Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-24Bitstream added on 2015-04-09T12:47:20Z : No. of bitstreams: 1 000817158.pdf: 763287 bytes, checksum: 5fbb2889f17a91f70839a5d61580be7f (MD5) / Mananoligossacarídeo na alimentação pode melhorar a imunidade, crescimento e saúde de peixes cultivados. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de níveis de MOS (0,0 g Kg-1; 2,0 g kg-1; 4,0 g kg-1; 8,0 g kg-1; 10,0 g kg-1; 15,0 g kg-1) na dieta de tilápia-do-Nilo sobre os parâmetros hematológicos e imunológicos, desempenho produtivo, digestibilidade de proteína e resistência à bactéria L. garvieae, após 45 dias. 576 tilápias (127,3±4,79 g e 18,7±0,27 cm), distribuídas em 24 caixas (310 L) com aeração e renovação constante de água (6 tratamentos e 4 repetições) foram alimentadas com as dietas-teste extrusadas. Aos 0, 7, 15, 30 e 45 dias após a alimentação, foi coletado sangue, destinado à realização de análises hematológicas e imunológicas. O consumo das dietas foi registrado semanalmente e aos 45 dias, os peixes foram pesados e medidos para obtenção de parâmetros de desempenho. Após 45 dias, as mesmas dietas, acrescidas de marcador e peletizadas foram oferecidas aos peixes e as fezes coletadas para determinar o coeficiente de digestibilidade de proteína. Nas mesmas condições, com 168 tilápias (125,3±5,09 g e 17,6±0,33 cm) e após 7, 15, 30 e 45 dias de alimentação realizaram-se desafios por co-habitação com L. garvieae, avaliando-se a taxa de mortalidade, durante 15 dias. Os grupos alimentados com o prebiótico não apresentaram melhora significativa em relação ao grupo controle nas variáveis imunológicas, hematológicas e digestibilidade de proteína. O mesmo ocorreu com o desafio bacteriano. Entretanto, a inclusão de 2,0, 4,0 e 8,0 g Kg-1 de MOS na dieta melhorou os valores de ganho de pesos dos animais. Como conclusão, a inclusão de MOS não afetou a hematologia, imunidade, digestibilidade de proteína e resistência bacteriana. Mas, a inclusão de 2,0, 4,0 e 8,0 g Kg-1 do prebiótico na dieta melhorou o ganho de peso da tilápia-do-Nilo / Manann oligosaccharide in feed can improve immunity, growth and health of farmed fish. Thus, the objective of this study was evaluate the influence of MOS levels (0.0 g Kg-1; 2.0 g kg-1; 4.0 g kg-1; 8.0 g kg-1; 10.0 g kg-1; 15.0 g kg-1) in the diet of Nile Tilapia in hematological and immunological parameters, production performance, digestibility of protein and resisting bacteria L. garvieae, after 45 days. 576 tilapias (127.3 ± 4.79 g and 18.7 ± 0.27 cm), distributed in 24 fiberglass tank (310 L) with aeration and constant renewal of water (6 treatments and 4 replications) it was fed with diets-extruded test. In time 0, 7, 15, 30 and 45 days after feeding, it was collected blood for hematological and immunological analyses. The consumption of diets was registered weekly and in the period 45 days the fish was weighed and measured to obtain performance parameters. After 45 days, the same diets, added marker and pelletized, were offered to fish and the faeces was collected to determine protein digestibility coefficient. Under the same conditions, with 168 Nile tilapia (125.3 ± 5.09 g and 0.33 ± 17.6 cm) and after 7, 15, 30 and 45 days it was made challenges by cohabitation with L. garvieae, evaluating the mortality rate during 15 days. The groups fed with prebiotic didn't show significant improvement as compared to the control group on variables, immunological, hematological and protein digestibility. The same occurred with the bacterial challenge. However, the inclusion of 2.0, 4.0 and 8.0 g Kg-1 of MOS in the diet improved the gain of weight of animals. As a conclusion, the inclusion of MOS not affected the hematology, immunity, protein digestibility and bacterial resistance. But, the inclusion of 2.0, 4.0 and 8.0 g Kg-1 of the prebiotic on diet improved weight gain of Nile tilapia

