Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-24Bitstream added on 2015-04-09T12:47:45Z : No. of bitstreams: 1 000814002.pdf: 1173956 bytes, checksum: f0571023b266097e79a4f39e523f7c80 (MD5) / Acredita-se que as frações ativas de mananoproteinas (FAM), obtidas a partir da extração e fracionamento da parede celular de leveduras (Saccharomyces cerevisiae) possam modular de forma benéfica o sistema imune. Este estudo avaliou os efeitos imunológicos das FAM em cães adultos e idosos. Foram empregadas três dietas extrusadas, isonutritivas com inclusão de 0% (T0); 0,04% (T400) e 0,08% de FAM (T800). No total, foram utilizados 36 cães da raça beagle. Os tratamentos resultaram da combinação de idade (adultos e idosos) e dieta (T0, T400 e T800), gerando seis tratamentos experimentais. Para cada dieta foram utilizados seis cães adultos (4,0±2,0 anos) e seis cães idosos (11,0±1,0 anos). O experimento seguiu delineamento em blocos, com três blocos de 12 cães (seis adultos e seis idosos, dois cães por idade e dieta). Nos dias zero, 14 e 28, amostras de sangue foram coletadas para fenotipagem dos leucócitos sanguíneos e ensaio de fagocitose. Nos dias zero e 28 foram realizados: hemogramas, análises bioquímicas, teste de linfoproliferação, produção de intermediários reativos do oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), avaliação da concentração de imunoglobulina A fecal e teste de hipersensibilidade cutânea tardia (DTH). Os dados foram submetidos à análise de variância com medidas repetidas no tempo, exceto o DTH, no qual se analisou separadamente cada tempo do período experimental. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey (p≤0,05). A FAM mostrou-se segura nos teores e períodos estudados. Aos 28 dias, cães adultos alimentados com a dieta T400 em relação à T0 apresentaram contagens mais elevadas de linfócitos totais (p<0,05). Ao analisar a fenotipagem dos leucócitos sanguíneos demonstrou-se que, mais especificamente, o consumo de 0,04% de FAM pelos cães adultos elevou a contagem de linfócitos T totais (p=0,05). Independente da idade, neutrófilos de cães alimentados com T400, em relação à dieta ... / It is believed that the active fractions mananoproteínas (AFM), obtained from the extraction and fractionation of cell wall of yeast (Saccharomyces cerevisiae), may beneficially modulate the immune system. This study evaluated the immunological effects of FAM in adults or elderly dogs. Three extruded diets with isonutritives including 0% (T0); 0.04% (T400) and 0.08% of AFM (T800) were used. In total, 36 beagle dogs were used. The treatments resulted from the combination of age (adults and elderly) and diet (T0, T400 and T800), generating six experimental treatments. For each diet six adult dogs (4.0 ± 2.0 years) and six elderly dogs (11.0 ± 1.0 years) were used. The experiment was randomized complete block design with three blocks of 12 dogs (six older and six adults, two dogs by age and diet). At zero, 14 and 28 days, blood samples were collected for phenotyping of blood leukocytes and evaluation of phagocytic activity. In zero and 28 days, hemogram, biochemical analysis, lymphocyte proliferation, production of hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO), evaluation of the concentration of fecal immunoglobulin A and delayed test hypersensitivity (DTH) were performed. Data were subjected to analysis of variance with repeated measures, except DTH, in which we analyzed separately each time the trial period. Means were compared by Tukey test (p≤0.05). The AFM was safe in the levels and periods. At 28 days, adult dogs fed the diet T400 relative to T0 had higher counts of total lymphocytes (p<0.05). By analyzing the phenotype of the blood leucocytes was shown that, more specifically, adult dogs consuming 0.04% of the AFM increased the amount of total T-lymphocytes (p=0.05). Regardless of age, neutrophils from dogs fed T400, relative to T0 diet, tended to produce more H2O2 (p=0.09). Higher percentage of phagocytic activity of neutrophils were observed in adult dogs fed on T400 compared to the T800 diet (p<0.05). The skin response ...

