O diagnóstico laboratorial do Vírus da Hepatite C (HCV) pode ser realizado através de análises sorológicas ou por técnicas de biologia molecular. Os testes moleculares são divididos em qualitativos, quantitativos e de genotipagem. Esses são utilizados para confirmação diagnóstica, escolha da terapia antiviral e monitoramento do tratamento. Diversos testes moleculares comerciais estão disponíveis no mercado, no entanto, limitações como o custo elevado, alta complexidade e falta de validação são impeditivos para sua ampla utilização no país. Em razão das dificuldades citadas, novos métodos moleculares têm sido propostos como alternativa. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo o aprimoramento de um método in house para extração e purificação do RNA de HCV, bem como sua detecção qualitativa e genotipagem, utilizando hibridização em microplacas do produto de PCR biotinilado, seguido de detecção colorimética. A região 5'-NCR do HCV foi escolhida para a amplificação. Para avaliar a eficiência do método colorimétrico de hibridização reversa (MCHR) proposto, os resultados foram comparados com os métodos de referência para detecção qualitativa e genotipagem do HCV. Entre as 85 amostras de plasma analisadas, a sensibilidade e especificidade do MCHR para detecção do RNA viral, quando comparado com Cobas Amplicor HCV Assay v2.0, foram de 100% (95% IC; 92,75% - 100%) e de 97,2% (95% IC; 85,48% -100%), respectivamente. Os valores preditivo positivo e preditivo negativo foram de 98% (95% IC; 89,36% - 99,95%) e de 100% (95% IC; 90,01% - 100%), respectivamente. O Kappa encontrado foi de 0,976 (p < 0,001), mostrando alto grau de concordância entre os dois métodos de detecção qualitativa. Para genotipagem do HCV, pôde-se observar 97,22% (35/36) de concordância entre o MCHR e o seqüenciamento de DNA. O Kappa encontrado foi de 0,976 (p < 0,001), mostrando alto grau de concordância entre os dois métodos de genotipagem. Sendo assim, o método proposto apresentou bons resultados de sensibilidade e especificidade, com alto grau de concordância com os métodos de referência, tanto para detecção qualitativa, como para genotipagem do HCV. / The tests for HCV diagnosis are divided into serological and molecular assays. The molecular assays are used to confirm viremia, choice of antiviral therapy and monitor the response to antiviral therapy. A variety of commercial molecular assays have been developed, however, limitations such as the high cost, high complexity and lack of validation impede its widespread use, especially in developing countries. Because of the difficulties cited above, new molecular biology techniques have been proposed as alternatives. Thus, this study aimed at the improvement of an in house method for extraction and purification of RNA from HCV as well as its qualitative detection and genotyping, using hybridization in microplates of biotin-labeled PCR products, followed by colorimetric detection. The region of HCV 5'-NCR was chosen for the amplification. To evaluate the efficiency of colorimetric microwell hybridization assay (CMHA), the results obtained were compared with the reference methods. Among the 85 plasma samples analyzed, the sensitivity and specificity of CMHA for viral RNA detection, when compared with Cobas Amplicor HCV assay v2.0, were 100% (95% CI, 92.75% - 100%) and 97.2% (95% CI, 85.48 % -100%), respectively. The positive predictive and negative predictive values were 98% (95% CI, 89.36% - 99.95%) and 100% (95% CI, 90.01% -100%), respectively. The calculated Kappa was 0.976 (p <0001), showing high correlation between the two methods. Similarly, it was observed 97.22% (35/36) of agreement between the DNA sequencing data and MCHR, for HCV genotyping. The Kappa values was 0.976 (p <0001), showing high correlation between the two methods. The proposed method showed good sensitivity and specificity, with a high degree of concordance between the reference methods for both qualitative detection and for genotyping of HCV.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-24T09:08:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 265286.pdf: 1493574 bytes, checksum: 1fd35486ee77c4a5ede3c203cc7c3ab3 (MD5) / As hepatites virais apresentam distribuição universal e magnitude variável de acordo com as regiões dos distintos países. A WHO estima que em torno de 3% da população mundial esteja infectada pelo vírus da hepatite C (VHC). Os mecanismos pelos quais o vírus da hepatite C causa dano celular ainda não são bem compreendidos, incluindo dano hepático imunológico, dano diretamente citotóxico mediado por diferentes produtos virais, bem como estresse oxidativo, têm sido sugeridos na patogênese da hepatite C crônica. O objetivo deste trabalho foi avaliar o status antioxidante no sangue de pacientes com hepatite C sem tratamento (Grupo II) e em tratamento com interferon peguilado associado à ribavirina (Grupo III) comparados a indivíduos saudáveis (Grupo I), antes e após suplementação antioxidante durante 6 meses (vitaminas E 800 mg/dia e C 500 mg/dia, e o mineral Zn 40 mg/dia). Foram examinadas as atividades das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx), glutationa redutase (GR) e glutationa S-transferase (GST), e as defesas antioxidantes não-enzimáticas, como os conteúdos de glutationa reduzida (GSH), vitamina E e o mineral Zn. Foram dosados também os marcadores de dano, como a lipoperoxidação (níveis de TBARS), proteína carbonilada (PC), atividades da gama-glutamiltransferase (GGT), da alanina aminotransferase (ALT), da aspartato aminotransferase (AST) e da fosfatase alcalina (ALP). Foram avaliadas ainda a atividade da mieloperoxidase (MPO) e a concentração de ferro (Fe) eritrocitário. Os resultados das análises dos biomarcadores enzimáticos de estresse oxidativo mostraram muitas alterações entre os três grupos avaliados. Nas determinações iniciais, observou-se aumento da atividade de algumas enzimas (CAT, SOD, MPO, ALT) e depleção da concentração de GSH e vitamina E em pacientes com hepatite C sem tratamento (Grupo II). Foram observados aumentos na atividade enzimática da CAT, GST e GR, na concentração de PC, bem como depleção dos conteúdos de GSH em pacientes com hepatite C em tratamento com interferon peguilado associado à ribavirina (Grupo III), tanto quando comparados ao controle negativo (banco de sangue-Grupo I), como quando comparados ao grupo II, sugerindo ação pró-oxidante do interferon e/ou da ribavirina. Após a suplementação antioxidante, observou-se diminuição das atividades enzimáticas, da CAT, GST e GR e vitamina E, além dos níveis de zinco e ferro em pacientes do grupo II. Por outro lado, a suplementação antioxidante no grupo III permitiu melhorar o poder redutor destes pacientes, aumentar os níveis de GSH, provavelmente a expensas da vitamina E, a qual apresentou níveis diminuídos, assim como os níveis de PC, ferro e zinco. Em suma, pacientes com VHC sem tratamento são passíveis de dano oxidativo enquanto que pacientes tratados com interferon e/ou ribavirina aparentemente apresentaram dano oxidativos aumentados e observou-se que suplementação antioxidante melhorou esta condição.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-03T12:22:15Z No. of bitstreams: 1 Esther Miranda.pdf: 149849 bytes, checksum: 9111b41a656c85945e355cd442bed3b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T12:22:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Esther Miranda.pdf: 149849 bytes, checksum: 9111b41a656c85945e355cd442bed3b1 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A hepatite C constitui um grave problema de saúde pública no Brasil. A maioria dos dados de prevalência disponível provém de grupos específicos. Em doadores de sangue, a prevalência da infecção pelo HCV varia de 0,65% (região Sul) a 3,5% (região Norte). A distribuição dos genótipos do HCV no Brasil é heterogênea entre as diferentes regiões geográficas e, até, entre diferentes estados da mesma região. Dados sobre a distribuição dos genótipos de HCV na região Norte são escassos. O principal objetivo deste estudo foi descrever aspectos clínicos, histopatológicos e laboratoriais de diferentes categorias de pacientes com hepatite C crônica, atendidos em um centro de referência para atendimento e tratamento de pacientes com doença hepática crônica, em Belém, Pará. Um estudo de corte transversal foi conduzido em 345 indivíduos infectados pelo HCV (163 pacientes com hepatite crônica, 56 doadores de sangue, 32 hemofílicos, 73 hemodialisados e 22 pacientes com carcinoma hepatocelular), procedentes de diferentes municípios do estado do Pará. Foram avaliados os seguintes aspectos demográficos, clínicos e epidemiológicos: idade, sexo, apresentação clínica, fatores de risco de aquisição de infecção por HCV e grau de lesões hepáticas de acordo com o sistema de classificação METAVIR. Amostras de soro foram analisadas para determinação do RNA e dos genótipos do HCV. A média de idade dos 345 pacientes com hepatite C crônica foi 47,7 anos (± 13,9). A maioria dos pacientes, neste estudo, era do sexo masculino (74.8%) e as mulheres apresentaram média de idade mais elevada (p=0.00115) do que os homens (51,9 ± 12,9 anos e 48,6 ± 13,7 anos, respectivamente). Os fatores de risco associados à infecção por HCV mais freqüentes foram: história prévia de transfusão sangüínea (50,1%), cirurgia (36.4%), hemodiálise (31.2%) e compartilhamento de agulhas não descartáveis (16.8%). As manifestações extra-hepáticas mais freqüentes nestes pacientes foram: astenia, hipertensão, diabetes mellitus, artralgia, prurido, hipotireoidismo e trombocitopenia. Da população estudada, 98% dos pacientes estavam infectados pelo genótipo 1 (77,1%) ou 3 (20,9%) do HCV. A distribuição dos genótipos do HCV foi similar entre os cinco grupos de pacientes. Não foram observadas diferenças significativas entre os genótipos do HCV e fatores de risco, aspectos clínicos e demográficos, exceto idade. Indivíduos infectados pelo HCV genótipo 3 apresentaram média de idade mais baixa (44,5 ± 13,6 anos) quando comparados àqueles infectados pelo HCV genótipo 1 (48,6 ± 13,7 anos) (p= 0.0273). Os seguintes aspectos clínicos e histopatológicos parecem estar associados com o genótipo de HCV: maior prevalência de diabetes mellitus tipo 2 (p= 0,0425) nos pacientes infectados pelo genótipo 1 do HCV; maior freqüência de esteatose em indivíduos infectados pelo genótipo 3. A intensidade da fibrose foi associada a idade elevada, grau de atividade e esteatose, níveis séricos elevados de ALT e AST e plaquetopenia. A presença de esteatose foi associada a graus de atividade e fibrose. Os maiores percentuais de resposta virológica sustentada (RVS) ao tratamento foram observados nos pacientes tratados com Interferon-α peguilado combinado com ribavirina. / Hepatitis C virus (HCV) infection is a major concern of public health worldwide. In Brazil, available data on HCV prevalence are mainly from selected groups. In blood donors, HCV seroprevalence ranges from 0.65% (Southern) to 3.5% (Northern). The distribution of HCV genotypes in Brazil varies greatly among different geographic regions. However, data on HCV genotypes are scarce in Northern region. Therefore, the main objective of this study was to describe clinical, histopathological and laboratorial features of different categories of patients with chronic hepatitis C, attended at a public reference center for management and treatment of chronic hepatic diseases in Belém, Pará. A cross sectional study was conducted among 345 HCV infected individuals (56 blood donors, 32 hemophiliac, 73 hemodialysis, 22 hepatocellular carcinoma, and 163 chronic hepatitis C patients) living in different counties of state of Pará, Eastern Amazon, Brasil. The following demographic, clinical, and epidemiological data were evaluated: gender, age, clinical presentation, and risk factors for acquiring HCV infection. Histopathological features were also evaluated by METAVIR system. Serum samples were analysed for determining HCV RNA and genotypes. The mean age of the 345 chronic hepatitis C patients, was 47.7 years old (± 13.9). Two hundred fifty eight (74.8%) were male. HCV infected women were older than men (p=0.00115), with average ages of 51.9 ± 12.9 years and 48,6 ± 13.7 years, respectively. Previous history of blood transfusion (50,1%), surgery (36.4%), hemodialysis (31.2%), and sharing non-disposable needles (16.8%) were the most frequently related risk factors associated with acquiring infection. Asthenia, blood hypertension, diabetes mellitus, arthralgia, itching, hypothyroidism and thrombocytopenia were the main extra-hepatic clinical manifestations observed. Overall, 98% of the patients were infected by HCV genotype 1 (77.1%) or genotype 3 (20.9%). The distribution of HCV genotypes was similar between the five patient groups. There were not significant differences between genotypes according to risk factors, clinical and demographic features, except for age. Individuals infected by HCV genotype 3 had a lower average age (44.5 ± 13.6 years) when compared to those infected by genotype 1 (48.6 ± 13.7 years) (p= 0.0273). The following clinical and histopathological features seem to be associated to HCV genotypes: higher prevalence (p= 0,0425) of diabetes mellitus type 2 among patients infected with HCV genotype 1; higher frequency of steatosis in individuals infected with HCV genotype 3. The intensity of fibrosis was associated with elevated age, activity index and steatosis, elevated levels of ALT and AST e low level of platelets. The presence of steatosis was associated to severity (activity index and fibrosis degree). Higher rates of sustained virological response (SVR) to treatment were achieved by patients treated with Interferon-α peguilado plus ribavirin.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:38:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213690.pdf: 2374034 bytes, checksum: 27fc864377794570554f05971b87a912 (MD5) / Com o grande crescimento da malacocultura em Santa Catarina, tornou-se necessário verificar e assegurar a qualidade sanitária destes moluscos, como também da água onde os mesmos são cultivados. Devido à característica de alimentação filtrante, moluscos bivalves podem bioacumular vírus e outros patógenos presentes em águas contaminadas por efluentes. O vírus da Hepatite A (HAV) tem sido detectado em surtos relacionados ao consumo de água ou alimentos contaminados, em especial de moluscos bivalves. Os métodos moleculares como a reação em cadeia da polimerase, a hibridização molecular e o sequenciamento são hoje os métodos mais recomendados para avaliação da presença de vírus entéricos com genoma RNA em amostras ambientais. O objetivo deste trabalho foi padronizar métodos para a detecção do vírus da Hepatite A a partir de tecidos de ostras. Para isso foram avaliados três protocolos de recuperação das partículas virais a partir de tecido digestivo dissecado das ostras e dois métodos de extração e purificação do RNA viral. Os protocolos selecionados combinam a dissecação do trato gastrointestinal das ostras, a extração orgânica antes da precipitação das partículas virais com PEG, a extração de RNA com Trizol LS® com a RT-PCR seguida pela hibridização molecular utilizando uma sonda marcada com digoxigenina. A sensibilidade do método foi determinada pela inoculação do trato gastrointestinal de ostras com diluições crescentes de HAV (0,001 a 105FFU/mL), seja por inoculação direta ou por semeadura viral em aquários. A RT-PCR foi capaz de detectar 0,1FFU/ml, e a hibridização, até 0,001FFU/ml. O protocolo estabelecido foi utilizado para analisar a possível contaminação por HAV de amostras de ostras, coletadas em três fazendas de cultivo de Florianópolis. Por RT-PCR, os índices de contaminação foram 10,5%, 21,1% e 0% para os sítios 1, 2 e 3, respectivamente. Quando a hibridização molecular foi utilizada, a sensibilidade de detecção viral foi aprimorada, e passou para: 47,4%, 79,0% e 31,8%, respectivamente. Conforme demonstrado, a hibridização molecular mostrou-se 100 vezes mais sensível que a RT-PCR na detecção do HAV no trato gastrointestinal de ostras. Os dados aqui apresentados poderão ser úteis no estabelecimento de um programa de segurança alimentar, visando a comercialização de ostras com qualidade sanitária assegurada para o consumo.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Saúde Pública. / Made available in DSpace on 2012-10-22T07:42:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 236312.pdf: 404732 bytes, checksum: 814d322cce09bde4792ff0122bee51ff (MD5) / A hepatite B é um sério problema de saúde pública mundial, atualmente responsável por mais de 1 milhão de mortes em decorrência das formas crônicas da doença, que são o hepatocarcinoma celular e a cirrose. A vacinação é a medida mais efetiva na prevenção da transmissão da doença e de suas conseqüências. Este foi um estudo de coorte retrospectivo, o qual teve como objetivo a avaliação da efetividade das vacinas anti-hepatite B (DNArecombinantes) em doadores de sangue da região meio-oeste do estado de Santa Catarina, conhecidamente endêmica para a hepatite B. Doadores de sangue compõem um grupo com

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2012-10-22T10:47:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 229189.pdf: 768469 bytes, checksum: e525c347c47613d8654d03f075501d73 (MD5)

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2011 / Bibliografia: f. 53-63 / Introdução: a doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) caracteriza-se por um amplo espectro de danos hepáticos que varia desde esteatose isolada a esteatohepatite (EHNA), fibrose avançada e cirrose. É altamente prevalente na população adulta de paí

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Introdução: A Hepatite Crônica Viral C tem curso altamente variável, sendo habitualmente assintomática. Os testes laboratoriais empregados não refletem com fidedignidade o estadiamento hepático. A biópsia hepática implica custos, riscos e dificuldade de repetição durante a evolução de hepatopatia crônica. Alguns marcadores séricos têm sido estudados como método alternativo para diagnóstico da fibrose hepática. Objetivos: Este estudo se propõe correlacionar o índice aspartato aminotransferase (AST)/alanino aminotransferase (ALT), os níveis séricos de gama-glutamiltransferase (GGT), a contagem de plaquetas, o índice APRI (quociente AST/plaquetas) e o ácido hialurônico (AH) ao estadiamento histológico (padrão-ouro) nos pacientes portadores de hepatite crônica viral C e avaliar a variação dos marcadores indiretos de fibrose pós-terapia antiviral. Casuística e métodos: Os 72 pacientes estudados foram divididos em dois grupos de acordo com o grau de fibrose (F) conforme os critérios de METAVIR (GI: F= 0, 1 e 2; n=48 e GII: F = 3 e 4; n=24). Foram dosadas no sangue periférico as concentrações de AH (por método imunofluorimétrico), de AST, ALT, GGT e plaquetas e a, partir desses valores foram calculados os índices AST/ALT e APRI. Os valores foram expressos com média ± desvio padrão, e na análise estatística foram utilizados os testes t de Student e correlação de Spearman. Nos casos em que as médias foram diferentes, foram construídas curvas ROC e estimadas a sensibilidade, a especificidade, VPP e VPN desses marcadores. Receberam tratamento com Interferon associado à Ribavirina 65 pacientes. Os indivíduos que completaram o tratamento foram submetidos à nova dosagem dos marcadores séricos 6 meses após o término da terapia antiviral, tendo sido utilizadas técnicas de análise de variância (ANOVA) para avaliação das medidas repetidas. Resultados: As dosagens séricas do AH foram significativamente mais elevadas no grupo com fibrose hepática avançada (GII 68,9±41,2ng/ml x GI 27,3±12,5 ng/ml) e se correlacionaram ao estadiamento hepático (p<0,01), com sensibilidade de 79,2% e especificidade de 85,4%. Os demais marcadores testados - GGT, plaquetas e índice APRI - também apresentaram diferença significativa entre os grupos com fibrose inicial e avançada, exceto o índice AST/ALT. A análise das áreas sob as curvas ROC (AUC) evidenciou que os marcadores que melhor se correlacionaram com o estágio de fibrose hepática foram o índice APRI e a dosagem sérica do ácido hialurônico - AUC (APRI) = 0,85 e AUC (AH) = 0,86. Até a avaliação final deste estudo, concluíram o tratamento 33 pacientes, sendo 19 com RVS e 14 NR. Na avaliação pós-tratamento a concentração sérica de GGT e o índice APRI apresentaram redução em ambos os grupos (respondedores e não respondedores), porém o AH apresentou redução com grau de significância estatística apenas nos pacientes com resposta virológica sustentada (p<0,05). Conclusões: Dos marcadores séricos avaliados, o índice APRI e o ácido hialurônico apresentaram maior valor preditivo no estadiamento dos pacientes portadores de hepatite crônica C, podendo representar uma alternativa à biópsia hepática. A concentração sérica do ácido hialurônico apresentou associação com a resposta virológica. / Introduction: The chronic hepatitis C (CHC) has highly variable course, being habitually assymptomatic. The used laboratorial tests do not reflect with fidedignity the assessment of hepatic fibrosis. The hepatic biopsy involves costs, risks and dificulty of repetition during the evolution of chronic hepatitis. Some serum markers have been studied as alternative method for diagnosis of the liver fibrosis. Objectives: This study proposes to correlate the index aspartate aminotransferase (AST)/alanine aminotransferase (ALT), the serum levels of gama-glutamyltransferase (GGT), platelet count, the index APRI (AST to platelet ratio index) and the hyaluronic acid (HA) to the histological assessment (the gold standard) in CHC patients and to assess the variation of indirect markers of fibrosis antiviral after therapy. Materials and methods: The 72 studied patients were divided-up into two groups according to the degree of fibrosis (F), using the METAVIR score (GI:F= 0, 1 and 2; n=48 / GII:F=3 and 4; n=24). The concentrations of AST, ALT, GGT, platelets and HA, were dosed in the blood peripherical (by means of immunefluorimetric method), and from these values the indexes AST/ALT and APRI were calculated. The values were expressed with mean±standard shunting and the statistic analysis were used the tests t of student and correlation of Spearman. In the cases which the means were differents, the curves ROC were constructed and calculated sensibility, specificity, positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV) of these variables. 65 patients received treatment with Interferon associated to Ribavirina. The patients that have completed the treatment were submitted to new dosage of the serum markers six months after the ending of the antiviral therapy and we have used techniques of analysis of variance (ANOVA) for assessment of the repeated measures. Results: The levels of hyaluronic acid were significantly more raised in the group with advanced liver fibrosis (GII 68,9±41,2ng/ml x GI 27,3±12.5ng/ml) and correlated themselves to the assessment of hepatic fibrosis (p<0,01); sensibility, specificity, PPV and NPV were 79,2%, 85,4%, 73% and 89% respectively. The others markers tested - GGT, platelet count and index APRI - also have presented significant difference among the groups with initial and advanced fibrosis, except the index AST/ALT. The analysis of the areas under the ROC curves (AUC) evidenced that the markers which more have correlated themselves with the degree of liver fibrosis were the index APRI and HA levels - AUC (APRI) = 0,85 and AUC (HA) = 0,86. Until the final assessment of this study, 33 patients concluded the treatment (19 responders and 14 non-responders). Among the studied markers, the serum concentration of GGT and the index APRI have shown reduction in responders and non-responders, but just hyaluronic acid felt only complete responders (p<0,05). The serum markers haven`t presented association with the virological response. Conclusions: The index APRI and the hyaluronic acid have shown greater predictive value in the histological assessment of CHC patients and might be an alternative to liver biopsy. Serum hyaluronic acid measurement presented association with the virological response / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-31. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:26Z : No. of bitstreams: 1 Publico-285.pdf: 1219371 bytes, checksum: 16bfea66e6a8c0aee3333e530efc796a (MD5) / Introdução: Os portadores de hepatitie C crônica habitualmente apresentam análise histológica hepática com baixos graus de atividade necroinflamatória. No entanto, formas histológicas com atividade necroinflamatória periportal intensa têm sido descritas. Os possíveis fatores associados a este achado têm sido pouco estudados e não estão completamente estabelecidos. Objetivos: Analisar as características epidemiológicas, laboratoriais e histológicas dos portadores de hepatite C crônica com atividade necroinflamatória periportal intensa, comparando-as com um grupo controle composto por pacientes com graus menos intensos de atividade necroinflamatória. Casuística e Métodos: Foram incluídos portadores de infecção crônica pelo HCV, avaliados no Setor de Hepatites da UNIFESP, no período de 1993 a 2006, que apresentavam à análise histológica atividade necroinflamatória periportal intensa. Esse grupo foi comparado com um grupo controle, constituído por pacientes com atividade necroinflamatória periportal ausente, leve ou moderada, numa proporção de 1:1. Pacientes com doença associada foram excluídos da análise comparativa. A taxa de progressão de fibrose foi calculada nos pacientes com data de infecção conhecida, dividindo-se o estágio de fibrose pela duração da infecção em anos. Resultados: Entre 1759 portadores de infecção pelo HCV, submetidos à biópsia hepática, 92 (5,2%) apresentavam intensa atividade necroinflamatória periportal. Destes, 57% eram homens e a média de idade foi de 49±10 anos. O FAN foi positivo em 12% dos casos, o AAML em 5%, e o anti-LKM 1 em 0%. O grupo com intensa atividade necroinflamatória apresentava maior média de idade (P<0.001) e maior frequência de antecedente transfusional (P=0,02) e de consumo excessivo de álcool (P=0,02); além de níveis mais elevados de ALT (P<0.001), AST (P<0.001) e GGT (P<0.001). Este grupo apresentou maior proporção de pacientes com atividade lobular moderada a intensa (P<0.001) e cirrose (P<0.001), e maior taxa de progressão para fibrose (0,17 vs. 0,09; P<0.001). Não foram observados achados histológicos sugestivos de hepatite auto-imune. Conclusões: Idade mais avançada, maior frequência de antecedente transfusional e de consumo de álcool foram variáveis associadas à intensa atividade necroinflamatória periportal. Este grupo apresentou enzimas hepáticas mais elevadas, atividade lobular mais intensa, estadiamento mais avançado e taxa de progressão de fibrose mais rápida. A ausência de níveis elevados de gamaglobulina, a baixa prevalência de auto-anticorpos e a ausência de achados histológicos típicos sugerem que seja pouco provável a sobreposição com hepatite auto-imune. Esses achados, associados a maior prevalência de marcadores etiológicos na análise histológica, sugerem que mecanismos intrínsecos à infecção pelo HCV, relacionados à interação vírus-hospedeiro, possam ser responsáveis pela atividade necroinflamatória periportal intensa na infecção pelo HCV. / Background: Although hepatitis C is usually accompanied mild inflammatory activity, intense interface hepatitis has been reported. The factors associated with this finding have not been completely established and a possible association with autoimmune hepatitis has been questioned. Aim: To analyze the epidemiological, laboratory and histological characteristics of patients with hepatitis C and intense interface hepatitis comparing to a control group with absent, mild or moderate interface hepatitis. Methods: Among 1759 patients with hepatitis C submitted to liver biopsy, 92 (5.2%) presented intense interface hepatitis. These patients were compared to a control group with absent, mild or moderate interface hepatitis (1:1 ratio). Results: In the comparative analysis the group with intense interface hepatitis showed older age (P<0.001), higher proportion of blood transfusion (P=0.02) and excessive alcohol consumption (P=0.02), higher ALT (P<0.001), AST (P<0.001) and GGT (P<0.001) levels, higher prevalence of moderate/intense lobular activity (P<0.001) and cirrhosis (P<0.001) and a faster fibrosis progression rate (FRP). No serological or histological evidence of overlap with autoimmune hepatitis was observed in patients with intense interface hepatitis. Conclusions: Older age, history of transfusion and alcoholism were associated with intense interface hepatitis. This group presented more elevated liver enzymes, more intense lobular activity and more advanced fibrosis. The absence of elevated gammaglobulin levels, the low prevalence of autoantibodies and the lack of typical histological findings do not suggest the overlap with autoimmune hepatitis in patients with intense interface hepatitis. Intrinsic mechanisms HCV infection related interaction virus-host could be responsible for this finding. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:49Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10891.pdf: 1223761 bytes, checksum: 16a3e60ccc8404a8ead53248d6526527 (MD5) / Introdução: O GBV-C está intimamente relacionado ao vírus da Hepatite C. Diferente do HCV, o GBV-C não parece ser hepatotrópico e não causa Hepatite aguda ou crônica. Devido a similaridade nas vias de transmissão, a co-infecção HIV-GBV-C é extremamente comum; além disso, estudos demonstraram que a viremia pelo GBV-C apresenta efeito benéfico na progressão e mortalidade em relação a doença causada pelo HIV. Objetivos: O objetivo deste estudo foi identificar os compartimentos infectados pelo GBV-C em pacientes HIV soropositivos co-infectados pelo HCV e estabelecer relações quanto à presença de marcadores de infecção pelo GBV-C e correlacioná-los com os parâmetros laboratoriais e achados histológicos na tripla infecção. Métodos: Pacientes HIV-HCV co-infectados submetidos à biópsia hepática no Hospital São Paulo entre maio de 2006 e maio de 2007 foram incluídos no estudo. O plasma desses pacientes foi testado para a presença de marcadores de replicação ativa (GBV-C RNA) e anticorpos contra a proteína E2 do GBV-C (anti-E2 HGV). Foram coletados dados demográficos e realizadas a contagem de células T CD4/CD8, quantificação da carga viral do HIV, HCV e do GBV-C. Os espécimes de biópsia hepática foram analisados no Departamento de Patologia da UNIFESP e corados pela Hematoxilina-Eosina e Tricômio de Masson. Nas biópsias com diagnóstico de hepatite crônica e fígado reacional foram avaliados o estadiamento e as atividades peri-portal e parenquimatosa utilizando os critérios de semiquantificação recomendados pelo Consenso Nacional sobre a Classificação das Hepatites Crônicas. Foram aplicadas as metodologias de RT-PCR in situ e Imunofluorescência Indireta in house (IFI) para identificar possíveis compartimentos infectados pelo GBV-C. Resultados: Foram incluídos 20 pacientes HIV-HCV co-infectados com média de idade de 43,0 (6,2) anos, 55% (11/20) do gênero masculino e 40% (8/20) tinham exposição parenteral. Destes, 30% (6/20) possuíam algum marcador de infecção pelo GBV-C, sendo que 15% (3/20) apresentavam positividade ao teste de ELISA para determinação qualitativa de anticorpos contra a proteína E2 do GBV-C e, os outros 15% (3/20) foram positivos quanto à presença de RNA do GBV-C em plasma. A detecção do GBV-C RNA pelo RTPCR in situ foi limitada, possivelmente por não ser mesmo um vírus hepatotrópico ou devido a degradação de RNA, assim como, a IFI in house com difícil interpretação e resultados inconclusivos. As correlações entre níveis de cargas virais de HIV e GBV-C foram prejudicadas, provavelmente devido ao número de pacientes incluídos. Conclusões: Apesar da pequena casuística incluída, observou-se que pacientes com replicação ativa (RNA) pelo GBV-C apresentaram menor grau de acometimento histológico hepático e menor carga viral do HCV quando comparados aos pacientes sem infecção ativa, embora essa diferença não atingisse significância estatística. / Introduction: GBV-C is a flavivirus closely related to the hepatitis C virus. Differing from HCV, GBV-C it does not seem to be hepatotropic nor causes acute or chronic hepatitis. Because of the similar routes of transmission, HIV-GBV-C co-infection is extremely common; besides, studies demonstrated that GBV-C viremia has a beneficial effect upon HIV disease progression and mortality. Purpose: The aim of this study was to identify the compartments infected by the GBV-C in HIV seropositive patients coinfected with HCV and to correlate these infection markers with laboratorial parameters and histological findings in the triple infection. Methods: HIV-HCV co-infected patients undergoing to liver biopsy at the Hospital São Paulo were included in the study from May 2006 to May 2007. Demographic data was collected at the inclusion. Plasma samples were tested for antibodies to E2 of GBV-C by ELISA and for GBV-C RNA detection by real time PCR. Blood samples were collected to evaluate CD4 and CD8 Tcell counts, HIV, HCV and GBV-C viral loads. Biopsy specimens were stained using hematoxilin-eosin and Masson’s trichrome. Analysis of the staging, peri-portal and parenchymatous activities were adopted according to the semiquantitation criterion recommended in the National Consensus for Classification of Chronic Hepatitis. RTPCR in situ and Indirect Immunofluorescence (IFI) techniques were developed in house in order to identify possible GBV-C infected compartments. Results: A total of 20 HIVHCV co-infected patients with the mean age of 43.0 (6.2), 55% (11/20) were male, 40% (8/20) were parenterally exposed. 30% (6/20) were positive to one of the GBV-C markers, of them, 15% (3/20) were E2 positive and 15% (3/20) were positive to GBV-C RNA, indicating active viral replication. Detection of GBV-C RNA by RT-PCR in situ was compromised by the pre-analytic process of samples whereas the IFI in house was difficult to interpret because of the inespecificity of the monoclonal antibody used. HIV and GBV-C viral load correlation was not observed in this study, probably as a consequence of the reduced number of patients included. Conclusions: Triple infected patients presented lower inflammation degree, lower hepatic-histological commitment and lower HCV viral load, when compared with HIV-HCV co-infected patients GBV-C no viremic. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações