina esportiva humana, muitos estudos foram realizados mensurando a concentração da enzima conversora de angiotensina (ECA) e relacionando-a com corredores de maratona de elite, especialmente aqueles com menores concentrações plasmáticas desta enzima. No entanto, como na medicina veterinária poucos estudos foram realizados neste campo, decidiu-se avaliar a atividade plasmática da ECA em equinos durante treinamento e, posteriormente, antes e durante prova de resistência. Foram utilizados 11 equinos adultos da raça Árabe, hígidos, mantidos sem treinamento durante 16 semanas. Foram realizados dois testes de esforço físico progressivo (TEP) para determinar o condicionamento físico dos animais, sendo um antes e outro ao final do treinamento, que durou 12 semanas. Uma semana após o segundo TEP, foi realizado um teste de resistência (TR) de 80 km. Antes, durante e após a realização do TR, amostras de sangue foram colhidas para mensurar a atividade plasmática da ECA. Os dados obtidos foram avaliados por meio de análise de variância e, quando verificadas diferenças estatísticas (p ≤ 0,05) em relação a variável tempo, os dados foram analisados pelo teste de Fisher. Houve diminuição gradual da atividade da ECA ao longo do período de treinamento. Os valores médios obtidos antes e durante o TR variaram e os valores encontrados antes do TR foram menores que os obtidos vinte e quatro horas após o término do mesmo (p=0,003). Os menores valores encontrados neste experimento foram após os equinos completarem 50 km do teste, o que não ocorreu durante o TR e é sugestivo de estar relacionado à desidratação. A diminuição da atividade plasmática da ECA com o treinamento se revelou ferramenta em potencial para avaliação dos efeitos de treinamento / Studies about horses submitted to long distance exercise have focused on individual performance and reasons for failure. In human sports medicine, many studies have measured plasma concentration of angiotensin converting enzyme (ACE) and correlated it to the performance of elite marathon runners, which present lower plasma concentration of this enzyme. This study evaluated plasma ACE activity during training and an endurance ride in a group of endurance horses. Eleven healthy adult Arabian horses were submitted to sixteen weeks of rest before the initiation of the training period. Before start and after the training period, a progressive exercise test (PET) was carried out in order to determine the horse’s fitness and to plan the training protocol. Horses were trained for twelve weeks, and at the end of the training period, one week after the second PET, horses were submitted to an 80 km endurance exercise test (ET). Before, during and after the ET, blood samples were collected to determine ACE’s plasma activity. Effects of sampling times were evaluated by ANOVA and significant differences analyzed by the Fisher’s test. ACE’s plasma activity gradually diminished during the training period The mean values of ACE’s activity obtained before and during the ET varied and values before the ET were lower than twenty four hours after the end (p=0,003). Lowest ACE values were found after 50 km of ET, and were simultaneous to the highest total protein. It indicates that the lowest ACE during endurance exercise may be related to dehydration, possibly indicating a body adjustment. Plasma ECA activity of horses decreased with training and may be used as a potential tool to measure training effects
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Modificações enzimáticas em pães brancos e pães ricos em fibras: impactos na qualidadeNunes, Janine Carvalho January 2008 (has links)
O pão é um dos alimentos mais consumidos na dieta humana, estando presente na mesa de diferentes povos e classes sociais. Além do seu aspecto apetitoso, o pão apresenta importante valor nutricional, uma vez que é fonte de carboidratos, proteínas, vitaminas e sais minerais. Na medida em que a panificação se estendeu do processo artesanal para a escala industrial, a utilização de agentes melhoradores de farinha vem se ampliando em função da necessidade de melhorar as características de processo e a vida útil dos produtos obtidos. Durante décadas, enzimas foram adicionadas à farinha na produção de pães com a finalidade de melhorar seu volume, sabor, aroma, estrutura da casca e do miolo, maciez e vida-deprateleira. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência da adição de enzimas na qualidade de pães brancos e pães ricos em fibras através do uso de associações enzimáticas de transglutaminase, xilanase e amilase. Foram preparadas 17 formulações para cada tipo de pão, com diferentes concentrações das enzimas, de acordo com o planejamento experimental 23 e para análise foi utilizada a metodologia de superfície de resposta. As etapas básicas da produção dos pães foram: pesagem e amassamento; divisão, boleamento e descanso; modelagem; fermentação; forneamento e resfriamento. As farinhas com a adição da associação enzimática e padrão foram submetidas às análises de umidade, cinzas, teor de glúten, cor, absorção de água, estabilidade, elasticidade e extensibilidade. Todas as 17 formulações e a formulação padrão para pão branco e pão rico em fibra foram analisadas sensorialmente, através da Análise Descritiva Quantitativa (ADQ), e físico-quimicamente, através das análises de umidade, cinzas, textura, cor, altura das fatias e volume específico. Os resultados obtidos no presente trabalho mostraram que a adição destas enzimas não é necessária para se ter um pão com boa qualidade e com características exigidas pelos consumidores. Observou-se que o efeito da associação das três enzimas testadas não foi significativo, pois na maioria das características avaliadas o melhor resultado foi o apresentado na amostra padrão, sem adição de enzimas. / Bread is one of the most consumed foods in the human diet. It is found on the table of people from different cultures and social classes. Besides its appetizing aspect, bread also presents important nutritional value, since it is a source of carbohydrates, proteins, vitamins and mineral salts. As bread-making has gone from the handmade process to the industrial scale, the usage of bread enhancements has increased in order to attend the necessity of improving process’s characteristics and lifespan of the obtained product. Throughout many decades, enzymes were added to the flour during bread’s production with the objective of increasing its volume, taste, aroma, crust’s and crumb’s structure, softness and lifespan. The present work is proposed to evaluate how the addition of enzymes can influence on the quality of white and wholemeal bread through the use of enzymatic associations of transglutaminase, xylanase and amylase. 17 formulations have been prepared for each type of bread, each one with different enzyme concentrations, according to the experimental planning 2³. The methodology used for the analysis was the Response Surface Methodology – RSM. The basic steps of production were: weighing and kneading; dividing, ball making and resting; molding; fermenting; baking and cooling. Both the standard flours and the ones with the addition of enzymatic associations were submitted to humidity, ashes, gluten level, color, water absorption, stability, elasticity, and extensibility analysis. All 17 formulations and the standard formulation for white bread and wholemeal bread have been submitted to sensorial evaluation using Quantitative Descriptive Analysis. They have also been physically and chemically tested through the analysis of humidity, ashes, texture, color, height of the slices and specific volume. The results obtained from this research proved that the addition of those enzymes is not necessary in order to make good quality bread with characteristics demanded by its consumers. It has been observed that the effect of the association of the 3 tested enzymes was not significant. The standard sample - free of enzyme addition - presented the best results for most of the evaluated characteristics.
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Efeito da retirada das drogas inibidoras da enzima conversora da angiotensina sobre a função renal em pacientes com diabete melito tipo 2 com e sem nefropatia diabéticaNunes, Alice Hoefel January 2009 (has links)
A Nefropatia Diabética (ND) é a principal causa de doença renal terminal e parece resultar de uma interação entre suscetibilidade genética e fatores ambientais. Tanto no desenvolvimento como na progressão da ND, tem sido evidente o papel do sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA). A renina age sobre o angiotensinogênio para formar a angiotensina I, que sofre transformação em angiotensina II através da ação da enzima conversora da angiotensina. A angiotensina II é um potente hormônio trófico e vasoconstritor e é mediador central no dano renal do diabetes, além de estimular a secreção de aldosterona. A diminuição da pressão arterial apresenta benefícios para a ND independentemente do agente utilizado. As drogas que alteram o SRAA, porém, têm efeito de diminuir a pressão arterial e diminuir a excreção urinária de albumina. O objetivo deste artigo é discutir o papel do SRAA na fisiopatogenia da ND, seu envolvimento nos diversos estágios da lesão renal e a partir deste conhecimento, todas as opções disponíveis de tratamento.
