Thesis (M.Sc.)--York University, 2005. Graduate Programme in Biology. / Typescript. Includes bibliographical references (leaves 79-101). Also available on the Internet. MODE OF ACCESS via web browser by entering the following URL: http://gateway.proquest.com/openurl?url%5Fver=Z39.88-2004&res%5Fdat=xri:pqdiss &rft_val_fmt=info:ofi/fmt:kev:mtx:dissertation&rft_dat=xri:pqdiss:MR11880

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-10-14Bitstream added on 2014-06-13T20:46:50Z : No. of bitstreams: 1 diniz_ea_dr_rcla.pdf: 624691 bytes, checksum: 0bce2c8708444f08d4428ee602667889 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve como objetivo o estudo da evolução dos comportamentos de preparação do substrato, cuidado com a cria e cuidado com a rainha e alados em formigas cultivadoras de fungo. Estas formigas pertencem à tribo Attini, subfamília Myrmicinae, e ocorrem exclusivamente no continente americano. Esta tribo contém aproximadamente 230 espécies, porém pouco se conhece da biologia da maioria delas, graças ao fato de serem extremamente crípticas e de não apresentarem importância econômica, como as formigas cortadeiras, que são as mais estudadas. Foram utilizadas seis espécies, que representam bem os diversos níveis da filogenia da tribo: Acromyrmex disciger, Apterostigma pilosum, Mycetarotes parallelus, Myrmicocrypta sp., Trachymyrmex fuscus e Trachymyrmex sp. nov. Os comportamentos foram estudados em ninhos mantidos em laboratório, com o auxílio de micro-câmeras e um aparelho gravador de vídeo. Os comportamentos foram analisados, caracterizados e quantificados. Os resultados foram divididos em três capítulos de acordo com o tipo de comportamento. No capítulo sobre a evolução dos comportamentos de preparação do substrato foi observado que, basicamente, o processo evoluiu no sentido de aumentar a capacidade das operárias em decompor inicialmente o substrato. As espécies basais, A. pilosum, M. parallelus e Myrmicocrypta sp. apresentaram um processamento mais simples com um número menor de comportamentos e principalmente sem os comportamentos do tratamento químico, que é responsável pela fragmentação do substrato ao mesmo tempo em que ele é tratado com enzimas digestivas. As duas espécies do gênero Trachymyrmex apresentaram um processo mais complexo com grande participação do tratamento químico. Em A. disciger, que é uma cortadeira, há uma intensa especialização do sistema de castas para o aumento da eficiência... / This work aims to study the evolution of the behaviors of substrate preparation, brood, queen and winged forms care in fungus growing ants. These ants are included in the tribe Attini, subfamily Myrmicinae, and occur exclusively in the american continent. This tribe contains approximately 230 species, but little is known about the biology of most of them, tanks to the fact that they show very cryptic habits and are not economically important, like the leaf cutting ants, which are the most studied. Six species were used in this work, which represent well all the levels of the phylogeny of the tribe: Acromyrmex disciger, Apterostigma pilosum, Mycetarotes parallelus, Myrmicocrypta sp., Trachymyrmex fuscus and Trachymyrmex sp. Nov. The behaviors were studied in laboratory nests, with a set of micro cameras and a video recording device. The behaviors were analyzed, characterized and quantified. The results were summarized and discussed in tree chapters, arranged by type of behavior. In the chapter about the evolution of the substrate preparation behaviors, basically it is assumed that this process evolved in order to develop the capacity of previously decompose the substrate by the workers. In the basal species, A. pilosum, M. parallelus and Myrmicocrypta sp. this process is very simple with a small number of behaviors and principally without the behaviors of chemical treatment, which are responsible for the fragmentation of the substrate as it is treated by with digestive enzymes. In the two species of the genus Trachymyrmex, the process became more complex and showed a greater participation of these behaviors. A. disciger, witch is a leaf cutting ant, showed an extensive specialization of physical castes in all the phases of the process which elevated it’s efficiency. In the chapter about the evolution of the behaviors of brood care... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Angela Regina Araújo / Banca: Marcia Nasser Lopes / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Geraldo Humberto Silva / Resumo: Este trabalho descreve o isolamento de 43 fungos endofíticos associados à espécie vegetal Senna spectabilis, e a triagem química e biológica destes. Os extratos brutos em AcOEt produzidos pelos fungos foram avaliados quimicamente por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H, e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostram promissores. A partir dos resultados obtidos os fungos Myrothecium gramineum e Acremonium sp. foram selecionados para crescimento em escala ampliada, em meio de cultivo MBD, visando a obtenção do extrato bruto para isolamento e determinação estrutural dos metabólitos produzidos. Nesta etapa foram utilizados dois modos de incubação (estático e sob agitação) para avaliação da influência do modo de crescimento na produção metabólica, evidenciando que não ocorreram mudanças significativas na produção dos metabólitos secundários. Do extrato bruto obtido de M. gramineum foi isolada a Verrucarina A, como um precipitado, durante a solubilização do extrato em MeOH. O sobrenadante foi então submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento de 3 dicetopiperazinas, sendo a ciclo (Pro-Tyr), ciclo (L-Pro-L-Leu) e a ciclo(D-Pro-D-Phe), e 4 tricotocenos, a Verrucarina A (já isolada como precipitado), Roridina A e Isororidina A e a Verrucarina L. Durante o processo de concentração para a obtenção do extrato bruto de Acremonium sp., ocorreu a formação de cristais em forma de filetes que ficaram aderidos ao balão. Os cristais foram separados e identificados como a Citocalasina D. O extrato bruto resultante da separação destes cristais foi submetido a fracionamento cromatográfico levando ao isolamento de 7 substâncias: uma xantona (Fusaridina), 4 isocumarinas [(R)-8-metoxi-meleina; (3S, 4S)-5-carbometoxi-4-hidroximeleína; (3R)-5-carbometoximeleina e (3S)-5-carboetoxi-mele... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work reports the isolation of 43 endophytic fungi associated with Senna spectabilis, and the chemical and biological screening of their extracts. The AcOEt crude extracts produced by fungi were submitted to chemical analysis by TLC, DAD-HPLC, NMR and bioassays to evaluation of antifungal, antioxidant and anticholinesterase potential, which showed promising. The results enabled us to select the fungi Myrothecium gramineum and Acremonium sp. to growth on a large scale for isolation and structural determination of metabolites produced. The fungal strains were cultivated in liquid media PDB to obtaining the crude extracts. In this stage, we used two modes of incubation (static mode and under agitation), to evaluate the influence of the growing mode in production of the secondary metabolites, showing that there were no significant changes in metabolic production. The crude extract of M. gramineum yielded the substance Verrucarin A, as a white precipitated during solubilization of the extract in MeOH. The supernatant was fractioned by CC and preparative HPLC yielding three diketopiperazines [(cicle (Pro-Tyr), cicle (L-Pro-L-Leu) and cicle (D-Pro-D-Phe)] and four trichothecenes [Verrucarin A (already isolated as substance), Roridin A and Isororidin A and Verrucarin L. During the process of concentration of solvents to obtain crude extract of Acremonium sp., there was the formation of crystals in the form of fillets that were attached to the balloon. The crystals were separated and identified like Citocalasin D. The resulting crude extract was submitted to chromatographic fractionation yielding seven substances: one xanthone [Fusaridin, four isocoumarins [(R)-8-methoxi-mellein, (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein, (3R)-5-carbomethoximellein and (3S)-5-carboethoxi-mellein] and the griseofulvin and 7-dechlorogriseofulvin. The substances (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Botrytis species affect over 300 host plants in all climate areas of the world, at both pre and post-harvest stages, leading to significant losses in agricultural produce. Therefore, the development of a rapid, sensitive and reliable method to assess the pathogen load of infected crops can help to prescribe an effective curing regime. Growers would then have the ability to predict and manage the full storage potential of their crops and thus provide an effective disease control and reduce post-harvest losses. A highly sensitive electrochemical immunosensor based on a screen-printed gold electrode (SPGE) with onboard carbon counter and silver / silver chloride (Ag/AgCl) pseudo-reference electrode was developed in this work for the detection and quantification of Botrytis species. The sensor utilised a direct sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) format with a monoclonal antibody against Botrytis immobilised on the gold working electrode. Two immobilisation strategies were investigated for the capture antibody, and these included adsorption and covalent immobilisation after self-assembled monolayer formation with 3-dithiodipropionic acid (DTDPA). A polyclonal antibody conjugated to the electroactive enzyme horseradish peroxidase (HRP) was then applied for signal generation. Electrochemical measurements were conducted using 3,3’, 5,5’-tetramethylbenzidine dihydrochloride / hydrogen peroxide (TMB/H2O2) as the enzyme substrate system at a potential of -200 mV. The developed biosensor was capable of detecting latent Botrytis infections 24 h post inoculation with a linear range from 150 to 0.05 μg fungal mycelium ml-1 and a limit of detection (LOD) as low as 16 ng ml-1 for covalent immobilisation and 58 ng ml-1 for adsorption, respectively. Benchmarked against the commercially available Botrytis ELISA kits, the optimised immuno-electrochemical biosensor showed strong correlation of the quantified samples (R2=0.998).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-27Bitstream added on 2014-06-13T20:14:33Z : No. of bitstreams: 1 theodoro_rc_me_botib.pdf: 1627532 bytes, checksum: 84aa1424194b14fdd0953c57c4c5c2a6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O fungo termo dimórfico, Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da Paracoccidioidomicose (PCM), a micose sistêmica mais prevalente da América Latina. Este fungo vem sendo frequentemente isolado de amostras clínicas, tecidos de tatu (Dasypus novemcinctus) e recentemente foi também isolado de cão. Este trabalho avaliou a transição de micélio para levedura (M-L), a termo tolerância e o perfil de virulência em nove isolados de P. brasiliensis (quatro de pacientes humanos, quatro de tatus e um de cão), bem como a sua relação com a seqüência parcial e expressão do gene hsp70 (Heat Shock Protein 70) através de Real Time RT-PCR. Tanto os dados morfológicos como moleculares se mostraram variáveis dentre os diferentes isolados. Alguns destes dados, como sequenciamento e morfologia leveduriforme corroboram com a divisão de nossos isolados nas duas espécies crípticas simpátricas previamente propostas por Matute et al (2006). Nossos resultados confirmam que a HSP70 pode ser um importante fator de virulência por estar associado à termo tolerância, mas sua expressão parece não ser diretamente associada a altos padrões de virulência. / The thermo dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), the most prevalent systemic mycosis in Latin America. The previous phylogenetic species recognition proved the existence of, at least, three cryptic species in this pathogen. In this work we evaluated the mycelia to yeast (M-Y) transition, thermo tolerance and virulence profiles of nine isolates of P. brasiliensis, (including members of two of the three species) as well as its relation to the partial sequence and expression of hsp70 gene. It was observed a large phenotypic variability concerning the M-Y transition. The isolates Bt84 and T10 took more time to convert to the yeast form. These same isolates presented stretched yeast cells at 36°C, instead of the typical round cells. It was also observed arthroconidia production during the M-Y transition for some of the nine isolates studied. The hsp70 expression showed to be variable among our isolates. The partial sequencing of hsp70 gene resulted in a Neighbour Joining tree that divided our isolates in two main groups. Our data confirm that hsp70 gene might be an important virulence factor, associated with the thermo tolerance, but its expression does not seem to be directly related to high virulence profiles. We also presented some preliminary results about mycological characters that could be important candidates for morphologic markers for species recognition, as well as the partial sequencing of one member of the hsp70 gene family that allowed the separation of our isolates in two clusters, that correspond to the two sympatric cryptic species that occur in our PCM hyper endemic area (Botucatu, SP, Brazil).