Diss. (sammanfattning) Linköping : Univ., 2001. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2004. / Härtill 4 uppsatser.

O desmame precoce (DP) causa mudanças na mucosa gástrica, como o aumento da proliferação celular e da expressão do Fator de Crescimento Transformante (TGFa). Neste trabalho, avaliamos o papel desse peptídeo e seu receptor EGFR no controle do crescimento gástrico. Ratos com 15 dias de vida foram divididos em: amamentados (controle) e DP, no qual os filhotes foram separados da mãe e alimentados com pasta de ração. O DP aumentou o número de células marcadas para EGFR, acelerou a diferenciação de células mucosas do colo e elevou a expressão de mucina 6. A inibição do EGFR com AG1478 diminuiu a proliferação celular e o número de células mucosas do colo. Entre as proteínas envolvidas na sinalização de EGFR e ciclo celular, detectamos que o DP elevou os níveis de p-ERK1/2 e p-Src e não alterou p-Akt, p21 e p27. Nós sugerimos que o padrão alimentar influencia a proliferação e diferenciação no epitélio gástrico, e que TGFa/EGFR podem regular esses processos durante o desenvolvimento pós-natal, provavelmente por ativação das vias de sinalização de MAPK e Src. / Early weaning (EW) causes changes in the gastric mucosa, including the increase in cell proliferation and Transforming Growth Factor (TGFa). In the present study, we evaluated the role of this peptide and its receptor EGFR in the control of the gastric growth. 15-d-old rats were divided into two groups: suckling (control) and EW, in which the pups were separated from the dam and fed with powdered chow. EW increased the number of EGFR-positive cells, accelerated the differentiation of mucous neck cells and augmented the expression of mucin 6. EGFR inhibition with AG1478 decreased cell proliferation and the number of mucous neck cells. Among the proteins involved on EGFR signaling pathways and cell cycle, we found that EW increased the levels of p-ERK1/2 and p-Src, but did not change p-Akt, p21 and p27. We suggest that the diet pattern influences proliferation and differentiation in the gastric epithelium, and the TGFa/EGFR can regulate these processes throughout the postnatal development, probably by activating MAPK and Src signaling pathways.

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / FGF23 is the central regulator for phosphate homeostasis. Both FGF23 and phosphate dysregulation are highly related with the progression of chronic kidney disease (CKD), which is a global health problem. In previous studies, FGF23 was found to be produced in bone and targeting the kidneys to regulate phosphate reabsorption and excretion. In the FGF23 signaling axis, it binds a receptor complex (αKlotho and FGFRs) in the distal convoluted tubules (DCT) and causes its biological effects in the proximal tubules (PT). The mechanism of how the signals passing on from DCT to PT is not clear. In my research, experiments were focused on the FGF23 signaling pathway within the kidney to study the communication steps between tubular cells. HBEGF treatment was given to FGF23 signaling impaired mouse models resulting in significant change of genes regulated by FGF23, indicating that HBEGF was important in the FGF23 signaling axis. Then high quality rabbit anti-mouse HBEGF antibodies were made to better study HBEGF activity in vivo and in vitro. A new cell model was characterized to test FGF23 effects on HBEGF signaling using Western blots and immunofluorescence. Lastly, the location of HBEGF activity was examined in the kidney in vivo. Immunostaining suggested that HBEGF activated the mitogen activated protein kinase (MAPK) pathway. This mapping may provide important information for the molecular relationships between FGF23 and HBEGF.