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-04. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:28Z : No. of bitstreams: 1 000836392.pdf: 752785 bytes, checksum: f467ff6135ad2af6a39361f9faa29c0f (MD5) / O objetivo desse trabalho avaliar a ocorrência de mastite em cabras no período pós-parto e monitorar a qualidade colostral e a transferência de imunidade para cabritos que ingeriram colostro e leite de cabras portadoras de mastite. Foram coletadas amostras de secreções lácteas e sangue imediatamente após o parto, bem como às 24 e 48 horas após o parto/nascimento. O exame físico das glândulas mamárias e a avaliação macroscópica das secreções lácteas também foram realizados nesses momentos. A presença de mastite nesse período foi baixa (16,90%), e a forma mais prevalente foi à assintomática. Os Staphylococcus coagulase negativo (SCN) tiveram presentes na maioria dos isolamentos realizados (11/12). O exame físico das glândulas mamárias não revelou grandes alterações ao longo dos momentos avaliados, entretanto o teste de CMT (California Mastitis Test) mostrou-se eficaz para o diagnóstico das mastites assintomáticas no período pós-parto imediato. A contagem de células somáticas foi maior nos animais positivos à lactocultura quando comparados àqueles que tiveram resultado negativo à esse teste. Não houve diferença entre as concentrações de IgG no soro lácteo logo após a parição entre os animais com e sem mastite, entretanto os teores de lactoferrina e albumina estiveram aumentados nas secreções positivas no exame microbiológico em comparação às amostras sem isolamento. Os cabritos alimentados por colostro e leite de cabras, com e sem mastite, não apresentaram falha de transferência de imunidade. As demais frações proteicas avaliadas, não diferiram entre os cabritos alimentados com colostro e leite de cabras com e sem mastite ao longo do experimento. / The objective of this work was in addition to avaluate the occurrence of mastitis in goats in the postpartum period as well as monitor the quality and colostral transfer of immunity to goats that ingested colostrum and milk of goats suffering from mastitis. Colostrum and blood samples were collected immediately after delivery, 24 and 48 hours after delivery / birth. Physical examination of the mammary glands and the macroscopic evaluation of mammary secretions were also performed at these times. The presence of mastitis in this period was low (16.90%), and the most prevalent form was asymptomatic. The coagulase negative staphylococcus (CNS) were present in most isolations performed (11/12). Physical examination of mammary glands revealed no major changes over the periods evaluated, however the test of CMT (California Mastitis Test) was effective for the diagnosis of asymptomatic mastitis in the immediate postpartum period. The somatic cell count was higher in the positive lactocultura animals when compared to those who had a negative result on this test. There was no difference between the concentrations of IgG in whey after calving between animals with and without mastitis, however the levels of lactoferrin and albumin were increased secretions in the positive microbiological examination compared to samples without isolation. The kids fed colostrum and milk of goats with and without mastitis, showed no failure of transfer of immunity, as evidenced by concentrations of IgG found. The other protein fractions evaluated, did not differ between goats fed or not fed colostrum and mastitic milk over the periods evaluated

Atualmente não se dispõe de vacinas contra a toxoplasmose humana, mas têm-se desenvolvido modelos animais em ratas e camundongos para o ensaio imunológico contra a toxoplasmose. No entanto, estes modelos têm mostrado certas limitações. É aconselhável contar com ensaios efetuados em diversas espécies animais antes de comprometer-se com custosos ensaios finais de vacinação, já que as diversas espécies animais, respondem diferentemente frente aos mesmos imunógenos. O objetivo geral do presente trabalho foi então, indagar a aplicabilidade de um modelo hamster para o estudo da imunidade contra a toxoplasmose congênita. Os objetivod específicos foram: verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio crônico da infecção; verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio agudo da infecção; verificar a ocorrência da transmissão lactogênica no desenho experimental proposto, e questionar a proteção contra a toxoplasmose congênita, conferida pela imunidade estéril e mediante a premunição. O cumprimento dos objetivos possibilitará o uso de imunizações (com Toxoplasma gondii viável) em futuros estudos, assim como conhecer a eficácia dos desafios efetuados em hamster, e também permitirá conhecer se o imunógeno mais simples disponível é suficiente para conferir proteção contra a toxoplasmose congênita. Quanto ao ensaio da imunidade na fase crônica da toxoplasmose foi possível comprovar nas condições deste experimento que ela não ocorre, pois as 10 fêmeas hamster inoculadas com 40 oocistos da cepa ME-49 antes de serem acasaladas, tiveram filhotes negativos para anticorpos anti-T.gondii. No modelo de infecção aguda, 100% das fêmeas inoculadas com 102 oocistos da cepa Prugniaud durante a gestação foram positivas, e houve 60% de transmissão transplacentária para seus filhotes e 40% de transmissão transmamária para filhotes adotados. Também, 100% das fêmeas inoculadas com 103 oocistos da mesma cepa durante a gestação foram positivas e nos seus filhotes ocorreram 100% de transmissão transplacentária, e em 40% dos filhotes adotados houve transmissão transmamária. Num terceiro experimento, em fêmeas inoculadas com a cepa RH e medicadas houve sobrevivência de 86,6% e a extinção da cepa RH em 46,15% dos cérebros. No modelo para testar a proteção com cepa RH contra oocistos de T. gondii de cepa heteróloga, não houve transmissão de toxoplasmose congênita em 100% das mães imunizadas com RH e desafiadas com Prugniaud e em 50% das mães imunizadas com RH e desafiadas com M3. O desafio heterólogo após imunização com a cepa RH, nesse experimento conferiu total proteção (100%) em hamsters duas vezes imunizadas com a cepa RH contra desafio com bradizoítos e oocistos com as cepas Prugniaud e M-7741, mas a proteção com oocistos de M3 foi parcial (67%). As conclusões foram o hamster é um modelo promissor para o estudo da toxoplasmose congênita, uma vez que a infecção crônica antes da prenhez, com oocistos da cepa ME49, protegeram as ninhadas e a infecção aguda durante a prenhez, com a cepa Prugniaud, resultou em transmissão transplacentária. Houve transmissão lactogênica mas não foi confirmada sua importância epidemiológica com a metodologia empregada. O hamster também se mostrou promissor para o estudo da proteção contra T. gondii tendo em vista que a infecção com cepa RH conferiu proteção total (contra Prugniaud e M7741) ou parcial (contra M3) das ninhadas contra cepas heterólogas. / Nowadays there are no vaccines against human toxoplasmosis, but it has been developed animal models in rats and mice for immunologic assay against