1. Moléculas de adhesión. (MA).Las MA son glicoproteínas que constituyen un conjunto de receptores de membrana encargados de mediar las interacciones célula-célula y célula-matriz extracelular a través de la unión ligando-receptor.Integrinas. Son heterodímeros de membrana de naturaleza proteica, resultado de la unión no covalente entre dos cadenas polipeptídicas  y . Familia de las inmunoglobulinas. Están constituidas por un conjunto de proteínas de membrana, caracterizadas por contener, en secuencia polipeptídica, el dominio de las inmunoglobulinas.Selectinas. Es una familia compuesta de tres proteínas designadas por el prefijo E (endotelio), P (plaquetas) y L (leucocito). Familia del CD44. Los miembros de esta familia están implicados en numerosos procesos biológicos .2. Generalidades de las patologías a estudio.2.1 Leucemia linfática crónica (LLC). Es una neoplasia de linfocitos B activados, de origen monoclonal detenidos en un estadio intermedio de diferenciación. 2.2 Tricoleucemia. Es una proliferación clonal de linfocitos B, post-foliculares.2.3 Linfoma linfoplasmocítico. Es un linfoma no Hodgkin originado a partir de un linfocito B post-folicular y previo a la etapa de célula plasmática. 2.4 Linfoma B esplénico de la zona marginal con linfocitos vellosos. 2.5 Linfoma del Manto. Tiene su origen en el manto folicular. 2.6 Linfoma folicular. Deriva de los linfocitos B del centro germinal del folículo linfoide. 3. Citometría de flujo. Es un método analítico que mide la emisión de fluorescencia y dispersión de la luz, a medida que las células desfilan de una en una, arrastradas por un flujo portador, frente a un sistema de detección. MATERIAL Y METODOS.1.Pacientes. Se incluyeron 123 pacientes diagnosticados de síndrome linfoproliferativo crónico (SLPC) desde Julio-98 hasta Junio-00. Se estudiaron extensiones de sangre periférica, de aspirado de médula ósea y biopsias medulares, además de estudios serológicos. 2.Citometría de flujo. Los anticuerpos monoclonales utilizados al diagnóstico: CD19, CD20, CD5, CD23, CD19/cadenas Kappa, CD19/cadenas Lambda, CD38, CD79, CD103, CD10, CD43, CD22, FMC7, y las MA: CD44, CD49b, CD49d, CD49e, CD62L, CD18, CD54, CD11a, CD11b, CD11c, CD50.3.Material. Instrumentos- Citómetro de flujo EPICS-XL-MCL, estación semiautomatizada de preparación de muestras, centrífuga clínica, contador hematológico y microscopio óptico.Reactivos y productos- Solución salina Optilyse C, solución salina tamponada de fosfatos, medio de separación de células mononucleares Ficoll-Paque, May Grünwald puro, agua tamponada, Giemsa y fluoroesferas Flow-Check.4.Estudio estadístico.Variables estudiadas- datos demográficos, clínicos, hematológicos en sangre periférica y en médula ósea, bioquímicos, del tratamiento (tto) y citométricos de inmunofenotipo de superficie.Métodos utilizados para su análisis- análisis descriptivo univariante, análisis descriptivo bivariante, análisis de supervivencia y análisis multivariante.RESULTADOS.1.Drescripción clínica de los pacientes. Se incluyeron 123 pacientes diagnosticados de SLPC, entre enero-1990 y junio 2001.2.Parámetros clínico-biológicos. Se realizaron estudios analíticos: hemograma y bioquímica. Estadiaje de enfermedad, tipo de infiltración medular, y evolución clínica, así como de la respuesta a tto y tiempo de duración de la misma.3.Resultados del inmunofenotipaje. Se analizaron diferentes anticuerpos monoclonales para el diagnóstico y su frecuencia de positividad.4.Expresión de MA. En el estudio univariante obtuvimos: que existía relación estadísticamente significativa (RES) entre estadios de Binet-Rai IV y valores elevados el CD54 (p=0.05), entre el tiempo de duplicación linfocitaria >12 meses y valores máximos para CD44 (p=0.03), vimos altos recuentos linfocitarios y valores altos para CD44 (p=0.058), bajos recuentos y altos valores para CD18 (p=0.007) y para CD11b (p=0.009), presentaron progresión de enfermedad aquellos con valores superiores para el CD50, CD49e y CD18 (p=0.051, p=0.017, p=0.057), además pudimos establecer RES entre pacientes fallecidos y valores bajos y la negatividad para CD11b (p=0.055) y de CD11c (p=0.001). En el estudio multivariante obtuvimos que la positividad para CD49d y CD54 aumentan el riesgo de precisar tto (p=0.03 y p=0.01) y la posividad para CD62 lo disminuye (p=0.04).DISCURSION.1.Expresión de las MA y las diferentes entidades.a- -Integrinas. Obtuvimos RES entre altos valores de CD18 y no-LLC (p= 0.022) RES entre baja expresión de CD18 y scores altos (p= 0.004)b- 1-Integrinas. El CD49d tiene mayor expresión en el grupo no-LLC frente al grupo LLC (p=0.002) c-Superfamilia de las Inmunoglobulinas. CD54 se expresa más en el grupo de no-LLC que en LLC (p= 0.048), y también RES entre los valores altos de CD54 y scores altos (p= 0.017) d- L-Selectina (CD62L) y CD44. La expresión de CD62 fue significativamente mayor en el grupo de LLC (p=0.004), CD44 es expresada en todos los casos, sin relación con la supervivencia o pronóstico y CD18, CD49d, CD54 son marcadores de no-LLC.2.Correlación entre las MA y los estadíos clínicos.a- -Integrinas, Inmunoglobulinas y Selectina. Si hay RES entre expresión de CD54 y los estadios avanzados de enfermedad. MARCADOR DE MASA TUMORAL.Además en el estudio multivariante, CD62 surge como un marcador independiente de buen pronóstico. BUEN INDICADOR DE ENFERMEDAD POCO AGRESIVA. b-CD44. Está asociada con estadios avanzados de enfermedad, es un indicador de peor pronóstico y supervivencia. 3.MA y factores pronósticos clásicos.a- Patrón de infiltración. No demostramos RES.b- Tiempo de duplicación linfocitaria. Hemos podido demostrar RES entre valores altos de CD44 y el tiempo de duplicación linfocitaria mayor de 12 meses o duplicación inexistente.c- Recuento linfocitario. Existe RES entre alta positividad de CD11b, CD18 y recuentos bajos de linfocitos.4.Progresión.En el estudio univariante se ha demostrado que los pacientes con expresión elevada de CD50, CD49d y CD18 tienen una mayor probabilidad de progresar que los que presentan valores inferiores.5.Relación entre la expresión de las MA, la necesidad de tratamiento y la supervivencia.En el estudio multivariante la expresión de CD49d y de CD54 aumentan la probabilidad de precisar tto citorreductor.CONCLUSIONES.1.-La expresión de las MA en los SLPC de nuestra serie es similar a lo que se describe en la literatura. Así, las LLC expresan con mayor frecuencia CD62 y los otros SLPC característicamente expresaron con mayor frecuencia CD49d, CD18 y CD54, siendo útil este patrón en el diagnóstico diferencial de estas entidades.2.- El CD44, MA expresada con alta intensidad en el 90% de los casos, en nuestras manos sólo se relaciona con un tiempo de duplicación linfocitaria mayor de 12 meses, pero no ha podido ser reconocido como factor de mal pronóstico o de riesgo para tto en el estudio multivariante.3.- CD54, MA poco expresada en las LLC, aparece relacionada con estadios avanzados de la enfermedad, mientras que CD62 es un marcador pronóstico independiente, apareciendo esta MA más expresada en los pacientes con supervivencia prolongada. También la expresión de CD11c actúa como factor protector, incluyendo al paciente como de bajo riesgo de mortalidad.4.- Hemos observado que la presencia de CD54 y CD49d son factores independientes que implican indirectamente una mayor agresividad de la enfermedad, con requerimiento de tto citoreductor, mientras la presencia de CD62 actúa como factor protector, indicando enfermedad menos agresiva (sin necesidades terapéuticas). / OBJECTIVES :1. Determinate the expression of the MA in the different entities being studied.2. Correlate the expression of the MA with clinic stages of LLC, and the classical prognostic factors.4. Establish the prognostic and predictive value of the MA and SLPC.MATERIAL AND METHOD:We included 123 patients diagnostic of SLPC with expressed leukemia diagnostic in H.Dr.Peset, starting the study of MA (CDlla, CDllb, CDllc, CD18, CD50, CD54, CD49c, CD49d, CD49e and CD44) by cytometric flow in July 1998 until June 2001.The statistical method used was univariant and bivariant descriptive analysis and Klapan-Meyer actuarial curves for survival study. The multivariable analysis was done by way of Cox logistical regression.RESULTS:We obtained a better survival in the group of non-treated (p=0.04), as well as a better survival for the group diagnosed LLC compared with other groups of SLPC (p=0.0027), establish SS between the strong expression of CD18, CD49d and CD54 and the group of others (p=0.022, 0.002, 0.048) as well as the low expression of CD18 and the higher positivity of CD62 and LLC (p=0.004, 0.004). We related advanced stages with the expression of CD54 (p=0.05). Finally the univariant analysis relates positive CD50, CD49d and CD18 with a higher probability of improvement. The multivariant analysis also relates positive CD11c and CD62 with a higher survival, positive CD54 and CD49d with high incertitude in determining a treatment and lower incertitude for positive CD62 patients.CONCLUSIONS:1. The LLC expresses with higher frequency CD62, opposed to CD49d, CD54 and CD18 that are more frequent in other SLPC.2. The expression of CD44 in our sample may result from a higher cellular differentiation.3. CD54 seems related to a advanced stage, while the patients with CD62 and CD11c show a higher survival rate, CD62 identifies as an independent prognostic marker.4. The presence of CD54 and CD49d implies higher certainty in determining the treatment, on the contrary positive CD62 will reduce that certainty.

En los linfomas no Hodgkin (LNH), las traslocaciones primarias características dan lugar a la desregulación de un protooncogén (debido en un gran número de casos al reordenamiento con el gen de las inmunoglobulinas) y cuya consecuencia funcional es la alteración de la expresión génica con potencial neoplásico. Otro tipo de lesión genética frecuente es la delección cromosómica que inactiva genes supresores tumorales, por ejemplo p53 ó p16. Estas anomalías se identifican junto a las traslocaciones primarias y se consideran alteraciones secundarias relacionadas con la progresión y transformación tumoral. También la amplificación génica es otro mecanismo de reordenamiento molecular frecuente en los LNH (oncogenes REL, c-MYC, y BCL2).La hibridación in situ con fluorescencia (FISH) es el vínculo entre citogenética y biología molecular. Ha permitido establecer la relación entre una determinada alteración a nivel del cromosoma y su correspondiente región genómica, con la identificación final de los genes implicados. Esta Tesis engloba tres trabajos cuyo objetivo ha sido detectar y caracterizar reordenamientos moleculares específicos de varios tipos de LNH. En el primer artículo se desarrollan sondas flanquantes del locus correspondiente al gen BCL6 que permiten detectar todas sus posibles traslocaciones. Este gen se encuentra alterado en un 40% de los casos de linfoma difuso de célula grande, sin que este aún claro su valor pronóstico. En el segundo artículo se detectan reordenamientos específicos que podrían implicarse en la progresión del linfoma esplénico de la zona marginal: trisomía 3 y reordenamientos en 19p13 y 7p22-q22. En el tercer artículo el estudio molecular de dos casos de linfoma MALT con t(14;18) ha permitido el clonaje de un nueva traslocación citogenética que afecta al gen MALT1, una paracaspasa implicada en la respuesta inmune y en la señalización a través de NF-kB. También se demuestra la amplificación de este gen en líneas celulares de LNH y el aumento en la expresión como consecuencia de estos reordenamientos. / Characteristic primary translocations in non-Hodgkin lymphomas (NHL-B), trigger deregulation of a proto-oncogene (most of them mediated by rearrangement with IGH gene) and thus, generating changes in the expression of cells with neoplastic potential. Another frequent genetic lesions are the chromosomic deletions inactivating tumour supressor genes as p53 ó p16. These rearrangements together with primary translocations are asumed to be related to tumoral progression and transformation. Genetic amplification is another frequent mechanism of rearrangement in NHL-B (oncogenes like REL, c-MYC, or BCL2).Fluorescent in situ hybridisation (FISH) is related to cytogenetics and molecular biology and represents the link between an specific rearrangement at the chromosome level and the genomic candidate region, allowing detection of the genes affected. This thesis includes three papers with the follow objective: the detection and characterisation of specific molecular rearrangements of NHL-B subtypes. Flanking probes detecting all possible translocations of BCL6 are developed in the first paper. The gene is rearranged in about 40% of diffuse large B cell lymphoma but prognosis value is still controversial. In the second paper, specific rearrangements detected in splenic marginal zone lymphoma are possible specific regions related to progression or agressive disease: trisomy +3 and rearrangements in chromosomal locations 19p13 and 7p22-q22. Two cases of MALT lymphoma showing t(14;18) have been characterised in the third paper, allowing us the molecular cloning of a novel translocation affecting MALT1 gene, a paracaspase involved in the immune response and proliferation mediated by NF-kB. We also demonstrate that the gene is amplified in several cell lines derived from NHL-B. Both amplification and translocation induce increase of MALT1 expression.