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Imobilização covalente de ciclodextrina glicosiltransferase em microesferas de silica-polietilenoglicol / Covalent immobilization of cyclodextrin glycosyltransferase onto silicapolyethyleneglicol microspheresMatte, Carla Roberta January 2011 (has links)
Ciclodextrina glicosiltransferase (CGTase, EC 2.4.1.19) é a enzima capaz de converter o amido e seus açúcares relacionados em ciclodextrinas (CDs) através da reação de ciclização. As CDs têm inúmeras aplicações na indústria farmacêutica, cosmética e de alimentos, devido à sua capacidade de encapsular moléculas hidrofóbicas dentro de sua cavidade. A CGTase de Thermoanaerobacter sp. é capaz de converter o amido em CDs sob condições de processo industrial, em temperaturas elevadas. A produção de CDs em escala industrial é feita, geralmente, em processos de batelada, nos quais é utilizada a enzima livre diretamente. No entanto, a imobilização da CGTase tem sido testada, com o propósito de permitir seu uso contínua e repetidamente, de modo a prevenir sua solubilização e promover uma forma molecular mais estável. Neste trabalho, buscouse imobilizá-la em microesferas de sílica-polietilenoglicol (sílica-PEG). O suporte foi silanizado com 3- aminopropiltrimetoxisilano (APTMS) e ativado com glutaraldeído para gerar condições de imobilização de enzimas, que foi realizada a 6ºC e pH 6, durante 15h. O rendimento de imobilização e a atividade recuperada foram 83% e 73%, respectivamente. Os resultados foram comparados com estudos anteriores sobre a imobilização covalente de CGTase. As propriedades enzimáticas da CGTase imobilizada foram investigadas e comparadas com as da enzima solúvel. CGTases solúveis e imobilizadas apresentaram valores similares de pH ótimo. Por outro lado, a temperatura ótima foi de 100ºC e 80ºC para as formas solúvel e imobilizada da enzima, respectivamente. Em comparação com a CGTase solúvel, a forma imobilizada apresentou maior Km (constante de Michaelis), menor Vmax (velocidade máxima de reação), a estabilidade de armazenamento diminuiu cerca de 15% e apenas um ligeiro decréscimo foi observado quando a estabilidade térmica estava sob avaliação. A estabilidade operacional foi medida em repetidos processos de batelada e a enzima imobilizada reteve cerca de 60% da atividade catalítica inicial, após 15 ciclos. / Cyclodextrin glicosyltransferase (CGTase, EC 2.4.1.19) is the enzyme able to convert starch and related sugars into cyclodextrins (CDs) via cyclization reaction. Cyclodextrins have numerous applications in the pharmaceutical, cosmetics, and food industry, because of their capacity to encapsulate hydrophobic molecules within their cavity. The CGTase from the Thermoanaerobacter sp. is able to degrade starch into CDs under industrial conditions (high temperature). For the industrial scale production of CDs, conventional batch production methods, which utilize soluble CGTase directly, have been mainly adopted. However the immobilization of CGTase has been pursued with the purpose of allow its reuse continuously and repeatedly by avoiding enzyme solubilization and promoting a more stable molecule form. In this research, Thermoanaerobacter CGTase was immobilized on silica-polyethyleneglycol (silica-PEG) microspheres. The support was silanized with 3- aminopropyltrimethoxysilane (APTMS) and activated with glutaraldehyde to generate conditions for enzyme immobilization, which was carried out at 6ºC and pH 6, during 15h. The immobilization yield and recovery activity was around 83% and 73%, respectively. Results were compared with previous studies on covalent immobilization of CGTase. The enzymatic properties of immobilized CGTase were investigated and compared with those of the soluble enzyme. Soluble and immobilized CGTases showed similar values for optimum pH. On the other hand, the optimum temperature was 100ºC and 80ºC for the soluble and immobilized forms, respectively. In comparison with the soluble CGTase, the immobilized form exhibited higher Km (Michaelis constant), lower Vmax (maximal reaction rate), the storage stability was decreased about 15% and just a slight decrease was observed when thermal stability was under evaluation. The operational stability was evaluated in repeated batch process and the immobilized enzyme retained about 60% of the initial catalytic activity after 15 cycles.