toxoplasmosis. However, these models have showed certain limitations. It is advisable to count on assays done in several animal species before pledging with expensive final vaccination assays, since several animal species differently answered to the same immunogens. The general objective of this work was to investigate the applicability of a hamster model for the study of immunity against congenital toxoplasmosis. The specific objectives were: to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the chronic phase of the infection; to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the acute phase of infection; to verify the occurrence of lactogenic transmission in the experimental trial which was proposed, and to question the protection against congenital toxoplasmosis given by the sterile immunity and by the means of premonition. The fulfillment of the objectives will enable the use of immunizations (with viable gondii Toxoplasma) in future studies, as well as, the knowledge of the efficacy about the challenges done in hamsters. It will also allow us to know whether the simplest immunogen available is enough to give protection against congenital toxoplasmosis. Regarding the immunity assay in the chronic phase of toxoplasmosis we were able to prove that it does not occur because 10 female hamsters inoculated with oocysts of ME- 49 strain before being coupled had negative offspring for anti-T. gondii antibodies. In the model of acute infection, 100% of females inoculated with 102 oocysts of Prugniaud strain during their gestation were positive and there were 60% of transplacental transmission for their offspring and 40% of transmammary transmission for foster offspring. Also, 100% of females inoculated with 103 oocysts of the same strain during the gestation time were positive and in their offspring there was 100% of transplacental transmission, and in 40% of their foster offspring there was transmammary transmission. In a third experiment, in females which were medicated and inoculated with RH strain there was a survival of 86.6% and the extinction of RH strain in 46.15% of the brains. In the model to test the protection with RH strain against oocysts of Toxoplasma gondii of heterologic strain, there was no transmission of congenital toxoplasmosis in 100% of mothers immunized with RH and challenged with Prugniaud and in 50% of mothers immunized with RH and challenged with M3. In this experiment, the heterologous challenge after the immunization with RH strain gave total protection (100%) in hamsters which were twice immunized with RH strain against challenge with bradyzoites and oocysts with Prugniaud and M-7741 strains, however, the protection with M3 oocysts was partial (67%). The conclusions were that the hamster is a promising model for the study of congenital toxoplasmosis, since chronic infection before pregnancy, with oocysts of ME49 strain protected their offspring and the acute infection during pregnancy, with Prugniaud strain, resulted in transplacental transmission. There was lactogenic transmission but it was not confirmed its epidemiologic importance with the methodology applied. Hamsters have also showed to be promising for the study of protection against T. gondii having in mind the infection with RH strain gave total protection (against Prugniaud and M7741) or partial (against M3) of offspring against heterologous strains.

Orientador: Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca: Sara Vilar Dantas Simões / Banca: Luiz Cláudio Nogueira Mendes / Resumo: O objetivo desse trabalho avaliar a ocorrência de mastite em cabras no período pós-parto e monitorar a qualidade colostral e a transferência de imunidade para cabritos que ingeriram colostro e leite de cabras portadoras de mastite. Foram coletadas amostras de secreções lácteas e sangue imediatamente após o parto, bem como às 24 e 48 horas após o parto/nascimento. O exame físico das glândulas mamárias e a avaliação macroscópica das secreções lácteas também foram realizados nesses momentos. A presença de mastite nesse período foi baixa (16,90%), e a forma mais prevalente foi à assintomática. Os Staphylococcus coagulase negativo (SCN) tiveram presentes na maioria dos isolamentos realizados (11/12). O exame físico das glândulas mamárias não revelou grandes alterações ao longo dos momentos avaliados, entretanto o teste de CMT (California Mastitis Test) mostrou-se eficaz para o diagnóstico das mastites assintomáticas no período pós-parto imediato. A contagem de células somáticas foi maior nos animais positivos à lactocultura quando comparados àqueles que tiveram resultado negativo à esse teste. Não houve diferença entre as concentrações de IgG no soro lácteo logo após a parição entre os animais com e sem mastite, entretanto os teores de lactoferrina e albumina estiveram aumentados nas secreções positivas no exame microbiológico em comparação às amostras sem isolamento. Os cabritos alimentados por colostro e leite de cabras, com e sem mastite, não apresentaram falha de transferência de imunidade. As demais frações proteicas avaliadas, não diferiram entre os cabritos alimentados com colostro e leite de cabras com e sem mastite ao longo do experimento. / Abstract: The objective of this work was in addition to avaluate the occurrence of mastitis in goats in the postpartum period as well as monitor the quality and colostral transfer of immunity to goats that ingested colostrum and milk of goats suffering from mastitis. Colostrum and blood samples were collected immediately after delivery, 24 and 48 hours after delivery / birth. Physical examination of the mammary glands and the macroscopic evaluation of mammary secretions were also performed at these times. The presence of mastitis in this period was low (16.90%), and the most prevalent form was asymptomatic. The coagulase negative staphylococcus (CNS) were present in most isolations performed (11/12). Physical examination of mammary glands revealed no major changes over the periods evaluated, however the test of CMT (California Mastitis Test) was effective for the diagnosis of asymptomatic mastitis in the immediate postpartum period. The somatic cell count was higher in the positive lactocultura animals when compared to those who had a negative result on this test. There was no difference between the concentrations of IgG in whey after calving between animals with and without mastitis, however the levels of lactoferrin and albumin were increased secretions in the positive microbiological examination compared to samples without isolation. The kids fed colostrum and milk of goats with and without mastitis, showed no failure of transfer of immunity, as evidenced by concentrations of IgG found. The other protein fractions evaluated, did not differ between goats fed or not fed colostrum and mastitic milk over the periods evaluated / Mestre

Orientador: Marcio Antonio Brunetto / Coorientador: Aulus Cavalieri Carciofi / Banca: Helio Jose Montassier / Banca: Ricardo Souza Vasconcellos / Resumo: Acredita-se que as frações ativas de mananoproteinas (FAM), obtidas a partir da extração e fracionamento da parede celular de leveduras (Saccharomyces cerevisiae) possam modular de forma benéfica o sistema imune. Este estudo avaliou os efeitos imunológicos das FAM em cães adultos e idosos. Foram empregadas três dietas extrusadas, isonutritivas com inclusão de 0% (T0); 0,04% (T400) e 0,08% de FAM (T800). No total, foram utilizados 36 cães da raça beagle. Os tratamentos resultaram da combinação de idade (adultos e idosos) e dieta (T0, T400 e T800), gerando seis tratamentos experimentais. Para cada dieta foram utilizados seis cães adultos (4,0±2,0 anos) e seis cães idosos (11,0±1,0 anos). O experimento seguiu delineamento em blocos, com três blocos de 12 cães (seis adultos e seis idosos, dois cães por idade e dieta). Nos dias zero, 14 e 28, amostras de sangue foram coletadas para fenotipagem dos leucócitos sanguíneos e ensaio de fagocitose. Nos dias zero e 28 foram realizados: hemogramas, análises bioquímicas, teste de linfoproliferação, produção de intermediários reativos do oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), avaliação da concentração de imunoglobulina A fecal e teste de hipersensibilidade cutânea tardia (DTH). Os dados foram submetidos à análise de variância com medidas repetidas no tempo, exceto o DTH, no qual se analisou separadamente cada tempo do período experimental. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey (p≤0,05). A FAM mostrou-se segura nos teores e períodos estudados. Aos 28 dias, cães adultos alimentados com a dieta T400 em relação à T0 apresentaram contagens mais elevadas de linfócitos totais (p<0,05). Ao analisar a fenotipagem dos leucócitos sanguíneos demonstrou-se que, mais especificamente, o consumo de 0,04% de FAM pelos cães adultos elevou a contagem de linfócitos T totais (p=0,05). Independente da idade, neutrófilos de cães alimentados com T400, em relação à dieta ... / Abstract: It is believed that the active fractions mananoproteínas (AFM), obtained from the extraction and fractionation of cell wall of yeast (Saccharomyces cerevisiae), may beneficially modulate the immune system. This study evaluated the immunological effects of FAM in adults or elderly dogs. Three extruded diets with isonutritives including 0% (T0); 0.04% (T400) and 0.08% of AFM (T800) were used. In total, 36 beagle dogs were used. The treatments resulted from the combination of age (adults and elderly) and diet (T0, T400 and T800), generating six experimental treatments. For each diet six adult dogs (4.0 ± 2.0 years) and six elderly dogs (11.0 ± 1.0 years) were used. The experiment was randomized complete block design with three blocks of 12 dogs (six older and six adults, two dogs by age and diet). At zero, 14 and 28 days, blood samples were collected for phenotyping of blood leukocytes and evaluation of phagocytic activity. In zero and 28 days, hemogram, biochemical analysis, lymphocyte proliferation, production of hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO), evaluation of the concentration of fecal immunoglobulin A and delayed test hypersensitivity (DTH) were performed. Data were subjected to analysis of variance with repeated measures, except DTH, in which we analyzed separately each time the trial period. Means were compared by Tukey test (p≤0.05). The AFM was safe in the levels and periods. At 28 days, adult dogs fed the diet T400 relative to T0 had higher counts of total lymphocytes (p<0.05). By analyzing the phenotype of the blood leucocytes was shown that, more specifically, adult dogs consuming 0.04% of the AFM increased the amount of total T-lymphocytes (p=0.05). Regardless of age, neutrophils from dogs fed T400, relative to T0 diet, tended to produce more H2O2 (p=0.09). Higher percentage of phagocytic activity of neutrophils were observed in adult dogs fed on T400 compared to the T800 diet (p<0.05). The skin response ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T19:18:36Z : No. of bitstreams: 1 cavalheiro_js_me_botfmvz.pdf: 256330 bytes, checksum: f23556a464c6107559d352bd6a674722 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A tuberculose bovina é uma doença transmissível de natureza granulomatosa crônica e caráter progressivo, apresentando tubérculos característicos, tendo como agente etiológico o Mycobacterium bovis - um patógeno intracelular. A imunidade celular é o mecanismo mais efetivo para o controle da infecção por Mycobacterium spp. Esta resposta resulta no acúmulo de fagócitos e na formação de lesão macroscópica (tubérculo ou granuloma tuberculoso), na tentativa de impedir a proliferação e disseminação bacteriana. Neste trabalho foram utilizados modelos experimentais murinos, obtidos por seleção genética bidirecional de camundongos bons (High=H) e maus (Low=L) produtores de anticorpos (Seleção IVA) contra antígenos naturais complexos. Trabalhos anteriores demonstraram alterações funcionais de células imunocompetentes, particularmente de macrófagos, sugerindo que os animais HIV-A seriam mais susceptíveis à infecção causada por patógenos intracelulares, enquanto que ocorreria maior susceptibilidade dos LIV-A à infecção por patógenos extracelulares, quando a imunidade humoral seria o mecanismo mais importante... . / The bovine tuberculosis is a transmissible disease, showing a chronic and progressive character, with typic tubercles. Its etiological agent, Mycobacterium bovis, is an intracellular pathogen. Cell-mediated immunity is the most effective mechanism for this infection control, with phagocytes accumulum and formation of a macroscopic lesion, aiming to avoid the bacteria proliferation and dissemination. In this work, a murine experimental model was used, with mice genetically selected for high (H) and low (L) antibody production (Selection IV-A). Previous works related functional alterations in immunecompetent cells, manily macrophages, suggesting that HIV-A mice were more susceptible to intracellular pathogens, whereas LIV-A were more susceptible to extracellular ones, when humoral-mediated immunity would be the most important mechanism. The goal of this work was to evaluate the macrophagic activity and to characterize the immune response of Mycobacterium bovis-AN5-infected mice. The response prolife previously observed in these strains was not similar in the Mycobacterium bovis infection; however, it was in agreement with works carried out with selection I, which is very similar the selection IV-A with regards to infection with Mycobacterium tuberculosis and Bacillus Calmette-Guérin. As to the bacterial recovery, LIV-A selection showed a higher containnment of the infectious process in the lung, but not in the spleen, where HIV-A selection was more resistant. With respect the macrophagic activity, H2O2 seemed to be not involved in the containment of the infection in both strains, since there was an inibition of this metabolite generation. NO and TNF- production was also analysed, and seemed to be important in the control of bacterial replication, varying according to the strain, time period and compartiment. Antibody production was also evaluated... (Complete abstract, click electronic address below).

