Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:31:02Z : No. of bitstreams: 1 000852082_20161210.pdf: 230591 bytes, checksum: 721ec6c30b85d4ed7418a75bd798b701 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-12-12T11:23:45Z: 000852082_20161210.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-12-12T11:24:26Z : No. of bitstreams: 1 000852082.pdf: 1311477 bytes, checksum: 528e3eaeba37a63044d2768293cc53b6 (MD5) / Este estudo foi realizado para o rastreio da produção de fitase utilizando resíduos agroindustriais como substrato para fermentação em estado sólido (SSF) e várias cepas fúngicas. A alta produção de fitase foi observada para a maioria dos microrganismos estudados, bem como características muito diferentes actividades bioquímicas, incluindo a valores de pH específicos. As fitases mostrou um comportamento muito distinto de óptimo e estabilidade do pH, os valores ideais de temperatura e estabilidade. A. niger mostrou os maiores valores de atividade enzimática. Enzima liofilizada produzida por A. niger atingiu 8,575 U / g e rendimento de 826,096.50 U / Kg de substrato quando fermentado em farelo de trigo. Portanto, o substrato, bem como a estirpe de microorganismo pode alterar as características bioquímicas da enzima produzida. A alta atividade de fitase e características muito distintas estabelecidas, além do baixo custo de substratos, fazer estes fungos fitases alternativas potenciais para a indústria biotecnológica. / This study was carried out for screening the phytase production using agroindustrial residues as substrate for solid state fermentation (SSF) and several fungal strains. High phytase production was observed for most of the microorganisms studied, as well as very different biochemical characteristics, including activities at specific pH values. The phytases showed very distinct behavior of optimum and stability pH, optimal values of temperature and stability. A. niger showed the higher values of enzyme activity. Lyophilized enzyme produced by A. niger reached 8,575 U/g and yield of 826,096.50 U/Kg of substrate when fermented in wheat bran. Therefore, the substrate as well as the microorganism strain can affect the biochemical character of the enzyme produced. The high phytase activity and very distinct characteristics established, plus the low cost of substrates, make these fungal phytases potential alternatives for biotechnological industry.

Made available in DSpace on 2016-02-05T18:29:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:33:10Z : No. of bitstreams: 1 000855140_20171231.pdf: 406283 bytes, checksum: 823f0d02fed64dbb32d7dff3316d1155 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-01-02T17:04:30Z: 000855140_20171231.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-01-02T17:05:40Z : No. of bitstreams: 1 000855140.pdf: 4432087 bytes, checksum: 4ac154a67789770c2556426a1bee6033 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O conhecimento sobre a organogênese das larvas de peixes é uma ferramenta útil para estabelecer suas capacidades funcionais sistêmicas e suas necessidades fisiológicas a fim de garantir o bem-estar ideal e o crescimento sob condições de aquicultura A manipulação de protocolos de alimentação na larvicultura pode influenciar a capacidade das funções digestivas, levando os animais a um maior ou menor desenvolvimento. Desta forma, o objetivo deste estudo foi verificar o crescimento e o desenvolvimento morfofisiológico do trato digestório de larvas de pacu, Piaractus mesopotamicus, cultivadas com diferentes dietas alimentares e protocolos de transição do alimento vivo para o formulado, por meio de análises de desempenho zootécnico, histológicas, histoquímicas e enzimológicas (tripsina, amilase, lipase, leucina-aminopeptidase, maltase e proteases ácidas), contribuindo assim, para a compreensão do desenvolvimento do trato digestório das larvas de pacu e da sua capacidade digestiva / The knowledge about organogenesis of fish larvae is a useful tool to establish their functional capabilities and systemic physiological needs in order to ensure welfare and optimal growth under aquaculture conditions. Feed in hatchery affects digestive functions inducing faster or slower development. Thus, this study aimed to evaluate growth and morphophysiological development of the gastrointestinal tract in pacu Piaractus mesopotamicus larvae, rearing under live food and formulated diet with different weaning protocols, through the analysis of production performance, histology, histochemistry and enzymology (trypsin, amylase, lipase, leucine-aminopeptidase, maltase and acid proteases). Therefore, this research contributes to the better understanding of the development of the gastrointestinal tract in pacu larvae and its digestive capacity

Made available in DSpace on 2016-02-05T18:30:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-28. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:34:11Z : No. of bitstreams: 1 000857399.pdf: 720117 bytes, checksum: a3a8aec8ec88cb21c1d175c569eee7ea (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As formigas cortadeiras abrigam em seus ninhos uma complexa comunidade microbiana. Esses insetos mantêm um mutualismo com fungos, os quais servem como alimento para a colônia. Além do parceiro fúngico, outros fungos também estão presentes nos ninhos das formigas cortadeiras, porém, pouco se conhece a respeito do papel ecológico que desempenham na associação. A partir de uma coleção de 235 isolados de fungos mantidos na Central de Recursos Microbianos da UNESP, o presente estudo teve como objetivo caracterizar o perfil enzimático desses microorganismos, os quais foram obtidos de ninhos de Atta sexdens rubropilosa (cortadeira de dicotiledônea) e