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-01Bitstream added on 2014-06-13T19:33:25Z : No. of bitstreams: 1 ferro_cg_me_jabo.pdf: 390303 bytes, checksum: 9d8f1206031713ae8ef90f14317d0c17 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estresse devido a mudanças ambientais pode impactar caracteres quantitativos através de alterações nas variâncias, genética e ambiental. Populações do patógeno da mela da soja, Rhizoctonia solani grupo de anastomose AG-1 IA, são altamente diferenciadas geneticamente ao longo de um gradiente latitudinal nas mais importantes regiões de cultivo de soja do Brasil. Entretanto, os processos evolutivos que guiaram a adaptação regional dessas populações são ainda desconhecidos. Neste trabalho foi testada a hipótese de que o estresse de temperatura elevada pode aumentar a variação genética para caracteres quantitativos, como a resistência a fungicida de amplo espectro, no fungo R. solani AG-1 IA da soja. Isto é o mesmo que testar se um aumento da temperatura, além da temperatura ótima para crescimento, resulta em aumento da herdabilidade de senso amplo para tolerância a um fungicida. Objetivou-se, especificamente, testar o efeito do estresse de temperatura sobre a variação genética para tolerância ao fungicida oxicloreto de cobre e avaliar a importância relativa da variação genética neutra e da seleção natural sobre a divergência e adaptação regional de populações de R. solani AG-1 IA da soja. Para tanto, avaliou-se o crescimento micelial in vitro de três populações brasileiras de R. solani AG-1 IA da soja sob dois regimes de temperatura, ótimo (25°C) e acima do ótimo (33,5°C), e sob três concentrações de oxicloreto de cobre: nenhum fungicida, 0,42 e 0,84 g.L-1. Foram determinadas os componentes de evolutibilidade: variância genética (IG), ambiental (IE) e a herdabilidade no sentido amplo (h2) para o crescimento micelial nas diferentes condições. Comparou-se, também, a diferenciação fenotípica por caracteres quantitativos (QST) e a diferenciação genética neutra (baseada em dados... / Stress due to environmental changes can impact quantitative traits through changes in variances, genetic and environmental. Populations of soybean foliar blight pathogen, Rhizoctonia solani anastomosis group AG-1 IA, are highly genetically differentiated along a latitudinal gradient in the most important Brazilian cropping areas. However, the evolutionary processes that have guided the regional adaptation of these populations are still unknown. In this study we tested the hypothesis that high temperature stress can increase the genetic variation for quantitative traits such as the tolerance to a broadspectrum fungicide, in the fungus R. solani AG-1 IA from soybean. This is the same as testing whether a temperature increase, beyond the optimum temperature for growth, results in increased broad sense heritability for fungicide tolerance. The specific objective was to test the effects of temperature stress on the genetic variation for tolerance to cupper oxychloride and to assess the relative importance of neutral genetic variation and natural selection on the divergence and local adaptation of R. solani AG-1 IA populations from soybean. We evaluated the in vitro mycelial growth of three Brazilian populations of R. solani AG-1 IA from soybean under two temperature regimes, optimal (25°C) and above optimal (33.5°C), and under three concentrations of cupper oxychloride: no fungicide, 0.42 and 0.84 g.L-1. We determined the components of evolvability: genetic (IG) and environmental (IE) variances and the broad-sense heritability (h2) for mycelial growth under these conditions. We also compared the phenotypic differentiation for quantitative traits (QST) and neutral genetic differentiation (based on microsatellite data) between three pairs of populations (FST). As measures of fungal phenotypic responses... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-24Bitstream added on 2014-06-13T20:26:04Z : No. of bitstreams: 1 zanardi_gj_dr_araiq.pdf: 7757680 bytes, checksum: 124090a2cfedea428566b448f77acc17 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho descreve o isolamento de 43 fungos endofíticos associados à espécie vegetal Senna spectabilis, e a triagem química e biológica destes. Os extratos brutos em AcOEt produzidos pelos fungos foram avaliados quimicamente por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H, e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostram promissores. A partir dos resultados obtidos os fungos Myrothecium gramineum e Acremonium sp. foram selecionados para crescimento em escala ampliada, em meio de cultivo MBD, visando a obtenção do extrato bruto para isolamento e determinação estrutural dos metabólitos produzidos. Nesta etapa foram utilizados dois modos de incubação (estático e sob agitação) para avaliação da influência do modo