Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-19T11:43:00Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 17841 bytes, checksum: 58ad259ae372ca949c61b0d2b4591cfd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T11:43:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 17841 bytes, checksum: 58ad259ae372ca949c61b0d2b4591cfd (MD5) Previous issue date: 2005-03-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O enriquecimento do cogumelo shiitake com selênio (Se) pode ser uma alternativa para elevar seu valor nutricional e funcional. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do Se sobre o crescimento e atividade biológica do fungo Lentinula edodes e produzir shiitake enriquecido com esse elemento. O crescimento de doze isolados de L. edodes, cultivados em ágar batata dextrose (BDA) e em substrato ligninocelulósico, contendo 0,32; 0,64; 0,96; 1,28 mmol L -1 de selenito de sódio e controle sem Se, variou com o substrato, com o isolado e com a concentração de Se. A matéria seca fúngica da maioria dos isolados cultivados em BDA diminuiu com o aumento da concentração de Se no meio de cultivo. Foram selecionados os isolados UFV11, UFV16 e UFV53, para continuidade do estudo, com base no crescimento da colônia, na biomassa seca e no potencial de produção de cogumelos. Os diâmetros das hifas, as distâncias entre septos e entre núcleos tenderam a diminuir nas maiores concentrações de Se. A atividade da lacase foi crescente com o aumento da dose de selenito de sódio enquanto que as atividades da celulase e xilanase diminuíram. A taxa respiratória acumulada variou com o isolado e foi maior no isolado UFV11. A morfologia e o tamanho dos cogumelos, cultivados em substratos enriquecidos com 0,08; 0,16 e 0,32 mmol L -1 de selenito de sódio, não variaram com a presença de Se e nem entre os isolados. Os valores de L, a e b, referentes à cor dos cogumelos foram menores nos tratamentos com Se quando comparados com o controle. O teor de umidade dos cogumelos variou de 89 a 91 % e aumentou na maior dose de Se. Os valores de proteínas solúveis foram em média 22,3 mg g -1 de matéria seca e não variaram com a presença de Se e nem com o isolado. Os teores de cálcio e de fósforo não variaram com o aumento da concentração de Se enquanto que os de magnésio tenderam a aumentar e os de potássio a diminuir. As concentrações de Se dos cogumelos aumentaram linearmente com o aumento da dose de selenito de sódio, sendo encontrado valores superiores a 17 mg 100 g -1 de cogumelos desidratados no tratamento com 0,64 mmol L -1 de selenito de sódio. Nos cogumelos do tratamento controle não foi detectado Se. A produtividade dos cogumelos aumentou até a concentração 0,32 mmol L -1 de selenito de sódio. O isolado UFV16 foi o que apresentou maior eficiência biológica em doses mais elevadas de Se. / Enrichment of shiitake mushroom by selenium (Se) can be an alternative to elevate it nutritional and functional value. The objective of this work was to evaluate the effect of Se on the growth and biological activity of fungus Lentinula edodes and to produce shiitake enriched with that element. The growth of 12 isolates of L. edodes, cultivated in Potato Dextrose Agar (PDA) and in ligninocelulosic substrate, containing 0.32; 0.64; 0.96; 1.28 mmol L -1 of sodium selenite and control without Se, varied according to substrate, to fungus isolate and to Se concentration. Fungal dry matter of most of the isolates cultivated in PDA decreased with the increase of the Se concentration in the cultivation medium. Isolates UFV11, UFV16 and UFV53 were selected, for the continuity of the study, based in the growth of the colony, in the dry biomass and in the potential of mushrooms production. Hyphae diameters, distances between septa and between nuclei tended to decrease in higher Se concentrations. Laccase activity was growing with the increase of sodium selenite while celulase and xilanase activities decreased. The accumulated respiratory rate varied with the isolate and was higher in Isolate UFV11. Mushrooms morphology and size, cultivated in substrate enriched with 0.08; 0.16 and 0.32 mmol L -1 of sodium selenite, did not varied according to Se concentration and neither among isolates. L, a and b values, regarding the mushroom’s color were lower in treatments by Se compared with control. Mushrooms humidity varied from 89 to 91% and increased in the higher Se xvconcentration. Soluble proteins were 22.3 mg g -1 of dry matter on average and did not varied with Se presence neither among isolate. Calcium and phosphorus did not varied with the increase of Se concentration while magnesium tended to increase and potassium to decrease. Se concentrations of the mushrooms increased lineally with the increase of the sodium selenite, being found values above to 17 mg 100 g -1 of mushrooms dehydrated in the treatment with 0.64 mmol L -1 sodium selenite. In the mushrooms of the treatment control Se was not detected. Mushroom productivity increased until 0.32 mmol L -1 sodium selenite. Isolate UFV16 was the one presented greater biological efficiency in higher Se concentration.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-10T17:04:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 326944 bytes, checksum: 9cebd9ea04d24f13dffed4354564c1b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-10T17:04:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 326944 bytes, checksum: 9cebd9ea04d24f13dffed4354564c1b2 (MD5) Previous issue date: 2001-10-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A atividade de glutamato desidrogenase (GDH), glutamina sintetase (GS) e glutamtato sintase (GOGAT) foi determinada em três isolados dos fungos ectomicorrízicos Pisolithus sp. (PT90A e RV82) e Laccaria laccata (ME46), crescidos por 25 dias na presença 2,26 mmol L^-1 de N-NH4^+, N-NO3^- ou N-NH4^+/N-NO3^- (1:1). A atividade de todas as enzimas variou entre os isolados e também com a fonte de nitrogênio utilizada no meio de crescimento. Em geral, os maiores valores de atividade foram observados no micélio do isolado RV82 Pisolithus sp. Este isolado também produziu maior quantidade de proteína. Não foi observado crescimento micelial do isolado ME46 quando cultivado em meio contendo N-NO3^- como única fonte de nitrogênio. Foi também estudado, em tubetes com 50 cm³ de areia, o efeito de N-NO3^-, N-NH4^+ ou N-NH4^+/NO3^- (1:1), nas doses de 50, 75, 100 ou 200 mg Kg^-1, sobre a colonização micorrízica, a produção e composição mineral da matéria seca, bem como as atividades das enzimas de assimilação de nitrogênio redutase do nitrato (RN), GDH, GS e GOGAT, em mudas de E. grandis inoculadas com os isolados acima. A atividade das enzimas de assimilação do nitrogênio na planta variou de acordo com a fonte e a dose de N aplicada e o fungo inoculado. Em geral, a atividade das enzimas na parte aérea das plantas foi maior do que na raiz, observando-se sempre maior atividade nas plantas inoculadas em relação às não inoculadas. No sistema radicular de plantas inoculadas com o ME46 e no das não-inoculadas não foi detectada atividade de RN e GDH. A produção de matéria seca e o conteúdo de nutrientes foi maior nas plantas inoculadas em relação às não-inoculadas.Concluiu-se que associação ectomicorrízica influencia a eficiência de utilização de diferentes formas de N pelas plantas, por alterar a atividade das enzimas de assimilação desse elemento. / The activity of glutamate dehydrogenase (GDH), glutamine synthetase (GS), and glutamate synthase (GOGAT) was determined in the mycelium of three isolates of the ectomycorrhizal fungi Pisolithus sp. (PT 90A and RV 82) and Laccaria laccata (ME46), grown for 25 days in media containing 2.26 mmol L^-1 N-NH4^+, N-NO3^-, and N- NH4^+/ N-NO3^- (1:1). Enzyme activity varied among isolates and nitrogen sources added to the growth media. In general, the highest activity values were observed in the mycelium of RV 82. This isolate also presented the highest protein content recorded. No mycelial growth was observed for the isolate ME46 when grown in medium containing only N-NO3^- as nitrogen source. The effect of N-NH4^+, N-NO3^-, and N-NH4^+/ N-NO3^- (1:1), supplied at 50, 75, 100, and 200 mg kg^-1 , on the ectomycorrhizal colonization, dry matter production, mineral composition, and on the activity of the nitrogen assimilation enzymes nitrate reductase (NR), GDH, GS, and GOGAT was studied in E. grandis seedlings inoculated with the fungal isolates PT 90A, RV 82, ME46. The activity of nitrogen assimilation enzymes in the plants varied with N source, dose, and fungal isolated used. In general, enzyme activity in the shoots was higher than that of the root system. Also, inoculated plants had higher enzyme activities than non-inoculated ones. In the root system of plants inoculated with ME46 and in that of non-inoculated plants, no activity of NR and GDH was observed. Dry matter production and nutrient content were higher in inoculated plants compared to non-inoculated ones. The ectomycorrhizal association influences the utilization efficiency of different N sources in plants by altering the activities of nitrogen assimilation enzymes.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-01-19T11:42:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 804820 bytes, checksum: 1d6c01f9b6cbd5f4e3e61bbba11e4db6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-19T11:42:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 804820 bytes, checksum: 1d6c01f9b6cbd5f4e3e61bbba11e4db6 (MD5) Previous issue date: 2017-07-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A eficiência da hidrólise da biomassa lignocelulósica apresenta algumas limitações, dentre elas a possível adsorção inespecífica das enzimas à lignina. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o perfil de adsorção de proteínas e enzimas do fungo fitopatogênico Chrysoporthe cubensis em bagaços de cana-de-açúcar pré-tratados e com diferentes conteúdos de lignina e avaliar a eficiência da recuperação destas enzimas e proteínas utilizando metodologias de reciclagem enzimática. De modo a obter o extrato enzimático, o fungo foi cultivado sob fermentação em estado semi-sólido com farelo de trigo. Os bagaços de cana foram pré-tratados com NaOH (BAL) e com H 2 SO 4 (BAC), de modo a conter 8,1% e 33,8% de lignina, respectivamente. A isoterma de Langmuir obtida pelo experimento em condições não hidrolíticas, revelou os parâmetros Pmax e Kp superiores para BAC, e K superior para BAL. Ao final da hidrólise, BAC foi capaz de adsorver maiores quantidades de proteínas, comparado ao substrato BAL. As enzimas celobiohidrolase e xilanase sofreram maiores adsorções em BAC, e de modo contrário, a endoglucanase adsorveu majoritariamente em BAL. A β-glicosidase foi a enzima que menos adsorveu em ambos os substratos. Esses resultados demonstraram o efeito da lignina presente em biomassas complexas ao promover uma maior adsorção de proteínas e de algumas enzimas do extrato enzimático de C. cubensis. Dentre os experimentos de reciclagem enzimática, todos demonstraram ser eficientes na recuperação de proteínas e enzimas adsorvidas na biomassa. A reciclagem com adição de substratos e enzimas frescas foi capaz de promover a maior eficiência de hidrólise da biomassa. Entretanto, para BAC, com elevado conteúdo de lignina, as reciclagens de enzimas e proteínas não demonstraram ser tão eficazes, bem como a hidrólise de açúcares. Desse modo, conclui-se que a lignina presente em altas concentrações nos substratos, além de promover maiores adsorções de proteínas e enzimas, também interfere nos métodos de reciclagem. Também foi comprovada a alta eficiência de reciclagem das enzimas de C. cubensis, mesmo no substrato contendo alta concentração de lignina, além da alta termoestabilidade dessas enzimas, mesmo após 216 h de hidrólise. Desse modo, é confirmado o grande potencial hidrolítico do extrato enzimático obtido desse fungo. / The efficiency of biomass hydrolysis by enzymes has some limitations, such as the possible non-specific adsorptions of enzymes in lignin. The aims of this work were to evaluate the adsorption profile of proteins and enzymes from the phytopathogenic fungus Chrysoporthe cubensis in pretreated sugarcane bagasses with different lignin contents and to evaluate the efficiency of recuperation of this enzymes and proteins using enzymatic recycling methodologies. In order to obtain the enzymatic extract, the fungus was cultivated under semi-solid state fermentation with wheat bran. The sugarcane bagasses were pretreated with NaOH (BAL) and H 2 SO 4 (BAC), in order to obtain 8.1% and 33.8% of lignin, respectively. The Langmuir isotherm obtained by the experiment under non-hydrolytic conditions showed the highest Pmax and Kp parameters for BAC, while K was higher for BAL. At the end of hydrolysis, BAC was able to adsorb greater amounts of proteins compared to BAL. The enzymes cellobiohydrolase and xylanase showed higher adsorption on BAC, and endoglucanase adsorbed mostly on BAL. β-glycosidase was the enzyme that suffered less adsorption on both substrates. These results demonstrate8d the negative effect of the lignin present in complex biomasses which promotes greater adsorption of proteins and some enzymes of the C. cubensis enzymatic extract. Among the enzymatic recycling experiments, all of them were efficient in the recovery of proteins and enzymes adsorbed in biomass. The recycling with the addition of fresh substrates and enzymes was able to promote higher biomass hydrolysis yields. However, for BAC, with high lignin content, the enzymes and proteins recycling did not show to be effective, as well as the sugars hydrolysis. Thus, it is concluded that high concentrations of lignin in the substrates, besides promoting greater adsorption of proteins and enzymes, also interferes in recycling methods. The results also demonstrated the high recycling efficiency of C. cubensis enzymes, even in the substrate containing high lignin concentration, besides the high thermostability of these enzymes, even after 216 h of hydrolysis. Thus, the great hydrolytic potential of enzymatic extract obtained from this fungus is confirmed.