Orientador: Aramis Augusto Pinto / Banca: José Antonio Jerez / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: O presente trabalho teve o objetivo de realizar o diagnóstico sorológico de Chlamydophila felis utilizando duas técnicas sorológicas: imunofluorescência indireta, nas modalidades de kit comercial (RIFI COMERCIAL), e ensaio in house (RIFI OVO), e ELISA, sendo estes testes de RIFI OVO e ELISA preparados com antígeno de Chlamydophila abortus produzidos em ovos embrionados SPF de galinha. Adicionalmente, objetivou-se a realização do diagnóstico molecular de C. felis e estabelecimento do diagnóstico diferencial da clamidiose felina em relação à infecção pelo herpesvírus felino tipo 1 (HVF-1), vírus da Imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV). Anticorpos anti-Chlamydiaceae foram detectados pela RIFI COMERCIAL em 81% dos animais (162/201), pela RIFI OVO em 55% (111/201) e pelo ELISA em 31% (69/201) das amostras. Verificou-se que o antígeno de Chlamydophila abortus inoculado em ovos embrionados não é indicado para utilização em técnicas imunológicas, devido à baixa sensibilidade, especificidade e correlação entre os testes estudados. Das amostras de suabes de conjuntiva submetidas à PCR, em 5,1% (12/235) foi amplificado o gene MOMP de C. felis e três amostras (1,3%) foi detectado DNA de herpesvírus. Houve coinfecção para os dois agentes em 0,4% (1/235) das amostras analisadas. Ademais, 150 amostras de soro foram avaliadas, sendo anticorpos anti-FIV detectados em 8 amostras (5,3%) e o antígeno de FeLV detectado em 11 amostras (7,3%). Não houve coinfecção por C. felis e HVF-1 com os vírus imunossupressores, demonstrando não haver correlação entre a infecção de FIV e/ou FeLV e o complexo respiratório felino / Abstract: This study aimed at perfoming the serological diagnosis of Chlamydophila felis by three serological approaches, using a commercial kit for Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT COMMERCIAL), and Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT EGG) and ELISA prepared with Chlamydophila abortus with antigen produced in SPF embryonated chicken eggs. Additionally, our study aimed at performing the molecular diagnosis of C. felis and establishing the differential diagnosis of feline chlamydiosis in relation to Feline Herpesvirus type-1 (HVF-1) in cat conjunctival swab samples, as well as investigate the presence of antibodies to Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and presence of Feline Leukemia Virus (FeLV) antigen in cat serum samples. IgG antibodies to Chlamydophila sp. were detected by in 81% (162/201), 55% (111/201), and 31% (69/201) of serum samples, by IFA Chlamydiaceae COMMERCIAL, IFA EGG and ELISA, respectively. The use of Chlamydophila spp antigen produced in embryonated eggs is not indicated for serological tests due to its low sensitivity, specificity and correlation with other serological tests. Twelve (5.1%) out of 235 conjunctival swab samples were positive to C. felis- MOMP gene PCR; three samples (1.3%) were positive to herpesvirus PCR. Co-infection for both agents (C. felis and Herpesvirus) was found in 1 cat (0.4%). Furthermore, 150 serum samples were evaluated by commercial ELISA kit-Snap ® Combo FeLV-FIV. IgG antibodies to FIV were detected in 8 samples (5.3%), and FeLV antigen was detected in 11 samples (7.3%). The presence of co-infection for C. felis and HVF-1 with immunosuppressive viruses was not observed, showing no correlation between FIV infection and / or FeLV and upper respiratory tract disease / Doutor

Orientador: Sônia Regina Verde da Silva Franco / Resumo: A dermatofitose é uma infecção fúngica superficial que acomete os animais e a espécie humana. Os gatos domésticos são um importante reservatório e fonte de infecção dos esporos dermatofíticos. Considerando a suscetibilidade dos portadores do vírus da imunodeficiência felina (FIV) às infecções fúngicas, o contato com esses animais pode aumentar a exposição de seres humanos a fungos patogênicos e representar um desafio para o controle da dermatofitose zoofílica. O presente estudo teve como objetivo avaliar a relação entre a dermatofitose felina e a infecção pelo FIV, na região de Campo Mourão, Paraná. As amostras de pêlo e sangue, colhidas de 123 felinos, foram submetidas respectivamente ao isolamento de dermatófitos por meio de cultivo fúngico e diagnóstico da infecção pelo FIV, utilizando a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR-Nested). Os resultados revelaram que 17,07% dos felinos carreavam dermatófitos e 9,76% eram positivos para o FIV. Não houve relação, estatisticamente significativa, entre a infecção pelo FIV e o transporte assintomático de dermatófitos. Contudo, os felinos positivos para o FIV mostraram-se predispostos a dermatofitose clínica. / Abstract: Dermatophytosis is a superficial fungal infection that occurs in animals and humans beings. The domestic cats are an important reservoir and source of infection of the dermatophytic spores. Considering the susceptibility caused by feline immunodeficiency virus (FIV) to fungal infections, the contact with these animals may expose humans to more pathogenic fungi and damage the zoophilic dermatophytosis control. The focus of this study was asses the relation between feline dermatophytosis and FIV infection, in Campo Mourão, Paraná. The hair and blood samples obtained from 123 felines were respectively submitted to mycological culture for dermatophyte isolation and polimerase chain reaction (PCRNested) for FIV detection. The results revealed that 17.07% of felines carried dermatophytes and 9.76% were positive for FIV. No statistical association was observed between FIV infection and asymptomatic dermatophyte carriers. However, the FIV positive cats were predisposed to clinical dermatophytosis. / Mestre

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Coorientador: Wilma Aparecida Starke Buzetti / Banca: Denise Saraiva Bresciani / Banca: Virginia Bodelão Richini Pereira / Resumo: As leishmanioses são zoonoses que acometem o homem e outras espécies de mamíferos silvestres e domésticos. É uma doença causada por protozoários intracelulares do gênero Leishmania. O agente causador da leishmaniose visceral no Novo Mundo é Leishmania infantum (syn. L. chagasi), sendo Lutzomya longipalpis o principal vetor responsável pela sua transmissão. O gato doméstico também desenvolve a infecção, geralmente de forma assintomática, podendo atuar também como reservatório destes protozoários. Tendo em vista a inespecificidade dos achados clínicos da leishmaniose felina (LF), a ausência de sinais e a semelhança dos aspectos clínicos dessa enfermidade com outras enfermidades em gatos, como a micoplasmose, leucemia felina (FIV) e síndrome da imunodeficiência felina (FeLV), esta zoonose deve ser sistematicamente incluída nas suspeitas clínicas de gatos em áreas endêmicas para leishmanioses canina e humana. Foram utilizadas amostras de sangue de 55 gatos procedentes da Associação Protetora dos Animais (APAISA) de Ilha Solteira, co-habitantes com cães portadores de leishmaniose visceral. À técnica de hemocultura, 16,4% (9/55) dos gatos apresentaram protozoários flagelados. A Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para L. infantum (syn. L. chagasi) foi testada em 51 gatos, revelando 62,7% (32/51) de animais reagentes. Testando-se a técnica de RIFI para Trypanosoma cruzi, 54,9% (28/55) dos animais foram reagentes. Pela busca de anticorpos anti-Leishmania e anti-Trypanosoma, pela técnica de ELISA indireto com antígeno bruto, encontrou-se 72,5% (37/51) e 39,2% (20/55) de animais reagentes, respectivamente. Com o teste de ELISA indireto com rK39 para Leishmania infantum (syn. L.chagasi), obteve-se a positividade em 21,6% (11/51) dos felinos testados. Pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), das 55 amostras de sangue total testadas, cinco (9,1%) foram positivas ... / Abstract: The leishmaniasis are zoonoses that affect humans and other species of wild and domestic mammals. It is a disease caused by intracellular protozoa of the genus Leishmania. Leishmania infantum (syn. L. chagasi) is the causative agent of visceral leishmaniasis in the New World, Lutzomyia longipalpis is the main vector responsible for transmission. The cat, besides living closely with humans, also develops infection, usually asymptomatic and may also act as a reservoir of these protozoa. Given the specificity of clinical feline leishmaniasis (LF), the absence of pathognomonic signs and symptoms, and the similarity of the clinical aspects of this disease with other very common in cats, as mycoplasmosis, feline leukemia virus (FIV) and immunodeficiency syndrome FeLV (Feline), this zoonosis should be systematically considered in the clinical suspicions of cats in of the areas endemic for canine and human leishmaniasis. Samples of blood from 55 cats coming from the Association for the Protection of Animals (APAISA) of Ilha Solteira, co-inhabitants with dogs with visceral leishmaniasis, were collected. The blood culture technique showed 16,4% (9/55) flagellate protozoa. The technique of indirect fluorescent antibody (IFA) for L. infantum (syn. L. chagasi) was tested on 51 cats, showing 62,7% (32/51) of animals reagents. Testing the technique of IFA for Trypanosoma cruzi, 54,9% (28/55) of animals were reactive. The search for anti-Leishmania antibodies and anti-Trypanosoma, the technique of ELISA with crude antigen, we found 72,5% (37/51) and 39,2% (20/55) of animals reagents, respectively. By ELISA with indirect rK39 for Leishmania infantum (syn. L.chagasi) gave a positive result in 21,6% (11/51) of tested cats. For the PCR, the 55 whole blood samples tested, five (9.1%) were positive for Leishmania spp. Confronting all the results obtained with the diagnostic techniques , is possible to determine the ... / Mestre

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Teresa Cristina Goulart de Oliveira Sequeira / Banca: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência da infecção por parasitas dos gêneros Babesia e Hepatozoon em gatos domésticos, por meio da identificação em esfregaços sangüíneos corados por Giemsa e pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). Foram colhidas amostras de sangue de 144 animais, sendo 113 do Estado de São Paulo e 31 do Distrito Federal. Os animais foram escolhidos aleatoriamente e não foram feitas distinções quanto à raça, idade, sexo ou estado de saúde dos gatos. A maioria dos animais habitava áreas rurais (52,8%) e, quando urbanas (47,2%), eram animais com livre acesso à rua. A extração do DNA das amostras de sangue foi realizada utilizando o GFXTM Genomic Blood DNA Purification Kit, de acordo com as recomendações do fabricante. Para a realização da PCR foram utilizados os oligonucleotídeos PiroA1 e PiroB para Babesia spp. e HepF e HepR para Hepatozoon spp. Pela análise dos esfregaços sangüíneos foram observadas estruturas intraeritrocitárias semelhantes à piroplasmídeos em cinco (3,47%) gatos, porém, apenas um (0,69%) foi positivo pela PCR para Babesia sp., com banda visualizada em 450pb. O seqüenciamento dessa amostra positiva demonstrou 100% de similaridade com Babesia canis vogeli já caracterizada no Brasil. Todas as amostras foram negativas para Hepatozoon spp., tanto pelo esfregaço quanto pela PCR. Por meio dos resultados obtidos neste estudo pode-se concluir que a freqüência desses hemoparasitas em gatos domésticos nessas regiões é muito baixa e técnicas moleculares são necessárias para o correto diagnóstico dessas hemoparasitoses nesses animais. / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the occurrence of infection by parasites of the genus Babesia and Hepatozoon in domestic cats. Infection was identified using Giemsa stained blood smears and the Polymerase Chain Reaction (PCR). The blood samples were collected from one hundred and forty four (144) cats that resided in São Paulo (113) state and the Federal District (31). The DNA extraction of blood samples was performed with the GFXTM Genomic Blood DNA Purification Kit, according to the manufacturer's instructions. The PiroA1 and PiroB primers for Babesia spp. and the HepF and HepF primers for Hepatozoon spp were used for PCR execution. Blood smear examinations, demonstrated the presence of intraerythrocytic structures resembling piroplasmids in five (3.47%) cats, however, only one (0.69%) was positive for Babesia sp., by PCR, with a band visualized at 450 bp. The sequencing of this positive sample demonstrated close identity with Babesia canis vogeli, which has already been characterized in Brazil. All blood smear and PCR samples were negative for Hepatozoon spp. The frequency of these hemoparasites in domestic cats in Brazil is very low and molecular techniques are necessary for the correct diagnostic of these hemoparasitosis in these animals. / Mestre

Orientador: Lucy Marie Ribeiro Muniz / Banca: Sheila Canavese Rahal / Banca: Maria Jaqueline Mamprim / Banca: Milton kolber / Banca: Fabiano Sellos Costa / Resumo: A displasia coxofemoral felina difere da canina tanto nas manifestações clínicas como nos achados radiográficos. O objetivo deste estudo foi avaliar a displasia coxofemoral em felinos, especialmente da raça persa, descrever as principais alterações radiográficas e classificá-las de acordo com sua gravidade. Para tanto, radiografaram-se a pelve nas projeções de distração, compressão e extensão 100 gatos, machos e fêmeas, castrados ou inteiros, com idade superior a 24 meses, sendo 50 da raça persa e 50 sem raça definida. Os animais foram submetidos à sedação com medetomidina (80 ìg/kg), associada ao butorfanol (0,5 mg/kg) e atropina (0,044 mg/kg) por via intramuscular. Foram observados sinais radiográficos compatíveis com a doença em 23% dos gatos, destes, sete sem raça definida e 16, da raça persa. Foi observada diferença estatística entre as raças, o mesmo não ocorrendo entre machos e fêmeas. Os valores do ângulo de Norberg para gatos normais variaram de 93,55° a 98,6° e para displásicos, de 89,75°a 93,02°; os de índice de distração variaram de 0,06 a 0,4 para gatos normais e de 0,1 a 0,45 para os doentes. Os principais achados radiográficos encontrados nos felinos demonstraram diferenças com os caninos, tanto na anatomia radiográfica quanto nos sinais da displasia coxofemoral. Em gatos com articulações coxofemorais normais, a cabeça femoral pode se apresentar em forma de "cogumelo", com menos de 50% recoberta pelo acetábulo, com leve aumento do padrão trabecular e com a borda acetabular cranial pontiaguda e afilada. Dentre as principais alterações radiográficas evidentes nos animais acometidos pela displasia coxofemoral pode-se citar a presença de osteófitos no bordo acetabular cranial, o arrasamento acetabular provocando desde incongruência articular leve até subluxação evidente, e, aumento acentuado no padrão trabecular. / Abstract: The cats' hip dysplasia differs from the canine both in clinical signs and at the radiographic evidences. The aim of this study was to evaluate the hip dysplasia in cats, mainly from the persian breed, to describe the main radiographic alterations and to classify it according to the severity of the radiographic evidences. Therefore, X-rays were taken at distraction, compression and extension projections of 100 cats, males and females, castrated and not castrated, 24 months older, 50 of persian breed and 50 cross breed. The cats were submitted to sedation with intramuscular medetomidine (80 ìg/kg), associated to butorphanol (0.5 mg/kg) and atropine (0.044 mg/kg). Radiographic evidences compatibles with the disease were observed in 23% of the cats, seven mixed breed and 16 of persian breed. Statistical differences between the breeds were observed, but no difference was observed between males and females. The Norberg angle for normal cats varied from 93.55° to 98.6° and for dysplasics, from 89.75° to 93.02°. The distraction index varied from 0.06 to 0.4 for normal cats and from 0.1 to 0.45 for the affected cats. The main radiographic evidences of in the cats differed from canine's both in radiographic anatomy and hip dysplasia signs. In cats with normal hip articulations, the femur head can be presented in a "mushroom" form, with less than 50% recovered by the acetabulum, with a slightly increase of the trabecular pattern and with sharped cranial acetabular margin. Among the main radiographic alterations evidenced, the presence of osteophytes at the cranial acetabular margin, the acetabular degeneration provoking from slightly articular incongruence to evident subluxation and a major increase at the trabecular pattern were outstanding features. / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011. / Submitted by Rafael Barcelos Santos (rafabarcelosdf@hotmail.com) on 2011-06-21T17:43:17Z No. of bitstreams: 1 2011_Tatiana Guerrero Marçola.pdf: 1850074 bytes, checksum: a07c4642414da6b648e397f1269c820a (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(tempestade_b@hotmail.com) on 2011-07-03T13:21:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_Tatiana Guerrero Marçola.pdf: 1850074 bytes, checksum: a07c4642414da6b648e397f1269c820a (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-03T13:21:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_Tatiana Guerrero Marçola.pdf: 1850074 bytes, checksum: a07c4642414da6b648e397f1269c820a (MD5) / O vírus da imunodeficiência felina (FIV) é um Retrovírus de distribuição mundial que acomete os felinos domésticos e selvagens. Estima-se que aproximadamente 10% de toda a população mundial de gatos domésticos esteja infectada. Marcadas diferenças existem entre as prevalências mundiais, com índices de 2,5 até 44%. No Brasil há relatos de ocorrência apor meio de diagnósticos moleculares de 14%. A patogenia se apresenta como na AIDS, onde há grande depleção de linfócitos e longo período assintomático, é descrito que muitas doenças oportunistas se aproveitem desta imunossupressão, sendo por essa razão o gato utilizado como modelo animal. As alterações hematológicas são conflitantes, sendo observadas: Anemias, linfopenias, neutrofilias, bem com aumento das proteínas. Hemoplasmas, Toxoplasma gondii e o Vírus da Leucemia Felina (FelV) estão entre as principais co-infecções associadas. Foram realizadas análises moleculares por PCR através de DNA extraídos de sangue de 200 gatos domésticos (Felis catus), de três regiões do Distrito Federal. A ocorrência encontrada foi de 2% para a infecção por FIV, com co-infecção de 100% por hemoplasma, 75% para FelV e 0% para Toxoplasmose. Análises hematológicas demonstraram significância (p<0,05) entre o grupo infectado e não infectado para: Contagem de leucócitos, diferencial absoluto de neutrófilos, proteínas plasmáticas totais e volume corpuscular médio. A análise filogenética evidenciou subtipo B para três dos quatro animais positivos. O estudo demonstrou que a taxa de ocorrência para o vírus no Distrito Federal é bem menor que outros estados do Brasil, que são poucas as alterações hematológicas encontras, sendo que estas não podem ser diferenciadas do vírus ou do hemoplasma e sugere-se que há outro subtipo viral além do B encontrado no Brasil. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Feline Immunodeficiency Virus (FIV) is a Retrovirus of worldwide distribution that affects domestic and wild cats. It is estimated that approximately 10% of the entire world population of domestic cats are infected. Wide differences exist between the prevalence worldwide, with rates of 2.5 to 44%. In Brazil there are reports of occurrence through molecular diagnostics 14%. The pathogenesis is similar as in AIDS, where there are large lymphocyte depletion and long asymptomatic period, it is reported that many opportunistic infections availed of this immunosuppression, and due this fact the cat used as an animal model. Hematological changes are controversial, being observed: Anemia, lymphopenia, neutrophilia, and an increase of the proteins. Hemoplasmas, Toxoplasma gondii and the Feline Leukemia Virus (FeLV) are among the leading co-associated infections. We performed molecular analysis by PCR using DNA extracted from blood of 200 domestic cats (Felis catus), in three regions of the Federal District. The occurrence was 2% for FIV infection, with co-infection by haemoplasma 100%, 75% for FeLV and 0% for toxoplasmosis. Haematological analysis showed significance (p <0.05) between infected and uninfected group to: Leukocyte count, count absolute neutrophil, serum total protein and mean corpuscular volume. The phylogenetic analysis revealed subtype B for three of four positive animals. The study showed that the rate of occurrence for the virus in the Federal District is far less than other states in Brazil, there are few hematological find, and these cannot be differentiated from the virus or haemoplasma and suggests that there are other viral subtype B found in Brazil.

Resumo: A leishmaniose é uma zoonose, causada por protozoários do gênero Leishmania e transmitida por vetores flebotomíneos. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de Leishmania spp. em cães e gatos provenientes de área endêmica e não endêmica para esta doença, através da associação de três técnicas diagnósticas: hemocultura em meio LIT (Liver Infusion Tryptose), Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para Leishmania spp. Foram coletadas aleatoriamente 50 amostras de sangue de cães e 50 amostras de sangue de gatos, procedentes do Centro de Controle de Zoonoses de Campo Grande - MS, onde a leishmaniose visceral canina (LVC) é endêmica, e aleatoriamente de 50 cães e 50 gatos do Canil Municipal e Associação de Proteção aos Animais (APA) de Botucatu - SP, considerada, até o momento, área não endêmica, silenciosa para esta enfermidade. Das 50 hemoculturas de cães procedentes de Botucatu, três (6%) foram positivas e das 50 hemoculturas dos gatos, duas (4%) foram positivas. Em Campo Grande, 29 hemoculturas (58%) de cães foram positivas e as dos gatos apresentaram 100% de negatividade. Quanto à PCR, 100% das amostras de cães e de gatos procedentes de Botucatu, assim como as dos gatos de Campo Grande foram negativas. Das 50 amostras de cães deste município, 36 foram positivas (72%) à PCR. À RIFI obteve-se 100% de negatividade nas amostras dos cães e gatos de Botucatu e 32 cães (64%) e 15 gatos (30%) de Campo Grande foram reagentes. Pelos resultados apresentados, podemos concluir que a contínua vigilância epidemiológica é importante em áreas não endêmicas para leishmaniose, bem como a busca de um diagnóstico seguro em áreas endêmicas, além de maiores estudos sobre o papel dos felinos no ciclo epidemiológico da doença. / Abstract: Leishmaniosis is a zoonosis caused by protozoans of Leishmania genus and is transmitted by phlebotomine vectors. This study was aimed to evaluate the occurrence of Leishmania spp. in dogs and cats from endemic and nonendemic areas by three diagnostic tests: hemoculture in LIT (Liver Infusion Tryptose) media, Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) and Polymerase Chain Reaction (PCR). Fifty blood samples of dogs and fifty of cats from Zoonosis Control Center from Campo Grande, MS, an endemic area for canine visceral leishmaniasis (CVL), were collected randomly, as well as blood samples of dogs and cats from Municipal Kennel and Animal Protection Association (APA) from Botucatu, SP, considered by the moment as freetransmission, non-endemic area for the disease. From 50 hemocultures of the dogs from Botucatu, three (6%) were positive and of the blood of 50 cats, two (4%) were positive. In Campo Grande, 29 hemocultures (58%) were positive for dogs and 100% of the cats were negative for this test. For the PCR detection of Leishmania spp., 100% of the samples from dogs and cats from Botucatu and all the cats from Campo Grande were negative. On the other hand, 36 dogs from Campo Grande were positive (72%) for the PCR. From Botucatu, by the IFAT, 100% of the dogs and cats were non reagent and 32 dogs (64%) and 15 cats (30%) from Campo Grande (MS) were positive for this test. The presented results show that a continuous epidemiological vigilance is important in non-endemic areas for leishmaniasis, as well as the research for an accurate diagnosis in endemic areas, and other studies based on the role of felines in epidemiological life cycle of this disease. / Orientador: Simone Baldini Lucheis / Coorientador: Hélio Langoni / Banca: Ana Luiza Alves Rosa Osório / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Mestre

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Solange Maria Gennari / Banca: Sílvia Helena Venturoli Perri / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Resumo: Os objetivos deste trabalho foram comparar os métodos de diagnóstico por ensaio imunoenzimático (ELISA) de captura e reação em cadeia da polimerase (nested-PCR) à análise morfológica utilizando a técnica de centrífugo-flutuação em água-éter seguida de coloração de Kinyoun modificada (microscopia) para estimar a taxa de eliminação de oocistos de Cryptosporidium spp. na população de gatos domiciliados na zona urbana do Município de Araçatuba, São Paulo. O potencial zoonótico do coccídio isolado em fezes deste hospedeiro foi investigado por meio de caracterização molecular. Um total de 138 amostras fecais foi colhido de forma aleatória simples e proporcional à população de gatos de cada uma das sete áreas censitárias pertencentes à zona urbana do município. Não houve discordância entre ELISA de captura e microscopia (p = 1,0000) nem entre nested-PCR e microscopia (p = 0,1094); entretanto, o grau de concordância variou de substancial (Kappa = 0,7948) a moderado (Kappa = 0,4647), respectivamente, entre estes métodos. Especificidade da nested-PCR e do ELISA de captura foi semelhante; entretanto, a nested-PCR apresentou menor sensibilidade, justificada pela associação entre a intensidade da densidade óptica e a amplificação da subunidade 18S do rRNA. Detectamos oocistos de Cryptosporidium spp. em 9,4% das amostras por pelo menos dois métodos diagnósticos. Com intervalo de 95% de confiança, estimamos que a taxa de eliminação de oocistos desse protozoário na população felina do município variou de 4,5% a 14,3%. Todos os isolados sequenciados apresentaram 100% de similaridade com Cryptosporidium felis. Concluímos que gatos domiciliados possam contribuir para a contaminação ambiental de um município, ainda que C. felis não seja o principal agente etiológico da criptosporidiose em seres humanos / Abstract: The aim of this work was to compare the diagnostic methods by capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and polymerase chain reaction (nested-PCR) to morphological analysis using the technique of flotation in water-ether followed by modified Kinyoun staining (microscopy) to estimate the shedding rate of Cryptosporidium spp. in stool samples of cats domiciled in urban area of municipality of Araçatuba, São Paulo State. Zoonotic potential of coccidian isolated in feces was investigated by molecular characterization. A total of 138 stool samples were collected random and proportionally from to cat population in each of the seven census areas belonging to the urban area. There was no disagreement between capture ELISA and microscopy (p = 1.0000) or between nested-PCR and microscopy (p = 0.1094); however, the degree of agreement varied from substantial (Kappa = 0.7948) to moderate (Kappa = 0.4647), respectively, in these diagnostic methods. Specificity of nested-PCR and ELISA capture were similar; however, the nested-PCR showed lower sensitivity, justified by the association between the intensity of the optical density and amplification of 18S rRNA subunit. We detected Cryptosporidium spp. in 9.4% of the samples by at least two diagnostic methods. With the 95% confidence, we estimate that shedding rate of Cryptosporidium oocysts ranged from 4.5% to 14.3% in the feline population of Araçatuba. All isolates sequenced showed 100% similarity with Cryptosporidium felis. We conclude that cats domiciled can contribute to environmental contamination of a municipality, although C. felis is not the primary etiologic agent of cryptosporidiosis in humans / Doutor

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-08Bitstream added on 2014-11-10T11:57:46Z : No. of bitstreams: 1 000791056.pdf: 1521345 bytes, checksum: 03c061fa4f15b07c0492cc0bf73a460a (MD5) / Os objetivos deste trabalho foram comparar os métodos de diagnóstico por ensaio imunoenzimático (ELISA) de captura e reação em cadeia da polimerase (nested-PCR) à análise morfológica utilizando a técnica de centrífugo-flutuação em água-éter seguida de coloração de Kinyoun modificada (microscopia) para estimar a taxa de eliminação de oocistos de Cryptosporidium spp. na população de gatos domiciliados na zona urbana do Município de Araçatuba, São Paulo. O potencial zoonótico do coccídio isolado em fezes deste hospedeiro foi investigado por meio de caracterização molecular. Um total de 138 amostras fecais foi colhido de forma aleatória simples e proporcional à população de gatos de cada uma das sete áreas censitárias pertencentes à zona urbana do município. Não houve discordância entre ELISA de captura e microscopia (p = 1,0000) nem entre nested-PCR e microscopia (p = 0,1094); entretanto, o grau de concordância variou de substancial (Kappa = 0,7948) a moderado (Kappa = 0,4647), respectivamente, entre estes métodos. Especificidade da nested-PCR e do ELISA de captura foi semelhante; entretanto, a nested-PCR apresentou menor sensibilidade, justificada pela associação entre a intensidade da densidade óptica e a amplificação da subunidade 18S do rRNA. Detectamos oocistos de Cryptosporidium spp. em 9,4% das amostras por pelo menos dois métodos diagnósticos. Com intervalo de 95% de confiança, estimamos que a taxa de eliminação de oocistos desse protozoário na população felina do município variou de 4,5% a 14,3%. Todos os isolados sequenciados apresentaram 100% de similaridade com Cryptosporidium felis. Concluímos que gatos domiciliados possam contribuir para a contaminação ambiental de um município, ainda que C. felis não seja o principal agente etiológico da criptosporidiose em seres humanos / The aim of this work was to compare the diagnostic methods by capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and polymerase chain reaction (nested-PCR) to morphological analysis using the technique of flotation in water-ether followed by modified Kinyoun staining (microscopy) to estimate the shedding rate of Cryptosporidium spp. in stool samples of cats domiciled in urban area of municipality of Araçatuba, São Paulo State. Zoonotic potential of coccidian isolated in feces was investigated by molecular characterization. A total of 138 stool samples were collected random and proportionally from to cat population in each of the seven census areas belonging to the urban area. There was no disagreement between capture ELISA and microscopy (p = 1.0000) or between nested-PCR and microscopy (p = 0.1094); however, the degree of agreement varied from substantial (Kappa = 0.7948) to moderate (Kappa = 0.4647), respectively, in these diagnostic methods. Specificity of nested-PCR and ELISA capture were similar; however, the nested-PCR showed lower sensitivity, justified by the association between the intensity of the optical density and amplification of 18S rRNA subunit. We detected Cryptosporidium spp. in 9.4% of the samples by at least two diagnostic methods. With the 95% confidence, we estimate that shedding rate of Cryptosporidium oocysts ranged from 4.5% to 14.3% in the feline population of Araçatuba. All isolates sequenced showed 100% similarity with Cryptosporidium felis. We conclude that cats domiciled can contribute to environmental contamination of a municipality, although C. felis is not the primary etiologic agent of cryptosporidiosis in humans

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-26Bitstream added on 2014-06-13T20:35:28Z : No. of bitstreams: 1 braga_arc_me_botfmvz.pdf: 1750631 bytes, checksum: b95977e138bb7661fe4ad8f78d46422b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose é uma zoonose, causada por protozoários do gênero Leishmania e transmitida por vetores flebotomíneos. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de Leishmania spp. em cães e gatos provenientes de área endêmica e não endêmica para esta doença, através da associação de três técnicas diagnósticas: hemocultura em meio LIT (Liver Infusion Tryptose), Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para Leishmania spp. Foram coletadas aleatoriamente 50 amostras de sangue de cães e 50 amostras de sangue de gatos, procedentes do Centro de Controle de Zoonoses de Campo Grande - MS, onde a leishmaniose visceral canina (LVC) é endêmica, e aleatoriamente de 50 cães e 50 gatos do Canil Municipal e Associação de Proteção aos Animais (APA) de Botucatu - SP, considerada, até o momento, área não endêmica, silenciosa para esta enfermidade. Das 50 hemoculturas de cães procedentes de Botucatu, três (6%) foram positivas e das 50 hemoculturas dos gatos, duas (4%) foram positivas. Em Campo Grande, 29 hemoculturas (58%) de cães foram positivas e as dos gatos apresentaram 100% de negatividade. Quanto à PCR, 100% das amostras de cães e de gatos procedentes de Botucatu, assim como as dos gatos de Campo Grande foram negativas. Das 50 amostras de cães deste município, 36 foram positivas (72%) à PCR. À RIFI obteve-se 100% de negatividade nas amostras dos cães e gatos de Botucatu e 32 cães (64%) e 15 gatos (30%) de Campo Grande foram reagentes. Pelos resultados apresentados, podemos concluir que a contínua vigilância epidemiológica é importante em áreas não endêmicas para leishmaniose, bem como a busca de um diagnóstico seguro em áreas endêmicas, além de maiores estudos sobre o papel dos felinos no ciclo epidemiológico da doença. / Leishmaniosis is a zoonosis caused by protozoans of Leishmania genus and is transmitted by phlebotomine vectors. This study was aimed to evaluate the occurrence of Leishmania spp. in dogs and cats from endemic and nonendemic areas by three diagnostic tests: hemoculture in LIT (Liver Infusion Tryptose) media, Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) and Polymerase Chain Reaction (PCR). Fifty blood samples of dogs and fifty of cats from Zoonosis Control Center from Campo Grande, MS, an endemic area for canine visceral leishmaniasis (CVL), were collected randomly, as well as blood samples of dogs and cats from Municipal Kennel and Animal Protection Association (APA) from Botucatu, SP, considered by the moment as freetransmission, non-endemic area for the disease. From 50 hemocultures of the dogs from Botucatu, three (6%) were positive and of the blood of 50 cats, two (4%) were positive. In Campo Grande, 29 hemocultures (58%) were positive for dogs and 100% of the cats were negative for this test. For the PCR detection of Leishmania spp., 100% of the samples from dogs and cats from Botucatu and all the cats from Campo Grande were negative. On the other hand, 36 dogs from Campo Grande were positive (72%) for the PCR. From Botucatu, by the IFAT, 100% of the dogs and cats were non reagent and 32 dogs (64%) and 15 cats (30%) from Campo Grande (MS) were positive for this test. The presented results show that a continuous epidemiological vigilance is important in non-endemic areas for leishmaniasis, as well as the research for an accurate diagnosis in endemic areas, and other studies based on the role of felines in epidemiological life cycle of this disease.