de crescimento na produção metabólica, evidenciando que não ocorreram mudanças significativas na produção dos metabólitos secundários. Do extrato bruto obtido de M. gramineum foi isolada a Verrucarina A, como um precipitado, durante a solubilização do extrato em MeOH. O sobrenadante foi então submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento de 3 dicetopiperazinas, sendo a ciclo (Pro-Tyr), ciclo (L-Pro-L-Leu) e a ciclo(D-Pro-D-Phe), e 4 tricotocenos, a Verrucarina A (já isolada como precipitado), Roridina A e Isororidina A e a Verrucarina L. Durante o processo de concentração para a obtenção do extrato bruto de Acremonium sp., ocorreu a formação de cristais em forma de filetes que ficaram aderidos ao balão. Os cristais foram separados e identificados como a Citocalasina D. O extrato bruto resultante da separação destes cristais foi submetido a fracionamento cromatográfico levando ao isolamento de 7 substâncias: uma xantona (Fusaridina), 4 isocumarinas [(R)-8-metoxi-meleina; (3S, 4S)-5-carbometoxi-4-hidroximeleína; (3R)-5-carbometoximeleina e (3S)-5-carboetoxi-mele... / This work reports the isolation of 43 endophytic fungi associated with Senna spectabilis, and the chemical and biological screening of their extracts. The AcOEt crude extracts produced by fungi were submitted to chemical analysis by TLC, DAD-HPLC, NMR and bioassays to evaluation of antifungal, antioxidant and anticholinesterase potential, which showed promising. The results enabled us to select the fungi Myrothecium gramineum and Acremonium sp. to growth on a large scale for isolation and structural determination of metabolites produced. The fungal strains were cultivated in liquid media PDB to obtaining the crude extracts. In this stage, we used two modes of incubation (static mode and under agitation), to evaluate the influence of the growing mode in production of the secondary metabolites, showing that there were no significant changes in metabolic production. The crude extract of M. gramineum yielded the substance Verrucarin A, as a white precipitated during solubilization of the extract in MeOH. The supernatant was fractioned by CC and preparative HPLC yielding three diketopiperazines [(cicle (Pro-Tyr), cicle (L-Pro-L-Leu) and cicle (D-Pro-D-Phe)] and four trichothecenes [Verrucarin A (already isolated as substance), Roridin A and Isororidin A and Verrucarin L. During the process of concentration of solvents to obtain crude extract of Acremonium sp., there was the formation of crystals in the form of fillets that were attached to the balloon. The crystals were separated and identified like Citocalasin D. The resulting crude extract was submitted to chromatographic fractionation yielding seven substances: one xanthone [Fusaridin, four isocoumarins [(R)-8-methoxi-mellein, (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein, (3R)-5-carbomethoximellein and (3S)-5-carboethoxi-mellein] and the griseofulvin and 7-dechlorogriseofulvin. The substances (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-17Bitstream added on 2014-06-13T20:06:36Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_cm_dr_araiq.pdf: 6887141 bytes, checksum: 82b00c7d4674c3606654ce87230ecfce (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este trabalho, descreve a busca de substâncias bioativas a partir do estudo químico e biológico dos extratos brutos produzidos pelos fungos endofíticos AM-01 identificado como Penicillium sp1, AM-02 e AM-03 não identificados e AM-04, também pertencente ao gênero Penicillium, que foram isolados das folhas de Alibertia macrophylla. Os fungos endofíticos isolados, foram cultivados em meio líquido MBD, e sólido (milho) a 25oC, sob agitação, e no modo estático, respectivamente. Para o meio líquido, o caldo foi separado do micélio e submetido à partição com AcOEt, fornecendo os extratos brutos após a evaporação do solvente. Para o meio sólido, foi realizado uma extração com metanol, seguido de filtração e evaporação do solvente, originando os extratos brutos. Após análises por RMN de ¹H e CLAE-DAD, os extratos brutos obtidos em milho, foram fracionados por cromatografia em coluna, seguida de separação via Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAEprep.). O extrato bruto de AM-01 (Penicillium sp1) forneceu seis substâncias da classe das isocumarinas, sendo duas inéditas. O fracionamento cromatográfico do extrato bruto de AM-02, conduziu ao isolamento de três sesquiterpenos inéditos identificados como Xylarenonas C, D e E. Também do extrato bruto de AM-02 foi isolado um composto furânico identificado como (E)-5-(1- hidroxialil)-4-(pent-1-enil)-2,5-diidrofurano-3-ácido carboxílico. O fracionamento cromatográfico de AM-04, permitiu o isolamento de um benzenóide, identificado como orcinol. O estudo químico dos extratos brutos obtidos em MBD, de AM-03 e AM-04, permitiram o isolamento das dicetopiperazinas ciclo (Pro-Try) e ciclo (L-Pro- L-Val), além da uracila. As substâncias isoladas foram identificadas por análises de RMN 1D e 2D e espectrometria de massas, bem como por comparação com dados da literatura... / This work describes the search for bioactive substances from the chemical/biological of the crude extracts produced by endophytic fungi AM-01 identified as Penicillium sp1, AM-02, AM-03 and AM-04 also belonging to the genus Penicillium isolated from the leaves of Alibertia macrophylla. The endophytic fungal isolates were grown in liquid medium and solid MBD to 25 °C under shaking and static mode, respectively. For the liquid medium the mycelium was separated from the broth and subjected to partition with AcOEt, giving the crude extracts after evaporation of the solvent. For solid medium, the extraction was performed with MeOH, followed by filtration and evaporation of the solvent yielding the crude extracts. After analysis by the ¹H NMR and HPLC-DAD, the crude extracts from maize were fractionated by chromatography on a column followed by separation using High Performance Liquid Chromatography (HPLCprep.). The crude extract of AM-01 (Penicillium sp1) provided six isocoumarins, two news. Chromatographic fractionation of the crude extract of AM-02 led to the isolation of three novel sesquiterpenes identified as Xylarenonas C, D and E and a furanic compound identified as 2,5-dihydro-5-(1-hydroxyallyl)-4-(E)-pent-1-enyl)furan-3-carboxylic acid. Chromatographic fractionation of AM-04 allowed the isolation of a benzenoid, identified as orcinol. The chemical study of AM-03 crude extracts and AM-04 cultivated in MDB allowed the isolation of diketopiperazines cyclo (Pro-Try), cyclo (L-Pro-L-Val), and uracil. The substances isolated were identified through analysis of 1H NMR, mass spectrometry and by comparison with literature data. The crude extracts and pure substances were submited for trials for antifungal agents, antioxidants, anticholinesterasic and inhibition of protease. All substances showed biological activities.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-17Bitstream added on 2014-06-13T20:26:07Z : No. of bitstreams: 1 cafeu_mc_dr_araiq.pdf: 2687839 bytes, checksum: 6f78bffb8a9f427b48e9b75f8cda9db6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho descreve a triagem de 21 fungos endofíticos associados a espécies vegetais de Cerrado e Mata Atlântica. Os extratos brutos fornecidos por estes fungos foram avaliados quimicamente (CLAE e RMN1H) e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostraram promissores. Após esta triagem, os fungos Xylaria sp. E Colletotrichum crassipes, associados a Casearia sylvestris, foram selecionados para o estudo químico/biológico. Estes fungos foram cultivados nos meios líquido (MDB) e sólido (milho) para obtenção dos extratos brutos. O extrato bruto de Xylaria sp. em milho foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento da griseofulvina, 7-desclorogriseofulvina e citocalasina B, enquanto que o extrato obtido do meio líquido conduziu ao isolamento da citocalasina D, citocalasina C e 5-carbóxi-6-hidroxi-3-metil-3,4- diidroisocumarina. Após fracionamento do extrato bruto do endófito C. crassipes no meio líquido MDB foram isoladas 8 substâncias da classe de dicetopiperazinas, N-(2-feniletil)acetamida, tirosol e as substâncias inéditas 1-hidroxi-1-feniletil-tirosol e (6-metil-3- (feniletóxi)-1,4-dioxan-2-il)metanol. Algumas substâncias puras foram submetidas à bioensaios e apresentaram potencial bioatividade frente aos fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e C. sphaerospermum e nos ensaios antioxidante e anticolinesterásico. As citocalasinas D e B isoladas durante este trabalho e outras 5 citocalasinas isoladas anteriormente foram submetidas à avaliação da citotoxicidade utilizando linhagens de células de adenocarcinoma murino e se mostraram muito ativas. Os fungos endofíticos Xylaria sp. e C. crassipes foram utilizados em biotransformação do substrato 4-etilciclohexanona. Este experimento foi realizado através do cultivo... / This work describes the screening of 21 endophytic fungi from plant species from Cerrado and Atlantic Forest. The crude extracts produced by these