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Síntese e estudo das interações de 3-(fosfato)- e 3-(fosfonamida)-4,4,4-trifluor-but-1-il-carbamatos de etila com a enzima acetilcolinesterase e síntese de 3-carboxietil- e 3-pirimidin-2-il-2-oxo-6-trifluormetil-[1,2,3]oxatiazinanas / Synthesis and interactions studies of 3-phosphate- and 3-phosphonamide-4,4,4-trifluoro-but-1-yl-carbamic acid ethyl esters with acetylcholinesterase enzyme and synthesis of 3-carboxyethyl- and 3-pyrimidin-2-yl-2-oxo-6-trifluoromethyl-[1,2,3]oxathiazinanesBorchhardt, Deise Moreira 01 March 2007 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A series of [3-(phosphate)-4,4,4-trifluoro-but-1-yl]-carbamic acid ethyl ester and [3-(phosphonamide)-4,4,4-trifluoro-but-1-yl]-carbamic acid ethyl ester obtained from the reaction of g-amino alcohols (4,4,4-trifluoro-3-hydroxy-butan-1-yl)-carbamic acid ethyl ester with phosphorus oxychloride in the presence of base and subsequent reaction with alcohols or amines. In addition, this work describes the synthesis and characterization of 3-carboxyethyl-2-oxo-6-trifluoromethyl-[1,2,3]oxathiazinanes and 3-[pyrimidin-2-yl]-2-oxo-6-trifluoromethyl-[1,2,3]oxathiazinanes obtained from the cyclization reaction of the g-amino alcohols (4,4,4-trifluoro-3-hydroxy-butan-1-yl)-carbamic acid ethyl ester and 4-(pyrimidin-2-ylamino)-1,1,1-trifluoro-butan-2-ols with thionyl chloride in the presence of a base. The g-amino alcohols used in this work were obtained from synthetic routes using as precursor b-alkoxyvinyl trifluoromethyl ketones with general formula F3CC(O)CH=C(R)OR1, where R = H, Me, Pr, Bu, Ph, 4-Me-Ph; R1 = Me, Et. The b-alkoxyvinyl trifluoromethyl ketones were obtained from the acylation of acetals or enolethers with trifluoroacetic anhydride. The effect of the carbamates containing phosphate group in the inhibition of acetylcholinesterase enzyme was tested. Several compounds exhibited significant inhibition of this enzyme. Molecular modeling studies were developed to elucidate the interaction mode of these new inhibitors. The oxathiazinanes were assessed against a panel of microorganisms including yeast like fungi, bacteria and algae, but no activity was found. / Uma série de [3-(fosfato)-4,4,4-trifluor-but-1-il]-carbamatos de etila e [3-(fosfonamida)-4,4,4-trifluor-but-1-il]-carbamatos de etila foram obtidos a partir da reação de g-amino álcoois (4,4,4-trifluor-3-hidróxi-butan-1-il)-carbamatos de etila com oxicloreto de fósforo na presença de base e subseqüente reação com álcoois ou aminas. Este trabalho apresenta também a síntese e caracterização de 3-carboxietil-2-oxo-6-trifluormetil-[1,2,3]oxatiazinanas e 3-[pirimidin-2-il]-2-oxo-6-trifluormetil-[1,2,3]oxatiazinanas obtidas por reação de ciclização dos g-amino álcoois (4,4,4-trifluor-3-hidróxi-butan-1-il)-carbamatos de etila e 4-(pirimidin-2-ilamino)-1,1,1-trifluor-butan-2-ols com cloreto de tionila na presença de base. Os g-amino álcoois utilizados neste trabalho foram obtidos por rotas sintéticas que tem como precursor as b-alcoxivinil trifluormetil cetonas de fórmula geral F3CC(O)CH=C(R)OR1, onde R = H, Me, Pr, Bu, Ph, 4-Me-Ph; R1 = Me, Et. As b-alcoxivinil trifluormetil cetonas utilizadas foram obtidas através de acilação de acetais ou enol éteres com anidrido trifluoracético. O efeito dos carbamatos contendo grupo fosfato na inibição da enzima acetilcolinesterase foi avaliado. Vários compostos apresentaram inibição significante dessa enzima e estudos de modelagem molecular foram desenvolvidos para elucidar o modo de interação destes novos inibidores. As oxatiazinanas foram testadas na inibição do crescimento de microorganismos incluindo leveduras como fungos, bactérias e alga, porém, não apresentaram atividade inibitória
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Atividade plasmática da enzima conversora de angiotensina em equinos puro sangue árabe em treinamento e durante prova de resistência /Silva, Ana Maria Guerreiro Braga da. January 2012 (has links)