O Plasma Rico em Plaquetas (PRP) é um produto derivado de células sanguíneas obtido por centrifugação, o qual contém uma alta concentração de fatores de crescimento em um pequeno volume de plasma. Este procedimento é utilizado desde a década de 1950 e vem crescendo amplamente para aplicação em diversas áreas como na Ortopedia, Odontologia, Cardiologia, Oftalmologia, Dermatologia, e para uso no reparo de feridas crônicas, especialmente em pacientes diabéticos ou com complicações venosas, feridas em mucosas, tecidos conjuntivos, patologias do sistema músculo-esquelético, superfície de fratura, enxerto ósseo entre outros. Nessas situações, observa-se um comprometimento dos níveis ideais de fatores de crescimento nas fases de cicatrização, por esse motivo vê-se a importância de manter os níveis adequados dos fatores de crescimento nas diferentes fases do reparo tecidual. O preparo de PRP por não ser padronizado pode comprometer a eficácia do tratamento, pois o número de células pode variar em cada paciente e a cada isolamento, e por consequência, a quantidade dos fatores de crescimento podem ser variáveis. As coletas de sangue são invasivas para o paciente, sendo dispendiosas em tempo e mão-de-obra ao procedimento operacional, implicando no aumento do custo. O preparo antecipado do PRP com possibilidade de armazenamento para o uso nas aplicações durante o tratamento pode ser uma solução importante para acelerar a regeneração tecidual e evitar o desconforto do paciente, que muitas vezes já não tem uma boa qualidade de vida. Portanto, o presente estudo visou comparar a diferença no processo de cicatrização durante sete dias em um modelo de lesão no dorso de rato nude com a aplicação de PRP humano obtido a fresco e PRP armazenado por liofilização e estocado a temperatura ambiente durante 18 dias, preparados a partir de dois diferentes doadores, comparados à aplicação do fator de crescimento derivado de plaquetas BB humano recombinante (rhPDGF-BB), um dos fatores de crescimento mais abundante no PRP. Os resultados mostraram eficácias comparadas nos tratamentos das feridas com rhPDGF-BB (controle 11 positivo) e com os PRPs fresco ou aramazenado a temperatura ambiente, de ambos os doadores, indicando a possibilidade de coleta de sangue do paciente apenas uma única vez e estocagem do mesmo até a reconstituição do produto no dia da aplicação, possibilitando o oferecimento de um tratamento de maior qualidade e menor invasividade ao paciente. Não houve diferença estatística significativa nos tratamentos das feridas com os PRPs fresco ou armazenado obtidos dos dois doadores, indicando que os valores de plaquetas dos doadores (189.000 e 216.000/mm3) foram adequados para o processo de regeneração tecidual. Este trabalho mostra a possibilidade do estoque do PRP, preparado a partir do sangue do paciente, em diversas alíquotas liofilizadas e estéreis a temperatura ambiente, o que poderá facilitar a aplicação do produto, possibilitando seu uso até mesmo em domicílio, e, consequentemente, uma melhora na qualidade de vida deste paciente. Também aponta para um protocolo de preparo rápido e efetivo para pacientes com até 189.000 plaquetas/ mm3, com atividade biológica testada in vivo, visando a preparação de PRP. / Platelet Rich Plasma (PRP) is a blood cell derived product obtained by centrifugation, which contains a high concentration of growth factors in a small volume of plasma. This procedure has been used since the 1950s and has been widely used in various areas such as Orthopedics, Dentistry, Cardiology, Ophthalmology, Dermatology for use in chronic wound repair, especially in diabetic patients or patients with venous complications, mucosal wounds, connective tissues, pathologies of the musculoskeletal system, fracture surface, bone graft, among others. In scarring and deficient tissues, there is an impairment of the ideal levels of growth factors in the wound healing phases. Therefore, it is important to maintain adequate levels of growth factors in all the different stages of tissue repair. The preparation of PRP is a non-standard procedure, with variable results being observed in the literature, being able to be involved with the amount of growth factors and methods of preparation. Usually, more than one PRP application is required involving a new blood collection for each application in order to accelerate tissue regeneration. The blood collections are invasive for the patient, being expensive in time and labor in the operational procedure, implying in the increase of the cost. The early preparation of PRP with possibility of storage for use in future applications during treatment could be an important solution to avoid the discomfort of patients, who often no longer have a good quality of life. Therefore, the present study aimed to compare the difference in the healing process for seven days in a nude rat dorsal lesion model, treated with human fresh PRP or stored PRP (prepared by lyophilization and stored at room temperature for 15 days, from two different donors, and compared to the application of recombinant human BB platelet-derived growth factor (rhPDGF-BB), one of the most abundant growth factors in PRP. The results showed comparative efficacies in the treatments of wounds with rhPDGF-BB (positive control) and with fresh PRPs or room temperature stored PRP of both donors, indicating the possibility of collecting blood from the patient only once and storing the same until the reconstitution of the product on the day of application, allowing the offer of a 13 treatment of higher quality and less invasiveness to the patient. There was no statistically significant difference in wound treatments with fresh or stored PRPs obtained from the two donors, indicating that donor platelet values (189,000 and 216,000/mm3) were adequate for the tissue regeneration process. This work shows the possibility of PRP stock, prepared from the patient\'s blood, in several sterile freeze-dried aliquots at room temperature, which may facilitate the application of the product, allowing its use even at home, and, consequently, an improvement in the quality of life of this patient. It also points to a fast and effective preparation protocol for patients with up to 189,000 platelets/mm3, with biological activity tested in vivo, aiming at the preparation of PRP.

Apesar da ampla aplicação clínica de plasma rico em plaquetas (PRP), a sua eficácia no reparo de defeitos ósseos e na osseointegração de implantes metálicos continua sendo questionada. Em vista disso, objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de um coquetel contendo os principais fatores de crescimento (GFs) e proteínas de PRP no desenvolvimento do fenótipo osteogênico in vitro sobre titânio (Ti). O coquetel referido continha PDGF-BB, TGF-β1, TGF- β2, albumina, fibronectina e trombospondina. Células da linhagem osteoblástica foram obtidas por digestão enzimática de osso alveolar humano e cultivadas sob condições osteogênicas convencionais até a subconfluência, sendo, em seguida, subcultivadas sobre superfície de Ti. As subculturas foram expostas durante os 7 primeiros dias a meio osteogênico, suplementado com GFs e proteínas, e apenas ao meio osteogênico nos 7 dias subseqüentes. Os grupos controles foram expostos apenas ao meio osteogênico. Nos experimentos dose-resposta foram utilizadas culturas primárias de calvária de ratos, as quais foram expostas ao coquetel de GFs e proteínas e às suas diluições de 1:10 e 1:100. Culturas derivadas de osso alveolar humano expostas ao coquetel de GFs e proteínas apresentaram: aumento significativo do número de células a partir do dia 4 e da proliferação celular em 1 e 4 dias; redução significativa nos níveis de atividade de fosfatase alcalina (ALP) em 4, 7 e 10 dias e ausência de marcação com vermelho de Alizarina em 14 dias. Apesar de as diluições 1:10 e 1:100 restaurarem a atividade proliferativa das culturas aos níveis controles, formações de matriz calcificada foram observadas apenas na diluição 1:100. Os resultados do presente trabalho mostram que o coquetel de GFs e proteínas inibe o desenvolvimento do fenótipo osteogênico de culturas de células osteoblásticas humanas e de ratos crescidas sobre Ti. / Background: Despite wide clinical application, the efficacy of platelet-rich plasma (PRP) for repairing bone defects and enhancing osseointegration of metal implants is still subject of debate. The objective of the present study was to evaluate the effects of a well-defined mixture of growth factors (GFs) and proteins (GFs+proteins) on the development of the osteogenic phenotype on titanium (Ti) in vitro. The composition of the mixture was based on the major components found in PRP preparations. Methods: The PRP-like mixture contained PDGF-BB, TGF-β1, TGF-β2, albumin, fibronectin, and thrombospondin. Osteoblastic cells were obtained by enzymatic digestion of human alveolar bone and cultured under standard osteogenic condition until subconfluence. They were then subcultured on Ti discs up to 14 days. Treated cultures were exposed during the first 7 days to osteogenic medium supplemented with GFs+proteins and to osteogenic medium alone thereafter. Control cultures were exposed to only osteogenic medium throughout the culture interval. Dose-response experiments were carried out using rat primary calvarial cells exposed to GFs+proteins and 1:10 or 1:100 dilutions of the mixture. Results: Treated human-derived cell cultures exhibited a significantly higher number of cells from day 4 on and of cycling cells at days 1 and 4, significantly reduced levels for alkaline phosphatase (ALP) activity, and no Alizarin red stained areas at day 14. Although the 1:10 and 1:100 dilutions restored the proliferative activity of rat calvaria-derived osteogenic cells to control levels, mineralized bone-like nodule formation was only observed with the 1:100 dilution. Conclusions: The present results demonstrated that a PRP-like protein mixture inhibits development of the osteogenic phenotype in both human and rat osteoblastic cell cultures grown on Ti.

Células Y-1 apresentam o gene K-ras amplificado, o que resulta em altos níveis de expressão da proteína codificada por este gene. Este fato faz com que células Y-1 apresentem níveis cronicamente altos de K-Ras-GTP. Além disso, estas células apresentam uma relativa desregulação da transição G0→Gl→S, a qual é caracterizada por uma porcentagem de células entrando na fase S do ciclo celular na condição carenciada; e também, por um afrouxamento na regulação de Myc, o qual apresenta níveis basais significantes de mRNA e proteína. Para verificar se existe uma relação entre K-Ras-GTP elevado e os níveis basais de Myc e a desregulação na transição G0→Gl→S, células Y-1 foram transfectadas com uma forma dominante negativa de H-ras, H-ras Asn-17 (RasN 17). Os transfectantes resultantes também foram utilizados para verificar o papel de Ras na transdução do sinal iniciado por FGF-2 e ACTH. Com estes clones foi possível verificar uma redução nos níveis de ativação de K-Ras na condição carenciada, e com isso ficou claro que FGF-2 e ACTH são capazes de induzir a ativação de K-Ras, porém com cinética diferentes: uma ativação tardia e lenta para FGF-2, e rápida e transiente para ACTH. Com a redução nos níveis de Ras-GTP, verificamos uma concomitante redução no basal da proteína c-Myc e também no basal de entrada em S, indicando que existe uma correlação entre estes fatores. Além disso, os clones Yl-RasN17 foram determinantes para mostrar que em células Y-1 a presença de Akt/PKB constitutivamente ativada é conseqüência dos níveis cronicamente elevados de K-Ras-GTP (Forti et al, 2002). / Abstract not available.

O leite é essencial para o desenvolvimento pós-natal da mucosa gástrica e durante o período de aleitamento, o jejum estimula a proliferação celular. Mostramos que o TGF<font face=\"Symbol\">b, reverte este efeito e p27 está envolvida neste mecanismo. Os níveis de p27 oscilam durante o ciclo celular, devido à sua fosforilação na Thr187, que leva à degradação pelo sistema UPS. Diferentes estudos relatam que TGF<font face=\"Symbol\">b pode aumentar p27, através do controle de sua degradação. Este estudo visa analisar o efeito do jejum e TGF<font face=\"Symbol\">b1, na regulação de p27 no epitélio gástrico de ratos lactentes. Para tanto, filhotes de 14 dias foram submetidos a jejum durante 90 min e receberam uma dose única de TGF<font face=\"Symbol\">b ou PBS, por gavagem. As amostras foram coletadas após 2 e 14 horas de tratamento. Analisamos a concentração proteica de p27, fosfo-p27, Skp2 e Cdh1. Observamos que durante o jejum houve a diminuição de p27 e Cdh1, paralelamente ao aumento de fosfo-p27 e Skp2. Enquanto que o tratamento com TGF<font face=\"Symbol\">b1, reverteu os efeitos do jejum em 2h e 14h em todas as proteínas analisadas. Além disso, o jejum aumentou a ubiquitinação e degradação de p27 e o tratamento com TGF<font face=\"Symbol\">b1 reverte esses efeitos. Desta forma, o TGF<font face=\"Symbol\">b1 do leite materno estabiliza os níveis de p27 e assim, influenciar a progressão do ciclo celular no epitélio gástrico. / Milk is essential for postnatal development of the gastric mucosa and during the suckling period fasting stimulates cell proliferation. We have shown that TGF<font face=\"Symbol\">b reverses this effect and p27 is involved in this mechanism. The levels of p27 oscillate during the cell cycle due to its phosphorylation at Thr187, which leads to its degradation by the UPS. Different studies reported that TGF<font face=\"Symbol\">b can increase p27, by controlling its degradation. This study aims to analyze the effect of fasting and TGF<font face=\"Symbol\">b1 in regulating p27 in lactating rats gastric epithelium. For such, the 14 days rats were fasted for 90 min and received a single dose of TGF<font face=\"Symbol\">b or PBS by gavage. Samples were collected after 2 and 14 hours of treatment. We analyzed the p27 protein concentration, phospho-p27, Skp2 and Cdh1. We found that during fasting, p27 and Cdh1 a decreased, at the same time to the increment of phospho-p27 and Skp2. The treatment with TGF<font face=\"Symbol\">b1, reversed the effects of fasting on 2h and 14h in all proteins analyzed. Moreover, the fasting increased the ubiquitination and the degradation of p27, while TGF<font face=\"Symbol\">b1 treatment reversed these effects. Thus the milk born TGF<font face=\"Symbol\">b1 can stabilize p27 levels and thus influences cell cycle progression in lactent rat gastric epithelium.

Pancitopenia é uma manifestação frequente na leishmaniose visceral (LV) cuja patogenia não é esclarecida. Neste estudo, a patogenia foi analisada em cão e camundongo com LV. Cães com LV, naturalmente infectados, sem coinfecção com erliquiose, foram classificados de acordo com as alterações hematimétricas em: pancitopenia, bicitopenia, citopenia e sem alterações hematológicas. O mielograma revelou um aumento na proporção mielóide:eritróide nos cães infectados em relação ao grupo controle. Havia mudanças no padrão morfológico e quantitativo nas células sanguíneas, particularmente na série eritróide em cães pancitopênicos. Na contagem diferencial, notou-se a diminuição da porcentagem de linfócitos, plasmócitos e monócitos que tinham correlação com a gravidade das alterações hematológicas. No exame histopatológico da medula óssea, observaram-se aumento na celularidade, hiperplasia megacariocítica, proliferação macrofágica e degeneração e/ou necrose. No estudo de fatores de crescimento e citocinas, o aumento da expressão de IFN-?, GM-CSF, IL-7 e TNF-? parece assumir um papel importante nos cães bicitopênicos, e IL-3 nos cães com citopenia. A expressão de IGF-I, em contraste, estava diminuída significantemente em cães pancitopênicos em relação aos demais grupos. Os dados sugerem, portanto, a ocorrência de uma dishematopoiese com a diminuição da expressão de IGF-I na doença severa. Em camundongos C57BL/6 infectados por via intravenosa com L. (L.) donovani, as alterações hematológicas foram analisadas com 28 dias pós-infecção quando vimos o desenvolvimento de um quadro pancitopênico. O mielograma revelou displasia celular, aumento na proporção mielóide:eritróide e do índice de maturação mielóide, bem como, uma hipoplasia eritróide. Além disso, observamos um aumento significante na porcentagem de linfócitos e macrófagos nos animais infectados. No exame histopatológico havia um aumento significante da celularidade com infiltrado e/ou proliferação de células mononucleares similares a macrófagos. Na caracterização dessas células por microscopia confocal, estas expressavam F4/80, um marcador típico de macrófagos residentes e/ou estromais. Por citometria de fluxo, constatamos um aumento significante na porcentagem de células F4/80+ em proliferação. Além disso, utilizamos outros marcadores expressos em macrófagos como CD169 e CD11b, e vimos que a população F4/80+CD169+CD11b+ estava diminuída nos camundongos infectados. Com base nesses dados, consideramos o camundongo C57BL/6 infectado por L. (L.) donovani um bom modelo para o estudo da dishematopoiese na LV e que os macrófagos estromais devam ter um papel importante, o que merece estudos futuros mais aprofundados. / Pancytopenia is a common manifestation in visceral leishmaniasis (VL) that may contribute to lethality. We assessed the factors involved in the pathogenesis of pancytopenia in canine and murine VL. We selected dogs with VL but without erlichiosis that were classified according to hematological alterations in: pancytopenia, bicytopenia, cytopenia and dogs infected without hematological changes. The myelogram revealed an increase in the myeloid:erythroid cell ratio in infected dogs compared with healthy dogs and changes in the morphological and quantitative patterns in hematopoietic cells, particularly in erythroid series of the pancytopenic dogs. In differential cell count, decrease in the percentage of lymphocytes, plasma cells and monocytes correlated with the severity of hematological changes. In the histopathological examination of the bone marrow, the main alterations were the increase in cellularity, megakaryocytic hyperplasia, macrophage proliferation and degeneration and/or necrosis. Addressing the growth factors and cytokines, increased expression of IFN-?, GM-CSF, IL-7 and TNF-? seemingly plays an important role in bicytopenic dogs, and the expression fo IL-3 in dogs with cytopenia. In contrast, pancytopenic dogs had a significant decrease in the IGF-I expression compared with other groups. The data suggest a dyshematopoiesis with participation of IGF-I in severe stage of disease. In L. (L.) donovani-intravenously infected C57BL / 6 mice hematological changes were evaluated at 28 days post-infection when pancytopenia was established. The bone marrow examination showed cellular morphological changes, an increase in myeloid:erythroid ratio and myeloid maturation index, and erythroid hypoplasia. Moreover, we observed a significant increase in the percentage of lymphocytes and macrophages in infected animals. In histopathological examination, we observed a significant increase in the cellularity accompanied by infiltration and/or proliferation of mononuclear cells resembling macrophages. We characterized these cells as F4/80+ cells by confocal microscopy, a typical marker of residents and/or stromal macrophages. Using flow cytometry, we found a significant increase in the percentage of F4/80 in proliferation. In addition, we used other macrophage markers such as CD169 and CD11b, when a reduction in F4/80+CD169+CD11b+ population was shown in infected mice. Based on these data, we may consider L. (L.) donovani-infected C57BL/6 mouse a good model for the study of dyshematopoiesis in VL and that stromal macrophage may have important role in the in the hematopoiesis that deserve further studies .

O fator de crescimento transformante beta tipo 1, TGF-&#946;1, é uma proteína extracelular homodimérica secretada por vários tipos celulares, que pode ter ação parácrina ou endócrina. Essa proteína está envolvida em processos celulares de diferenciação, proliferação, mobilidade e formação de matriz extracelular. Além disso, é parte importante dos processos de regeneração tecidual, atuando, de maneira decisiva, no reparo, atraindo macrófagos e fibroblastos para o local da injúria e estimulando a angiogênese. Assim, considerando o papel desse peptídeo no processo regenerativo, o uso de TGF-&#946;1 como proteína terapêutica na área de Bioengenharia Tecidual é bastante promissor. Apesar disso, a venda dessa proteína, para fins terapêuticos, é inexistente no mercado e a proteína recombinante vendida, que só pode ser utilizada em pesquisas científicas, não é produzida nacionalmente e chega a custar R$200.000,00/mg. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho é desenvolver uma metodologia de produção do fator recombinante TGF-&#946;1 em células de ovário de hamster chinês (CHO), visando à obtenção de níveis altos de rendimento, e, futuramente, a transferência da tecnologia de produção para a iniciativa privada, tornando possível seu uso na Medicina Regenerativa, sozinho ou em combinação com outros fatores de crescimento. O cDNA de TGF-&#946;1 foi amplificado a partir de um banco de cDNA humano e clonado no vetor proprietário pNU1 de expressão de mamífero. A construção pNU1/TGF-&#946;1 foi utilizada para transfectar estavelmente células CHO DG44 e uma estratégia de co-amplificação foi utilizada para selecionar células transfectantes com maior número de cópias da sequência correspondente a TGF-&#946;1. Estas culturas foram submetidas ao processo de amplificação gênica com concentrações crescentes de metotrexato. Ensaios de Western Blot e ELISA foram realizados utilizando-se o meio condicionado pelas populações selecionadas e por clones superprodutores. Entre os 41clones obtidos, cinco apresentaram maiores níveis de produção de TGF-&#946;1, entre 1.000 e 2.000 ng/mL. Estes clones foram selecionados para a realização de testes de atividade in vitro utilizando-se células A549, que permitem avaliar a transição epitélio-mesênquima. Um ensaio de cicatrização de feridas em peles do dorso de camundongos foi padronizado e utilizado para avaliar a atividade in vivo do clone que apresentou melhor resultado in vitro. A proteína TGF-&#946;1 foi parcialmente purificada por HPLC em uma coluna de afinidade. Portanto, a proteína TGF-&#946;1 humana recombinante foi produzida, apresentando atividade biológica in vitro e in vivo, sendo capaz de reparar eficientemente feridas cutâneas. Essa iniciativa pode oferecer aos pacientes uma alternativa para o tratamento de lesões teciduais, acelerando a cicatrização de feridas e o reparo de tecidos. / The transforming growth factor beta 1, TGF-&#946;1, is a homodimeric extracellular protein secreted by several cell types, which may have paracrine or endocrine action. This protein is involved in cellular processes of differentiation, proliferation, mobility and formation of extracellular matrix. In addition, it is an important part of the tissue regeneration processes, acting decisively on repair, attracting macrophages and fibroblasts to the site of injury and stimulating angiogenesis. Therefore, considering the role of this peptide in the regenerative process and the use of TGF-&#946;1 as a therapeutic protein in the field of Tissue Bioengineering is very promising. Despite this, the sale of this protein for therapeutic purposes is nonexistent in the market and the recombinant protein available in the market, which can only be used in scientific research, is not produced nationally and the costs are in the order of R$ 200,000.00/mg. In this context, the objective of the present work is to develop a methodology for the production of the TGF-&#946;1 recombinant factor in Chinese hamster ovary (CHO) cells, aiming at obtaining high yields, and, in the future, transfering the production technology to the private initiative, allowing its use in Regenerative Medicine, alone or in combination with other growth factors. The TGF-&#946;1 cDNA was amplified from a human cDNA library and cloned into the proprietary pNU1 mammalian expression vector. The pNU1/TGF-&#946;1 construct was used to stably transfect CHO DG44 cells, and a co-amplification strategy was used to select transfectant cells with the largest number of gene copies. These cultures were subjected to the process of gene amplification with methotrexate. Western Blot and ELISA were used to assay the conditioned medium obtained from the selected cell populations and from overproducing cell clones. Among the 41 clones obtained, five presented higher levels of TGF-&#946;1 production, between 1,000 and 2,000 ng/mL. These clones were selected for in vitro activity testing using A549 cells to evaluate the epithelial-mesenchymal transition. Awound healing assay on mouse dorsal skin was standardized and used to evaluate the in vivo activity of the cell clone which displayed the highest result in vitro. The TGF-&#946;1 protein was partially purified by HPLC on an affinity column. Therefore, the recombinant human TGF-&#946;1 protein was produced and shown to display biological activity both in vitro and in vivo, being able to eficiently repair cutaneous wounds. This initiative may provide patients with an alternative treatment for tissue damage, accelerating wound healing and tissue repair.