fungi after fermentation in potato dextrose broth (PDB) were evaluated by HPLC, 1HNMR and potential biological activities: antifungal, antioxidant and anticholinesterasic. After screening, the extracts of Xylaria sp. and Colletotrichum crassipes, isolated from Casearia sylvestris, were selected, based on the chemical/biological results. These endophytic fungi were cultivated in PDB and corn for crude extract preparation. The crude corn extract of Xylaria sp. led to isolation of griseofulvin, 7- dechlorogriseofulvin and cytochalasin B while the crude PDB extract led to isolation of cytochalasin C, cytochalasin D and 5-carboxy-6- hidroxy-3-methyl-3,4-dihydroisocoumarin. The crude PDB extract of Colletotrichum crassipes led to isolation of eight diketopiperazines, N-(2-phenylethyl)acetamide, tyrosol, 1-hidroxy-1- phenylethyl-tyrosol and (6-methyl-3-(phenethyloxy)-1,4-dioxan-2- yl)methanol. The some of them pure compounds showed potential antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaeropermum, antioxidant and anticholinesterasic activities. The Cytochalasins D and B, isolated in this work, and other five cytochalasins produced by Xylaria sp.1 showed potential activity for cytotoxic activity against adenocarcinomatous murine cells. The fungi Xylaria sp. and C. crassipes were evaluated as biocatalysts for biotransformation of 4-ethylcyclohexanone. Four biotransformation products were isolated. Their structures were established by spectroscopic methods, including the application of bidimensional NMR techniques and comparison with published data.

Resumo: O fungo termo dimórfico, Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da Paracoccidioidomicose (PCM), a micose sistêmica mais prevalente da América Latina. Este fungo vem sendo frequentemente isolado de amostras clínicas, tecidos de tatu (Dasypus novemcinctus) e recentemente foi também isolado de cão. Este trabalho avaliou a transição de micélio para levedura (M-L), a termo tolerância e o perfil de virulência em nove isolados de P. brasiliensis (quatro de pacientes humanos, quatro de tatus e um de cão), bem como a sua relação com a seqüência parcial e expressão do gene hsp70 (Heat Shock Protein 70) através de Real Time RT-PCR. Tanto os dados morfológicos como moleculares se mostraram variáveis dentre os diferentes isolados. Alguns destes dados, como sequenciamento e morfologia leveduriforme corroboram com a divisão de nossos isolados nas duas espécies crípticas simpátricas previamente propostas por Matute et al (2006). Nossos resultados confirmam que a HSP70 pode ser um importante fator de virulência por estar associado à termo tolerância, mas sua expressão parece não ser diretamente associada a altos padrões de virulência. / Abstract: The thermo dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), the most prevalent systemic mycosis in Latin America. The previous phylogenetic species recognition proved the existence of, at least, three cryptic species in this pathogen. In this work we evaluated the mycelia to yeast (M-Y) transition, thermo tolerance and virulence profiles of nine isolates of P. brasiliensis, (including members of two of the three species) as well as its relation to the partial sequence and expression of hsp70 gene. It was observed a large phenotypic variability concerning the M-Y transition. The isolates Bt84 and T10 took more time to convert to the yeast form. These same isolates presented stretched yeast cells at 36°C, instead of the typical round cells. It was also observed arthroconidia production during the M-Y transition for some of the nine isolates studied. The hsp70 expression showed to be variable among our isolates. The partial sequencing of hsp70 gene resulted in a Neighbour Joining tree that divided our isolates in two main groups. Our data confirm that hsp70 gene might be an important virulence factor, associated with the thermo tolerance, but its expression does not seem to be directly related to high virulence profiles. We also presented some preliminary results about mycological characters that could be important candidates for morphologic markers for species recognition, as well as the partial sequencing of one member of the hsp70 gene family that allowed the separation of our isolates in two clusters, that correspond to the two sympatric cryptic species that occur in our PCM hyper endemic area (Botucatu, SP, Brazil). / Orientador: Eduardo Bagagli / Coorientador: Ivan de Godoy Maia / Banca: Everaldo dos Reis Marques / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Mestre