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-07T11:46:42Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1307111 bytes, checksum: 9206e9e1d7450e4895b82477625ede32 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T11:46:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1307111 bytes, checksum: 9206e9e1d7450e4895b82477625ede32 (MD5) Previous issue date: 2015-04-30 / A biotecnologia pode contribuir para tornar os processos industriais mais competitivos e sustentáveis. No processamento convencional da cana de açúcar, cerca de 50% do bagaço poderá ser utilizado como matéria prima para a produção do etanol de segunda geração, após a redução dos custos do processo, que atualmente inviabilizam o processo. No branqueamento da polpa Kraft, o emprego de enzimas leva à redução de resíduos tóxicos. Neste trabalho o isolado Trichoderma deliquescens J-7 foi avaliado quanto ao seu potencial para produção de enzimas lignocelulolíticas visando suas aplicações em processos biotecnológicos, mais precisamente, processos de sacarificação do bagaço de cana de açúcar e no branqueamento da polpa Kraft de eucalipto. O fungo foi cultivado em meio líquido contendo diferentes fontes de carbono e nitrogênio e, após sete dias de cultivo, os extratos produzidos foram coletados e analisados. A palha de milho foi a melhor opção para produção de celulases embora uma maior produção de β-glicosidase tenha sido observada para o cultivo com palha de cana. Testes estatísticos com delineamentos fatoriais foram então utilizados para avaliar o efeito das concentrações dos componentes do meio afim de se otimizar a produção das enzimas, sendo otimizada a produção de xilanase (784 U/mL). Contudo não foi possível ajustar um modelo para a atividade CMCase. As enzimas foram mais ativas entre 50 °C e 65 °C e no pH 4,5 a 5,5. O tempo de meia vida a 50 °C das celulases foi de aproximadamente 32 horas e da xilanase de 66 minutos a 60 °C. Na aplicação das enzimas foi observado um menor rendimento na conversão de glicose na sacarificação da biomassa comparando o extrato do T. deliquescens com o extrato comercial Multifect® CL. Entretanto o rendimento na conversão de xilana foi aproximadamente 4 vezes maior. Quando aplicada no branqueamento da polpa, a xilanase produzida pelo fungo possibilitou a uma redução de 14% da utilização de dióxido de cloro além de maiores níveis de alvura da polpa. Estes dados nos mostraram o grande potencial da utilização dos extratos enzimáticos produzidos pelo isolado J-7 de T. deliquescens nos processos estudados. / Biotechnology can help to make industrial processes more competitive and sustainable. In conventional processing of sugar cane, about 50% of the bagasse could be used as raw material for the production of second generation ethanol after reduction of process costs. In Kraft pulp bleaching, biotechnology with the use of enzymes leads to a reduction of toxic wastes. The Trichoderma deliquescens J-7 strain was evaluated for its potential to produce lignocellulolytic enzymes aiming their applications in biotechnological processes, more precisely, in saccharification of sugar cane bagasse and bleaching of eucalyptus kraft pulp. The fungus was grown in liquid medium with different sources of carbon and nitrogen and after seven days of growth, produced extracts were collected and analyzed. Corn husk proved to be the best option for production of cellulases while increased production of β- glucosidase was observed when using sugar cane straw. Statistical factorial designs were used to evaluate the concentrations of the medium components in order to optimize the production of enzymes, being optimized to produce xylanase (784 U/mL). However it was not possible to fit a model to CMCase activity. The enzymes are most active between 50 °C and 65 °C, pH 4.5 to 5.5. The half-life for cellulases at 50 °C was approximately 32 hours and for xylanase 66 minutes at 60 °C. In application of enzymes was observed lower yield on glucose conversion in the saccharification of biomass comparing T. deliquescens extract and the commercial extract Multifect® CL. However, the yield of xylan conversion was about 4 times higher. When applied in pulp bleaching, a GH11 xylanase produced by the fungus led to a 14% reduction in the use of chlorine dioxide as well as higher levels of pulp brightness. These data have shown us the great potential of the use of enzymatic extracts produced by the straiw J-7 of T. deliquescens in studied processes.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-27T11:15:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 791688 bytes, checksum: 7beb2517f6fac48a0e8b4a7cd36448fd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T11:15:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 791688 bytes, checksum: 7beb2517f6fac48a0e8b4a7cd36448fd (MD5) Previous issue date: 2009-08-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Três experimentos foram realizados com poedeiras Bovans Goldline na fase de produção. No primeiro experimento avaliou-se o efeito da adição da enzima fitase (QuantumTM Fitase) sobre o desempenho e o metabolismo de nutrientes das aves. Foram utilizadas 360 poedeiras, no período de 24 a 36 semanas de idade, distribuídas em um delineamento experimental inteiramente casualizado, com doze repetições de seis aves por unidade experimental e cinco tratamentos: T1 = Controle Positivo (CP), T2 = Controle Negativo (CN) com 0,15% de fósforo disponível, T3 = CN + 200U de fitase, T4 = CN + 400U de fitase, T5 = CN + 600U de fitase. A dieta do controle positivo foi formulada seguindo as recomendações das Tabelas Brasileiras e a dieta do controle negativo foi calculada reduzindo os nutrientes de acordo com a matriz nutricional da enzima. Poedeiras alimentadas com a dieta do controle positivo apresentaram melhores valores para a massa de ovo (MO) e conversão alimentar por massa de ovo (CAMO) quando comparadas àquelas que receberam dietas do controle negativo. No entanto, com a adição da enzima fitase, a MO e a CAMO foram semelhantes aos encontrados na dieta do controle positivo e do controle negativo. Não foi observado efeito significativo para a conversão alimentar por dúzia. Os parâmetros de componentes de ovo não foram influenciados pelos tratamentos, com exceção do peso da casca, que apresentou aumento com a suplementação de fitase nas dietas. Apesar do aumento do coeficiente de digestibilidade aparente da matéria seca em dietas suplementadas com 400U de fitase/kg, não se observou melhoria na rentenção e na excreção de cálcio e de fósforo de poedeiras comerciais. No segundo experimento, avaliou- se o efeito da adição da enzima xilanase (Econase XT25) sobre o metabolismo de nutrientes e o desempenho de poedeiras no período de 24 a 48 semanas de idade. Foram utilizadas 288 poedeiras, distribuídas em um delineamento experimental inteiramente casualizado em arranjo fatorial 2 x 2 (dois níveis de energia metabolizável,sendo 2900 e 2755 kcal/kg X com ou sem adição da enzima xilanase), com doze repetições de seis aves por unidade experimental e quatro tratamentos:T1 = Controle Positivo (CP), T2 = Controle Negativo (CN), T3 = CP + Xilanase (37,5 g/ton) e T4 = CN + Xilanase (37,5 g/ton). As dietas do controle positivo e CP + Xilanase foram formuladas seguindo as recomendações das Tabelas Brasileiras (100% de energia metabolizável) enquanto que as dietas do controle negativo e CN + Xilanase foram calculadas reduzindo 5% da energia metabolizável. A adição da enzima xilanase ao controle negativo proporcionou produção de ovos e massa de ovos semelhante às poedeiras alimentadas com as dietas do controle positivo. A redução de 5% de energia metabolizável resultou na diminuição da produção de ovos, da massa de ovos, na piora da conversão alimentar e no aumento do consumo de ração. Os componentes de ovos não foram influenciados pelos tratamentos. Os valores médios da energia metabolizável aparente corrigida foram maiores em dietas com a maior energia metabolizável. A adição da enzima xilanase melhorou a utilização da energia e a produção de ovos em dietas de galinhas poedeiras. No terceiro experimento, objetivou-se verificar o efeito