Atta capiguara (cortadeira de monocotiledônea). Uma técnica de triagem enzimática de alto desempenho foi adaptada neste trabalho para realizar a análise simultânea de isolados produtores de amilase, celulase, polimetilgalacturonase, poligalacturonase e xilanase. Do total de isolados, 94% (n= 220) foram produtores de pelo menos uma das enzimas avaliadas. As proporções de isolados produtores de celulase, polimetilgalacturonase, xilanase e poligalacturonase foram de 72, 71, 53 e 33%, respectivamente. Nenhum isolado produziu amilase. Segundo a análise de correspondência, os isolados provenientes de ninhos de A. sexdens rubropilosa e de A. capiguara apresentaram um perfil enzimático relacionado com a produção de poligalacturonases e xilanases, respectivamente. Essa diferença está intimamente relacionada ao tipo de substrato vegetal utilizado pelas formigas para cultivar o fungo mutualista. Os fungos Penicillium citrinum e Fusarium solani foram selecionados dentre os 235 isolados, para serem utilizados em ensaios de crescimento do fungo das formigas. Quando o fungo mutualista foi cultivado na presença dos produtos de hidrólise de polissacarídeos vegetais gerados por P. citrinum e F. solani, foi observado um crescimento significativo do fungo das formigas nos produtos de hidrólise... / Leaf-cutting ants harbor in their nests a complex microbial consortium. These insects maintain a mutualistic interaction with fungi cultured for food. In addition to the fungal partner, alien fungi are also present in leafcutter nests, but little is known about the ecological role they play in the interaction. From a pool of 235 fungal isolates kept at the UNESP-Microbial Resource Center, we characterize the enzymatic profile of these microorganisms derived from nests of Atta sexdens rubropilosa (dicot-cutting ant) and Atta capiguara (grass-cutting ant). An adapted high-throughput screening approach was used to assess the production of cellulase, pectate lyase, polygalacturonase and xylanase. Regarding the total number of isolates, 94% (n = 220) were positive for at least one of the tested enzymes. Cellulase, polymetylgalacturonase, polygalacturonase and xylanase were produced by 72, 71, 53 and 33% of the total isolates, respectively. No fungi produced amylase. According to the correspondence analysis, isolates belonging to A. sexdens rubropilosa and A. capiguara nests had an enzymatic profile related to the production of polymetylgalacturonase and xylanases, respectively. Such difference is likely related to the type of plant substrate used by the ants to nourish their fungal cultivar. The fungi Penicillium citrinum and Fusarium solani were selected among the 235 isolates and used in growth assays of the ant cultivar. When the mutualistic fungus was grown in the hydrolysis products of plant polysaccharides generated by P. citrinum and F. solani, we observed a significant growth of the ant fungus in the hydrolysis products of carboxymethylcellulose and xylan. Such results support the hypothesis that microorganisms found in nests of leaf-cutting ants may assist in the degradation of the plant material present in the nest, with consequent release of nutrients to the fungal mutualist. In addition to the ecological approach, this study also ...

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-15. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:20Z : No. of bitstreams: 1 000858042.pdf: 2321453 bytes, checksum: d56468b7b1d5643182c61f38e1a2372d (MD5) / Com o atual cenário de mudanças climáticas, observa-se a tendência a eventos de seca mais longos e recorrentes, desta forma a obtenção de plantas mais tolerantes à seca figura como um dos principais investimentos dentro da ciência e tecnologia nacional. Os oligossacarídeos da família das rafinoses (RFOs) desempenham múltiplas funções nas plantas e sabe-se que estes são acumulados nos tecidos vegetais em situações de déficit hídrico, garantindo a estabilidade das membranas celulares, consequentemente mantendo as funções vitais da planta. Por sua vez, a enzima galactinol sintase (GolS, EC 2.4.1.123), catalisa o primeiro passo na biossíntese dos oligossacarídeos dos RFOs desempenhando um importante papel regulador na partição do carbono entre sacarose e RFOs. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi introduzir em soja, via Agrobacterium tumefaciens, a construção gênica 35S:AtGolS2 e caracterizar molecularmente e fisiologicamente os eventos obtidos sob déficit hídrico. Para o processo de transformação, a cultivar convencional de soja BRS 184 foi utilizada e os eventos obtidos foram caracterizados quanto ao número de cópias através da técnica de qPCR. Para a análise da expressão gênica constitutiva o RNA total dos eventos, em condições bem irrigadas, foi extraído e a expressão determinada via RT-qPCR. A taxa de segregação foi calculada através do teste do X2 (p≤ 0.05). Com base nos resultados obtidos, dois eventos (2Ia1 e 2Ia4) foram selecionados para serem analisados quanto a respostas moleculares e fisiológicas sob déficit hídrico induzido em condições de casa de vegetação. Os resultados mostraram que nas plantas do evento 2Ia4 o maior acumulo de água associado a menor área foliar na condição controle levou a manutenção das trocas gasosas causado pela redução na transpiração foliar, maior acúmulo de água no substrato e acúmulo de transcritos de rafinose e galactinol nos tecidos / With the current scenario of climate change, there is a tendency to longer and recurrent drought events, thus obtaining more drought tolerant plants figure as a major investment in the national science and technology. Raffinose family oligosaccharides (RFOs) plays multiple functions in plants and it is known that these are accumulated in plant tissues in water deficit situations, guaranteeing the stability of cell membranes, thus maintaining the vital functions of the plant. In turn, galactinol synthase (GolS, EC 2.4.1.123) catalyzes the first step in the biosynthesis of RFOs plays an important regulatory role in carbon partitioning between sucrose and orphans. Thus, our objective was to introduce gene construction 35S:AtGolS2 via Agrobacterium tumefaciens in soybean plants and characterize molecularly and physiologically events obtained under water deficit. In this context, the conventional soybean BRS 184 was used in the transformation process and the soybean events were molecularly characterized in regard to the transgene copy number by qPCR technique. For the analysis of constitutive gene expression total RNA of events, well-watered conditions, was extracted and the expression determined by RT-qPCR. The segregation rate was calculated using the X2 test (p ≤ 0.05). Based on our results, two events (2Ia1 and 2Ia4) were selected to be analyzed for physiological responses under drought simulated under greenhouse conditions. The results showed that the plants 2Ia4 event the largest accumulation of water associated with lower leaf area in the control condition led to maintenance of gas exchange caused by the reduction in leaf transpiration, increased water accumulation in the substrate and accumulation of raffinose and galactinol transcripts in tissues. Thus, the increased levels of these carbohydrates would have made these act as osmoprotectors, enabling the recommendation of 2Ia4 plants breeding programs aimed at tolerance to drought

Submitted by CAROLINE OLIVEIRA DA ROCHA null (carolnine@hotmail.com) on 2016-04-07T01:01:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação CAROL _final.pdf: 2850056 bytes, checksum: faa1d75413b1d7af499fafe8cb5e9700 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-07T16:24:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rocha_co_me_araiq.pdf: 2850056 bytes, checksum: faa1d75413b1d7af499fafe8cb5e9700 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-07T16:24:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rocha_co_me_araiq.pdf: 2850056 bytes, checksum: faa1d75413b1d7af499fafe8cb5e9700 (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As enzimas são catalisadores de alto custo, sendo necessário a imobilização para que haja a recuperação e a reutilização tornando o processo viável economicamente. Além disso, a utilização de enzimas imobilizadas permite simplificar o modelo de reatores e o controle da reação. Assim, a imobilização é geralmente um requisito para a utilização de enzimas como biocatalisadores industriais. A escolha do suporte para imobilização depende das propriedades da enzima a ser imobilizada. Suportes sólidos podem interagir com a enzima por diferentes vias: por adsorção, ligação covalente ou encapsulamento. Um importante fator para imobilizar a enzima é que o suporte deve ser inerte e biocompatível ao ambiente, ou seja, não deve interferir na estrutura nativa da proteína e nem comprometer sua atividade biológica. Dentre as principais enzimas, as lipases hidrolisam triglicerídeos (TAG) em glicerol e ácidos graxos e por este motivo estão na classe das hidrolases. Uma proposta de imobilização destas enzimas consiste na utilização de nanoestruturas magnéticas como biocatalisadores da reação de transesterificação para a produção de biodiesel, devido à facilidade e a rápida separação das enzimas imobilizadas, a partir da mistura reacional, usando um campo magnético externo. As vantagens das enzimas imobilizadas em relação às enzimas livres surgem da sua maior estabilidade e facilidade de separação, o que acarreta economia significativa no custo global do processo, desde que o procedimento de imobilização não seja muito caro, haja boa recuperação da atividade enzimática e que a estabilidade operacional da enzima imobilizada seja suficientemente longa. O uso de enzimas imobilizadas permite a retenção do biocatalisador no reator; elevada concentração de catalisador no reator permitindo intensificar o processo; controle do microambiente da enzima; facilidade de recuperação e reutilização do catalisador, o que reduz os custos das enzimas; possibilidade de ser utilizado em sistemas contínuos. Utilizando a técnica de difração de raios X foi possível confirmar a fase magnetita nas sínteses propostas: método de coprecipitação e em meio orgânico. A funcionalização da superfície da NP e SP com APTS, foi comprovado por espectroscopia na região de infravermelho, apresentando bandas de –NH2. A técnica de DLS comprovou a funcionalização, pelo aumento dos diâmetros hidrodinâmicos das amostras NP-APTS e SP-APTS comparada a NP e SP. O ponto isoelétrico das amostras SP e SP-APTS apresentou aumento de 2,33 para 6,44. O derivado imobilizado apresentou bandas típicas de amidas. As lipases imobilizadas apresentaram diâmetros hidrodinâmicos maiores que NP-APTS e SP-APTS. Os resultados da atividade hidrolítica das enzimas suportadas foram satisfatórios, sendo que SP-APTS-LPP apresentou maior atividade. Pela análise termogravimétrica comprovou-se rendimento de imobilização de 22,86%. Determinou-se o pH ótimo da lipase imobilizada que mostrou maior atividade em pH 8 enquanto a LPP livre em pH 6,5. As medidas de temperatura ótima demostrou que o derivado imobilizado possui maior atividade que a LPP livre a 50 °C, favorecendo a utilização deste suporte em processos industriais de biodiesel que opera em altas temperaturas. Neste contexto, a síntese de suportes magnéticos porosos e a imobilização de lipases com este suporte, apresentou excelentes resultados para a aplicação em biocatálise na reação de transesterificação para a síntese de biodiesel. / Enzymes are expensive catalysts, immobilization is necessary for recovery and reuse making the process economically viable. Furthermore, use of immobilized enzymes can simplify model reactor and control reaction. Thus, immobilization is generally a requirement for use of the enzyme as an industrial biocatalyst. The choice of support for biocatalysts immobilization depends on properties of enzyme to be immobilized. Solid supports can interact with enzyme in different ways: by adsorption, covalent bonding or encapsulation. An important factor to immobilize the enzyme is that support must be inert and biocompatible to environment; it should not interfere in native structure of protein and not compromising their biological activity. The main enzymes, lipases hydrolyze triglycerides (TAG) to glycerol and fatty acids and for this reason; they are in the class of hydrolases. These enzymes are carboxylesterases that catalyze hydrolysis in glycerides synthesis. A proposal for immobilization of these enzymes is use of magnetic nanostructures in biocatalysts transesterification reaction for producing biodiesel due to ease and rapid separation of immobilized enzyme, from a mixture reaction using an external magnetic field. The benefits of immobilized enzymes compared to free enzymes arise from their greater stability and ease of separation, which leads to significant savings in the overall cost of the process, provided that immobilization procedure is not very expensive, there is good recovery of enzyme activity, and operational stability of immobilized enzyme is sufficiently long. The use of immobilized enzymes allow retention of biocatalyst in reactor; high concentration of catalyst in reactor to intensify the process; control of microenvironment of enzyme; ease of recovery and reuse of catalyst, which reduces the costs of enzymes; possibility of being used in continuous systems. Using the technique of X-ray diffraction was confirmed magnetite phase in syntheses proposed: co-precipitation method and organic solvent. The functionalization of surface NP and SP with APTS confirmed by spectroscopy in infrared region, with bands of -NH2. The DLS technique proved the functionalization, the increase of hydrodynamic diameters NP-APTS samples and SP-APTS compared to NP and SP. The isoelectric point of SP and SP-APTS samples increased by 2.33 to 6.44. The immobilized derivative showed typical bands of amides. Immobilized lipases showed higher hydrodynamic diameters NP-APTS and SP-APTS. The results of hydrolytic activity of supported enzymes were satisfactory and SP-APTS-LPP showed higher activity. By thermogravimetric analysis, it was shown immobilization yield 22.86%. It was determined the pH optimum of immobilized lipase showed highest activity at pH 8 while the LPP free at pH 6.5. The optimum temperature measurements demonstrated that immobilized derivative is more active than free LPP at 50 ° C, favoring the use of support in industrial processes of biodiesel, which operates at high temperatures. In this context, the synthesis of porous magnetic support and immobilization of lipases showed excellent results for use in biocatalysis in transesterification reaction for biodiesel synthesis.

This work presents a study of the several organic compounds such as trihalomethylated enaminones, γ-amino alcohols, oxazinones, oxazines, dihydrofuranones, pyrrolidin-2-ones, 2-methylsulfanyl pyrimidine, enoylcarbamates and 3-dialkoxy phosphoryloxy on the acetylcholinesterase enzyme activity. Also, this work shows the effect per se of organic solvents on the AChE of different cerebral structures of rats. The N- and N-O-alkylated 3-alkoxy-5-hydroxy-trifluormethyl-pyrrolidin-2-ones and trifluoromethylated enoylcarbamates showed in vitro inhibitory effect of the AChE activity in the striatum cerebral of rat, at the concentration 1.0 mM. The dimethyl-[(2-methylsulfanyl-4-trichloromethyl-6-pyrimidin-ylmethoxy)-ethyl] amine showed significant inhibitory effect (p<0.001) in vitro on AChE activity of the striatum cerebral of rat, in the concentration 0.1mM. The in vivo effect of this pyrimidine was significant (p<0.001) in the concentration of 10mg/Kg in the AChE activity in striatum and erythrocyte of rat. Finally, the trifluoromethylated 3-diethoxy-phosphoryloxy ethyl carbamates show significant inhibitory effect (p<0.001) on the purified AChE activity at the concentration of 0.001 mM. / Este trabalho apresenta um estudo de várias classes de compostos orgânicos: enamino compostos, γ-aminoálcoois, oxazinonas, oxazinas, diidrofuranonas, pirrolidin-2-onas, 2-metilsulfanil pirimidina, enoilcarbamatos e 3-dialcoxi fosforiloxi trialometilados sobre a atividade da enzima acetilcolinesterase. Também demonstra o efeito per se de solventes orgânicos sobre a atividade da AChE em diferentes estruturas cerebrais de rato. As 3-alcoxi-5-hidroxi-5-trifluormetil pirrolidin-2-onas N-alquiladas e N-O-alquiladas e os enoilcarbamatos trifluormetilados mostraram efeito inibitório significativo (p<0,05) sobre a atividade in vitro da AChE de estriado cerebral de rato, na concentração de 1,0 mM. A dimetil-(2-metilsulfanil-4-triclorometil-6-pirimidinilme-toxi)etil] amina mostrou efeito inibitório significativo (p<0,001) sobre a atividade in vitro da AChE de estriado cerebral de rato na concentração de 0,1mM. O efeito in vivo dessa pirimidina foi significativo (p<0,001) na concentração de 10 mg/Kg sobre a atividade da AChE em estriado cerebral e membrana de eritrócitos de rato. Finalmente, as 3-dietoxi-fosforiloxi carbamatos de etila trifluormetilados mostraram efeito inibitório significativo (p<0.001) sobre a atividade da AChE purificada em concentrações a partir de 0.001 mM.

