Orientadores: Ricardo Barini, Lourenço Sbragia Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-11-27T12:29:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bueno_MarciaPereira_D.pdf: 2898828 bytes, checksum: 2c6dcaa4a20ec185bea4b47114c30a0e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A restrição do crescimento intrauterino (RCIU) limita o desenvolvimento fetal adequado aumentando a morbidade e mortalidades perinatais. Os mecanismos fetais adaptativos na RCIU podem desencadear alterações endócrinas e metabólicas que explicariam a ocorrência de doenças na idade adulta. O objetivo do estudo foi avaliar na RCIU experimental pela ligadura da artéria uterina se existem alterações na morfometria e histologia do fígado, intesti no e rins e se existem diferenças na expressão dos receptores de insulina, IR-(3, IRS-1, IRS-2, IGF-IR(3 no grupo de fetos submetidos à RCIU. O presente experimento foi submetido ao Comitê de Ética e Experimentação Animal da Universidade Estadual de Campinas (CEEA-UNICAMP) e aprovado como projeto de pesquisa N° 1644-1. Para realização do estudo utilizamos fetos de ratas Sprague Dawley divididos em 3 grupos. Grupo I (RCIU) - 40 fetos submetidos à ligadura da artéria uterina unilateral com 18,5 dias de gestação, Grupo II (Controle-RCIU) - 40 fetos do corno oposto ao da ligadura da artéria uterina e Grupo III (Controle Externo) - 40 fetos sem procedimento cirúrgico ou alimentar. Os resultados mostraram no modelo experimental de RCIU uma diminuição do peso corporal (PC), hepático (PH) e intestinal (PI) (p<0,01) no grupo RCIU, as relações entre PH/PC, PI/PC, PR/PC foram mantidas, fetos RC IU tem diminuição das camadas submucosas e mucosas intestinais (p<0,05); diminuição da camada cortical renal e do número de glomérulos, com aumento do volume glomerular (p<0,05). Na RCIU encontramos menor expressão hepática do IR-(3, IRS-1 e IRS-2, menor expressão do IRS-2 no intestino e rins e maior expressão do IGF-IR(3 em todos os tecidos. O modelo experimental estudado causou uma RCIU simétrica com alterações morfométricas e do metabolismo da glicose que poderiam justificar no futuro um maior risco de doenças metabólicas / Abstract: Intrauterine growth restriction (IUGR) limits appropriate fetal development increasing morbidity and perinatal mortality. Adaptive mechanisms in fetal IUGR may leave to endocrine and metabolic alterations that could explain the occurrence of diseases in adulthood. The aim of this study was to evaluate whether experimental IUGR by uterine artery ligation causes changes in morphology and histology of the liver, intestines and kidneys. We also evaluated if there were differences in the expression of insulin receptors, IR-(3, IRS-1, IRS-2, IGF-IR(3 of fetuses subjected to IUGR. This experiment was submitted to the Ethics and Animal Experimentation of the Campinas State University (UNICAMP CEEA) and was approved as a research project No. 1644-1. The study used fetuses Sprague-Dawley rats divided into 3 groups. Group I (IUGR) - 40 fetuses who underwent uterine artery ligation sided with 18.5 days of pregnancy Group II (Control-IUGR) - 40 fetuses of the horn opposite to the uterine artery ligation, and Group III (External Control) - 40 fetuses without surgery or food The results showed the experimental model of IUGR, a reduction in body weight (BW), liver (PH) and intestine (PI) (p <0.01) in IUGR, the relationship between PH/PC, PI/PC, PR/PC have been retai ned, IUGR fetuses have reduced layers of the intestinal mucosa and submucosa (p<0,05), decreased renal cortical layer and the glomerular number and increased volume rate (p<0,05). In IUGR found lower hepatic expression of IR-(3, IRS-1 and IRS-2, reduced expression of IRS-2 in the intestine and kidney and increased expression of IGF-IR(3 in all tissues. The experimental model studied caused a symmetrical IUGR with histological changes and glucose metabolism that could justify a greater risk of metabolic diseasesin the future / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Tocoginecologia

As queimaduras são eventos comuns e recorrentes no dia a dia dos atendimentos médicos. Há uma constante busca para entender a sua fisiopatologia, no intuito de minimizar seus resultados devastadores. Plasma rico em plaquetas (PRP) é um concentrado de plaquetas com capacidade de liberação local de múltiplos fatores de crescimento (FC) que aceleram a cicatrização. Este estudo consiste em dois experimentos: o primeiro visa validar um modelo experimental para a criação de queimaduras de tamanho e profundidade padronizados e, o segundo, avalia o uso de PRP em queimaduras. Para o desenvolvimento de queimaduras na validação do modelo experimental, foi idealizado um equipamento que permitisse o controle preciso da temperatura, além da utilização em conjunto de uma técnica inovadora de fixação que garante pressão constante no momento das queimaduras. Para o primeiro experimento, foram utilizados 12 ratos, por grupo, submetidos a queimaduras de 60 oC, 70 oC ou 80 oC por dez segundos, com um equipamento que desenvolvemos. Metade dos animais de cada grupo foi morta no terceiro dia e suas feridas foram analisadas por histologia, e, na outra metade, a ferida foi mensurada e acompanhada até o seu fechamento. No uso de PRP em queimaduras, foram avaliadas queimaduras de segundo grau (SG), segundo grau com diabetes mellitus induzido (SGD) e queimaduras de terceiro grau (TG). Noventa animais foram distribuídos em três grupos (SG, SGD e TG), onde, em cada um, dez animais foram tratados, dez serviram de controle e dez foram utilizados para o preparo do PRP. As áreas das feridas foram acompanhadas até o vigésimo primeiro dia, quando os animais foram mortos e biópsias de pele foram realizadas. Os resultados da validação do modelo mostram que as queimaduras produzidas com 60 oC foram de SG superficial (28% da derme envolvida); com 70 oC foram de SG profundo (72% da derme envolvida); e com 80 oC foram de TG (100% da derme envolvida). Em relação ao uso de PRP em queimaduras, observou-se que nos grupos tratados SG e SGD houve aceleração do fechamento da ferida e redução no número de células CD31, CD163, CD68, MPO e TGF-&#946; positivas, e aumento do número de células MMP2 positivas. A neoepiderme foi mais fina nos controles dos grupos SG e SGD, e o tecido de granulação foi reduzido nos controles SGD e TG. O modelo utilizado é seguro e confiável para produzir queimaduras regulares e uniformes, de diâmetros variados, pela capacidade do controle fino da temperatura e pelo posicionamento do animal, e reprodutíveis. PRP parece acelerar a cicatrização de queimaduras de SG e SGD, mas não de TG. / Burns are common and recurring events in the daily lives of medical care. There is a constant search to understand itsphysiopathology, in order to minimize its devastating results. Platelet-rich plasma (PRP) is a platelet concentrate with capacity of local release of multiple growth factors (FC) that accelerate healing. This study consists in two experiments: the first to validate an experimental model for the creation of standardized burns in size and depth and the second to evaluate the use of PRP in burns. The burns were achieved in an experimental burn model using an equipment that we developed and allows precise temperature control and in association with a innovative fixation technique that creates a constant pressure. Twelve rats per group underwent burns at 60oC, 70oC or 80oC for 10 seconds, with a device that we developed. Half of the animals of each group was killed on the third day and their wounds were analyzed by histology, and in the other half the wounds were measured and monitored until their closure. In the use of PRP in burns, second degree burns (SD), second degree burns with induced diabetes mellitus (SDD) and third degree burns (TD) were evaluated. Ninety animals were divided into three groups (SD, SDD, and TD) and in each one10 animals were treated, 10 animals served as controls, and 10 animals were used for PRP preparation. The wound areas were accompanied until the twenty-first day, when the animals were killed and skin biopsies were obtained. The results of the validation of the model show that the burns derived from 60oC were of superficial SD (28% of the dermis involved); for 70 C they were deep SD (72% of the dermis involved); and for 80oC they were TD (100% of the dermis involved). Regarding the use of PRP in burns, it was observed that in the SD and SDD treated groups the wound closure was accelerated and there was reduction in the number of CD31, CD163, CD68, MPO, and TGF-&#946; positive cells, and increasing of the number of MMP2 positive cells. The neoepidermis was thinner in control of both SD and SDD groups, and the granulation tissue was reduced in both control SDD and TD. The model used is safe and reliable to produce regular and uniform burns of varying diameters, by its ability of the fine control of temperature, by the animal positioning, and by its reproducibility. PRP appears to accelerate the healing of burns of SD and SDD, but not TD.

INTRODUÇÃO: O transplante pulmonar é a única opção terapêutica para determinados pacientes com doença pulmonar em estágio terminal. A maioria dos transplantes de pulmão é realizada a partir de doadores em morte encefálica, condição que per si pode comprometer o sucesso do procedimento. A fisiopatologia da morte encefálica é complexa e envolve mecanismos hemodinâmicos, simpáticos e inflamatórios. A administração de metilprednisolona 60 minutos após indução da morte encefálica reduz a atividade inflamatória em pulmões de ratos. OBJETIVO: Avaliar os efeitos do tratamento com metilprednisolona em pulmões de ratos transplantados a partir de ratos doadores induzidos à morte encefálica quando administrada 60 minutos após indução da mesma. MÉTODOS: doze ratos Wistar foram randomizados e anestesiados em 2 grupos (n=6): controle: indução de morte encefálica e administração de solução salina; metilprednisolona (MET): indução de morte encefálica e administração de metilprednisolona 60 minutos após. Os animais foram observados e ventilados por 120 minutos e depois submetidos a transplante pulmonar. Foram avaliados parâmetros hemodinâmicos e gasométricos, escore histológico, dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), superóxido dismutase (SOD), TNF-α e interleucina-1β (IL-1β). RESULTADOS: houve redução significativa dos níveis de TNF-α e IL-1β no grupo que recebeu metilprednisolona (p=0,0084; p=0,0155, respectivamente). Não houve diferença significativa na atividade do TBARS e SOD entre os grupos controle e MET (p=0,2644; p=0,7461, respectivamente). Não houve diferença significativa na gasometria, nos parâmetros hemodinâmicos, e nas alterações histológicas entre os grupos controle e MET. CONCLUSÃO: a utilização de metilprednisolona após a morte encefálica em ratos doadores reduz a atividade inflamatória em pulmões transplantados, mas não tem influencia sobre o estresse oxidativo. / INTRODUCTION: Lung transplantation is the only therapeutic option for a subset of patients with end-stage lung disease. Most lung transplantations are performed using brain-dead donors, a condition that compromises the success of the procedure. The physiopathology of brain death is complex and involves haemodynamics, the sympathetic nervous system and inflammatory mechanisms. Administering methylprednisolone 60 minutes after inducing brain death in rats has been shown to modulate pulmonary inflammatory activity. OBJECTIVE: To evaluate the effects of methylprednisolone on transplanted rat lungs from donors treated 60 minutes after brain death. METHODS: Twelve Wistar rats were anaesthetised and randomly assigned to 1 of 2 groups (n=6): a control group that underwent the induction of brain death and the administration of saline solution and a methylprednisolone (MET) group that underwent the induction of brain death and the administration of methylprednisolone after 60 minutes. All of the animals were observed and ventilated for 120 minutes and then submitted to lung transplantation. We evaluated haemodynamic and blood gas parameters, the histologic score, the lung tissue determination of thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), the level of superoxide dismutase (SOD), the level of TNF-α and the level of interleukin-1β (IL-1β). RESULTS: There was a significant reduction in the levels of TNF-α and IL-1β in the group that received methylprednisolone (p=0.0084 and p=0.0155, respectively). There were no significant differences in TBARS and SOD between the control and MET groups (p=0.2644 and p=0.7461, respectively). There were no significant differences in the blood gas parameters, the haemodynamic parameters and the histologic alterations between the control and MET groups. CONCLUSION: The administration of methylprednisolone after brain death in donor rats reduces inflammatory activity in transplanted lungs but has no influence on oxidative stress.

Introdução: A Síndrome dos Ovários Policísticos (SOP) afeta 5 a 10% de mulheres em idade reprodutiva. O tratamento da infertilidade de causa anovulatória em pacientes com SOP envolve a indução da ovulação, sendo o citrato de clomifeno (CC) a medicação de primeira escolha. Nos casos resistentes ao CC, a segunda linha de tratamento pode ser medicamentosa (gonadotrofinas) ou cirúrgica (cauterização ou diatermia ovariana), realizada por videolaparoscopia (VLPC). A indução com gonadotrofinas aumenta muito o risco de multigestação, o que não ocorre com a diatermia ovariana, que restaura a ovulação fisiológica (monovulação). A ecografia transvaginal é um procedimento simples, menos invasivo do que aVLPC, que permite a punção ovariana através do fórnice vaginal. Objetivos: desenvolver uma técnica minimamente invasiva de cauterização ovariana monopolar guiada por ecografia transvaginal, utilizando animais (ovelhas e vacas) como modelo experimental. Métodos: em um primeiro experimento foram utilizadas ovelhas (15 Corriedale e 2 Suffolk) e no segundo experimento foram utilizadas 11 vacas Angus, todos animais em idade reprodutiva e com integridade ovariana anatômica e funcional. Para a cauterização monopolar foi utilizado o eletrocautério Valleylab Force FX e uma agulha especialmente desenvolvida para esse fim. Os animais tiveram os ovários cauterizados em 4 pontos cada e foram abatidos 2 dias após para coleta dos ovários e inspeção do trajeto da agulha. Resultados: Nas ovelhas, dos 34 ovários cauterizados, apenas 3 apresentaram a lesão característica. Dos 22 ovários cauterizados nas vacas, 20 apresentaram a lesão característica, tanto macro quando microscopicamente. Nas duas espécies animais, não houve lesões no trajeto da agulha. Conclusão: A cauterização ovariana se mostrou segura nos dois modelos experimentais, nenhum animal apresentou lesões térmicas ou pela punção no trajeto da agulha. Nas vacas, a identificação ecográfica e a cauterização, além de segura, foram efetivas. A eficiência e segurança dessa técnica devem ser estudadas em mulheres com anovulação por SOP. / Introduction: The Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) affects 5-10% of women at reproductive age. Treatment of anovulatory infertility in patients with PCOS involves the induction of ovulation, with clomiphene citrate (CC) the drug of first choice. In cases resistant to CC, the second line of treatment can be medicated (gonadotropins) or surgery (ovarian diathermy or cautery), performed by laparoscopic video (LPCV). The induction with gonadotrophins increases the risk of multi pregnancy, which does not occur with ovarian diathermy, which restores physiological ovulation (monovulation). The transvaginal ultrasound is a simple procedure, less invasive than the LPCV allowing ovarian puncture through the vaginal fornix. Objectives: To develop a minimally invasive technique of monopolar ovarian cauterization guided by transvaginal ultrasound, using animals (sheep and cattle) as an experimental model. Methods: In a first experiment were used sheep (15 Corriedale and 2 Suffolk). In the second experiment were used 11 cows Angus, all animals at reproductive age with anatomic and funcional ovarian integrity. For cauterized were used Valleylab Force FX electrocautery and a needle specially developed for this purpose. The animals had ovaries cauterized at 4 points each and were slaughtered 2 days after for collection of the ovaries and inspection of the needle path. Results: In sheep, from the 34 ovaries cauterized, only 3 showed the characteristic lesion. From the 22 ovaries cauterized in cows, 20 had the characteristic lesion, both macro and microscopically. In both species, there were no injuries in the path of the needle. Conclusion: The ovarian cauterization proved safe in experimental models, no animal showed thermal injury or puncture in the path of the needle. In cows, the sonographic identification and cauterization, beyond safe, were effective. The efficiency and safety of this technique should be studied in women with SOP anovulatory.

INTRODUÇÃO: Os macrófagos são tipos celulares envolvidos na progressão do enfisema pulmonar e podem assumir funções diferentes, dependendo dos estímulos que recebem e do microambiente. Na presença de interferon-? (IFN-y) ocorre a polarização de macrófagos M1, reconhecidos como pró-inflamatórios. Entretanto em presença de interleucinas (IL) -4 e IL-13 ocorre a polarização alternativa de macrófagos do tipo M2, reconhecidos por exercerem ação anti-inflamatória e com boa ação fagocítica para microrganismos e células apoptóticas (eferocitose). A progressão do enfisema está associada à redução da atividade da eferocitose e a resposta pulmonar na presença de poluentes depende da ação efetiva dos macrófagos para eliminação destas partículas. OBJETIVO: verificar a participação dos diferentes fenótipos de macrófagos envolvidos no processo de desenvolvimento do enfisema em camundongos submetidos a poluentes. MÉTODOS: Camundongos C57BL/6 machos receberam instilação intranasal de elastase pancreática de porco (PPE) para indução de enfisema e os grupos Controle receberam salina e ambos foram expostos ao ar poluído (PPE+POL e SAL+POL) ou filtrado (PPE+AF e SAL+AF) por 60 dias de acordo com os grupos. Avaliamos mecânica respiratória, perfil inflamatório no lavado broncoalveolar (LBA), intercepto linear médio (Lm), fibras elásticas e de colágeno e também avaliamos a expressão de citocinas IL-12, TNF-alfa, IFN-y, IL-4, IL-10 e IL-13 pela técnica de ELISA em homogenato de pulmão. RESULTADOS: Os grupos SAL+POL e PPE+AF mostraram um aumento no aumento intecepto alveolar, macrófagos, linfócitos e células epiteliais no LBA, e nas fibras elásticas e colágenas e nas quantidades de células Caspase 3 positivas e estas respostas foram exacerbadas em animais que receberam PPE e foram expostos a partículas exauridas de diesel. A análise da mecânica respiratória revelou uma diminuição na Htis (resistência tecidual) e Gtis (elastância tecidual) apenas nos grupos PPE, enquanto a expressão de IL-4, IL-10 e IL-13 foi aumentada apenas nos grupos expostos a poluição. RT-PCR e citometria de fluxo mostraram um aumento para os marcadores fenotípicos M2 nos grupos PPE+ AF e SAL+ POL e estas respostas foram exacerbadas no grupo PPE + POL. CONCLUSÃO: A associação entre instilação de PPE e exposição ao diesel exarcebou a resposta inflamatória e o enfisema em camundongos. Além disso, apenas a exposição ao às partículas poluentes exauridos da queima do diesel já induziu uma resposta inflamatória com desenvolvimento de enfisema mesmo em concentrações que estão de acordo com os padrões internacionais de qualidade do ar ambiente. Ambos os fatores induziram uma polarização do fenótipo M2, provavelmente devido à alta demanda por fagocitose de células apoptóticas / BACKGROUND: Macrophages are cells involved on progression of pulmonary emphysema and may assume different functions depending on microenvironment. stimuli. In presence of Interferon-? (IFN-y) occurs the polarization of macrophages M1, recognized as pro-inflammatory. However, in presence of interleukins-4 (IL-4) and -13 (IL-13), there is an alternative polarization of M2-type macrophages, recognized as anti-inflammatory action and good phagocytic action for microorganisms and apoptotic cells. Considering that the progression of emphysema is associated with the reduction of eferocytosis activity and that the pulmonary response on presence of pollutants depends on the effective action of the macrophages to eliminate these particles. AIM: To perform a temporal analysis of inflammation progression mediated by immune verify the participation of the different macrophages phenotypes involved in the process development of emphysema in mice submitted to pollutants. METHODS: C57BL/6 mice received intranasal instillation of elastase for emphysema induction on control groups received saline and exposed to polluted or filtered air for 60 days according to the groups. We evaluated respiratory mechanics, elastic and collagen fibers and in the amounts of Caspase 3 positive cells and inflammatory profile in BAL and evaluation of the mean linear intercept, we also evaluated the expression of IL-12, TNF-alpha, IFN-y, IL-4, IL-10 and IL-13 cytokines by ELISA in lung homogenate. RESULTS: The SAL + POL and PPE + AF groups showed an increase in alveolar intelect enhancement, macrophages, lymphocytes and epithelial cells in BAL, and in elastic and collagen fibers and in the amounts of Caspase 3 positive cells and these responses were exacerbated in animals receiving PPE and were exposed to diesel exhausted particles. The analysis of respiratory mechanics revealed a decrease in tissue elastance and tissue damping only in the PPE groups, whereas IL-4, IL-10 and IL-13 expression was increased only in the groups exposed to pollution. RT-PCR and flow cytometry showed an increase for the M2 phenotypic markers in the PPE + AF and SAL + POL groups and these responses were exacerbated in the PPE + POL group. CONCLUSION: The association between PPE instillation and diesel exposure exacerbated the inflammatory response and emphysema in mice. In addition, only exposure to particulate pollutants exhausted from diesel burning has already induced an inflammatory response with the development of emphysema even at concentrations that are in line with international ambient air quality standards. Both factors induced a polarization of the M2 phenotype, probably due to the high demand for phagocytosis of apoptotic cells

