Orientador : Quivo S. Tahin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T03:56:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cavalcanti_TerezaCristinaSamico_M.pdf: 2962227 bytes, checksum: afed83276a954010a478a9b668b92388 (MD5) Previous issue date: 1978 / Resumo: A L-glutamato desidrogenase (GDH) [ L-gluta-mato NAD(P) oxi-redutase (desaminante) E,C.1,4.1.2-4 ] enzima chave da regulação do metabolismo da amónia, do glutamato e do alfa-cetoglutarato, foi preparada a partir de um extrato bruto de brometo de cetiltrimetilamonia 0,1% de fígado, rim e coração de Bufo paracnemis,Rana catesbeiana e de rato. Essa enzima catalisa reversivelmente a de saminação oxidativa do glutamato dependente de NAD(P). A asparagina (Asn) nas concentrações desde 1 a 50 mM mostrou ser capaz de causar um extraordinário efeito sobre a atividade da GlDH, isto é, quando a reação se processa em presença de NADH, causando uma aumento de 10 a 94 vezes' na velocidade da catálise enzimática, dependendo da origem da glutamato desidrogenase e das condições experimentais,porém nenhum efeito foi observado sobre a G2DH, isto é, quando a reação se dava em presença do NAD+. 0 efeito da asparagina não é idêntico para enzimas de origens diferentes e mesmo quanto a órgãos diferentes do mesmo animal. A GDH proveniente de coração de B. paracnemis e R. catesbeiana e de coração de rato mostrou ser bem mais sensível a asparagina do que a enzima de outros órgãos do mesmo animal. A Asn causa um deslocamento do pH ótimo da reação enzimática, aumentando-o de cerca de meia unidade de pH. Esse fato pode sugerir que a Asn possa alterar a cons tante de dissociação de algum grupo ionizavel da enzima importante para a reação enzimática. A atividade da G1DH de fígado, rim e coração de B. paracnemis, R. catesbeiana e de rato, apresenta a característica de variar exponencialmente em função da variação da concentração da enzima, essa característica está (relacionada com o aumento do estado de agregação causado pelo aumento da concentração da enzima. Entretanto , na presença de Asn 50 mM, para todas as G1DH estudadas, aquela função é linear, ou seja, a atividade enzimática é diretamente proporcional ã variação da concentração da ensima. A ADP 0,1 mM, não estimula a G1DH nas nossas condições de baixas concentrações de enzima e aumenta cerca de 20% o efeito da Asn sobre a GlDH de coração de B. paracnemis . A Gln 50 mM não causa nenhum efeito sobre a GlDH de coração de 3. paracnemis, semelhante ao da Asn 50 mM, todavia inibe cerca de 20% o efeito da Asn 50 mM sobre a enzima. / Abstract: The L-glutamate dehydrogenase CGDH) [L-glutama teNAD(P) oxidoreduetase ( deaminating) B.C.1.4.1.2-4] a key regulatory enzyme of NH3, glutamate and alfa-ketoglu tare metabolism, was extracted with 0,1% cetyltrimethy1 ammonium bromide from liver, kidney and heart of the amphibians Bufo paracnemis and Rana catesbeiana and rat. This enzyme catalyses the reversible reaction of oxidative deaminating of the glutamate NAD(P) dependent. Asparagine (Asn) at concentration from 1 to 50 mM cause a dramatic increase on GlDH activities, i.e., when the enzyme catalyses the reaction on the presence of NADH and alfa-ketoglutarate, from 10 to over 90 times, depending on the enzyme origin. However, no effect was observed on G2DH, i.e., when the enzyme catalyzes the reaction on the presence of NAD+ and glutamate. The effect of Asn is different with respect on animal organs. The B. paracnemis, R. catesbeiana and rat heart GlDH is much more affected by Asn 50 mM then GlDH from kidney and liver of same animal. The optimum pH of GlDH reaction is increased about 0.5 pH unit by the presence of Asn 50 mM. This fact may suggest that the Asn could change the dissociation contant of some ion group of the enzyme with importance to enzymatic reaction. The B. paracnemis, R. catesbeiana and rat liver, kidney and heart GlDH has the characteristic of changing the enzymatic activity exponentially by the changing of the enzyme concentration. This characteristic is related with the state of protein aggregation that is caused by the increase of enzime concentration. On the other hand, GlDH has a linear dependence of the enzyme activity in function of enzyme concentration when Asn 50 mM is present during the enzymatic reation. ADP 0.1 mM does not increase the B. paracnemis heart GlDH, at our experiment conditions of low enzyme con centrations, but increases about 20% the effect of Asn on that enzyme. Glutamine 50 mM does shown any effect on B. paracnemis heart GlDH, but decreases about 20% the effect of Asn on that enzyme. / Mestrado / Mestre em Biologia