da adição do complexo enzimático (Rovábio®Max) sobre metabolismo de nutrientes e o desempenho de poedeiras. Foram utilizadas 216 poedeiras no período de 24 a 36 semanas de idade, distribuídas em delineamento experimental inteiramente casualizado, com doze repetições de seis aves por unidade experimental e três tratamentos: T1 = Controle Positivo, T2 = Controle Negativo (CN), T3 = CN + Complexo Enzimático (100 g/ton). A dieta do controle positivo foi formulada seguindo as recomendações das Tabelas Brasileiras e a dieta do controle negativo foi calculada reduzindo os nutrientes presentes na matriz nutricional da enzima. Comparando as aves que receberam dietas do controle positivo e do controle negativo, a adição do complexo enzimático nas dietas do controle negativo melhorou o percentual de postura e a conversão alimentar por dúzia. A redução dos níveis nutricionais das dietas resultou em menores valores de energia metabolizável aparente (EMA) e energia metabolizável aparente corrigida. A suplementação do complexo enzimático às dietas com menores níveis nutricionais melhorou os valores de EMA, resultando em valores similares aos apresentados pelas aves alimentadas com a dieta do controle positivo. Poedeiras alimentadas com a dieta do controle positivo apresentaram maiores ingestão, excreção e retenção de fósforo (mg/ave/dia); entretanto, houve maior retenção de fósforo (%) pelas aves que receberam dietas suplementadas com o complexo enzimático .A utilização do complexo enzimático mostrou-se eficiente em dietas para poedeiras pelo aumento exercido no percentual de postura, pela melhora da conversão alimentar por dúzia e pelo aumento nos valores de EMA e retenção de fósforo em dietas nutricionalmente deficientes. / Three experiments were developed with Bovans Goldline commercial layers, in the production period. In the one experiment was conducted with the objective to determine the effect of the addition of phytase enzyme on performance and metabolism of laying hens in the period from 24 to 36 weeks of age. Three hundred and sixty laying hens were used, allotted to a completely randomized design, with twelve replicates of six birds per unit and five experimental treatments: T1 = Positive Control (PC), T2 = Negative Control (NC by 0.15% phosphorus available), T3 = NC + 200U of phytase, T4 = NC + 400U of phytase, T5 = NC + 600U of phytase. The positive control diet was formulated to contain adequate nutrient levels following the recommendations of the Brazilian Tables and the negative control diet was calculated reducing the nutrients in agreement to the nutritional matrix of the phytase enzyme. Hens fed with the control diet showed higher positive values for the egg mass (EM) and feed conversion by egg mass (FCEM) when compared to those that were fed with the negative control. However, with the addition of phytase, the FCEM and EM were similar to those found in the diets of positive control and negative control. There was no significant effect for feed conversion per dozen. The parameters of components of eggs were not affected by treatments, except the eggshell weight, which showed an increase with the addition of phytase in the diets. Despite the increase of the apparent digestibility coefficient of dry matter in diets supplemented with 400U of phytase/kg, there was no improvement in retention and excretion of calcium and phosphorus of laying hens. In the second experiment, the effect of adding enzyme xylanase (Econase XT25) on metabolism of nutrients and performance and metabolism of laying hens in the period from 24 to 48 weeks of age was evaluated. Two hundred and eighty-eight laying hens were used, allotted in a completely randomized design with a 2x2 factorial arrangement (two levels of metabolizable energy, being 2900 and 2755 kcal/kg X with or without addition of enzyme xylanase), with twelve replicates of six birds per unit and four experimental treatments: T1 = Positive Control (PC), T2 = Negative Control (NC), T3 = PC + Xylanase (37.5 g/ton) and T4 = NC + Xylanase (37.5 g/ton). Diets in the positive control and PC + Xylanase treatments were formulated to contain adequate nutrient levels (100% metabolizable energy level) following the recommendations of the Brazilian Tables. Diets of negative control and NC + Xilanase treatments were calculated with 5% reduction in metabolizable energy The addition of enzyme xylanase to the negative control diet resulted in layers with egg production and egg mass similar to the layers fed with the positive control diet. The 5% reduction of metabolizable energy resulted in lower egg production, egg mass, worst feed conversion and higher feed intake. The eggs components were not affected by treatments. The average values of corrected apparent metabolizable energy were higher on diets with increased metabolizable energy. The addition of enzyme xylanase provided improvement of the energy use and eggs production of laying hens. The third experiment was made to verify the effect of adding the enzymatic complex (Rovábio®Max) on performance and metabolism of laying hens in the period from 24 to 36 weeks of age. Two hundred and sixteen laying hens were used, allotted to a completely randomized design, with twelve replicates of six birds per unit and three experimental treatments: T1 = Positive Control (PC), T2 = Negative Control (NC), T3 = NC + enzymatic complex (100 g/ton). The positive control diets were formulated to contain adequate nutrient levels following the recommendations of the Brazilian Tables. Diets of negative control and NC + enzymatic complex were calculated reducing the nutrients present in the nutritional matrix of the enzyme complex evaluated. When hens fed with the negative and positive control diets were compared, the addition of enzymatic complex to the negative control diet improved hen-day egg production an feed:gain ratio (Kg/Dz). The reduction in the levels of nutritional diets resulted in lower values of apparent metabolizable energy and corrected apparent metabolizable energy. The supplementation of the enzymatic complex to diets with lower levels improved the nutritional values of metabolizable energy, resulting in values similar to those presented by the hens fed with the positive control diet. Layers fed with the positive control diet showed higher phosphorus intake, excretion and retention (mg/bird/day); however, there was greater retention of phosphorus (%) by birds that received supplemented diets with the enzymatic complex. The use of the enzymatic complex was efficient in laying hens diets for the increase in the percentage of egg production, improved feed conversion per dozen and the increase in AME and retention of phosphorus in diets nutritionally deficient.