Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2014-08-13T17:59:58Z : No. of bitstreams: 1 000768347_20160221.pdf: 161112 bytes, checksum: 81652a09b62d246f4c78fc239ef06ae2 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-22T11:12:47Z: 000768347_20160221.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-22T11:13:41Z : No. of bitstreams: 1 000768347.pdf: 885551 bytes, checksum: 3352268d651e4caf0f5c3131e9467935 (MD5) / As lipases, também chamadas de glicerol éster hidrolases, são enzimas que fazem parte do grupo das serina hidrolases, tendo como substrato, triglicerídeos. O modo de ação das lipases assemelha-se ao das esterases, realizando a hidrólise das ligações ésteres-carboxílicas de acilgliceróis, formando ácidos graxos e glicerol. Processos de bioconversão enzimática têm sido bastante utilizados na produção, transformação e valorização de matérias-primas. Avanços na tecnologia enzimática, como a imobilização de enzimas, possibilitaram a modificação das propriedades cinéticas e da estabilidade destas moléculas contribuindo com o aumento no potencial de aplicações das mesmas. O presente trabalho teve por objetivo estudar diferentes métodos de imobilização de lipases em suportes de sílica, bem como os efeitos deste procedimento, visando melhorar a funcionalidade das enzimas e o maior rendimento econômico nos processos industriais. Os métodos de imobilização escolhidos para os estudos foram: adsorção física, ligação covalente e encapsulação. O processo de imobilização de lipase em Celite (adsorção física) foi otimizado levando em conta o pH, porcentagem da concentração enzima:suporte e temperatura ótimos de atividade enzimática. Também se utilizou Celite como suporte para a imobilização de lipase por ligação covalente, onde se obteve os melhores resultados com atividade enzimática 20% a 40 ºC e eficiência de imobilização de 50%. A celite foi ativada com 3-aminopropiltrietoxisilano e glutaraldeído. Por último, foi avaliada a possibilidade de encapsulação da lipase utilizando o precursor tetraetilortossilicato (TEOS). Os resultados obtidos nesta última metodologia não se mostraram satisfatórios. Logo, com os dados obtidos, podemos dizer que uma boa manutenção da atividade catalítica depende do tipo de retenção (química ou física) e da força de interação ... / Lipases, also known as glycerol ester hydrolases , are enzymes that belong to the group of serine hydrolases. The mode of action of lipases is very similar to esterase group, performing the hydrolysis of carboxylic esters of glycerides - forming fatty acids and glycerol. The enzymatic bioconversion processes have been widely used in manufacturing, processing and recovery of raw materials. Advances methodology for immobilization of enzyme have allowed the modification of the kinetic properties and stability of these molecules contributing to the increase in the potential applications of the same. The present work is aimed to study different methods of immobilization of lipases in silica supports, and the effects of this procedure to improve the functionality of enzymes. The immobilization methods chosen for the studies were: physical adsorption, covalent bonding and encapsulation process. The process of immobilization of lipase on Celite (by physical adsorption) was optimized taking into account several parameters such as: pH, the enzyme concentration:support and temperature for enzyme activity. Celite was also used as a support for the immobilization of lipase by covalent bond, where best results were obtained with 20% enzymatic activity at 40 ° C and immobilization efficiency of 50%. The celite was activated with 3-aminopropyltriethoxysilane and glutaraldehyde. Finally, we have studied the possibility of encapsulation of lipase using the precusor tetraethylorthosilicate (TEOS). The results of this last methodology were not satisfactory. These results show that to maintain a good catalytic activity depends on the type of immobilization chose (chemical or physical) and the strength of the interaction between the enzyme and support, which can cause structural distortions in the protein, leading maintenance or a decrease in catalytic activity

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2014-08-13T17:59:37Z : No. of bitstreams: 1 000776456.pdf: 1095176 bytes, checksum: 02c8a230d432dbaaf152290a6c2d0966 (MD5) / A propagação vegetativa é a principal forma de produção de mudas de Eucalyptus, porém alguns materiais clonais ainda apresentam dificuldades de propagação, inclusive no enraizamento. Indiretamente, os flavonóides e o peróxido de hidrogênio podem favorecer este processo, assim como alterar os níveis de substâncias antioxidantes, como enzimas e compostos fenólicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação do flavonóide quercetina, peróxido de hidrogênio e ácido indol butírico (IBA) no enraizamento e desenvolvimento de Eucalyptus grandis x urophylla, bem como nos mecanismos de produção de antioxidantes e proteção das células contra danos oxidativos. O estudo foi dividido em duas fases. Inicialmente os clones foram submetidos a tratamentos com combinação de peróxido de hidrogênio (0; 1,75; 3,5 e 7,0%) e IBA (0; 1.000 mg kg-1) e a combinação de quercetina (0; 250; 500; 1.000 mg kg-1) e IBA (0; 1.000 mg kg-1). Os tratamentos foram aplicados em estacas e as mudas foram avaliadas em relação aos trinta, sessenta e noventa dias após o plantio em relação a altura, diâmetro e porcentagem de sobrevivência. Aos noventa dias uma avaliação destrutiva foi realizada e determinados a porcentagem de enraizamento, o tamanho médio da maior raiz e a quantidade de raízes. Após esta avaliação, o peróxido de hidrogênio (0;3,5%), IBA (0; 1.000 mg kg-1) e a quercetina (0; 500 mg kg-1) foram combinados a fim de verificar a interação de peróxido de hidrogênio, quercetina e IBA sobre algumas moléculas com capacidade antioxidante. Noventa dias após o plantio, os efeitos desses compostos na atividade das enzimas IAA-oxidase, peroxidase, polifenoloxidase, fenilalanina amônio liase e poliamina oxidase e nos teores de compostos fenólicos, flavonoides, antocianinas e poliaminas foram avaliados por métodos espectofotométricos e teores de quercetina e ácido indolacético foram avaliados ... / Vegetative propagation is the main form to produce cuttings of Eucalyptus, but some clones still have difficulties in propagation, including on rooting process. Indirectly, flavonoids and hydrogen peroxide can enhance this process, as well as modify the levels of antioxidants such as phenolic compounds and enzymes. This work was aimed to evaluate flavonoid quercetin, hydrogen peroxide and indolbutyric acid (IBA) action on rooting of cuttings of Eucalyptus grandis x urophylla, as well as in mechanisms of antioxidants production and cells protection against oxidative damage. The study was divided into two phases. Initially, clones were subjected to treatments with combination of hydrogen peroxide (0, 1.75, 3.5 and 7.0%) and IBA (0, 1.000 mg kg-1) and combination of quercetin (0, 250, 500, 1.000 mg kg-1) and IBA (0, 1.000 mg kg-1). Treatments were applied to cuttings and evaluated in thirty, sixty and ninety days after planting in relation to height, diameter and survival percentage. Ninety days after planting, a destructive evaluation was performed and percentage of rooting, average size of the largest root and the amount of roots were determined. After this evaluation, hydrogen peroxide (0, 3.5%), IBA (0, 1000 mg kg-1) and quercetin (0,500 mg kg-1) were combined in order to verify the interaction of hydrogen peroxide, quercetin and IBA on some molecules with antioxidant capacity. Ninety days after planting, these compounds effects on the activity of IAA oxidase, peroxidase, polyphenol oxidase, phenylalanine ammonia lyase and polyamine oxidase and the levels of phenolics, flavonoids, anthocyanins and polyamines were evaluated by spectrophotometric methods and levels of quercetin and indole acetic acid were evaluated via LC/MS in leaves and roots. Data were subjected to analysis of variance (ANOVA) and Tukey test at 5 % probability. No significant differences were found in relation to height, diameter, survival ...

Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-30Bitstream added on 2014-08-27T15:57:12Z : No. of bitstreams: 1 000777532.pdf: 1116769 bytes, checksum: 22614337236b0dca0f19d04f2be2d13d (MD5) / Estudando a utilização de coprodutos agroindustriais para aplicação na aquicultura utilizou-se fígado suíno (FS) e resíduo do processamento da tilápia (RT) (Oreochromis niloticus) na produção de diferentes hidrolisados enzimáticos para aplicação na nutrição animal. As matérias primas FS e RT foram hidrolisadas com complexos enzimáticos Alcalase® (A) e Brauzyn® (B), resultando em quatro hidrolisados: FA (FS com A), FB (FS com B), TA (RT com A) e TB (RT com B). Foi utilizado delineamento experimental fatorial 2x2 inteiramente casualisado, sendo o primeiro fator as matérias-primas, RT e FS, o segundo as enzimas, Alcalase® e Brauzyn® e três repetições em escala industrial. A hidrólise ocorreu em reator encamisado com controle de temperatura, contendo a relação enzima/substrato de 1:200 (p/p), durante 60 minutos. Após o processamento dos hidrolisados foram avaliados sua composição centesimal, perfil de aminoácidos totais e livres e perfil de ácidos graxos e sua aplicação em dietas para peixes. Para avaliar o uso de diferentes hidrolisados proteicos sobre o desempenho zootécnico, parâmetros metabólicos, hepáticos e composição centesimal de juvenis de pintado Real® (Pseudoplatystoma sp), foram distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualizado 200 peixes (7,23 ± 0,12 g) em 20 tanques (500 L) com cinco dietas: controle, sem inclusão de hidrolisado (CO); e com inclusão de 20% de hidrolisados: Hidrolisado de fígado suíno com Alcalase® (FA); Hidrolisado de fígado suíno com Brauzin® (FB); Resíduo de tilápia com Alcalase® (TA); Resíduo de tilápia com Brauzin® (TB), totalizando cinco tratamentos e quatro repetições. Durante o período experimental a média de temperatura, pH e oxigênio dissolvido foram equivalentes a 28,5 ± 0,4 ºC, 7,40 ± 0,26 e 6,21 ± 0,32 mg L-1, respectivamente. Produtos hidrolisados com Alcalase® apresentaram ... / This