Orientador: Fumio Yokoya / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agricola / Made available in DSpace on 2018-07-17T06:48:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rossell_CarlosEduardoVaz_D.pdf: 3428895 bytes, checksum: 6ed68815173eb2da63f7abdd96b0868b (MD5) Previous issue date: 1976 / Resumo: Foi estudada a produção de penicílinainidahidrolase (PAH) por fermentação com Escherichia coli ATCC 3637, em fermentadores de laboratório, banco e piloto. No meio de fermentação empregado, baseado em água de maceração de milho, a cinética de crescimento apresenta duas fases exponenciais sucessivas. A mudança de uma a outra é provocada pela limitação de oxigênio dissolvido, A programação do incremento da taxa de transferência de oxigênio em função do tempo controla a duração relativa de ambas as fases. A velocidade específica de crescimento no primeiro período (µI) foi bem maior que no segundo (µII) - A produção de PAH segue uma cinética exponencial, ficando associada ao crescimento celular e sendo maior quanto menor o valor de µII. Quando µ tende a ymax. não se tem o acumulo de enzima. São condições necessárias para a produção de PAH a adição de ácido fenilacético como indutor e a manutenção da concentração de oxigênio dissolvida a valores muito baixos. Foi desenvolvido ura modelo cinético para a produção de PAH, baseado nas variáveis mencionadas. A fermentação foi ampliada de escala de um fermentador banco com 10 litros de meio até um fermentador piloto com 15 a 20 vezes este volume de meio de fermentação. Entre ambas unidades não se manteve similaridade geométrica. O critério seguido na ampliação da escala foi a de manter as velocidades tangenciais no agitador na mesma ordem para o modelo e o protótipo, a porcentagem da tensão de oxigênio dissolvido próxima de zero, ajustando a taxa de transferência de oxigênio máxima e o coeficiente volumétrico de transferência de massa (k1a) mediante a taxa de aeração. De uma análise dos resultados obtidos experimentalmente concluiu-se que (k1a) ou a área interfacial (a) podem ser descritos mediante as correlações de Yoshida para k1a ou de Calderbank para a, desde que seja substituído nas mesmas a velocidade de aeração associada com a secção transversal do fermentador (Vs) pela velocidade de aeração associada com a secção total dos orifícios do distribuidor. Os rendimentos de PAH foram da mesma ordem em escala banco e piloto / Abstract: Penicillinamidohiydrolase (PAH) production by Escherichia coli ATCC 9637 was studied in laboratory, bench and pilot scale fermentors. Using a culture medium based on corn steep liquor, it was shown that kinetics of growth has two succesive exponential phases. The shift from one to the other is caused by limitation of dissolved oxygen. The relative length of those phases can be controlled by programming the increment of oxygen transfer rate with time. The specific growth rate during the first period is larger than the second period. PAH production follows .exponential kinetics and it is associated with cell growth being larger if the second growth phase shows the slower rate (µII). When the value approaches the µmax no enzyme accumulation was observed. The conditions required for PAH production were the addition of phenylacetic acid as inducer and the maintenance of dissolved oxygen concentration at very low level. A kinetic model for the production of PAH was developed based on the variables above mentioned. Fermentation was scaled-up from a bench fermentor with ten liters of medium to a fermentor with 15-20 times larger volume. Geometric similarity was not maintained between those units. The criteria followed for scaling-up were to maintain a similar peripheral velocity at the tip of the impeller between model and prototype, and the percent of dissolved oxygen tension near zero. Adjustment of the maximum oxygen transfer rate and volumetric mass transfer coefficient (k1a) was acomplished by changing air rate. It was concluded, from experimental data, that (k1a)or the interfacial area (a) can be described by the correlation of Yoshida for k1a or Calderbank for a, if the surface air velocity at the cross section of the fermentor (Vs) is replaced by air velocity at the total area of holes in the sparger. Yield of PAH obtained in bench and pilot scale fermentor was the same / Doutorado / Doutor em Ciências e Tecnologia de Alimentos