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-26T12:52:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 137036 bytes, checksum: db49b7e84bd9e6a78d43ec365b2c53e1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T12:52:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 137036 bytes, checksum: db49b7e84bd9e6a78d43ec365b2c53e1 (MD5) Previous issue date: 2000-08-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os efeitos de níveis de nitrogênio não-específico combinados com níveis de vitamina D sobre as atividades de lipase e amilase do quimo e pâncreas foram estudados em um experimento conduzido com pintos de um dia, machos, Hubbard, criados em bateria aquecida com piso de tela elevado e alimentados ad libitum com água e dietas básicas purificadas, contendo todos os aminoácidos essenciais, vitaminas (exceto vitamina D) e minerais em níveis recomendados, por um período de 14 dias. O delineamento foi um fatorial 3 x 4 inteiramente casualizado, com quatro repetições de oito pintos cada e os tratamentos foram constituídos da dieta básica suplementada com 5, 10 e 15% de ácido L- glutâmico (L-Glu), combinados com 0, 5.000, 10.000 e 15.000 UI de vitamina D/kg de dieta (vit. D). Ao término do experimento, quatro aves de cada tratamento foram sacrificadas por deslocamento cervical, e os conteúdos da porção proximal do intestino delgado (quimo) e pâncreas foram removidos, homogeneizados com solução de HCl, pH 3,0, e imediatamente liofilizados. A seguir, alíquotas de cada amostra foram solubilizadas em água destilada e deionizada, centrifugadas, e o sobrenadante foi utilizado para determinações das atividades enzimáticas de lipase e amilase. As atividades de lipase e amilase no pâncreas e no quimo foram determinadas com kits específicos IN VITRO DIAGNOSTICA LTDA. Os dados obtidos permitiram as seguintes obser- vações: em animais alimentados com dietas com níveis baixos (5% L-Glu) de nitrogênio não-específico, foi observado aumento na atividade de lipase pancreática com a suplementação de vitamina D (até 15.000 UI); em dietas com níveis normais e altos (10 e 15% de L-Glu) de nitrogênio não-específico, a atividade de lipase pancreática dos pintinhos atingiu um máximo com suple- mentação de 10.000 UI de vitamina D; a atividade da lipase no quimo dos pintinhos variou acentuadamente, sem permitir observar alguma tendência; em dietas com nível baixo ou normal (5 e 10% de L-Glu) de nitrogênio não- específico, a atividade de amilase do pâncreas de pintinhos aumentou até a suplementação de 5.000 UI de vitamina D, e em níveis vitamínicos superiores (10 e 15.000 UI) houve uma redução na atividade; somente foi observada elevação da atividade da amilase do pâncreas de pintos com a suplementação de vitamina D em dietas com elevado teor de nitrogênio não-específico (15% de L-Glu); e a atividade da amilase no quimo dos pintos tendeu a valores mais elevados em animais alimentados com baixo nível de nitrogênio não-específico (5% de L-Glu). / The effects of non specific nitrogen levels combined with vitamin D levels in the chymo and pancreas lipase and amylase activities were studied in a experiment conducted with one day old chicks, male, Hubbard, raised in eletrically heated batteries with wired and fed ad libitum with water and purified aminoacids diets containing all essential aminoacids, vitamina (except vitamin D) and minerals at recomended levels for a 14 days period. The experimental design was a 3 x 4 factorial with four replicates with eight chicks each and the treatments were formulated with the basic purified diet supplemented with 5, 10 and 15% L-glutamic acid combined with 0, 5,000, 10,000 and 15,000 IU of vitamin D/kg of diet. At the end of the experimental period, four chicks from each treatments were killed by cervical dislocation and the delgate intestine proximal portion and pancreas were removed. These were homogenized with HCl solution, pH 3,0 and immediately freezed-dried. After that, aliquots from each sample were solubilized in destilled and deionized water, centrifuged and the supernatants used for the determination of lipase and amylase activities with IN VITRO DIAGNOSTICA LTDA specific kits. The data observed allowed the folowqing observations: chicks fed low level of non specific nitrogen (5% L- Glu) had an increased in the pancreas lipase activities with vitamin D supplementation from 0 to 15,000 IU/kg of diet; chicks fed normal and higher levels of non specific nitrogen (10 and 15% L-Glu) showed a maximum activity when supplemented with 10,000 IU of vitamin D; chymo lipase activities varied so much without any rational tendency; chicks fed low and normal level of non specific nitrogen (5 and 10% L-Glu) had higher pancreas amylase activities with 5,000 IU of vitamin D and at higher levels of vitamin D (5,000 and 15,000 IU) these activities were reduced; only chicks fed higher non specific level (15% L-Glu) showed a positive effect of vitamin D supplementation; differently from the other results observed chymo amylase activity had a tendency to be higher in chicks fed low level of non specific nitrogen. / Não foi localizado o cpf do autor.

Atualmente, o aumento da produção industrial, assim como várias ações humanas, resultam no lançamento de substâncias químicas no meio ambiente. Entre os diversos poluentes, o efluente proveniente da indústria do couro é considerado um dos maiores contaminantes dos recursos hídricos. Neste contexto, o estresse oxidativo é sugerido como um dos mecanismos bioquímicos da toxicidade de vários contaminantes ambientais, e alterações nas atividades de enzimas responsáveis pela detoxificação de xenobióticos podem ser utilizadas no monitoramento dos efeitos nocivos destas substâncias. Assim, este trabalho teve como objetivo central avaliar o efeito da exposição ao efluente de curtume sobre parâmetros oxidativos, principalmente por meio da avaliação das atividades de enzimas antioxidantes em diferentes modelos animais, roedores e insetos. Na primeira etapa, avaliou-se os efeitos da exposição in vitro ao efluente de curtume sobre o estado oxidativo e as atividades da superóxido dismutase, glutationa peroxidase e glutationa S-transferase em estruturas cerebrais (córtex, estriado e hipocampo) e fígado de ratos e camundongos. No fígado, observou-se que a exposição ao efluente de curtume induziu um aumento nas atividades das glutationa peroxidase e glutationa S-transferase nos ratos, enquanto que, em camundongos não houve alterações nas atividades destas enzimas. Em relação à formação das espécies reativas, observou-se um aumento no fígado dos camundongos, e o mesmo não foi detectado em ratos. Este resultado pode estar relacionado com o aumento nas atividades da glutationa peroxidase e glutationa S-transferase, já que estas enzimas são relacionadas com detoxificação de xenobióticos. Nas estruturas cerebrais, a exposição ao efluente de curtume induziu efeitos similares em ratos e camundongos, uma vez que houve um aumento nos níveis de espécies reativas no cerebelo, hipocampo e córtex, assim como um perfil semelhante na atividade das enzimas avaliadas nestas estruturas. Estes resultados sugerem que camundongos são mais suscetíveis já que a exposição não ocasionou um aumento nas atividades das enzimas do sistema glutationa no fígado, indicando que a biodisponibilidade central dos compostos presentes no efluente de curtume pode ser maior em camundongos. Na segunda etapa, avaliou-se os efeitos da exposição de Drosophila melanogaster adultas por 72 horas ao efluente de curtume. Após a exposição, foi quantificada a mortalidade e as atividades da superóxido dismutase, glutationa peroxidase e glutationa S-transferase. Neste estudo, observou-se um aumento da letalidade. Foi detectado também, um aumento na atividade da glutationa peroxidase. No entanto, observou-se decréscimo na atividade de glutationa S-transferase nas moscas expostas ao contaminante. Considerando estes resultados, é possível sugerir que a exposição ao efluente proveniente do curtume pode alterar o sistema antioxidante enzimático, e que Drosophila melanogaster parece ser um bom modelo para avaliar a toxicidade induzida pelo