Cardiomiopatia dilatada (CMD) é uma doença miocárdica caracterizada por dilatação cardíaca e redução da contratilidade da parede do ventrículo esquerdo ou de ambos os ventrículos, sendo a etiologia de origem genética ou desconhecida. Em suínos existem raros relatos de CMD, sendo frequentemente relacionados com intoxicações por ionóforos ou gossipol. Surtos de CMD de etiologia desconhecida em suínos de rebanhos comerciais no Brasil sugeriram a existência de nova etiologia, possivelmente nutricional. Este estudo teve como objetivo investigar as possíveis causas dos surtos de CMD em suínos, a partir de análises macroscópicas, microscópicas, bioquímicas, cromatográficas, moleculares, imuno-histoquímica (IHQ) e reprodução experimental. E teve como resultado 2 artigos científicos. O primeiro artigo descreve os achados clínicos, patológicos, químicos e toxicológicos de três surtos de CMD em suínos de crescimento, além da reprodução experimental desta condição utilizando a ração de uma das propriedades afetadas. Para o estudo experimental utilizou-se 9 animais divididos em 3 grupo; Grupo 1 recebendo ração suspeita, Grupo 2 metade ração suspeita mais metade de ração controle e o grupo 3 recebeu ração controle. Dois suínos do grupo 1 apresentaram condições clínicas e patológicas semelhantes aos casos naturais após 8 dias de consumo da ração suspeita. Os principais sinais clínicos observados eram tosse e dispneia grave. Na necropsia foram constatados dilatação cardíaca bilateral acentuada, hidrotórax, hidropericárdio, edema pulmonar, ascite e fígado com aspecto de noz moscada. O segundo artigo teve como objetivo fazer a caracterização histológica, histoquímica e imuno-histoquímica das lesões cardíacas em 8 suínos com CMD e compara-las com dois suínos controles. As principais lesões evidenciadas foram atrofia de cardiomiócitos, vacuolização sarcoplasmática, ruptura de miofibras e fibras com padrão ondulado evidenciadas nas colorações de hematoxilina e eosina (HE), Tricrômico de Masson e Picrosírius. Na análise imuno-histoquímica utilizando o anticorpo anti-desmina houve uma imunomarcação reduzida ou inexistente em áreas com lesões histopatológicas. A imuno-histoquímica anti-desmina demonstrou ser uma importante ferramenta diagnóstica para caracterização de lesões de CMD em suínos. / Dilated cardiomyopathy (DCM) is a myocardial disease characterized by cardiac dilatation and reduced contractility of the left ventricular wall or both ventricles, the etiology of which is genetic or unknown. In pigs there are rare reports of DCM and are often related to ionosphere or gossypol poisoning. DCM outbreaks of unknown etiology in swine from herds in Brazil suggested the existence of a new, possibly nutritional, etiology. This study aimed to investigate the possible causes of DCM in pigs through macroscopic, microscopic, biochemical, chromatographical, molecular and immunohistochemical (IHC) evaluations, as well as the experimental reproduction of the disease. The project resulted in 2 scientific papers. The first article describes the clinical, pathological, chemical and toxicological findings of three DCM outbreaks in grower pigs, in addition to the experimental reproduction of this condition using the ration of one of the affected farms. For the experimental trial, 9 animals were divided into 3 groups; Group 1 received suspected ration only, Group 2 was fed a diet composed of half suspected ration plus half control ration, and group 3 received control ration only. Two pigs from group 1 presented clinical and pathological conditions similar to the natural cases after 8 days of consumption of the suspected ration. The main clinical signs observed were cough and severe dyspnea. At necropsy, bilateral cardiac dilatation, hydrothorax, hydropericardium, pulmonary edema, ascites and liver with the appearance of nutmeg were observed. The second article aimed to perform the histological, histochemical and immunohistochemical characterization of the cardiac lesions in 8 pigs with DCM and compare it with two control pigs. The main lesions evidenced were cardiomyocyte atrophy, sarcoplasmic vacuolization, rupture of myofibers and fibers with corrugated pattern evidenced in the staining of hematoxylin and eosin (HE), Masson's trichrome (MT) and Picrosírius (PS). Immunohistochemistry analysis using the anti-desmin antibody showed reduced or non-existent immunostaining in areas with histopathological lesions. The anti-desmin IHC proved to be an important tool for the diagnosis and characterization of DCM lesions in pigs.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-31Bitstream added on 2014-06-13T21:06:05Z : No. of bitstreams: 1 furuta_pi_dr_jabo.pdf: 1073038 bytes, checksum: 5e772861c92b1e24fce5e65feea5cf02 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A neosporose é uma doença causada pelo protozoário Neospora caninum, e causa um grande impacto econômico na pecuária mundial. Sabe-se que muitos mamíferos são considerados hospedeiros intermediários, e que recentemente, foi confirmado o papel das aves no ciclo de vida de N. caninum como hospedeiros intermediários. O presente trabalho teve como finalidade estudar o ciclo evolutivo e patogenia de N. caninum em cães alimentados com ovos embrionados de Gallus gallus domesticus previamente inoculados com taquizoítas. Realizou-se diariamente o exame de fezes dos animais, pela técnica de flutuação, constatando a presença de oocistos nas fezes a partir de 7 dia apósinfecção. Anticorpos anti- N. caninum foram pesquisados semanalmente nos cães pela RIFI, sendo observados anticorpos a partir dos 14dai. Semanalmente um cão foi eutanasiado e durante a necropsia observou-se em todos os cinco animais, aumento dos linfonodos mesentéricos e das tonsilas, presença de muco no duodeno e jejuno e hepatoesplenomegalia, com hiperplasia de polpa branca do baço. Pelo exame histopatológico detectou-se reatividade dos linfonodos, lesões no fígado, coração, pulmão, baço e rim. Pelas técnicas de imunoistoquímica, imunofluorescência indireta dos tecidos e no Real-time PCR, observou-se a presença do parasito. Os resultados obtidos apontam que, os ovos embrionados infectados pelo parasito mostraram eficiência como modelo experimental para infectar cães, que eliminaram oocistos nas fezes, mesmo não apresentando sinais clínicos da neosporose. Ademais, os cães infectados apresentaram prematura soroconversão pela prévia administração de bicarbonato de sódio e o uso das técnicas citadas tornou possível a detecção do parasito nos tecidos analisados. / Neosporosis is a protozoan disease caused by Neospora caninum and affects the reproductive system in cattle worldwide. Infection by the parasite has been widely described in mammals, and recently the role of birds in its lifecycle was confirmed as intermediate hosts. This work aimed to study the life cycle of N. caninum and the pathogeny in dogs that were fed with embryonated eggs inoculated with tachyzoites. The tested dogs were followed up for oocyst shedding, by flotation technique, and it was detected at 7 days after infection. Antibodies anti- N. caninum were detected at 14dai. Once a week, one dog was euthanized and at the necropsy alterations was observed on the mesenteric lymph nodes and tonsils, presence of mucus at duodenum and jejunum portions, and hepatosplenomegaly. At the histopathological examination lymph nodes alterations were noticed ranging from moderate to intense. In addition, there were alterations in liver, heart, lung, spleen and kidney. The parasite was detected by immunochemistry and indirect immunofluorescense tests as well as by Real-time PCR. The results herein presented suggest that inoculated embryonated eggs showed to be an efficient model to infect dogs, because of shedding oocysts, and no clinical alterations. Moreover, the infected dogs presented earlier seroconvertion because of sodium bicarbonate solution administration and the parasite detection in the analyzed tissues was successful by the techniques used.

Moniliophthora perniciosa é o agente causal da doença vassoura-de-bruxa em cacaueiro (Theobroma cacao). Os sintomas da doença compreendem perda de dominância apical, inchamento e excesso de brotações em ramos novos, reversão de meristemas florais em vegetativos, partenocarpia e lesões necróticas em frutos, sugerindo a ocorrência de alterações hormonais no hospedeiro. A disponibilidade de isolados do biótipo-S capazes de infectar o tomateiro, permitiu a utilização da cultivar miniatura \'Micro-Tom\' (MT) como um modelo para estudo da interação Moniliophthora perniciosa x Solanum lycopersicum. Além de provocar sintomas característicos no MT, a disponibilidade de mutantes e linhas transgênicas introgredidos em MT, com alterações que afetam o metabolismo e sensibilidade hormonal, permitem investigar o papel dos hormônios vegetais no desenvolvimento dos sintomas. Inicialmente, foi avaliada a agressividade de três isolados do biótipo-S no MT, sendo que um isolado de Tiradentes apresentou maior agressividade, com maior incidência dos sintomas, maior engrossamento do caule, redução na altura das plantas, aumento no número de lóculos nos frutos e redução na biomassa radicular. Mutantes com alterações na percepção para auxina (diageotropica e entire) e uma linha transgênica expressando uma citocinina oxidase de Arabidopsis (35S::AtCKX2) diferiram para o engrossamento do caule e distribuição do número de lóculos nos frutos em relação ao MT. A linha transgênica 35S::AtCKX2 diferiu significativamente de MT com menor incidência de infecção. O engrossamento do caule associa-se ao aumento na área do córtex e, principalmente do xilema e floema. A aplicação exógena de citocinina sintética benzil-adenina (BA) e da auxina sintética ácido naftaleno acético (ANA) em MT evocam sintomas similares aos de plantas infectadas com M. perniciosa. Linhas transgênicas repórter de sinalização por citocinina (ARR5::GUS) ou auxina (DR5::GUS) indicaram sinalização diferencial por citocinina a 24 h e 36 h após inoculação (HAI) e 48 HAI por auxina. A infecção por M. perniciosa aumentou os níveis de ácido jasmônico, ácido salicílico (AS) e auxina em MT entre 5 d a 30 DAI, com maior incremento aos 5 DAI, enquanto que o nível de ácido abscísico aumentou aos 20 d e 30 DAI, e AS foi o único detectado em micélio dicariótico do biótipo-S. Genes de biossíntese de citocinina (IPT), ativação (LOG), degradação (CKX) e resposta à citocinina (ARRs e CRF) e auxina (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) foram induzidos em MT inoculado de 12 h a 5 DAI, mas com maior acúmulo de transcritos aos 30 DAI. M. perniciosa induziu maior expressão desses genes citados e de biossíntese auxina, nos momentos iniciais da interação (12 h a 5 DAI) em 35S::AtCKX2 do que no MT. O efeito da infecção em aumentar o número de lóculos nos frutos parece ser independente ou downstream a mutação fasciated, Mouse ears e ovate. A mutação Lanceolate parece ter um papel na redução do efeito da infecção em aumentar o número de lóculos. Os resultados obtidos sugerem que a infecção pelo M. perniciosa em MT altere os níveis/sinalização dos hormônios vegetais, principalmente auxina e citocinina, provocando o engrossamento do caule (aumento no xilema, floema e córtex), redução no crescimento e na