Orientador : Luis Alberto Magna / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Bilogia / Made available in DSpace on 2018-07-17T11:02:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LatufFilho_Paulo_M.pdf: 1337740 bytes, checksum: a7bbcdcb24cf6835c635211b126dc05e (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: A anidrase carbônica (AC) (EC 4.2.1.1) é uma metaloenzima que contém um átomo de zinco. Sua função de maior importância é a hidratacão do dióxido de carbono e a desidratação do ácido carbônico, sendo o seu substrato natural o dióxido de carbono. Na espécie humana foram reconhecidas até opresente. sete isozimas da anidrase carbônica, as quais diferem entre. si quanto à estrutura molecular propriedades cinéticas, especificidade, pelo substrato. Padrões de inibição, de eficiência catalitica. além da distribuição tecidual. A mais alta concentração da anidrase carbônica é encontrada nos eritrócitos, nos quais se reconhecem três isozimas (CAI, CAII e CAIII). Sabe-se, atualmente. que algumas doenças estão associadas a variações quantitativas e/ou qualitativas das isozimas eritrocitárias da anidrase carbônica. Visto que as pessoas com trissomia do cromossomo 21 (síndrome de Down) mostram aumento significativo da quantidade da CAI eritrocitária, passou a ser de crucial importância investigar se ocorreria fenômeno idêntico nos pacientes com a doença de Alzheimer, pois é notória a coincidência de alguns sinais nessas duas enfermidades,tais como a degeneração granulovacuolar de neurônios, placas senis. enovelados neurofibri1ares, calci;icaç:ões cerebrais e alterôções do metabolismo dos peróxidos. A atividade total da anidrase carbônica eritrocitária e as concentrações de suas isolimas e do zinco plasmático foram investigadas em 10 pacientes com diagnóstico clínico confinante à certeza de doença de Alzheimer e em 10 indivíduos sadios, que se assemelhavam aos pacien tes quanto à idade, sexo e raça (grupo controle). A determinação da atividade total da anidrase carbônica baseou-se na sua inibição por acetazolamida, usando o acetato de alfa-naftila como substrato. Âs concentrações das isozimas foram determinadas por densitometria, após eletro forese, em fitas de acetato de celulose, das soluções parcialmente purificadas. A concentração de zinco plasmático foi obtida por intermédio de espectrofotômetro de absorção atômica com chama. A atividade total da anidrase carbônica dos pacientes não diferiu da observada no grupo controle. Esses dois grupos também não diferiram quanto à distribuição das isozimas eritrocitârias e a concentração de zinco plasmático. Tais resultados conduzem à seguinte conclusão:o padrão da anidrase carbônica eritrocitária dos pacientes co. quadro clínico sugestivo de doença de Alzheimer é diferente daquele encontrado em indivíduos com sindrome de Down, mas não difere daquele apresentado por pessoas normais / Abstract: Carbonic anhydrase, (CA) (EC 4.2.1.1) is a zinc-containing mettalloenzym, wich central function is the hydration of carbon dioxide and the dehydration of carbonic acid, and íts naturalsubstrate is carbon dioxide. So far, in human species only seven isozymes of carbonic Inhydrase have been identified. wich differ from each other concerning their molecular structure, kinect propertíes, specifit_ from substrate, ínhibiton sensitivity and catalytíc in addition to tissue distribuition. The highest concentration of carbonic anhydrase is founded in erythrocytes. in wich three isozymes <CAI, CAII and CAIII) are recognized. As is well know , some diseases are aS5cciated to quantitative or qualitative variations of carbonic anhydrases erythrocytes isozymes. Cocerning that people with Down.s Syndrome (chrom0550me 21 tryssomy) show significative increase of erythrocyte CAI, it seemed extremely Important to investigate if the same occurs in pacients with Alzheimer¿s disease, since there is a prominant coincidence in some of the signs of the two diseases, such a5 granulovacuolar degeneration of neurons, senile plaques, neurofibrillary tang1es, cerebelary ca1cifications and alterations of peroxide metabolism. The whole activity of erythrocytic carbonic anhydrase and its isozymes and plasmatic zinc concentrations were investigated in 10 diseased with cl1inical diagnostic suggesting Alzheimer's disease and 10 healthy.people, with simmilar caracteristics of the diseased as for age, sex and race (control group). The determination of the whole activity of carbonic anhydrase was based on its inhibition by acetazolamide, using alpha-naphtyl acetate as 5ubstrate. Concentration of isozymes was determinated by densitometry, after electrophoresis in cel1u1ose acetate membrane of partial1y purified so1utions. Concentration of plasmatic Zinc was measured by atomic abSoption spectrophotometry (with f1ame).Carbonic anhydrase total activity was similar in diseased group and the control group, as well as both groups did not differed concerning the distribuition of erythrocytic isozymes and plasmatic zinc . These results conduct to the follow conclusion : the role of erythrocytic carbonic anhydrase of the people with clinical diagnostic suggesting Alzheimer's disease is different to that the found in people with Down's syndrome / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Jaime Amaya-Farfan / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T00:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benedet_HonorioDomingos_D.pdf: 3710174 bytes, checksum: 9bc147c05a655042ff45c3cbf6bc1c84 (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: Dezesseis coalhos comerciais, obtidos nas regiões centro sul e sul do Brasil, foram estudados, objetivando caracterizar os mesmos em termos das enzimas coagulantes neles contidas. Perfis de aminoácidos livres nos soros resultantes da ação das diferentes enzimas (renina, pepsina bovina, pepsina porcina e dos fungos Endothia parasitica, Mucor miehei e Mucor pusillus) em leite desnatado mostraram diferenças quantitativas entre os mesmos. Não houve, porém, relação clara entre as atividades proteolíticas das enzimas e o nível de aminoácidos liberados. Todavia, foi observado que a enzima da Endothia parasitica liberou seis vezes mais fenilalanina que o encontrado no soro após precipitação ácida, enquanto que a enzima do Mucor pusillus promoveu a liberação de quantidade considerável de carnosina. A aplicação do método de difusão de enzimas coagulantes em gel de ágar-caseína, capaz de distinguir entre si os seis tipos de enzimas, revelou que a maioria dos coalhos amostrados possui atividade de pepsina bovina. 0 único coalho rotulado como sendo de vitelo apresentou a difusão característica da renina. As frações dos coalhos comerciais com atividade coagulante, obtidas por filtração era gel Sephadex G-1Q0, foram submetidas à eletroforese em gel normal de poliacrilamida e as bandas resultantes comparadas com as dos padrões. Todas as frações apresentaram uma banda principal, cuja mobilidade e aspecto coincidiram com as da pepsina bovina, menos uma, que exibiu duas bandas, uma intensa, comparada à da renina, e outra tênue, com mobilidade semelhante ã da pepsina bovina. Partindo das enzimas coagulantes cromatograficamente homogêneas, estudou-se a influência da concentração do íon cálcio na velocidade de coagulação. A concentração de cálcio que forneceu a velocidade máxima de coagulação foi 58 e 68 mM para as duas pepsinas e para as outras enzimas, respectivamente, a pH 5,0 e 35°C. Estudou-se também o comportamento das enzimas frente ao cloro ativo. As experiências mostraram que todas sofreram inativação quando a concentração atingiu 100 ppm. Mo caso da renina, o efeito foi notável, sendo esta enzima completamente inativada com apenas 10 ppm de cloro ativo. / Abstract: Sixteen commercial rennets sampled in Brazil's middle southern and southern regions were characterized in terms of their constituting enzymes. Free amino acid profiles of the whey¿s resulting from the action of the enzymes rennin, bovine pepsin, and porcine pepsin, arid these of the fungi Endothia parasitica, Mucor miehei and Mucor pusillus on defatted milk revealed that quantitative differences associated with the type of enzyme used are likely to occur. No clear relationship was found, however, between the photolytic activity of each