A toxoplasmose, protozoose disseminada de baixa morbidade, apresenta número significativo de doença ocular, congênita ou do sistema nervoso central. O diagnóstico é sorológico por diferentes testes, mas limiares baixos e variação individual levam a frequentes problemas. Novos imunoensaios fluorescentes de fase sólida (FLISA) usam a quantificação direta de anticorpos. Aqui, desenvolvemos um FLISA multiplex (FLISAm) para a detecção simultânea de anticorpos IgG e IgM contra Toxoplasma gondii. Após padronização, a eficiência do FLISAm com conjugados comerciais foi feita inicialmente de forma isolada para cada imunoglobulina em 140 amostras de soro de universitários previamente analisadas pelo ELISA IgG/IgM. FLISA IgG mostrou boa concordância (Kappa=0,7088), com sensibilidade de 83,3% e especificidade de 94,2%, enquanto FLISA IgM apresentou boa concordância (K=0,6026), menor sensibilidade de 55,5% e igual especificidade de 98,4%. Foram produzidos novos conjugados fluorescentes de maior especificidade e seu desempenho no FLISAm foi validado em 24 amostras e sua eficiência foi avaliada em 120 amostras conhecidas de soro de gestantes. FLISAm mostrou excelente concordância, tanto para a detecção de anticorpos IgG (K=0.8837, sensibilidade=100,0%, especificidade=87,5%), quanto para a detecção de anticorpos IgM (K=0,9187, sensibilidade=100%, especificidade=99,1%) com excelente reprodutibilidade. O teste desenvolvido é rápido, econômico, de fácil execução, alto rendimento e que pode ser utilizado como método de triagem de soroconversão em mulheres grávidas, útil em aplicações de grande número de amostras como o cuidado pré-natal. / Toxoplasmosis, a disseminated low morbidity protozoan disease, presented significant numbers of affected people, mainly ocular disease, fetal infections or encephalitis in immune deficient patients. Serology is the main diagnosis with commercial antibody assays, but individual variation or low thresholds cause many inconsistencies. New solid phase immunofluorescence assays (FLISA) allows direct antibody quantification in microplates. Here, we developed a multiplex FLISA (FLISAm) for simultaneous detection of IgG and IgM anti-Toxoplasma gondii antibodies. After standardization, the efficiency of this method was initially analyzed in isolated FLISA for each immunoglobulin with commercial conjugates in 140 serum samples of the students previously screened by IgG/IgM ELISA. IgG FLISA showed good concordance (Kappa=0.7088), 83,3% sensitivity and 94,2% specificity, while IgM FLISA also showed good concordance (Kappa=0,6026), lower 55,5% sensitivity and similar 98,4% specificity. New higher efficiency conjugated were prepared and tested in 120 serum samples of the pregnant woman in a same well conjunct IgG/IgM FLISAm. We also validate the FLISAm in 24 serum samples. Compared to isolated ELISA IgG/IgM, FLISAm demonstrated excellent concordance for IgG (Kappa=0.8837; sensitivity=100%; specificity=87,5%,) and IgM (Kappa=0,9187; sensitivity=100%; specificity=99,1%), with excellent reproducibility. The standardized FLISAm is quick, inexpensive, easily performed and high throughput and the assay can be used for screening serum conversion in pregnant women, useful in large numbers applications as antenatal care.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:43:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:58:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06500.pdf: 5041467 bytes, checksum: 85575a2b20c2e1b56487851767fef65f (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:52:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A radiação ionizante tem sido empregada com sucesso na modificação das propriedades imunológicas das biomoléculas e tem se mostrado uma potente ferramenta para destoxicar venenos de serpentes sem afetar e, muitas vezes, melhorando suas propriedades imunogênicas. Resultados promissores foram obtidos com o tratamento, tanto de veneno total quanto de frações isoladas, com a radiação gama de 60Co. No presente trabalho, foram avaliados os efeitos da Bothropstoxina-1 (Bthx-1) e do veneno total de