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-13. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:46:54Z : No. of bitstreams: 1 000830316.pdf: 480896 bytes, checksum: a5e41f1e33eaed9c3e07df80b06f7e3a (MD5) / Este trabalho está dividido em três artigos no formato para a submissão e publicação. No primeiro, testamos níveis de carboidratos (CHO) associados ao jejum e realimentação como estratégia de induzir as vias catabólicas e anabólicas dos diferentes nutrientes e auxiliar no entendimento da intolerância dos peixes aos CHOs; no segundo, avaliamos o uso da amônia sérica como indicador de dietas desbalanceadas; e, ainda, no terceiro artigo avaliamos como o jejum afeta a imunidade e a estratégia metabólica adotada pelos peixes para sustentar a resposta imune em condições de déficit energético. Os resultados indicam que o pacu pode tolerar altos níveis de CHO, uma vez que os valores de glicemia e glicogênio hepático foram semelhantes entre os peixes que ingeriram 25 e 45% CHO, além de suportar longos períodos de jejum (30 dias), sem comprometer a capacidade de resposta de ganho em peso. Entretanto, 25% CHO resultou em menor acúmulo de lipídeo visceral, associado com maior lipólise (mais ácidos graxos livres circulantes) e menores níveis de triglicerídeo e colesterol circulantes após 30 dias de alimentação. Após 30 dias de jejum, os peixes consumiram as reservas energéticas avaliadas, mas após um dia de re-alimentação, apenas as reservas de glicogênio e os níveis circulantes de triglicerídeo e colesterol normalizaram, enquanto as reservas lipídicas teciduais foram restauradas ao final dos 30 dias de realimentação. As atividades da hexoquinase (HK), glicoquinase (GK), glicose 6-fosfato desidrogenase (G6PDH) e aspartato aminotransferase (AST) acompanharam o perfil das variáveis metabólicas, reforçando que o pacu é capaz de usar altos níveis de CHO e ajustar seu metabolismo para suportar longos períodos de jejum. Como foram utilizadas duas dietas, uma balanceada em proteína e energia (45% CHO), e outra desbalanceada (25% CHO), testamos a determinação da concentração da amônia plasmática para validar ... / This study is divided in three papers formatted to be submitted and publishing. In the first one, we tested carbohydrate (CHO) levels associated to fasting and refeeding as strategy to induce catabolic and anabolic pathways of different nutrients and assist in understanding of CHO intolerance in fish; in the second, we evaluated the serum ammonia as indicator of unbalanced diets utilization; and also, in a third paper, we evaluated how fasting affect the fish immunity and the metabolic strategies adopted by fish to sustain the immune response under energy deficit conditions. The results indicate pacu use efficiently high CHO levels, once values of blood glucose and liver glycogen were similar between fish fed with 25 and 45% CHO, besides this, pacu tolerates long-term fasting (30 days), without compromise the ability of weight gain response. However, 25% CHO resulted in lower mesenteric fat accumulation and higher lipolysis (more current non-esterified fatty acids) and lower levels of triglycerides and cholesterol after 30 days feeding. After 30 days fasting, fish consumed the evaluated energy reserves, but after one day re-feeding, only reserves of liver glycogen, triglycerides and cholesterol normalized, while the tissue lipid reserves were reestablished at the end of 30 days re-feeding. The hexokinase (HK), glucokinase (GK), glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) and aspartate aminotransferase (AST) follow the metabolic variables profile, reinforcing that pacu is able to use high CHO levels and adjust their metabolism to tolerate long-term fasting. As we used two diets with different protein/energy ratio, we tested the serum ammonia determination to validate the use of this parameter as indicator of unbalanced diets utilization in pacu. The AST activity was used to prove the occurrence of protein catabolism after feeding fish during 30 days with both diets. At the end of period, we observed increasing in serum ammonia and AST ...

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:30Z : No. of bitstreams: 1 000834841.pdf: 1067389 bytes, checksum: 7e8cce7866a293f952884030f830b2f2 (MD5) / A Leishmaniose visceral (LV) no Brasil representa um grave problema de saúde pública; portanto, é importante estudar novas alternativas para o tratamento de cães infectados. O imunomodulador agregado de magnésio-amônio fosfolinoleato-palmitoleato anidrido proteína (P-MAPA) melhora a imunocompetência quando o sistema imunológico está comprometido, mas sua dependência de receptores Toll-like (TLRs) e os mecanismos envolvidos na resposta imune ainda não estão claros. Estudou-se a ação in vitro de P-MAPA sobre a expressão de TLR2 e TLR4, espécies reativas de oxigénio (ROS), óxido nítrico (NO) e p38 ativada por mitógeno proteína quinase (p38MAPK) e fosforilação de IKK em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e macrófagos de cães saudáveis e infectados. O PBMC ou macrófagos foram isolados e cultivados com diferentes concentrações de P-MAPA (20,100 e 200 μg/mL) em uma atmosfera húmida, a 37°C com 5% de CO2. A observação revelou que nos macrófagos de cães infectados com Leishmania sp. mostraram uma diminuição em TLR2 em comparação com cães saudáveis e em indução com P-MAPA. ROS foram aumentados em PBMC de cães infectados com Leishmania sp. em comparação com cães saudáveis e P-MAPA melhorou a produção de ROS. A produção de NO foi aumentada no sobrenadante da cultura a partir de macrófagos estimulados por P-MAPA em ambos os grupos de cães saudáveis e infectados com Leishmania sp. O tratamento de macrófagos de cães saudáveis com imunomodulador P-MAPA induziu p38 MAPK e fosforilação de IKK, sugerindo a transdução de sinal por esta via. Estas descobertas sugerem que a P-MAPA tem potencial como uma droga terapêutica no tratamento de leishmaniose visceral canina / Visceral leishmaniasis (VL) in Brazil represents a serious public health problem; therefore, it is important to study new alternatives to treat infected dogs. The immunomodulator protein aggregate magnesium-ammonium phospholinoleate-palmitoleate anhydride (P-MAPA) improves immunocompetence when the immune system is impaired, but its dependence on Toll-like receptors (TLRs) and the mechanisms involved in the immune response remain unclear. The in vitro action of P-MAPA on the expression of TLR2 and TLR4, reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO) and p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and IKK phosphorylation were studied in mononuclear cells from peripheral blood and macrophages from healthy and Leishmania-infected dogs. The PBMC or macrophages were isolated and cultured with different concentrations of P-MAPA (20,100 and 200 μg/mL) in a humid environment at 37°C with 5% CO2. Observation revealed that Leishmania-infected dogs showed a decrease in TLR2 in macrophages compared with healthy dogs and in induction with P-MAPA. ROS were increased in PBMCs from Leishmania sp.-infected dogs compared with healthy dogs and P-MAPA improved ROS production. NO production was increased in culture supernatant from macrophages stimulated by P-MAPA in both healthy and Leishmania-infected dogs. Treatment of macrophages from healthy dogs with immunomodulatory P-MAPA induced p38 MAPK and IKK phosphorylation, suggesting signal transduction by this pathway. These findings suggest that P-MAPA has potential as a therapeutic drug in the treatment of canine visceral leishmaniasis

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-04. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:28Z : No. of bitstreams: 1 000836392.pdf: 752785 bytes, checksum: f467ff6135ad2af6a39361f9faa29c0f (MD5) / O objetivo desse trabalho avaliar a ocorrência de mastite em cabras no período pós-parto e monitorar a qualidade colostral e a transferência de imunidade para cabritos que ingeriram colostro e leite de cabras portadoras de mastite. Foram coletadas amostras de secreções lácteas e sangue imediatamente após o parto, bem como às 24 e 48 horas após o parto/nascimento. O exame físico das glândulas mamárias e a avaliação macroscópica das secreções lácteas também foram realizados nesses momentos. A presença de mastite nesse período foi baixa (16,90%), e a forma mais prevalente foi à assintomática. Os Staphylococcus coagulase negativo (SCN) tiveram presentes na maioria dos isolamentos realizados (11/12). O exame físico das glândulas mamárias não revelou grandes alterações ao longo dos momentos avaliados, entretanto o teste de CMT (California Mastitis Test) mostrou-se eficaz para o diagnóstico das mastites assintomáticas no período pós-parto imediato. A contagem de células somáticas foi maior nos animais positivos à lactocultura quando comparados àqueles que tiveram resultado negativo à esse teste. Não houve diferença entre as concentrações de IgG no soro lácteo logo após a parição entre os animais com e sem mastite, entretanto os teores de lactoferrina e albumina estiveram aumentados nas secreções positivas no exame microbiológico em comparação às amostras sem isolamento. Os cabritos alimentados por colostro e leite de cabras, com e sem mastite, não apresentaram falha de transferência de imunidade. As demais frações proteicas avaliadas, não