efluente de curtume. Os resultados desta Tese apoiam a ideia de que alterações no sistema antioxidante enzimático podem estar relacionadas com efeitos tóxicos da exposição ao efluente de curtume, e que, em parte, estas alterações podem elucidar o mecanismo pelo qual o contaminante causa resposta divergente em roedores, além de que os compostos deste efluente podem impactar na sobrevivência e no sistema antioxidante de insetos adultos. / Actually, chemicals have been widely released to the environment. Among the many pollutants emitted into the environment, the effluent from the leather industry is considered one of the greatest contamination of water resources. In this context, the oxidative stress has been suggested as a central biochemical mechanism of toxicity from several environmental toxicants, and changes in the enzymes activities responsible for the detoxification of xenobiotics can be used in monitoring the harmful effects of these substances. Thus, this study aimed to evaluate the effect of exposure to tannery wastewater on oxidative parameters, and mainly studying the enzymatic activities in different animal models. In the first step of this study, it was evaluated the effects of in vitro exposure to tannery wastewater on oxidative status, and activities of superoxide dismutase, glutathione peroxidase and glutathione S-transferase in brain structures (cortex, striatum and hippocampus) and liver of the rats and mice. It was observed that exposure to tannery wastewater induced an increase in the activity of glutathione peroxidase and glutathione S-transferase in the rats liver, whereas no changes were detected in the hepatic enzymes in mice. Regarding the formation of reactive species, there was an increase in the mice liver, and it was not detected any effect in rat liver This result may be related to the increase in the activity of glutathione peroxidase and glutathione S-transferase since these enzymes have been related to detoxification of xenobiotics. Exposure to effluent induced similar effects in brain structures from rats and mice, since there was an increased in the free radical levels in the cerebellum, hippocampus and cortex, as well as a similar profile in the activity of the enzymes evaluated in these brain structures from both species. These results suggest that mice are more susceptible since the exposure did not cause an increase in the activity of the enzymes glutathione system in the liver, indicating that the central bioavailability of the compounds in tannery wastewater may be higher in mice. In the second section, it was evaluated the effects of exposure of adult Drosophila melanogaster placed for 72 hours with tannery effluent. After exposure, mortality was quantified, and it was evaluated the activities of superoxide dismutase, glutathione peroxidase and glutathione S-transferase. In this work, exposure to tannery effluent induced lethality in flies. We also detected an increase in glutathione peroxidase activity. However, there was a decrease in the glutathione S-transferase activity in flies exposed to contaminant. Considering these results, it is possible to suggest that exposure to tannery effluent can modify the enzymatic antioxidant system in insects, and Drosophila melanogaster is a reliable model to evaluate the toxicity induced by tannery wastewater. The results of this study support the idea that alterations in enzymatic antioxidant system may be associated with toxic effects of exposure to tannery wastewater and, in part, these changes can clarify the mechanism by which the contaminant causes a divergent response in rodents and insects.

Esta dissertação de mestrado apresenta o estudo da utilização de enzimas na síntese de poliésteres, através do uso de catálise enzimática na transesterificação de diácidos carboxílicos com polióis. O objetivo principal foi estudar a viabilidade na síntese de poliésteres a partir de diácidos carboxílicos como o ácido adípico e o Pripol® e polióis como: glicerol, trimetilolpropano, pentaeritritol, 1,10-decanodiol e poliol vegetal (este oriundo da reação de alcoólise entre óleo de soja e glicerol). A enzima utilizada para o processo foi a Novozym 435, obtida comercialmente. Esta se enquadra na classificação como uma hidrolase do tipo EC 3.1.1.3, mais comumente chamadas de lipases. Como vantagens no emprego de tais enzimas podemos destacar o menor consumo de energia e sustentabilidade ambiental no processo. Também foi avaliada a toxicidade do sistema frente às reações enzimáticas. A mistura ciclohexano/THF se mostrou a mais efetiva. Nas reações de policondensação, foi avaliada a influência do monômero hidroxilado e do monômero carboxílico, sendo que reações com ácido adípico e Pripol® na presença de solventes como ciclohexano/THF e THF/5-hexen-1-ol propiciaram a formação de poliésteres com massa molar numérica média (Mn) superior a 4000 Da. / This works presents the synthesis of polyesters by enzymatic catalysis for the transesterification of carboxylic diacids with polyols. The main objective was to study the feasibility for the synthesis of polyesters from carboxylic diacids as adipic acid and PRIPOL®, and polyols such as glycerol, trimethylolpropane, pentaerythritol, 1.10-decanediol and polyol (from the enzymatic alcoholysis reaction between soybean oil and glycerol). The enzyme used in the process was the comercial Novozym 435, which is classified as hydrolase EC 3.1.1.3, more commonly called lipases. The advantages in the use of such enzymes are the lowest energy consumption and environmental sustainability in the process. We also evaluated the enzymatic toxicity in the presence of the reagents and solvents. The mixture cyclohexane / THF was the most effective. The influence of the hydroxylated and carboxylic acid monomers in the polycondensation reactions was investigated , and the reaction with adipic acid and PRIPOL® in the presence of solvents such as cyclohexane / THF and THF/5-hexen-1-ol enabled the formation of polyesters with mass molar number average (Mn) higher than 4000 Da.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2015-11-03T14:18:27Z No. of bitstreams: 1 2015_PatriciaAlvesSilva.pdf: 1963450 bytes, checksum: 252f173b1b9d8c60126eea7dac7dc38c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-12-30T11:53:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_PatriciaAlvesSilva.pdf: 1963450 bytes, checksum: 252f173b1b9d8c60126eea7dac7dc38c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-30T11:53:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_PatriciaAlvesSilva.pdf: 1963450 bytes, checksum: 252f173b1b9d8c60126eea7dac7dc38c (MD5) / O crescente número de casos de infecções fúngicas sistêmicas tem sido motivo de grande preocupação em âmbito mundial. As opções terapêuticas disponíveis atualmente são limitadas, dividida em quatro grupos: os Polienos (anfotericina B), Fluoropirimidinas (flucitosina), Azólicos (cetoconazol, fluconazol, itraconazol, posaconazol e voriconazol) e Equinocandinas (caspofungina, micafungina e anidulafungina. Além disso, vem sendo observado há algum tempo o surgimento de resistência aos agentes antifúngicos como Anfotericina B e derivados azólicos, surgindo à necessidade do desenvolvimento de novos antifúngicos. Atualmente, a pesquisa e o desenvolvimento de drogas consomem muito tempo e apresentam altos riscos. O planejamento baseado na estrutura e no mecanismo de ação tem se mostrado uma