Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-04Bitstream added on 2014-06-13T19:50:54Z : No. of bitstreams: 1 000760136.pdf: 3009097 bytes, checksum: ab6e7c1fbf6f7224e3b942dec747e608 (MD5) / As afecções do cólon menor são causas frequentes de síndrome cólica, sendo a enterotomia rotineiramente empregada para a remoção de fecalitos, enterólitos e corpos estranhos. O trauma cirúrgico resulta em inflamação difusa e ocorrência de peritonite asséptica devido à manipulação e ao acesso cirúrgico. Objetivou-se estudar a reatividade peritoneal após a realização de enterotomia e abrasão do cólon menor em equinos tratados ou não com heparina sistêmica. Foram utilizados dez equinos com idade média de 9 ± 3,87anos e 358 ± 30,28 Kg de massa corporal, divididos em dois grupos de cinco animais, sendo um grupo o controle (GC) e o outro tratado (GT). Ambos os grupos foram submetidos à laparotomia e enterotomia de cólon menor através da via paralombar direita em posição quadrupedal e receberam flunixin meglumine, gentamicina e associação de penicilinas. Ao GT, acrescentou-se heparina (150 UI/Kg SC, BID, 5 dias). Os animais foram avaliados quanto ao exame físico; hemograma; fibrinogênio; coagulograma; proteínas de fase aguda, séricas e peritoneais; características macroscópicas, físico-químicas e citológicas do líquido peritoneal; concentrações peritoneais do ativador e inibidor do plasminogênio tecidual e dímero D. Para tanto, pradonizaram-se os seguintes momentos de avaliação: M0-prévio à enterotomia; M1-12 horas; M2 - 1dia, M3- 2dias, M4- 4dias e M5- 6 dias; M6- 10 dias e M7- 14 dias após a enterotomia. Observou-se que a heparina resultou em anemia e diminuição da contagem de plaquetas, aumento do tempo de tromboplastina parcial ativada e aumento nas concentrações séricas e peritoneais das proteínas de fase aguda, entretanto diminuiu a formação de dímeros D, sugerindo diminuição da formação de coágulos de fibrina. Após 15 dias da enterotomia, realizou-se o exame laparoscópico, que não demonstrou diferença na deposição de fibrina entre os grupos, entretanto... / Small colon affections are frequent causes of abdominal pain, and enterotomy is routinely employed for removal of fecalith, enteroliths and foreign bodies. Surgical trauma results in diffuse inflammation and aseptic peritonitis occurrence due to handling and surgical access. The aim of this study was to evaluate peritoneal reactivity after small colon enterotomy and abrasion in horses treated or not with systemic heparin. Were used ten horses with a mean age of 9 ± 3.87 years and 358 ± 30,28 body weight, divided into two groups of five animals: one control group (CG) and the other treated (TG). Both groups underwent laparotomy and small colon enterotomy via right paralumbar flank in standing position and received flunixin meglumine, gentamicin and penicillin association. TG received also heparin (150 IU / kg SC BID, 5 days). Animals were evaluated for physiological parameters, hemogram, fibrinogen, coagulation markers, serum and peritoneal acute phase proteins, peritoneal fluid macroscopic, physico-chemical and cytological characteristics, peritoneal concentrations of tissue plasminogen activator and inhibitor and d-dimer. Assessments were performed prior to enterotomy-M0, M1-12 hours after enterotomy; M2 - 1 day, M3 - 2days; M4 - 4days; M5 - 6 days; M6-10 days and M7 - 14 days after the enterotomy. Heparin resulted in anemia and decreased platelet counts, increased in partial thromboplastin activated time and increased serum and peritoneal acute phase proteins, however, resulted in decreased formation of fibrin clots and d dimer formation. After 15 days of enterotomy, laparoscopic examination showed no difference in fibrin deposition between the groups, and a slight diffuse peritoneal reactivity higher to treated group. So, heparin showed as negative effect the development of anemia, significant decrease in platelet count and acting as a proinflammatory agent, however shown to reduce fibrin deposition and formation ...