La composición proteica de los venenos de serpiente refleja el hecho de que éstos se originaron en etapas tempranas de la evolución de los reptiles escamosos, por reclutamiento y transformación por evolución acelerada de un número reducido de proteínas endógenas. Los venenos de los vipéridos poseen un arsenal de proteínas capaces de degradar la matriz extracelular e interferir en la cascada de coagulación, el sistema hemostático y la reparación de tejidos. Los proteomas de las serpientes Viperinae caracterizados hasta la fecha están constituidos por isoformas de unas pocas familias de proteínas, cuya abundancia relativa presenta gran variación interespecífica. Las proteínas mayoritarias de los venenos de las víboras y serpientes de cascabel se agrupan en enzimas (proteasas dependientes de serina, metaloproteasas dependientes de Zn2+ del grupo de las reprolisinas, isoenzimas del grupo II de fosfolipasas A2, L-amino acido oxidasa) y proteínas sin actividad enzimática (proteínas similares a lectinas dependientes de Ca2+ y disintegrinas). Las disintegrinas (40-100 AAs) son liberadas al veneno por procesamiento proteolítico de las metaloproteasas PII y actúan inhibiendo la adhesión de las integrinas a sus ligandos. Se clasifican en función de su longitud y número de enlaces disulfuro en monoméricas largas (~90 AAs, 7 SS), medias (~70 AAs, 6 SS) y cortas (~ 40 AAs, 4 SS) y diméricas (subunidades de ~ 63 AAs, 2 SS Inter.- y 4 SS intracatenarios). El objetivo general de esta Tesis Doctoral ha sido profundizar en el estudio de las bases moleculares de la diversificación estructural y funcional de la familia de las disintegrinas. Partimos de un esquema evolutivo basado en la pérdida sucesiva de enlaces disulfuro ("ingeniería de enlaces disulfuro") y la acumulación de mutaciones ("química combinatorial") en el bucle de inhibición de integrinas. La aplicación de técnicas proteómicas nos ha permitido determinar la composición proteica del veneno crudo de Sistrurus m. barbouri, Echis ocellatus y Bitis arietans. Para ello los venenos se fraccionaron por RP-HPLC y cada una de estas fracciones fue analizada por SDS-PAGE, secuenciación N-terminal, determinación de masa molecular, contenido en cisteínas libres, enlaces disulfuro y huella peptídica por espectrometría de masas MALDI-TOF, además de secuenciación de novo por espectrometría de masas en tándem (MS/MS). Así pudimos adjudicar cada pico obtenido tras la separación a 10-12 familias de proteínas conocidas. Con el objeto de comparar proteoma y transcriptoma e investigar la posible presencia de intermediarios evolutivos de las familias de disintegrinas no expresados en el veneno se han analizado librerías de ADNc de glándulas de venenos de Bitis arietans (Ba) y Echis ocellatus (Eo). En el caso de Ba identificamos un producto que presenta un dominio tipo disintegrina ECD con 16 cisteínas, conservando el enlace entre las CysXIII-CysXVI, pero que carece del dominio rico en cisteínas típico de las metaloproteasas PIII, lo cual indica que la deleción del dominio rico en Cys ocurrió con anterioridad a la pérdida del enlace disulfuro C13-C16. En Eo amplificamos precursores de disintegrinas diméricas, los cuales pertenecen a la clase "mensajeros cortos" (carecen del dominio metaloproteasa). La existencia de mensajeros que codifican para disintegrina no expresados en el veneno podría indicar la existencia de "fondos de reserva genómicos" de eventual relevancia para la adaptación a ecosistemas cambiantes. Además, mediante el análisis de la organización genómica de disintegrinas de las diferentes familias estructurales, hemos demostrado que la pérdida sucesiva de intrones forma parte de un mecanismo evolutivo de diversificación de las disintegrinas que conlleva una evolución acelerada y una minimización de las estructuras génica y proteica. / Venoms of Viperidae and Crotalidae snakes contain proteins that interfere with the coagulation cascade, the haemostatic system and tissue repair. The general aim of this thesis was elucidate the molecular details of the mechanisms leading to snake venom toxin diversification. We describe the application of the proteomic characterization of Echis ocellatus (Eo), Bitis arietans (Ba) and Sistrurus m. barbouri (Smb) venoms. Their protein composition was analyzed by RP-HPLC and SDS-PAGE of each separated protein fraction. The molecular mass and the number of cysteine residues/disulphide bonds were determined by MALDI-TOF mass spectrometry. Selected protein bands were subjected to in-gel tryptic digestion, peptide mass fingerprinting and de novo sequencing by MS/MS. Our results show that snake venoms are composed of proteins belonging to a few protein families, including enzymes (serine proteinases, Zn2+-dependent PI-PIV metalloproteases, group II phospholipase A2 isoenzymes) and proteins with no enzymatic activity as disintegrins, which are potent antagonist of integrins. To understand the genomic basis of the accelerated evolution of disintegrins we have undertaken the analysis of cDNAs encoding disintegrins from venom gland libraries of Eo and Ba and the genomic organization of disintegrin genes. The cDNA sequences coding for dimeric disintegrins lack the metalloproteinase domain and belong thus to the short-coding class. Analysis of two distinct messengers coding for the short disintegrin ocellatusin strongly argues for a common ancestry of short- and dimeric disintegrin subunits. We also report the cloning and sequence analysis of a novel and unique ECD-disintegrin-like domain from Ba. It contains the 16 cysteine residues that are conserved in all PIII disintegrin-like domains but lacks the cysteine-rich domain. On the other hand, comparison of the exon-intron organization revealed that the evolutionary pathway leading to the diversification of disintegrins also involved the miniminization of the gene organization by the successive removal of introns.

Entre las múltiples y variadas implicaciones fisiopatológicas del Estrés Oxidativo, lostrastornos cardiovasculares son, sin duda, uno de los objetivos prioritarios y motivo deinterés de un gran número de investigadores biomédicos.Uno de los principales factores de riesgo es el desarrollo de una serie de enfermedadesfrecuentes en nuestra población como son la hipertensión arterial y las dislipemias.Éstos trastornos, tienen una vinculación más o menos estrecha, directa o indirecta con elfenómeno que conocemos como estrés oxidativo y los 3 tipos de patologías poseenaumentados los niveles de EO de manera que se potencia el riesgo de aparición de eventoscardiovasculares.Objetivo de este estudio es comparar los niveles de EO en las diferentes patologíascardiovasculares seleccionadas (HTA con y sin Síndrome Metabólico asociado, HF y HFC)midiendo la respuesta de las células mononucleares frente al EO crónico a través de lamedida de los niveles de ARNm de las actividades antioxidantes en cada una de ellas.Dicho estudio comparativo se va a realizar mediante el análisis de los siguientesparámetros oxidativos en orina, plasma y en células circulantes de los grupos seleccionadosy el grupo control:1.- Estudio de los productos de oxidación, marcadores de EO y metabolitos relacionados(GSH, GSSG, 8-oxo-dG nuclear, mitocondrial y urinaria, MDA, proteínas carboniladas yniveles de NO3/NO2 .2.- Determinación de la actividad de los principales sistemas antioxidantes y prooxidante(SOD Cu-Zn y Mn, Cat, GPx, GSR y XO) .3.- Cuantificación de los niveles de ARNm por RT-PCR cuantitativo a tiempo real, de losgenes que codifican dichas actividades enzimáticas, además de OGG1 y G6PDH.CONCLUSIONES· 1) En las tres patologías, HTA, HF y HFC, los resultados obtenidos sugieren que elEO representa un mecanismo común y subyacente en la patogenicidad de dichosprocesos y posiblemente contribuya al desarrollo de complicacionescardiovasculares, si bien, el mecanismo bioquímico-molecular responsable delproceso oxidativo presenta características diferenciales entre ellas, así como laintensidad de respuesta al EO.· 2) Los niveles elevados de EO en estas patologías no dependen exclusivamente deun aumento en su producción ya que existe una menor actividad antioxidante. Ladisminución de los mecanismos antioxidantes se debe principalmente a:- Actividad reducida de los genes antioxidantes y del sistema GSH.- Menores niveles de ARNm, disminuyendo así su capacidad de producir enzimasy sistemas protectores frente a EO.· 3) Los pacientes de HTA sin tratamiento se encuentran peor protegidos frente aEO que los controles, a pesar de la activación de algunos sistemas antioxidantescomo el sistema Tiorredoxina y la enzima Manganeso Superóxido Dismutasa.· 4) Los pacientes de HTA con y sin síndrome metabólico asociado no presentandiferencias significativas entre sí, lo que nos confirma que es la HTA el factorasociado al estrés oxidativo, siendo indiferentes las otras características quedeterminan el diagnóstico de síndrome metabólico.· 6) La hipertensión arterial progresa con una marcada oxidación del materialgenético que se verifica por el aumento en la producción de la base modificada ymutagénica 8-oxo-dG como resultado del estrés oxidativo y de la disminución deenzima reparadora OGG1 en las células mononucleares de los pacientes hipertensos.· 7) De los marcadores analizados, la liberación de 8-oxo-dG en orina es el parámetromás representativo del estrés oxidativo en la hipertensión arterial.· 8) Los tres modelos de EO crónico analizados poseen un aumento en los niveles deEO pero distinta intensidad en su respuesta. Los pacientes se encuentrandesprotegidos frente al EO. / The main aim of this study is to compare the EO levels in some different cardiovasculardiseases, previously selected (control, HTA with and without an associate metabolicsyndrome, HF and HFC), by measuring the response of mononuclear cells against thechronicle EO through the RNAm level in the antioxidant activity of each one.This comparative study is carried out in different groups by the analyse of differentoxidative parameters in urine, plasma and circulated cells.1.- Study of oxidation products , EO markers and related metabolites.2.- Main antioxidant and prooxidant systems activity determination.3.- RNAm level quantification by a real time quantitative RT-PCR.CONCLUSIONS:1.- The results of the three pathologies (HTA, HF and HFC) propose that EO represents acommon and underlying mechanism in their pathologies process and probably itcontributes to develop cardiovascular complications, although the responsiblebiochemistry-molecular mechanism of the oxidative process shows many differentfeatures between them.2.- The high levels of EO in these pathologies do not exclusively depends on an increaseof its production because the oxidant activity is lower.3.- HTA patients without a treatment are worse protected against EO that the controledones, despite of the activation of some antioxidant systems like Tiorredoxine Systemand SOD Mn enzyme.4.- HTA patients with and without the associated metabolic syndrome do not showgreat differences between them, so it confirms that HTA is the associated factor to theoxidative stress.5.- The High blood pressure progresses with a high oxidation of the genetic material,that it is verified by the increase of the production of modify base and mutagenig 8-oxo-dG as a result of oxidative stress and the decrease of repairing enzyme OGG1 inthe mononuclear cells.6.- In analysed markers, the 8-oxo-dG liberation in urine is the most representativeparameter of oxidative stress in high blood pressure.7.- The three EO chronicle models analysed have an increase on EO level but differentintensity in their response so patients are unprotected against EO.

La pancreatitis aguda (PA) es un proceso inflamatorio del páncreas que puede afectartambién a otros órganos más distantes y que puede cursar como una forma leve ocomo una forma grave con aparición de complicaciones locales o sistémicas quepueden conducir al desarrollo de un fallo multiorgánico. En la PA se produce unainflamación local como fenómeno inicial, observándose la acumulación de neutrófilos,macrófagos y mastocitos en el páncreas; en cambio, existe poca información sobre laparticipación del eosinófilo en este proceso.El proceso de hematopoyesis en la médula ósea, así como la atracción y la activacióndel eosinófilo en los tejidos está mediado por citocinas y quimiocinas, moléculasmedidadoras liberadas por los leucocitos, células endoteliales y algunas célulastisulares, siendo la citocina IL-5 el principal factor de diferenciación y la quimiocinaeotaxina el factor quimiotrayente más selectivo del esonófilo.Nuestro estudio se propone evaluar la participación del eosinófilo en la pancreatitisaguda mediante el análisis de eotaxina e IL-5, citocinas implicadas en ladiferenciación, activación y migración del eosinófilo, a lo largo de la evolución de lapancreatitis aguda.Nuestros resultados muestran que el número de eosinófilos en sangre se incrementaprogresivamente desde el día del ingreso hasta el mes del episodio agudo, aunque nosupera los límites considerados normales. La concentración de IL-5 en suero seincrementa en los primeros días, recuperando el valor control a los 5 días del ingreso,comportamiento similar al de otras citocinas proinflamatorias, lo cual podría indicar queefectivamente se está produciendo una activación de la hematopoyesis del eosinófiloen el momento agudo. Sin embargo, la concentración de eotaxina se mantiene similaral control hasta pasados 2 días del ingreso, momento en el que inicia su incremento,que es máximo al mes del episodio agudo. Estos resultados sugieren la activación deleosinófilo en el tejido y su papel inmunoregulador en el proceso inflamatorio de lapancreatitis aguda. / Acute Pancreatitis (AP) is a pancreas inflammatory process that can affect to otherdistant organ. AP exhibits a wide variability in its severity, in most cases the course isfairly benign (mild AP) while in others it may progress to a more severe form (severeAP) with local complications or systemic -inflammatory response which can led tomultiple organ dysfunction syndrome. Local inflammatory response is an early event inAP and has been revealed neutrophils, macrophages and mast cells infiltrated inpancreas; however, there is no information about eosinophil participation in thisprocess.Eosinophil development from the bone marrow, trafficking into tissues and activationare mediated by a regulated process involving cytokines and chemokines, chemicalmediators secreted from leukocytes, endotelial cell and tissue resident cells. IL-5cytokine is the most selective for eosinophils differentiation and eotaxin has aselectively chemoattractant activity that regulates eosinophil trafficking.There are no studies about eosinophils role in inflammatory process of acutepancreatitis. Our study try to evaluate eosinophil responsability through the eosinophilsnumber quantification and eotaxin and IL-5 determination, cytokines involved indifferentiation, activation and survival eosinophil.Results show a progresive increase in eosinophils number from inclusion to monthfrom acute onset, whereas eosinophils number remain in normal range. Serum IL-5concentration increases at day 1 to 4, and become in normal values at day 5 after theinclusion, similar fact to other proinflammatory cytokines. This results are in line witheosinophil hematopoiesis activation in early phase. However, eotaxin concnetration issimilar to control from day 1 to day 2, and increases from day 4 to month. This resultssuggest eosinophil activation in tissue and an inmunoregulatory role in inflammatoryprocess of acute pancreatitis.

El desarrollo de modelos de toxicidad in vitro es de gran interés en los campos de la Farmacología y la Toxicología bioquímicas tanto para la detección inicial de fenómenos fármaco-tóxicos, como para el estudio de los mecanismos moleculares implicados. Los granulocitos de sangre periférica desempeñan un papel esencial en la inmunidad inespecífica con funciones que implican a la membrana plasmática, las mitocondrias y los lisosomas. Las funciones bioquímicas de los granulocitos de sangre periférica son muy sensibles a los cambios metabólicos en el indivíduo entero y se relacionan con la presencia de diferentes mediadores fisiológicos o moléculas tóxicas circulantes. La citometría de flujo es una técnica muy útil para el análisis multiparamétrico de células individuales y la detección de alteraciones estructurales y funcionales. Por sus características estructurales, los granulocitos son identificados fácilmente por citometría de flujo, permitiendo su análisis específico, sin necesidad de etapas de purificación. Es evidente el beneficio que el ejercicio físico supone sobre prácticamente todos los aspectos de la salud y se han realizado estudios que demuestran que el ejercicio es un regulador de la función inmunológica. Aunque aún existen aspectos poco claros en cuanto a su influencia sobre el sistema inmune, parece existir relación entre la intensidad y duración del ejercicio, y la magnitud y dirección de los cambios en los contajes y porcentajes de los leucocitos circulantes en sangre. Lo mismo sucede con la función aunque las alteraciones funcionales no están relacionadas con los cambios numéricos. El presente trabajo evalúa la utilidad de los granulocitos de sangre periférica como célula diana para el desarrollo de modelos de alteración funcional "in vitro" que pudieran ser aplicados a la detección de efectos tóxicos, así como al estudio de los mecanismos funcionales implicados en situaciones fisiopatológicas que afecten al Sistema Inmunitario. También se plantea aplicar la capacidad analítica de la citometría de flujo multiparamétrica para el análisis funcional de los granulocitos y la comparación de sus respuestas con la de otras células inmunitarias en los modelos de toxicidad a desarrollar. Se plantea así mismo aplicar los aspectos metodológicos desarrollados al estudio del posible papel del estrés oxidativo en las alteraciones funcionales inducidas en los granulocitos y otras células inmunitarias por el ejercicio físico de alta intensidad.Los objetivos planteados se abordan a través de un estudio integrado, mediante citometría de flujo (EPICS Elite) para el estudio de suspensiones de leucocitos de sangre periférica, obtenidas tras la depleción de hematíes por sedimentación sobre Ficoll-Histopaque y separación celular por "cell sorting". Los granulocitos son identificados y preseleccionados por sus cacterísticas morfológicas, mediante análisis de la dispersión frontal y lateral de luz. Una primera fase in vivo analiza muestras procedentes de indivíduos sometidos a un esfuerzo físico de alta intensidad. El posible papel del estrés oxidativo en las alteraciones funcionales de los granulocitos observadas in vivo, se estudia en una segunda fase en un modelo in vitro de exposición controlada a concentraciones subletales de agentes pro-oxidantes, solubles (como el peróxido de hidrógeno (H2O2)) y de membrana (como el peróxido de tert-butilo (tBOOH)). En las suspensiones de leucocitos aislados se determina el Potencial de Membrana Mitocondrial (PMM, con Rhodamina 123), la generación de H2O2- y Superóxido (con Dihydrodiclorofluoresceina (DHDCF) e Hydroethidina (HE)) y los niveles de Glutation (GSH con Naranja de Mercurio), así como la expresión de CD69 y CD25. La expresión de las β2-integrinas CD18, CD11a, CD11b y CD11c, se han determinado en condiciones basales y tras estimulación con PMA o FMLP. En ambos modelos se analiza la distribución, estado de activación, respuesta mitogénica y generación de especies reactivas de oxígeno en las diferentes subpoblaciones leucocitarias. Los estudios citométricos sobre el modelo in vitro aborda fundamentalmente los fenómenos de expresión de moléculas de adhesión de la familia de las integrinas, en condiciones basales y tras estimulación quimiotáctica o activación de la protein kinasa C, por la especial relevancia de dichas moléculas en la funcionalidad de los granulocitos y su papel en los fenómenos de interacción de los mismos con otras células implicadas en las alteraciones funcionales inducidas por el ejercicio físico intenso.Las determinaciones demuestran que el ejercicio físico intenso induce una disminución en el porcentaje de linfocitos T citotóxicos, linfocitos T inductores de cooperación y células Natural Killer, aumentando el porcentaje de linfocitos T inductores de supresión. En este modelo se produce un incremento de las células T que expresan el receptor de Interleukina-2, acompañado de una mayor capacidad de respuesta a la activación mitogénica in vitro. Sin embargo, dichas células utilizan con menos eficacia la Interleukina-2 exógena, sugiriendo la existencia de interferencias con el mecanismo de transducción de la señal de activación. Además la incubación in vitro con dosis no letales de prooxidantes exógenos induce un estrés oxidativo intracelular en los leucocitos, pero no provoca la activación de los linfocitos. Los prooxidantes exógenos, en general, incrementan la expresión espontánea de moléculas de adhesión, los niveles intracelulares de especies reactivas de oxígeno y modifican la sobreexpresión inducida por estímulos quimiotácticos o activadores de la protein kinasa C en granulocitos y monocitos, lo que sugiere la existencia de un posible estrés oxidativo en dichas células y por tanto de un desequilibrio entre prooxidantes y antioxidantes que puede participar en las alteraciones de la función inmunitaria específica e innata. Los granulocitos han respondido de forma más sensible y consistente que los monocitos a la acción in vitro de los oxidantes exógenos. Por último, la utilización de la citometría de flujo multiparamétrica para determinar la funcionalidad de los granulocitos, células fáciles de estudiar selectivamente, podría representar una aproximación de interés para la detección y análisis de fenómenos de citotoxicidad que afecten al Sistema Inmunitario. / AIMS: To evaluate the utility of whole blood granulocytes as useful cells in the development of in vitro models of functional disturbance in order to detect toxic effects, to study the functional mechanisms of the Inmunitary System and to determine by flow cytometry (CMF) the in vitro effects of oxidative stress on the functional status of leukocytes in whole blood, assessed by analysis of mitochondrial function, intracellular prooxidants, early- and late activation markers and cell adhesion molecules. METHODS: Whole blood samples were in vivo processed by CMF after a high intensity physical exertion and in vitro incubated with sublethal concentrations of soluble (H2O2) and membrane (t-Butyl hydroperoxyde) prooxidants. Mitochondrial membrane potential (MMP, with Rhodamine 123), H2O2- and superoxide generation (with dihydrodiclorofluorescein (DHDCF) and hydroethidine) and glutathione levels (GSH with Mercury Orange) were determined in isolated leukocytes suspensions. CD69 and CD25 expression was determined in whole blood leukocytes. β2-integrins (CD18, CD11a, CD11b and CD11c) were determined in basal conditions and following cell stimulation with PMA or FMLP. All the analysis were performed with an EPICS XL flow cytometer.RESULTS: High intensity physical exertion modified lymphocyte subpopulations with different functional implication and also the activation state of these cells, and increased metabolic activity, basal integrin expression and H2O2 intracellular levels in granulocytes and monocytes. Extracellular prooxidants induced in all leukocytes significant increase of intracellular oxidants and MMP and decreased cell GSH. There were no changes in the distribution of lymphocyte subpopulations. CD69 and CD25 were not affected. The effects on β2-integrins were complex and more significant in granulocytes: in general, low-concentration of prooxidants enhanced basal integrin expression, while higher concentrations tended to decreased the expression. Also, oxidative stress decreased the sttimulatory effect of FMLP and PMA, specially in the granulocyte subpopulations. In all cases, CD11b and CD11c were the most affected molecules by prooxidants.CONCLUSIONS: The effect of intense physical exercise increase T-cells with an IL-2 receptor and more responsive to the mitogenic activation, but used less effectively exogenous IL-2. In intense physical exercise occur functional changes in granulocytes which are evident by increased metabolic activity, basal integrin expression and intracellular levels of reactive oxygen species. Exogenous prooxidants in vitro induce intracellular oxidative stress and have complex effects on the expression of β2-integrins in leukocytes, specially in granulocytes. The use of flow cytometry to determine the functionality of granulocytes could be of interest to detect and study cytotoxicity events that affect the Inmune System.