estratégia eficiente e menos dispendiosa para desenvolvimento de novos fármacos. Neste contexto, em resultados preliminares obtidos pelo grupo, por meio de análise in silico, foram identificados quatro possíveis genes-alvos, que estão presentes em sete fungos patogênicos humanos relevantes e ausentes no genoma humano. Entre estes genes-alvo está o kre2 ou Mnt1, que codifica uma proteína de aproximadamente 49 kDa, a α - 1,2 manosiltransferase. Esta é uma proteína importante para viabilidade celular e virulência do patógeno no interior do hospedeiro. Além da seleção dos dez genes candidatos, nosso grupo identificou por métodos in silico de modelagem molecular e screening virtual, 17 compostos de baixa massa molecular (small molecules) que potencialmente têm capacidade de inibir a enzima α - 1,2- manosiltransferase (KRE2) de P. lutzii. Das 17 moléculas selecionadas, uma se destacou nos testes de susceptibilidade contra fungos de importância médica e foi denominada de molécula 3. Com testes de inibição in vitro promissores surgiu-se a necessidade de avaliar se de fato esta molécula é capaz de inibir especificamente o alvo molecular KRE2 de P. lutzii. Os resultados alcançados neste trabalho apontam para o sucesso na obtenção desta proteína no sistema de expressão heteróloga em Pichia pastoris. Uma vez que este sistema realiza glicosilação de proteínas, possibilita o dobramento correto da enzima alvo, e fornece as condições necessárias para continuidade dos experimentos. Quantidades razoáveis da proteína foram produzidas heterologamente, o que possibilitou a realização dos ensaios para determinação dos parâmetros cinéticos e testes de inibição enzimática usando a molécula 3 contra o alvo KRE2 de P. lutzii. Utilizando substrato marcado com [14C] nas reações, foi determinado o Km aparente de KRE2 de P. lutzii que atingiu 3,7 pM, demonstrando alta afinidade da enzima pelo substrato em relação aos dados descritos na literatura. De forma semelhante, os testes de inibição enzimática utilizaram o isótopo radioativo e a molécula 3 foi usada contra as enzimas KRE2 de P. lutzii e MNT1 de Cândida albicans. Os resultados obtidos para KRE2 de P. lutzii demonstram que na presença da molécula inibidora, foi observada uma redução da atividade enzimática de até 60%. No entanto, a redução da atividade enzimática de MNT1 de Cândida albicans ficou em 20%. Faz-se necessário destacar que a molécula 3 apresenta problemas de solubilidade e que novos ensaios de susceptibilidade contra espécies de Cândida spp. utilizando Pluronic F-127 associados a molécula 3 foram realizados pelo nosso grupo e os resultados foram promissores. Desta forma, o melhoramento da solubilidade da molécula 3 representa um avanço nos testes de inibição in vitro, o que aumenta a expectativa de um MIC90 melhor para os outros fungos de importância médica. Os resultados apresentados neste trabalho representam um avanço na validação da molécula 3 como inibidor de KRE2 de P. lutzii, o que poderá contribuir com dados relevantes para o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento de micoses de relevância mundial. / The occurrence of growth of systemic infections has been the cause of great concern worldwide. The therapeutic options currently available are limited, and are divided into four groups, Polyenes (amphotericin B), fluoropyrimidines (flucitosine), Azoles (ketoconazole, fluconazole, itraconazole, posaconazole and voriconazole) and Echinocandins (caspofungin, micafungin and anidulafungin. Furthermore, this is observed of resistance to antifungal agents such as amphotericin B and azoles, leading to the need of development of new antifungal agents. Currently, the research and drug development, consume much time and it have high risks. The planning based on structure and mechanism of action has proven to be an efficient and less expensive strategy for development of new drugs. In this context, in preliminar results obtained by the group using in silico analysis identified four possible target genes which are present in seven relevant human pathogenic fungi and absent in the human genome. Among these target genes Kre2 or Mnt1 is responsible to encode a protein of approximately 49 kDa, the α - 1,2 mannosyltransferase. This is an important protein for cell viability and virulence of the pathogen within the host. Besides the selection of ten candidate genes, our group identified using in silico methods of molecular modeling and virtual screening 17 compounds of low molecular weight (small molecules) that potentially have the ability to inhibit the enzyme α - 1,2 mannosyltransferase (KRE2) of P. lutzii. Of the 17 molecules selected, one highlighted out in susceptibility tests against fungi of medical importance and was called molecule 3. With in vitro inhibition tests promising, the need to evaluate if in fact this molecule is able to specifically inhibit the molecular target KRE2 of P. lutzii emerged. The results obtained in this study point to the success in getting this protein in heterologous expression system in Pichia pastoris. Once this system performs glycosylation of proteins, it allows the correct folding of the target enzyme, favoring the necessary conditions to continue the experiments. Reasonable amounts of protein were produced heterologously, allowing the tests to determine the kinetic parameters and enzyme inhibition tests using the molecule 3 against the target KRE2 P. lutzii. Using labeled substrate [14C] in the reactions, apparent Km of KRE2 of P. lutzii was determined, which reached 3.7 pM, demonstrating the high affinity of the enzyme for the substrate in comparison to data in the literature. Similarly, the enzymatic inhibition tests used the radioactive isotope and the molecule 3 was used against enzymes KRE2 of P. lutzii and MNT1 of Candida albicans. The results obtained for KRE2 of P. lutzii demonstrated that in the presence of the inhibitor molecule, was observed a reduction in the enzymatic activity by 60%. However, reduction of the enzymatic activity of MNT1 of Candida albicans was 20%. It is necessary to point out that the molecule 3 shows solubility issues, additional susceptibility testing against species of Candida spp. using Pluronic F-127 linked to molecule3 were carried out by our group with promising results. Thus, the improvement of the solubility of the molecule 3 represented an advance in vitro inhibition tests, which increases the expectation of better MIC90 for other fungi of medical importance. The results presented in this work represents an advancement in the validation of the molecule 3 as an inhibitor of KRE2 of P. lutzii, which may contribute to important data for the development of new drugs for the treatment of fungal infections of global relevance.