Um modelo experimental de arco dentário, moldado em epóxi, foi utilizado para estudar o comportamento mecânico do copolímero de etileno e acetato de vinila (EVA), na forma de placa plana e protetor bucal. O modelo experimental foi investigado, usando-se um sistema configurado em duas formas diferentes: suporte + arco + placa plana e suporte + arco + protetor bucal. O comportamento mecânico do copolímero de etileno e acetato de vinila foi estudado em função de três variáveis: espessura, temperatura e na ausência e presença de saliva artificial. A avaliação do comportamento mecânico do EVA, na forma de placa e protetor, foi feita usando-se dois planejamentos estatísticos fatoriais, 3x2x2 e 23, respectivamente, numa máquina universal de tração. As propriedades mecânicas do EVA, ao esforço compressivo, avaliadas nas duas configurações (suporte + arco + placa e suporte + arco + protetor) foram: energia aparente absorvida (J.mm-1), tensão máxima (N.mm-1), deslocamento máximo (mm) e força máxima (N). Os efeitos das variáveis, espessura, temperatura e presença ou ausência da saliva artificial foram modelados, matematicamente, usando-se as propriedades mecânicas do EVA ao esforço compressivo, como parâmetros de resposta. Os polinômios ortogonais foram ajustados em função das variáveis e de suas interações significantes, fixando-se o nível de significância igual ou menor de 0,05 ou 5%. Um mecanismo de oclusão do modelo experimental, para explicar a resposta mecânica do EVA, no sistema suporte + arco + placa e suporte + arco + protetor, consistiu em três eventos acoplados: 1) deformação compressiva longitudinal; 2) escorregamento entre os arcos e 3) travamento mecânico ao atingir a máxima oclusão. As variáveis, espessura da placa ou do protetor, temperatura (ambiente e bucal) e saliva (ausência ou presença), bem como algumas interações significantes entre elas, modificaram as propriedades mecânicas do EVA, no sentido de aumentar ou reduzir a resistência oferecida, por este material, ao esforço compressivo, dependendo de como os níveis das respectivas variáveis eram combinados. A resposta mecânica do EVA no sistema suporte + arco + protetor diferiu do sistema suporte + arco + placa, pois os intervalos de espessuras médias dos protetores e das placas foram significativamente diferentes. O mecanismo de oclusão do modelo experimental proposto justifica as diferenças de comportamento mecânico observadas para as duas configurações estudadas. Para placas ou protetores mais finos, da ordem de 2mm, o escorregamento acoplado ao travamento mecânico foram dois eventos determinantes. Para as placas mais espessas, da ordem de 4 mm, o comportamento mecânico pode ser explicado por três eventos acoplados: deformação compressiva longitudinal, escorregamento entre os arcos e travamento mecânico, ao atingir a máxima oclusão. / An experimental model of dental arch, moulded in epoxy, was used to study the mechanic behaviour of a copolymer of ethylene and vinyl acetate (EVA), in the form of a flat plaque or mouth protector in function of three variables: thickness, temperature and the absence or presence of artificial saliva. The evaluation of the mechanical behaviour of EVA, as a plaque or as a mouth protector, was made with the use of two factorial statistical projection, 3x2x2 and 23, respectively, in a universal test machine. The mechanic properties of EVA, at compressive effort, evaluated in two configurations (support + arch + plaque and support + arch + mouth protector) were: maximum absorbed energy (J.mm-1), maximum strain (N.mm-1), maximum displacement (mm) and maximum force (N). The effect of the variables (thickness, temperature and absence or presence of artficial saliva) were shaped, mathematically, by using the mechanical properties of EVA to compressive effort as a reply parameter. The orthogonal polynomials were adjusted in function of the variables and their significant interactions, fixing the level of significancy as 0,05 (5%) or less. A mechanism of occlusion of the experimental model, to explain the mechanic answer of EVA in the system support + arch + plaque and support + arch + protector, consisted of three connected events: 1) longitudinal compressive deformation; 2) sliding between the arches and 3) mechanic lockage on maximum occlusion. The variables, thickness of the plaque or mouth protector, temperature (local or mouth) e saliva (presence or absence), as well as some significant interactions between them, modified the mechanic properties of EVA, in the sense of increasing or reducing the resistence of this material to the compressive effort, depending on the way these variables were combined. The mechanic answer of EVA in the system support + arch + mouth protector differed from the system support + arch + plaque, as the intervals of average thickness of the mouth protectors and of the plaque were significantly distinct. The mechanism of occlusion of the experimental model proposed justifies the differences of mechanical behaviour observed in both configurations studied. In thinner plaques or mouth protectors, approximately of 2 mm, the sliding connected to the mechanic lockage were two determinant events. For thicker plaques, approximately of 4 mm, the mechanical behaviour can be explained by three linked events: longitudinal compressive deformation, sliding between the arches and mechanic locakge, on the maximum occlusion.

In this study, the structural design and analysis of a wing having mission-adaptive control surfaces were conducted. The wing structure was designed in order to withstand a maximum aerodynamic loading of 5 g due to maneuver. The structural model of the wing was developed by using MSC/PATRAN package program and that structural model was analyzed by using MSC/NASTRAN package program. The designed wing was then manufactured by Turkish Aerospace Industries Inc. (TUSAS-TAI). The finite element analysis results were verified by conducting ground vibration tests on the manufactured wing. The comparative results were used to tune the finite element model and the results obtained showed that the modeling was very successful.

Os mecanismos moleculares que levam ao dano da via nigroestriatal durante a progressão da Doença de Parkinson (DP) ainda não estão totalmente elucidados. Dessa forma, existe a necessidade de desenvolver modelos experimentais adequados para o estudo desse distúrbio neurodegenerativo. A linhagem de neuroblastoma humano SH-SY5Y tratada com neurotoxinas indutoras deste distúrbio (ex.: 6-hidroxidopamina - 6-OHDA) é amplamente utilizada como modelo in vitro da DP. Muitos estudos mostram que esta linhagem pode ser diferenciada em células dopaminérgicas através da combinação da diminuição do soro fetal bovino (SFB) em meio de cultura e da adição de neurotrofinas como o ácido retinóico (AR). No entanto, há poucos estudos mostrando as diferenças entre células proliferativas e diferenciadas da linhagem de neuroblastoma SH-SY5Y, além do efeito do tratamento com 6-OHDA. Ainda, não há um consenso nos protocolos de diferenciação. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi estabelecer um protocolo de diferenciação dopaminérgica da linhagem de neuroblastoma humano SH-SY5Y, bem como avaliar a potencialidade do modelo como plataforma para o screening de neurotoxicidade/neuroproteção de compostos e a possibilidade de manipulação gênica. As células proliferativas SH-SY5Y foram mantidas em meio de cultura DMEM/F12 (1:1) suplementado com 10% de SFB. A diferenciação foi induzida pela combinação de 10 μM de AR e meio de cultura com 1% de SFB durante 4, 7 e 10 dias. Foram avaliados parâmetros morfológicos (presença de neuritos) e neuroquímicos, através marcadores de diferenciação neuronal (DAT- transportador de dopamina; TH – tirosina hidroxilase; ENS – enolase neurônio específica; NeuN – proteína nuclear de neurônio; Nestina). Ainda, avaliamos parâmetros de estresse oxidativo através da atividade de enzimas antioxidantes e dos níveis de tióis reduzidos. Nossos dados mostraram que as células SH-SY5Y diferenciadas por 7 dias apresentaram mudanças morfológicas e o aumento do imunoconteúdo de todos os marcadores neuronais testados, e a concomitantemente diminuição do imunoconteúdo de nestina (marcador de células indiferenciadas). Além disso, o fenótipo neuronal apresentou uma maior atividade de alguns sistemas antioxidantes. Também foi avaliada a citotoxicidade frente ao H2O2 e à 6-OHDA nos dois fenótipos. As células diferenciadas se mostraram mais resistentes ao dano causado pelo H2O2 e mais sensíveis à 6-OHDA. Dessa forma, a citotoxicidade da 6-OHDA pode estar relacionada com o aumento do imunoconteúdo do DAT, visto que a neurotoxina entra na célula dopaminérgica através deste transportador. Interessantemente, as células diferenciadas apresentaram aumento dos níveis da proteína neuroprotetora DJ-1, que está relacionada a uma forma prematura de Parkinsonismo em humanos. Após a caracterização do modelo, nós utilizamos o fenótipo diferenciado como plataforma experimental para o screening de compostos neuroprotetores como os organocalcogênios. Nós determinamos a citotoxidade destes compostos em células diferenciadas da linhagem de neuroblastoma SH-SY5Y. A partir destes dados, foram selecionados compostos com baixa citotoxicidade e avaliamos a morfologia celular (densidade de neuritos). Nós verificamos que antes da perda de viabilidade, ocorre a perda de neuritos, sendo que este parâmetro é outra vantagem do modelo de célula diferenciada para avaliação da neurototoxicidade. Ainda, verificamos que estes compostos são capazes de prevenir o dano celular causado pela 6-OHDA. Além disso, nós caracterizamos a capacidade do modelo de ser manipulado geneticamente através da transfecção e superexpressão de plasmídeo contendo a proteína verde fluorescente, onde verificamos que a expressão é mantida durante a diferenciação. Dessa forma, nossos dados mostraram a eficácia da padronização da diferenciação induzida por AR da linhagem de neuroblastoma humano SH-SY5Y, pois estas células apresentam características morfológicas e neuroquímicas adequadas de neurônio dopaminérgico bem como pode ser aplicado não só para avaliação de neurototoxicidade/neuroproteção, mas também pode ser manipulado geneticamente. / The molecular mechanisms underlying the massive cellular loss found in the nigrostriatal pathway during the progression of Parkinson’s disease (PD) are not completely understood. Therefore, it is important to develop more suitable experimental models to study the molecular mechanisms of this neurodegenerative disorder. Proliferative human neuroblastoma cell line SH-SY5Y challenged with neurotoxins (e.g.: 6-hydroxydopamine – 6-OHDA) has been widely used as an in vitro model for PD. Many lines of evidence showed that this cell line differentiates with the combination of lower fetal bovine serum (FBS) and retinoic acid (RA) to dopaminergic-like neural cell. However, there are few studies addressing the differences between proliferative and RA-differentiated SH-SY5Y cells as well as their responses to 6-OHDA cytotoxicity. Moreover, there is no consensus in differentiation protocols. Hence, the objective of this study was to establish a RAinduced dopaminergic differentiation protocol and also evaluate its capabilities for drug screening of neurotoxicity/neuroprotection and genetic manipulation. Exponentially growing SH-SY5Y cells were maintained with DMEM/F12 (1:1) medium plus 10% FBS. Differentiation was triggered by the combination of 10 μM of RA plus medium with 1% of FBS during 4, 7 and 10 days. We evaluated the cell morphology (neurites) and the neuronal markers (Dopamine Transporter- DAT, Tyrosine Hydroxylase-TH, Neuron-Specific Enolase-NSE, Neuronal Nuclei Protein- NeuN, and Nestin immunocontent). Furthermore, we verify the activity of antioxidant enzymes and the reduced thiol levels. Our data demonstrated that SH-SY5Y cells differentiated for 7 days expresses all neuronal markers tested with concomitant decrease in nondifferentiated marker (nestin). Besides, they showed a higher activity of some antioxidant systems. We also evaluated the cytotoxicity of H2O2 and 6-OHDA in both phenotypes. Differentiated cells are more resistant to H2O2 and more sensitive to 6- OHDA. Hence, the damage caused by 6-OHDA could be related with the increase of DAT immuncontent, because this neurotoxin enters into the dopaminergic cell through this transporter. Interestingly, the differentiated cells have more levels of neuroprotective DJ-1 protein, which is related with a juvenile Parkinsonism. After establish the conditions of differentiation, we used the neuronal phenotype to perform a drug screening with organoselenide compounds. We verify the cytotoxicity of these compounds in differentiated cells. From these data, we selected compounds with low toxicity and evaluated the cell morphology (neurites density). We verify that before the loss of viability, there is a loss of neurites. This parameter is another advantage of the differentiated cells model to neurotoxicity evaluation. Moreover, these compounds were able to prevent neuronal cell death caused by 6-OHDA. We also characterized the ability of the model to be manipulated genetically through transfection and overexpression of a green fluorescent protein (GFP) plasmid. We verify that the expression of GFP is maintained during the differentiation. Hence, our data showed the efficacy of the RA-induced differentiation protocol of the neuroblastoma cell line SH-SY5Y, because these cells have morphological and neurochemical characteristics of dopaminergic neurons. Furthermore, the neuronal phenotype can be applyed not only to evaluate neurocytotoxicity/neuroprotection but also can be manipulated genetically.

INTRODUÇÃO: O transplante pulmonar é a única opção terapêutica para determinados pacientes com doença pulmonar em estágio terminal. A maioria dos transplantes de pulmão é realizada a partir de doadores em morte encefálica, condição que per si pode comprometer o sucesso do procedimento. A fisiopatologia da morte encefálica é complexa e envolve mecanismos hemodinâmicos, simpáticos e inflamatórios. A administração de metilprednisolona 60 minutos após indução da morte encefálica reduz a atividade inflamatória em pulmões de ratos. OBJETIVO: Avaliar os efeitos do tratamento com metilprednisolona em pulmões de ratos transplantados a partir de ratos doadores induzidos à morte encefálica quando administrada 60 minutos após indução da mesma. MÉTODOS: doze ratos Wistar foram randomizados e anestesiados em 2 grupos (n=6): controle: indução de morte encefálica e administração de solução salina; metilprednisolona (MET): indução de morte encefálica e administração de metilprednisolona 60 minutos após. Os animais foram observados e ventilados por 120 minutos e depois submetidos a transplante pulmonar. Foram avaliados parâmetros hemodinâmicos e gasométricos, escore histológico, dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), superóxido dismutase (SOD), TNF-α e interleucina-1β (IL-1β). RESULTADOS: houve redução significativa dos níveis de TNF-α e IL-1β no grupo que recebeu metilprednisolona (p=0,0084; p=0,0155, respectivamente). Não houve diferença significativa na atividade do TBARS e SOD entre os grupos controle e MET (p=0,2644; p=0,7461, respectivamente). Não houve diferença significativa na gasometria, nos parâmetros hemodinâmicos, e nas alterações histológicas entre os grupos controle e MET. CONCLUSÃO: a utilização de metilprednisolona após a morte encefálica em ratos doadores reduz a atividade inflamatória em pulmões transplantados, mas não tem influencia sobre o estresse oxidativo. / INTRODUCTION: Lung transplantation is the only therapeutic option for a subset of patients with end-stage lung disease. Most lung transplantations are performed using brain-dead donors, a condition that compromises the success of the procedure. The physiopathology of brain death is complex and involves haemodynamics, the sympathetic nervous system and inflammatory mechanisms. Administering methylprednisolone 60 minutes after inducing brain death in rats has been shown to modulate pulmonary inflammatory activity. OBJECTIVE: To evaluate the effects of methylprednisolone on transplanted rat lungs from donors treated 60 minutes after brain death. METHODS: Twelve Wistar rats were anaesthetised and randomly assigned to 1 of 2 groups (n=6): a control group that underwent the induction of brain death and the administration of saline solution and a methylprednisolone (MET) group that underwent the induction of brain death and the administration of methylprednisolone after 60 minutes. All of the animals were observed and ventilated for 120 minutes and then submitted to lung transplantation. We evaluated haemodynamic and blood gas parameters, the histologic score, the lung tissue determination of thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS), the level of superoxide dismutase (SOD), the level of TNF-α and the level of interleukin-1β (IL-1β). RESULTS: There was a significant reduction in the levels of TNF-α and IL-1β in the group that received methylprednisolone (p=0.0084 and p=0.0155, respectively). There were no significant differences in TBARS and SOD between the control and MET groups (p=0.2644 and p=0.7461, respectively). There were no significant differences in the blood gas parameters, the haemodynamic parameters and the histologic alterations between the control and MET groups. CONCLUSION: The administration of methylprednisolone after brain death in donor rats reduces inflammatory activity in transplanted lungs but has no influence on oxidative stress.

Introdução: A Síndrome dos Ovários Policísticos (SOP) afeta 5 a 10% de mulheres em idade reprodutiva. O tratamento da infertilidade de causa anovulatória em pacientes com SOP envolve a indução da ovulação, sendo o citrato de clomifeno (CC) a medicação de primeira escolha. Nos casos resistentes ao CC, a segunda linha de tratamento pode ser medicamentosa (gonadotrofinas) ou cirúrgica (cauterização ou diatermia ovariana), realizada por videolaparoscopia (VLPC). A indução com gonadotrofinas aumenta muito o risco de multigestação, o que não ocorre com a diatermia ovariana, que restaura a ovulação fisiológica (monovulação). A ecografia transvaginal é um procedimento simples, menos invasivo do que aVLPC, que permite a punção ovariana através do fórnice vaginal. Objetivos: desenvolver uma técnica minimamente invasiva de cauterização ovariana monopolar guiada por ecografia transvaginal, utilizando animais (ovelhas e vacas) como modelo experimental. Métodos: em um primeiro experimento foram utilizadas ovelhas (15 Corriedale e 2 Suffolk) e no segundo experimento foram utilizadas 11 vacas Angus, todos animais em idade reprodutiva e com integridade ovariana anatômica e funcional. Para a cauterização monopolar foi utilizado o eletrocautério Valleylab Force FX e uma agulha especialmente desenvolvida para esse fim. Os animais tiveram os ovários cauterizados em 4 pontos cada e foram abatidos 2 dias após para coleta dos ovários e inspeção do trajeto da agulha. Resultados: Nas ovelhas, dos 34 ovários cauterizados, apenas 3 apresentaram a lesão característica. Dos 22 ovários cauterizados nas vacas, 20 apresentaram a lesão característica, tanto macro quando microscopicamente. Nas duas espécies animais, não houve lesões no trajeto da agulha. Conclusão: A cauterização ovariana se mostrou segura nos dois modelos experimentais, nenhum animal apresentou lesões térmicas ou pela punção no trajeto da agulha. Nas vacas, a identificação ecográfica e a cauterização, além de segura, foram efetivas. A eficiência e segurança dessa técnica devem ser estudadas em mulheres com anovulação por SOP. / Introduction: The Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) affects 5-10% of women at reproductive age. Treatment of anovulatory infertility in patients with PCOS involves the induction of ovulation, with clomiphene citrate (CC) the drug of first choice. In cases resistant to CC, the second line of treatment can be medicated (gonadotropins) or surgery (ovarian diathermy or cautery), performed by laparoscopic video (LPCV). The induction with gonadotrophins increases the risk of multi pregnancy, which does not occur with ovarian diathermy, which restores physiological ovulation (monovulation). The transvaginal ultrasound is a simple procedure, less invasive than the LPCV allowing ovarian puncture through the vaginal fornix. Objectives: To develop a minimally invasive technique of monopolar ovarian cauterization guided by transvaginal ultrasound, using animals (sheep and cattle) as an experimental model. Methods: In a first experiment were used sheep (15 Corriedale and 2 Suffolk). In the second experiment were used 11 cows Angus, all animals at reproductive age with anatomic and funcional ovarian integrity. For cauterized were used Valleylab Force FX electrocautery and a needle specially developed for this purpose. The animals had ovaries cauterized at 4 points each and were slaughtered 2 days after for collection of the ovaries and inspection of the needle path. Results: In sheep, from the 34 ovaries cauterized, only 3 showed the characteristic lesion. From the 22 ovaries cauterized in cows, 20 had the characteristic lesion, both macro and microscopically. In both species, there were no injuries in the path of the needle. Conclusion: The ovarian cauterization proved safe in experimental models, no animal showed thermal injury or puncture in the path of the needle. In cows, the sonographic identification and cauterization, beyond safe, were effective. The efficiency and safety of this technique should be studied in women with SOP anovulatory.