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Biologia comparativa de Rhodnius neglectus e Rhodnius robustus (Triatominae) sob condições de laboratório e infecção experimental pelo Trypanosoma rangeli com ênfase nos aspectos ultraestruturais das glândulas salivares infectadas

Santana, Daniella Barreto January 2006 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-10-31T16:11:40Z No. of bitstreams: 1 2006_Daniella Barreto Santana.pdf: 1808092 bytes, checksum: 6050e51aee3d99b95f04cb15e837f7f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-07-08T13:00:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Daniella Barreto Santana.pdf: 1808092 bytes, checksum: 6050e51aee3d99b95f04cb15e837f7f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-08T13:00:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Daniella Barreto Santana.pdf: 1808092 bytes, checksum: 6050e51aee3d99b95f04cb15e837f7f5 (MD5) Previous issue date: 2006 / Triatomíneos do gênero Rhodnius: R. neglectus e R. robustus, vetores naturais do Trypanosoma rangeli, foram identificados utilizando-se as chaves taxonômicas de Lent & Wygodzinsky, 1979 e a morfometria geométrica das asas. Este último confirmou sua utilidade como parâmetro de identificação taxonômica em triatomíneos do gênero Rhodnius. No estudo comparativo das estatísticas vitais e dos aspectos de comportamento alimentar, os triatomíneos das duas espécies foram observados diariamente para se estabelecer: (i) o período de desenvolvimento dos estádios ninfais; (ii) percentual de mortalidade; (iii) detecção do hospedeiro (tempo de aproximação dos triatomíneos ao hospedeiro vertebrado experimental); (iv) número de tentativas de picadas dos insetos no hospedeiro; (v) tempo total do repasto sanguíneo; (vi) índice de picadas; (vii) lapso entre o final do repasto e a primeira defecação; e (viii) quantidade de sangue ingerido. Comparando-se as duas espécies, R. neglectus apresentou um período ninfal significativamente menor que R. robustus, havendo diferença significativa (p<0,001) para todos os estádios, exceto para Ninfa V. Com relação ao comportamento alimentar, as duas espécies apresentaram os parâmetros bem similares, exceto para o número de picadas onde R. neglectus se apresentou significativamente maior para as Ninfas IV e V, e para a quantidade de sangue ingerido onde R. robustus apresentou uma média de ingestão significativamente maior que R. neglectus. Em R. robustus, registrou-se a presença dos dois pares de glândulas (D1 e D2), característica da espécie estudada. Para verificar o potencial vetorial de T. rangeli nas espécies de triatomíneos, utilizou-se três procedimentos laboratoriais com a cepa SC-58: infecção via alimentação em camundongo infectado, via inoculação intracelômica e via xenodiagnóstico artificial, mas não houve infecção das glândulas salivares. Após diversas tentativas, T. rangeli infectou a hemolinfa em apenas dois triatomíneos, sem progresso de infecção. Com a cepa LP-01, isolada recentemente de R. neglectus naturalmente infectado, realizou-se uma tentativa de infecção via alimentação em camundongo infectado, sem demonstrar invasão hemolinfática. Na infecção in vitro das glândulas salivares, foi utilizada uma glândula controle (sem infecção) e mais quatros glândulas, infectadas por quatro tempos distintos (30 minutos, 1, 3 e 24 horas), que foram processadas e levadas ao Microscópio Eletrônico de Varredura para verificar e documentar o processo inicial de adesão e penetração na membrana basal. Após o processamento, observou se que apenas com 30 minutos e 1 hora de infecção, flagelados encontravam-se aderidos na membrana basal, formando “grumos” com aparência de estar penetrando por orifícios grandes e visíveis. Isto poderia sugerir então que de alguma maneira, os flagelados lesam a membrana basal, com a finalidade de atravessá-la e ganhar passo às células do epitélio glandular. / Rhodnius neglectus and Rhodnius robustus (Hemíptera, Triatominae), two species from the genus Rhodnius, were initially identified using the well known taxonomical keys described by Lent and Wygodzinsky ( 1979) and, in addition, techniques of wings geometric morphometry. Both approaches resulted in good agreement confirming the value of the last one in accurate identification of species of Rhodnius spp .Comparative studies on experimental life tables and feeding behavior of R. neglectus and R. robustus important natural vectors of Trypanosoma rangeli in Brazil, were carried out in order to establish: (i) time instars development (ii) mortality (iii) source host detection (iv) average number of bugs’ bite on host (v) bloodmeal spending time (vi) biting rate (vii) elapsed time between bloodmeal intake and first defecation (viii) total bloodmeal ingested . Main results of such comparison were: R. neglectus have shown a faster development of nymphs than R. robustus during all different stages except nymph V ( p<0,001). Regarding feeding behavior, if on one hand R neglectus demonstrated a higher number of bites in instar IV and V, on the other hand R. robustus have shown higher average of blood uptake . Two pairs of salivary glands (D1 and D2) were recorded in R. robustus and histologically described .The vector potential of the two species under study were pursued with challenges using two strains of T. rangeli (strains SC58 and LP01). Attempts of experimental infection using mouse infected with the flagellate, artificial xenodiagnosis and intracoelomic injections of cultures of the flagellate, were carried out with partial intestinal and haemolymphatic infections. No invasion of salivary glands were obtained in spite of our repeated efforts. Alternatively, salivary glands “in vitro infections” procedures, in different time-point( 30’, 1 hour, 24 hours) were performed. Studies on infected glands by light microscopy and scanning electron microscopy (SME) were done. Striking results were the recording of parasites recognition, adhesion and , probably, initial penetration through holes /orifices apparently produce by the flagellum of T. rangeli trypomastigotes/epimastigotes on the basal membrane surface. Our interpretation is that the parasite somehow open holes through the basal membrane of the salivary glands when they form clusters of flagellum first, to gain entry into the adjacent glandular epithelium.
