Foi desenvolvido um experimento, numa criação comercial localizada na região subtropical do Estado do Paraná, para identificar os efeitos que influenciam a taxa de prenhez de 117 vacas de corte Nelore x Hereford, com idades entre 2 e 20 anos e com diferentes frações gênicas de Nelore (25,0%; 37,5%; 50,0% e 100,0%), paridas no período de 11/08/03 a 23/12/03 e acasaladas, por monta natural, entre 10/12/03 a 12/03/04. Foram avaliados os efeitos do peso ao início do acasalamento (PI), ganho diário médio de peso durante o acasalamento (GDA), escore de condição corporal ao início do acasalamento (ECCI), data juliana de parto (DJ), altura de garupa (H), fração gênica de Nelore (FGN), ordem de parto (OP), sexo do terneiro (S), peso ao nascer (PN) e peso ao desmame ajustado (PAJ205) sobre a probabilidade de prenhez (Pi). Os dados foram submetidos à análise de regressão logística, por meio do procedimento Logistic do pacote computacional SAS, para identificar os efeitos de cada variável na Pi. A média da taxa de prenhez foi de 43,2%. A Pi foi explicada pelas variações de ECCI (P=0,25), PI (P=0,02), GDA (P=0,09) e DJ (P=0,07). A mudança na chance de prenhez para cada acréscimo de unidade na variável regressora foi estimada com base na estatística da razão entre chances (odds ratio) dada por OR = exp(k), considerando que chance é a razão entre a probabilidade do evento ocorrer e a probabilidade do evento não ocorrer A razão entre chances foi estimada em 1,341, 1,133, 1,197 e 0,886 para ECCI, PI, GDA e DJ, respectivamente. Não foram observados efeitos significativos (P>0,30) da FGN, OP, S, PN e PAJ205 sobre a Pi. A chance das vacas conceberem esteve associada ao escore de condição corporal no início do acasalamento, sendo de 34,1% para cada 0,5 unidade de ECCI e de 19,7% para cada 0,100 kg/d na variação de peso durante o acasalamento. Além disto, vacas com partos mais cedo dentro do ano e com maiores pesos no início do acasalamento também apresentaram maiores chances de conceber, 12,9% e 13,3%, respectivamente. Portanto, para aumentar as taxas de prenhez de vacas de corte são necessárias melhorias no escore de condição corporal no início do acasalamento e no ganho de peso durante a estação de monta, ambos decorrentes de uma adequada nutrição pré e pós-parto.

Foi validado durante quatro anos um modelo simulado de cria e recria de animais Nelore a pasto, nos Cerrados do Centro—Oeste brasileiro. Novilhas tiveram taxa média de prenhez (TP) de 89% e vacas de 87%. Taxa de desmama foi 87% e de mortalidade de bezerros 6%. Ordem de parto (OP) teve efeito quadrático na TP (P<0,0001). Vacas primiparas (0P1) tiveram TP de 69% e OP5-0P8 90%. Condição corporal (CC) à desmama afetou a TP (P=0,0007). Vacas OP1 com CC 2,0 e 3,5 tiveram TP de 52,7 e 82,5%, respectivamente. Entre OP4-0P8 com CC 3,5 a TP foi 96%. OP teve efeito quadrático no intervalo de partos (IP; P<0,0001). Vacas OP1 tiveram IP de 392,10 ± 3,54 dias e OPs superiores 370 dias. Vacas OP1 desmamaram bezerros com 159,01 ± 2,30 kg e OP4 com 178,07 ± 3,44 kg (P<0,001). As novilhas acasalaram aos 776,04 ± 30,11 dias com peso vivo (PV) de 306,95 ± 32,79 kg. Novilhas prenhas foram 25,58 ± 9,97 dias mais velhas (P=0,0124) e 9,8 ± 7,04 kg mais pesadas (P=0,1683) do que as falhadas. A CC e PV médio geral das vacas foram 3,77 e 429 kg, respectivamente. Novilhos apresentaram PV de 366 kg aos 20/21 meses e condição de terminação em confinamento. A produtividade anual de PV do sistema foi 206,11 kg/ha. Vacas Nelore com CC maior que 3,0 apresentaram altos índices de produtividade. Novilhas Nelore iniciando a vida reprodutiva aos 24/26 meses de idade tiveram alta TP. / A