enzyme and the level of free amino acids released. On the other hand, it was observed that the Endothia parasitica¿s enzyme liberated six times more phenylalanine and that of Mucor pusillus enzyme liberated considerately more carnosine than found in the acid produced whey. Testing all the enzyme standards and the rennet samples by the method of difusion in agar-casein gel it was possible to distinguish among the six different enzymes and to ascertain that all but one of the rennets were of the bovine pepsin type. The only exception, rennet labeled as being from calf origin, showed, upon analysis, the typical pattern of rennin. The rennets were fractionated in Sephadex G-100 columns and the fractions with coagulating activity were compared by normal polyacrylamide-gel electrophoresis (PAGE) with the standard enzymes. Such fractions showed one main band which coincided with that of bovine pepsin for all the rennets, except for one which had the same mobility of rennin: the rennet of calf origin. This latter rennet exhibited a PAGE pattern which also suggested the presence of minor amounts of bovine pepsin. Influence of the calcium ion concentration on the rate of coagulation was studied on the chromatographically homogeneous coagulating enzymes. Optimal rates were obtained at 58 and 68 mM of Ca++ for the two pepsins and the other enzymes, respectively, at pH 5,0 and 35°C. The effect of active chlorine on the enzyme activity was also studied. The results showed that all enzymes underwent inactivation when the active chlorine concentration reached 100 ppm. Rennin was particulary sensitive an enzyme to this type of treatment since it was completely inactivated with 10 ppm of chlorine. / Doutorado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador : Thales Rocha de Mattos Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-18T04:23:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_CarlosEduardoPulz_M.pdf: 4761331 bytes, checksum: 87750a905fe008aa26e8cd35618cfd0c (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Odontologia

Orientador : Aldo Focesi Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T11:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amazonas_MariaAngelaLopesdeAlmeida_D.pdf: 8072162 bytes, checksum: 306d833807fef1df9778d78273e59d2b (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Piruvato descarboxilase (PDC, EC 4.1.1.1) é uma enzima chave no metabolismo do carbono de levedura, direcionando o ácido pirúvico para a produção de etanol. Embora esteja bem estabelecido que a enzima é um tetrâmero de aproximadamente 240 KD, a estrutura das suas subunidades monoméricas é ainda uma questão controvertida. Tanto um como dois tipos de subunidades têm sido descritos, tendo sido identificados até o momento três genes estruturais -- PDC 1, PDC 5 e PDC 6. Esta tese se propôs a contribuir para a elucidação da questão. Experimentos preliminares foram executados visandoestabelecer as condições adequadas à produção e à estabilidade da enzima durante sua purificação e estocagem.Três formas de PDC, separáveis por cromatografia de troca iônica, foram isoladas e as seguintes hipóteses foram levantadas para explicar suas origens: 1. dissociação dímerotetrâmero/holoenzima-apoenzima; 2. fosforilação reversível;3. proteólise; e 4. diferentes subunidades/isoenzimas / Abstract: Pyruvate decarboxylase (PDC, EC 4.1.1.1) is a key enzyme in the yeast carbon metabolism, driving pyruvic acid towards ethanol production. Although it is well established that the enzyme is a tetramer of about 240 KD, its monomeric subunit structure is still a matter of controversy. Either one or two subunit types have been described and three structural genes -- PDC 1, PDC 5 and PDC 6 -- identified so faro This thesis had the aim of contributing for the elucidation of the questiono preliminary experiments were developed to establish the adequate conditions to the enzyme production and stability during its purification and storage. Three types of PDC,separable by ion exchange chromatography, were isolated and the following hypotheses to explain their origin were brought foward: 1.dimer-tetramer/holoenzyme-apoenzyme dissociation;2. reversible phosphorylation; 3.proteolysis;and 4. different subunits/isoenzymes / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Lucia