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Identificação, clonagem e seqüenciamento de proteína quinases na saliva de Triatoma infestans

Cordeiro, Ciro Davi 05 July 2011 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina,2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-10-17T09:46:53Z No. of bitstreams: 1 2011_CiroDaviCordeiro.pdf: 3713229 bytes, checksum: a14347ffe78d400f239544c332dd71c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2011-10-18T11:21:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_CiroDaviCordeiro.pdf: 3713229 bytes, checksum: a14347ffe78d400f239544c332dd71c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-18T11:21:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_CiroDaviCordeiro.pdf: 3713229 bytes, checksum: a14347ffe78d400f239544c332dd71c5 (MD5) / Os triatomíneos são insetos hematófagos transmissores da doença de Chagas ao homem. Durante a picada, injetam saliva que contém moléculas com ações fisiológicas diversas. O estudo destas moléculas tem ajudado a elucidar como os insetos inibem mecanismos de defesa do hospedeiro em seu favor. Além disso, a caracterização dos componentes salivares pode produzir conhecimento útil para produção de novas drogas. Encontrou-se recentemente evidências de que existem quinases na saliva de Triatomíneos. Neste estudo,foram identificadas e seqüenciadas regiões codificadoras de arginina quinase(AK) e nucleosídeo difosfato quinase da glândula salivar de Triatoma infestans.A AK foi clonada, expressa em bactéria e utilizada em imunização para produção de anticorpos específicos. Ensaios de Western blot permitiramconfirmar a presença de AK na saliva de T. infestans, Panstrongylus megistuse Rhodnius neglectus, na forma de dímeros. Em contrapartida, identificou-se AK monomérica na glândula salivar. A enzima tem potencial alergênico que pode contribuir para reações de hipersensibilidade causada pela picada de triatomíneos. Ainda não se sabe se a AK exerce papel funcional na hematofagia, mas a diferença entre a proteína citosólica e secretada indica que pode haver valor adaptativo para os dímeros de AK salivar. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Triatomines are haematophagous insects that transmit Chagas’ disease tohuman populations. During blood feeding, they inject saliva composed of physiologically active molecules. The research of saliva’s molecules provided better understanding of insect’s adaptations to inhibit host’s defenses mechanisms. Besides, molecular characterization may provide useful knowledge to new drugs development. Recent evidences indicated the possibility that kinases could be secreted by triatomine’s salivary glands. This research identified and sequenced coding regions of arginine kinase (AK) and nucleoside diphosphate kinase from salivary glands of Triatoma infestans. AKwas cloned, expressed on bacteria and used in immunizations to specificantibody production. Through western blot assays we confirmed dimeric AKsecretion in saliva of T. infestans, Panstrongylus megistus and Rhodniusneglectus. However, monomeric AK was identified on the salivary glands. Theenzyme is a potential allergenic that could contribute to hypersensibility reactions associated to triatomines’ bites. Although the role of AK inhaematophagy is still unknown, the difference observed between the cytosolicand secreted AKs indicates that the dimeric AK in saliva may have an adaptive value to the bug.
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Avaliação pós-radioterápica de glândulas salivares maiores

Galli, Susane D'Arc Barcelos Britto January 2013 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-03-17T11:49:28Z No. of bitstreams: 1 2013_SusaneDarcBarcelosBrittoGalli.pdf: 8139144 bytes, checksum: 9f6e793033aa67f4df1faa7cb9b07eb0 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-03-17T12:53:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_SusaneDarcBarcelosBrittoGalli.pdf: 8139144 bytes, checksum: 9f6e793033aa67f4df1faa7cb9b07eb0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-17T12:53:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_SusaneDarcBarcelosBrittoGalli.pdf: 8139144 bytes, checksum: 9f6e793033aa67f4df1faa7cb9b07eb0 (MD5) / Objetivo: Este estudo objetivou avaliar a xerostomia por meio de questionário e objetivamente analisou-se o volume das glândulas salivares maiores pela TC e a função e excreção por meio de cintilografia, antes e após a radioterapia. Materiais e Métodos: Neste estudo prospectivo foram selecionados 28 pacientes, 22 homens e 6 mulheres, com idade que variou entre 18 e 75 anos, com diagnóstico histopatológico de carcinoma espinocelular na região de cabeça e pescoço. Os pacientes foram examinados clínica e radiograficamente para verificar as condições bucais antes da radioterapia. Todos receberam atendimento odontológico. Para avaliar subjetivamente a xerostomia utilizou-se um questionário, a TC para avaliar o volume das glândulas salivares maiores e a cintilografia para análise da função e excreção, antes e após a radioterapia. Resultados: Da aplicação do questionário de xerostomia: foi possível verificar que os respondentes do questionário de xerostomia apresentaram tendência à elevação de seus escores de qualidade de vida ao final do tratamento, quando comparados ao início do tratamento. A elevação dos escores indica a alteração da qualidade de vida, considerada inicialmente como regular passando para ruim ao final do tratamento. Sobre a questão relativa ao gradiente de secura, verificou-se que inicialmente os pacientes classificavam como muito confortável e passaram a sentir, ao final do tratamento, um gradiente de secura moderado. Por fim, em relação ao RTOG ( Radiation Therapy Oncology Group), verificou-se a alteração significativa dos gradientes dos pacientes. Foi possível analisar que inicialmente os pacientes classificaram-se sem alterações, e ao final do tratamento, passaram a classificação para grau II tendendo a grau III. Os exames tomográficos revelaram que ao avaliar as dimensões das glândulas salivares por meio de tomografia, foi possível verificar que, em comparação ao período inicial, houve redução significativa do volume médio das glândulas parótidas e submandibulares (exceto as esquerdas) após o término do tratamento radioterápico. Em relação à função e excreção (exames cintilográficos): ao avaliar a função das glândulas parótidas direita e esquerda foi possível verificar que houve elevação significativa dos escores. Já nas glândulas submandibulares direitas verificou-se que estas passaram de função normal, observada no início do tratamento, para uma disfunção leve. Um comportamento semelhante fora observado nas glândulas submandibulares esquerdas, porém apenas uma tendência à significância estatística. Em relação à excreção, verificou-se que houve uma redução das glândulas, sendo que apenas a glândula submandibular esquerda apresentou redução estatisticamente significativa de sua excreção. Conclusão: Os pacientes apresentaram alterações estatisticamente significativas nas glândulas salivares maiores após a radioterapia conformacional nas três modalidades de análise. Pela facilidade de aplicação do questionário esse estudo propõe como protocolo de atenção ao paciente submetido à radioterapia, no contexto do acompanhamento multidisciplinar antes, durante e depois da radioterapia. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Objectives: This study has the aim to evaluate xerostomia, by means of a questionnaire and to objectively analyze the volume of major salivary glands by CT (computerized tomography), and the function and excretion by means of scintigraphy before and after radiotherapy. Materials and Methods: In this prospective study, 28 patients between 18 and 75 years old were selected: 22 men and 6 women, with a histopathologic diagnosis of head and neck squamous cell carcinoma. The patients were clinically and radiographically examined to verify mouth conditions before radiotherapy. All patients received dental treatment. A quantitative analysis of salivary flow was made as well as a subjective analysis of xerostomia, using questionnaires. The CT was used to evaluate the volume of the major salivary glands and the scintigraphy for the analysis of function and excretion before and after radiotherapy. Results: From the xerostomia questionnaire, it was possible to verify that those who answered it showed a tendency of a significant raise of their scores on life quality in the treatment end when compared to the treatment start. The score raise shows the change of life quality, which was initially considered as regular and was bad in the treatment end. In relation to the mouth dryness gradient question, it was verified that, initially, the patients classified it as very comfortable and after as a moderate mouth dryness gradient in the treatment end. Finally, in relation to the RTOG (radiation toxicity group), a significant change was verified in patients’ gradient. It was possible to analyze that, initially, the patients classified themselves as having no changes, and in the end of treatment, they changed their classification to level II, tending to III. The tomographic exams revealed: when evaluating the salivary glands dimensions by means of tomography, it was possible to verify that, in comparison to the initial period, there was a significant reduction of the averages of parotid and submandibular glands (except the left one) after the end of radiotherapy treatment. In relation to function and excretion (scintigraphic exams): when evaluating the function of right and left parotid glands, it was possible to verify that there was a significant score rise. However, in relation to the right submandibular glands, it was verified that these ones changed from normal function, as observed in the treatment start, to light dysfunction. A similar behavior has been observed in the left submandibular glands, although only a tendency to significant statistics was noticed. In relation to excretion, it was verified that there was a tendency to a reduction by the glands, being the left submandibular gland the only one to show that there was a statistically significant reduction of its excretion. Conclusion: The patients showed changes that were statistically significant in major salivary glands after conformational radiotherapy in the three kinds of analysis. Due to the fact that it was easy to apply the questionnaire, this study proposes this questionnaire as a protocol of patient attention to those subjected to the radiotherapy, in the context of multidisciplinary follow-up before, during and after radiotherapy.
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Avaliação do efeito radioprotetor do selenito de sodio em glandulas parotidas de ratos

Tuji, Fabricio Mesquita 03 August 2018 (has links)
Orientadores: Solange Maria de Almeida, Silvana Pereira Barros / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:33:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tuji_FabricioMesquita_D.pdf: 8010513 bytes, checksum: 9ffd27e3ef82d3c96c356a87c4a36e45 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado
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Influencia da ciclofosfamida e do metotrexato sobre glandulas submandibulares estimuladas pela amputação dos incisivos inferiores em ratos machos castrados tratados pelo pindolol ou reserpina

Lima Junior, Gerson Mendes de 19 July 2018 (has links)
Orientador: Maria de Lourdes Garboggini da Gama / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-19T23:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LimaJunior_GersonMendesde_D.pdf: 2064230 bytes, checksum: dcd99a6419c6e3d90d3a3bf64dba2237 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Foi estudado o efeito da amputação dos incisivos inferiores s'obre as glândulas submandibulares de ratos machos castrados. Demonstramos que nestes animais, injetados com metotrexato Q,75 mg/kg, i.p., e submetidos ã amputação dos in cisivos inferiores',ocorre aumento do peso relativo das glându1as' submandibu1ares - não ocorrendo o mesmo em ratos cas- , trados que só .sofr'eram amputação dos incisivos inferiores. Assim, utilizando-se ratos que foram castrados aos 30 dias de idade, prQcedemQ~ a amputação dos incisivos inferiores e administramosDurateston 250R. Os resultados indicam um peso gla~ dular relativo menor para as glândulas dos ratos que receberam a adminis.tração da referida droga, por via i .m.. Animais machos castr'ados tambem foram submetidos à administração de metotrexato ou ci.clofosfamida e ã amputação única dos incisivos inferiores e administração de reserpina ou pindolol, com a finalidade de verificar se tais drogas bloqueadoras do simpático impediriam os aumentos relativos das glândulas submandibulares, que eram retiradas e pesadas no 79 dia após a amputação dos incisivos inferiores. Nos animais que se injetou matotrexato mais reserpina e se fez amputação dos incisivos inferiores, não houve significante aumento ou diminuições dos pesos glandulares relativos quando comparado com os contro- 1es, apesar de o peso glandular medio ter sido menor. Já os ratos i..njetadoscom reserpina 25 mg/kg e ciclofosfamida, apre sentaram pesos relativos maiores que os ratos do grupo injetados com r'e.serpinae metotrexato e com incisivos inferiores am- putados. Comparando-se ratos castrados, nos quais se injetava pindolol mais ciclofosfamida, não foi verificado diferença sig-. nificante entre os pesos glandulares médios destes ratos e do grupo controle, isto ê, ratos castrados, com incisivos inferiores amputados mais administração de pindolol. Os resultados dos experimentos foram submetidos ã análise de variância e ao teste de Tuk.ey / Abstract: Not informed. / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Odontologia
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Influência do Estado Diabético Sobre a Atividade e Distribuição das Enzimas Hexoquinase e Fosfofrutoquinase-1 nas Glândulas Submandibular e Parótida de Ratos / Influence of diabetes on the activity and distruition of the enzimes hexokinase and phosphofructokinase of the rat parotid and submandibular gland

Nogueira, Fernando Neves 07 August 2001 (has links)
Na presente investigação estudamos a possível influência da falta da insulina sobre a atividade de duas enzimas importantes para a via glicolítica: a hexoquinase (HK) e a fosfofrutoquinase-1 (PFK-1), nas glândulas submandibular (GLSM) e parótida (GLPA) de ratos. Para isso, em ratos mantidos em jejum durante aproximadamente 15 horas foi injetado, via intraperitonial, estreptozotocin dissolvido em tampão citrato 0,1M pH 4,5 (60 mg/Kg de peso corporal). 48 horas após a indução, o sangue dos animais foi coletado e a glicemia determinada. Somente aqueles ratos que apresentaram glicemia igual ou acima de 350mg de glicose/100 ml de sangue foram utilizados. Os animais foram sacrificados 30 dias após a indução do estado diabético, por traumatismo craniano. As GLSM e GLPA foram removidas e analisadas para atividade e distribuição das enzimas HK e PFK-1. A enzima HK foi determinada no citosol (fração solúvel) e ligada a mitocôndria (fração ligada). A enzima PFK-1 foi determinada no citosol (fração solúvel) e ligada ao citoesqueleto (fração ligada) em dois pHs: pH 6,9, sujeito a regulação alostérica e pH 8,2, em que mostra atividade máxima. Na GLPA observamos aumento da atividade da HK tanto na fração solúvel (aproximadamente 33%) quanto na fração ligada a mitocôndria (aproximadamente 85%). Relativamente a isoenzimas de HK, não verificamos alteração no estado diabético. A atividade da enzima PFK-1 na GLPA não apresentou alterações quer considerando a forma sujeita a regulação alostérica, quer a forma com atividade máxima e portanto, não sujeita a regulação. Na GLSM constatamos uma redução da enzima HK ligada a mitocôndria de aproximadamente 74%, não havendo alteração da forma determinada no citosol (forma solúvel). Relativamente às formas isoenzimáticas, verificamos a perda de uma forma isoenzimática tanto na fração solúvel quanto na fração ligada. Por outro lado, observamos um aumento da atividade da PFK-1 da fração solúvel de aproximadamente 50% quando determinada em pH 6,9, que reflete a forma regulada alostericamente, e de aproximadamente 84% quando determinada em pH 8,2 e, portanto, não sujeito a regulação. Contrariando ao esperado, o conteúdo de Fru-2,6-P2 nas GLSM de ratos diabéticos apresentou redução de aproximadamente 42% enquanto a atividade da PFK-2 também apresentou redução. / We have studied in the present investigation a possible influence of the diabetic state of the rats on the activity of two important enzymes of the glycolitic pathway, namely, the HK and PFK-1 of the submandibular and parotid gland. The diabetic state was induced by an injection of streptozotocin (60mg/Kg body weight) dissolved in 0,1M citrate buffer pH 4,5 in rats overnight fasted. Forty-eight hours after the injection, blood was collected and the glucose determined. Only those animals presenting a blood glucose equal or above 350mg glucose/100ml blood we used in this experiment. The animals were sacrificed by cranial traumatism, thirty days after the induction of the diabetes, the submandibular and parotid glands were removed and analyzed for activity and distribution of the enzymes HK and PFK-1. The activity of the enzyme HK was determined in the cytosol (soluble fraction) and bound to mitochondria (solubilized fraction). The activity of the enzyme PFK-1 was determined in the cytosol (soluble fraction) and bounded to cytoscheletal (bound fraction)at two pHs, pH 6,9 that respond to allosteric regulation and pH 8,2 in which it show maximum activity. In the parotid gland it was observed an increase in the HK activity in both fractions, soluble and bond to mitochondria, of about 33% and 85% respectively. It was not possible to observe alterations in the isoenzymes profile. The activity of PFK-1 in the parotid gland showed no variation either considering the soluble fraction on the bound form, at both pHs in which it was determined. In the submandibular gland, it was verified a reduction of the bound HK of about 74%, but no variation in the soluble form. Concerning the isoenzymes, it was observed the disappearance of an isoenzyme in both fraction. On the other hand, we observed an increase in the activity of PFK-1 of the soluble fraction of about 50%, when determined at pH 6,9, pH in which it respond to allosteric control, and about 84% when determined at pH 8,2. Contrary to what it was expected, the content of Fru-2,6-P2 were reduced in the submandibular gland of diabetic rats.
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Estudo imuno-histoquímico da co-expressão de citoqueratinas, vimentina e actina em neoplasias de glândula salivar /

Carvalho, Yasmin Rodarte. January 1998 (has links)
Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Luiz Antonio Guimarães Cabral / Banca: Ney Soares de Araujo / Banca: Ronaldo Maia Melhado / Banca: Vera Cavalcanti de Araujo / Resumo: Os tumores de glândulas salivares humanas originados do ducto intercalar apresentam grande variação histológica e citológica, atribuída principalmente à presença da celula mioepitelial. Neste estudo, pesquisou-se a presença dos filamentos intermediàrios vimentina e citoqueratina, de microfilamentos de actina e do antígeno epitelial de membrana (EMA), em 30 neoplasias originadas do ducto intercalar: 5 adenomas pleomórficos, 3 adenomas de celulas basais, 5 mioepiteliomas, 7 carcinomas adenóide císticos (CAC) e 10 adenocarcinomas polimorfos de baixo grau de malignidade (APBGM), com o intuito de verificar o grau de diferenciação das células neoplásicas e uma possível relação da diferenciação mioepitelial com a presença de secreção intra-luminal. Foram realizadas reações imuno-histoquímicas para dupla evidenciação de antígenos. Nas neoplasias em que há diferenciação para ducto intercalar (adenoma pleomórfico, adenoma de células basais e CAC), as células luminais expressam as citoqueratinas 7, 8, 18, 19 e eventualmente co-expressam a citoqueratina 14. Alguns ductos apresentam celulas luminais positivas para EMA, especialmente quando há secreção em seu lúmen. As células externas das estruturas ductais e demais células com características mioepiteliais expressam vimentina e co-expressam eventualmente actina e/ou citoqueratina 14, sendo sempre negativas para as demais citoqueratinas e para EMA. A co-expressao de actina, vimentina e citoqueratina 14, nas células externas das estruturas ductais, e mais comum quando a célula luminal é positiva para EMA. As células plasmocitóides, presentes no mioepitelioma e no adenoma pleomórfico, expressam vimentina e raramente as citoqueratinas 7, 8, 18 e 19, eventualmente co-expressando a citoqueratina 14, e são negativas para os outros antígenos pesquisados. Nos tumores em que não há diferenciação para ducto intercalar (APBGM e adenoma de células basais sólido)... / Abstract: Human salivary gland tumors originated from intercalated ducts present a broad range of histologic and cytologic patterns, mainly due to the presence of myoepithelial cells. The aim of this study is to verify the differentiation grade of neoplastic cells and a possible relation between myoepithelial cell differentiation and the presence of luminal secretory contents. The expression of vimentin and cytokeratin (CK) intermediate filaments, actin myofilament and epithelial membrane antigen (EMA) was investigated by double labeling immunocytochemical technique, in thirty salivary gland neoplasms: 5 pleomorphic adenomas, 5 myoepitheliomas, 3 basal cell adenomas, 7 adenoid cystic carcinomas (ACC) and 10 polimorphous low grade adenocarcinomas (PLGA). Tumors with intercalated duct differentiation (pleomorphic adenomas, basal cell adenomas and ACC) express CKs 7, 8, 18 and 19 in the luminal cells and coexpress eventually CK14 with these CKs. Some luminal cells stained with anti-EMA antibody, mainly where a secretory content in the lumen was observed. Outer ductal cells and other myoepithelial-like cells express vimentin, sometimes coexpressing actin and/or CK14 with vimentin. Plasmacytoid cells in myoepitheliomas and pleomorphic adenomas express vimentin and rarely CKs 7, 8, 18 and 19, sometimes coexpressing these CKs with CK14 but they are negative for the remaining antigens. Tumors without intercalated duct differentiation (solid basal cell adenoma and PLGA) express vimentin and CKs 7, 8, 14 and 18, sometimes coexpressing CKs 8 and 18 with CK14. In conclusion, in tumors with intercalated duct differentiation, myoepithelial cells express vimentin and sometimes coexpress actin and/or CK14 with vimentin, never coexpressing other CKs with vimentin. CK14 and actin are independently expressed by myoepithelial cells, so their expression is probably induced by different stimulus. However, the secretory function of luminal cells, visualized by EMA staining,....
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Expressão imuno-histoquímica de metaloproteinase de matriz-9 (MMP-9) e de inibidor tecidual de metaloproteinase-1 (TIMP-1) em neoplasias de glândulas salivares /

Guterres, Micheline Bica January 2012 (has links)
Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Coorientador: Luiz Eduardo Blumer Rosa / Banca: Adriana Aigotti Haberbeck Brandão / Banca: Carlos Eduardo Dias Colombo / Resumo: Os tumores de glândulas salivares apresentam uma grande diversidade celular, morfológica e de comportamento, tornando muitas vezes difícil seu diagnóstico, tratamento e prognóstico. Um componente importante desses tumores é a matriz extracelular, cuja remodelação é regulada por enzimas como as metaloproteinases da matriz (MMPs) e seus inibidores teciduais (TIMPs). O objetivo deste estudo foi avaliar a presença e expressão de MMP-9 e TIMP-1 em neoplasias de glândulas salivares. Foram estudados 20 casos de adenoma pleomórfico (AP), 05 de mioepitelioma (MIO), 17 de carcinoma mucoepidermóide (CME), 10 de adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade (APBG) e 08 de carcinoma adenóide cístico (CAC), que foram selecionados dos arquivos do laboratório de Patologia Cirúrgica da FOSJC/UNESP. O material foi submetido à reação imuno-histoquímica para detecção de MMP-9 e TIMP-1, pelo método da estreptavidina-biotina peroxidase. Foi feita avaliação semiquantitativa da marcação e os dados foram submetidos à analise estatística descritiva e inferencial utilizando o programa Minitab (versão 16.0). Foram aplicados os testes Mann-Whitney e de sinais de postos de Wilcoxon, com nível de significância de 5%. Verificou-se que existe variação da expressão dos marcadores entre as diversas estruturas de cada lesão, com predomínio de TIMP-1 sobre MMP-9. Entre as neoplasias, observou-se maior expressão de TIMP-1 no AP, no CME e no CAC e de MMP-9 no MIO e no APBG, porém, sem diferença estatisticamente significante. Na comparação da marcação para cada anticorpo, entre lesões benignas e malignas, não se observou diferença estatisticamente significativa. Concluiu-se que a maioria das neoplasias de glândula salivar apresenta MMP-9 e TIMP-1 e que o grau de expressão dessas proteínas é... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The salivary gland tumors present very diverse cellular morphology and behavior, often making their diagnosis, treatment and prognosis difficult. An important component of tumors is the extracellular matrix, which is regulated by remodeling enzymes such as matrix metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TIMPs). The objective of this study was to evaluate the role of MMP-9 and TIMP-1 in salivary gland neoplasms. We studied 20 pleomorphic adenomas (PA), 05 myoepitheliomas (MIO), 17 mucoepidermoid carcinomas (MEC), 10 polymorphous low-grade adenocarcinomas (PLGA) and 08 adenoid cystic carcinomas (ACC), which were selected from the files of the Laboratory of Surgical Pathology from FOSJC / UNESP. The material was subjected to immunohistochemical staining for detection of MMP-9 and TIMP-1 by the method of the streptavidin-biotin peroxidase. A staining semiquantitative assessment was made and the data were submitted to descriptive and inferential statistical analysis using Minitab (version 16.0). We applied the Mann-Whitney and Wilcoxon signs of posts tests, with a significance level of 5%. It was found that there is variation in the expression of markers among the various structures of each lesion, with a predominance of TIMP-1 over MMP-9. Among the tumors, we observed greater expression of TIMP-1 in PA, MEC and ACC and of MMP-9 in MIO and PLGA, however, any statistically significant difference has not been observed. Comparing the labeling for each antibody among benign and malignant lesions, there was no statistically significant difference. It was concluded that most of the salivary gland neoplasms express MMP-9 and TIMP-1 and that the degree of expression of these proteins is variable among the structures of the same lesion and among the various salivary neoplasms, regardless of their benign... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Densidade microvascular linfática e proliferação celular em neoplasias de glândulas salivares /

Americo, Marcia Gimenes. January 2012 (has links)
Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Co-orientador: Renata Falchete do Prado / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Ana Cristina Posch Machado / Resumo: As neoplasias de glândulas salivares compreendem cerca de 5% das neoplasias da região oral e maxilofacial. O estudo sobre a linfangiogênese pode permitir a melhor compreensão destas patologias. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre as características histológicas, a expressão do fator de crescimento vascular endotelial linfático (VEGF-C), a densidade microvascular linfática (DML) e a proliferação celular, em neoplasias de glândulas salivares. Foram analisados 67 casos de neoplasias benignas e malignas dos arquivos do Laboratório de Patologia da FOSJC-UNESP. O diagnóstico das lesões foi confirmado pela análise de lâminas coradas por HE. O material foi submetido à reação imuno-histoquímica para avaliar a proliferação celular pela detecção do Ki-67, da DML pelo D2-40 e do VEGF-C pelo anticorpo anti-VEGF-C. Foi realizada análise quantitativa da DML e do índice de proliferação celular e semi-quantitativa do VEGF-C. Os resultados foram submetidos à análise estatística descritiva e inferencial utilizando o programa Minitab (versão 16.0), sendo aplicados os testes de Pearson, Kruskal Wallis e t-Student, adotando-se o nível de significância de 5%. Analisando as lesões separadamente, não houve significância na comparação entre o índice de proliferação celular e a DML com relação à expressão de VEGF-C, exceto no adenocarcinoma polimorfo de baixo grau, em que maior proliferação foi observada nos casos com forte marcação para VEGF-C. Em nenhuma neoplasia foi observada correlação entre o índice de proliferação celular e a DML. Comparando-se os grupos das neoplasias benignas (25 casos) e malignas (42 casos), verificou-se que o índice de marcação para o Ki-67 e a DML não apresentaram diferença estatística significante e que houve maior expressão de VEGF-C em neoplasias benignas. Concluiu-se que na maioria dos tumores de glândula... / Abstract: The salivary gland neoplasms comprise about 5% of all cancers of the oral and maxillofacial region. The study of lymphangiogenesis may provide a better understanding of these diseases. The aim of this study was to evaluate the relationship among histological features, expression of lymphatic vascular endothelial growth factor (VEGF-C), lymphatic vessel density (LVD) and cell proliferation in salivary gland neoplasms. Sixty seven cases of benign and malignant neoplasms of the Laboratory of Pathology FOSJC-UNESP were analyzed. The diagnosis of the lesions were confirmed by analysis of slides stained with HE. The material was subjected to immunohistochemical staining to evaluate cell proliferation by detection of Ki-67, LVD by D2-40 and VEGF-C by anti-VEGF-C. Quantitative analysis of LVD and cell proliferation index and semi-quantitative analysis of VEGF-C were performed. The results were analyzed by descriptive and inferential statistics using Minitab (version 16.0), applying Pearson, Kruskal Wallis and t-test, with a significance level of 5%. Analyzing the lesions separately, there was no significance when comparing cell proliferation index and LVD to the expression of VEGF-C, except in polymorphous low grade adenocarcinoma, in which a higher proliferation index was observed in cases with strong staining of VEGF-C. There was no correlation between cell proliferation and LVD in any neoplasm. Comparing the groups of benign (25 cases) and malignant neoplasms (42 cases), the labeling index for Ki-67 and LVD showed no statistically significant difference and there was increased expression of VEGF-C in benign lesions. It was concluded that in the majority of salivary gland neoplasms there is no relation among the rate of cell proliferation, the expression of VEGF-C and LVD and that the cellular proliferation does not correlate with the LVD. Between benign and malignant neoplasms, cel... / Mestre
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Estudo da expressão e características bioquímicas das ectonucleotidases em cultura de células acinares de glândulas salivares

Henz, Sandra Liana January 2007 (has links)
Os nucleotídeos da adenina são moléculas sinalizadoras no meio extracelular e estão envolvidas em importantes condições fisiológicas e patológicas. O papel do ATP como um mediador extracelular e neurotransmissor têm sido descrito em vários sistemas, inclusive na glândula salivar. Nas glândulas salivares, o ATP é liberado juntamente com acetilcolina e noradrenalina a partir do sistema de inervação da glândula. Esse ATP atua sobre os receptores P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2, regulando importantes processos secretórios. Os eventos induzidos pelos nucleotídeos extracelulares são controlados pelas ectonucleotidases, que incluem membros da família das ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterases (E-NPPs) e ecto-5’-nucleotidase (ecto-5’N). Assim, no presente estudo nós investigamos a presença dessas ectonucleotidases nas células acinares da glândula submandibular. A presença de uma E-NTPDase e uma ecto-5'-nucleotidase foi identificada com as seguintes propriedades bioquímicas para a hidrólise de ATP, ADP e AMP: pH ótimo entre 6,5-8,0, requerimento de cátions divalentes (Ca2+ e Mg2+) e valores de Kmapp na faixa de micromolar. As células acinares das glândulas salivares também foram capazes de hidrolisar o p-Nph-5´-TMP, sugerindo a presença de uma E-NPP. A enzima descrita nesse estudo é dependente de cátions metálicos divalentes (Ca+2 e Mg+2), sendo que a hidrólise do p-Nph-5´-TMP foi máxima na presença de níveis basais de cátions e em pH entre 8,5 e 9,0. Também se analisou o efeito de vários compostos sobre a hidrólise do ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP e verificou-se que aazida sódica, inibidor de várias NTPDases, inibiu a hidrólise do ATP e do ADP, e não teve efeito sobre o p-Nph-5´-TMP.A ouabaína e o NEM, inibidores clássicos de ATPases, não afetaram significativamente a hidrólise de ATP, ADP e p-Nph-5´- TMP, já o AMP, inibiu a hidrólise do p-Nph-5´-TMP. Esses resultados sugerem a co-existência de diferentes ectonucleotidases nas células acinares, que estão relacionadas com a hidrólise dos nucleotídeos e que podem atuar em diferentes situações. Também avaliamos o efeito de fármacos antidepressivos na atividade e expressão das enzimas envolvidas na hidrólise dos nucleotídeos. Em relação à atividade enzimática, observamos que a fluoxetina induziu um aumento na hidrólise de ATP e ADP e o moclobemide e a imipramina induziram um aumento significativo na hidrólise de todos os nucleotídeos (ATP, ADP e AMP). A expressão relativa da NTPDase1-3 aumentou e da ecto-5´-nucleotidase diminuiu com a imipramina. A fluoxetina aumentou a expressão relativa da NTPDase3 e ecto-5´-nucleotidase e inibiu a expressão relativa da NTPDase2. O moclobemide aumentou a expressão relativa de todas as enzimas. Em relação à atividade enzimática da NPP, os tratamentos com imipramina, fluoxetina e moclobemide levaram a um aumento significativo dessa atividade, enquanto as expressões relativas das NPP-1, NPP-2 e NPP-3 não apresentaram alteração. A presença de ectonucleotidases modulando os níveis dos nucleotídeos nas células acinares é importante tendo em vista o papel do ATP nos mecanismos de secreção salivar. / Adenine nucleotides are extracellular signaling molecules and are involved in important physiological and pathological conditions. The role of adenosine triphosphate (ATP) as an extracellular mediator and neurotransmitter has been described in various systems, including salivary glands. In salivary glands, extracellular ATP is co-released with acetylcholine and noradrenaline from glands nerve system. ATP acts on P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2 receptors and may regulate important secretory processes in salivary gland cells. The events induced by extracellular nucleotides are controlled by ectonucleotidases, that include family members of ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (E-NTPDase), ectopyrophosphatases/ phosphodiesterases (E-NPP) and ecto-5’-nucleotidase. The presence of an E-NTPDase and ecto-5'-nucleotidase was identified with the following biochemical characteristics for ATP, ADP, and AMP hydrolysis: optimum pH between 6.5-8.0, dependence of divalent cations (Ca2+ e Mg2+) and Kmapp values in micromolar range. Acinar cells from salivary glands were capable to hydrolyze p-Nph-5´-TMP, suggesting the presence of an E-NPP. The enzyme described in this study is divalent cations-dependent (Ca+2 e Mg+2), and the p-Nph- 5´-TMP hydrolysis was maximal with basal levels of cations in pH between 8,5 and 9,0. The effect of different compounds in ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP hydrolysis was evaluated and sodium azide, an inhibitor of several NTPDases, inhibited ATP and ADP hydrolysis, but have no effect in p-Nph-5´-TMP hydrolysis. Ouabain, NEM, classical ATPases inhibitors did not affect ATP, ADP e p-Nph-5´-TMPhydrolysis; however, AMP inhibited the p-Nph-5´-TMP hydrolysis. These results suggest the co-existence of different ectonucleotidases in acinar cells that are related with nucleotide hydrolysis and can act under different situations. The effect of antidepressants in activity and expression of enzymes involved in nucleotide hydrolysis was also evaluated. In relation to enzymatic activity, fluoxetine induced an increase only in ATP and ADP hydrolysis, whereas moclobemide and imipramine induced a significant increase in hydrolysis of all nucleotides (ATP, ADP and AMP). The relative expression of NTPDase1-3 was enhanced and for ecto-5´-nucleotidase was diminished with imipramine. Fluoxetine enhanced relative expression of NTPDase3 and ecto-5´-nucleotidase and inhibited the relative expression of NTPDase2. Moclobemide enhanced the relative expression of all enzymes. In relation to E-NPPs activities, imipramine, fluoxetine e moclobemide treatmens lead to a significant increase in this activity whereas the relative expression of NPP-1, NPP-2, and NPP-3 did not show modifications. The presence of ectonucleotidases modulating the levels of nucleotides in acinar cells is important considering the ATP role in the mechanisms of salivary secretion.

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