Bothrops jararacussu sobre o sistema imune de camundongos B10.PL e BALB/c, visando caracterizar a resposta imune contra proteínas irradiadas. Modificações estruturais foram observadas por meio de técnicas eletroforéticas - SDS-PAGE. Para os ensaios imunológicos, camundongos de diferentes linhagens foram imunizados com ambas as formas da Bthx-1 e os anticorpos circulantes foram isotipados e titulados pelo método de ELISA. Os resultados mostraram que tanto o veneno total como a toxina isolada, mesmo após o processo de irradiação, se mostraram imunogênicos e os anticorpos produzidos reconheciam as formas nativas. Para a caracterização antigênica a técnica de Western Blot permitiu demonstrar que a Bthx-1 irradiada induziu à produção de anticorpos responsivos para ambas as formas da toxina isolada e do veneno total. Os resultados do ensaio de citotoxicidade mostram que a viabilidade dos macrófagos ensaiados com a Bthx-1 ou com o veneno total irradiados foi maior quando comparada com os resultados obtidos para as formas nativas. Analisando-se o resultado do ensaio de LDH, observou-se que a Bthx-1 irradiada promoveu menor dano muscular que a toxina nativa. Conclui-se que a irradiação de proteínas promove modificações estruturais significativas, mantendo, contudo, suas propriedades imunológicas originais, representando uma potencial ferramenta na melhoria do processo de imunização. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:43:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:07:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06215.pdf: 3526908 bytes, checksum: cc8e43873e065cc38e12399bc94209dc (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2016-02-03T11:52:39Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2016-02-03T11:52:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O soro anti-elapidico brasileiro é produzido com uma mistura de veneno de Micrurus frontalis e de M. corallinus. Estudos indicam que o soro resultante não neutraliza o veneno de algumas espécies de Micrurus. Além disso, o baixo rendimento de veneno e as dificuldades de manutenção destas serpentes em cativeiro dificultam a produção de soro. Assim, um método alternativo para a produção deste soro seria de grande valor. Estudos têm mostrado que os venenos de elapideos brasileiros contêm toxinas com um elevado grau de homologia com as de suas congêneres australianas. O presente trabalho teve como objetivo comparar inicialmente o soro brasileiro e o australiano frente ao veneno de Micrurus frontalis e M. lemniscatus. A reatividade cruzada foi testada por Western-blot e ELISA com veneno de Micrurus frontalis e a capacidade neutralizante por soroneutralização com venenos de M. frontalis, M. lemniscatus, e em parceiria com venenos de M. corallinus, M. altirostris, M. spixii, M. ibiboboca, M. fulvius, M. pyrrhocryptus , M. nigrocinctus, em camundongos. Os dados obtidos indicam nível elevado de reatividade e neutralização cruzada entre os soros. Também comparamos a imunogenicidade do veneno nativo ou irradiado, não observando diferenças nos níveis de anticorpos obtidos. As serpentes australianas utilizadas para a produção de soro são mais fáceis de manusear e produzem maiores quantidades de venenos do que as corais brasileiras. Concluímos que um soro produzido com o veneno de serpentes australianas neutraliza a atividade tóxica das Micrurus estudadas, incluindo espécies que o soro nacional não neutraliza. Assim, o uso de venenos da Austrália como imunógeno constitui alternativa viável para sanar a carência do soro nacional. / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Orientadores: Maria Helena Andrade Santana, Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-11T17:04:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_MoysesOstDamm_M.pdf: 2259859 bytes, checksum: 461e16fd565ac08cc88d2c5c24c42ac1 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Neste trabalho, foi estudada a detecção da IgG-anticardiolipina presente em soros de pacientes com doenças autoimunes, utilizando lipossomas polimerizados. A vantagem desse sistema é o reconhecimento molecular e transdução de sinal em uma única etapa. O uso de soros reais, ao invés de soros de referência, objetivou avaliar a potencialidade dos lipossomas polimerizados para aplicação em diagnóstico clínico-laboratorial. Os estudos foram realizados com "pools" de soros de pacientes com doenças auto-imunes, os quais foram previamente caracterizados através da dosagem de três níveis de IgG-específica designados como alta (5152,01 mg/mL), média (2030,49 mg/mL) e baixa concentração (13,39 e 14,03 mg/mL). Soro sadio, com concentração de IgG anti-cardiolipina 5,58 mg/mL foi usado como controle. Os lipossomas monoméricos foram compostos do ácido diacetilênico 10,12-tricosadiinóico e cardiolipina. A polimerização foi feita por irradiação de luz ultravioleta com a máxima absorção na região do azul. As interações foram estudadas com a cardiolipina livre e na superfície dos lipossomas polimerizados. A discriminação entre os soros autoimunes e soro sadio foi estudada em lipossomas polimerizados, através da diluição dos soros ou através da sua purificação com gel de sepharose- proteína G, o grau de polimerização e a concentração de cardiolipina. Os resultados mostram que as ligações específicas são predominantes em relação às inespecíficas, porém os componentes não específicos exercem interferência expressiva. Nos lipossomas polimerizados, os padrões de absorbâncias do vermelho e do azul com o tempo, são diferentes para os soros autoimunes e sadio, resultando em sinais espectrais maiores para o soro sadio. A diluição ou purificação muda o padrão de absorbância do azul, a qual decresceu com a interação, intensificando o sinal colorimétrico do vermelho resultante. A polimerização e a concentração de cardiolipina intensificam os sinais colorimétricos, porém não discriminaram a olho nu a diferença entre soro sadio e autoimune. O estudo dos efeitos da diluição e purificação apontam condições onde a discriminação do sinal pode ser maximizada. Esses resultados mostram a potencialidade dos lipossomas polimerizados para a detecção de anticorpos anticardiolipina em soros reais em ensaio de etapa única, e demonstram a factibilidade da análise espectral no estudo de interações moleculares em sistemas complexos. / Abstract: This work studies the detection of anticardiolipin IgG present in the sera o patients with autoimmune diseases , using polymerized liposomes. The advantage of this system is the molecular recognition and transduction of signal in a single step. The use of real sera, instead reference sera, aimed to evaluate the potentiality of polymerized liposomes to application in clinical-laboratorial diagnosis. The studies were carried out using pools of sera from patients with autoimmune diseases, which were previously characterized through the dosage of specific IgG level. Three levels of specific-IgG were selected, which were classified as high (5152,01 mg/mL), medium (2030,49 mg/mL) and low concentration (13,39 e 14,03 mg/mL). Serum from healthy individuals, with 5,58 mg/mL IgG anti-cardiolipin was used as control. The monomeric liposomes were composed by the diacetylenic acid 10,12-tricosadiynoic and cardiolipin. The polymerization was perfomed by irradiation in the UV wave lenght, with the maximum absorption in the blue region. The interactions were studied on the free cardiolipin and on the surface of polymerized liposomes. The discrimination between autoimmune and health sera was studied in polymerized liposomes through the dilution of sera, purification of sera using sepharose- protein G gel, the polymerizatio level and the cardiolipin concentration. The results show that the specific binding are predominant in related to the inspecific ones, but the interference of non-specific components is significant. The patterns of absorbance in red and blue along time in polymerized liposomes are different for the autoimmune sera and healthy serum. The dilution or purification chages the absorbance pattern in the blue, which decreasing as a consequence of the interaction, intensifying the final red signal. The polymerization and the cardiolipin concentration in liposomes intensified the colorimetric signals, but they don't discriminate by naked eye the dfferences between autoimmune and health sera. The study of the effects of dilution and purification pointed out to conditions where the signal discrimination may be maximized. These results show the potentialities of polymerized liposomes to detection of anticardiolipin antibodies in real sera using a single step assay. Furthermore, they demonstrate the factibility of the spectral analysis on the study of molecular interactions in complex systems. / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

O objetivo deste trabalho foi avaliar de maneira detalhada e sistemática os perfis hormonais sanguíneos, fecais, urinários e salivares das progestinas e estrógenos durante o ciclo estral induzido de ovinos. Foram colhidas amostras diárias durante um período de 60 dias de sete fêmeas adultas (n=8) saudáveis e sexualmente maduras. Antes do início da fase de colheita das amostras, todos os animais foram submetidos ao protocolo de tratamento hormonal para indução e sincronização do cio durante dozes dias. O primeiro ciclo ovariano de cada animal desse experimento, detectado logo após a indução do cio foi descartado e seus valores não foram utilizados nas análises hormonais, pois poderiam estar sob o efeito dos hormônios exógenos. A concentração dos progestágenos foi determinada pelas técnicas analíticas de Radioimunoensaio (RIE) e Enzimaimunoensaio (EIE) e os estrógenos por RIE. Houve correlações entre as concentrações de progesterona medidas nas matrizes sérica e fecal, sérica e salivar, fecal e salivar (r=0,90, p<0,0001; r=0,90, p<0,0001; r=0,92, p<0,0001, respectivamente) durante os ciclos estrais observados (n=15). Obtivemos correlação (r=0,74, p<0,0001) entre as concentrações dos estrógenos quantificados nas matrizes sérica e fecal, mas não entre estas concentrações e aquelas medidas na matriz salivar. Não obtivemos nenhuma correlação entre as concentrações medidas na matriz urinária com as quantificadas nas outras matrizes para nenhum dos hormônios estudados. Obtivemos correlação entre as concentrações de progesterona medidas na matriz fecal pelos métodos de RIE e EIE (r=0,78, p<0,0001) e também na matriz salivar pelos dois métodos empregados (r=0,81, p<0,0001). Os resultados do presente experimento indicam que os imunoensaios utilizados podem ser utilizados para a avaliação das concentrações de progestágenos nas matrizes fecal e salivar durante o ciclo estral em ovinos. / The aim of the present work was evaluate the hormonal profiles of progestins and estrogens in blood, feces, urine and saliva during the induced estral cycle in ovine. Samples were collected daily a 60-day period from eight adult (n=8) cycling ewes. The animals were previously submitted to a protocol of estrus induction and synchronization for twelve days. In order to avoid the effect of exogenous hormones, the first cycle immediately after the synchronization was not considered for hormonal analysis. Progestagen concentrations were quantified by two analytical techniques, radioimmunoassay (RIA) and enzyme immunoassay (EIA). Estrogen concentrations were assessed by radioimmunoassay. Correlations in progesterone concentrations were found to be significant for serum and feces, serum and saliva and feces and saliva (r=0.90, p<0.0001; r=0.90, p<0.0001; r=0.92, p<0.0001, respectively) during the estrous cycles (n=15). Estrogen concentrations in the serum and feces were also positively correlated (r=0.74, p<0.0001). Salivary concentrations of estrogens were not correlated with fecal or serum concentrations of the same hormone. No correlation was found between urinary concentrations and concentrations found in other matrixes for both progestagens and estrogens. Concentrations of progestagens obtained using RIA and EIA were correlated on feces (r=0.78, p<0.0001) and saliva (r=0.81, p<0.0001). Results indicate that both immunoassays used in the present experiment can be used to evaluate progestagen concentrations on fecal and salivary matrixes during the estrous cycle of sheep.

Neste trabalho, anticorpos anti-IgGh foram conjugados às nanopartículas de prata (NPAg) para detectar imunoglobulina G humana (IgGh). Um imunoensaio colorimétrico baseado na diminuição da agregação devido ao aumento da repulsão eletrostática após a interação ligante-alvo. A agregação é induzida pela variação da força iônica e uma mudança da coloração da suspensão coloidal de amarelo para vermelho pode ser observada. Na presença de IgGh, a agregação é inibida e a coloração da suspensão coloidal não se altera. As nanopartículas foram obtidas por meio de cinco procedimentos diferentes e caracterizadas por espectroscopia UV-Vis, espalhamento dinâmico de luz, difração de raios-X e microscopia eletrônica. Glicose e borohidreto de sódio foram utilizados como agentes redutores, enquanto CTAB e &#946;-ciclodextrina foram utilizados como estabilizantes. Citrato de sódio foi utilizado como agente redutor e/ou estabilizante. Nanoesferas de carbono foram obtidas por tratamento hidrotérmico de uma solução aquosa de glicose e também foram utilizadas no preparo das nanopartículas. As nanopartículas foram funcionalizadas com ácido mercaptossuccínico e a conjugação ocorreu devido à interação entre grupos aminas e grupos carboxílicos ionizados, presentes no anticorpo e agente de acoplamento, respectivamente. A estabilidade dos conjugados e o efeito da adição de IgGh foram avaliados para todos os sistemas preparados. As nanopartículas de prata preparadas com borohidreto de sódio e citrato de sódio foram selecionadas para serem aplicadas no desenvolvimento do imunoensaio e as condições experimentais foram avaliadas. Em condições ótimas, observou-se uma correlação linear entre a diminuição da agregação do sistema (NPAg-anti-IgGh) e a concentração de IgGh (0 a 200 ng mL-1). O limite de detecção foi estimado em 25 ng mL-1. O método colorimétrico apresentou boa seletividade para a detecção de IgGh. Além disso, foi obtido um resultado satisfatório ao aplicar o método para determinação do fator IX de coagulação. Foi desenvolvido também um método para determinação de ATP baseado na agregação de nanopartículas de ouro. Aptâmeros foram utilizados como elemento de reconhecimento. Em princípio, o método pode ser aplicável à determinação de outros analitos, por meio da substituição do aptâmero utilizado neste trabalho pelo oligonucleotídeo específico para o alvo de interesse. / In this work, antibodies to human immunoglobulin G (anti-IgGh) were used in combination with silver nanoparticle (NPAg) to detect IgGh. A colorimetric immunoassay based on the decrease of aggregation due to increased electrostatic repulsion upon ligand-target interaction. Aggregation was induced by varying the ionic strength and the solution of NPAg-anti-IgGh shows obvious visible color change from yellow to red. In the presence of IgGh aggregation the nanoparticle is inhibited and coloration of the colloidal solution does not change. The nanoparticles were obtained using five different procedures and they were characterized by UV-Vis spectroscopy, dynamic light scattering, X-ray diffraction and electron microscopy. Glucose and sodium borohydride were used as reducing agent, as CTAB and &#946;-cyclodextrin reagents were used as stabilizers. Sodium citrate was used as reducing and stabilizing agent. Carbon nanospheres were prepared by hydrothermal treatment of glucose and used in the preparation of NPAg. The nanoparticles were functionalized with dimercaptosuccinic acid and their conjugation occurred due to the interaction of positively charged amine groups and anionic groups (-COO-) present on the antibody and coupling agent. The stability of conjugates and the variation of aggregation in the presence of IgGh were evaluated for all systems. The NPAg prepared by sodium borohydride were selected for use in the immunoassay and the optimum conditions of the assay were investigated. Under the optimal conditions, the ration between the absorbance at 396 nm and 564 nm was linearly proportional to the IgGh concentration on a range from 0 to 200 ng mL-1, with a detection limit of 25 ng mL-1. The colorimetric method showed good selectivity for IgGh detection. It was possible to adapt the method to the determination of other proteins, such as factor IX. In another approach, anti-aptamer ATP was used to develop a colorimetric method for the determination of ATP based on stabilization of gold nanoparticles provided by strands of DNA.The strategy was based on stabilization of nanoparticles due to interaction with single strands of DNA, and the change of the stability of the nanoparticles provided by the conformational change of the aptamer following recognition. This method could in principle be used to detect analytes by substituting the aptamer used in this study by the specific aptamer for the target of interest

Rodent-borne hantaviruses (family Bunyaviridae) cause two distinct human infections; hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) and hantavirus pulmonary syndrome (HPS). HFRS is a common viral zoonosis, characterized by fever, renal dysfunction and hemostatic imbalance. Four HFRS-associated hantaviruses have been described: Hantaan virus and Seoul virus mainly found in Asia, Dobrava virus, encountered in the Balkan region and Puumala virus (PUU), causing mild HFRS (nephropathia epidemica; NE) in Europe. HPS, recently discovered in the Americas, involves adult respiratory distress syndrome with a high mortality rate and is caused by Sin Nombre virus. Hantaviruses are enveloped and carry a RNA genome which encodes a polymerase, two glycoproteins and a nucleocapsid protein. The latter elicits a strong humoral immune response in infected patients. The clinical diagnosis of hantavirus infections has until recently relied on serological confirmation by immunofluorescense assay (IFA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using cell culture derived viral antigens. Due to the hazardous nature of hantaviruses and variable virus yield in cell culture we aimed at using recombinant hantavirus proteins for serological purposes. We expressed PUU N in E. coli (PUU rN) and found that high levels of IgM to this protein could be detected at onset of NE. This indicated that it was useful as the sole antigen for serodiagnosis. Our finding was confirmed by comparing IFA and PUU rN ELISA using 618 sera collected at the regional diagnostic laboratory. Full-length PUU rN is difficult to purify due to aggregation to E. coli remnants. We therefore located the important domain for the humoral immune response by utilizing truncated PUU rN proteins to its amino-terminal region (amino acid 7-94). Amino acid 1-117 of N of the five major human hantavirus pathogens were produced in E. coli. Serological assays based on them could detect IgM and IgG serum responses in 380 HFRS and HPS patients from Sweden, Finland, Slovenia, China, Korea and the USA with high sensitivity. In an epidemiological investigation of hantavirus serum responses in European Russia we unexpectedly found antibody responses to the hantaviruses found in east Asia and the Balkan region in 1.5 %, speaking in favour for the presence of such virus in this region. The degree of cross reactivity within the hantavirus genus was adressed by following the serum responses in NE patients. We found an increase of cross reactivity during the maturation of the immune response from onset of disease up to three years by comparing the IgG reactivity towards the hantavirus aminoterminal rN proteins. The first human isolate of the causative agent of NE in Scandinavia was recovered in cell culture from phytohemagglutinin stimulated leukocytes. Serological analysis revealed that this virus belongs to the PUU hantavirus serotype, distinct from the rodent prototype PUU Sotkamo. The human PUU Umeå is unique but genetically similar to rodent isolates from northern Sweden. / digitalisering@umu.se

Accurate diagnosis of active tuberculosis is required to improve treatment, reduce transmission of the disease and control the emergence of drug resistance. A rapid and reliable test would make a considerable contribution to the management of the TB epidemic, especially in HIV-burdened and resource-poor countries where access to diagnostic laboratories are limited. Surrogate marker antibody detection to mycobacterial lipid cell wall antigens gave promising results, in particular with cord factor. The specific advantage of using mycolic acids as lipid antigens in comparison to protein antigens is that mycolic acid is a CD1 restricted antigen with the ability to induce proliferation of CD4/CD8 double negative T-cells, which may explain the sustained antibody production in AIDS patients. Traditional end-point assays to detect anti-MA antibodies showed an unacceptable number of false positive and negative test results. Here a much improved biosensor method (the MARTI-assay, i.e. Mycolic acid Antibody Real-Time Inhibition assay) was developed to detect antibodies to mycolic acid in patient sera as surrogate markers of active tuberculosis. The test was assessed on an IAsys optical biosensor and gave an accuracy of 82%. The technology was transferred to an SPR (ESPRIT) biosensor to economise and simplify the assay. Mycolic acid containing liposomes were immobilized on the SPR gold surface pre-coated with octadecanethiol. The following parameters were optimized on the ESPRIT biosensor to enable reliable TB diagnosis: effect of degassed buffer, saponin blocking, first exposure to serum at low concentration and second exposure to antigen inhibited serum at high concentration. The IAsys biosensor system has a weakness in the double channel cuvette system, in which the channels often do not give matching results, while being ten times more expensive than the gold discs provided for the ESPRIT biosensor. The ESPRIT biosensor is provided with an adjustable laser setting to compensate for differences in the channel readings as well as an automated fluidic system that reduces variance from one sample to the next. First indications are that the test can also be used for prognosis of TB during treatment. It is hoped that the ESPRIT biosensor will improve the accuracy of the test to more than 90%. If the MARTI-assay technology could be made amenable for high throughput screening, it may provide the solution to the serodiagnosis of tuberculosis and monitoring of progress during TB treatment both in adult and children, thereby reducing the spread of TB within the communities. / Thesis (PhD)--University of Pretoria, 2009. / Biochemistry / unrestricted