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Detecção de línfócitos T no intestino de frangos de corte tratados com lactobacillus spp. e desafiados com Salmonella enteritidis /

Noujaim, José Charl. January 2005 (has links)
Orientador: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Paulo Lourenço da Silva / Banca: Renée Laufer Amorim / Resumo: O objetivo deste trabalho foi verificar por meio de imunoistoquímica se a inoculação oral de culturas de Lactobacillus acidophillus, L. reuteri, L. salivarius e a microbiota cecal de aves estimula a resposta imune celular no intestino de pintos de linhagem comercial, desafiadas ou não por Salmonella Enteritidis, na forma de infiltrado leucocitário por células T CD3+, CD4+ e CD8+. Foram utilizados 320 aves com um dia de vida, não sexados e livres de quimioterápicos. Cada grupo foi subdividido em quatro subgrupos com 20 aves cada e classificados em grupo que não recebeu tratamento (controle negativo), tratamento com L. spp ou MC, tratamento com L. spp ou MC e desafio com S. Enteritidis e tratamento com S. Enteritidis (controle positivo). Os resultados obtidos mostram que o tratamento com L. reuteri, L. salivarius, L. acidophillus ou microbiota cecal e o desafio com S. Enteritidis, determina resposta imune na forma de infiltrado leucocitário por linfócitos CD3+, CD4+ e CD8+ no epitélio e na lâmina própria do duodeno, jejuno e ceco de aves com até 12 dias de idade. / Abstract: The bacteria of the Lactobacillus sort have been very studied currently had to its important paper in the process of competitive exclusion where they contribute in the reduction of pathogenically genus, in special infections for Salmonella spp. it saw oral in the first days of life. These bacteria with probiotically characteristics provide beneficial effect to the general health of the host, through the stimulation and anti tumor modulation of the immune reply and properties, had probably the action on the cellular immune system. The objective of this work was to verify if Lactobacillus acidophillus, L. reuteri, L. salivarius and microbiota cecal of broiler chicken have been imunostimulated activities through its inoculation in birds of commercial ancestry with one day of life, defied or not for Salmonella Enteritidis, determining immune reply in the form of infiltrated leucocytes for cells T in the epithelium and intestinal proper blade.The gotten results demonstrate that the cultures of L. acidophillus, L. reuteri, L. salivarius and microbiota cecal defy or not with S. Enteritidis, they determine immune reply on the part of the host in the infiltrated form of leucocytes for lymphocytes CD3+, CD4+ and CD8+. / Mestre
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Participação do TLR9 na atividade fungicida de células dendríticas humanas desafiadas com o Paracoccidioides brasiliensis / Participation of TLR9 on fungicidal activity of human dendritic cells challenged with Paracoccidioides brasiliensis

Vieira, Ivy Rafacho [UNESP] 20 January 2017 (has links)
Submitted by Ívy Rafacho Vieira null (ivy.raff@yahoo.com.br) on 2017-02-20T18:11:01Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final mesmo Ivy.pdf: 2121270 bytes, checksum: ae8b49d15e98a6f5efb7ad097fe78b38 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-22T20:26:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_ir_me_bot.pdf: 2121270 bytes, checksum: ae8b49d15e98a6f5efb7ad097fe78b38 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-22T20:26:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_ir_me_bot.pdf: 2121270 bytes, checksum: ae8b49d15e98a6f5efb7ad097fe78b38 (MD5) Previous issue date: 2017-01-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, endêmica na América Latina, causada pela inalação de propágulos micelianos do fungo termodimórfico do gênero Paracoccidioides spp.(Pb). Dentre os mecanismos de resposta imune contra o fungo, destacam-se os exercidos pelas células fagocitárias como os macrófagos, neutrófilos e células dendríticas (DCs). Além do importante papel efetor, isto é, de destruição do fungo, essas células, por terem capacidade de produzir citocinas tanto pró como anti-inflamatórias, desempenham um importante papel modulador da resposta imune inata, assim como de instrução da resposta imune adaptativa que será gerada posteriormente. Para essa última função, as células dendríticas merecem destaque por constituírem a população de células fagocitárias mais adaptada ao processo de ligar, fagocitar, destruir, processar microrganismos e após migrarem aos órgãos linfóides periféricos, locais onde elas maturam para desenvolver o processo de apresentação de antígeno, desencadear e instruir a resposta imune adaptativa. No entanto, de forma similar às outras células fagocíticas, as DCs são capazes de liberar potentes moléculas citotóxicas que as capacita a destruírem eficientemente os microrganismos. Essa capacidade, embora necessária ao papel modulador das DCs citado acima, representa um mecanismo efetor importante durante a resposta imune inata. A maior ou menor capacidade das DCs destruírem os vários microrganismos pode resultar em diferenças na disseminação dos mesmos durante a migração dessas células da periferia até os órgãos linfóides secundários. Neste contexto, em estudo anterior avaliamos se DCs humanas exercem atividade fungicida contra o P. brasiliensis e se esse processo envolve a ativação do sistema NADPHoxidase com consequente produção de H2O2, o metabolito envolvido na destruição do P. brasiliensis. Detectamos que as DCs não liberam níveis adequados de H2O2 e consequentemente não desenvolvem atividade fungicida contra o P. brasiliensis. Em outro estudo observamos que a interação das DCs com o Pb não resulta em maturação eficiente dessas células. O tipo de receptor de reconhecimento padrão (PRR) ao qual o fungo se liga pode determinar o seu destino no interior das células fagocitárias. Estudos têm mostrado que enquanto alguns deles estão envolvidos na replicação dos microrganismos no interior das células fagocíticas, ao contrário, outros participam da destruição dos mesmos. Nesse sentido, estudos sugerem que a estimulação de TLR9 através do ligante agonista CpG-ODN culmina com ativação do metabolismo oxidativo e consequente destruição de patógenos. Corroborando com esses estudos, detectamos que a incubação de DCs humanas com um agonista do TLR9 induziu um aumento significativo na atividade fungicida dessa células contra o P.brasiliensis . No entanto, esse efeito não esteve associado à um aumento da produção de H2O2. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis, endemic to Latin America, caused by the inhalation of mycelial propagules of the thermodymorphic fungus of the genus Paracoccidioides spp. (Pb). Among the mechanisms of immune response against the fungus, we highlight those exerted by phagocytic cells such as macrophages, neutrophils and dendritic cells (DCs). In addition to their important effector role, that is, fungus destruction, these cells, due to the capacity to produce both pro and anti-inflammatory cytokines, play an important role in modulating the innate immune response, as well as instructing the adaptive immune response. For this latter function, DCs deserve special attention, as they are the phagocytic cells population more adapted to the process of binding, phagocytizing, destroying, processing microorganisms and after migrate to the peripheral lymphoid organs, where they mature and instruct the adaptive immune response. However, similarly to other phagocytic cells, DCs are able to release potent cytotoxic molecules that enable them to efficiently destroy microorganisms. This ability, although necessary to their modulatory role cited above, represents an important effector mechanism during the innate immune response. The higher or lower capacity of DCs to destroy the various microorganisms may result in differences in dissemination of the infection during the migration of these cells from the periphery to the secondary lymphoid organs. In this context, in a previous study we evaluated whether human DCs exert fungicidal activity against P. brasiliensis and whether this process involves the activation of the NADP oxidase system with consequent H2O2 production, the metabolite involved in the P. brasiliensis killing. We have detected that DCs do not release adequate levels of H2O2 and consequently do not exert fungicidal activity against P. brasiliensis. In another study, we observed that the interaction of DCs with Pb does not result in efficient maturation of these cells. The type of pattern recognition receptor (PRR) to which the fungus binds can determine its fate within the phagocytic cells. Studies have shown that while some PRRs are associated to the replication of microorganisms within the phagocytic cells, other, on the contrary, are involved in the mechanisms of pathogens killing. In this sense, studies suggested that TLR9 stimulation by the agonist CpG-ODN culminates with oxidative metabolism activation and pathogens elimination. Accordinly, in our study we detected that human DCs incubation with a TLR9 agonist results in a significant increase of the fungicidal activity of these cells against P.brasiliensis. However, this effect was not associated with an increase in H2O2 production.
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Revisão sistemática de marcadores de resistência e/ou susceptibilidade de Biomphalaria sp. à infecção por Schistosoma mansoni

MONTEIRO, Anndreisa Christiny 12 September 2017 (has links)
A esquistossomose é uma doença endêmica que acomete mais de 200 milhões de pessoas no mundo todo. É sabido que vários fatores podem interferir para o sucesso ou não de uma infecção do Schistosoma mansoni em seu hospedeiro intermediário, tais como fatores comportamentais, genéticos e imunológicos do caramujo. No entanto, a complexidade dos mecanismos de resistência e/ou suscetibilidade do molusco, ainda não foram totalmente esclarecidos. Compreendendo esta importância o presente estudo objetivou realizar uma revisão sistemática sobre os fatores de resistência e/ou suscetibilidade à infecção dos moluscos pelo Schistosoma mansoni. Uma pesquisa sistemática foi realizada nas bases de dados PUBMED, SCOPUS e WEB OF SCIENCE. A presente revisão identificou 189 trabalhos, das quais 66 foram elegidos para inclusão nesta revisão sistemática. Foi observado que a maioria dos estudos foi desenvolvida em países desenvolvidos e indenes à doença, tais como Estados Unidos e Reino Unido. A maioria dos estudos focou no uso de linhagens de Biomphalaria glabrata derivadas do Brasil e Caribe infectadas com cepas oriundas destas duas regiões geográficas (n=58/87,88%). Foram identificados 71 fatores relacionados à resistência e 41 relacionados à susceptibilidade do hospedeiro intermediário à infecção. Os processos biológicos relacionados a esses fatores foram diversos, se destacando principalmente processos relacionados ao estresse oxidativo, resposta imunológica e estresse celular. Dentre estes os genes identificados, os que foram mais citados nos trabalhos elegidos foram os que codificam a enzima Superoxido dismutase (SOD1) e a proteína do choque térmico 70 (HSP70), os quais foram mais citados como fatores de resistência à infecção. Apesar desta revisão indicar vários fatores de resistência e/ou susceptibilidade do hospedeiro intermediário à infecção por S. mansoni, ainda é necessário investir em pesquisas que visam estudar este aspecto da relação parasita-hospedeiro intermediário, para identificar com mais clareza os principais genes e vias biológicas relacionadas com a resistência ou susceptibilidade do Biomphalaria sp. à infecção por S. mansoni. / Schistosomiasis is an endemic disease that affects more than 200 million people worldwide. It is known that several factors may interfere with the success or failure of S. mansoni infection in its intermediate host, such as behavioral, genetic and immunological