biomassa radicular e aumento no número de lóculos nos frutos / Moniliophthora pernicisa is the causal agent of witches\' broom disease in cocoa (Theobroma cacao). The disease symptoms comprise loss of apical dominance, thickening and proliferation of axillary shoots, shift from inflorescence into vegetative meristem, parthernocarpy and necrotic lesions on fruits, suggesting a host hormonal imbalance. The availability of an isolated of S-biotype M. perniciosa, which colonizes tomato, enabled the utilization of the miniature tomato (Solanum lycopersicum) cultivar \'Micro-Tom\' (MT) as a suitable model to study the pathosystem M. perniciosa x S. lycopersicum. In addition to the characteristic symptoms of the infection in MT, the availability of mutants and transgenic lines introgessed into MT, with changes in plant metabolism and hormonal sensitivity, enable the investigation of the role of plant hormones in the development of symptoms. Initially, we evaluated the aggressiveness of three S-biotype M. perniciosa isolates. The isolate \'Tiradentes\' showed greater aggressiveness infecting MT, with higher plant infection incidence, greater stem thickening, reduction in plant height, increase in fruit locule number and reduction in root dry weight. Mutants with altered auxin perception (diageotropica e entire) and the transgenic line expressing a cytokinin oxidase gene of arabidopsis (35S::AtCKX2) differed in stem thickening and fruit locule number distribution, as compared to MT. The transgenic line 35S::AtCKX2 differed significantly from MT, showing lower incidence of infection. The thickening of the stem may be related with an increase in area of the cortex, especially xylem and phloem. The exogenous application of synthetic cytokinin benzyl adenine (BA) and auxin naphthalene acetic acid (NAA) in MT induces similar symptoms to plants infected with M. perniciosa. Cytokinin (ARR5::GUS) and auxin (DR5::GUS) signaling reporter transgenic lines revealed differential cytokinin signaling 24 h e 36 h hours after inoculation (HAI) and differential auxin signaling in 48 HAI. Infection of MT by M. perniciosa increased the content of JA, SA and auxin during the development of symptoms from 5 d to 30 DAI, with greater increase at an early stage of symptoms development (5 days after inoculation - DAI), whereas abcisic acid content increased in 20 and 30 DAI, and only AS was detected in dicariotic mycelium of the S-biotype M. perniciosa. Cytokinin biosynthesis (IPT), activating (LOG), and breakdown (CKX) genes and response to cytokynin genes (ARRs e CRF) and auxin (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) were induced in MT infected in 12 h a 5 DAI, with greater accumulation of transcripts in 30 DAI. M. perniciosa induced higher levels of IPT, LOG, CKX, ARRs, and CRF genes and auxin biosynthesis genes at an ealry stage of infection (12 h a 5 DAI) in 35S::AtCKX2, as compared to MT. The effect of the infection on increasing fruit locule number seems to be independent or downstream fasciated, Mouse ears and ovate mutation. Lanceolate mutation seems to play a role in reducing M. perniciosa ability of increasing fruit locule number. The results suggest infection of MT by S-biotpye M. perniciosa alters levels/signaling of the hormones, especially auxin and cytokinin, inducing stem thickening (increasing xylem, phloem and cortex), reduction in plant height, root dry weight and increase in fruit locule number

Orientador: Adjair Antonio do Nascimento / Banca: Celio Raimundo Machado / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Milton Hissashi Yama / Resumo: A infecção experimental por T. vivax em ovinos foi realizada com o objetivo de avaliar os sinais clínicos, a parasitemia, as alterações hematológicas, anatomopatológicas e bioquímicas, além de realizar a biometria do parasito. Para tanto, foram utilizados oito ovinos machos, sorologicamente negativos para T. vivax, sendo quatro destinados ao grupo testemunho e quatro infectados com 105 T. vivax. As colheitas de sangue foram realizadas duas vezes antes da infecção e, posteriormente, em dias determinados, destinados aos exames laboratoriais. Exames clínicos e parasitemias foram realizados diariamente; e o peso, um dia antes da infecção, e com intervalos de 30 dias, a necropsia foi realizada aos 120 dias após infecção. Observou-se que a amostra usada era típica de T. vivax e o período prépatente de um dia, com parasitemia intermitente até o final do experimento. Os sinais clínicos encontrados nos animais infectados foram: apatia, palidez das mucosas, emaciação, aumento dos linfonodos, corrimento nasal, hipertermia, alterações no peso, diarréia e neuropatias. Ocorreu diminuição significativa na contagem global de hemácias, no teor de hemoglobina, no hematócrito e no volume corpuscular médio. A anemia, no final da observação, foi microcítica normocrômica, e leucocitose causada por linfocitose. Todos os exames bioquímicos apresentaram alterações nos animais infectados em relação ao grupo testemunho exceto a tiroxina total. No geral, observou-se: diminuição do colesterol total, colesterol ligado ao HDL, do lipídio total hepático, dos glicogênios hepático e muscular, ferro, magnésio, gamaglutamiltransferase, aspartatoaminotransferase, fosfatase alcalina, creatinaquinase, lactatodesidrogenase, triiodotironina, cortisol e nas proteínas da fase aguda, exceto a transferrina e antitripsina que estiveram altas no final do período experimental...