study evaluates the use of agro-industrial byproducts in aquaculture. To this end, pig liver (PL) and tilapia (Oreochromis niloticus) processing byproduct (TR) were used to produce different hydrolysates for use in animal nutrition. The raw materials PL and TR were hydrolyzed with Alcalase® (A) and Brauzyn® (B) enzyme complexes, resulting in four hydrolysates: PA (PL with A), PB (PL with B), TA (TR with A) and TB (TR with B). The experimental design was completely randomized, 2x2 factorial, where the first factor was the raw materials, PL and TR; and the second, the enzyme complexes, Alcalase® and Brauzyn®, with three replications in industrial scale. The hydrolysis reactor, containing the enzyme/substrate material at 1:200 ratio (w/w), was jacketed for temperature control, and the reaction lasted 60 minutes. After processing, the hydrolysate was analyzed to determine the proximate composition; total and free amino acids and fatty acids profile; and, its use in fish diets. The use of different protein hydrolysates in fish diet was evaluated by the growth performance parameters; metabolic and liver parameters; proximate composition of juvenile pintado real® (Pseudoplatystoma sp). Following a completely randomized design with five treatments and four replications, 200 fish (7.23 ± 0.12 g) were distributed in 20 tanks (500 L) and fed the control diet, without hydrolyzed (CO); two diets added 20% of Alcalase® hydrolysates, PA and TA; and two diets with 20% Brauzin® hydrolysate, PB and TB. During the experimental period the average temperature, pH and dissolved oxygen values were 28.5°C ± 0.4; 7.40 ± 0.26; and 6.21 ± 0.32 U mg L-1, respectively. The Alcalase® hydrolysates had a higher amount of free amino acids compared to the other hydrolysates, regardless of the byproduct used. The tilapia residue hydrolysates had higher mean lipid contents, especially monounsaturated fatty ...

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-17Bitstream added on 2014-11-10T11:58:13Z : No. of bitstreams: 1 000794470.pdf: 828780 bytes, checksum: 2f18935a0f22dbcb62abeb6fb0334d95 (MD5) / O trabalho foi realizado com o objetivo de verificar em quatro genótipos de milho o efeito da inoculação com Azospirillum brasilense na resposta germinativa das sementes e crescimento de plântulas, no teor de nitrogênio e índice de conteúdo de clorofila foliar e, na expressão quantitativa relativa de ESTs chaves no metabolismo do nitrogênio. Em um primeiro ensaio avaliou-se a qualidade fisiológica de sementes de dois híbridos simples comerciais (AG7098 e 2B707) e duas variedades sintéticas experimentais (V2 e V4) inoculados com A. brasilense, por meio de testes de porcentagem de germinação e emergência, índice de velocidade de emergência, massa de matéria seca de parte aérea e raiz. O segundo ensaio foi conduzido em casa de vegetação onde foram cultivados os mesmos quatro genótipos sob diferentes formas de inoculação com A. brasilense e fornecimento de N sendo avaliados teor de nitrogênio e clorofila foliar e a expressão de duas ESTs que codificam enzimas chaves da rota metabólica do N, a nitrato redutase (ZmNR) e a glutamina sintetase (ZmGln1-3) por meio da técnica de PCR quantitativa em tempo real. Os genótipos diferem em relação à inoculação com A. brasilense. Os híbridos foram responsivos à inoculação com A. brasilense para massa de matéria seca de raiz. A variedade V2 apresentou comportamento inferior quanto à massa de matéria seca de raiz, mas respondeu positivamente a massa de matéria seca de parte aérea, e V4 não apresentou diferenças significativas quando inoculada. Os resultados de índice de conteúdo de clorofila não foram significativos. Para teor de nitrogênio foliar cada genótip respondeu de maneira particular. Em relação a expressão das ESTs verificou-se que a inoculação proporcionou incrementos na expressão de ZmNR para os híbridos AG7098 e 2B707. A variedade V2 não respondeu a inoculação e V4 apresentou maior nível de ... / The objective was to evaluate in maize genotypes the effect of inoculation with Azospirillum brasilense in seed germination response and seedling growth, the nitrogen and chlorophyll leaf content the relative quantitative expression of ESTs keys on nitrogen metabolism. In a first experiment was evaluated the physiological quality of seeds from two single cross hybrids (AG7098 and 2B707) and two synthetic varieties experimental (V2 and V4) inoculated with A. brasilense , by germination and emergence percentage, emergence rate tests, dry weight of shoot and root The second experiment was conducted in a greenhouse where the same genotypes were grown under different forms of inoculation with A. brasilense and supplying nitrogen being evaluated nitrogen and chlorophyll leaf content and the expression of two ESTs encoding key enzymes of metabolic pathway for N, nitrate reductase (ZmNR) and glutamine synthetase (ZmGln1-3) using the technique of quantitative real -time PCR. The genotypes differ with respect to inoculation with A. brasilense. Hybrids were responsive to inoculation with A. brasilense for dry root matter. The V2 variety showed lower performance as the dry weight of root, but responded positively to dry mass of shoots and V4 showed no significant differences when inoculated. The results of chlorophyll content were not significant. To the N content each genotype evaluated responded in a particular way. Regarding the expression of ESTs were found that inoculation promoted increases in expression ZmNR for AG7098 and 2B707 hybrids. A variety V2 did not respond to inoculation and V4 showed higher expression level when received only nitrogen application. In general, the varieties responded negatively or did not respond to inoculation with A. brasilense , when comparing the genotypes within treatments , and V2 showed lower expression values ZmRN for all forms of inoculation and fertilizer ...