Orientador: Carloa Alberto Hussni / Banca: Armen Thomassian / Banca: Luis Cláudio Lopes Corrêa da Silva / Resumo: As afecções do cólon menor são causas frequentes de síndrome cólica, sendo a enterotomia rotineiramente empregada para a remoção de fecalitos, enterólitos e corpos estranhos. O trauma cirúrgico resulta em inflamação difusa e ocorrência de peritonite asséptica devido à manipulação e ao acesso cirúrgico. Objetivou-se estudar a reatividade peritoneal após a realização de enterotomia e abrasão do cólon menor em equinos tratados ou não com heparina sistêmica. Foram utilizados dez equinos com idade média de 9 ± 3,87anos e 358 ± 30,28 Kg de massa corporal, divididos em dois grupos de cinco animais, sendo um grupo o controle (GC) e o outro tratado (GT). Ambos os grupos foram submetidos à laparotomia e enterotomia de cólon menor através da via paralombar direita em posição quadrupedal e receberam flunixin meglumine, gentamicina e associação de penicilinas. Ao GT, acrescentou-se heparina (150 UI/Kg SC, BID, 5 dias). Os animais foram avaliados quanto ao exame físico; hemograma; fibrinogênio; coagulograma; proteínas de fase aguda, séricas e peritoneais; características macroscópicas, físico-químicas e citológicas do líquido peritoneal; concentrações peritoneais do ativador e inibidor do plasminogênio tecidual e dímero D. Para tanto, pradonizaram-se os seguintes momentos de avaliação: M0-prévio à enterotomia; M1-12 horas; M2 - 1dia, M3- 2dias, M4- 4dias e M5- 6 dias; M6- 10 dias e M7- 14 dias após a enterotomia. Observou-se que a heparina resultou em anemia e diminuição da contagem de plaquetas, aumento do tempo de tromboplastina parcial ativada e aumento nas concentrações séricas e peritoneais das proteínas de fase aguda, entretanto diminuiu a formação de dímeros D, sugerindo diminuição da formação de coágulos de fibrina. Após 15 dias da enterotomia, realizou-se o exame laparoscópico, que não demonstrou diferença na deposição de fibrina entre os grupos, entretanto ... / Abstract: Small colon affections are frequent causes of abdominal pain, and enterotomy is routinely employed for removal of fecalith, enteroliths and foreign bodies. Surgical trauma results in diffuse inflammation and aseptic peritonitis occurrence due to handling and surgical access. The aim of this study was to evaluate peritoneal reactivity after small colon enterotomy and abrasion in horses treated or not with systemic heparin. Were used ten horses with a mean age of 9 ± 3.87 years and 358 ± 30,28 body weight, divided into two groups of five animals: one control group (CG) and the other treated (TG). Both groups underwent laparotomy and small colon enterotomy via right paralumbar flank in standing position and received flunixin meglumine, gentamicin and penicillin association. TG received also heparin (150 IU / kg SC BID, 5 days). Animals were evaluated for physiological parameters, hemogram, fibrinogen, coagulation markers, serum and peritoneal acute phase proteins, peritoneal fluid macroscopic, physico-chemical and cytological characteristics, peritoneal concentrations of tissue plasminogen activator and inhibitor and d-dimer. Assessments were performed prior to enterotomy-M0, M1-12 hours after enterotomy; M2 - 1 day, M3 - 2days; M4 - 4days; M5 - 6 days; M6-10 days and M7 - 14 days after the enterotomy. Heparin resulted in anemia and decreased platelet counts, increased in partial thromboplastin activated time and increased serum and peritoneal acute phase proteins, however, resulted in decreased formation of fibrin clots and d dimer formation. After 15 days of enterotomy, laparoscopic examination showed no difference in fibrin deposition between the groups, and a slight diffuse peritoneal reactivity higher to treated group. So, heparin showed as negative effect the development of anemia, significant decrease in platelet count and acting as a proinflammatory agent, however shown to reduce fibrin deposition and formation ... / Mestre

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-03T17:36:12Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2000761 bytes, checksum: 8f77b739f400a6cd9d8c72e2e1e545f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-03T17:36:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2000761 bytes, checksum: 8f77b739f400a6cd9d8c72e2e1e545f0 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A pesquisa foi desenvolvida na forma de dois subprojetos: o primeiro foi intitulado Ativação de plaquetas: ultraestrutura e morfometria no plasma rico em plaquetas de equinos Imunoistoquímica de TIMP-1 e TGF- morfometria em tendão de equino tratado com plasma rico em plaquetas primeiro subprojeto foi investigar a capacidade de ativação do plasma rico em plaquetas (PRP) por substâncias farmacológicas, assim como verificar a necessidade ou não dessa ativação para uso terapêutico. O PRP foi obtido de quatro equinos mestiços hígidos, machos castrados, com 13 a 16 anos (15±1anos) de idade, e processado para classificação e quantificação da morfologia plaquetária, mediante a utilização da microscopia eletrônica de transmissão. Todas as amostras de PRP foram ativadas com cloreto de cálcio (CaCl2) a 10%, trombina bovina pura ou associada a CaCl2. O controle (PRP puro) não foi ativado farmacologicamente. Nas amostras de PRP puro, 49% das plaquetas foram classificadas como ativação incerta, 41% em descanso, 9% totalmente ativada e 1% com dano irreversível. O tratamento com CaCl2 a 10% proporcionou uma distribuição de 54% de plaquetas com ativação incerta, 24% totalmente ativada, 20% em descanso, e 2% como com dano irreversível. Amostras tratadas com trombina bovina pura ou associada com CaCl2 apresentaram morfologia plaquetária que não se enquadraram na classificação adotada, apresentando forma irregular com emissão de grandes pseudópodes filamentosos, aspecto de lise celular e grânulos inteiros no citoplasma remanescente e meio extracelular. Houve efeito do tratamento sobre a morfologia plaquetária (P=0,03). O CaCl2 a 10% é um adequado agente ativador de plaquetas. Entretanto, nos casos onde se faz necessário o uso de PRP na forma mais líquida, recomenda-se o uso do PRP puro, que além de apresentar uma adequada porcentagem de plaquetas totalmente ativadas, também possui importante quantidade do tipo em descanso, que pode ser ativado por substâncias presentes no tecido lesionado. O segundo subprojeto teve como objetivo verificar o efeito terapêutico do PRP no tratamento da tendinopatia do tendão do músculo flexor digital superficial (TFDS), mediante a realização de estudos histológico e imunoistoquímico (TIMP-1 e TGF- fases inflamatória e de proliferação do processo de reparação. Tendinopatia do TFDS de ambos os membros torácicos foi induzida em seis equinos mestiços hígidos, machos castrados e com idade entre 5 e 16 anos (13±4,05anos), mediante administração intratendínea de 2.090 unidades de digestão tecidual de colagenase. Após cinco dias, um dos membros de cada animal foi tratado com 1,8 mL de PRP puro e o outro com NaCl a 0,9%. Biópsia para obtenção de amostra para exames histológico e imunoistoquímico foi realizada três (fase inflamatória) ou dezesseis (fase de proliferação) dias após realização dos tratamentos. O processamento das amostras para histologia seguiu os métodos rotineiros, e os cortes foram corados com hematoxilina-eosina, Picrosirius Red e tricrômico de Masson para avaliação de características morfológicas e organização tecidual, além de realização da morfometria. Para a imunoistoquímica foi adotado o método da peroxidase indireta, utilizando anticorpos primários anti-TIMP-1 e anti-TGF- 1, sendo verificada a presença ou ausência de marcação citoplasmática. Em ambas as fases, independentemente do tratamento, a área da lesão estava preenchida por tecido de granulação contendo fibras colágenas esparsas com perda do paralelismo, fibroblastos com morfologia variada e endotendão hipertrofiado, sendo essas características mais acentuadas na fase de proliferação. Os infiltrados inflamatórios predominantes foram do tipo misto. Ainda que o tendão tratado com PRP tenha apresentado melhor orientação das fibras colágenas, histologicamente não houve diferença (P>0,05) entre os grupos. A marcação do TFDS foi negativa para TGF- -1 em alguns membros, sem diferença (P>0,05) entre tratamentos e fases do reparo. Uma única aplicação intralesional de PRP puro, cinco dias após a indução de tendinopatia, não influencia o processo de reparação, nem a presença de TIMP-1 e TGF- nas fases inflamatória e de proliferação do processo de reparação. / The research was conducted in two different subprojects: the first was entitled -rich plasma of horses , and the second Immunohistochemistry of TIMP-1 and TGF- 1, histology and morphometry in equine tendon treated with platelet-rich plasma . The aim of the first study was to investigate the capability of activating the platelet-rich plasma (PRP) by pharmacological substances, as well as the need of this activation for the therapeutic uses. The PRP was obtained from four healthy, crossbred gelding, aged 13 to 16 years (15±1 year), and processed for observation and quantification of the platelets morphology by using of transmission electron microscopy. All PRP samples were activated with 10% calcium chloride (CaCl2) solution, bovine thrombin, and bovine thrombin associated with CaCl2. The control (pure PRP) was not activated pharmacologically. In PRP pure samples, 49% of the platelets were classified as state of activation uncertain, 41% as resting, 9% as fully activated, and 1% as irreversibly damaged. The 10% CaCl2 solution treatment provided a distribution of 54% as state of activation uncertain, 24% as fully activated, 20% as resting, and 2% as irreversibly damaged. Samples treated with bovine thrombin alone or associated with CaCl2 showed platelet morphology that did not fit in the classification adopted, revealing irregular shape with large filamentous pseudopodia emission, cell lysis aspect, and whole granules remaining in the cytoplasm remaining, and extracellular environment. There was an effect of treatment on platelet morphology (P=0.03). The CaCl2 10% is an appropriate platelet activator agent. However, in cases where it is necessary the use of PRP in a more liquid form, it is recommended the use of pure PRP, which besides presenting an adequate percentage of fully activated platelets, also has significant amount of the resting type, which can be activated by substances present in the injured tissue. The aim of the second subproject was to investigate the therapeutic effect of PRP in the treatment of superficial digital flexor (SDF) tendinopathy, through histological and immunohistochemical (TIMP-1 and TGF- 1) studies, in inflammatory and proliferative phases of healing. SDF tendinopathy of both forelimbs was induced in healthy, crossbred gelding, by intratendinous administration of 2.090 units of collagenase tissue digestion. After five days, one forelimb of each animal was intralesional treated with 1.8 mL of pure PRP, and the other limb with 0.9% NaCl solution. Biopsy to obtain samples for histologic and immunohistochemical studies was performed three (inflammatory phase) or sixteen (proliferative phase) days after treatments. The samples were processed following the histologic routine method, and sections were stained with hematoxylin-eosin, Picrosirius Red, and Masson's trichrome, for evaluation of morphological characteristics and tissue organization, besides performing morphometry. For immunohistochemistry evaluation, indirect peroxidase technique was adopted, by using of the primary antibodies anti-TIMP-1 and anti-TGF- 1, being the presence or absence of cytoplasmic staining verified. In both phases, regardless the treatments, the injured area was filled by a granulation tissue containing sparse collagen fibers with loss of parallelism, fibroblasts with variable morphology, and endotenon hypertrophy, being these characteristics more pronounced in the proliferation phase. Mixed inflammatory cell infiltrate was predominant. Although the PRP treated tendon presented a better orientation of collagen fibers, no differences (P>0.05) were detected between groups in histologic variables. The SDF tendon was immunonegative stained for TGF- 1, and immunopositive stained for TIMP-1 in some samples, but no difference (P>0.05) was detected between treatments and stages of tendon repair. A single intralesional application of pure PRP, five days after the induction of tendinopathy, does not influence the healing process, nor the presence of TIMP-1 and TGF- 1 in fibroblasts in both inflammatory and proliferation phases of the repair process.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-13Bitstream added on 2014-06-13T20:01:45Z : No. of bitstreams: 1 maia_l_dr_botfmvz.pdf: 18060170 bytes, checksum: 35902efcd3573630e0675fd37df370df (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / O interesse terapêutico e biológico nas células-tronco tem aumentando nos últimos anos, fato este demonstrado pelo número crescente de pesquisas e publicações na área. Na espécie equina, as pesquisas envolvendo o uso da terapia celular com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão focadas, particularmente para o tratamento de lesões tendíneas e osteoarticulares, havendo poucos relatos da sua utilização em outros tecidos, tais como o sistema nervoso. Desta forma, as vias de aplicação mais utilizadas até então para uso clínico em equino são as intralesionais e intra-articulares, carecendo assim na medicina equina de estudos pré-clínicos que avaliem a segurança de administração das CTMs em outras vias, tais como a intratecal por via liquórica. Nesse sentido, o objetivo geral deste estudo foi a obtenção, o cultivo e a caracterização das CTMs provenientes da medula óssea (MO) de equinos, além da avaliação da viabilidade e da segurança de aplicação dessas células autólogas por via intratecal através do espaço atlanto-occiptal. Também foi avaliado in vitro o potencial de transdiferenciação das CTMs-MO em fenótipos neurais, utilizando-se dois protocolos de diferenciação neural: P1 (forksolin e ácido retinóico) e P2 (2- mercaptoetanol). Ao término do cultivo primário, a análise imunofenotípica revelou a presença de CTMs com elevada expressão do marcador CD90, seguida de menor expressão para o marcador CD44 e ausência de expressão do marcador CD34. Nos ensaios de diferenciação nas tri-linhagens mesodermais ficou evidenciada a resposta positiva às diferenciações osteogênica (OST), condrogênica (CDG) e adipogênica (ADP) caracterizadas pela deposição de matriz extracelular rica em cálcio (OST), proteoglicanos e colágeno... / Biological and therapeutic interest in stem cells has increased in recent years, a fact demonstrated by the crescent number of research and publications in the area. In equine species, research involving the use of cell therapy with mesenchymal stem cells (MSCs) are focused, particularly for the treatment of tendineous and osteoarticular injuries, having scarces reports of its use in other tissues such as the nervous system. Thus, the pathways of administration most used so far for clinical use in equines are the intralesional and intra-articular, needing thereby in equine medicine of preclinical studies that asses the security of administration