simulated mode! was validate for a breeding and rearing system under Cerrado condition of Central Brazil. Nelore cow's and heifer's pregnancy rate (TP) were 87 and 89%, respectively. The weaning rate mean was 87% and calf mortality 6%. Calving arder (OP) had quadratic response on TP (P<0,0001). First calving cows (OP1) had TP of 69% and cows of OP5 to OP8 of 90%. Body condition (CC) at weaning affected TP (P=0,0007). OP1 cows with CC of 2,0 and 3,5 had TP of 52,7 and 82,5%, respectively. For OP4 to OP8 cows with CC 3,5 TP was 96%. The OP showed quadratic response on calving interval (IP), (P<0,0001). OP1 cows had IP of 392,10 ± 3,54 days and cows with higher OPs 370 days. Calve's weaning weight was 159,01 ± 2,30 kg for OP1 cows and 178,07 ± 3,44 kg for OP4 cows (P<0,001). Heiferis live weight (PV) and age at breeding season were 306,95 ± 32,79 kg and 776,04 ± 30,11 days, respectively. Pregnant heifers were 25, 58 ± 9,97 days older (P=0,0124) and 9,8 ± 7,04 kg heaviest (P=0,1683) than no pregnant ones. The CC and PV cow's means were 3,77 and 429 kg, respectively. Steers 20/21 months old weighed 366 kg and had development to be finished at feed lot. The annual productivity of the system was 206,11 kg of PV per hectare. Nelore cows on tropical pasture condition with CC around 3.5 showed high productivity. Heifers 24/26 months old showed high TP.

Foi desenvolvido um experimento, numa criação comercial localizada na região subtropical do Estado do Paraná, para identificar os efeitos que influenciam a taxa de prenhez de 117 vacas de corte Nelore x Hereford, com idades entre 2 e 20 anos e com diferentes frações gênicas de Nelore (25,0%; 37,5%; 50,0% e 100,0%), paridas no período de 11/08/03 a 23/12/03 e acasaladas, por monta natural, entre 10/12/03 a 12/03/04. Foram avaliados os efeitos do peso ao início do acasalamento (PI), ganho diário médio de peso durante o acasalamento (GDA), escore de condição corporal ao início do acasalamento (ECCI), data juliana de parto (DJ), altura de garupa (H), fração gênica de Nelore (FGN), ordem de parto (OP), sexo do terneiro (S), peso ao nascer (PN) e peso ao desmame ajustado (PAJ205) sobre a probabilidade de prenhez (Pi). Os dados foram submetidos à análise de regressão logística, por meio do procedimento Logistic do pacote computacional SAS, para identificar os efeitos de cada variável na Pi. A média da taxa de prenhez foi de 43,2%. A Pi foi explicada pelas variações de ECCI (P=0,25), PI (P=0,02), GDA (P=0,09) e DJ (P=0,07). A mudança na chance de prenhez para cada acréscimo de unidade na variável regressora foi estimada com base na estatística da razão entre chances (odds ratio) dada por OR = exp(k), considerando que chance é a razão entre a probabilidade do evento ocorrer e a probabilidade do evento não ocorrer A razão entre chances foi estimada em 1,341, 1,133, 1,197 e 0,886 para ECCI, PI, GDA e DJ, respectivamente. Não foram observados efeitos significativos (P>0,30) da FGN, OP, S, PN e PAJ205 sobre a Pi. A chance das vacas conceberem esteve associada ao escore de condição corporal no início do acasalamento, sendo de 34,1% para cada 0,5 unidade de ECCI e de 19,7% para cada 0,100 kg/d na variação de peso durante o acasalamento. Além disto, vacas com partos mais cedo dentro do ano e com maiores pesos no início do acasalamento também apresentaram maiores chances de conceber, 12,9% e 13,3%, respectivamente. Portanto, para aumentar as taxas de prenhez de vacas de corte são necessárias melhorias no escore de condição corporal no início do acasalamento e no ganho de peso durante a estação de monta, ambos decorrentes de uma adequada nutrição pré e pós-parto.

As técnicas de marcadores moleculares têm sido aplicadas em estudos populacionais das espécies bovinas, verificação de genealogia e teste de paternidade. Dentre os marcadores moleculares, os microssatélites (MS) são amplamente utilizados, porém, alguns problemas técnicos têm motivado o desenvolvimento de alternativas, como os marcadores do tipo polimorfismo de nucleotídeos único (SNP). Assim, surgiu a necessidade de identificar haplótipos SNP que estão em concordância com cada alelo MS e então os genótipos MS poderiam ser convertidos em genótipos SNP e vice-versa, por meio da imputação do genótipo. O objetivo deste trabalho foi aplicar um método para imputar alelos MS a partir de haplótipos SNP, para verificação de paternidade, utilizando animais da raça Nelore e também identificar um menor conjunto de SNP, com qualidade suficiente para otimizar e diminuir o custo da genotipagem. Foram realizadas genotipagens em SNP e MS para 99 trios de animais da raça Nelore provenientes da EMBRAPA Pecuária Sudeste e foi verificada a existência de alelos nulos pelo programa MICRO-CHECKER. Foram selecionados SNP que estivessem próximos de cada marcador MS e o programa BEAGLE foi usado para identificar a fase de ligação dos genótipos. Posteriormente, foi realizada a técnica de imputação dos MS a partir de haplótipos SNP e foi verificada a paternidade pelo programa CERVUS. A precisão da imputação dos alelos MS foi verificada através do cálculo da concordância entre os alelos MS imputados e relatados. O marcador SPS115 foi removido da análise por evidências de alelos nulos, devido ao excesso de homozigotos observados. O marcador mais informativo foi o TGLA122, cujo conteúdo de informação polimórfica (PIC) foi 0,8. Foram encontrados desvios do equilíbrio de HW (P<0,05) para os locos ETH225 e TGLA57. Um maior conjunto de SNP foi necessário para imputação de alelos MS para o marcador BM1824. As taxas de verificação de parentesco foram de 97,1% para os alelos MS genotipados e 96,3% para os MS imputados. Somente 4% dos 99 filhos não tiveram a paternidade atribuída, quando a simulação foi feita apenas para o pai conhecido e 1% quando pai e mãe eram conhecidos. Esta técnica obteve precisão maior que 96% para a imputação de dados MS e permitiu imputar dados genotípicos multialélicos a partir de bi-alélicos. Os resultados terão um impacto imediato para os pesquisadores e associações de criadores que visam a transição do MS para SNP baseada em verificação de parentesco. / Molecular markers techniques have been applied in bovine population studies, genealogy verification and paternity test. Among the molecular markers, microsatellites (MS) are widely used, however, some technical problems have motivated alternatives development, as markers type single nucleotide polymorphism (SNP). Thus, the need to identify SNP haplotypes which are in agreement with each MS allele and then MS genotypes could be converted into SNP genotypes and vice versa, through genotype imputation. The objective of this study was to apply a method to impute MS alleles from SNP haplotypes to verify paternity, using Nellore and also identify a smaller set of SNP, with enough quality to optimize and reduce genotype cost. SNP genotyping was performed at and for 99 MS trios Nellore from EMBRAPA Cattle Southeast and was checked for null alleles by MICROCHECKER. SNP were selected that were near each MS marker and the program BEAGLE was used to identify genotypes phase. Subsequently, were applied the MS imputation technique from SNP haplotype and paternity was verified by CERVUS. The accuracy of MS alleles imputation was verified by calculating the correlation between MS alleles imputed and reported. The SPS115 marker was removed from the analysis for null alleles evidence due to homozygote excess observed. The most informative marker was TGLA122 with 0.8 PIC. Deviations from equilibrium HW (P<0.05) were found for the loci ETH225 and TGLA57. A larger set of SNP was necessary to impute MS alleles for the marker BM1824. The verification rates of paternity were 97.1% for genotyped MS alleles and 96.3% for MS imputed. Using imputed MS alleles and when only the sire was considered only 4% of the 99 offspring were not assigned paternity and 1% when both parents were known. The technique achieved greater than 96% accuracy for MS imputation data. This research allow to impute multi-allelic genotypes from bi-allelic data. Our results will have an immediate impact for researchers and livestock associations aiming the transition from MS- to SNP-based parentage verification.

Foi validado durante quatro anos um modelo simulado de cria e recria de animais Nelore a pasto, nos Cerrados do Centro—Oeste brasileiro. Novilhas tiveram taxa média de prenhez (TP) de 89% e vacas de 87%. Taxa de desmama foi 87% e de mortalidade de bezerros 6%. Ordem de parto (OP) teve efeito quadrático na TP (P<0,0001). Vacas primiparas (0P1) tiveram TP de 69% e OP5-0P8 90%. Condição corporal (CC) à desmama afetou a TP (P=0,0007). Vacas OP1 com CC 2,0 e 3,5 tiveram TP de 52,7 e 82,5%, respectivamente. Entre OP4-0P8 com CC 3,5 a TP foi 96%. OP teve efeito quadrático no intervalo de partos (IP; P<0,0001). Vacas OP1 tiveram IP de 392,10 ± 3,54 dias e OPs superiores 370 dias. Vacas OP1 desmamaram bezerros com 159,01 ± 2,30 kg e OP4 com 178,07 ± 3,44 kg (P<0,001). As novilhas acasalaram aos 776,04 ± 30,11 dias com peso vivo (PV) de 306,95 ± 32,79 kg. Novilhas prenhas foram 25,58 ± 9,97 dias mais velhas (P=0,0124) e 9,8 ± 7,04 kg mais pesadas (P=0,1683) do que as falhadas. A CC e PV médio geral das vacas foram 3,77 e 429 kg, respectivamente. Novilhos apresentaram PV de 366 kg aos 20/21 meses e condição de terminação em confinamento. A produtividade anual de PV do sistema foi 206,11 kg/ha. Vacas Nelore com CC maior que 3,0 apresentaram altos índices de produtividade. Novilhas Nelore iniciando a vida reprodutiva aos 24/26 meses de idade tiveram alta TP. / A simulated mode! was validate for a breeding and rearing system under Cerrado condition of Central Brazil. Nelore cow's and heifer's pregnancy rate (TP) were 87 and 89%, respectively. The weaning rate mean was 87% and calf mortality 6%. Calving arder (OP) had quadratic response on TP (P<0,0001). First calving cows (OP1) had TP of 69% and cows of OP5 to OP8 of 90%. Body condition (CC) at weaning affected TP (P=0,0007). OP1 cows with CC of 2,0 and 3,5 had TP of 52,7 and 82,5%, respectively. For OP4 to OP8 cows with CC 3,5 TP was 96%. The OP showed quadratic response on calving interval (IP), (P<0,0001). OP1 cows had IP of 392,10 ± 3,54 days and cows with higher OPs 370 days. Calve's weaning weight was 159,01 ± 2,30 kg for OP1 cows and 178,07 ± 3,44 kg for OP4 cows (P<0,001). Heiferis live weight (PV) and age at breeding season were 306,95 ± 32,79 kg and 776,04 ± 30,11 days, respectively. Pregnant heifers were 25, 58 ± 9,97 days older (P=0,0124) and 9,8 ± 7,04 kg heaviest (P=0,1683) than no pregnant ones. The CC and PV cow's means were 3,77 and 429 kg, respectively. Steers 20/21 months old weighed 366 kg and had development to be finished at feed lot. The annual productivity of the system was 206,11 kg of PV per hectare. Nelore cows on tropical pasture condition with CC around 3.5 showed high productivity. Heifers 24/26 months old showed high TP.

O presente trabalho foi delineado com o intuito de identificar os efeitos da inclusão da Gonadotrofina Coriônica Equina (eCG) antes e após a IA em vacas de corte submetidas a protocolos de IATF e conduzido na Fazenda Rancho 60, pertencente ao Grupo Agropecuária Fazenda Brasil (Barra do Garças, MT, Brasil). Para tanto, 901 vacas Nelores multíparas com média de 44 dias pós-parto foram sincronizadas, inseminadas em tempo fixo utilizando-se três touros (Aberdeen Angus) e nove inseminadores. Além disso, as vacas foram monitoradas por exames ultrassonográficos e/ou colheitas de sangue até os 30 dias após a IA. Taxas de sincronização, prenhez aos 30 e 60 dias foram mensuradas e as amostras de sangue foram avaliadas quanto à concentração de progesterona sérica. Foram avaliados os efeitos da inclusão de 300 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG) 2 dias antes e/ou 14 dias depois da IA e posteriormente avaliou-se também a influência do grupo genético e sexo dos bezerros no desempenho reprodutivo. Em suma, o tratamento com eCG após a IA não melhorou a fertilidade em vacas Nelore pós-parto, entretanto pode-se observar um incremento nas taxas de ovulação, prenhez aos 60 dias e aumento nas concentrações séricas de P4 nos animais que receberam eCG no D8. Quanto à influência da progênie na fertilidade das mães conclui-se que pode haver uma relação entre o sexo e raça dos bezerros na concentração circulante de P4 das progenitoras, entretanto estas variáveis não influenciaram na fertilidade da vaca submetida à IATF no período pós-parto. / The present work was designed to identify the effects of a treatment with equine chorionic gonadotropin (eCG) before and post-AI in beef cows submitted to TAI protocols. The experiment was conducted at Rancho 60 Farm, belonging to Grupo Agropecuaria Fazenda Brasil (Barra do Garças, MT, Brazil). For this, 901 multiparous Nellore cows with 44 days post-partum were synchronized, inseminated at fixed time using semen of three bulls (Angus). In addition, cows were monitored by ovarian ultrasonography and/or blood sampling until 30 days post AI. Ovulation rate, and pregnancy rates at 30 and 60 days were evaluated and blood samples were analyzed for serum progesterone concentration. The effects of treatment with 300 IU of eCG 2 days before and/or 14 days after AI were evaluated, as well as the influence of the breed and gender of their calves in the reproductive performance. In general, treatment with eCG after AI did not improve fertility in post-partum Nelore cows, however, it was detected an improvement in ovulation rate and pregnancy rate at 60 days and an increase in serum progesterone concentrations in cows that received eCG at Day 8. There was no effect of gender and breed of calves on fertility of the dams; however these variables influenced circulating progesterone post AI.

Foi desenvolvido um experimento, numa criação comercial localizada na região subtropical do Estado do Paraná, para identificar os efeitos que influenciam a taxa de prenhez de 117 vacas de corte Nelore x Hereford, com idades entre 2 e 20 anos e com diferentes frações gênicas de Nelore (25,0%; 37,5%; 50,0% e 100,0%), paridas no período de 11/08/03 a 23/12/03 e acasaladas, por monta natural, entre 10/12/03 a 12/03/04. Foram avaliados os efeitos do peso ao início do acasalamento (PI), ganho diário médio de peso durante o acasalamento (GDA), escore de condição corporal ao início do acasalamento (ECCI), data juliana de parto (DJ), altura de garupa (H), fração gênica de Nelore (FGN), ordem de parto (OP), sexo do terneiro (S), peso ao nascer (PN) e peso ao desmame ajustado (PAJ205) sobre a probabilidade de prenhez (Pi). Os dados foram submetidos à análise de regressão logística, por meio do procedimento Logistic do pacote computacional SAS, para identificar os efeitos de cada variável na Pi. A média da taxa de prenhez foi de 43,2%. A Pi foi explicada pelas variações de ECCI (P=0,25), PI (P=0,02), GDA (P=0,09) e DJ (P=0,07). A mudança na chance de prenhez para cada acréscimo de unidade na variável regressora foi estimada com base na estatística da razão entre chances (odds ratio) dada por OR = exp(k), considerando que chance é a razão entre a probabilidade do evento ocorrer e a probabilidade do evento não ocorrer A razão entre chances foi estimada em 1,341, 1,133, 1,197 e 0,886 para ECCI, PI, GDA e DJ, respectivamente. Não foram observados efeitos significativos (P>0,30) da FGN, OP, S, PN e PAJ205 sobre a Pi. A chance das vacas conceberem esteve associada ao escore de condição corporal no início do acasalamento, sendo de 34,1% para cada 0,5 unidade de ECCI e de 19,7% para cada 0,100 kg/d na variação de peso durante o acasalamento. Além disto, vacas com partos mais cedo dentro do ano e com maiores pesos no início do acasalamento também apresentaram maiores chances de conceber, 12,9% e 13,3%, respectivamente. Portanto, para aumentar as taxas de prenhez de vacas de corte são necessárias melhorias no escore de condição corporal no início do acasalamento e no ganho de peso durante a estação de monta, ambos decorrentes de uma adequada nutrição pré e pós-parto.

O presente trabalho teve como objetivo geral estudar a qualidade de carne (Longissimus dorsi) de machos inteiros da raça Nelore através de análise proteômica bidimensional. Para tanto, dois objetivos específicos foram propostos: (i) estudar a proteólise das carnes em diferentes tempos de maturação, no caso um, sete e 14 dias, e (ii) estudar o perfil protéico das carnes de bovinos machos inteiros Nelore com genótipos contrastantes para maciez, em diferentes tempos de maturação (um, sete e 14 dias), associados aos marcadores moleculares CAPN4751 (&mu;-calpaína) e UOGCAST1 (calpastatina). Amostras de sangue foram coletadas para realização de análises genotípicas. Para as análises eletroforéticas e de maciez, amostras maturadas por um, sete e 14 dias foram coletadas. A caracterização e determinação dos genótipos polimórficos (SNP) para os marcadores CAPN4751 e UOGCAST1 foram realizadas por meio de PCR em tempo real. Seis pools de amostras de animais foram preparados para a realização de eletroforese bidimensional. As análises estatísticas foram realizadas no pacote Statistical Analysis System(SAS). Foram encontrados 256 spots em comum na análise de proteólise, sendo 25 significativos (P&lt;0,05). Na análise de regressão múltipla, sendo maciez a variável dependente e os spots significativos a variável independente, foi possível verificar que 13 spots explicaram em 73% a variação de maciez durante a maturação. As análises de variância da intensidade para os volumes de expressão normalizados (IVEN) indicaram 21 spots significativos (P&lt;0,05) para os marcadores CAPN4751 e UOGCAST1. Análises de regressão múltipla para os spots significativos mostraram que alguns spots, além dos marcadores estudados, podem predizer a maciez da carne aos 14 dias de maturação. Portanto, as avaliações de spots permitirão identificar as proteínas diferencialmente expressas, auxiliando no melhor entendimento do complexo mecanismo que determina a maciez da carne. / The present work aimed to study beef quality (Longissimus dorsi) from Nellore bull through two-dimensional proteomic analysis. For this purpose, two specific objectives were proposed: (i) to study the proteolysis of meat at different aging times, if 24 hours, seven and 14 days, and (ii) to study the protein profile of meat from Nellore bull with contrasting genotypes for tenderness at different aging times (24 hours, seven and 14 days), associated with molecular markers CAPN4751 (&mu;-calpain) and UOGCAST1 (calpastatin). Blood samples were collected for genomic analyses. For electrophoretic analysis and tenderness, samples aged for 24 hours, seven and 14 days were collected. The characterization and determination of genotypes polymorphic (SNP) markers for CAPN4751 and UOGCAST1 were performed using real time PCR. Six samples of animals pools were set up to carry out two-dimensional electrophoresis. Statistical analyzes were performed in the package Statistical Analysis System (SAS). 256 spots were found in common in the analysis of proteolysis, with 25 spots significant. We found that 13 spots accounted for 73% of the variation in tenderness during aging. Analyses of variance of the intensity of expression for the normalized volumes (IENV), 21 spots indicated significant (P&lt;0,05) for the markers CAPN4751 and UOGCAST1. Multiple regressions analysis to significant spots showed to some spots, in addition to the markers studied may predict meat tenderness at 14 days of aging. Therefore, the assessments will identify the spots differentially expressed proteins, aiding in better understanding the complex mechanism that determines the softness of the meat.

A identificação de mecanismos moleculares é importante para entender os eventos fisiológicos que ocorrem durante o processo de maturação sexual. O objetivo deste trabalho foi semiquantificar o RNAm para os receptores de gonadotrofinas em células da granulosa de folículos dominantes em crescimento de novilhas Nelore pré-púberes, buscando associação com a fertilidade precoce. As novilhas foram separadas em Precoce (P, n=6) e Não Precoce (NP, n=16), de acordo com o diagnóstico positivo de gestação aos 15 meses de idade. Realizou-se exame ultra-sonográfico dos ovários durante 17 dias para a identificação da onda folicular, o folículo dominante com 8-9 mm foi aspirado via trans-vaginal. O RNA total foi extraído das amostras e convertido a DNA complementar que teve uma região amplificada para a expressão dos genes para os receptores de gonadotrofinas. A semiquantificação foi feita por análise digital onde levou-se em consideração a intensidade média das bandas (unidade arbitrária - UA) em gel de poliacrilamida (8%) corado com uma solução de TBE-brometo de etídio (0,02%). Foi utilizado o RNAm para o gene do GAPDH como controle interno para corrigir a expressão dos receptores de gonadotrofinas em função da quantidade de RNA em cada amostra. Não houve diferença entre P e NP na quantidade de RNAm para o receptor de FSH (FSHr, 1,14±0,07 e 1,19±0,04 UA) e de LH (LHr 0,79±0,12 e 0,78±0,05 UA, respectivamente). Foi detectada a presença de splicing alternativo do RNAm para o receptor de LH (LHrs), pelo aparecimento de banda com peso molecular diferente, em todos os animais do experimento, constatando-se através do sequenciamento que o material apresentava a deleção do exon 10. As novilhas P apresentaram maior percentagem de LHrs em relação ao LHr (LHrs/LHr) (83,66±4,26%) quando comparadas a NP (70,05±3,39%). A quantidade de RNAm para receptores de gonadotrofinas parece não estar relacionada com o aparecimento de fertilidade precoce, mas a maior percentagem de deleção do exon 10 no RNAm para o LHr pode estar envolvida com a fertilidade precoce em novilhas Nelore. / Identification of molecular mechanisms is important to understand the physiological events occurring during the process of sexual maturation. The objective of this work was to semiquantify the mRNA for gonadotropins receptors from granulosa cells of developing dominant follicles in pre-pubertal Nellore heifers and associate the results to precocious fertility. The heifers were sorted in Precocious (P, n=6) and Non Precocious (NP, n=16), according to positive pregnancy at 15 months of age. Ovarian ultrasound examination was performed through 17 days for follicular wave identification, the growing dominant follicle was aspirated at 8-9 mm. Total mRNA was extracted from the granulosa cells samples, converted to complementary DNA and had a region amplified for gene expression for gonadotropins receptors. The semiquantification was performed by digital analysis of intensity average for the bands (arbitrary unit - AU) in poliacrilamida gel (8%) stained with etidio TBE-bromide solution (0,02%). mRNA for GAPDH gene was used as internal control to correct the expression of gonadotropins receptors to the amount of mRNA in each sample. There was no difference between P and NP in the amount of mRNA for FSH receptors (FSHr, 1,14±0,07 and 1,19±0,04 AU) and LH receptors (LHr 0,79±0,12 and 0,78±0,05 AU, respectively). Heifers presented alternative splicing of mRNA for LH receptors (LHrs) evidenced through sequencing, as the absence of exon 10. P heifers presented greater percentage of LHrs in relation to LHr (LHrs/LHr) (83,66±4,26%) when compared the NP (70,05±3,39%). The amount of mRNA for gonadotropins receptors was not related with precocious fertility, but the greater percentage of exon 10 deletion from mRNA for LHr was associate the precocious fertility in Nelore heifers.

Nos últimos anos o gene da leptina, vem sendo objeto de intensa investigação em bovinos pela sua associação com características econômicas, tais como, metabolismo energético, eficiência e consumo alimentar, deposição de gordura e características reprodutivas. Estudos anteriores apontam que esse gene possa influenciar o início da puberdade tanto em animais como em humanos. Tendo em vista a importância desse gene para a pecuária nacional, os objetivos do presente estudo foram determinar a relação entre expressão do gene da leptina e puberdade em novilhas Nelore; identificar polimorfismos no promotor e no gene da leptina; avaliar os efeitos desses polimorfismos com a puberdade, expressão do gene e diferença esperada na progênie (DEP) para probabilidade de prenhez de novilha aos 14 meses (PP14). Amostras de tecido adiposo subcutâneo foram coletadas de 28 novilhas Nelore com idade em torno de 25 meses, sendo 14 pré-púberes e 14 púberes. Análises foram feitas por RT-PCR quantitativa, utilizando cDNA sintetizado a partir de RNA total extraído das amostras de tecido adiposo. A expressão da leptina foi 2,1 vezes maior (P=0,0337) no tecido adiposo das novilhas púberes, sugerindo que esse gene possa estar influenciando o início da puberdade nestes animais. Amostras de DNA foram extraídas para identificar polimorfismos no gene e no promotor da leptina que poderiam estar associados com a puberdade e a expressão do gene no tecido adiposo subcutâneo. Foram identificados 37 polimorfismos, dos quais 20 não haviam sido reportados previamente. Nenhum dos 37 polimorfismos encontrados ou dos 10 haplótipos formados a partir dos polimorfismos, foram associados (P0,05) com a maior expressão do gene ou com a puberdade nestas novilhas. Aparte disso, o DNA de 96 fêmeas Nelore, sendo 48 com alta DEP para PP14 e 48 com baixa DEP para PP14 pertencentes a outro rebanho, foi extraído a partir de sangue periférico. Uma região de 715 pb do gene da leptina foi seqüenciada nestas 96 amostras. Nenhuns dos 11 polimorfismos identificados apresentaram associação (P0,05) com os valores de alta ou baixa DEP para PP14, entretanto a substituição do haplótipo 1, o mais freqüente, pelo haplótipo 2 revelou uma associação sugestiva (P=0,0923) com a característica, indicando que a substituição possa estar contribuindo para a variação da DEP para PP14. Fêmeas com o haplótipo 2 em média tiveram efeito de -9,51 a DEP para PP14 em relação aquelas com o haplótipo mais freqüente. Este estudo confirma a associação da expressão do gene da leptina com a puberdade, descreve novos polimorfismos identificados neste gene e apresenta resultados iniciais da associação dos polimorfismos com expressão e puberdade em Nelore. / In recent years, the leptin gene has been subject of intense research in cattle, possibly because of its association with economic characteristics, such as, energy metabolism, feed efficiency, feed intake, fat deposition and reproductive characteristics. Previous studies suggest that this gene might be influencing the onset of puberty in both animals and humans. Given the importance of this gene for the national livestock, the goals of this study was to determine the relationship between leptin gene expression and puberty in Nelore heifers; identified polymorphisms in the promoter and leptin gene; evaluate the effect of these polymorphisms on puberty, gene expression and expected progeny difference (EPD) for probability of pregnancy of heifers at 14 months (PP14). Samples of subcutaneous adipose tissue were collected from 28 heifers aged around 25 months, 14 prepubertal and 14 pubertal. Leptin gene expression was determined by quantitative RT-PCR using cDNA synthesized from total RNA extracted from adipose tissue samples. The expression of leptin was 2.1 times higher (P=0,0337) in subcutaneous adipose tissue of pubertal heifers, suggesting that this gene might be influencing the onset of puberty in these animals. DNA from these heifers were extracted to identify polymorphisms in the promoter and leptin gene that could be associated with puberty and gene expression in subcutaneous adipose tissue of these heifers. We identified a total of 37 polymorphisms, 20 of which have not been reported previously. None of the 37 polymorphisms found or the 10 haplotypes formed from the polymorphisms were associated (P0.05) with higher expression of the gene or with puberty in these heifers. Apart from this, DNA of 96 Nelore, being 48 with high EPD for PP14 and 48 with low EPD for PP14 belonging to another herd, was extracted from peripheral blood. A region of 715 bp in the leptin gene was sequenced in these 96 samples. None of the 11 polymorphisms identified were associated (P0.05) with high or low values of EPD for PP14, however replacing the haplotype 1, the most frequent, for haplotype 2 showed a suggestive association (P=0,0923) with the trait, indicating that the replacement can contribute to the variation of EPD for PP14. Females with haplotype 2 had an average effect of -9.51 on EPD for PP14 compared to those with the most frequent haplotype. This study confirms the association of leptin expression on puberty, describes new polymorphisms identified in this gene and presents initial results of the association of polymorphisms with expression and puberty in Nelore.