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-22Bitstream added on 2014-12-02T11:21:22Z : No. of bitstreams: 1 000794674_20151122.pdf: 159305 bytes, checksum: 1a69d7746b9537ef5de8785498d29618 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-27T16:09:58Z: 000794674_20151122.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-27T16:10:42Z : No. of bitstreams: 1 000794674.pdf: 2802997 bytes, checksum: 3381bd1473d6cc3c5215e1c2590cb7b4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / No presente estudo, o fungo termofílico Myceliophthora thermophila M.7.7, foi cultivado em fermentação em estado sólido (FES), usando como fonte de carbono misturas de bagaço de cana, palha de cana e palha de milho, com farelo de trigo (w/w 1:1). As fontes de nutrientes minerais avaliadas foram substâncias químicas analíticas e fertilizantes agrícolas. Os efeitos das condições de fermentação, tais como temperatura, pH e umidade sobre a produção de xilanase, endoglucanase e β-glucosidase foram estudados. Além disso, foi realizado o prétratamento do bagaço e da palha de cana submetidos a 2 min de irradiação em micro-ondas com glicerol 70% em solução ácida, alcalina e água destilada. As frações sólidas resultantes do pré-tratamento foram utilizadas nas análises de fibras, TGA, DTG, DSC, FTIR e microscopia eletrônica de transmissão e as frações líquidas, para análises de açúcares e fenóis. Amostras de bagaço e de palha tratados e não tratados (controle) foram submetidas à hidrólise enzimática por 24 e 72 horas, a 55 °C, usando as soluções enzimáticas obtidas do cultivo de M. thermophila M.7.7. e comercial (Celluloclast 1.5L) com atividade de endoglucanase padronizadas a 60 U/g de substrato seco ou com relação à quantidade total de proteínas das soluções (5 mg/g de substrato seco). Ao extrato de M. thermophila M.7.7 foi feita uma suplementação com enzima β-glicosidase comercial, de modo a atingir a mesma atividade presente na enzima Celluloclast. As atividades máximas de xilanase (446,9 U/mL), endoglucanase (94,7 U/mL) e β-glicosidase (2,8 U/mL) foram obtidas no cultivo por FES com 70% de umidade, a 40 ºC, usando palha de milho e farelo de trigo e solução nutriente composta por fertilizantes agrícolas, com pH ajustado para 5,0. Os espectros de infravermelho e as análises térmicas mostraram que o prétratamento agiu principalmente sobre a lignina e a hemicelulose do bagaço de cana, ... / This study investigated the effect of non expensive carbon and nitrogen sources on enzyme production by Myceliophthora thermophila M.7.7 in solid-state fermentation. Three kinds of lignocellulosic waste (corn straw, sugarcane bagasse and sugarcane straw) and six nitrogen sources (urea, calcium nitrate, analytical ammonium sulphate, yeast extract, agricultural fertilizer NPK 20-05-20 and fertilizing grade ammonium sulphate) were tested. Some physical-chemical parameters of the fermentation, such as temperature, initial pH and moisture content of the substrate on enzyme production were evaluated. Furthermore, the pre-treatment of bagasse and sugar cane straw with microwave radiation in presence of glycerol diluted in water, sulphuric acid and sodium hydroxide on the chemical composition, fiber structure and the efficiency of subsequent enzymatic hydrolysis was investigated. Bagasse and cane straw were subjected to 2 min of irradiation and the solid fractions resulting were used in the analysis of fibers, TGA, DTG, DSC, FTIR, X-ray and transmission electron microscopy and liquid fractions used to detemine sugar and phenol contents. Samples of bagasse, treated cane straw and untreated cane straw (control) were submitted to enzyme hydrolysis for 24 to 72 h at 55 °C with enzymatic solutions obtained by the cultivation of M. thermophila M.7.7. and Celluloclast 1.5L based on 60 U of endoglucanase activity per g of dry substrate or on the total amount of protein solutions (5 mg protein/g of dry substrate). The enzyme solution from M. thermophila M.7.7 was supplemented with a commercial β-glucosidase in order to achieve the same activity present in Celluclast. The maximum xylanase activity (446.9 U/ml), endoglucanase (94.7 U/ml) and β-glucosidase (2.8 U/mL) were obtained in the cultivation by SSF with 70% humidity, 40 °C using corn stover and wheat bran and nutrient solution composed of agricultural fertilizers, with pH adjusted to 5.0. ...