Helena Innocentini Mei / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-18T17:08:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Trevisan_HenriqueCelso_D.pdf: 6497533 bytes, checksum: de0e9dc9e56e40b1eabef187ed7d324d (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Essa dissertação apresenta os resultados com o objetivo de se produzir suportes silicicos de porosidade controlada para a imobilização de enzimas. Inicialmente, sílicas de três procedências, uma preparada em laboratório e duas disponíveis comercialmente, foram submetidas a tratamento hidrotérmico em cinco temperaturas, os produtos resultantes caracterizados por porosimetria de intrusão de mercúrio e suas capacidades de imobilização da enzima amiloglicosidase avaliadas. Os resultados sugeriram uma relação linear entre a pressão do tratamento hidrotermico e o diâmetro de poro médio resultante, mostrando também que a sílica preparada em laboratório era mais adequada para imobilização da enzima. Partindo-se dos dados anteriores, começou-se a otimizar o método de preparação da sílica, como o objetivo de melhorar a capacidade de imobilização do material, avaliando-se a qualidade dos produtos pela medida do volume de intrusão de água, porosimetria de mercúrio e imobilização de amiloglicosidase. Os suportes foram considerados adequados quando se conseguiu imobilizar uma quantidade de enzima equivalente aos melhores dados encontrados na literatura. Para suportes tratados a 150-270¿GRAUS¿C, obteve-se diâmetros médios de poro de 100-790A e conseguiu-se estabelecer uma relação simples entre a temperatura e o tamanho de poro resultante. Esses suportes foram caracterizados por porosimetria de mercúrio e microscopia eletrônica de varredura e utilizados na imobilização de "horsehadish" peroxidase, amiloglicosidase, glicose oxidase, invertase, lactase e albumina de soro bovino...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: This dissertation presents the results aiming the development of controlled pore siliceous supports for enzyme immobilization. At first, silicas from three sources, one prepared in laboratory and two commercially available, were submitted to hydrothermal treatment in five temperatures, the resulting products were characterized by mercury intrus10n porosimetry and their capacity of immobilizing the enzyme amyloglucosidase were evaluated. The results suggested a linear relationship of the hydro thermal treatment pressure with .the medium pore diameter and also showed that the silica prepared in laboratory was the more suitable for enzyme immobilization. Starting from the previous data, the method optimization for preparation of the silica support was initiated, being the quality of the products evaluated by measuring the water intrusion volume, mercury porosimetry and amyloglucosidase immobilization. 150-270.C, the medium pore diameter was 100-270A, relation between the temperature and the resulting was established. The last supports were characterized by mercury porosimetry and scanning electronic microscopy and the immobilization of horseradish peroxidase, amyloglucosidase, glucose oxidase, invertase, lactase and bovine serum albumin were afforded. For each protein, the optimum pore diameter for immobilization and the relation between the immobilized activity and the particle size, in this optimum diameter, was established ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Ladaslav Sodek / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T13:06:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vitoria_AngelaPierre_M.pdf: 3937638 bytes, checksum: b7de6cc8f7438dee3dbc531ecc102f3c (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: O aminoácido asparagina (ASN) é um dos principais compostos nitrogenados transportado pelos vasos condutores das plantas, principalmente nas leguminosas. O nitrogênio (N) que constitui este aminoácido é reutilizado nos órgãos em formação da planta (órgãos dreno) para a síntese de proteínas e compostos nitrogenados em geral. No entanto, existe a necessidade de metabolização da ASN para que este N apresentese na forma livre e portanto possa ser reutilizado. São conhecidas duas enzimas capazes de metabolizar a ASN: Asparagina Transaminase e Asparaginase (ASNase). A presença da enzima ASNase é de extrema importância, pois apresenta