Se realizó un estudio experimental con ratas macho cepa Wistar, para valorar el efecto de la Pentoxifilina (PTX) en la lesión por Isquemia-Repefusión intestinal y de esta forma considerar la conveniencia o no de su utilización, en el caso de trasplante de Intestino Delgado.Material y métodosSe distribuyeron aleatoriamente 150 ratas en 6 grupos: 2 controles, alos que se administró suero fisiológico, y 4 grupos con tratamiento Pentoxifilina: grupo Pl (1 mg/Kg de PTX 1 hora antes de isquemia), grupo P2 (1 mg/Kg de PTX en el momento de la reperfusión), grupo P3 (10 mg/ Kg de PTX 1 hora antes de la isquemia), grupo P4 (10 mg/Kg de PT'X en momento de la reperfusión).La isquemia intestinal se realizó con clampaje de la arteria mesentérica superior, durante 120 minutos, siendo el tiempo de reperfusión empleado de 1 hora.El fármaco ensayado fue la Pentoxifilina, que es un agente hemorreologico de la familia de las metibcantinas. Sus propiedades más destacadas son el aumento de la deformabilidad eritrocitaria, la disminución de la viscosidad sanguínea y el aumento de la capacidad fibrinolítica del plasma, efectos que contribuyen al aumento del flujo circulatorio.Determinaciones realizadas:- Estudio de supervivencia a17° día de la intervención.- Pruebas Bioquímicas: Urea, Creatinina, Sodio, Potasio, Calcio, Cloro, Fósforo, LDH.- Determinaciones de Malonildialdehído y Mieloperoxidasa en el tjido intestinal isquémico, que nos valoran el grado de peroxidación lipídica y de infiltración neutrofílica, respectivamente.- Estudio anatomopatológico de los cortes intestinales.Estudio de la microcirculación intestinal mediante la técnica del Láser Doppler, recogiendo las mediciones ininterrumpidamente desde antes de la isquemia hasta 1 hora después de la reperfusión. ConclusionesLos resultados obtenidos en el presente estudio sugieren que la Pentoxifilina:1. Influye favorablemente en la lesión por isquemia-reperfusión intestinal.2. Protege la circulación intestinal, gracias a sus acciones hemorreológicas.3. Minimiza el proceso de peroxidación lipídica.4. El efecto protector de la PTX se muestra dependiente del momento de administración, siendo óptimo el tiempo cero de la reperfusión. 5. Su acción no es dosis /dependiente en el rango de tratamiento utilizado. / A study was carried out using male Wistar rats to assess the effect of Pentoxifilina (PTX) on the intestinal lesion caused by Ischemia-Reperfusion and thus consider how suitable its use is in cases of small intestine transplant.Material and methodOne hundred and fifty rats were placed randomly into 6 groups awo control g4:oups, which were given physiological serum (saline solution?) and 4 groups wffich were treated with Pentoxifilina. Group P1 (1 mg/kg of PTX one hour before is'chérhia), group P2 (1 mg/kg of PTX at the moment of reperfusion), group P3 (10/kg of PTX 1 hour before ischemia), groupP4 (10mg/kg of PTX at the moment of reperfusion).The intestinal ischer,nia y,ras done by clamping the superior mesenteric artery for 120 minutes, the timé nécessary for 1 hour reperfusion.The drug used was Pentoxifilina, which is a haemorrhaging agent belonging to the mefn1ipa flámily. Its most notable properties are the increase in eritrocitarydeformation decrease in blood viscosity and the increase in the fibrinolitical ability of plasma, effects which contribute to the increase in blood circulation. Tests carried out.:Study of the survival rate at 17 daysBiochemical analyses :urea, creatinin, sodium, potassium, calcium, chlorine, phosphorus, LDH.Analyses of malonildialdehyde and mieloperoxidasa in the ischemic intestinal tissue, which gives us the degree of lipid peroxidation and neutrophylic infiltration, respectively.Anatomopathological study of intestinal cuts.Study of intestinal microcirculation using the Laser Doppler technique, reading the measurements without interruption since one hour before the ischemia until 1 hour after the reperfusion.ConclusionsThe results from this study suggest that Pentoxifilina1.has a favourable outcome on the lesion caused by intestinal reperfusion 2. protects intestinal circulation thanks to it haemorrhaging action3. minimizes the lipid peroxidation process4. the protective effect of PU depends on the moment of its administration, the best timé being rrioment zero of feperfusipn5 Its efifect 15 nbt dependent on dose in the range of treatment usedTHE EFFECT OF PENTOXIFILINA TREATMENT ON INTESTINAL ISCHEMIA.REPERFUSIONA study was carried out using male Wistar rats to assess the effect of Pentoxifilina (PTX) on the intestinal lesion caused by Ischemia-Reperfusion and thus consider how suitable its use is in cases of small intestine transplant.Material and methodOne hundred and fifty rats were placed randomly into 6 groups awo control g4:oups, which were given physiological serum (saline solution?) and 4 groups wffich were treated with Pentoxifilina. Group P1 (1 mg/kg of PTX one hour before is'chérhia), group P2 (1 mg/kg of PTX at the moment of reperfusion), group P3 (10/kg of PTX 1 hour before ischemia), groupP4 (10mg/kg of PTX at the moment of reperfusion).The intestinal ischer,nia y,ras done by clamping the superior mesenteric artery for 120 minutes, the timé nécessary for 1 hour reperfusion.The drug used was Pentoxifilina, which is a haemorrhaging agent belonging to the metibcantina flámily. Its most notable properties are the increase in eritrocitary deformation the decrease in blood viscosity and the increase in the fibrinolitical ability of plasma, effects which contribute to the increase in blood circulation. Tests carried out.:Study of the survival rate at 17 daysBiochemical analyses :urea, creatinin, sodium, potassium, calcium, chlorine, phosphorus, LDH.Analyses of malonildialdehyde and mieloperoxidasa in the ischemic intestinal tissue, which gives us the degree of lipid peroxidation and neutrophylic infiltration, respectively.Anatomopathological study of intestinal cuts.Study of intestinal microcirculation using the Laser Doppler technique, reading the measurements without interruption since one hour before the ischemia until 1 hour after the reperfusion.ConclusionsThe results from this study suggest that Pentoxifilina1.has a favourable outcome on the lesion caused by intestinal reperfusion 2. protects intestinal circulation thanks to it haemorrhaging action3. minimizes the lipid peroxidation process4. the protective effect of PU depends on the moment of its administration, the best timé being rrioment zero of feperfusipn5 Its efifect 15 nbt dependent on dose in the range of treatment used

INTRODUCCIONEl PSA es el mejor marcador tumoral disponible y utilizado en la actualidad para el diagnóstico y seguimiento del tratamiento del cáncer de próstata.La discriminación entre la patología benigna y maligna de la próstata, en especial entre la hiperplasia benigna de próstata y el cáncer de próstata es crucial.Desafortunadamente, el PSA no siempre puede distinguir eficientemente entre enfermedad maligna y benigna de la próstata, especialmente en el intervalo de valores entre 4,1 y 10,0 ng/ml, y cuando el tacto rectal es normal.La angiogénesis tumoral es un proceso de incremento de vascularización tumoral que es crítica para el crecimiento tumoral y la progresión del cáncer. También juega un papel predominante en la invasión de las células tumorales a la circulación y crecimiento de micrometástasis latentes a lo largo del tiempo.La evidencia de que el crecimiento y progresión del cáncer de próstata es angiogénesis dependiente se ha demostrado por la correlación entre la neovascularización en tejido prostático tumoral con el incremento de la densidad vascular y la expresión de los factores de crecimiento angiogénicos. Hay evidencias que apoyan la intervención de los factores de crecimiento VEGF y bFGF en el desarrollo y progresión del cáncer de próstata.OBJETIVOSComprobar si existe relación entre los niveles séricos de VEGF y urinarios de bFGF con la patología benigna y maligna prostática, en el momento del diagnóstico inicial.Determinar si existe relación entre los niveles séricos de VEGF y los niveles urinarios de bFGF con los niveles séricos de PSA, edad, estadio clínico tumoral, grado de Gleason y presencia de metástasis, en el momento del diagnóstico inicial, así como con la mortalidad cáncer específica en los ocho primeros años de seguimiento.MATERIAL Y MÉTODOSSe incluyeron 71 pacientes con indicación de realización de ecografía transrectal y biopsia prostática ecodirigida.La indicación de ecografía transrectal y biopsia prostática fue: tacto rectal sospechoso y/o un valor sérico de PSA mayor de 4,0 ng/ml.No se incluyeron en el estudio aquellos pacientes con antecedentes de neoplasias previas, diabetes, enfermedad cardiaca activa, tratamientos anticoagulantes y los que presentaron infecciones agudas, sondaje uretral o cirugía transuretral en las cuatro semanas previas a la realización de la ecografía y biopsia prostática.Se cuantificó, mediante técnicas de ELISA, VEGF en suero y bFGF en orina de todos los pacientes incluidos en el estudio.Se agruparon según el resultado de la biopsia en grupo A: 23 pacientes con adenocarcinoma de próstata, grupo B: 48 pacientes con hiperplasia benigna de próstata.RESULTADOSSe apreciaron diferencias significativas entre los valores séricos de VEGF y la presencia de metástasis. Se obtuvo un punto de corte de máxima sensibilidad (80%) y especificidad (70,8%) de VEGF para discriminar entre la presencia o no de metástasis al diagnóstico en el valor de 891,00 pg/ml.No se observaron diferencias significativas entre los valores séricos de VEGF y urinarios de bFGF con ambos grupos de estudio ni con la edad de los pacientes, PSA, estadio clínico, grado de Gleason y mortalidad cáncer específica.CONCLUSIONESEn el presente trabajo evidenciamos que niveles séricos elevados de VEGF se asocian a pacientes con cáncer de próstata metastásico. La cuantificación de VEGF puede ser útil como marcador de enfermedad diseminada y puede añadir información pronóstica adicional a la proporcionada por el grado de Gleason, estadio clínico y PSA sérico, aunque hacen falta estudios prospectivos con tamaños muestrales mayores para determinar cómo puede ser utilizado como una herramienta más en el manejo y seguimiento de pacientes con cáncer de próstata así como medida de respuesta al tratamiento y agresividad del tumor. / Introduction:The evidence that the growth and progression of prostate cancer is angiogenesis dependent has been shown for the correlation among the neovascularization in prostate weaving tumoral with the increment of the density vascular and the expression of the angiogenic growth factors.There are evidences that support the intervention of growth factors VEGF and bFGF in the development and progression of prostate cancer.Objectives:Verifying if relation between the serum levels of VEGF and urinary levels of bFGF with the prostate harmful and benign pathology, at the moment of the initial diagnosis.Determining if relation between the serum levels of VEGF and the urinary levels of bFGF with the serum levels of PSA, age, tumoral clinical stage, degree of Gleason and presence of metastasis, at the moment of the initial diagnosis, as well as with the mortality specific cancer in the eight first years of monitoring.Material and method:It was quantified, by means of techniques of ELISA, VEGF in serum and bFGF in urine of 71 patients with indication of prostate biopsy by suspects of neoplasia. They were grouped according to the result of the biopsy in group A: 23 patients with prostate adenocarcinoma, group B: 48 patients with benign hiperplasia of prostate. Results:There were appreciated differentiate significant between the serum values of VEGF and the presence of metastasis. Themselves they were not observed you differentiate significant between the serum values of VEGF and urinary of bFGF with both groups of study neither with the age of the patients, PSA, clinical stage, degree of Gleason and mortality specific cancer. Conclusions:High levels of VEGF in serum associate patients with metastatic prostate cancer.The quantification of the levels of VEGF can be useful like scoreboard of illness disseminated and can add additional pronostic information to it provided by the degree of Gleason, clinical stadium and serum PSA.

El estrés oxidativo (desequilibrio entre la producción y neutralización de radicales libres, a favor de la primera) se ha implicado en la etiopatogenia de numerosas patologías según la literatura. En el presente estudio se analiza el papel del estrés oxidativo así como la influencia de la suplementación con un complejo vitamínico-mineral con propiedades antioxidantes (dosis nutricionales) en grupos de individuos diabéticos, hipertensos y sanos, haciendo especial hincapié en la valoración de las retinopatías diabética e hipertensiva leves-moderadas en un seguimiento durante 5 años.Para ello se seleccionaron un total de 604 individuos en 1999 (distribuidos en grupo de diabetes, grupo de hipertensión y grupo de controles sanos) a los que se les realizó una anamnesis detallada (contemplando posibles factores de riesgo de retinopatía), medición de la tensión arterial diastólica (TAD), una exploración oftalmológica completa y una determinación en sangre de parámetros clásicos (glucemia, hemoglobina glicosilada, colesterol total, HDL, LDL, urea y creatinina) y de parámetros emergentes indicadores del balance oxidativo-antioxidante (malonildialdehído (MDA), actividad antioxidante total y actividad superóxido dismutasa). Parte de la muestra fue asignada aleatoriamente a suplementación antioxidante. Se realizaron revisiones anuales para evidenciar cambios clínicos, reforzar la ingesta del suplemento y anotar posibles cambios de filiación.Al final del seguimiento (2004) se les realizó una anamnesis, exploración clínica y analítica idéntica a la inicial a los 490 individuos que siguieron en el estudio.Se evidenció que el balance de las actividades oxidativas estaba alterado en los grupos de la diabetes mellitus y de la hipertensión arterial, a favor del estrés oxidativo, respecto al grupo de controles sanos. Se realizaron estudios de correlación entre los distintos parámetros, obteniendo asociación significativa entre duración de la enfermedad y grado de retinopatía, MDA y glucosa , y MDA y colesterol total en sangre.Se encontró que el aumento de la actividad oxidativa y la disminución de la actividad antioxidante se relacionaron con la progresión de la retinopatía diabética e hipertensiva aunque los niveles de de los marcadores bioquímicos del estado oxidativo antioxidantes no se asociaron con el grado de severidad de la afectación ocular.La agudeza visual media con la mejor corrección y la TAD no cambiaron en los grupos y subgrupos a lo largo del seguimiento, independientemente de recibir o no el suplemento. Sin embargo, el grado de retinopatía, tanto diabética como hipertensiva, se mantuvo estable en grupos y subgrupos con suplementación y empeoró en sujetos sin suplementación antioxidante. Por otra parte, la suplementación con antioxidantes se reflejó en el mantenimiento y mejoría del estado antioxidante plasmático y el descenso paralelo de la actividad prooxidativa en plasma. En resumen, los resultados sugieren que el estrés oxidativo está implicado en la patogenia de la retinopatía diabética e hipertensiva y que la suplementación a largo plazo con un complejo vitamínico-mineral con propiedades antioxidantes a dosis nutricionales disminuye su progresión clínica en estadios precoces. / In this study, the role of oxidative stress and the antioxidant supplementation with an oral vitaminic-mineral complex (nutritional doses) are analyzed in groups of diabetic, hypertensive and healthy subjects, emphasizing in the assessment of mild and moderate diabetic and hypertensive retinopathies in a five-year follow-up.With this aim a total pool of 604 subjects were recruited in 1999 (distributed in diabetic, hypertensive and healthy group). A detailed anamnesis (including possible risk factors of retinopathy), diastolic blood pressure (DBP) assessment, a complete ophthalmic check-up and a blood determination of classic parameters (glucaemia, glycated hemoglobina, total colesterol, HDL, LDL, urea and creatinine) and parameters of the oxidative status (malonyldialdehyde (MDA), total antioxidant status (TAS) and superoxide dismutase activity). A part of the simple was supplemented with antioxidants. Annual assessments were performed in order to detect clinical changes, reinforce the ingestion of the supplement and check possible changes in address and phone numbers. A total of 490 subjects were followed in five years. An anamnesis, clinical and a blood analysis identical that the performed at the beginning were carried-out at the end of the follow-up (2004).The imbalance of oxidative activity was altered in the diabetic and hypertension groups compared to healthy group, in favour of oxidative stress. Correlation studies were performed and we obtained a significant association between the duration of the disease and retinopathy grade, MDA and glucose and MDA and blood total cholesterol.It was also found that the increase of oxidative activity and a decrease of antioxidant activity were related to the severity progression of diabetic and hypertensive retinopathies although levels of biochemical markers of oxidative stress were not associated with the severity stage of ocular damage.Average best-corrected visual acuity and DBP did not change during the follow-up, independently of supplementation. However, the stage of retinopathy (diabetic and hypertensive) remained stable in groups and subgroups with supplementation and worsened in groups without antioxidant supplementation.Furthermore, antioxidant supplementation maintained the antioxidant plasmatic status and was related with the decrease of pro-oxidative plasmatic activity.