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-08Bitstream added on 2015-01-26T13:31:04Z : No. of bitstreams: 1 000804379.pdf: 639049 bytes, checksum: b9535eb8e5e3b6227e56ed9f829b005e (MD5) / A inclusão de complexos enzimáticos em dietas para peixes é uma promissora estratégia para maximizar a eficiência de utilização das dietas. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da inclusão do complexo enzimático (Allzyme SSF) na digestibilidade aparente e na atividade de protease não específicas em juvenis de tilápia do Nilo. Foram avaliados seis níveis de inclusão do complexo enzimático (0; 0,025; 0,040; 0,055; 0,070 e 0,085%). Foram utilizados 486 peixes distribuídos em 18 caixas de alimentação e 18 aquários de fibra de vidro com fundo afunilado (sistema Guelph modificado) para a coleta das fezes. Para a coleta da porção anterior do intestino, foram coletados 4 peixes de cada aquário de alimentação 10 e 20 dias após alimentação com as dietas experimentais. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com seis tratamentos e quatro repetições. Não houve diferença significativa para o coeficiente de digestibilidade aparente (CDa) da proteína, energia bruta e na atividade da protease entre os níveis de inclusão testados e nos períodos avaliados. Nas condições avaliadas a inclusão do complexo enzimático não melhorou a digestibilidade das dietas em juvenis de tilápia do Nilo / The inclusion of enzyme supplement in fish diets is a promising strategy to increase the feed efficiency. This work aimed to evaluate the effect of inclusion of the enzymatic complex (Allzyme SSF) on apparent digestibility and non-specific protease activity in juvenile Nile tilapia. Six levels of inclusion of the enzymatic complex were evaluated (0; 0.025; 0.040; 0.055; 0.070 and 0.085%). A total of 486 fish were distributed in 18 feeding aquaria and 18 tanks of faeces collection (modified Guelph system). After 10 and 20 days of feeding, four fish per aquarium were collected and the anterior portion of the intestine were sampled. The experimental design was completely randomized with six treatments and four replicates. There was no significant difference in the apparent digestibility coefficients (ADCs) of protein, gross energy and protease activity among the tested levels of inclusion and periods. Under the conditions evaluated the inclusion of the enzymatic complex did not improve the digestibility of diets in juvenile Nile tilapia

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-27Bitstream added on 2015-01-26T13:30:25Z : No. of bitstreams: 1 000802436.pdf: 2206629 bytes, checksum: c28fc179139f63f8c371ef86c4c8387f (MD5) / O estudo detalhado das partes constituintes do colmo de cana, por meio de análises bioquímicas e tecnológicas, pode possibilitar o conhecimento minucioso da qualidade do caldo e assim, auxiliar em diversas ações ao longo do processo de industrialização. Sendo assim, o presente trabalho foi conduzido com o objetivo de comparar diferentes partes do colmo de cultivares de cana-de-açúcar, e sua influência na qualidade da matéria-prima. As coletas dos colmos de cana ocorreram em área experimental da Fazenda de Ensino Pesquisa e Extensão da FCAV/UNESP-Jaboticabal, SP. As análises bioquímicas e tecnológicas foram realizadas no Laboratório de Tecnologia do Açúcar e Etanol da mesma Universidade. Os cultivares apresentaram diferenças em relação às variáveis estudadas, e o cultivar SP81-3250 apresentou os resultados mais satisfatórios. O caldo extraído dos entrenós apresentou maior porcentagem de sacarose aparente, teor de açúcares redutores totais, níveis de fósforo inorgânico e, menor teor de polissacarídeos e atividade enzimática da polifenoloxidase e peroxidase. De modo inverso, o caldo dos nós apresentou baixa qualidade, durante toda a safra, evidenciando assim menor predisposição para a produção de açúcar. O terço superior do colmo e a presença da casca apresentaram maior atividade enzimática, o que poderia proporcionar caldo de cana mais escuro, dificultando a produção de açúcar de qualidade. A região do colmo representada pelo entrenó obteve maior potencial de geração de bioenergia / The detailed study of the constituent parts from sugarcane stalks by means of biochemical and technological analysis, may enable a thorough knowledge of the quality of the juice and thus aid in several actions throughout the process of industrialization. Therefore, this study was conducted in order to compare different parts of the sugarcane cultivars stlaks, and their influence on the quality of the raw material. The collections of the sugarcane stalks occurred in Fazenda de Ensino Pesquisa e Extensão from FCAV/UNESP-Jaboticabal, SP. The biochemical and technological analyzes were performed at the Laboratório de Tecnologia do Açúcar e Etanol in the same University. The cultivars showed differences in the studied variables, and the cultivar SP81-3250 showed the most satisfactory results. The juice extracted from internodes had a higher percentage of apparent sucrose level, total reducing sugars, inorganic phosphorus levels and lower content of polysaccharides and enzymatic activity of polyphenol oxidase and peroxidase. In reverse, node juice had low quality, throughout the crop, showing their lower predisposition to produce sugar. The upper third of the stalk and the presence of the bark showed higher enzyme activity, which could provide cane juice darker, hindering the production of quality sugar. The region of the stalk represented by internode got greater potential for bioenergy generation