Orientador: José Corrêa de Lacerda Neto / Banca: Tanja Maria Hess / Banca: Aureo Evangelista Santana / Resumo: Estudos com cavalos de enduro submetidos a exercícios de resistência enfocam o desempenho individual. Na medicina esportiva humana, muitos estudos foram realizados mensurando a concentração da enzima conversora de angiotensina (ECA) e relacionando-a com corredores de maratona de elite, especialmente aqueles com menores concentrações plasmáticas desta enzima. No entanto, como na medicina veterinária poucos estudos foram realizados neste campo, decidiu-se avaliar a atividade plasmática da ECA em equinos durante treinamento e, posteriormente, antes e durante prova de resistência. Foram utilizados 11 equinos adultos da raça Árabe, hígidos, mantidos sem treinamento durante 16 semanas. Foram realizados dois testes de esforço físico progressivo (TEP) para determinar o condicionamento físico dos animais, sendo um antes e outro ao final do treinamento, que durou 12 semanas. Uma semana após o segundo TEP, foi realizado um teste de resistência (TR) de 80 km. Antes, durante e após a realização do TR, amostras de sangue foram colhidas para mensurar a atividade plasmática da ECA. Os dados obtidos foram avaliados por meio de análise de variância e, quando verificadas diferenças estatísticas (p ≤ 0,05) em relação a variável tempo, os dados foram analisados pelo teste de Fisher. Houve diminuição gradual da atividade da ECA ao longo do período de treinamento. Os valores médios obtidos antes e durante o TR variaram e os valores encontrados antes do TR foram menores que os obtidos vinte e quatro horas após o término do mesmo (p=0,003). Os menores valores encontrados neste experimento foram após os equinos completarem 50 km do teste, o que não ocorreu durante o TR e é sugestivo de estar relacionado à desidratação. A diminuição da atividade plasmática da ECA com o treinamento se revelou ferramenta em potencial para avaliação dos efeitos de treinamento / Abstract: Studies about horses submitted to long distance exercise have focused on individual performance and reasons for failure. In human sports medicine, many studies have measured plasma concentration of angiotensin converting enzyme (ACE) and correlated it to the performance of elite marathon runners, which present lower plasma concentration of this enzyme. This study evaluated plasma ACE activity during training and an endurance ride in a group of endurance horses. Eleven healthy adult Arabian horses were submitted to sixteen weeks of rest before the initiation of the training period. Before start and after the training period, a progressive exercise test (PET) was carried out in order to determine the horse's fitness and to plan the training protocol. Horses were trained for twelve weeks, and at the end of the training period, one week after the second PET, horses were submitted to an 80 km endurance exercise test (ET). Before, during and after the ET, blood samples were collected to determine ACE's plasma activity. Effects of sampling times were evaluated by ANOVA and significant differences analyzed by the Fisher's test. ACE's plasma activity gradually diminished during the training period The mean values of ACE's activity obtained before and during the ET varied and values before the ET were lower than twenty four hours after the end (p=0,003). Lowest ACE values were found after 50 km of ET, and were simultaneous to the highest total protein. It indicates that the lowest ACE during endurance exercise may be related to dehydration, possibly indicating a body adjustment. Plasma ECA activity of horses decreased with training and may be used as a potential tool to measure training effects / Mestre
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Extração de genipina a partir do jenipapo (genipa americana linnaeus) para imobilização de enzimas / Extraction of genipin from genipap (genipa americana linnaeus) for enzymes immobilizationBellé, Anelise Stein January 2017 (has links)