Atualmente não se dispõe de vacinas contra a toxoplasmose humana, mas têm-se desenvolvido modelos animais em ratas e camundongos para o ensaio imunológico contra a toxoplasmose. No entanto, estes modelos têm mostrado certas limitações. É aconselhável contar com ensaios efetuados em diversas espécies animais antes de comprometer-se com custosos ensaios finais de vacinação, já que as diversas espécies animais, respondem diferentemente frente aos mesmos imunógenos. O objetivo geral do presente trabalho foi então, indagar a aplicabilidade de um modelo hamster para o estudo da imunidade contra a toxoplasmose congênita. Os objetivod específicos foram: verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio crônico da infecção; verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio agudo da infecção; verificar a ocorrência da transmissão lactogênica no desenho experimental proposto, e questionar a proteção contra a toxoplasmose congênita, conferida pela imunidade estéril e mediante a premunição. O cumprimento dos objetivos possibilitará o uso de imunizações (com Toxoplasma gondii viável) em futuros estudos, assim como conhecer a eficácia dos desafios efetuados em hamster, e também permitirá conhecer se o imunógeno mais simples disponível é suficiente para conferir proteção contra a toxoplasmose congênita. Quanto ao ensaio da imunidade na fase crônica da toxoplasmose foi possível comprovar nas condições deste experimento que ela não ocorre, pois as 10 fêmeas hamster inoculadas com 40 oocistos da cepa ME-49 antes de serem acasaladas, tiveram filhotes negativos para anticorpos anti-T.gondii. No modelo de infecção aguda, 100% das fêmeas inoculadas com 102 oocistos da cepa Prugniaud durante a gestação foram positivas, e houve 60% de transmissão transplacentária para seus filhotes e 40% de transmissão transmamária para filhotes adotados. Também, 100% das fêmeas inoculadas com 103 oocistos da mesma cepa durante a gestação foram positivas e nos seus filhotes ocorreram 100% de transmissão transplacentária, e em 40% dos filhotes adotados houve transmissão transmamária. Num terceiro experimento, em fêmeas inoculadas com a cepa RH e medicadas houve sobrevivência de 86,6% e a extinção da cepa RH em 46,15% dos cérebros. No modelo para testar a proteção com cepa RH contra oocistos de T. gondii de cepa heteróloga, não houve transmissão de toxoplasmose congênita em 100% das mães imunizadas com RH e desafiadas com Prugniaud e em 50% das mães imunizadas com RH e desafiadas com M3. O desafio heterólogo após imunização com a cepa RH, nesse experimento conferiu total proteção (100%) em hamsters duas vezes imunizadas com a cepa RH contra desafio com bradizoítos e oocistos com as cepas Prugniaud e M-7741, mas a proteção com oocistos de M3 foi parcial (67%). As conclusões foram o hamster é um modelo promissor para o estudo da toxoplasmose congênita, uma vez que a infecção crônica antes da prenhez, com oocistos da cepa ME49, protegeram as ninhadas e a infecção aguda durante a prenhez, com a cepa Prugniaud, resultou em transmissão transplacentária. Houve transmissão lactogênica mas não foi confirmada sua importância epidemiológica com a metodologia empregada. O hamster também se mostrou promissor para o estudo da proteção contra T. gondii tendo em vista que a infecção com cepa RH conferiu proteção total (contra Prugniaud e M7741) ou parcial (contra M3) das ninhadas contra cepas heterólogas. / Nowadays there are no vaccines against human toxoplasmosis, but it has been developed animal models in rats and mice for immunologic assay against toxoplasmosis. However, these models have showed certain limitations. It is advisable to count on assays done in several animal species before pledging with expensive final vaccination assays, since several animal species differently answered to the same immunogens. The general objective of this work was to investigate the applicability of a hamster model for the study of immunity against congenital toxoplasmosis. The specific objectives were: to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the chronic phase of the infection; to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the acute phase of infection; to verify the occurrence of lactogenic transmission in the experimental trial which was proposed, and to question the protection against congenital toxoplasmosis given by the sterile immunity and by the means of premonition. The fulfillment of the objectives will enable the use of immunizations (with viable gondii Toxoplasma) in future studies, as well as, the knowledge of the efficacy about the challenges done in hamsters. It will also allow us to know whether the simplest immunogen available is enough to give protection against congenital toxoplasmosis. Regarding the immunity assay in the chronic phase of toxoplasmosis we were able to prove that it does not occur because 10 female hamsters inoculated with oocysts of ME- 49 strain before being coupled had negative offspring for anti-T. gondii antibodies. In the model of acute infection, 100% of females inoculated with 102 oocysts of Prugniaud strain during their gestation were positive and there were 60% of transplacental transmission for their offspring and 40% of transmammary transmission for foster offspring. Also, 100% of females inoculated with 103 oocysts of the same strain during the gestation time were positive and in their offspring there was 100% of transplacental transmission, and in 40% of their foster offspring there was transmammary transmission. In a third experiment, in females which were medicated and inoculated with RH strain there was a survival of 86.6% and the extinction of RH strain in 46.15% of the brains. In the model to test the protection with RH strain against oocysts of Toxoplasma gondii of heterologic strain, there was no transmission of congenital toxoplasmosis in 100% of mothers immunized with RH and challenged with Prugniaud and in 50% of mothers immunized with RH and challenged with M3. In this experiment, the heterologous challenge after the immunization with RH strain gave total protection (100%) in hamsters which were twice immunized with RH strain against challenge with bradyzoites and oocysts with Prugniaud and M-7741 strains, however, the protection with M3 oocysts was partial (67%). The conclusions were that the hamster is a promising model for the study of congenital toxoplasmosis, since chronic infection before pregnancy, with oocysts of ME49 strain protected their offspring and the acute infection during pregnancy, with Prugniaud strain, resulted in transplacental transmission. There was lactogenic transmission but it was not confirmed its epidemiologic importance with the methodology applied. Hamsters have also showed to be promising for the study of protection against T. gondii having in mind the infection with RH strain gave total protection (against Prugniaud and M7741) or partial (against M3) of offspring against heterologous strains.

Vacinas inativadas de vírus inteiro (WIV) são amplamente utilizadas para o controle de influenza A em suínos (SIV) nos Estados Unidos e Europa e conferem proteção contra cepas homólogas à vacina reduzindo a doença clínica. Porém, a proteção da WIV pode ser limitada contra um desafio heterólogo. O aumento da doença respiratória associado à vacina (VAERD) foi descrito em suínos vacinados com uma WIV contendo uma cepa δ1-cluster-H1N2 e desafiado com uma cepa heteróloga contendo a mesma hemaglutinina, H1N1pdm09. Nesse contexto, os suínos apresentaram pneumonia severa com aumento das lesões pulmonares associado ao uso da WIV. No primeiro manuscrito foi avaliado se a formulação da WIV, o tempo entre o reforço vacinal e o desafio, e a idade de vacinação tinham impacto em VAERD. Suínos foram vacinados com duas vacinas bivalentes, WIV-δ1H1N2/H3N2 (MN08-TX98) ou WIV-δ1H1N2/H1N1pdm09 (MN08-CA09), administradas em duas doses com intervalo de três semanas, e desfiados com H1N1pdm09, três semanas após o reforço. Além disso, dois grupos foram vacinados com uma WIV-δ1H1N2 (MN08) e desafiados três ou seis semanas após o reforço. Em um estudo subsequente, dois grupos vacinados com uma WIV-δ1H1N2 com duas doses da vacina em diferentes idades: a primeira dose com 4 ou 9 semanas de idade e o reforço com 7 ou 12 semanas de idade. E um grupo vacinado com uma vacina viva atenuada de influenza (LAIV). Os animais foram desafiados com H1N1pdm09 às 15 semanas de idade. Com exceção dos grupos MN08-CA09, LAIV e controles, todos os grupos WIV apresentaram lesões pulmonares consistentes com VAERD. Nenhum grupo induziu anticorpos neutralizantes para o H1N1pdm09, exceto MN08-CA09. No entanto, grupos vacinados com a WIV-MN08 em diferentes idades induziram anticorpos IgG não-neutralizantes com reatividade cruzada com o H1N1pdm09 no soro e no pulmão, comparado com LAIV e controles. Esses dados sugerem que a idade da primeira dose da vacina, a formulação com a vacina bivalente MN08-TX98 e o desafio seis semanas após o reforço vacinal, não preveniram o desenvolvimento de VAERD. Em contraste, a vacinação com a LAIV demonstrou proteção até oito semanas após reforço. No segundo manuscrito foi avaliado o impacto dos adjuvantes na formulação da WIV no modelo de VAERD. Cinco grupos foram vacinados com WIV-δ1H1N2 formuladas com diferentes adjuvantes comerciais: óleo em água 1 (OW1), OW2, nano-emulsão (NE), gel polímero (GP) e partículas imuno-estimulantes aquosa (IMP). O protocolo vacinal/desafio foi utilizado com três semanas de intervalo entre as doses. Os grupos vacinados com WIV-OW apresentaram lesões macroscópicas nos pulmões consistentes com VAERD comparado com WIV-NE, WIV-GP e controles. Nenhum dos grupos induziu anticorpos neutralizantes contra o vírus do desafio (H1N1pdm09). Similarmente, os grupos WIV-OW, WIV-NE e WIV-GP induziram anticorpos não neutralizantes IgG de reatividade cruzada contra o H1N1pdm09 no soro e pulmão. Apesar dos anticorpos não neutralizantes com reatividade cruzada nos grupos WIV-NE e WIV-GP, não apresentaram lesões pulmonares tão severas como os grupos OW. Além disso, os adjuvantes tiveram um papel significativo na imunogenicidade da WIV e no desenvolvimento de VAERD. / Whole inactivated virus (WIV) vaccines reduce clinical disease against homologous influenza A virus (IAV) infection and are widely used in swine; however, WIV has been associated with vaccine-associated enhanced respiratory disease (VAERD) when challenged with heterologous IAV of the same hemagglutinin subtype. Here, we evaluated the impact of age at vaccination and timing between vaccination and challenge on development of VAERD using a model with a human-like 1δ cluster swine MN08 H1N2 as the vaccine component and pandemic H1N1 (H1N1pdm09) virus as the challenge strain. Pigs were vaccinated with bivalent WIV vaccine containing H1N2-MN08/H3N2-TX98 or H1N2-MN08/H1N1pdm09-CA09. All groups were challenged with H1N1pdm09 at 3 weeks post-boost (wpb). In addition, a monovalent WIV MN08 H1N2 group was challenged at 6 wpb to determine if time post-vaccination played a role on VAERD. In