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-05-19T04:04:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333310.pdf: 2571212 bytes, checksum: ec206db5183720c66c0dee0407f362ef (MD5) Previous issue date: 2015 / A crescente demanda por materiais poliméricos livres de resíduos tóxicos, oriunda dos setores médico, farmacêutico e alimentício, bem como os avanços tecnológicos na obtenção de enzimas como as lipases solvente tolerantes e/ou imobilizadas, permitindo sua reutilização tornou possível que, catalisadores biológicos e fluidos pressurizados outrora relegados a segundo plano, tornassem-se atualmente uma das alternativas mais promissoras na área de polímeros biorreabsorvíveis e biodegradáveis. Neste contexto, a policaprolactona (PCL), um polímero biorreabsorvível e biodegradável, bem como o dióxido de carbono supercrítico (scCO2) têm permeado, de forma separada ou conjunta, diversas áreas de interesse acadêmico e industrial, com aplicações nos setores biomédico, farmacêutico, alimentício, e ecológico. Da combinação destas tecnologias aliada à possibilidade de produção em larga escala de polímeros via sistemas contínuos, emerge um vasto território de possibilidades/oportunidades para o setor acadêmico e industrial. Neste contexto, o presente trabalho objetivou o estudo da polimerização enzimática por abertura de anel (e-ROP) da e-caprolactona (e-CL) em fluidos pressurizados pelo uso de um reator contínuo empacotado (PBR) com enzimas imobilizadas (Novozym 435), visando a definição das melhores condições para as reações de polimerização. Para tanto, inicialmente foram realizados experimentos em dióxido de carbono (CO2) de forma a avaliar a influência da pressão de operação (120 e 200 bar), da razão mássica solvente/monômero (S/M = 2:1 e 1:2) e dos diferentes tempos espaciais (t) do substrato dentro do PBR sobre o rendimento das reações (Y), massa molecular numérica média (Mn) e índice de polidispersão (IP). Este estudo também avaliou a produção de policaprolactona para longos tempos de reação com a mesma carga de enzimas, visando determinar a retenção da atividade enzimática por meio da constância nos valores das variáveis de resposta das reções de e-ROP (Y, Mn e IP). Os melhores resultados obtidos a partir destes experimentos iniciais foram de 60,1 % e 53,5 % de conversão monomérica (Y) e de 21700 Da e 35800 Da de massa molecular númerica (Mn) para os experimentos realizados com razão S/M de 2:1 e pressões de 120 e 200 bar respectivamente. No entanto, estes valores de Y e Mn diminuíram rápida e expressivamente com o processamento contínuo dos reagentes devido ao acumulo/adsorção de material polimérico sobre as enzimas. A partir destes resultados optou-se pelo uso de um solvente orgânico (diclorometano-DCM) comocossolvente para reações de polimerização com as melhores condições operacionais obtidas anteriormente. Neste sentido, o uso do DCM como cossolvente nas reações mostrou-se promissor resultando em altos valores de Y (93,3 %) e valores de Mn de cerca de 22500 Da para tempos espaciais de apenas 15 minutos em reações realizadas a 120 bar e razão S/MIX (MIX = 50 % de e-CL + 50 % de DCM). Além disso, os valores de Y permaneceram constantes até 6 t (90 min.), já os valores de Mn foram menos constantes. A partir destes resultados, diversas variáveis foram testadas visando melhorar a eficiência na produção de policaprolactona em sistema contínuo como: quantidade de água no meio reacional, tipo e concentração de cossolvente no meio, uso de ondas ultrassônicas nas reações de e-ROP e uso de n-butano como solvente pressurizado. Neste sentido rendimentos de até 98 % e massas moleculares (Mn) na faixa de 35000 (Da) foram obtidos. Algumas das melhores condições operacionais obtidas a partir destes experimentos foram utilizadas em reações de e-ROP realizadas para até 40 t (10 h de reação) usando a mesma carga de enzimas. Esta etapa resultou em valores de Y de 95,0 % e massas moleculares (Mn) de 20000 (Da), estes valores máximos mantiveram-se constantes por até 10 horas de reação com a mesma carga de enzimas. A partir dos resultados obtidos conclui-se que, tanto o equipamento quanto a metodologia desenvolvida no presente trabalho para a produção de PCL em modo contínuo mostraram-se promissores na busca por polímeros de alto valor agregado.<br> / Abstract: The rising demand for products free of toxic waste coming from the medical sectors, pharmaceutical and food industries, as well as technological advances in obtaining solvent-tolerant lipases and/or immobilized, allowing its reuse and economic feasibility, that made it possible, biological catalysts and fluids pressurized once relegated to the background to become currently one of the most promising in the field of biodegradable polymers. In this context, polycaprolactone (PCL), a biodegradable polymer and bioresorbable, and the scCO2, have permeated separately/together several areas of academic interest and industrial, with applications in the food, pharmaceutical, biomedical and ecological. From of the combination of these technologies coupled with the possibility of large scale production (polymer) from continuous systems, emerges a vast territory of possibilities/opportunities for the academic and industrial sectors. In this context, this work aims to study the enzymatic polymerization of ring opening (e-ROP) of e-caprolactone (e-CL) in pressurized fluids by use of a continuous reactor packed (PBR) with immobilized enzymes (Novozym 435) aimed at defining the best conditions for the polymerization reaction. To this end, experiments were performed in carbon dioxide (CO2) in order to assess the influence of the operating pressure (120 and 200 bar), the mass ratio solvent/monomer (S/M = 2:1 and 1:2) and different space times (t) of the substrate within the PBR on the income of Y reactions, number average molecular weight (Mn) and polydispersity index (PI). This study also evaluated the production of polycaprolactone for long time reactions with the same amount of enzymes, aiming to determine the retention of the enzymatic activity through constancy in the values of response variables of reactions of e-ROP (Y, Mn and IP). The best results obtained from of these initial experiments were of 60,1 (wt%) and 53,5 (wt%) of monomeric conversion (Y) and of 21700 Da and 35800 Da of numeric molecular weight (Mn) to the experiments carried out with the ratio S/M of 2:1 and pressures of 120 and 200 bar respectively. But these values of Y and Mn decreased fast and expressively with the continuous processing of the reagents due to accumulation/adsorption of polymeric material on the enzymes. From these results it was decided to use one organic solvent (dichloromethane-DCM) as cosolvent for polymerization reactions with the best operating conditions previously obtained. In this sense, the use of DCM as a cosolvent in the reactions proved to be promises resultingin high values of Y (93,3 wt%) and values of Mn around of 22500 Da for space times of only 15 minutes in reactions carried out at 120 bar and mass ratio S/MIX (MIX= 50 wt% of e-CL + 50 wt% of DCM). Moreover, the Y values remained constant even after 6 t (90 min.), while the Mn values remained constants less. From these results, several variables were tested aiming to improve the efficiency in the polycaprolactone production in continuous system, as: amount of water in the reaction medium, type and concentration of cosolvent in the medium, the use of ultrasonic waves in the e-ROP reactions and the use of n-butane as pressurized solvent. Some of the best operating conditions obtained from these experiments were used in e-ROP reactions carried out for up to 40 t (10 h reaction time) using the same load of enzymes. This step resulted in values of Y 95,0 (wt%) and molecular weight (Mn) of 20000 (Da) these maximum values remained constant up to 10 hours of reaction with the same load of enzymes. From the results obtained it is concluded that both the equipment and the methodology developed in this work for the production of PCL in continuous mode proved extremely promising in the search for polymers with high added value.