of MSCs in other pathways such as intrathecal by liquoric way. In this sense, the general aim of this study was the obtaining, cultivation and characterization of MSCs from bone marrow (BM) of equines, besides the evaluation of the feasibility and safety of application of these autologous cells by intrathecal pathway through atlanto-occipital space. It was also evaluated in vitro the potential of transdifferentiation of MSCs-MO in neural phenotypes, using two protocols of neural differentiation: P1 (forksolin and retinoic acid) and P2 (2- mercaptoethanol). At the end of the primary culture immunophenotypic analysis revealed the presence of MSCs with high expression of marker CD90, followed by the lower expression for the marker CD44 and absence of expression of marker CD34. In tests of differentiation in the tri-lineage mesodermal became evidenced the positive response to osteogenic (OST), chondrogenic (CDG) and adipogenic (ADP) differentiation characterized by the deposition of extracellular matrix rich in calcium (OST), proteoglycans and collagen II (CDG) and deposition of intracellular lipid droplets (ADP). In immunocytochemical characterization MSCs were... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Coorientador: Reneé Laufer-Amorim / Banca: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Maria Verônica de Souza / Banca: Brunna Patrícia A. da Fonseca / Banca: Márjorie de Assis Golim / Resumo: O interesse terapêutico e biológico nas células-tronco tem aumentando nos últimos anos, fato este demonstrado pelo número crescente de pesquisas e publicações na área. Na espécie equina, as pesquisas envolvendo o uso da terapia celular com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão focadas, particularmente para o tratamento de lesões tendíneas e osteoarticulares, havendo poucos relatos da sua utilização em outros tecidos, tais como o sistema nervoso. Desta forma, as vias de aplicação mais utilizadas até então para uso clínico em equino são as intralesionais e intra-articulares, carecendo assim na medicina equina de estudos pré-clínicos que avaliem a segurança de administração das CTMs em outras vias, tais como a intratecal por via liquórica. Nesse sentido, o objetivo geral deste estudo foi a obtenção, o cultivo e a caracterização das CTMs provenientes da medula óssea (MO) de equinos, além da avaliação da viabilidade e da segurança de aplicação dessas células autólogas por via intratecal através do espaço atlanto-occiptal. Também foi avaliado in vitro o potencial de transdiferenciação das CTMs-MO em fenótipos neurais, utilizando-se dois protocolos de diferenciação neural: P1 (forksolin e ácido retinóico) e P2 (2- mercaptoetanol). Ao término do cultivo primário, a análise imunofenotípica revelou a presença de CTMs com elevada expressão do marcador CD90, seguida de menor expressão para o marcador CD44 e ausência de expressão do marcador CD34. Nos ensaios de diferenciação nas tri-linhagens mesodermais ficou evidenciada a resposta positiva às diferenciações osteogênica (OST), condrogênica (CDG) e adipogênica (ADP) caracterizadas pela deposição de matriz extracelular rica em cálcio (OST), proteoglicanos e colágeno... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Biological and therapeutic interest in stem cells has increased in recent years, a fact demonstrated by the crescent number of research and publications in the area. In equine species, research involving the use of cell therapy with mesenchymal stem cells (MSCs) are focused, particularly for the treatment of tendineous and osteoarticular injuries, having scarces reports of its use in other tissues such as the nervous system. Thus, the pathways of administration most used so far for clinical use in equines are the intralesional and intra-articular, needing thereby in equine medicine of preclinical studies that asses the security of administration of MSCs in other pathways such as intrathecal by liquoric way. In this sense, the general aim of this study was the obtaining, cultivation and characterization of MSCs from bone marrow (BM) of equines, besides the evaluation of the feasibility and safety of application of these autologous cells by intrathecal pathway through atlanto-occipital space. It was also evaluated in vitro the potential of transdifferentiation of MSCs-MO in neural phenotypes, using two protocols of neural differentiation: P1 (forksolin and retinoic acid) and P2 (2- mercaptoethanol). At the end of the primary culture immunophenotypic analysis revealed the presence of MSCs with high expression of marker CD90, followed by the lower expression for the marker CD44 and absence of expression of marker CD34. In tests of differentiation in the tri-lineage mesodermal became evidenced the positive response to osteogenic (OST), chondrogenic (CDG) and adipogenic (ADP) differentiation characterized by the deposition of extracellular matrix rich in calcium (OST), proteoglycans and collagen II (CDG) and deposition of intracellular lipid droplets (ADP). In immunocytochemical characterization MSCs were... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor