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Distribuição da diversidade genética em Hypsiboas cinerascens (Anura: Hylidae) na AmazôniaSousa, Jessica Motta de 18 June 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-06-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Several hypotheses have been formulated to explain Amazonian biodiversity patterns,
whose biotic diversification has been seen as a result of historically complex scenarios
covering a wide range of temporal and spatial scales. Anurofauna has the potential to enhance
our understanding of the biogeographic patterns of diversification and processes of speciation,
since it serves as a model for inferring historical events. However, the challenge for those
seeking to elucidate the processes of diversification of Amazonian frogs is that large portion
of its diversity is cryptic, which result in an inaccuracy of limits and distributions of species,
which drastically alters our perception of structuring of biodiversity and obscures
biogeographic patterns. One of the components of the Amazon anurofauna is the species
Hypsiboas cinerascens, which was used as a model to investigate and contribute to the
knowledge of the patterns of genetic distribution of anurofauna in the Amazon. Given its wide
geographic distribution, some authors have indicated the existence of a species complex with
molecular data (mitochondrial gene sequences and genomic data) providing of important tools
for the delimitation of evolutionary lineages and their distributional limits, thus clarifying
current taxonomy, and for the identification of cryptic species, and thus biogeographic
patterns. Given the above, we used sequences of mitochondrial genes 16S RNA and
cytochrome b together with the new8 generation sequences (ddRAD-tags) to study the
distribution patterns of genetic diversity of H. cinerascens in the Amazon and so testing for
cryptic lineages, and inferring biogeographic patterns of the lineages found. Through genetic
distance analyses and formation of biological groups with 16S rRNA, concatenated
phylogeny of the mitochondrial 16S rRNA and Cytochrome B genes, phylogenomic analyses
of the ddRAD-tags, and estimating the time of divergence of both genomes, we identified the
possible existence of nine evolutionary lineages in H. cinerascens that originated in the
Miocene to the Pliocene: Japurá-Peru, Manaus-Juruti-Guyana, Matupiri-Purus, Santarém-Alta
Floresta, Tefé-Jutaí, Morrinho-Rondônia, Uacari, French Guiana and Negro-Trombetas. The
filogenomic analyzes confirmed the lineages found in the mtDNA, but with some
discrepancies between the topologies. Due to the robustness of the dating of gDNA, we use it
to infer the biogeographical history of the group. We suggested that the transcontinental
formation of the Amazon River in the last 10 Ma may have been the precursor event for the
diversification of the lineages, but due to the complexity of the relationships between groups
and the lack of sampling throughout the complete distribution of the H. cinerascens species
complex, possibly different historical and ecological factors events influenced their
distributions, which can not be identified accurately with our data. The Negro-Trombetas
lineage has a distinct biogeographic history of the other lineages of the complex, which may
be associated with open forest environments in the region of Guyana. In the future a
taxonomic revision of the group should be carried out to verify the existence of new species. / Diversas hipóteses foram formuladas para explicar os padrões de biodiversidade
amazônica, cuja diversificação biótica tem sido vista como um produto que envolve cenários
historicamente complexos e que abrangem uma ampla gama de escalas temporais e espaciais.
A anurofauna possui o potencial de aprimorar o entendimento dos processos biogeográficos
nos padrões de especiação e diversificação, já que serve como modelo para inferir eventos
históricos. Porém, o desafio para quem busca elucidar o processo de diversificação de anuros
amazônicos é que grande parcela de sua diversidade é críptica, que tem por consequência uma
imprecisão de limites e distribuições das espécies, o que altera drasticamente a nossa
percepção da estrutura da biodiversidade e oculta padrões biogeográficos. Um dos
componentes da anurofauna amazônica é a espécie Hypsiboas cinerascens, que foi utilizada
como modelo para investigar e contribuir com o conhecimento sobre os padrões de
distribuição genética da anurofauna na Amazônia. Considerando sua ampla distribuição
geográfica, alguns autores indicam a existência de um complexo de espécies e os dados
moleculares (sequências de genes mitocondriais e dados genômicos) são importantes
ferramentas para a delimitação de linhagens evolutivas e seus limites de distribuição, de
forma a clarificar a taxonomia vigente, bem como para a identificação de espécies crípticas, e
consequentemente a mostrar padrões biogeográficos. Conforme o exposto, utilizamos o
sequenciamento dos genes mitocondriais 16S rRNA e Citocromo b juntamente com o
sequenciamento de nova geração (ddRAD-tags), para estudar os padrões de distribuição da
diversidade genética de H. cinerascens na Amazônia e assim testar a presença de linhagens
crípticas, inferindo padrões biogeográficos sobre as linhagens encontradas. Por meio de
análises de distâncias genéticas e formação de grupos biológicos com o 16S rRNA, filogenia
concatenada dos genes mitocondriais 16S rRNA e Citocromo B, filogenômica dos ddrad-tags,
e estimação do tempo de divergência de ambos genomas, definimos a possível existência de 9
linhagens evolutivas em H.. cinerascens que se originaram do Mioceno ao Plioceno: Japurá-
Peru, Manaus-Juruti-Guiana, Matupiri-Purus, Santarém-Alta Floresta, Tefé-Jutaí, Morrinho-
Rondônia, Uacari, Guiana Francesa e Negro-Trombetas. As análises filogenômicas
confirmaram as linhagens encontradas com o mtDNA, porém com algumas discordâncias
entre as topologias. Devido a maior robustez da datação do gDNA, a utilizamos para inferir a
história biogegráfica do grupo. Sugerimos que a formação transcontinental do Rio Amazonas
nos últimos 10 Ma pode ter sido o evento precursor da diversificação de linhagens, porém
devido a complexidade das relações entre os grupos e a falta de amostragem da completa
distribuição da espécie, possivelmente diferentes eventos históricos e fatores ecológicos
influenciaram as suas distribuições, nos quais não podem ser definidos com exatidão com os
nossos dados. A linhagem Negro-Trombetas possui uma história biogeográfica distinta das
outras linhagens do complexo, que pode estar associada a ambientes florestais mais abertos na
região das Guianas. Futuramente deve ser realizada a revisão taxonômica do grupo para
verificar a existência de novas espécies.