factors. However, the complexity of mechanisms of mollusk resistance or susceptibility have not yet been fully elucidated. Understanding this importance, the present study aimed to carry out a systematic review on Biomphalaria ́s resistance and susceptibility factors to S. mansoni infection. A systematic search was carried out in PUBMED, SCOPUS and WEB OF SCIENCE databases. The present review identified 189 papers, of which 66 were included in this systematic review. It was observed that most of the studies were derived from developed and disease-free countries, such as the United States and the United Kingdom. Most of the studies focused on the use of Biomphalaria glabrata strains derived from Brazil and Caribbean infected with S. mansoni strains from these two geographic regions (n = 58 / 87.88%). Seventy-one factors related to resistance and 41 related to the host's susceptibility to infection were identified. The biological processes related to these factors were diverse, mainly highlighting processes related to oxidative stress, immune response and cellular stress. Among the genes identified, the most cited genes cited in the selected studies were those that encode the enzyme Superoxide dismutase (SOD1) and heat shock protein 70 (HSP70), which were more frequently cited as factors of resistance to infection. Although this review indicates several factors of resistance and / or susceptibility of the intermediate host to infection by S. mansoni, it is still necessary to invest in studies that aimed to study this aspect of the intermediate host and parasite relationship, in order to make more clearly the main genes and Biological pathways involved in resistance or susceptibility of Biomphalaria sp. to S. mansoni infection. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG
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Toll-like recepctors (TLRs) and retinoic acid inducible gene-I (RIG-I) activation by viral analogs in bovine endometrial cells /

Carneiro, Luisa Cunha. January 2016 (has links)
Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Coorientador: João Paulo Elsen Saut / Banca: Ricarda Maria dos Santos / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Banca: Maria Emília Franco Oliveira / Banca: Érica Azevedo Costa / Resumo: De modo geral, o objetivo deste estudo foi determinar se as células endometriais bovinas responderam a análogos virais de padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs) mediante a produção de citocinas pró-inflamatórias após ativadas pelos receptores "Toll-Like" (TLRs) no endossoma celular e no citoplasma celular pelo genes indutores de ácido retinóico tipo I (RIG-I). No primeiro experimento, amostras uterinas de vacas de corte mestiças pós-púberes foram dissectadas para obtenção de células endometriais epiteliais e estromais. Um controle negativo e quatro PAMPs: LPS, ssRNA, Poly I:C (LMW), Poly (I:C) HMW foram utilizados. Dois grupos de tratamentos (transfectados e não transfectados) foram analisados durante 24 horas. Em outro experimento, células endometriais foram tratadas apenas com o PAMP Poly (I:C) LMW e um grupo Controle Negativo. Neste, os grupos foram incubados às 0, 2, 6, 12, 24, 36, 48 e 72 horas. Sobrenadantes foram colhidos para desenvolver o teste de ELISA para IL-6 e IL-8. Células epiteliais produziram IL-6 em resposta ao Poly I:C (HMW) quando comparadas com o Controle (Grupo DOTAP positivo; P< 0.05), enquanto que o LPS induziu produção de IL-6 e IL-8 em células estromais (P< 0.05). O uso de um reagente de transfecção entre as células e tratamentos demonstrou efeito (P> 0.05). Ainda, células estromais tratadas por Poly I:C (LMW) demonstraram uma maior produção de IL-6 às 48 e 72 horas (P< 0.05), e para o IL-8 às 6, 12, 24, 36, 48 e72 horas quando comparadas com o grupo Controle (P< 0.05). No segundo experimento, outras amostras uterinas de vacas de corte pós-púberes foram utilizadas. A obtenção de células endometriais estromais e epiteliais foram isoladas pelo mesmo protocolo do primeiro experimento. O PAMP Poly (I:C) LMW e um controle negativo foram utilizados. Proteínas para o RIG-I e p65 foram colhidas após 12, 24, 48 e 72 horas de tratamento / Abstract: In general, the objective of this study was to determine if bovine endometrial cells replied to virus analogs of pathogen associated molecular pattern (PAMPs) by production of proinflammatory cytokines after Toll-Like Receptor (TLR) activation in the cell endosome and after retinoic acid inducible gene - I (RIG-I) stimulation in the cell cytoplasm. In the first experiment, uterine samples from post pubertal cross-breed beef cows were dissected using a protocol to obtain epithelial and stromal cells. A negative control and four different PAMPs: LPS, ssRNA, Poly I:C (LMW), Poly (I:C) HMW were used. Two treatments (transfected and non-transfected) groups were investigated during 24 hours. In the other experiment, endometrial cells were treated with only Poly (I:C) LMW and a negative Control group. All incubated at 0, 2, 6, 12, 24, 36, 48 and 72 hours. Supernatants were collected to develop Elisa for IL-6 and IL-8. Epithelial cells produced IL-6 in response do Poly I:C (HMW) compared to Control (P< 0.05), otherwise, LPS induced IL-6 and IL-8 in stromal (P< 0.05). The transfection Reagent differ between cells and treatments (P> 0.05). Still, in stromal cells treated by Poly I:C (LMW) the production of IL-6 was higher at 48 and 72 hours (P< 0.05), and for IL-8 at 6, 12, 24, 36, 48 and 72 hours when compared to the Control (P< 0.05). In the second experiment, uterine samples from others post pubertal mixed-breed beef cows were used. To obtain stromal and epithelial cells, uterine samples were dissected with the same protocol as the first experiment. The PAMP Poly (I:C) LMW and a negative control were used. Proteins for RIG-I and p65 were collected after 12, 24, 48 and 72 hours. In response to Poly (I:C) LMW induction, stromal cells activated RIG-I at 48 hours (P< 0.05) were compared to the Control group. On the other hand, epithelial cells were not sufficient stimulated Poly (I:C) LMW to activate ... / Doutor
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Infecção experimental de tambaqui (Colossoma macropomum) por Aeromonas hydrophila : avaliação de antimicrobianos e da resposta imune do hospedeiro /

Gallani, Sílvia Umeda. January 2019 (has links)
Orientador: Fabiana Pilarski / Banca: Diogo Teruo Hashimoto / Banca: Geovana Dotta Tamashiro / Banca: Luiz Carlos Kreutz / Banca: Antonio Augusto Mendes Maia / Resumo: As enfermidades têm se destacado como um dos principais entraves para o desenvolvimento da aquicultura, e apesar do tambaqui Colossoma macropomum ser a espécie nativa mais produzida na América do Sul, pouco conhecemos sobre as enfermidades que o afetam e como o seu mecanismo imune reage frente às infecções. A septicemia hemorrágica é causada pela bactéria Aeromonas hydrophila, e se destaca como uma das principais enfermidades na aquicultura, principalmente em espécies tropicais. Por isso, confirmamos a patogenicidade de A. hydrophila pelo Postulado de Koch e estabelecemos as doses letais até 80%, estimando a DL50 em 5, 57 x 107 a 1, 41 x 108 UFC/ml. Não recomendamos o verde malaquita como recurso profilático e indicamos ceftriaxona, florfenicol, oxitetracyclina, sulfazotrim e tianfenicol como potenciais antimicrobianos para o controle desta bactéria, mas consideramos os óleos essenciais de cravo Eugenia caryophyllata e canela Cinnamomum zeylanicum como melhores opções para potencial tratamento da bacteriose, com forte atividade inibitória. Descrevemos um perfil leucocitário incomum de severa leucopenia em período agudo de infecção, devido à liberação de armadilhas extracelulares pelos leucócitos (ETosis). ETosis é um mecanismo de suicídio leucocitário, ainda não descrito para a maioria dos peixes, e que pode ser considerado como um dos últimos recursos imunes adotado pelo hospedeiro para tentar conter a infecção. Este mecanismo pode ser visualizado através de uma metodologia ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Diseases have emerged as one of the main obstacles to aquaculture development, and although tambaqui Colossoma macropomum is the most produced native species in South America, little is known about the diseases that affect this fish and how its immune mechanism reacts to infection. Hemorrhagic septicemia is caused by the bacterium Aeromonas hydrophila, and stands out as one of the major diseases in aquaculture, especially in tropical species. Therefore, we confirmed the pathogenicity of A. hydrophila by the Koch's Postulate and established the lethal doses up to 80%, estimating the LD50 at 5.57 x 107 to 1.41 x 108 CFU/ml. We do not recommend malachite green as a prophylactic resource and we recommend ceftriaxone, florfenicol, oxytetracycline, sulphazotrin and thiamphenicol as potential antimicrobials for this bacterium control, but we consider the essential oils of clove Eugenia caryophyllata and cinnamon Cinnamomum zeylanicum as the best options for potential treatment of bacteriosis, with strong inhibitory activity. We describe an unusual leukocyte profile with severe leukopenia during acute infection due to the release of leukocyte extracellular traps (ETosis). ETosis is a mechanism of leukocyte suicide, not described yet for most of fish species, and it can be considered as one of the last immune mechanisms adopted by the host to try to contain the infection. This mechanism can be visualized through a low-cost and of easy-execution methodology, developed in this thesis. A... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Aspectos da fisiopatologia da sepse em Piaractus mesopotamicus induzida por Aeromonas hydrophila /

Claudiano, Gustavo da Silva. January 2015 (has links)
Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Julieta Rodini Egracia de Moraes / Coorientador: Cleni Mara Marzocchi-Machado / Banca: Aureo Evangelista Santana / Banca: Rogério Salvador / Banca: Luiz Lehmann Coutinho / Banca: Antonio Vicente Mundim / Resumo: A patogenia da sepse envolve múltiplas inter-relações na dinâmica entre os diversos componentes relacionados ao hospedeiro e ao patógeno, com altas taxas de mortalidade em várias espécies animais. Embora seja uma das principais causas de mortalidade de peixes, há escassez de literatura sobre seus fenômenos fisiopatológicos e em seus mecanismos de modulação. Assim, neste trabalho, objetivou-se estudar os aspectos fisiopatológicos da evolução da reposta séptica induzida por Aeromonas hydrophila em Piaractus mesopotamicus - pacus. O inóculo utilizada foi determinada pela DL50 (DL50-96h) e estimada em 1,78 x 109. A sepse foi induzida pela inoculação na cavidade celomática e seguiram-se as coletas de sangue nos tempos pré-determinados de 1, 3, 6 e 9 horas após indução e o grupo controle. Verificou-se rápido aumento da cortisolemia com inibição da absorção de glicose, seguido de hipocortisolemia e hiperglicemia. Os hormônios da tireoide, apresentando diminuição imediata de suas concentrações séricas T3 e T4. Este último apresentou aumento 6 HPI. As alterações hormonais induzidas pela sepse desencadearam alterações nas vias metabólicas com aumento do catabolismo protéico e lipídico, utilização da via da glicólise anaeróbica transitória e lesão hepática. O leucograma demonstrou leucopenia e trombocitopenia seguido de cessar da quimiotaxia dos leucócitos após 6 HPI e graves alterações morfológicas em leucócitos e eritrócitos. As variáveis do sistema imune inato apresentaram aumento da produção de EROs 3 HPI, seguido de diminuição, sem alteração da concentração da lisozima sérica e progressivo aumento do ALS e AAB. Após inoculação ip. de A. hydrophila, foram evidenciados sinais clínicos de aeromonose, bacteremia crescente e sobrevida de 57,14 % depois 36 HPI / Abstract: The pathogenesis of sepsis involves multiple interrelationships in the dynamics between various components related to the host and the pathogen, with high mortality rates in several animal species. Although it is a major cause of fish deaths, there is lack of literature about its physiopathology and the mechanisms of modulation. This work aimed to study the physiopathological aspects of the evolution of the septic response induced by Aeromonas hydrophila in Piaractus mesopotamicus - pacu. The dose was determined by the LD50 (LD50-96h) and estimated in 1,78 x 109. Sepsis was induced by the administration in the coelomic cavity and was followed by the collection of blood in the pre-determined times of 1, 3, 6, and 9 hours after induction and more control. There was a rapid increase of cortisol concentration in plasma, inhibition of glucose uptake, followed by hypocortisolemia and hyperglycemia. Thyroid hormones have immediate reduction of serum concentration of T3 and T4. The latter showed an increase after 6 HPI. Hormonal changes induced by sepsis-triggered changes in metabolic pathways enhancing protein and lipid catabolism, use of transient anaerobic glycolysis via and liver damage. The leucocyte count showed leukopenia and thrombopenia followed by cessation of leukocyte migration after 6 HPI and severe morphological changes in leukocytes and erythrocytes. The innate immune variables showed increased production of ROS after 3 HPI, followed by reduction without changing the concentration of serum lysozyme and progressive increase in SHA and ABA. After ip inoculation of A. hydrophila in pacu, clinical signs were evident of Aeromonas infection, growing bacteremia and survival of 57,14 % after 36 HPI / Doutor
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Federalismo e tributação: certidões e cadastros

Magalhães, Cristiane de Araújo Góes January 2007 (has links)
121 f. / Submitted by Ana Valéria de Jesus Moura (anavaleria_131@hotmail.com) on 2013-03-22T12:02:32Z No. of bitstreams: 1 CRISTIANE DE ARAÚJO GÓES MAGALHÃES - DISSERTAÇÃO.pdf: 611810 bytes, checksum: 5025d1adf3defec692b8b4f0c2644b8b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Valéria de Jesus Moura(anavaleria_131@hotmail.com) on 2013-03-22T12:02:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CRISTIANE DE ARAÚJO GÓES MAGALHÃES - DISSERTAÇÃO.pdf: 611810 bytes, checksum: 5025d1adf3defec692b8b4f0c2644b8b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-22T12:02:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CRISTIANE DE ARAÚJO GÓES MAGALHÃES - DISSERTAÇÃO.pdf: 611810 bytes, checksum: 5025d1adf3defec692b8b4f0c2644b8b (MD5) Previous issue date: 2007 / O trabalho versa sobre certidões de regularidade fiscal e cadastros de inadimplentes. O estudo foca as relações envolvendo a União e os Estados-membros, quando aquela exige ou nega o fornecimento de certidões a estes entes e os inclui em cadastros de inadimplentes. São abordadas as conseqüências dessas práticas para a autonomia dos Estados-membros, peculiar ao Federalismo brasileiro atual, e para o cumprimento do dever de implementar políticas públicas prevista na Carta Magna visando atender as necessidades da coletividade. O Federalismo é estudado com foco especial na Federação brasileira à luz da atual Constituição Federal. É destacado que, ao lado da autonomia dos entes federados, há o papel de coordenadora que, através da repartição constitucional das competências, foi atribuído à União. É demonstrado que esta coordenação deve ter por fim atingir o desenvolvimento econômico e social, bem como deve se harmonizar com a autonomia dos Estados-membros. Neste contexto é demonstrada atual tendência à centralização praticada pela União e sua inconstitucionalidade. É estudada a imunidade recíproca. Esta norma constitucional encontra fundamento no Federalismo e representa uma garantia para a coletividade. Portanto, o benefício deve ser interpretado de forma ampla, não devendo ser limitado aos impostos, abrangendo, inclusive, as obrigações acessórias. É demonstrado que a execução contra a Fazenda Pública, que envolve débitos tributários e não tributários, tem regras próprias: deve observar o sistema de precatório, o regime jurídico dos bens públicos, a inaplicabilidade da responsabilidade patrimonial, o rito da execução no CPC e da Lei de Execuções Fiscais. Deste regramento, infere-se que os efeitos da inscrição em Dívida Ativa não devem ser aplicados aos Estados-membros. Demonstrada a inconstitucionalidade da negativa de fornecimento da certidão ou da sua exigência para a prática de atos em razão do interesse público envolvido. É evidenciada a influência da Lei de Responsabilidade Fiscal para a instituição e aumento da utilização dos cadastros de inadimplentes. São evidenciados os reflexos negativos no condicionamento das transferências constitucionais e, apesar do mérito do propósito, é destacado que o pretendido controle do endividamento está a ofender interesses da coletividade. Isto porque a aplicação de penas institucionais, ao atingir o ente federado, impede o exercício da gestão pública e, por conseqüência, obsta o implemento das políticas públicas constitucionais. / Salvador
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Imunização genética contra infecção experimental por Leishmania (Viannia) braziliensis / Genetic immunization against experimental infection by Leishmania (Viannia) braziliensis

Salay, Gerson [UNIFESP] January 2006 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Leishmania (Viannia) braziliensis é o agente etiológico de mais de 90% dos casos de leishmanioses cutânea e mucocutânea no Brasil. Apesar da alta freqüência no Brasil, poucos estudos de vacinação estão descritos utilizando esta espécie de Leishmania. Com intuito de iniciar os estudos de vacinação experimental contra as leishmanioses cutânea e mucocutânea causada por L. (V.) braziliensis, isolamos os genes que codificam os antígenos LACK, TSA, LeIF e LbSTI1 desta espécie. Os genes foram caracterizados segundo sua seqüência de DNA e transcrição de mRNA nas diferentes formas do parasita. Observamos alta conservação na seqüência predita de aminoácidos quando comparamos as espécies L. (V.) braziliensis e L. (L.) major com identidades de 83% a 96%. Observamos também a presença de mRNA tanto nas formas promastigotas como amastigotas de L. (V.) braziliensis. Em seguida, inserimos estes genes em vetores para expressão em células eucarióticas e procarióticas. As proteínas recombinantes bacterianas foram inicialmente utilizadas para imunização de camundongos. Os anticorpos específicos foram utilizados para confirmar a expressão destes antígenos nas formas promastigotas e amastigotas de L. (V.) braziliensis. Posteriormente, observamos que a imunização de camundongos com plasmídios e proteínas recombinantes dos respectivos antígenos, induziu a produção de anticorpos específicos, com diferenças na magnitude e tipos de subclasse de anticorpo, assim como linfócitos produtores de IFN-γ. Por fim, analisamos a imunidade protetora após o desafio com formas promastigotas de L. (V.) braziliensis. Observamos que a resposta imune desencadeada pela imunização não foi suficiente para reduzir a lesão primária da infecção experimental. Desta parte de nossos estudos concluímos que: i) os quatro antígenos por nós clonados de L. (V.) braziliensis possuem potencial para utilização em estratégias de imunização contra infecção experimental por parasitas do gênero Leishmania; ii) as diferentes estratégias de imunização utilizadas não foram capazes de induzir significativa imunidade contra a infecção experimental com L. (V.) braziliensis. Em paralelo, estudamos o papel da molécula “glucocorticoid-induced tumor necrosis factor family-related receptor” (GITR) durante a infecção experimental com L. (L.) major. Inicialmente, observamos que camundongos geneticamente deficientes que não expressam a molécula GITR foram mais resistentes à infecção, quando comparados ao grupo de animais selvagens. Este aumento na resistência correlacionou com o aumento no número de células T CD4+ produtoras de IFN-γ presente no sítio de infecção. Complementamos estes experimentos, estudando o efeito do tratamento com anticorpos anti-GITR nesta infecção. Observamos que o tratamento com este anticorpo levou a diminuição do número de parasitas no sítio da lesão quando comparado ao grupo controle de animais. Este fenômeno foi correlacionado com a quantidade de IFN-γ produzida por células do linfonodo de drenagem. Destes experimentos pudemos concluir que a molécula GITR tem um papel crítico durante a leishmaniose cutânea causada por L. (L.) major, e que anticorpos anti-GITR tem um potencial para serem utilizados em estratégias de vacinação contra a leishmaniose cutânea potencializando a resposta imune específica. / Leishmania (Viannia) braziliensis is responsible for more than 90% of the cases of cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis in Brazil. In spite of the high frequency of this parasite in Brazil, few studies of vaccination using this species of Leishmania are described. Aiming at initiating these studies of experimental vaccination against cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis caused by L. (V.) braziliensis, we isolated the genes encoding the antigens LACK, TSA, LeIF e LbSTI1. The genes were characterized according to their DNA sequence and mRNA transcription in the different forms of the parasite. We observed a high conservation in the predicted amino acid sequences when we compared the species L. (V.) braziliensis and L. (L.) major. The identities varied from 83% to 96%. We also observed the presence of mRNA in both forms of L. (V.) braziliensis (promastigotes and amastigotes). Subsequently, we cloned these genes into vectors which allowed their expression into eukaryotic or prokaryotic cells. The bacterial recombinant proteins were initially used to immunize mice. Specific antibodies were used to confirm the expression of these antigens in promastigotes and amastigotes of L. (V.) braziliensis. Subsequently, we observed that the immunization of mice with recombinant plasmids and recombinant proteins representing the distinct antigens induced specific antibodies and IFN-γ producing T cells. Finally, we evaluated the degree of protective immunity after a challenge with promastigotes forms of L. (V.) braziliensis. We observed that the immune response induced by immunization was not sufficient to reduce the primary lesion caused by infection. From these results we concluded that: i) all four antigens isolated from L. (V.) braziliensis have the potential to be used for immunization against experimental infection by different species of Leishmania; ii) the different strategies of immunization used were not capable of inducing significant immunity to experimental infection with L. (V.) braziliensis. In parallel, we studied the role of the glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor family-related protein (GITR) during infection with L. (L.) major. Initially, we observed that genetically deficient mice which do not express GITR were more resistant to infection when compared to wild type animals. The resistance correlated with the increased number of IFN-γ producing CD4+ T cells in the infection site. We complemented these experiments, studying the effect of the treatment with antibodies to GITR during infection. We observed that treatment with these antibodies led to reduction in the number of parasites in the lesion site when compared to control animals. The reduction was correlated with the amount of IFN-γ produced by lymph node cells. From these experiments we concluded that GITR has a critical role during cutaneous leishmaniasis caused by L. (L.) major and that antibodies to GITR may have a potential to be used for vaccination against cutaneous leishmaniasis improving the specific immune response. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Distribuição de linfócitos T Vδ1 e V δ2 durante a doença ativa e tratamento específico da tuberculose / Distribuition of V δ1 and V δ2 T lymphocytes during the active disease and specific therapy of tuberculosis

Costa, Priscilla Ramos [UNIFESP] January 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A tuberculose é considerada um problema de saúde pública mundial. Estima-se que um terço da população mundial está infectada pelo Mycobacterium tuberculosis. Trabalhos avaliando a interação patógeno vs. hospedeiro tem incentivado o estudo dos mecanismos envolvidos na resposta imunológica inicial nos indivíduos infectados e doentes. A participação dos linfócitos T na resposta contra a micobactéria tem destacado a importância dessas células na imunopatogênese. Uma subpopulação de linfócitos T, as células T γδ têm sido investigada quanto à sua participação na resposta imunológica, principalmente frente a processos infecciosos e inflamatórios. Essas células carregam cadeia TCR γδ, atuam tanto na resposta inata como na adaptativa e são encontradas em epitélios de alguns órgãos e no sangue periférico. Duas subpopulações são predominantes no sangue periférico, aquelas expressando TCR Vγ2Vδ2 e outras expressando TCR VγnVδ1. A subpopulação Vδ2 tem demonstrado reatividade a produtos micobacterianos, enquanto que os mecanismos específicos das células T Vδ1 permanecem desconhecidos. Este trabalho propôs investigar através da citometria de fluxo a distribuição dos linfócitos T γδ, Vδ1 e Vδ2 na infecção pelo M. tuberculosis. Este trabalho foi realizado com amostras de pacientes com tuberculose pulmonar na fase aguda e durante terapia específica, indivíduos expostos ao M. tuberculosis e controles saudáveis. Nós encontramos uma diminuição na freqüência de células T Vδ2 nos pacientes com tuberculose, permanecendo estável durante terapia. Ao contrário as células T Vδ1 revelaram tanto uma freqüência aumentada na fase aguda, como também aumento contínuo ao longo da terapia específica. Com base no impacto da doença na freqüência desses linfócitos T γδ, acreditamos que essas células estejam envolvidas na resposta imunológica inicial contra a micobactéria, e que exista uma provável função complementar dessas células com as xi células T αβ. Nós recomendamos futuros estudos para explorar e avaliar a funcionalidade das células T Vδ1 e Vδ2, esses dados serão de grande valia para melhor compreender a contribuição dessas células na resposta imune durante a tuberculose. / Tuberculosis is an enormous challenge to global health. One third of the world’s population is estimated to be infected by the Mycobacterium tuberculosis. Previous reports assessing the interaction between the pathogen and the host have promoted further studies on the mechanisms involved during the innate immune response of infected individuals. The participation of T lymphocytes in the response against the mycobacterium has revealed the importance of these cells in immunopathogenesis of the disease. The γδ T cells, a subset of T lymphocytes, have been investigated with regard to their participation in the immune response, mainly against infectious and inflammatory processes. These cells express TCR γδ chains, participating in innate as well as adaptive responses, and are found in the epithelium of some organs and in the peripheral blood. There are two predominant subsets of cells in the peripheral blood: those expressing TCR Vγ2Vδ2 chains and those expressing TCR VγnVδ1 chains. The Vδ2 subset has demonstrated reactivity to compounds produced by M. tuberculosis, while the specific mechanisms of Vδ1 T cells remain unknown. Using flow cytometry, this study aims were to investigate the frequency of both Vδ1 and Vδ2 subsets of γδ T cells in Mycobacterium tuberculosis infection. This study was performed with samples that include acute tuberculosis patients, those receiving specific therapy, exposed individuals, and healthy controls. We found that the frequency of Vδ2 T cells was diminished in tuberculosis patients, and remained steadily low during specific therapy. In contrast, the Vδ1 T cells subset displayed not only increased frequency at acute phase, but also continued to rise throughout the course of specific therapy. Based on the impact of the disease on the γδ T cells frequency, we believe that these cells may be involved in an innate immune response xiii against the mycobacterium. Additionally, it is likely that they play a complementary role to αβ T cells during infectious processes. We recommend future studies to explore and evaluate the funcionality of Vδ1 and Vδ2 T cells in order to better understand the contribution of these subsets in the immune response during tuberculosis infection. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Avaliação da resposta inflamatória in vivo e in vitro na esporotricose felina em diferentes apresentações clínicas

Miranda, Luisa Helena Monteiro de January 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-05T18:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) luisa_miranda_ipec_dout_2013.pdf: 2382714 bytes, checksum: d55b4e803e3fb5de09cd228382c4aa44 (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A ocorrência de formas graves de esporotricose felina, aliada a lesões sem granulomas e ricas em estruturas leveduriformes, evidencia a suscetibilidade destes animais para a doença e enfatiza a importância do estudo da sua patogenia. O objetivo deste estudo foi descrever o processo inflamatório e a carga fúngica das lesões em diferentes apresentações clínicas, e sua relação com o perfil de leucócitos no sangue periférico de gatos com esporotricose por meio da técnica de citometria de fluxo (CF) e com a infecção pelo Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) e/ou pelo Vírus da Leucemia Felina (FeLV). Gatos com lesões cutâneas com isolamento de Sporothrix sp. foram incluídos no estudo, separados nos grupos L1, L2 e L3 (lesões em um, dois e três ou mais locais, respectivamente) e submetidos a coleta de sangue e de fragmentos de lesão. O estado geral dos animais foi classificado como bom, regular ou ruim. Ao exame histopatológico, as lesões foram agrupadas de acordo com o processo inflamatório (granulomatoso ou inespecífico), grau de ativação de fagócitos predominantes nos granulomas (macrófagos ou células epitelióides), organização do granuloma (bem formado ou mal formado) e intensidade dos tipos celulares no infiltrado A carga fúngica foi verificada pelas técnicas de impregnação pela prata de Grocott (IPG) e imuno-histoquímica (IHQ). A CF foi aplicada no sangue periférico, utilizando anticorpos monoclonais para os marcadores CD4, CD8, CD21, CD14 e granulócitos. Cento e um animais foram incluídos no estudo: 20 do grupo L1, 22 do grupo L2 e 59 do grupo L3. O processo inflamatório granulomatoso supurativo (PIGS) foi observado em 99 casos. A maioria das lesões, sobretudo no grupo L3, apresentavam granulomas mal formados (pvalor= 0,032) e com predomínio de macrófagos (p-valor=0,010). A IPG e a IHQ evidenciaram estruturas leveduriformes (EL) em 94 casos cada uma, sendo a concordância entre as duas observada em 92 casos. As duas técnicas associadas apresentaram sensibilidade de 98,0%. A carga fúngica de mais de 400 EL/ campo (400x) ocorreu em 48,5% dos casos com PIGS e foi predominante nos animais do grupo L3. Houve correlação entre granulomas mal formados e com predomínio de macrófagos e a carga fúngica superior a 100 EL/ campo (p-valor<0,01). A CF foi realizada em 33 casos de esporotricose e cinco animais não infectados (Grupo controle). O percentual de linfócitos T CD8+ foi maior nos animais dos grupos L2 e L3 (p-valor=0,01) O maior percentual de células CD4+ esteve associado ao grupo L1 e ao estado geral bom (pvalor= 0,04 e 0,03, respectivamente). A expressão CD8low ocorreu em 20 animais com esporotricose, sendo predominante no grupo L3 (p-valor=0,01), e não ocorreu no grupo controle. Esta expressão foi associada a granulomas com predomínio de macrófagos (p-valor=0,01) e ocorreu em 76,2% dos casos com carga fúngica acima de 100 EL/campo. Três animais foram positivos para FIV, quatorze para FeLV e dois para os dois testes. Não houve correlação entre estes testes e os demais achados. Estes resultados sugerem associação entre a resposta bem organizada, menor carga fúngica e aumento de linfócitos CD4+ com o controle da doença, manutenção do estado geral bom e lesões localizadas. No estado geral ruim, as lesões disseminadas e alta carga fúngica estavam relacionadas a existência de um padrão de resposta com aumento de células CD8+ e aumento da expressão de CD8low / The occurrence of severe forms of feline sporotrichosis, along with lesions without granulomas and rich in yeast-like forms, demonstrate the su sceptibility of these anim als to the disease and emphasizes the importance of the study of its pathogenesis. The aim of this study was to describe the inflammatory changes and fungal load at different clinical presentations and its relationship with the profile of leukocytes in peripheral blood of cats with sporotrichosis by means of flow cytometry (FC) technique and with Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and / or Feline Leukemia Virus (FeLV). Cats presenting cutaneous lesions with isolation of Sporothrix sp. in culture were included. They were separated in groups L1, L2 and L3 (lesions in one, two and three or more sites, respectively) and were subjected to blood sample collection and to biopsy of the lesion. The general condition of the animal s was classified as good, fair or poor. Histologically, the lesions were described according to the inflammatory process (granulomatous or nonspecific), degree of activation of predominant phagocytes within the granulomas (macrophages or epithelioid cells), granulomas organization (well-formed or poorly formed) and intensity of cell types within the inflammation. The fungal lo ad was assessed by Grocott silver stain (GSS) technique and immunohistochemistry (IHC). The FC was applied to peripheral blood by means of monoclonal antibodies to target CD4, CD8, CD21, CD14 and granulocytes. One hundred and one animals were included: 20 in group L1, 22 in group L2 and 59 in group L3. Histologically, 99 lesions showed suppurative granulomatous inflammation (SGI). Most lesions, specially in the group L3, showed poorly formed granulomas (p-value=0.032) and predominantly macrophages (p-value=0.010). The GSS and IHC s howed yeast-like forms (YF) in 94 cases each one and their concordance was noted in 92 cases. Together, the two techniques showed sensivity of 98.0%. The fungal load of more than 400 YF/Field (400x) occurred in 48,5% of cases by GSS and was predominant in group L3. There was a correlation between poorly formed granulomas with macrophages predominance and the fungal load exceeding 100 YF/Field (p-value<0.01). The CF was performed in 33 cases of sporotrichosis and five uninfected cats (control group). The percentage of CD8 + T cells was greater in the groups L2 and L3 (p-value=0.001). The higher percentage of CD4 + T cells was correlated to group L1 and to good general condition (p- value=0.04 and 0.03, respectively). The reduced expression of the CD8 molecule (CD8low) occurred in 20 animals with sporotrichosis, being predominat in group L3 (p-value=0.01), and was not observed in control group. This expression was associated with granulomas with macrophage predominance (p-value=0.01) and occurred in 76.2% of cases with fungal load above 100 YF/field. Three animals were positive to FIV, four teen to FeLV and two to both tests. There was no correlation between these tests and the other findings. These results suggest an association of the well-organized response, the lower fungal load and increased CD4 + T lymphocytes with the control of the disease, al ong with the good general condition and localized lesions. At the poor general condition, the dissem inated lesions and high fungal load were related to a response patter n with and increase of CD8 + T lymphocytes and particulary of the CD8 low expression.

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