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this research was to study an experimental infection of T. vivax in sheep, evaluating clinical signs and parasitemia as well as hematological, anatomopathological and biochemical alterations and to obtain the biometric data of the parasite. Eight male sheep were used, four in the testimony group and four infected with 105 T. vivax .Blood samples were collected two times before and posterior to receiving the infection on days designated and determined by laboratory exams. The animals were examined daily, as well as the clinical aspects and parasitemia. The animals were also weighed one day before the infection and in 30 day intervals, until they were sacrificed. The following results were obtained: the sample used was typical of T. vivax and the parasites were detected in the blood on the first day after the infection of the intermittent parasite until the end of the experiment. The clinical signs found were: apathy, paleness of the mucous, emaciation, lymph gland enlargement, runny nose, hyperthermia, weight alterations, diarrhea and neurological signs. There was a significant decrease in the global hemacia count, hemoglobin and in the hematocritic and in the average packed cell volume. The anaemia, at the end of the observations, were microcitic, normochromic and leucocitosis due to the lymphocytes. All of the biochemical exams presented alterations in the animals infected in relation to the testimony group except for the thyroxine. In general, was observed: decrease in total cholesterol, HDL, total hepatic lipid, hepatic and muscular glycogen, iron, magnesium, gamaglutamiltrasnferase, aspartate aminotransferase, alkaline phosphatase, creatine kinase, lactate desidrogenase, triiodothyronine, cortisol and proteins in the acute phase except the transferrin and antitrypsin that were high at the end of the experimental period...(Complete abstract, click electronic address below) / Doutor

Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-09-15T17:49:26Z No. of bitstreams: 1 TeseTLLC.pdf: 3509437 bytes, checksum: 42003cf0915a332a24874db33a08def6 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:27:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseTLLC.pdf: 3509437 bytes, checksum: 42003cf0915a332a24874db33a08def6 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:28:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseTLLC.pdf: 3509437 bytes, checksum: 42003cf0915a332a24874db33a08def6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T19:28:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseTLLC.pdf: 3509437 bytes, checksum: 42003cf0915a332a24874db33a08def6 (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / This project aims to investigate the TiO2-NP toxicity after acute (48 h) and subchronic (14 d) exposure using hematology, biochemical and morphological biomarkers in P. lineatus. TiO2- NP only caused blood disorders after subchronic exposure and did not show geno- and neurotoxicity, but they affected the immunity of P. lineatus. In gills, acute exposure to TiO2- NP decreased reactive oxygen species (ROS) formation and increased glutathione (GSH) levels, while subchronic exposure increased ROS and GSH levels and inhibited superoxide dismutase (SOD) activity. In kidney, acute exposure to TiO2-NP did not cause ROS formation and changes in antioxidant enzymes activity, but increased GSH and lipid peroxidation (LPO) levels. Subchronic exposure inhibited catalase activity in kidney tissue, but redox balance was not impaired. In the liver, acute exposure to TiO2-NP did not alter the antioxidant enzymes activity and metallothionein levels, but ROS formation decreased and GSH levels increased. After subchronic exposure, SOD activity did not change, but GPx and GST activity and GSH levels increased in the liver. Additionally, morphological damage was found in gills, liver and kidneys. Gills showed slight changes after acute exposure and slight to moderate changes after subchronic exposure. In kidney and liver tissue, degenerative changes and necrosis occurred after TiO2-NP exposure. TiO2-NP also inhibited enzymes of osmoregulation activity in gills after acute exposure, but had no effect after subchronic exposure and in renal tissue. Mitochondria-rich cells (MRC) density increased in gill filaments and renal tissue after subchronic exposure, while plasma osmolality decreased and calcium ions (Ca2+) concentration increased after acute exposure. Osmolality, however, was restored after subchronic exposure. These results suggest that GSH played an important role in preventing ROS formation. In liver and kidneys, TiO2-NP can cause moderate to severe tissue damage the long term, may lead to organ dysfunction, as considerable portion of the organ was reduced due to necrosis and degenerative damage. Osmoregulatory system impairment was caused after acute exposure to TiO2-NP, but no after subchronic exposure, probably due to proliferation of new MRC and morphological changes in gills. However, these morphological changes may hinder gases exchange and osmotic and ionic balance in the long term. / O presente projeto teve como objetivo investigar a toxicidade das NP-TiO2 após exposição aguda (48 h) e subcrônica (14 d) utilizando biomarcadores de hematologia, bioquímicos e morfológicos em P. lineatus. As NP-TiO2 causaram distúrbios hematológicos apenas após exposição subcrônica e não mostraram genotoxicidade e neurotoxicidade, porém afetaram a imunidade dos animais. Nas brânquias, a exposição aguda a NP-TiO2 diminuiu a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e aumentou os níveis de glutationa (GSH), enquanto a exposição subcrônica aumentou as ERO e os níveis de GSH e diminuiu a atividade da superóxido dismutase (SOD). Nos rins, a exposição aguda a NP-TiO2 não causou formação de ERO e alteração na atividade das enzimas antioxidantes, porém causou um aumento nos níveis de GSH e lipoperoxidação (LPO). Após exposição subcrônica a atividade da catalase diminuiu sem causar desbalanço oxidativo. No fígado, a exposição aguda a NP-TiO2 não alterou as enzimas antioxidantes e metalotioneína, mas causou diminuição de ERO e aumento de GSH. Após exposição subcrônica ocorreu uma diminuição na atividade da SOD e aumento da atividade das enzimas GPx e GST e do conteúdo de GSH no fígado. Danos morfológicos também foram encontrados em brânquias, fígado e rins. As brânquias mostraram alterações leves após exposição aguda e alterações leves e moderadas após exposição subcrônica. No tecido renal e hepático, mudanças degenerativas e necrose ocorreram após exposição a NPTiO2. As NP-TiO2 inibiram a atividade das enzimas com função de osmorregulação branquiais após exposição aguda sem nenhuma alteração após exposição subcrônica e no tecido renal. A densidade de células ricas em mitocôndrias (CRM) aumentou nos filamentos branquiais e tecido renal após exposição subcrônica, enquanto a exposição aguda diminuiu a osmolalidade plasmática e aumentou a concentração de íons cálcio (Ca2+). No entanto, a osmolalidade foi restabelecida após exposição subcrônica. Esses resultados sugerem que a GSH pode ser uma das principais vias no combate as ERO. No fígado e nos rins, as NP-TiO2 podem causar danos moderados a severos no tecido que podem levar à perda da função do órgão em longo prazo, uma vez que a porção do tecido funcional reduziu devido aos danos degenerativos e necrose. Desequilíbrio osmorregulatório foi causado pela exposição aguda a NP-TiO2, mas não após exposição subcrônica devido à proliferação de novas CRM e mudanças morfológicas nas brânquias. No entanto, essas mudanças morfológicas podem dificultar a troca de gases e o equilíbrio osmótico e iônico em longo prazo.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 759656 bytes, checksum: 08559ba05ec99261b3eaa0c86a4aa9e9 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Samples of mandibular, mediastinic, gastric, mesenteric and inguinal lynph nodes and lungs. kidneys, liver, heart and spleen of 24 pigs showing clinical features of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) and samples of inguinal lynph nodes of 24 clinicaly healthy pigs were colected. In one part of the samples were performed real time PCR for detection of the Porcine Circovirus 2 (PCV 2) nucleic acid. The other part were analysed for histopathological lesions. One part of the lynph nodes were submited to immunohistochemistry against the PCV 2 and this results were compared to the results of real time PCR Lynphocellular depletion and infiltration of histiocytic cells were the most seen lesions in lynph nodes. Based on the intensity of this lesions, three stages of the desease were determined Stage 1, mild lesions (39%), stage 2, moderate lesions (32,7%) and stage 3, severe lesions (20%). In the lungs, the majority of the lesions seen were intersticial pneumonia with lynphoid and hystiocytic infiltration of the alveolar septae ln the kidneys, intersticial nephritis with mononuclear infnltration were seen in 35% of the samples and glomerulonephritis with glomerular fibrin and neutrophill infiltration were seen in 50% of the samples. In the Iiver, lynphoid infiltration in the periportal zones were the lesions most observed. Lynphocellular depletion were obseved in the most samples of the spleen. No lesions were observed in the heart. Only 65.3% of the lynph nodes submitted to immunohistochemistry were considered positive for the presence of the PCV 2. Though 100% of the samples submitted to the real time PCR were considered positive for the presence of the virus. / Foram coletadas amostras de Iinfonodos mandibulares, mediastínicos, epigástricos, mesentéricos e inguinais superficiais, além de pulmões, rins, fígado. coração e baço de 24 suínos exibindo sinais clínicos da síndrome do definhamento multissistêmico pós-desmame (PMWS) e amostras de Iinfonodos inguinais superficiais de 24 suínos cIinicamente sadios. Uma pane dos tecidos foi encaminhada para a realização de PCR em tempo real para detecção do ácido nucléico do Circovírus suíno 2 (PCV 2). Outra parte das amostras foi incluída em parafina e cortada na espessura de 4 um para avaliação histopatológica. Uma parte dos linfonodos foi submetida ao teste de imunoistoquímica e este resultado foi comparado ao resultado do PCR em tempo real. Depleção Iinfóide e infiltrado macrofágico foram as lesões mais observadas nos linfonodos. Baseado na intensidade destas lesões foram determinados trés estágios da doença. Estágio 1, lesões discretas (39%), estágio 2, lesões moderadas (32,7%) e estágio 3, lesões graves (20%). Nos pulmões, a lesão mais encontrada foi pneumonia intersticial com espessamento dos septos alveolares por infltrado inflamatório mononuclear, principalmente linfócitos e histiócitos. Nos rins, a nefrite intersticial com infiltrado de linfócitos e histiócitos na medula e na córtex renal foi observada em 35 % das amostras e glomerulonefrite com infiltrado de fibrina e neutrófilos nos glomérulos foi observada em 50 % das amostras. No fígado, o achado mais freqüente foi infiltrado inflamatório linfocítico nas regiões periportais. Depleção linfóide foi observada na maioria das amostras de baço. Não foram observadas lesões nas amostras de coração. Apenas 65,3 % dos linfonodos submetidos à imunoistoquímica foram considerados positivos para a presença do PCV 2. Entretanto, 100°/o das amostras foram consideradas positivas para a presença do vírus pelo PCR em tempo real.

Resumo: Este trabalho objetivou avaliar a anatomopatologia, o hemograma e o perfil bioquímico sérico de aves de postura inoculadas por Salmonella Gallinarum (SG) contendo os genes cobS e cbiA inoperantes (SGcobScbiA) que mostrou ser avirulenta em trabalhos anteriores, comparando-a com cepas virulentas SGNalr e SGcobS, para mostrar se SGcobScbiA pode ser componente de vacina contra cepas selvagens de SG e S.Enteritidis. 280 pintainhas foram distribuídas em 4 grupos (G); G1 (SGcobS), G2 (SGNalr), G3 (SGcobScbiA) e G4 (controle). Com exceção do G4, os grupos receberam 0,2 mL de suas respectivas cepas contendo aproximadamente 108 UFC/mL de inóculo, aos 5 dias de idade. A eutanásia foi realizada 24h antes (1DAI) e após a inoculação (1DPI), e 3 (3DPI), 5 (5DPI), 7 (7DPI), 10 (10DPI) e 15 (15DPI) dias após a administração do inóculo, sacrificando-se, em cada momento, dez aves de cada grupo. As aves foram sacrificadas, obtendo-se amostras de sangue utilizadas para os exames hematológicos e bioquímicos. Fragmentos de fígado, baço, timo, bursa de Fabricius, rins e coração foram destinados aos exames histológicos. As aves inoculadas com a cepa SGcobS tiveram comportamento semelhante às aves inoculadas por SGNalr, porém com algumas respostas diferentes nos exames hematológicos e bioquímicos. As aves inoculadas com a cepa SGcobScbiA tiveram comportamento semelhante ao grupo controle, entretanto foi verificado alterações brandas em alguns parâmetros, mostrando que estudos futuros devem ser feitos, verificando se as alterações constatadas não irão interferir no desempenho de aves vacinadas com a cepa SGcobScbiA. / Abstract: The aim of the present study was to evaluate anatomopathology, hemogram and blood serum components of commercial layers experimentally inoculated with SGcobScbiA, which is a Salmonella Gallinarum (SG) strain it shows attenuation of the virulence in previous research and it was compared with high virulence SGNalr and SGcobS strains in order to show if SGcobScbiA has potential to be use as a vaccine against SG and S. Enteritidis wild strains. 280 commercial layers were divided into 4 groups (G); G1 (SGcobS), G2 (SGNalr), G3 (SGcobScbiA) and G4 (control group). With exception of G4, all the other groups received 0,2 mL of their respective strain containing about 108 CFU/mL of the inoculum with five days of age. Birds were sacrificed 24 hours before (1DBI) and 24 hours after the inoculation (1DAI), and three (3DAI), five (5DAI), seven (7DAI) ten (10DAI), and fifteen (15DAI) days after the administration of the inoculum, slaughtering ten birds at a time in each group. Birds were submitted to euthanasia and blood samples were collected in order to make the hematological and blood serum components test. Samples of liver, spleen, thymus, bursa of Fabricius, kidneys and heart were collected for the histological test. The birds inoculated with SGcobS strain had similar behavior when compared with that ones who received SGNalr strain, however some different responses in the hematological and blood serum components were found. On the other hand, the birds inoculated with SGcobScbiA strain had similar behavior when compared with the control group, however, lower alterations in some parameters were found. Further studies must be done to verify if these alterations will not interfere in the performance of the vaccinate birds with SGcobScbiA strain. / Orientador: Ângelo Berchieri Júnior / Coorientador: José Jurandir Fagliari / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Raimundo Souza Lopes / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Apesar de significativos avanços obtidos no estudo da esquistossomose mansônica, as relações existentes entre esquistossomose e má-nutrição ainda não se acham completamente esclarecidas. Sendo a fase de lactação um período de vida de extrema importância para o indivíduo, alterações metabólicas na gestante podem afetar diretamente o desenvolvimento do feto sugerindo uma programação (imprinting) no metabolismo deste indivíduo em resposta adaptativa aos fatores ambientais encontrados em períodos iniciais de desenvolvimento. Este trabalho teve como objetivo avaliar as características do baço na fase aguda da infecção esquistossomótica de camundongos programados metabolicamente por restrição calórica e restrição protéica. Os baços dos animais eutanasiados na 9 semana de infecção foram submetidos a cortes histológicos (5m) e corados com hematoxilina-eosina. Foi realizada avaliação histopatológica, análise morfométrica e estereologia. A análise estatística foi realizada utilizando-se o programa Graph Pad Instat. Foi observada desorganização estrutural da polpa branca e da polpa vermelha nos grupos programados, independente da presença de infecção. Animais infectados apresentaram hiperplasia e hipertrofia da polpa branca e maior quantidade de pigmentos dispersos no tecido esplênico, bem como a presença de eosinófilos no interior de estruturas vasculares. A polpa branca dos grupos infectados tanto de restrição calórica quanto de restrição protéica apresentaram medidas morfométricas maiores quando comparados aos grupos não infectados. Os resultados estereológicos mostraram que o grupo de restrição calórica infectado apresentou menor densidade de volume de polpa vermelha, enquanto não houve diferenças significativas na densidade de volume de polpa branca. Megacariócitos foram vistos em maior quantidade nos grupos infectados, com ênfase no grupo de restrição protéica. Estes dados sugerem que a programação pela desnutrição materna na lactação e a infecção esquistossomótica provocam desorganização do tecido esplênico. / Despite significant advances in the study of schistosomiasis, the relationship between schistosomiasis and malnutrition are still not completely understood. As lactation stage is a extreme important lifetime for the individual, metabolic abnormalities during pregnancy can directly affect fetal development suggesting a metabolic imprinting of this individual in adaptive response to environmental factors found in earlier periods of development. This study aimed to evaluate the spleen characteristics in the acute phase of mice schistosomiasis metabolically programmed by caloric restriction and protein restriction. The spleens of animals euthanized at the 9th week of infection were subjected to histological sections (5μm) and stained with hematoxylin-eosin. It was performed histopathological evaluation, morphometric and stereological analysis. Statistical analysis was performed using Graph Pad Instat. It was observed structural disorganization of the white pulp and the red pulp on programmed groups, regardless of the presence of infection. Infected animals showed hyperplasia and hypertrophy of the white pulp and a larger amount of pigments dispersed in the spleen tissue, as well as the presence of eosinophils within vascular structures. The white pulp of both infected groups of caloric restriction and protein restriction showed higher morphometric measurements when compared to uninfected groups. The stereological results showed that the infected caloric restriction group had lower volume density of red pulp, while there were no significant differences in the volume density of white pulp. Megakaryocytes were seen in higher quantities in the infected groups, with emphasis on the protein restriction group. These data suggest that imprinting by maternal undernutrition during lactation and schistosome infection causes disorganization on the splenic tissue.

Cardiomiopatia dilatada (CMD) é uma doença miocárdica caracterizada por dilatação cardíaca e redução da contratilidade da parede do ventrículo esquerdo ou de ambos os ventrículos, sendo a etiologia de origem genética ou desconhecida. Em suínos existem raros relatos de CMD, sendo frequentemente relacionados com intoxicações por ionóforos ou gossipol. Surtos de CMD de etiologia desconhecida em suínos de rebanhos comerciais no Brasil sugeriram a existência de nova etiologia, possivelmente nutricional. Este estudo teve como objetivo investigar as possíveis causas dos surtos de CMD em suínos, a partir de análises macroscópicas, microscópicas, bioquímicas, cromatográficas, moleculares, imuno-histoquímica (IHQ) e reprodução experimental. E teve como resultado 2 artigos científicos. O primeiro artigo descreve os achados clínicos, patológicos, químicos e toxicológicos de três surtos de CMD em suínos de crescimento, além da reprodução experimental desta condição utilizando a ração de uma das propriedades afetadas. Para o estudo experimental utilizou-se 9 animais divididos em 3 grupo; Grupo 1 recebendo ração suspeita, Grupo 2 metade ração suspeita mais metade de ração controle e o grupo 3 recebeu ração controle. Dois suínos do grupo 1 apresentaram condições clínicas e patológicas semelhantes aos casos naturais após 8 dias de consumo da ração suspeita. Os principais sinais clínicos observados eram tosse e dispneia grave. Na necropsia foram constatados dilatação cardíaca bilateral acentuada, hidrotórax, hidropericárdio, edema pulmonar, ascite e fígado com aspecto de noz moscada. O segundo artigo teve como objetivo fazer a caracterização histológica, histoquímica e imuno-histoquímica das lesões cardíacas em 8 suínos com CMD e compara-las com dois suínos controles. As principais lesões evidenciadas foram atrofia de cardiomiócitos, vacuolização sarcoplasmática, ruptura de miofibras e fibras com padrão ondulado evidenciadas nas colorações de hematoxilina e eosina (HE), Tricrômico de Masson e Picrosírius. Na análise imuno-histoquímica utilizando o anticorpo anti-desmina houve uma imunomarcação reduzida ou inexistente em áreas com lesões histopatológicas. A imuno-histoquímica anti-desmina demonstrou ser uma importante ferramenta diagnóstica para caracterização de lesões de CMD em suínos. / Dilated cardiomyopathy (DCM) is a myocardial disease characterized by cardiac dilatation and reduced contractility of the left ventricular wall or both ventricles, the etiology of which is genetic or unknown. In pigs there are rare reports of DCM and are often related to ionosphere or gossypol poisoning. DCM outbreaks of unknown etiology in swine from herds in Brazil suggested the existence of a new, possibly nutritional, etiology. This study aimed to investigate the possible causes of DCM in pigs through macroscopic, microscopic, biochemical, chromatographical, molecular and immunohistochemical (IHC) evaluations, as well as the experimental reproduction of the disease. The project resulted in 2 scientific papers. The first article describes the clinical, pathological, chemical and toxicological findings of three DCM outbreaks in grower pigs, in addition to the experimental reproduction of this condition using the ration of one of the affected farms. For the experimental trial, 9 animals were divided into 3 groups; Group 1 received suspected ration only, Group 2 was fed a diet composed of half suspected ration plus half control ration, and group 3 received control ration only. Two pigs from group 1 presented clinical and pathological conditions similar to the natural cases after 8 days of consumption of the suspected ration. The main clinical signs observed were cough and severe dyspnea. At necropsy, bilateral cardiac dilatation, hydrothorax, hydropericardium, pulmonary edema, ascites and liver with the appearance of nutmeg were observed. The second article aimed to perform the histological, histochemical and immunohistochemical characterization of the cardiac lesions in 8 pigs with DCM and compare it with two control pigs. The main lesions evidenced were cardiomyocyte atrophy, sarcoplasmic vacuolization, rupture of myofibers and fibers with corrugated pattern evidenced in the staining of hematoxylin and eosin (HE), Masson's trichrome (MT) and Picrosírius (PS). Immunohistochemistry analysis using the anti-desmin antibody showed reduced or non-existent immunostaining in areas with histopathological lesions. The anti-desmin IHC proved to be an important tool for the diagnosis and characterization of DCM lesions in pigs.

Objetivo: Avaliar a concordância entre o exame anatomopatológico transoperatório de congelação (TO) e o diagnóstico histológico no exame anatomopatológico convencional (AP-conv) nas massas anexiais, divididas em grupos conforme seu tamanho e suas características morfológicas na ultrassonografia da pelve, para especificar fatores ultrassonográficos preditores de erro no TO. Os diagnósticos do TO nos grupos foram comparados com os AP-conv de tumores benignos, borderline e malignos. Métodos: Estudo transversal com avaliação retrospectiva em 302 pacientes com diagnóstico ultrassonográfico de massas anexiais, submetidas a procedimento cirúrgico no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Estas foram divididas em oito grupos, conforme as características morfológicas ultrassonográficas e o tamanho tumoral. Grupo 1: tumores uniloculares ≤ 10 cm; grupo 2: tumores líquidos septados ≤ 10 cm; grupo 3: tumores heterogêneos ≤ 10 cm; grupo 4: tumores sólidos ≤ 10 cm; grupo 5: uniloculares > 10 cm; grupo 6: líquidos septados > 10 cm; grupo 7: heterogêneos > 10 cm; e grupo 8: sólidos > 10 cm. O resultado diagnóstico do TO foi então comparado com o diagnóstico histológico final no AP-conv. Resultados: A concordância diagnóstica variou entre os grupos. Nos 33 casos do grupo 1, houve 100% de concordância (Kappa 1) entre o TO e o AP-conv. No grupo 2, com 32 casos, também houve 100% de concordância, assim como nos seis casos do grupo 8 (Kappa 1). No grupo 3, com 90 casos, a concordância diagnóstica também foi ótima (Kappa 0,898), com dois casos discordantes (2,22%): um diagnóstico benigno no TO que se confirmou borderline no AP-conv e outro benigno no TO que se confirmou maligno no AP-conv. O grupo 4, com 24 casos, apresentou uma discordância (4,17%) de benigna no TO e maligna no AP-conv (Kappa 0,869). No grupo 5, houve concordância em 93% dos 15 casos, com uma discordância (6,67%) no diagnóstico: benigno no TO e maligno no AP-conv; não foi possível calcular o Kappa neste grupo. Dos 39 casos do grupo 6, 89,74% tiveram o diagnóstico concordante, com duas discordâncias (5,13%): benignos no TO foram borderline no AP-conv; uma discordância (2,57%): borderline no TO foi benigno no AP-conv; e outra discordância (2,57%): borderline no TO foi maligno no AP-conv (Kappa 0,591). O grupo 7, com 63 pacientes, teve concordância em 55 casos (87,30%), com oito casos discordantes (12,70%): dos seis benignos (9,52%) no TO, três foram borderline (4,76%) e três malignos (4,76%) no AP-conv; dos dois borderline (3,18%) no TO, um foi benigno (1,59%) e um maligno (1,59%) no AP-conv (Kappa 0,776). Conclusão: O TO tem uma concordância com o AP-conv que varia de ótima em tumores císticos a moderada em tumores multiloculados com mais de 10 cm. Nosso estudo apresenta limitações por ser um estudo retrospectivo, além de não haver sido o mesmo patologista quem avaliou todas as peças. Mas a estratificação das massas anexiais em grupos, de acordo com seu tamanho e características morfológicas na ultrassonografia, é um bom método para avaliação pré-operatória de massa anexiais, sabendo-se que, nas lesões císticas septadas ou com componentes sólidos maiores que 10 cm, a concordância do TO com o AP-conv é moderada. Portanto, devemos estar cientes que, em tumores maiores de 10 cm com componente sólido, o erro diagnóstico do TO aumenta. Assim, nesses casos, o patologista e o cirurgião deverão estar atentos para um correto diagnóstico e um planejamento adequado do tratamento, evitando, com isso, o subtratamento ou o sobretratamento da paciente. / Objective: To assess agreement between intraoperative frozen section (IFS) and final histopathology (HPE) for anatomic pathology examination of adnexal masses stratified according to size and morphological characteristics on pelvic ultrasonography and define sonographic predictors of diagnostic error of IFS. IFS classification of masses as benign, borderline, or malignant was compared to final diagnoses after HPE. Methods: Cross-sectional study with retrospective assessment of 302 patients with a sonographic diagnosis of adnexal masses that underwent surgical treatment at Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Patients were divided into eight groups according to mass size and sonographic morphology as follows: Group 1, unilocular tumors ≤10 cm in size; Group 2, septated cystic tumors ≤10 cm in size; Group 3, heterogeneous tumors ≤10 cm in size; Group 4, solid tumors ≤10 cm in size; Group 5, unilocular tumors >10 cm in size; Group 6, septated cystic tumors >10 cm in size; Group 7, heterogeneous tumors >10 cm in size; and Group 8, solid tumors >10 cm in size. The diagnostic findings of IFS were then compared with the final histopathologic diagnosis. Results: Diagnostic agreement varied among groups. In Groups 1 (33 cases), 2 (32 cases), and 8 (6 cases), there was 100% agreement between IFS and HPE (Kappa = 1.0). In Group 3 (90 cases), agreement was excellent (Kappa = 0.898), with only two divergences (2.22%): one mass classified as benign on IFS that was borderline on HPE and another initially classified as benign that later proved malignant on HPE. In Group 4 (24 cases), Kappa was 0.869, with one divergence (4.17%), again a mass classified as benign on IFS which proved malignant on HPE. In Group 5, there was agreement in 93% of 15 cases, with one divergence (6.67%) in diagnosis: benign on IFS and malignant on HPE. Kappa could not be calculated for this group. Of the 39 cases in Group 6, there was agreement in 89.74%, with two masses classified as benign on IFS later deemed malignant on HPE (5.13%); one borderline on IFS diagnosed as benign on HPE (2.57%); and one borderline on IFS and diagnosed as malignant on HPE (2.57%) (Kappa = 0.591). In Group 7 (63 patients), there was agreement in 55 cases (87.30%), with eight divergences (12.70%): of six masses deemed benign on IFS (9.52%), three (4.76%) were diagnosed as borderline and three (4.76%) as malignant on HPE; of two masses deemed borderline on IFS (3.18%), one was later deemed benign (1.59%) and one diagnosed as malignant (1.59%) on HPE (Kappa = 0.776). Conclusion: Agreement between IFS and HPE ranged from excellent (for cystic masses) to moderate (for multilocular tumors larger than 10 cm). Limitations of this study include its retrospective design and the fact that not all surgical specimens were examined by the same pathologist. Nevertheless, stratification of adnexal masses by sonographic morphology and size is a good method for preoperative assessment, with the knowledge that agreement between IFS and HPE is only moderate for septated cystic or heterogeneous lesions larger than 10 cm. Therefore, clinicians should bear in mind that the diagnostic error of IFS is higher for adnexal masses >10 cm in size with a solid component. In these cases, particular care is required from both the pathologist and surgeon for proper diagnosis and treatment planning, thus avoiding undertreatment or overtreatment.