IntroducciónEl cáncer colorrectal es la tercera neoplasia en frecuencia y mortalidad y su tratamiento supone un importante coste socioeconómico. Su tratamiento clásico produce resultados discretos. Disponer de un tratamiento que pudiera prevenir la aparición del cáncer o evitar la recidiva del cáncer tratado supondría un gran avance en la prevención y curación de esta patología. Existen muchos estudios que versan sobre la prevención de estos tumores con diversos fármacos y regímenes dietéticos. De entre los primeros cabe destacar los fármacos anti-inflamatorios no esteroideos y más recientemente los inhibidores selectivos de la ciclo-oxigenasa 2 (COX-2), que parecen tener una mayor actividad anti-inflamatoria y anti-tumoral.ObjetivosInvestigar el efecto de la inhibición selectiva de la COX-2 en la disminución de la cantidad de tumores cólicos inducidos, así como en la actividad COX-2 expresada en el tejido tumoral y valorar si este efecto es mayor que el conseguido con la inhibición no selectiva de la COX.Material y métodosSe ha diseñado un estudio prospectivo, aleatorizado y doble ciego sobre un modelo animal constituido por 35 ratas Sprague-Dawley macho de 225 gramos de peso medio (intervalo de 155 a 400 g), asignadas aleatoriamente a uno de los cuatro grupos siguientes: un grupo control (n=5) sin manipulación experimental, un grupo de carcinogénesis farmacológica (n=10) con inducción y promoción cancerígena cólica con 1,2-dimetilhidrazina dihidrocloruro (1,2-DMH) (Grupo DMH), un grupo de carcinogénesis e inhibición no selectiva de la COX (n=10) (Grupo DMH + AAS) con administración de ácido acetil-salicílico (AAS) al tiempo de la carcinogénesis farmacológica, y un grupo de carcinogénesis e inhibición selectiva de la COX-2 (n=10) (Grupo DMH + RFC), con administración de rofecoxib (RFC) junto a la carcinogénesis farmacológica. La inducción carcinogénica se realizó con 1,2-DMH a dosis semanal de 25 mg / Kg de peso durante 18 semanas por vía subcutánea. Los antiinflamatorios se administraron por vía oral a razón de AAS 30 mg / Kg de peso del animal / día y rofecoxib 3 mg / Kg / día, disueltos en el agua de consumo. Se analizaron los tumores cólicos inducidos en la semana 20 del inicio de la manipulación experimental, con estudios microscópicos e inmunohistoquímicos.ResultadosSe han obtenido 57 tumores, 27 adenomas y 30 adenocarcinomas, sin diferencias entre los grupos. Los tumores de los animales del grupo DMH + RFC presentan unos resultados significativamente menores en relación a los tumores de los animales del grupo DMH en lo referente a la superficie tumoral total (reducción del 55%), al porcentaje de superficie tumoral maligna (reducción del 62%) y al porcentaje de superficie tumoral total (reducción del 58%). Del mismo modo, se aprecian reducciones significativas de la expresión de la actividad COX-2 en el tejido de los adenomas (no existe expresión en los adenomas de los animales del grupo DMH + RFC), en la expresión de la actividad COX-2 el tejido tumoral y peritumoral de los adenomas (reducción del 68%) y en la expresión COX-2 en el tejido tumoral de los adenocarcinomas (reducción del 80%) a favor de los tumores de los animales del grupo DMH + RFC frente a los del grupo DMH. No se encuentran diferencias significativas al analizar los resultados de los tumores de los animales del grupo DMH + AAS frente a los de los otros grupos ni en la cantidad de tumor inducido ni en la expresión de la actividad COX-2 en el tejido tumoral.ConclusionesLa inhibición selectiva de la actividad COX-2 produce una disminución significativa de la cantidad de tumor inducido mediante una disminución de la expresión de la actividad COX-2 en el tejido tumoral. / ObjectivesTo investigate the effect of the selective inhibition of the cyclooxygenase-2 (COX-2) in the prevention of colonic tumors and in the activity COX-2 expressed in the tumoral tissue.Material and methodsExperimental study with 35 male Sprague-Dawley rats, divided into four groups: a) control group (n=5) without experimental manipulation, b) pharmacological carcinogenesis (n=10) with 1,2-dimethyhydrazine dihydrocloride (1,2-DMH) at a weekly dose of 25 mg/Kg during 18 weeks (Group DMH), c) carcinogenesis and nonselective inhibition of COX (n=10) (Group DMH + AAS) with administration of acetylsalicylic acid (ASA) at dose of 30 mg/Kg/day during 18 weeks at the same time of carcinogenesis, and d) carcinogenesis and selective inhibition of COX-2 (n=10) (Group DMH + RFC), with administration of rofecoxib (RFC) at dose of 3 mg/Kg/day during 18 weeks at the same time of carcinogenesis. The induced colonic tumors were analyzed with microscopic and immunohistochemical studies in 20th week of the beginning of the manipulation.ResultsA total of 57 tumors have been obtained, 27 adenomas and 30 adenocarcinomas, without differences between the groups. The tumors of the group DMH + RFC display significantly better results in relation to the tumors of the group DMH with respect to total microscopic tumor surface area, to malignant microscopic tumor percentage and to total microscopic tumor percentage. Moreover, significant reductions of the expression of activity COX-2 are appraised in the tumoral tissue of the adenomas, in the expression of activity COX-2 the tumoral and peritumoral tissue of the adenomas and in expression COX-2 in the tumoral tissue of adenocarcinomas in favour of the tumors of the group DMH + RFC as opposed to those of group DMH. There are not significant differences between the tumors of the group DMH + AAS as opposed to those of the other groups neither in the amount of induced tumor nor in the expression of COX-2 activity in the tumoral tissue.ConclusionsThe selective inhibition of COX-2 activity produces a significant diminution of the amount of induced tumor through a diminution of the expression of COX-2 activity in the tumoral tissue.