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-04Bitstream added on 2015-03-03T12:06:35Z : No. of bitstreams: 1 000806921_20151027.pdf: 88769 bytes, checksum: ee2079f5c5af519526da722d146280cb (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-03T14:39:15Z: 000806921_20151027.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-03T14:40:16Z : No. of bitstreams: 1 000806921.pdf: 1901089 bytes, checksum: 19ea9e2e9292aca8fe31cea875b9a490 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A imobilização da invertase em resíduos agroindustriais traz diversas vantagens, como a criação de uma inovação biotecnológica, reaproveitamento de matérias e obtenção de açúcar invertido de alta qualidade e alto grau de pureza. O objetivo do trabalho foi analisar métodos físicos de extração da invertase de Saccharomyces cerevisiae e protocolos de ativação de pó de sabugo de milho para imobilização da enzima, e posteriormente avaliar os derivados quanto à potencialidade para produção de açúcar invertido. A levedura foi submetida a seis tratamentos físicos de rompimento: (1) congelamento, (2) congelamento com água, (3) ultrassom, (4) agitação na presença de abrasivos, (5) maceração sem solventes orgânicos e (6) maceração com éter. O extrato do melhor método foi parcialmente purificado. O pó de sabugo de milho foi ativado (1) com a formação de grupos glioxil, amino e glutaraldeído subsequentes, ou (2) com oxidação direta, formação de grupos amino e glutaraldeído, também subsequentes. A estabilidade térmica, inativação térmica e meia vida dos derivados foram avaliadas. O melhor derivado foi então estocado úmido, em água destilada, tampão fosfato de sódio pH 7 e tampão acetato de sódio pH 4,5, e submetido a experimentos de carga máxima enzimática e utilizado em reator de batelada e de leito fluidizado com solução de sacarose 40%. Dos seis tratamentos de extração da invertase, a agitação na presença de abrasivos foi capaz de extrair maior quantidade de proteínas (3,3 ± 0,4 mg.mL-1) e unidades enzimáticas (509,0 ± 81,3 U.mL-1), entretanto o tratamento com maior atividade específica foi o ultrassom (1696,5 ± 528,7 U.mg-1). O método escolhido como melhor foi o congelamento puro, que após purificação parcial resultou em extrato com 1.101,27 U, atividade específica de 1.324,28 U.mg-1, velocidade máxima de 3.333,3 ?mols.min-1.mg-1 e Km de 54,7 mM. A imobilização foi ... / Immobilization of invertase on agro-industrial byproducts has many advantages, such as a biotechnology innovation, reuse of materials and obtaining of high quality and purity invert sugar. The objective of this work was to analyze physical methods for invertase extraction from Saccharomyces cerevisiae and the activation of powdered corncobs for enzyme immobilization protocols, and then evaluate the potential of the derivatives for the production of invert sugar. The yeast was subjected to six physical disruption treatments: freezing, freezing with water, ultrasound, stirring in presence of abrasives, maceration without organic solvents and maceration with ether. The extract from the best extraction method was partially purified. The powdered corncobs were activated (1) with the formation of glyoxyl, amine and glutaraldehyde groups, subsequently, or (2) direct oxidation, formation of amine and glutaraldehyde groups, also subsequently. The thermal stability, thermal inactivation and half-life of the products were evaluated. The best derivative was then stored dampened, in distilled water, sodium phosphate buffer pH 7 and sodium acetate buffer pH 4.5, and subjected to maximum enzyme load test, in batch reactor and fluidized bed reactor with 40% sucrose solution. Among the six invertase extraction treatments, the agitation in the presence of abrasive extracted greater amounts of protein (3.3 ± 0.4 mg.mL-1) and enzymatic units (509.0 ± 81.3 U.mL-1), however treatment with higher specific activity was ultrasound (1696.5 ± 528.7 U.mg-1). The method chosen as the best was freezing, that after partial purification resulted in extracts with 1101.27 U, specific activity of 1,324.28 U.mg-1, Vmax of 3,333.3 ?mols.min-1.mg-1 and Km of 54.7 mM. Immobilization was completed after 90 minutes of reaction, whereas the derivative from direct oxidized was capable of retaining higher enzyme activity and was the more stable at 60oC. Both derivatives showed ...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Laboratório de Enzimologia, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-07-23T11:15:58Z No. of bitstreams: 1 2013_BrendaRabellodeCamargo.pdf: 1629534 bytes, checksum: 5c3f05b33b886b1d1c691fe38f9dab93 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-07-24T17:51:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_BrendaRabellodeCamargo.pdf: 1629534 bytes, checksum: 5c3f05b33b886b1d1c691fe38f9dab93 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-24T17:51:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_BrendaRabellodeCamargo.pdf: 1629534 bytes, checksum: 5c3f05b33b886b1d1c691fe38f9dab93 (MD5) / A busca por fontes de combustíveis renováveis tem ocupado o centro de discussões em função da necessidade da redução da poluição proveniente da queima de combustíveis fósseis e a uma adequação da matriz energética atual. No Brasil, a proposta é utilizar biomassa vegetal para a produção de bioetanol de segunda geração produzido a partir de resíduos agroindustriais (bagaço e palha de cana de açúcar e piolho de algodão), sendo que uma das etapas limitantes para esse fim é a hidrólise desta biomassa para produção de açúcares fermentáveis. A linhagem de Clostridium thermocellum (Isolado B8) isolada de rúmen de caprinos da raça Moxotó foi caracterizada como capaz de hidrolisar as biomassas citadas e de secretar enzimas e complexos enzimáticos (celulossomas) com atividade de carboximetilcelulase (CMCase) e xilanase. Estas atividades foram detectadas nos sobrenadantes das culturas e também nas frações de proteínas celulossomais, eluídas do substrato residual (FES) e recuperadas do sobrenadante por adsorção a celulose cristalina (FEC).. A fração de proteínas celulossomais eluídas dos substratos palha de cana de açúcar, bagaço de cana-de-açúcar e piolho de algodão, denominadas FES, apresentaram valores mais significativos de atividade de CMCase na faixa de pH de 5,0 a 7,0 e de xilanase de 6,0, e valores de temperatura ótima na faixa entre 65°C e 70°C para CMCase e xilanase. A fração de proteínas celulossomais de palha de cana apresentaram uma média de 80% de retenção da sua atividade de xilanase e CMCase quando incubadas a 70°C por 6 horas. As amostras FEC e FES das fontes de carbono utilizadas apresentaram perfis semelhantes de bandas protéicas pela análise de atividade em gel, sendo observadas 6 bandas com atividade de CMCase e 7 bandas com atividade de xilanase. As amostras FES das diferentes fontes de carbono fracionadas em coluna de exclusão molecular apresentaram perfis cromatográficos diferentes com relação ao volume de eluição dos picos protéicos com massa molecular estimada acima de 2 MDa, e em análise por DLS (Espalhamento de luz dinâmica) foi estimado uma proteína com a massa estimada de 6,5MDa para a amostra de bagaço de cana e palha de cana. Duas proteínas presentes na fração de palha de cana foram identificadas por espectrometria de massa: a proteína estrutural (CipA) e a exoglucanase (CelS). Estes resultados indicam o potencial de utilização do isolado B8 como fonte de atividades enzimáticas holocelulolíticas com propriedades cinéticas adequadas para aplicação industrial.O isolado B8 secreta celulossoma quando cultivado em diferentes fontes de carbono e estes apresentam constituições distintas podendo contribuir para o desenvolvimento de processo industrial para hidrólise enzimática destes resíduos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The search for sources of renewable fuels has been at the center of discussions around the need of reducing pollution from the burning of fossil fuels and the adequacy of current energy matrix. In Brazil, the proposal is to use biomass for the production of second generation bioethanol produced from agricultural and industrial waste (sugar cane straw and bagasse,and cotton louse), and one of the limiting steps for this purpose is the hydrolysis of this biomass for production of fermentable sugars. The strain of Clostridium thermocellum (Isolated B8) isolated from the rumen of Moxotó goats was characterized as capable of hydrolyzing the biomass cited and secrete enzymes and enzyme complexes (Cellulosomes) with carboxymethylcellulase activity (CMCase) and xylanase. These activities were detected in the culture supernatants and also in cellulosomal protein fractions, eluted from the residual substrate (FES) and recovered from the supernatant by adsorption crystalline cellulose (FEC). The fraction eluted cellulosomal protein substrates of sugar cane straw, sugar cane bagasse and cotton louse, called FES, showed more significant CMCase activity at pH 5.0 to 7.0 and xylanase of 6.0 and optimum temperature values in the range between 65°C and 70°C for CMCase and xylanase. The protein fraction cellulosomal of straw showed a mean 80% retention of its CMCase and xylanase activities when incubated at 70°C for 6 hours. Samples FEC FES from the carbon sources used showed similar profiles of protein bands by activity gel analysis, were observed 6 bands with CMCase activity and 7 bands with xylanase activity. The samples FES of different carbon sources fractionated on a column of molecular exclusion showed different chromatographic profiles with respect to the elution volume of the protein peaks with estimated molecular weight above 2 MDa. Pooled fractions analyzed by DLS (dynamic light scattering) peaks were detected consisting of high molecular weight proteins, with the estimated mass of 6.5 MDa for the sample of bagasse and cane straw. Two proteins present in the fraction of straw were identified by mass spectrometry: the structural protein (CipA) and exoglucanase (CelS). These results indicate the potential use of isolated B8 as a source of xylanases and CMCases activities with kinetic properties suitable for industrial applying. The isolated B8 releases cellulosome when grown on different carbon sources and these have different constitutions and could contribute to the development of industrial processes for Enzymatic hydrolysis of these residues.