um papel regulatório na metabolização da ASN, como por exemplo neste trabalho, em que se estudou sementes imaturas, onde este aminoácido é degradado no início do desenvolvimento, quando a necessidade de nutrientes é maior e a atividade desta enzima é alta. Existem duas formas de ASNase, uma dependente e outra independente do íon potássio (K+), porém as duas formas nunca foram encontradas juntas numa mesma espécie. Deste modo, investigou-se treze espécies do gênero Crotalaria, uma leguminosa tropical, para a determinação das formas enzimáticas de cada espécie. Com base nos estudos sobre as formas enzimáticas e observações morfológicas, sugerimos que exista uma relação entre a forma enzimática e a morfologia foliar para as espécies deste gênero, pois as cinco espécies que apresentaram ASNase dependente de K+ eram unifolioladas, e as independentes, sempre trifolioladas. A partir do anticorpo produzido para a enzima ASNase independente de K+ purificada de Lupinus polyphyllus pôde-se fazer um estudo imunoquímico para tentar estabelecer similaridades entre as moléculas das duas formas enzimáticas. Neste estudo constatamos que o reconhecimento por parte do anticorpo não se dá em função da dependência do cofator K+ pela enzima. Por isto sugerimos que a porção da molécula da enzima onde se liga o anticorpo não seja a mesma porção que determina a dependência ao K+. Foi determinado também quais compostos nitrogenados compunham a seiva xilemática destas plantas a partir de dois tratamentos que permitiam ou não a formação de nódulos. Para isto foram dosados ureídeos e aminoácidos, que são normalmente os principais compostos nitrogenados do exsudato do xilema de leguminosas. Pelos dados obtidos observamos que os ureídeos não são utilizados pelas espécies de Crolalaria como transp0rtadores de N mesmo nas plantas do tratamento com nodulação, onde esta classe de composto é mais frequentemente encontrada. Constatamos também que os aminoácidos são os compostos nitrogenados transportados preferencialmente na seiva das espécies estudadas de Croralarza. A ASN representou mais de 50% dos aminoácidos detectados na seiva, sendo o principal produto composto transportador de N nestas plantas. O ASP (ácido aspartico) foi o segundo aminoácido encontrado em maior quantidade. A partir desta afirmação ressaltamos a crucial importância da enzima ASNase na metabolização de ASN, uma vez que sua utilização é fundamental para o crescimento da planta / Abstract: The amino acids Asparagine (ASN) is one of the principal fonns of nitrogen found in the vascular transportsystem of plants, principally of legumes. The nitrogen (N) contained is this amino acids is reutilized in developing organs of the plant (sinks) for the synthesis of proteins and nitrogenous compounds in general. However, the liberation and consequent reutilization of this nitrogen depends upon the metabolism of ASN. Two enzymes capable of metabolizing ASN are known: Asparagine Transaminase and Asparaginase (ASNase). The presence of ASNase is of extreme importance, in view of its regulatory role in ASN metabolismo such as in this study with immature seeds where the amino acids is degraded in the early stages of development when the demand for nutrients is greater and ativity of the enzyme higher. Two forms of ASNase are know, one depedent and the other independent of potassium. However, the two forms have never been found together in the same tissue. Thirteen species of the genus Crolalaria, a tropical legume, were investigated to determine the form of ASNase present in each species. Based on this study coupled with morphological observations, we found a relationship between the enzyme form and leaf morphology, since the five species that contain the KT dependent ASNase were unifoliate and the remaing K+ independent species were all trifoliate. Using the antibory specific for the K+ independent ASNase of Lupinus pollyphylus, an immunochemical study was carried out in an attempt to establish homologies among the two enzyme forms. This study showed that the antibory reaction was not related to K+ dependence this leads us to suggest that the molecular-binding site for the antibory is not involved in the determination of potassium dependence. We also determined which nitrogenous compouds were present in the xylem juice of these plants, using two treatments that produced nodulated and non-nodulated plants. The levels of ureides and amino acids, nonnally the main fonns of nitrogen found in xylem exudates, were detennined here. The data show that only traces ofureides are found in the transport stream of Crotalaria species, even in nodulated plants where this class of compound is usually found. The data also show that ammo acids are the main forms of nitrogen transport in the Crotalaria species under study. ASN represented more than 50 % of the xylem amino acids. and therefore the main transport compound for nitrogen in these plants. ASP (aspanic acid) was the second most abundant amino acid. This finding reforces the importance of the enzyme ASNase in the metabolism of nitrogen in the developing seed. / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Yong Kung Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-19T15:24:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_EdilsaRosada_M.pdf: 3407991 bytes, checksum: 034054af95dd9576d195ab70be16a3c3 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: A enzima amilolítica produzida por uma nova linhagem de levedura, classificada como Candida sp ATCC 90238, foi purificada e caracterizada. Este trabalho visou o aproveitamento de amido de milho para a produção de xarope de glicose e maltose. Estudou-se a sacarificação de amido, com a preparação bruta da enzima amilolítica de Candida sp, onde foi verificado a produção principalmente de glicose e maltose a temperaturas mais elevadas. A enzima foi purificada por fracionamento com sulfato de amônio, cromatografia em coluna de DEAE-Sephadex e CM-Celulose. A eletroforese da enzima purificada em gel de SDS-PAGE revelou uma única banda de proteína. O peso molecular foi estimado como 120.000 daltons. A enzima purificada foi caracterizada. Verificou-se que a enzima hidrolisa as ligações glicosídicas ?-1,4 e ?-1,6 de amido, o que tomou possível concluir que esta enzima é uma amiloglicosidase (E.C. 3.2.1.3., ?-1,4 glucano glucanahidrolase), que entretanto, apresenta características diferentes da amiloglucosidase de Aspergillus niger e Rhizopus sp quanto à hidrólise da ligação glicosídica ?-1,4 da maltose. A amiloglicosidase de Candida sp hidrolisa com menor eficiência a maltose e pode ser utilizada na produção de mistura de glicose e maltose. A enzima apresentou pH ótimo e temperatura ótima de 5,6 e 55° 60°C respectivamente. A combinação da amiloglicosidase de Candida sp com a pululanase de Klebsiella sp, resultou no aumento significativo da eficiência da hidrólise de amido de milho, para a produção de glicose e maltose. / Abstract: Amylolitic enzyme was produced by a new strain of yeast which was identified as Candida sp ATCC 90238 was purified and investigated to its enzymatic characteristics. The enzyme was purified by ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephadex A-50 and CM-Cellulose column chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) which showed a single protein band. The molecular weight of the enzyme was calculated as 120.000. The purified enzyme hydrolyzed starch to only glucose. This is apparent that the enzyme cleaved ?-1,4 and ?-1,6 glicosidic linkages in the starch. This result indicated that the enzyme is an extracellular amyloglucosidase (?-1,4-g1ucan glucanohydrolase, E.C.3.2.1.3.). When substrate is liquefied starch which was hydrolyzed by bacterial ?-amylase, the enzyme hydrolyzed the liquefied starch to glucose and maltose. The property of the enzyme was different as compared with amyloglucosidases from Aspergillus niger and Rhizopus sp. Further investigation demonstrated that the purified enzyme was not able to hydrolyze maltose efficiently. The optimum pH and the optimum temperature of the purified enzyme were 5,6 e 55° - 60°C. Combination of the Candida sp amyloglucosidase and Klebsiella sp pullulanase efficiently hidrolyzed the liquefied com starch, producing glucose and maltose as compared to Candida amyloglucosidase only / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Graciliano de Oliveira Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-19T23:53:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RoverJunior_Laercio_M.pdf: 1973498 bytes, checksum: a8176355af0b235fa0b0fdf3bd93dfe8 (MD5) Previous issue date: 1995 / Mestrado