a follow up study, we compared the time of first WIV vaccination (4 or 9 weeks of age) and the boost three weeks later (7 or 12 weeks of age) to determine if age at first vaccination or if 8 weeks duration between vaccination and challenge impacted VAERD. A live-attenuated influenza virus (LAIV) vaccine administered at 4 and 7 weeks of age was also included. Pigs from study 2 were challenged with H1N1pdm09 at 15 weeks of age. All mismatched WIV groups had significantly higher macroscopic and microscopic lung lesions compared with LAIV, bivalent MN08-CA09 and non-vaccinated challenge controls. These data suggest that the age of first vaccination or length of time between booster dose and subsequent challenge do not alter the development VAERD in WIV vaccinated pigs. In the second paper, we evaluated the impact of adjuvant in WIV vaccine on VAERD-affected pigs. Pigs were vaccinated with WIV containing swine MN08/H1N2 that were formulated with five different commercially available adjuvants: OW1, OW2, nano-emulsion (NE), gel polymer (GP), and aqueous immunostimulating particulate (IMP). Pigs were vaccinated with 2 doses, 3 weeks apart, by the intramuscular (WIV-OW1, -OW2, -NE, and -GP) or intranasal (WIV-IMP) routes. Non-vaccinated and challenged pigs (NV/C) and non-vaccinated, non-challenged pigs (NV/NC) were included as controls. Following challenge with H1N1pdm09, WIV-OW1 and WIV-OW2 groups had significantly higher percentages of macroscopic lung lesions consistent with VAERD compared to the NV/C controls, and in contrast to WIV-NE, WIV-GP and WIV-IMP. Prior to challenge, WIV-OW, NE and GP groups had the hemagglutination inhibition antibody (HI) titers to the vaccine strain compared with controls. The WIV-IMP group had HI mean titers below the positive cut-off, with no response to any immune parameter measured, so it could not be implicated or excluded in the VAERD model. None of the groups had cross-reactive HI antibodies against the H1N1pdm09. WIV-OW groups had significantly higher levels of IgG antibody in serum against homologous and heterologous virus; however, the WIV-NE and WIV-GP groups also had serum IgG antibody against both viruses, so presence of total virus IgG alone did not explain the different VAERD outcomes. Adjuvant played a significant role in WIV immunogenicity and in VAERD; however the mechanism requires further investigation.

A transfecção gênica tem sido eficientemente realizada a partir de diferentes formulações de lipídios catiônicos e neutros. Este trabalho teve como objetivo verificar a viabilidade de uma teoria que propõem utilizar moléculas anfifílicas como neutralizadoras da carga do DNA para a transfecção gênica in vitro. Foram realizadas transfecções utilizando o surfactante brometo de dodeciltrimetil amônio (DOTAB) ou o lipídio catiônico brometo de dimetildioctadecil amônio (DDAB) com o pCH110 (plasmídeo que expressa a enzima β-galactosidase) nas formas linear e circular. Em paralelo, foram realizadas transfecções com Lipofectamine (lipossomo formado por DOSPA e DOPE) com o mesmo plasmídeo. O DDAB, que é mais hidrofóbico, apresentou-se mais eficiente e menos tóxico que o DOTAB. O DDAB transfectou com semelhante eficiência o pCH110 circular e linear em células de linhagem VERO, diferente de Lipofectamine que não transfectou o pCH110 linear na quantidade utilizada para o circular. Foi necessário utilizar Lipofectamine em um volume cinco vezes superior para formar o complexo com o DNA linear em relação ao plasmídeo circular. Através da eletroforese em gel de agarose, verificou-se que o DDAB não alterou a estrutura dos plasmídeos linear e circular na proporção em que foram utilizados para transfectar. Na Microscopia de Força Atômica, verificou-se diferentes estruturas formadas entre o DDAB e o plasmídeo circular, onde predominaram esferas de 50-100 nm, sendo possivelmente DNA na forma toroidal. Embora não tenha sido identificado o mecanismo de transfecção, este sistema mostrou-se simples, econômico e eficiente para transfectar células de linhagem, utilizando-se tanto plasmídeo linear como circular.

Vacinas inativadas de vírus inteiro (WIV) são amplamente utilizadas para o controle de influenza A em suínos (SIV) nos Estados Unidos e Europa e conferem proteção contra cepas homólogas à vacina reduzindo a doença clínica. Porém, a proteção da WIV pode ser limitada contra um desafio heterólogo. O aumento da doença respiratória associado à vacina (VAERD) foi descrito em suínos vacinados com uma WIV contendo uma cepa δ1-cluster-H1N2 e desafiado com uma cepa heteróloga contendo a mesma hemaglutinina, H1N1pdm09. Nesse contexto, os suínos apresentaram pneumonia severa com aumento das lesões pulmonares associado ao uso da WIV. No primeiro manuscrito foi avaliado se a formulação da WIV, o tempo entre o reforço vacinal e o desafio, e a idade de vacinação tinham impacto em VAERD. Suínos foram vacinados com duas vacinas bivalentes, WIV-δ1H1N2/H3N2 (MN08-TX98) ou WIV-δ1H1N2/H1N1pdm09 (MN08-CA09), administradas em duas doses com intervalo de três semanas, e desfiados com H1N1pdm09, três semanas após o reforço. Além disso, dois grupos foram vacinados com uma WIV-δ1H1N2 (MN08) e desafiados três ou seis semanas após o reforço. Em um estudo subsequente, dois grupos vacinados com uma WIV-δ1H1N2 com duas doses da vacina em diferentes idades: a primeira dose com 4 ou 9 semanas de idade e o reforço com 7 ou 12 semanas de idade. E um grupo vacinado com uma vacina viva atenuada de influenza (LAIV). Os animais foram desafiados com H1N1pdm09 às 15 semanas de idade. Com exceção dos grupos MN08-CA09, LAIV e controles, todos os grupos WIV apresentaram lesões pulmonares consistentes com VAERD. Nenhum grupo induziu anticorpos neutralizantes para o H1N1pdm09, exceto MN08-CA09. No entanto, grupos vacinados com a WIV-MN08 em diferentes idades induziram anticorpos IgG não-neutralizantes com reatividade cruzada com o H1N1pdm09 no soro e no pulmão, comparado com LAIV e controles. Esses dados sugerem que a idade da primeira dose da vacina, a formulação com a vacina bivalente MN08-TX98 e o desafio seis semanas após o reforço vacinal, não preveniram o desenvolvimento de VAERD. Em contraste, a vacinação com a LAIV demonstrou proteção até oito semanas após reforço. No segundo manuscrito foi avaliado o impacto dos adjuvantes na formulação da WIV no modelo de VAERD. Cinco grupos foram vacinados com WIV-δ1H1N2 formuladas com diferentes adjuvantes comerciais: óleo em água 1 (OW1), OW2, nano-emulsão (NE), gel polímero (GP) e partículas imuno-estimulantes aquosa (IMP). O protocolo vacinal/desafio foi utilizado com três semanas de intervalo entre as doses. Os grupos vacinados com WIV-OW apresentaram lesões macroscópicas nos pulmões consistentes com VAERD comparado com WIV-NE, WIV-GP e controles. Nenhum dos grupos induziu anticorpos neutralizantes contra o vírus do desafio (H1N1pdm09). Similarmente, os grupos WIV-OW, WIV-NE e WIV-GP induziram anticorpos não neutralizantes IgG de reatividade cruzada contra o H1N1pdm09 no soro e pulmão. Apesar dos anticorpos não neutralizantes com reatividade cruzada nos grupos WIV-NE e WIV-GP, não apresentaram lesões pulmonares tão severas como os grupos OW. Além disso, os adjuvantes tiveram um papel significativo na imunogenicidade da WIV e no desenvolvimento de VAERD. / Whole inactivated virus (WIV) vaccines reduce clinical disease against homologous influenza A virus (IAV) infection and are widely used in swine; however, WIV has been associated with vaccine-associated enhanced respiratory disease (VAERD) when challenged with heterologous IAV of the same hemagglutinin subtype. Here, we evaluated the impact of age at vaccination and timing between vaccination and challenge on development of VAERD using a model with a human-like 1δ cluster swine MN08 H1N2 as the vaccine component and pandemic H1N1 (H1N1pdm09) virus as the challenge strain. Pigs were vaccinated with bivalent WIV vaccine containing H1N2-MN08/H3N2-TX98 or H1N2-MN08/H1N1pdm09-CA09. All groups were challenged with H1N1pdm09 at 3 weeks post-boost (wpb). In addition, a monovalent WIV MN08 H1N2 group was challenged at 6 wpb to determine if time post-vaccination played a role on VAERD. In a follow up study, we compared the time of first WIV vaccination (4 or 9 weeks of age) and the boost three weeks later (7 or 12 weeks of age) to determine if age at first vaccination or if 8 weeks duration between vaccination and challenge impacted VAERD. A live-attenuated influenza virus (LAIV) vaccine administered at 4 and 7 weeks of age was also included. Pigs from study 2 were challenged with H1N1pdm09 at 15 weeks of age. All mismatched WIV groups had significantly higher macroscopic and microscopic lung lesions compared with LAIV, bivalent MN08-CA09 and non-vaccinated challenge controls. These data suggest that the age of first vaccination or length of time between booster dose and subsequent challenge do not alter the development VAERD in WIV vaccinated pigs. In the second paper, we evaluated the impact of adjuvant in WIV vaccine on VAERD-affected pigs. Pigs were vaccinated with WIV containing swine MN08/H1N2 that were formulated with five different commercially available adjuvants: OW1, OW2, nano-emulsion (NE), gel polymer (GP), and aqueous immunostimulating particulate (IMP). Pigs were vaccinated with 2 doses, 3 weeks apart, by the intramuscular (WIV-OW1, -OW2, -NE, and -GP) or intranasal (WIV-IMP) routes. Non-vaccinated and challenged pigs (NV/C) and non-vaccinated, non-challenged pigs (NV/NC) were included as controls. Following challenge with H1N1pdm09, WIV-OW1 and WIV-OW2 groups had significantly higher percentages of macroscopic lung lesions consistent with VAERD compared to the NV/C controls, and in contrast to WIV-NE, WIV-GP and WIV-IMP. Prior to challenge, WIV-OW, NE and GP groups had the hemagglutination inhibition antibody (HI) titers to the vaccine strain compared with controls. The WIV-IMP group had HI mean titers below the positive cut-off, with no response to any immune parameter measured, so it could not be implicated or excluded in the VAERD model. None of the groups had cross-reactive HI antibodies against the H1N1pdm09. WIV-OW groups had significantly higher levels of IgG antibody in serum against homologous and heterologous virus; however, the WIV-NE and WIV-GP groups also had serum IgG antibody against both viruses, so presence of total virus IgG alone did not explain the different VAERD outcomes. Adjuvant played a significant role in WIV immunogenicity and in VAERD; however the mechanism requires further investigation.