O consumo e a utilização de produtos naturais, tanto para a alimentação quanto para utilização industrial é cada vez mais frequente. Assim, este trabalho teve como objetivo principal extrair um iridoide natural a partir do jenipapo, a genipina, a fim de empregá-la como agente de ativação em suportes de quitosana para imobilização de enzimas. Já que, dentre os agentes conhecidos este é o menos tóxico para este tipo de aplicação. Adicionalmente, foi iniciado um estudo para a construção de uma lactase recombinante visando a sua imobilização e síntese de prebióticos. Inicialmente, o jenipapo (Genipa americana L.), que pode possuir até 3 % de genipina disponível em seu fruto, foi submetido a diferentes condições de extração enzimática em um sistema aquoso bifásico (SAB). Com o intuito de compará-la com seu possível substituinte, o glutaraldeído, géis de quitosana foram produzidos e reticulados tanto com genipina quanto com glutaraldeído para avaliação das suas propriedades texturais e reológicas. Após, duas β-galactosidases modelos, de Kluyveromyces lactis e de Aspergillus oryzae, foram imobilizadas nos suportes de quitosana preparados a fim de avaliar a capacidade catalítica das enzimas imobilizadas O tratamento com a enzima comercial Celluclast à 10 % (v/v), a 36 °C e pH 3,7, promoveu a obtenção de 196 mg de genipina por grama de jenipapo – a maior concentração descrita na literatura. Quanto aos géis de quitosana reticulados, a utilização de 0,5 % de genipina (m/v) resultou em géis com propriedades texturais superiores e propriedades reológicas similares aos géis reticulados com 3 % de glutaraldeído (v/v). No geral, a hidrólise da lactose com a β-galactosidase de K. lactis imobilizada em quitosana ativada com 0,5 % de genipina (m/v) foi superior ao grau de hidrólise alcançada com as β-galactosidases imobilizadas em quitosana ativada com 3 % de glutaraldeído (v/v) (87 % e 9 %, respectivamente). Assim, a genipina extraída mostrou ser uma excelente substituta do glutaraldeído na ativação da quitosana e para utilização na imobilização de enzimas. Por fim, foi realizado o estudo para obtenção de uma β-galactosidase recombinante visando a síntese de galacto-oligossacarídeos (GOS). / The consumption and use of natural products, both for food or for industrial use is increasingly common. Thus, the main objective of this work was to extract a natural iridoid from genipap, genipin, in order to use it as an crosslinking agent in chitosan supports for immobilization of enzymes. Since, among the known agents, it is the least toxic for this type of application. In addition, a study was started for a construction of a recombinant lactase aiming at its immobilization and synthesis of prebiotics. Initially, which may have up to 3% genipin available in its fruit, was submitted to different enzyme-assisted extractions in an aqueous biphasic system (ABS). Moreover, in order to compare it with its possible substituent, glutaraldehyde, chitosan gels were prepared and crosslinked with genipin and glutaraldehyde for evaluation of their textural and rheological properties. Lastly, the crosslinked chitosan was used as support for the immobilization of two model β-galactosidases from Kluyveromyces lactis and Aspergillus oryzae, in order to evaluate their catalytic capacities. The treatment carried out with Celluclast 10 % (v/v), at 36 °C and pH 3.7, provided an extraction of 196 mg of genipin per gram of genipap - the highest genipin concentration found in literature until now Chitosan gels crosslinked with genipin 0.5 % (w/v) showed better textural and similar rheological properties when compared to the chitosan crosslinked with glutaraldehyde 3 % (v/v). In general, the percentage of lactose hydrolysis by the β-galactosidases from K. lactis immobilized using genipin as a crosslinker was higher than when glutaraldehyde was used (87 % and 9 %, respectively). Therefore, genipin proves to be an excellent alternative for the use of glutaraldehyde in chitosan crosslinking studies. Finally, a study was carried out to obtain a recombinant β-galactosidase for the synthesis of galactooligosaccharides (GOS).
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