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-07-25T13:26:24Z No. of bitstreams: 1 2013_GilvanCaetanoDuarte.pdf: 4660619 bytes, checksum: ebcfd427e9b15fe76b95d88e4051d7f7 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-07-25T21:05:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_GilvanCaetanoDuarte.pdf: 4660619 bytes, checksum: ebcfd427e9b15fe76b95d88e4051d7f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-25T21:05:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_GilvanCaetanoDuarte.pdf: 4660619 bytes, checksum: ebcfd427e9b15fe76b95d88e4051d7f7 (MD5) / Piolho de algodão sujo, piolho de algodão limpo e pó de filtro são resíduos da indústria têxtil e representam fontes de matérias-primas renováveis com elevados percentuais de holocelulose. A degradação destes resíduos requer a atividade de holocelulases produzidas por Aspergillus oryzae, reconhecido pelos elevados títulos de hemicelulases, especialmente xilanases, quando cultivado em biomassa lignocelulósica residual como fonte de carbono. Este trabalho objetivou utilizar os resíduos da indústria têxtil no cultivo submerso de A. oryzae e produção de holocelulases, além de purificar, caracterizar e submeter estas enzimas à hidrólise de substratos lignocelulósicos. A suplementação dos meios de cultivo com os resíduos pré-tratados, (NH4)2SO4 0,16%, e o estabelecimento do período de 6 dias de cultivo aumentaram a produção de xilanases por A. oryzae. Por consequência, uma xilanase (Xyl-O1) de 21,5 kDa foi purificada da fração ultrafiltrado do extrato bruto (EB) de A. oryzae e apresentou atividade catalítica máxima a 50°C e pH 6,0, termoestabilidade a 50°C por 6 h quando em presença de L-cisteína 20 mmol.L-1, especificidade em hidrolisar ligações glicosídicas β(1-4) internas de substratos solúveis, com eficiência máxima de 33% para hidrólise de xilana de bétula e liberação de xilobiose como produto predominante. A partir da fração concentrado do EB de A. oryzae, outras isoenzimas com atividade de xilanase foram purificadas e identificadas como Xyl-O2 (21,5 kDa) e Xyl-O3/Xyl-O4 (35,3 e 33,1 kDa, respectivamente). Em adição, uma endoglicanase (Cel-O1) foi parcialmente purificada e apresentou massa molecular entre 40 e 45 kDa. A caracterização da amostra contendo as isoenzimas Xyl-O3/Xyl-O4 revelou maior atividade catalítica a 60°C e no intervalo de pH 5,0 a 7,0 quando diluídas em tampão tris-HCl. A amostra ainda permaneceu 100% termoestável a 40°C por 24 h. As holocelulases produzidas por A. oryzae apresentaram maior atividade de hidrólise sobre o bagaço de cana-de-açúcar explodido a vapor, com 0,398 mg.mL-1 de açúcar redutor (AR) liberado. As amostras enzimáticas de ultrafiltrado do EB de A. oryzae e de Xyl- O1 purificada promoveram a hidrólise das polpas de celulose (PC), com 0,168 mg.mL-1 de AR liberado pela amostra Xyl-O1 purificada sobre a PC branca. A liberação de cromóforo a 237 nm e do produto xilobiose resultaram da atividade das amostras enzimáticas sobre as PC. A. oryzae cultivado em resíduos da indústria têxtil produziu elevados títulos de hemicelulases, principalmente xilanases. A caracterização enzimática destas isoenzimas, purificadas ou parcialmente purificadas, revelaram propriedades catalíticas que as tornam alvos potenciais de aplicação nas biorefinarias. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Dirty cotton, clean cotton and filter powder are textile residues and represent sources of renewable raw materials with high percentages of holocellulose. The degradation of these residues requires the holocellulase activities produced by Aspergillus oryzae recognized by high titers of hemicellulases, xylanases especially when grown on lignocellulosic biomass waste as a carbon source. This study aimed to use the textile industry residue in submerged cultivation of A. oryzae and production of holocelulases. In addition, purify and characterize these enzymes undergo hydrolysis of lignocellulosic substrates. Supplementation of culture medium with the pretreated residues, 0.16% (NH4)2SO4 and setting the period of 6 days cultivation increased the production of xylanases by A. oryzae. Consequently, a xylanase (Xyl-O1) of 21.5 kDa was purified from ultrafiltrate fraction of A. oryzae crude extract (CE) and showed maximal catalytic activity at 50°C and pH 6.0. It was thermostable at 50°C for 6 h in the presence of 20 mmol.L-1 L-cysteine. Xyl-O1 showed specificity in hydrolyze the internal glycosidic bonds β(1-4) in soluble substrates, with maximum efficiency of 33% for the hydrolysis of birchwood xylan and release of xylobiose as the predominant product. From the concentrated fraction of A. oryzae CE, other isoenzymes with xylanase activity were purified and identified as Xyl-O2 (21.5 kDa) and Xyl-O3/Xyl-O4 (35.3 and 33.1 kDa respectively). In addition, an endoglucanase (Cel-O1) was partially purified and presented molecular weight between 40 and 45 kDa. The characterization of the sample containing Xyl- O3/Xyl-O4 isoenzymes showed a higher catalytic activity at 60°C and in the pH range from 5.0 to 7.0 when diluted in Tris-HCl buffer. The sample still remained 100% thermostable at 40°C for 24 h. The holocellulases produced by A. oryzae showed greater activity on the hydrolysis of steam-exploded sugarcane bagasse, with 0.398 mg.mL-1 of reducing sugar (RA) released. Enzymatic samples of ultrafiltrate from A. oryzae CE and purified Xyl-O1 promoted hydrolysis of paper pulps (PP), with 0.168 mg.mL-1 of RA released by purified Xyl-O1 on white PP. The release of chromophore at 237 nm and xylobiose product resulted from the enzymatic activity of the samples on the PP. A. oryzae grown in the textile industry waste produced high titers of hemicellulases, mainly xylanases. The enzymatic characterization of these enzymes purified or partially purified revealed catalytic properties which make them potential targets for application of the biorefineries.