The present study sought to compare the in vitro antioxidant potentials of a newly synthesized organodiselenide, dicholesteroyl diselenide (DCDS) and diphenyl diselenide (DPDS) and their possible interactions with some thiol containing enzymes in different tissues from mammalian system. In addition, the potency of DPDS as antioxidant and antihyperglycaemic agents, and its interaction with thiol containing proteins in various mammalian tissues and organs (hepatic, renal and spleenic and more importantly cerebral tissues) were evaluated in animal models of streptozotocin induced diabetic rats. The in vitro results show that DPDS exhibited a higher glutathione-peroxidase mimetic activity as well as increased ability to oxidize both mono- and di- thiols than DCDS. In addition, while DPDS inhibited thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and protein carbonyls formations in both cerebral and hepatic tissues, induced by either iron (II) or SNP, DCDS exhibited a prooxidant effect in both cerebral and hepatic tissues when iron (II) serves as the prooxidant, However, when TBARS was induced by SNP, DCDS slightly modify TBARS formation in both hepatic and cerebral tissues. Also the activities of cerebral and hepatic delata aminolevulinic acid dehydratase (ð-ALA-D), cerebral Na+/K+- ATPase were significantly inhibited by DPDS and only weakly inhibited by the DCDS. Further studies reveal that the inhibition caused by organodiselenides (in this case, DPDS) on Na+/K+-ATPase activity likely involves the modification of the thiol groups at the ATP binding site of the enzyme. Similarly, different isoforms of lactate dehydrogenase (LDH) were significantly inhibited by both DPDS and DCDS in vitro. Likewise, we observed that the in vitro inhibition of different isoforms of lactate dehydrogenase by DCDS and DPDS likely involves the modification of the -SH groups at the NAD+ binding site of the enzyme. Oral administration of DPDS dissolved in soya bean oil administered to streptozotocin induced diabetes in male albino rats shows that there was significant reduction in blood glucose levels accompanied by a marked reduction of glycated proteins in streptozotocin induced diabetic rats treated with DPDS in relation to untreated streptozotocin induced diabetic. In addition, DPDS was able to significantly ameliorate the levels of Vitamin C and GSH (liver, kidney and spleen), which were decreased in streptozotocin treated rats. Similarly, treatment with DPDS was able to markedly abolish the increase levels of TBARS that were observed in STZ diabetes group. Finally, the inhibition of both ð-ALA-D and some isoforms of LDH caused by hyperglycaemia were prevented by DPDS. We also observed that although streptozotocin evoke a significant diminution on brain s antioxidant status and activity of Na+/K+-ATPase, but the activity of acetylcholineesterase and glutamate uptake and release were not altered. However, DPDS was able to markedly restore the observed imbalance in antioxidant status and sodium pump. Finally, we conclude that organodiselenides are promising antioxidant remedy in the management of diseases caused by oxidative stress. However, their toxicity involves an interaction with thiols on proteins and this study has further demonstrated that the sulphydryl groups in question are critical to the normal function of the protein or enzymes. Most likely, these -SH are associated with thiols at the substrate binding (active site) sites of the enzymes. Interestingly, pharmacological doses of organodiselenides 3mg/kg bw for the study on diabetes do not present any observed toxicity. / O presente estudo quis comparar os potenciais antioxidants in vitro de organoselênios novamente sintetizados, diseleneto dicolesterol e diseleneto de difenila e suas possíveis interações com algumas enzimas contendo tióis em diferentes tecidos de mamíferos. Além disso, o potencial de DPDS como agente antioxidante e antihiperglicêmico, e sua interação com proteínas contendo tióis em vários tecidos e órgãos de mamíferos (hepático, renal, esplênico e, mais importante, tecido cerebral) foram avaliados em modelos animais de streptozotocina induzindo diabetes em ratos. Os resultados in vitro mostram que DPDS exibiu uma maior atividade mimética da glutationa peroxidase bem como aumentada habilidade para oxidar mono e di-tióis que DPDS. Além disso, enquanto o DPDS inibiu substâncias reativas ao ácido tiobarbitpúrico (TBARS) e formação de proteínas carboniladas em tecidos cerebral e hepático, induzidas por ferro(II) ou SNP, DCDS exibiu um efeito pró-oxidante em cérebro e tecido hepático quando ferro(II) serviu como próoxidante, porém, quando TBARS foi induzido por SNP, DCDS modificou a formação de TBARS tanto em tecido cerebral como hepático. Também, as atividades da deltaaminolevulinato desidratase (ð-ALA-D) cerebral e hepática e Na+/K+-ATPase cerebral foram significativamente inibidas por DPDS e somente fracamente inibida por DCDS. Mas estudos revelam que a inibição causada por organodiselenetos (neste caso, DPDS) na atividade da Na+/K+-ATPase envolve a modificação de grupos tiólicos ligados ao sítio ATP da enzima. Similarmente, diferentes isoformas da lactato desidrogenase (LDH) foram significativamente inibidas por DPDS e DCDS in vitro. nós observamos que a inibição in vitro de diferentes isoformas da LDH por DCDS e DPDS envolve a modificação de grupos SH no sítio ligante NAD+ da enzima. a administração oral de DPDS dissolvido em óleo soya administrado a ratos albino machos com diabetes induzida por streptozotocina mostrou que houve uma redução significante nos níveis de glicose sanguínea acompanhada por uma marcada redução nas proteínas glicadas em ratos diabéticos induzidos com streptozitocina tratados com DPDS em relação aos não diabéticos. Além disso, DPDS melhorou significativamente os níveis de vitamina C e GSH (fígado, rim e baço), que foram diminuídos em ratos tratados com streptozotocina. Similarmente, tratamento com DPDS marcadamente aboliu os níveis elevados de TBARS que foram observados no grupo diabético. Finalmente, a inibição da ð-ALA-D e algumas isoformas da LDH causada pela hiperglicemia foram prevenidas por DPDS. Nós também observamos que STZ provocou uma significante diminuição no status antioxidante do cérebro e atividade da Na+/K+- ATPase, mas a atividade da acetilcolinesterase e captação e liberação de glutamato não foram alteradas. Porém, DPDS marcadamente restaurou o desequilíbrio observado no status antioxidante e bomba de sódio. Finalmente, nós concluímos que organoselenetos são remédios antioxidantes promissores no manejo de doenças causadas por estresse oxidativo. Porém, sua toxicidade envolve uma interação com tióis em proteínas e este estudo demonstrou que os grupos sulfidril em questão são críticos para a função normal de enzimas e proteínas. Estes SH são associados com tióis dos sítios de ligação do substrato (sítio ativo) de enzimas. interessantemente, doses farmacológicas de organodiselenetos (3mg/kg para o estudo de diabetes) não apresentou nenhuma toxicidade observada.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-07Bitstream added on 2014-06-13T19:54:52Z : No. of bitstreams: 1 kohatsu_ds_me_botfca.pdf: 4312398 bytes, checksum: 91e1ff1dd9bac30e33d67d04a04522bd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve por objetivo avaliar o efeito de reguladores vegetais nas trocas gasosa durante o desenvolvimento da planta e na qualidade pós-colheita de frutos de melão rendilhado Galileu, armazenados em condições ambiente. A primeira etapa do experimento foi conduzida em estufa para cultivo protegido das plantas de melão, localizada na área experimental da Fazenda Experimental de São Manuel/UNESP, Botucatu, SP. A aplicação dos tratamentos foram realizadas no início da fase reprodutiva, 15 e 30 dias após a primeira aplicação. As medidas de trocas gasosas foram realizadas sempre no período das 8:00 às 11:00 horas da manhã, nas plantas controle e tratadas com os reguladores vegetais, no dia anterior e posterior à aplicação. Ci, A, gs e E foram feitas com um Infra Red Gas Analyser IRGA, modelo LI-6400 da LI-COR. As plantas receberam os tratamentos no campo (T1 controle, T2 GA3 (ácido giberélico) a 100 mg L-1, T3 IBA (ácido indolilbutírico) a 100 mg L-1, T4 cinetina a 100 mg L-1, T5 mistura de GA3 + IBA + cinetina a 5%), os frutos foram colhidos (51 dias após a primeira aplicação) e transportados ao Laboratório de Frutas e Hortaliças, pertencente ao Departamento de Gestão e Tecnologia Agroindustrial/UNESP, Botucatu, SP. Os frutos foram avaliados a cada 5 dias, durante 20 dias de armazenamento. As alterações pós-colheita foram detectadas por meio de análises de perda de massa fresca, firmeza, acidez titulável, pH, sólidos solúveis, relação SS/AT, açúcares totais, redutores e sacarose, atividade das enzimas peroxidase (POD), pectinametilesterase (PME) e poligalacturonase (PG). Os macronutrientes e micronutrientes foram analisados na colheita. O delineamento estatístico utilizado foi em blocos ao acaso com o controle e mais quatro tratamentos e quatro repetições que correspondem aos blocos. Nas condições em que o experimento... / This work's objective was to evaluate the effects of plant growth regulators on gas exchange during plant development and on post harvest quality of Galileu cantaloupes stored at conditions atmosphere. The first stage of the assay was conducted in a greenhouse (protected cultivation of cantaloupe plants), in the experimental area of São Manuel's Experimental Farm/UNESP, Botucatu, SP. The treatments were applied in the beginning of the reproductive stage, and 15 and 30 days after the first application. Gas exchange measurements were performed from 0800 to 1100 a.m, both in control plants and plants treated with plant growth regulators, on the previous and subsequent day from application. Ci, A, gs, and E were evaluated with a LI-COR model LI-6400 Infra Red Gas Analyzer - IRGA. The cantaloupe plants were treated in the field (T1 controls, T2 GA3 (gibberellic acid) 100 mg L-1, T3 IBA (indolebutyric acid) 100 mg L-1, T4- kinetin 100 mg L-1, T5- GA3 + IBA + kinetin mixture at 5%), and fruits were harvest (51 days after the first application) and transported to the Fruits and Vegetables Laboratory of Departamento de Gestão e Tecnologia Agroindustrial/UNESP, Botucatu, SP. The fruits were evaluated every 5 days during a 20-day storage period. Alterations in post harvest quality were detected through analyses comprising fresh weight loss, firmness, titratable acidity, pH, soluble solids, SS/TA ratio, total sugars, reduced sugars and sucrose, and activity of the enzymes peroxidase (POD), pectin methylesterase (PME), and polygalacturonase (PG). Macronutrients and micronutrients were analyzed at harvest time. The statistical design consisted of randomized blocks including a control, in addition to four treatments and four replicates that corresponded to blocks. Under the conditions in which the experiment was conducted, the results allow us to... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15Bitstream added on 2014-06-13T20:43:38Z : No. of bitstreams: 1 alegranci_p_dr_arafcf.pdf: 707044 bytes, checksum: e6d30cd26abce772eacd24b870674935 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / esporotricose é uma micose subcutânea causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, apresentando em geral, lesões cutâneas com proliferação via vasos linfáticos especialmente em pacientes imunocomprometidos, o que pode levar a doença sistêmica. Os macrófagos têm um papel importante na resposta imune inata contra diversos patógenos e dependendo do estimulo recebido podem ser polarizados em M1 e M2, os quais apresentam propriedades distintas, sendo que os primeiros possuem atividades proinflamatórias e o segundo anti-inflamatória. Desta forma, o objetivo do trabalho foi verificar a participação das populações de macrófagos M1 e M2 através da avaliação das citocinas IL-12, IL-23, IL-10 e TGF-β, da produção de NO e da atividade da enzima arginase, juntamente com a avaliação fenotípica dessas populações durante todo período experimental. Os resultados revelaram que as células do exsudato peritoneal dos camundongos dos grupos infectados quando desafiadas ex vivo com o exoantígeno e o extrato lipídico foram capazes de levar a produção de IL-12, IL-10 e TGF- β durante todo o período experimental. A produção de IL-23 ocorreu na 2ª e 4ª semana mediante o desafio com o exoantígeno e em todo período experimental com o EL. A fenotipagem revelou a presença de macrófagos tanto M1 quanto M2 durante todo o período experimental, com aumento da expressão do receptor CD206 (M2) no período tardio da infecção, o que explica a produção dos mediadores tanto inflamatórios (IL-12 e IL-23) quanto anti-inflamatórios (IL-10 e TGF- β) encontrados durante toda a cinética. Além das citocinas também foi observada a produção de óxido nítrico e a atividade da enzima arginase. Desta forma os resultados encontrados evidenciam a participação dos macrófagos M1 e M2 durante a esporotricose, uma vez que os M1... / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus, Sporothrix schenckii, generally presenting skin lesions with spread via lymphatic vessels, especially in immunocompromised patients, what can lead to systemic disease. Macrophages play an important role in innate immune response against various pathogens and, depending on the eliciting signals, macrophage can be polarized in M1 and M2, which presents distinct proprieties, so macrophage activation can be either proinflammatory or antiinflammatory. Thereby, the aim of this study was to evaluate the role of macrophage populations M1 and M2, through the evaluation of IL-12, IL-23, IL-10 and TGF-β, NO production and activity of the enzyme arginase, along with phenotypic evaluation of these populations throughout the experimental period. The results showed that peritoneal exudate cells of infected mice groups, when challenged ex vivo with exoantigen and lipid extract, were able to lead to production of IL-12, IL- 10 and TGF-β throughout the experimental period. The production of IL-23 occurred in the 2nd and 4th week through the challenge with exoantigen and throughout the experimental period with the lipid extract. Phenotyping revealed the presence of both macrophages, M1 and M2, throughout the experimental period, with increased expression of the receptor CD206 (M2) in the late infection period, which could explain the production of proinflammatory (IL-12 and IL-23) and anti-inflammatory (IL-10 and TGF-β) mediators found throughout the kinetic, and the nitric oxide production and activity of the arginase enzyme. M1 macrophages are important during sporotrichosis, they have microbicidal activity and are responsible for releasing inflammatory mediators in an attempt to eliminate the fungus Sporothrix schenckii, while the M2 found during... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador : David Alexander Mitchell / Co-orientadores : Prof. Dr. Marcos Lúcio Corazza e Profª Drª Nádia Krieger / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 23/11/2015 / Inclui referências : f. 65-67 / Resumo: Na última década, o interesse pela produção de biodiesel catalisada por lipases tem aumentado consideravelmente. Uma das principais razões para isto deve-se à catálise enzimática representar uma alternativa "verde" à catálise química tradicionalmente empregada na indústria. Entretanto, embora a rota enzimática forneça produto de maior qualidade, em condições de reação mais amenas e ausência de reações laterais, sua implantação em escala industrial ainda é limitada pelos altos custos do biocatalisador. Recentemente, estratégias visando reduzir os custos de produção de biocatalisadores têm sido estudadas. Uma dessas estratégias é a produção de lipases por fermentação em estado sólido e a consecutiva aplicação destes sólidos fermentados diretamente ao meio reacional para catalisar reações de transesterificação ou esterificação. Outra estratégia para reduzir os custos na produção enzimática de biodiesel é realizar reações em sistemas livres de solventes, o que permite o uso de reatores menores e a redução do impacto ambiental e das etapas de extração e recuperação do biodiesel. Além disso, a utilização de matérias-primas residuais, como as borras ácidas, para a produção enzimática de biodiesel oferece possibilidade de reduzir significativamente o custo do processo, uma vez que a matéria-prima representa cerca de 70-85% do custo total de produção. O uso de sólido fermentado para a produção de ésteres do biodiesel a partir de ácidos graxos da borra do óleo de soja em sistema livre de solvente foi investigado recentemente, onde foi mostrado que cerca de 30% do meio reacional era sorvido pelo sólido fermentado e que este meio sorvido tinha composição diferente da encontrada para o meio de reação líquido. A composição dessa fase sorvida, que representa o microambiente da lipase no sólido, tem implicações diretas na modelagem cinética da reação. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um modelo cinético combinado com o efeito de sorção para descrever a reação de esterificação de ácidos graxos da borra ácida do óleo de soja catalisada por sólido fermentado com atividade lipolítica em sistema livre de solvente. A sorção dos componentes do meio ao sólido fermentado seguiu uma isoterma de Langmuir multicomponente, enquanto a equação cinética foi expressa em termos de composição da fase sorvida. Com um único conjunto de parâmetros, foi possível encontrar bom ajuste do modelo aos dados experimentais obtidos nos estudos anteriores para três razões molares etanol:ácidos graxos (1:1, 1,5:1, 3:1), tanto para perfis de conversão quanto para composição nas fases líquida e sorvida. Além disso, foram construídos diagramas ternários experimentais de Equilíbrio Líquido-Líquido para o sistema "ácidos graxos + etanol + água + ésteres etílicos", e também foi feita a modelagem termodinâmica para este sistema. Este modelo termodinâmico pode ser usado, futuramente, para prever a separação das fases orgânica e aquosa no reservatório do sistema, permitindo o uso do modelo cinéticosorção para um sistema onde somente a fase orgânica do reservatório seja retornada ao leito fixo que contém o sólido fermentado. Com isso, o modelo poderá ser utilizado para realizar o escalonamento do processo de produção enzimática de biodiesel. Palavras-chave: biodiesel, Burkholderia cepacia, equilíbrio líquido-líquido, esterificação, lipase, sólido fermentado, modelagem cinética, modelagem termodinâmica / Abstract: Over last decade, interest on biodiesel production catalyzed by lipases has been increased. One of the most important reasons for this is because enzymatic catalysis represents a greener alternative to chemical catalysis used on industry traditionally. However, although enzymatic route yields higher quality product at mild conditions with no side reactions its implementation in large scale is limited yet by high biocatalyst costs. Recently, strategies aiming to reduce production costs of biocatalysts have been studied. One of these strategies is producing lipases by solid state fermentation and consecutively applying these fermented solids in reaction media to catalyze transesterification and esterification reactions. Other strategy to reduce enzymatic biodiesel production costs is performing reactions in solvent-free systems, which allows using smaller reactors and decreasing environmental impact and extraction and recovery steps. Furthermore, the use of cheaper feedstocks, as soapstocks, to enzymatic production of biodiesel offers possibility of reducing process cost significantly, since feedstocks represent around 70-85% of whole production cost. Using fermented solid to produce biodiesel esters from fatty acids from soybean soapstock acid oil has been investigated recently, and it was shown that up to 30% of the total mass of the reaction medium sorbed onto the fermented solids during the process and that this sorbed phase had a composition that was quite different from that of the bulk reaction medium. Composition of sorbed phase, which represents lipase microenvironment into fermented solid, has implications in modeling reaction kinetics. Therefore, the aim of this study was develop a combined sorption-kinetic model capable of describing the reaction profiles in the esterification of fatty acids from soybean soapstock acid oil catalyzed by fermented solid with lipolytic activity in a solvent-free system. The sorption of the medium components onto the fermented solids followed a multicomponent Langmuir isotherm, while the kinetic equation was expressed in terms of the composition of the sorbed phase. With a single set of parameters, the model adjusted well to the experimental results for three different ethanol to fatty acid molar ratios (1:1, 1.5:1 and 3:1), not only for the overall conversion profile, but also for the compositions of the bulk reaction medium and the sorbed phase. Moreover, experimental ternary diagrams of Liquid-Liquid Equilibrium of system "fatty acids + ethanol + water + ethyl esters" were constructed and also thermodynamic modeling was performed to this system. These data could be used further to predict separation of organic and aqueous phases in reaction reservoir, allowing the use of kinetic-sortion model to a system where only organic phase be recycled to the packed bed that contains fermented solid. From this perspective, model would be applied to guide scale-up of enzymatic biodiesel production. Keywords: biodiesel, Burkholderia cepacia, liquid-liquid equilibrium, esterification, lipase, fermented solid, kinetic modeling, thermodynamic modeling