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Citogenômica comparativa de lagartos da família Teiidae da AmazôniaCarvalho, Natalia Dayane Moura 13 October 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-10-13 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / Macroteiids Neotropical lizards Teiidae family. Classical cytogenetic approaches in this group revealed karyotype variation with diploid numbers ranging 34-52 chromosomes, as well as differences in the distribution patterns of heterochromatin and composition thereof. However, the physical chromosomal mapping of repetitive DNA and comparative analysis of these elements is incipient fundamental to the understanding of the dynamics, organization and carioevolution this group of lizards. In that sense, this study mapped different classes of sequences of repetitive DNA, such as 5S rDNA, telomeric sequences, genes of tropomyosin 1 and retrotransposons Rex 1 and SINE and repetitive fraction Cot1-DNA in chromosomes of five species of Ameiva ameiva, Cnemidophorus sp.1, Kentropyx calcarata, Kentropyx pelviceps and Tupinambis teguixin. The mapping of repetitive sequences revealed a distinct pattern in Cnemidophorus sp.1, while the remaining species showed all sequences associated with each other in the heterochromatic region. The chromosomal physical mapping of tropomyosin 1 gene was first performed in lizards and revealed that in addition to being functional, has a structural function similar to the other mapped repetitive elements (rDNA 5S, telomeric sequences, retrotransposons Rex 1 and SINE) being located preferably in the centromeric regions of chromosomes and terminals. The FISH Cot1-DNA isolated from both Ameiva ameiva much Cnemidophorus sp.1 showed that these sequences are mainly located in the regions heterochromatic centromeric and telomeric chromosome of Ameiva ameiva, Kentropyx calcarata, Kentropyx pelviceps and Tupinambis teguixin. In Cnemidophorus sp.1 the Cot1-DNA probe isolated from Ameiva ameiva had multiple interstitial markings on chromosomes, while the mapping Cot1-DNA isolated from the species itself marked centromeric regions of some chromosomes, highlighting the centromeric differential composition in this species. The cloning and sequencing oh the repetitive fraction showed that different microsatellites, transposons, retrotransposons and some gene families also make up the fraction of moderately and highly repetitive DNA in the species teídeos. The results of this study demonstrated that different classes of repetitive DNA are part of the genome of Ameiva ameiva, Cnemidophorus sp.1, Kentropyx calcarata, Kentropyx pelviceps and Tupinambis teguixin, being interspersed heterochromatin and differences in the composition of this repetitive fraction between teideos are evident. These sequences
plays an important role in the functional and structural organization of the centromere and telomere these species. / Macroteídeos são lagartos Neotropicais da família Teiidae, a qual apresenta variação cariotípica quanto ao número diploide e diferenças nos padrões de distribuição da heterocromatina. Contudo, o mapeamento físico cromossômico de DNAs repetitivos bem como análises comparativas destes elementos são incipientes no grupo, sendo fundamentais para o entendimento da dinâmica, organização e a carioevolução destes lagartos. Diante disto, o presente estudo isolou e mapeou diferentes classes de sequências de DNAs repetitivos, tais como fração repetitiva Cot1-DNA, DNAr 5S, sequências teloméricas, genes da tropomiosina 1 e os retroelementos Rex 1 e SINE em cromossomos mitóticos de cinco espécies de teídeos amazônicos: Ameiva ameiva, Cnemidophorus sp.1, Kentropyx calcarata, Kentropyx pelviceps e Tupinambis teguixin. O mapeamento das sequências repetitivas revelou um padrão diferenciado em Cnemidophorus sp.1, enquanto que as demais espécies apresentaram todas as sequências associadas entre si na região heterocromática. O mapeamento físico cromossômico do gene da tropomiosina 1 foi realizado pela primeira vez em lagartos e revelou que, além de ser funcional, este possui função estrutural semelhante aos demais elementos repetitivos mapeados, estando localizados preferencialmente nas regiões centroméricas e terminais dos cromossomos. A FISH com Cot1-DNA isoladas tanto de Ameiva ameiva quanto de Cnemidophorus sp.1 evidenciou que estas sequências estão localizadas principalmente nas regiões heterocromáticas centroméricas e teloméricas dos cromossomos de Ameiva ameiva, Kentropyx calcarata, Kentropyx pelviceps e Tupinambis teguixin. Em Cnemidophorus sp.1 a sonda de Cot1-DNA isolada de Ameiva ameiva apresentou múltiplas marcações intersticiais nos cromossomos, enquanto que o mapeamento do Cot1-DNA isolado da própria espécie marcou regiões centroméricas de alguns cromossomos, ressaltando a composição centromérica diferencial nesta espécie. A clonagem e o sequenciamento do Cot1-DNA evidenciou que diferentes microssatélites, transposons, retrotransposons e algumas famílias gênicas também compõe a fração de DNA moderada e altamente repetitiva nas espécies de teídeos. Assim, os resultados obtidos neste estudo demonstraram que diversas classes de DNAs repetitivos fazem parte do genoma das espécies analisadas, estando estes intercalados e alocados na heterocromatina, especialmente em regiões centroméricas e teloméricas,
indicando que estes desempenham papel importante na organização funcional e estrutural.
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Caracterização molecular e análise filogenética dos vírus dengue circulantes na cidade de Boa Vista, Roraima , BrasilCordeiro, Joel da Silva 21 September 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-09-21 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Dengue virus (DENV) are the etiologic agent of the most important arbovirosis from Tropical and
Subtropical region. They are classified as flaviviruses following their genetic and antigenic
properties into four groups: DENV1, DENV2, DENV3 and DENV4. In the last decades, dengue
fever has increased its virulence and several factors had been associated to this increasing.
Secondary infection and viral factors are the main one implicated to increase of severe form of
dengue fever. In this study, were analysed 80 samples of serum from patients with suspect of
dengue infection from Boa Vista. We aim to identify the DENV serotypes and genotypes circulating
in this city. Eighty samples were inoculated in C6/36 cells. The RNAs were extracted and viral
identity was archieved using by Reverse Transcription – Polymerase Chain Reaction (RT-PCR)
method developed by Lanciotti et al. (1992). After viral type identification, cDNA was used to PCR
with specific primers to gene E. The sequencing was performed on MEGABACE1000 platform.
Maximum Likelihood dendrograms were constructed by PhyML 3.0. Branch confidences were
calculated using approximated Likelihood Ratio Test (aLRT). Thirty four samples were isolated and
identified: 23 DENV1 strains and 11 DENV2 strains, three of them were coinfection. After edition
of sequences, 15 fragments with 962nt large of DENV1 and three fragments with 825nt large of
DENV2 were used to analysis. DENV1 strains isolated in this study grouped with strains of
genotype V, together with strains from Venezuela and Brazil, previously described. DENV2 strains
were classified as american/asian genotype, together to Cuba and Taiwan strains. Data obtained
shown strong relantionship between Roraima strains and Venezuelan and Caribbean strains. The
results help future analysis about DENV evolution and gene flow in Brasil and its relationship with
DENV isolated in other regions of American Continent. / Vírus Dengue (DENV) são agentes etiológicos da mais importante arbovirose das regiões tropical e
subtropical do planeta. São flavivírus classificados, segundo suas propriedades genéticas e
antigênicas, em quatro tipos virais: DENV1, DENV2, DENV3 e DENV4. Nas últimas décadas, o
dengue tem aumentado sua virulência e muitos fatores têm sido associados a esse aumento.
Infecção secundária e fatores virais são os principais apontados para aumento da ocorrência das
formas graves do Dengue. Neste estudo foram analisadas 80 amostras de soros de pacientes com
suspeita de infecção pelos vírus dengue, provenientes da cidade de Boa Vista, com intuito de
identificar os sorotipos e genótipos circulantes. Oitenta amostras foram inoculadas em células
C6/36 de Aedes albopictus. O RNA foi extraído e a identificação do tipo viral foi realizada por
transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) desenvolvida por
Lanciotti et al. (1992). Após identificar o tipo viral, o cDNA viral foi submetido à PCR com
primers específicos para o gene E. O seqüenciamento das amostras foi realizado na plataforma
MEGABACE1000. A reconstrução filogenética foi realizada no programa PhyML 3.0 utilizando o
método de Máxima Verossimilhança. A confiabilidade dos ramos foi calculada pelo Teste de Razão
de Verossimilhança (aLRT).Do total, 34 amostras foram isoladas e identificadas. Foram 23 cepas de
DENV1 e 11 DENV2, sendo 03 casos de co-infecção. Após o seqüenciamento e edição das
seqüências, foram obtidos 15 fragmentos de 962nt para DENV1 e 03 fragmentos de 825nt para
DENV2. As cepas de DENV1 isoladas neste trabalho formaram clado com o genótipo V, junto com
cepas da Venezuela, Brasil, previamente descritas. As cepas de DENV2 foram classificadas como
genótipo “Americano/Asiático”, formando um clado com as cepas isoladas de Cuba e de Taiwan.
Os dados demonstram uma forte relação entre as cepas isoladas em Roraima e cepas isoladas no
Caribe e Venezuela. Os resultados obtidos abrem caminho para novas análises da evolução e fluxo
gênico do DENV no Brasil e suas relações com DENV isolados em outras regiões do Continente
Americano.
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Anotação do transcriptoma parcial de Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi Root, 1926Azevedo Junior, Gilson Martins de 17 May 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-05-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Disease-transmitting insects have been studied to characterize several
biological and evolutionary aspects. Whole Genome sequencing has been allowing
comparisons between the gene sequences of different species, providing molecular
data. The mosquitoes Anopheles gambiae (subfamily Anophelinae), the most
important vector of malaria in Africa, whose genome contains 278.253.050 base
pairs (bp), Aedes aegypti, transmitter of Dengue, with 1.310.090.344 bp and Culex
quinquefasciatus, vector of arbovirus, with 579.042.118 bp, both of (subfamily
Culicinae) are cited. In Brazil, the Anopheles darlingi (subfamily Anophelinae) is the
most important malaria vector, whose partial EST (Expressed Sequences Tags)
libraries of adults and larvae previously obtained were analyzed in this study. Genic
sequences of An. gambiae, Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus were analyzed for
the presence of orthologous genes, in these mosquitoes in comparison with An.
darling. An. darlingi’s ESTs (568 Unigenes) were virtually mapped in An. gambiae’s
chromosomes. After that, differential gene expressions were analyzed, which
allowed to statistically quantify the levels of differential expression of each gene, in
the transcriptome of An. darlingi. The An. darlingi sequences were mapped
according to onthologic terms of Gene Ontology (GO) and the sequences
differentially expressed, with good statistical value that indicates the orthology were
manually analyzed, according to the literature.The studies showed that 61% of An.
darlingi are orthologous in An. gambiae and the in silico chromosomal mapping
showed that the An. darling’s 568 Unigenes are represented in 793 chromosomal
regions of An. gambiae, corroborating with evolutionary studies that say that the two
species are evolutionarily close. An. darlingi sequences mapped in GO were
associated with 1249 ontholgy levels and sublevels that describe a gene according
to its function and cellular location. Differential expression analysis of some gene
products was found more intense in larvae than in An. darlingi adults. Phylogenetic
analysis of the An. darlingi glutathione-s-transferase (GST) gene was also done, an
insecticide resistance gene which is well conserved, evolutionarily speaking, in An.
gambiae, Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus. The Phylogenetic tree grouped An.
darlingi and An. gambiae as sister species, because they are more evolutionarily
related than Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus. In this analyses, the
Phlebotomus papatasi was used as an external group, as the root of the tree. The
manual annotation of An. darlingi ESTs sequences helped to understand the gene
expression and evolutionary aspects of this mosquito related with An. gambiae, Ae.
aegypti and Cx. quinquefasciatus, and also provided important data for further
studies about individual genes of this malaria-transmitting species in Brazil. / Insetos transmissores de doenças têm sido estudados para caracterização de
diversos aspectos biológicos e evolutivos. Sequenciamentos de genomas inteiros
têm permitido comparações entre sequências gênicas de espécies diferentes,
fornecendo dados moleculares. Citam-se os mosquitos Anopheles gambiae
(subfamília Anophelinae), principal vetor da malária na África, cujo genoma contém
278.253.050 pares de bases (pb), o Aedes aegypti, transmissor do Dengue, com
1.310.090.344 pb e Culex quinquefasciatus, vetor de arboviroses, com 579.042.118
pb, ambos da (subfamília Culicinae). No Brasil, o Anopheles darlingi (subfamília
Anophelinae) é o principal vetor da malária, cuja bibliotecas de ESTs (Expressed
SequenceTags) parcial de adultos e larvas previamente obtidas foram analisadas
no presente trabalho. Sequências gênicas de An. gambiae, Ae. aegypti e Cx.
quinquefasciatus foram analisadas quanto a presença de genes em comum e
genes ortólogos, nesses mosquitos em comparação com An. darlingi. ESTs (568
Unigenes) de An. darlingi foram mapeadas virtualmente em cromossômos de An.
gambiae. Em seguida, foram realizadas análises de expressão diferencial gênica, o
que permitiu quantificar estatisticamente os níveis de expressão de cada gene, no
transcriptoma de An. darlingi. As sequências de An. darlingi foram mapeadas nos
termos ontológicos do Gene Ontology (GO) e as sequências diferencialmente
expressas, com bons valores estatísticos que indicam ortologia, foram analisadas
manualmente, segundo a literatura. Os resultados mostraram que, 61% das
sequências de An. darlingi são ortólogas em An. gambiae e o mapeamento
cromossômico in silico mostrou que os 568 Unigenes de An. darlingi estão
representados em 793 regiões cromossômicas do An. gambiae, corroborando
estudos evolutivos de que as duas espécies são próximas evolutivamente. As
sequências de An. darlingi analisadas no programa GO foram associadas a 1.249
níveis e subníveis de ontologias que descrevem um gene de acordo com sua
função e localização celular. Análises de expressão diferencial de alguns produtos
gênicos mostraram-se mais intensas em larvas do que em adultos de An. darlingi.
Realizaram-se, ainda, a análise filogenética do gene da Glutationa-S-Transferase
(GST) de An. darlingi, um gene de resistência a inseticidas bem conservado em
termos evolutivos em An. gambiae, Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus. A árvore
filogenética agrupou o gene da GST de An. darlingi com An. gambiae como
espécies irmãs, estando estas proximamente relacionadas evolutivamente do que
em relação ao Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus. O Phlebotomus papatasi,
constou como grupo externo, para enraizamento dessa árvore. A anotação manual
de ESTs de An. darlingi auxiliou na compreensão da expressão gênica e aspectos
evolutivos desse mosquito em relação ao An. gambiae, Ae. aegypti e Cx.
quinquefasciatus, além de fornecer dados importantes para estudos posteriores
sobre funções gênicas individuais de An. darlingi transmissor da malária no Brasil.
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Citotaxonomia de arraias de água doce (Myliobatiformes, Potamotrygonidae) da bacia Amazônica centralValentim, Francisco Carlos de Souza 16 February 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / The family Potamotrygonidae in the order Myliobatiformes comprises all the
Neotropical freshwater ray species. The knowledge about this fish group is
limited, for example, the species number is uncertain, some species names
are questionable, there is no information about how their diversification in
freshwater happened, and there are no studies about their real marine sister
group. Cytogenetic studies in this family are incipients. With the objective of
widen the knowledge about this fish group, that arouses interests in aquarium,
and are indicated as an overfishing group, were analyzed, cytogenetically,
seven nominal species and two cytotypes: Plesiotrygon iwamae (2n=74,
FN=120), Potamotrygon sp. C (cururu) (2n=67♂/68♀, FN=104/106), with a
sex determination system XX/X0, Potamotrygon sp. C1 female (2n=68,
FN=108), Potamotrygon scobina (2n=66, FN=102), Potamotrygon cf. scobina
(2n=66, FN=101), both with a probable sex determination system XX/XY,
Potamotrygon constellata (2n=66, FN=110), Potamotrygon leopoldi (2n=64,
FN=102), Potamotrygon orbignyi (2n=66, FN=106), with a confirmed XX/XY
system and Potamotrygon motoro from
differents localities of the central
Amazon basin. Among the specimens of Potamotrygon sp. identified a distinct
female specimen, which showed the same diploid number (2n=68) of
Potamotrygon sp. C, but with different morphology and karyotype formula.
Therefore, it may represent another species to be recognized and described
this taxon, provisionally named Potamotrygon sp. C1. However, the
occurrence of the system XX/XO may for now be characterized only in
Potamotrygon sp. C. All the species presented multiple nucleolar organizer
regions (NORs), although those regions were not always active, and the silver
nitrate stains number ranged from four to eight, in most of the metaphases
they were localized in the terminal position of the long arms, except in one
pair in P. constellata that was localized in the short arm. The constitutive
heterochromatin is located, in the centromeric regions of all the complement
chromosomes, in all the species. Chromosomal rearrangements, specially
fusions or fissions, inversions and translocations, were indispensable
mechanisms of karyotype evolution in the freshwater stingrays, and may be
involved in the speciation processes of this group. / A família Potamotrygonidae, ordem Myliobatiformes abriga todas as
espécies de arraias de água doce neotropical. Pouco ainda se conhece a
respeito deste grupo de peixes, por exemplo, o número de espécies é incerto,
alguns nomes ainda são duvidosos, como ocorreu sua diversificação em
água doce, qual o grupo irmão marinho. Estudos citogenéticos são ainda
incipientes nesta família. Com o objetivo de ampliar o conhecimento neste
grupo de peixes, de grande interesse na aquariofília e com indicativos de
sobrepesca, foram analisadas, citogeneticamente, sete espécies nominais:
Plesiotrygon iwamae (2n=74, NF=120), Potamotrygon sp. C (cururu)
(2n=67♂/68♀, NF=104/106), com sistema de determinação do sexo XX/X0,
Potamotrygon scobina (2n=66, NF=102), Potamotrygon cf. scobina (2n=66,
NF=101), ambas com provável sistema de determinação de sexo XX/XY,
Potamotrygon constellata (2n=66, NF=110), Potamotrygon leopoldi (2n=64,
NF=102), Potamotrygon orbignyi (2n=66, NF=106), confirmando a presença
do sistema XX/XY e Potamotrygon motoro de diferentes localidades da bacia
amazônica central. Entre os espécimes de Potamotrygon sp. foi identificado
um exemplar fêmea distinto, que apresentou o mesmo número diploide
(2n=68) de Potamotrygon sp. C, mas com morfologia e fórmula cariotípica
diferenciadas podendo, portanto, representar mais uma espécie a ser
reconhecida
e
descrita
neste
táxon,
provisoriamente
denominada
Potamotrygon sp. C1. Entretanto, a ocorrência do sistema XX/XO pode, por
ora, ser caracterizado apenas em Potamotrygon sp. C. Todas as espécies
têm regiões organizadoras de nucléolo múltiplas, com número variando de 4
a 8, as quais porém, nem sempre estiveram todas ativas. Estas regiões
encontram-se preferencialmente localizadas na região terminal dos braços
longos dos cromossomos, exceto um par presente em P. constellata que se
localizou nos braços curtos. A heterocromatina constitutiva, encontra-se
localizada
na
complemento,
região
em
centromérica
todas
as
de
espécies.
todos
os
cromossomos
Rearranjos
do
cromossômicos,
principalmente os do tipo fusão e/ou fissão, inversões e translocações, foram
mecanismos determinantes da evolução cariotípica das arraias de água doce,
podendo estar implicados nos processos de especiação desse grupo.
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Evolução molecular adaptativa dos genes da família ldh em teleósteosCastro, Nayara Sousa 29 June 2015 (has links)
Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-01-06T19:14:56Z
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Previous issue date: 2015-06-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / The L-Lactate Dehydrogenase (LDH) is an enzyme key in the processes of anaerobic glycolytic metabolism and has three encoders genes in fish (LDH-A, LDH-B and LDH-C). The regulation of these genes is independent and has tissue specificity in vertebrates. They were originated by successive events of genome replication and its evolution showed be closely related to the development of adaptive thermal mechanisms and, also different physiological conditions as hypoxia. The main objectives of this study were understand the evolution of these genes in fish, basal group of the vertebrates, and identify specific replacements that may be considered adaptive to Amazon fish species and other parts of the world (temperate, subtropical and polar). Our results showed that the genes A and B originate from a genetic duplication event that occurred near the origin of vertebrates, and that in a second duplication event, the LDH-C gene was originated from the LDH-B. Thus, the LDH of the lamprey was identified as LDH-A, and from this gene had the differentiation in teleost. In addition, our study showed that LDH-A presents sites and lineages that have gone through or are still undergoing of the adaptive evolution (Amazonian and cold weather fish). In the same time their phylogeny combined with the time difference, pointed a later specialization of this gene as a result of the adaptation to the environment. The course of evolution for these genes appears to have resulted in the influence of natural selection with variants adapted to their environment and its functions. / A L-Lactato Desidrogenase (LDH) é uma enzima chave nos processos do metabolismo glicolítico anaeróbico e possui três genes codificadores em peixes (ldh-a, ldh-b e ldh-c). A regulação desses genes é independente, resultando em especificidade tecidual nos vertebrados. Esses genes foram originados por eventos sucessivos de duplicação do genoma e sua evolução mostra-se intimamente relacionada com o desenvolvimento de mecanismos adaptativos térmicos e de condições fisiológicas distintas, as quais compreendem a hipóxia. Entender a evolução desses genes em peixes, grupo base dos vertebrados, e identificar substituições pontuais que possam ser consideradas adaptativas para espécies de peixes da Amazônia e de outras regiões do planeta (Temperada, Polar e Subtropical) estão dentre os principais objetivos deste estudo. Nossos resultados mostraram que os genes A e B se originaram a partir de um evento de duplicação gênica próximo a origem dos vertebrados, e que, por um segundo evento de duplicação, o gene da LDH-C foi originado a partir da LDH-B. Assim, a LDH da lampreia foi identificada como uma LDH-A, a partir da qual o gene se diferenciou nos teleósteos. Além disso, nossos estudos mostram que a LDH-A apresenta sítios e linhagens que sofreram e estão sofrendo evolução adaptativa (peixes amazônicos e de clima frio) e sua filogenia, combinada com o tempo de divergência, apontou uma especialização mais recente desse gene como resultado da adaptação ao ambiente. O curso da evolução para esses genes parece ter resultado na vitória da seleção natural com variantes adaptadas ao seu meio ambiente e às suas funções.
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Análise da paternidade de Caiman crocodilus crocodilus (L.) da reseva de desenvolvimento sustentável Piagaçu-Purus, utilizando marcadores microssatélitesOliveira, Deyla Paula de 20 April 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-04-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Recently genetic studies have been utilized to study breeding systems of several
crocodilian, however, no paternity studies involved Caiman crocodilus crocodilus. To
investigate paternity, it is necessary to use highly polymorphic microsatellite loci that have
high probability of exclusion of paternity and differentiating individuals. For this purpose
12 dinucleotide microsatellite loci were isolated and characterized from a genomic library
enriched for the dinucleotide repetitions (CT) 8 and (GT) 8 . The 12 loci were characterized
in C. c. crocodilus from the Piagaçu-Purus Sustainable Development Reserve, Amazonas,
and their utility also tested in Caiman c. yacare from Cacéres, Mato Grosso. The results of
the characterization indicated that these loci are adequate for the study of the breeding
system and also for population studies with the Caiman crocodilus complex. Six loci with
highest polymorphism, high power of paternity exclusion and with high probability of
differentiating among individuals were used in a PCR multiplex system for breeding
system analysis of the C. c crocodilus from the Piagaçu-Purus Sustainable Development
Reserve. We genotyped 198 hatchlings from 13 nests (representing a sampling effort that
varied from 30% to 100% of the hatchlings per nest) sampled in the two reproductive
seasons (2007 and 2008), as well as 11 females that were beside their respective nests and
21 males, potential fathers. In 100% of the nests there was a contribution of two to four
fathers, all males contributed approximately equally per clutch, and none of the genotyped
males were the actual fathers of the hatchlings. No male mated with more than one female,
and no female showed across-year male fidelity. All females found in proximity of nests
were mothers of the hatchlings of those nests. Our study highlights that polyandry is
common in this species, that no single male reproductively dominates, and that females
mate with geographically distant males.
Our results have important implications for
conservation efforts and species management in the study area and beyond. / Nos últimos anos, estudos genéticos têm sido utilizados para investigar os sistemas de
acasalamento em crocodilianos, mas até a presente data nenhuma pesquisa tinha sido
realizada para investigar a paternidade de Caiman crocodilus crocodilus. Para investigar a
paternidade é necessária a utilização de locos microssatélites altamente polimórficos, que
apresentem uma alta probabilidade de exclusão de paternidade e permita diferenciar
indivíduos. Neste sentido, foram isolados e caracterizados 12 locos microssatélites
dinucleotídeos a partir de uma biblioteca genômica enriquecida com repetições de
dinucleotídeos (CT) e 8 (GT) 8. Os 12 locos foram caracterizados em C. c. crocodilus da
Reserva de Desenvolvimento Sustentável Piagaçu – Purus, Amazonas e também testado
em Caiman c. yacare de Cáceres, Mato Grosso. Os resultados da caracterização indicaram
que estes locos são adequados para o estudo do sistema de acasalamento e também para
estudos populacionais com o complexo C. crocodilus. Seis locos mais polimórficos com
alto poder de exclusão de paternidade e com alto poder de diferenciar indivíduos foram
usados em sistema do PCR multiplex para a análise do sistema de acasalamento da espécie
C. c. crocodilus da Reserva de Desenvolvimento Sustentável Piagaçu – Purus. Foram
genotipados 198 filhotes de 13 ninhos (representando um esforço de amostragem que
variaram de 30% a 100% de filhotes por ninho) de duas temporadas reprodutivas (2007 e
2008), além de 11 fêmeas que estavam ao lado dos respectivos ninhos e 21 machos,
potencias pais. Em 100% dos ninhos houve uma contribuição de 2-4 pais, sendo que todos
os machos contribuíram igualmente para a ninhada, e nenhum dos machos genotipados
foram os pais reais dos filhotes. Nenhum macho acasalou com mais de uma fêmea e as
fêmeas não mostraram fidelidade a um único macho. Todas as fêmeas encontradas nas
proximidades dos ninhos eram as mães dos filhotes dos ninhos. Nosso estudo destaca que a
poliandria é comum nesta espécie não há um único macho reprodutivo dominante e que as
fêmeas copularam com machos geograficamente distantes. Nossos resultados têm
implicações importantes para os esforços de conservação e manejo de espécies na área de
estudo e outras áreas do entorno.
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Citogenética clássica e molecular do boto-vermelho Inia geoffrensis (Blainville, 1817)Bonifácio, Heidi Luz 03 May 2011 (has links)
Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-12T14:13:05Z
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Previous issue date: 2011-05-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Amazon river dolphin or boto or (Iniidae, Inia geoffrensis) is a fluvial dolphin endemic to the
Amazon and Orinoco basins. In order to understand the genomic organization of this species
and to produce markers to investigate the evolutional relationship of this dolphin with others
cetaceans, classical and molecular cytogenetic (fluorescence in situ hybridization with probes
for 5S rDNA, 18S rDNA and telomeric sequence retrotransposon LINE-L1) studies were
carried out. Twenty four specimens were analyzed (11♀ e 13♂) which presented 2n=44
chromosomes (12m+14sm+6st+10t) e FN= 76. The nucleolar organizer region was situated at
single site on pair 21t. The heterochromatin was terminally distributed on metacentric,
submetacentric and subtelocentric pairs and on the pericentromeric region of telocentric.
Interstitial blocks were observed in some submetacentric pairs and subtelocentric as well,
with presence of polymorphism on pair 9sm. Chromosomal homeologies has been settled
throughout the G-band pattern between the boto and Atlantic bottlenose dolphin Tursiops
truncatus. Interstitial telomeric sequences were not observed. Location of retrotransposon L1
was not random on the boto karyotype. At the autosomes L1 had been preferably situated on
G-positive-band regions, and the largest accumulation of this sequence was on chromosome
X. The 5S rDNA and L1 are colocalized in the centromeric region of pair 5m. Beyond this, it
is possible that the L1 retrotransposon could be involved on band C polymorphism found in
four dolphins at Mamiraua Sustainable Development Reserve in Amazonas-Brazil. Although
karyotype structure is being considered as conserved in cetaceans, karyotype characteristics of
the boto indicate that variations may exist in relation to karyotype formula, heterochromatin
distribution and nucleolar organizer compared to other cetacean species. / O golfinho da Amazônia ou boto-vermelho (Iniidae, Inia geoffrensis) é um golfinho fluvial
endêmico das bacias Amazônica e do Orinoco. Para compreender a organização genômica
desta espécie e gerar marcadores para investigar as relações evolutivas deste golfinho em
relação a outros cetáceos, foram realizadas análises de citogenética clássica e molecular
(hibridização fluorescente in situ com sondas de DNAr 5S, DNAr 18S, sequência telomérica e
retrotransposon LINE-L1). Foram analisados 24 espécimes (11♀ e 13♂) que apresentaram
2n=44 cromossomos (12m+14sm+6st+10t+XX/XY) e NF= 72. A região organizadora do
nucléolo está localizada em único sítio, no par 21t. A heterocromatina distribuiu-se
terminalmente nos pares metacêntricos, submetacêntricos e subtelocêntricos e na região
pericentromérica dos telocêntricos. Blocos intersticiais foram observados em alguns pares
submetacêntricos e subtelocêntricos, com a presença de polimorfismo no par 9sm.
Homeologias cromossômicas foram estabelecidas através do padrão de banda G entre o boto-
vermelho e o golfinho-nariz-de-garrafa-comum Tursiops truncatus. Sequências teloméricas
intersticiais não foram observadas. Localização do retrotransposon L1 não foi aleatória no
cariótipo do boto-vermelho. Nos autossomos o L1 esteve preferencialmente localizado em
regiões de banda G positiva e o maior acúmulo desta sequência esteve no cromossomo X. O
DNAr 5S e L1 estão colocalizados na região centromérica do par 5m. Além disso, é possível
que o retrotransposon L1 esteja envolvido no polimorfismo de banda C encontrado para
quatro indivíduos da Reserva de Desenvolvimento Sustentável Mamirauá, Amazonas-Brasil.
Embora a estrutura cariotípica seja considerada conservada em cetáceos, características
cariotípicas do boto-vermelho mostram que variações existem em relação à fórmula
cariotípica, distribuição da heterocromatina e do organizador nucleolar comparativamente a
outras espécies de cetáceos.
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O efeito da hipóxia sobre o metabolismo e a expressão dos genes HIF-1α e VEGF do ciclídeo amazônico Astronotus ocellatus (Agassiz, 1831)Baptista, Ramon Barros 17 February 2011 (has links)
Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-12T14:20:39Z
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Previous issue date: 2011-02-17 / Amazonian fishes exhibit a variety of strategies related to oxygen uptake in response to
shortages of gas into water, related to their lifestyle and evolution. The Astronotus ocellatus
is a species of extreme tolerance to hypoxia and some of their physiological, biochemical
and molecular techniques could be evaluated in this study. Under conditions of severe
hypoxia (0.5 mgO2 / L) the hematological parameters are primary responses and were
adjusted to increase and make more efficient the carrying of oxygen to tissues, observed by
the increase of hematocrit, the number of circulating erythrocytes and hemoglobin
concentration. Furthermore, increased glucose demonstrated its importance in the supply of
carbohydrate metabolism, especially in anaerobic glycolysis, in times of shortage of oxygen.
Another strategy, and perhaps most important in increasing tolerance to hypoxia of the
species was widespread suppression of metabolism evidenced by the reduction in activity of
enzymes MDH and CS in tissues such as liver, heart and brain, as well as reducing glycolytic
enzyme LDH in the brain. Increased expression of HIF-1α and VEGF genes in conditions of
severe hypoxia revealed the importance of these, respectively, in the transcription of specific
target genes related to hypoxia and increased vascularity of tissues, facilitating the transport
of oxygen through the blood. As the oscar experiencing situations of daily fluctuation in
oxygen levels in their natural habitat, an important strategy in the face of these periodic
events is rapid and adequate recovery after hypoxic stress, observed in this work through the
reorganization of hematological parameters, the enzymatic machinery and transcription of
essential genes for the resumption of oxygen. / Os peixes amazônicos apresentam inúmeras estratégias ligadas à captação de oxigênio em
resposta aos períodos de escassez deste gás no meio aquático, as quais estão relacionadas
à sua evolução e estilo de vida. O Astronotus ocellatus é uma espécie de extrema tolerância
à hipóxia e algumas de suas respostas fisiológicas, bioquímicas e moleculares puderam ser
avaliadas neste trabalho. Em condições de hipóxia severa (0,5 mgO 2 /L) os parâmetros
hematológicos são respostas primárias que se ajustaram para aumentar e tornar mais
eficiente o carreamento de oxigênio aos tecidos, observado através do aumento do
hematócrito, do número de eritrócitos circulantes e da concentração de hemoglobina. Além
disso, o aumento da glicose demonstrou sua importância no abastecimento do metabolismo
de carboidratos, principalmente da glicólise anaeróbica, em períodos de escassez de
oxigênio. Outra estratégia, e talvez a mais importante no aumento da tolerância desta
espécie à hipóxia, é a supressão generalizada do metabolismo, evidenciada por meio da
redução na atividade das enzimas MDH e CS em tecidos como fígado, coração e cérebro,
além da redução da enzima glicolítica LDH no cérebro. O aumento da expressão dos genes
HIF-1α e VEGF em condições de hipóxia severa revelou a importância destes genes,
respectivamente, na transcrição de genes alvo específicos relacionados à hipóxia e no
aumento da vascularização dos tecidos, facilitando o transporte de oxigênio através do
sangue. Como o acará-açu vivencia situações de flutuação diária nos níveis de oxigênio em
seu habitat natural, uma importante estratégia diante destes eventos periódicos é sua
recuperação rápida e adequada após o estresse hipóxico, observada neste trabalho através
da reorganização dos parâmetros hematológicos, da maquinaria enzimática e da transcrição
de genes essenciais durante a retomada de oxigênio.
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Citogenômica comparativa de três espécies de Potamorhina (Ostariophysi, Curimatidae) do entorno de Manaus: uma abordagem evolutivaPinheiro, Vanessa Susan da Silva 17 June 2015 (has links)
Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-12T15:09:48Z
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Previous issue date: 2015-06-17 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Curimatidae family, order Characiformes, have a wide geographic distribution in Central
and South America, being found in greater abundance in the Amazon River basin. Classical
cytogenetic approaches to elucidate evolutionary aspects have been taken to the genus
Potamorhina that occur in the Amazon region (Potamorhina latior, P. altamazonica and P.
pristigaster) and have shown large interspecific variation with respect to the diploid number,
bucking the trend of chromosomal stability in the macrostructure of Curimatidae species (2n
= 54 chromosomes) family. Furthermore, the distribution of heterochromatin also appears to
be involved in the process of diversification in the genre. However, chromosomal physical
mapping and comparative analysis of repetitive DNA sequences are essential for
understanding the genomic organization of the group. Thus, this study aimed to characterize
through cytogenetics technics the three species of the genus Potamorhina found near Manaus,
and understand the evolutionary mechanisms involved in the karyotype differentiation of
these species. For this we sampled 19 P. latior, 17 P. altamazonica and 12 P. pristigaster
from Iranduba and Manacapuru, in the Amazonas state of Brazil. The technics applied in
theses samples were the conventional Giemsa staining, C-banding, silver nitrate impregnation
and fluorescent in situ hybridization with DNA probes (5S rDNA, 18S rDNA, Rex 1,Rex 3,
tropomyosin 1 and telomeric sequences). Analysis showed variations for both classical
cytogenetic markers as for molecular markers. Diploid number of 54, 56 and 102
chromosomes were shown for P. pristigaster, P. latior and P. altamazonica, respectively.
Heterochromatic regions were present in the centromeric regions of chromosomes and also in
the terminal regions. However P. latior provided further interstitial markings. The 5S rDNA
and 18S were the simple type, not syntenic in Amazonian species of Potamorhina.
retroelement Rex 1 and 3 were present in the centromeric region of all chromosomes for the
three species as well as tropomyosin 1, except for some chromosomes in P. altamazonica.
Given this, comparing the information obtained herein to previously proposed phylogenetic
data, that the terminals and centromeric regions rich in heterochromatin seem to be the most
dynamic regions in the genome and involved in the evolution process of the genus
Potamorhina. / Os peixes da família Curimatidae, ordem Characiformes, possuem uma ampla distribuição
geográfica na América Central e na América do Sul, sendo encontrados em maior abundância
na bacia do rio Amazonas. Abordagens de citogenética clássica têm sido realizadas para as
espécies do gênero Potamorhina que ocorrem na região amazônica (Potamorhina latior, P.
altamazonica e P. pristigaster) e têm demonstrado grandes variações interespecíficas com
relação ao número diploide, contrariando a tendência da estabilidade na macroestrutura
cromossômica das espécies da família Curimatidae (2n = 54 cromossomos). Além disso, a
distribuição da heterocromatina também parece estar envolvida no processo de diversificação
no gênero. Entretanto, mapeamentos físicos cromossômicos e análises comparativas de
sequências de DNA repetitivo são imprescindíveis para o entendimento da organização
genômica do grupo. Diante disso, este estudo buscou caracterizar citogenomicamente as três
espécies do gênero Potamorhina encontradas nas proximidades de Manaus - AM e
compreender os mecanismos evolutivos envolvidos na diferenciação cariotípica das mesmas.
Para isso foram amostradas 19 Potamorhina latior, 17 P. altamazonica e 12 P. pristigaster
nos municípios de Iranduba - AM e Manacapuru - AM, as quais foram submetidas à
coloração convencional com Giemsa, bandeamento C, impregnação com nitrato de prata e
hibridização fluorescente in situ com sondas de DNAr 5S e 18S, Rex 1 e 3, tropomiosina 1 e
sequências teloméricas. As análises demonstraram variações tanto para marcadores da
citogenética clássica quanto para os marcadores moleculares. Número diploide igual a 54, 56
e 102 cromossomos foram evidenciados para P. pristigaster, P. latior e P. altamazonica,
respectivamente. Blocos heterocromáticos estiveram presentes nas regiões centromérica e
terminal dos cromossomos das três espécies, contudo P. latior apresentou marcações
intersticiais adicionais. As marcações de DNAr 5S e 18S foram do tipo simples, não sintênico
nas espécies amazônicas de Potamorhina. Os retroelementos Rex 1 e 3 estiveram presentes na
região centromérica de todos os cromossomos para as três espécies, bem como o gene
tropomiosina 1, com exceção de alguns pares cromossômicos em P. altamazonica. Diante
disso, ao relacionar os dados aqui obtidos aos dados filogenéticos anteriormente propostos
infere-se que as regiões terminais e, principalmente, centroméricas ricas em heterocromatina,
parecem ser as mais dinâmicas do genoma e envolvidas na carioevolução de Potamorhina.
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