diferiram entre os cabritos alimentados com colostro e leite de cabras com e sem mastite ao longo do experimento. / The objective of this work was in addition to avaluate the occurrence of mastitis in goats in the postpartum period as well as monitor the quality and colostral transfer of immunity to goats that ingested colostrum and milk of goats suffering from mastitis. Colostrum and blood samples were collected immediately after delivery, 24 and 48 hours after delivery / birth. Physical examination of the mammary glands and the macroscopic evaluation of mammary secretions were also performed at these times. The presence of mastitis in this period was low (16.90%), and the most prevalent form was asymptomatic. The coagulase negative staphylococcus (CNS) were present in most isolations performed (11/12). Physical examination of mammary glands revealed no major changes over the periods evaluated, however the test of CMT (California Mastitis Test) was effective for the diagnosis of asymptomatic mastitis in the immediate postpartum period. The somatic cell count was higher in the positive lactocultura animals when compared to those who had a negative result on this test. There was no difference between the concentrations of IgG in whey after calving between animals with and without mastitis, however the levels of lactoferrin and albumin were increased secretions in the positive microbiological examination compared to samples without isolation. The kids fed colostrum and milk of goats with and without mastitis, showed no failure of transfer of immunity, as evidenced by concentrations of IgG found. The other protein fractions evaluated, did not differ between goats fed or not fed colostrum and mastitic milk over the periods evaluated

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-20. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:24:11Z : No. of bitstreams: 1 000836316.pdf: 1042031 bytes, checksum: 4a8a8f1f380a58dcfe20921854b03eae (MD5) / Leishmaniose visceral é uma doença grave que tem no cão seu principal reservatório doméstico. Algumas lacunas no conhecimento dificultam ainda mais o controle da doença. Com relação ao reservatório canino, a possibilidade de se estabelecer indicadores de infectividade ao vetor, como a carga parasitária, poderia resultar em melhor caracterização de seu papel como fonte de infecção na cadeia epidemiológica. Foram realizados xenodiagnósticos em cães acometidos de leishmaniose visceral, com subsequente avaliação da carga parasitária no hospedeiro e no vetor, utilizando-se flebotomíneos da área urbana de Araçatuba,SP. Após cinco dias do repasto, as fêmeas foram dissecadas e submetidas à avaliação parasitológica por meio da demonstração direta do parasito (DDP) e da contagem em câmara de Neubauer (NC). Fragmento de DNA de cinetoplasto (kDNA) de Leishmania spp. foi amplificado por meio da PCR convencional e em tempo real (qPCR), para quantificação da carga parasitária. Os cães foram avaliados para a presença de sinais clínicos e amostras de sangue, swab conjuntival e de pele foram colhidas e processadas por PCR e qPCR. Os resultados dos métodos diagnósticos utilizados foram correlacionados em modelo de regressão linear e a positividade de felbotomíneos foi corrigida pela positividade natural. Tanto a PCR convencional quanto a qPCR mostraram-se adequadas para a avaliação da infectividade canina. Houve correlação entre a carga de parasitos presentes na pele e no swab conjuntival do cão bem como com a cargas de parasitos dos flebotomíneos. Alguns sinais clínicos dos cães, pela análise de componentes principais (PCA), estiveram relacionados com a maior taxa de infecção dos vetores. / Visceral leishmaniasis is a severe disease that has the dog as its main domestic reservoir. Gaps in the knowledge difficult even more the control of this disease. Regarding the canine reservoir, the possibility of establishing infectivity indicators, like the dogs parasite load, could result in better characterization of its role as source of infection in the transmission chain. Xenodiagnosis in dogs with visceral leishmaniasis were performed with subsequent parasite load evaluation of the host and the vectors, using sandflies captured in the urban area of Araçatuba,SP. After five days, the female sand flies were dissected, subjected to parasitological evaluation by the direct demonstration of the parasite (DDP) and by counting in a Neubauer chamber (NC). A kinetoplast DNA fragment of Leishmania spp. was amplified by conventional PCR and by qPCR to check the presence and quantification of Leishmania kDNA. Dogs were assessed for clinical signs and blood, skin and conjunctival swab samples were taken and tested for parasite load. The diagnostic methods tested (NC, PCR and qPCR) were correlated by linear regression and positivity results were corrected by the natural infection rate. Conventional PCR and qPCR proved to be appropriate for evaluating canine infectivity. There was a correlation between the parasite load present in the dog' skin and the conjunctive swab, as well as with the sandflies parasite loads. Principal component analysis revealed that some of the clinical signs shown by the dogs were related to a highest sandfly infection rate.

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-16Bitstream added on 2015-01-26T13:30:20Z : No. of bitstreams: 1 000799157_20151201.pdf: 186778 bytes, checksum: 1e61fe369d65bb79b39a5c22db15a258 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-12-01T09:08:32Z: 000799157_20151201.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-01T09:09:25Z : No. of bitstreams: 1 000799157.pdf: 1033615 bytes, checksum: fdb5ea1c46b1511dd50917b56da4bf11 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No diabetes há controvérsias em relação ao equilíbrio entre citocinas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias, sendo carente na literatura estudos sobre o perfil de citocinas no sangue materno e no colostro de mães diabéticas. Assim, este estudo avaliou a imunofenotipagem de leucócitos e os perfis de respostas Th1, Th2 e Th17 no sangue materno, no sangue de cordão umbilical e no colostro de mães diabéticas e verificar a modulação de citocinas sobre a atividade funcional de fagócitos. Foram avaliadas 124 gestantes, assim distribuídas: não-diabético (ND; N=45), hiperglicemia gestacional leve (HGL; N=30), diabetes mellitus gestacional (DMG; N=15) e diabetes mellitus tipo 2 (DM2; N = 34). Observou-se que as porcentagens de células CD3+CD45RA+ foram menores no sangue do cordão do grupo DM2. As células TCD4+ foram menores no sangue do cordão dos grupos com HGL e DM2. O sangue materno do grupo de DM2 apresentou diminuição das subpopulações de células CD45RA+. As subpopulações de células CD45RO+ aumentaram no colostro de mães portadoras de DM2. O maior percentual de células TCD4+ foi observado no sangue materno e colostro de mães com DM2. Com relação a concentração de citocinas, observou que as concentrações de IL2, IL4 e IFN-γ foram similares em todos os grupos estudados. A concentração de IL6 foi superior no colostro quando comparado às concentrações encontradas no sangue materno e no sangue do cordão. As maiores concentrações de IL-17 foram observadas no sangue materno do grupo DM2. Na avaliação da atividade funcional de fagócitos observou-se que as células mononucleares do colostro e do sangue materno, tratados ou não com as citocinas (IFN-γ e TGF-β) e independente dos níveis glicêmico, exibiram índices fagocíticos similares para Escherichia coli enteropatogênica (EPEC). No grupo DM2, independente da presença de citocinas os fagócitos do sangue materno apresentaram menor liberação de ... / In diabetes there is controversy regarding the balance between proinflammatory and anti-inflammatory cytokines, but there is lacking in the literature studies on the cytokine profile in maternal blood and colostrum of diabetic mothers. This study evaluated the subsets of cells and cytokine profile Th1, Th2 e Th17 of maternal blood, cord blood and colostrum of diabetic mothers and verify the modulation of cytokines on the functional activity of phagocytes. Were evaluated 124 pregnant women that were divided according to their glycemic status: non-diabetic (ND, ND=45), mild gestational hyperglycemia (HGL, N=30), gestational diabetes mellitus (GDM, N=15) and diabetes mellitus type 2 (DM2, N=34). We observed that the percentages of CD3+ CD45RA+ cells was lower in cord blood group DM2. The CD4+ cells were lower in cord blood groups with HGL and DM2. Maternal blood group DM2 exhibited reduced subset of CD45RA+ cells. Subsets of CD45RO+ cells increased in the colostrum of mothers with DM2. The higher percentage of CD4+ cells were observed in maternal blood and colostrum of mothers with DM2. The concentration of cytokines IL2, IL4 and IFN-γ were similar in all groups. The concentration of IL-6 was higher in colostrum when compared to concentrations in maternal and cord blood. Higher concentrations of IL-17 were found in the maternal blood DM2. In relation of the functional activity of phagocytes was observed that the mononuclear cells of colostrum and blood treated or not with cytokines (IFN-γ and TGF-β), independent of blood glucose levels, exhibited similar phagocytic activity for enteropathogenic Escherichia coli (EPEC). In DM2 group, irrespective of the presence of cytokines phagocytes maternal blood showed lower release of intracellular calcium. Phagocytes of the cord blood of the non-diabetic group when treated by TGF-β, showed an increase in the release of intracellular calcium. The cells of colostrum and maternal blood in the ... / FAPESP: 11/18045-5

A Toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita que ocorre principalmente em indivíduos imunodeprimidos, gestantes e em pacientes em terapia anti-câncer. Na Medicina Veterinária, animais como ovelhas, cabras e porcos são seriamente afetados podendo ocorrer abortos e com isto perdas significativas em termos econômicos. Atualmente não se dispõem de vacinas contra a toxoplasmose, mas tem-se desenvolvido modelos animais em ratas e camundongos para o ensaio imunológico contra a enfermidade. Os modelos atualmente utilizados, possuem limitações, por exemplo, não é possível ensaiar no modelo rata um imunógeno de Toxoplasma gondii, uma vez que todas as linhagens de ratas disponíveis são resistentes. Portanto não se pode ensaiar desafios vacinais altamente exigentes neste modelo. Por isso é aconselhável contar com experimentos efetuados em diversas espécies animais. Está sendo proposto testar o Hamster (Mesocricetus auratus), com o intuito de estabelecer se é ou não um modelo que se aproxima das respostas esperadas nos humanos.Antes de se comprometer a custos muito elevados com ensaios finais de vacinações, o aconselhável é contar com ensaios em diversas espécies, pois os animais respondem de formas dIferentes aos mesmos imunógenos. Na transmissão congênita crônica dez Hamsters foram inoculados com 40 oocistos por via oral da cepa Me-49 do T.gondii e após sessenta dias foram postas para cruzarem com os machos. Obteve-se resultados promissores uma vez que a transmissão congênita aos seus filhotes nesta fase crônica da infecção foi nula. Na transmissão congênita aguda da infecção, obteve-se 42,9% de taxa de transmissão de T.gondii. Não foi observada a transmissão lactogênica, do toxoplasma, na fase aguda da infecção. / Taxoplasmosis is a cosmopolitan disease that causes a lot of damage to immunocompromised people, pregnant women, patients who have had transplants and people undergoing anticancer therapy. Animals like sheep, goats and pigs are seriously affected causing abortions and consequently significant economic losses. This is why, the importance of studing the transmission, the mechanisms of transmission and the forms of infection. Currently, vaccines against toxoplasmosis are not available, but animals’ models, in rats and mice, have been developed to an immune assay against this disease. These models considered to the study have some limitations, however it is not possible to apply a toxoplasma immune assay on a rat model, because it is a susceptible race and it has already been proven that rats are resistant to toxoplasma. We proposed to test the hamster (Mesocrisetua auratus) with the intention of establishing if it is or not one model that approaches the same results expected on human beings, therefore before compromising high costs with final assays of vaccinations, the advisable thing to do is to turn to assays on diverse species, because animals have different answers to the same immune. We intended to test hamster (Mesocrisetus auratus), with the intention of establishing if it is or no a model that approaches the expected ansewer from diferential ways to the same strains. In the chronic congenital transmit, in Hamsters was obtained promising results because yours creates didn’t present title when their organs (liver and lung), they were bioassayed in mice and twenty five days after they were bled and their serum tested with direct agglutination of Desmonts and Remington (1980), confirming that the passage wasn’t made during the gestation of females infected before the conception. In the sharp congenital transmission of the infection, it was obtained 42,9% that passed to their descendants antibodies of T. gondii. In the lactogenic transmission, wasn’t have title for T.gondii

Com o objetivo de avaliar as imunidades humoral e celular de pacientes com endometriose, analisamos as concentrações das Imunoglobulinas ( A, G e M ) e das Interleucinas (1β, 10 e IFγ) no soro e no líquido peritonial. Também analisamos a sua associação com a presença de infertilidade, o nível de dor apresentado e a extensão da endometriose. Foram coletadas amostras de soro e líquido peritonial de 43 pacientes submetidas a laparoscopia, que foram divididas em 4 grupos : 20 pacientes inférteis com endometriose, 9 pacientes inférteis sem endometriose, 4 pacientes férteis com endometriose e 10 pacientes férteis sem endometriose. As concentrações de IL-1β, IL-10 e IFγ foram determinadas pela método de ELISA e as concentrações de IgA, IgG e IgM foram feitas pela técnica de imunodifusão radial. Nas pacientes com endometriose, as concentrações de IgA no soro e do líquido peritonial foram maiores nas pacientes inférteis do que nas férteis. A IgG estava mais elevada nas pacientes sem endometriose do que nas pacientes com endometriose, todas inférteis. Os níveis de interleucina 10 no líquido peritonial de pacientes com endometriose foram mais elevados nas pacientes inférteis do que nas férteis e Interferon γ apresentou concentrações mais baixas no soro e no líquido peritonial de pacientes inférteis sem endometriose. Não houve diferenças significativas entre os grupos para as concentrações de IgM e IL-1β, bem como nas correlações entre os níveis de citocinas e imunoglobulinas entre os diferentes grupos com os graus de endometriose e os níveis de dor nessas pacientes.

Atualmente não se dispõe de vacinas contra a toxoplasmose humana, mas têm-se desenvolvido modelos animais em ratas e camundongos para o ensaio imunológico contra a toxoplasmose. No entanto, estes modelos têm mostrado certas limitações. É aconselhável contar com ensaios efetuados em diversas espécies animais antes de comprometer-se com custosos ensaios finais de vacinação, já que as diversas espécies animais, respondem diferentemente frente aos mesmos imunógenos. O objetivo geral do presente trabalho foi então, indagar a aplicabilidade de um modelo hamster para o estudo da imunidade contra a toxoplasmose congênita. Os objetivod específicos foram: verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio crônico da infecção; verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio agudo da infecção; verificar a ocorrência da transmissão lactogênica no desenho experimental proposto, e questionar a proteção contra a toxoplasmose congênita, conferida pela imunidade estéril e mediante a premunição. O cumprimento dos objetivos possibilitará o uso de imunizações (com Toxoplasma gondii viável) em futuros estudos, assim como conhecer a eficácia dos desafios efetuados em hamster, e também permitirá conhecer se o imunógeno mais simples disponível é suficiente para conferir proteção contra a toxoplasmose congênita. Quanto ao ensaio da imunidade na fase crônica da toxoplasmose foi possível comprovar nas condições deste experimento que ela não ocorre, pois as 10 fêmeas hamster inoculadas com 40 oocistos da cepa ME-49 antes de serem acasaladas, tiveram filhotes negativos para anticorpos anti-T.gondii. No modelo de infecção aguda, 100% das fêmeas inoculadas com 102 oocistos da cepa Prugniaud durante a gestação foram positivas, e houve 60% de transmissão transplacentária para seus filhotes e 40% de transmissão transmamária para filhotes adotados. Também, 100% das fêmeas inoculadas com 103 oocistos da mesma cepa durante a gestação foram positivas e nos seus filhotes ocorreram 100% de transmissão transplacentária, e em 40% dos filhotes adotados houve transmissão transmamária. Num terceiro experimento, em fêmeas inoculadas com a cepa RH e medicadas houve sobrevivência de 86,6% e a extinção da cepa RH em 46,15% dos cérebros. No modelo para testar a proteção com cepa RH contra oocistos de T. gondii de cepa heteróloga, não houve transmissão de toxoplasmose congênita em 100% das mães imunizadas com RH e desafiadas com Prugniaud e em 50% das mães imunizadas com RH e desafiadas com M3. O desafio heterólogo após imunização com a cepa RH, nesse experimento conferiu total proteção (100%) em hamsters duas vezes imunizadas com a cepa RH contra desafio com bradizoítos e oocistos com as cepas Prugniaud e M-7741, mas a proteção com oocistos de M3 foi parcial (67%). As conclusões foram o hamster é um modelo promissor para o estudo da toxoplasmose congênita, uma vez que a infecção crônica antes da prenhez, com oocistos da cepa ME49, protegeram as ninhadas e a infecção aguda durante a prenhez, com a cepa Prugniaud, resultou em transmissão transplacentária. Houve transmissão lactogênica mas não foi confirmada sua importância epidemiológica com a metodologia empregada. O hamster também se mostrou promissor para o estudo da proteção contra T. gondii tendo em vista que a infecção com cepa RH conferiu proteção total (contra Prugniaud e M7741) ou parcial (contra M3) das ninhadas contra cepas heterólogas. / Nowadays there are no vaccines against human toxoplasmosis, but it has been developed animal models in rats and mice for immunologic assay against toxoplasmosis. However, these models have showed certain limitations. It is advisable to count on assays done in several animal species before pledging with expensive final vaccination assays, since several animal species differently answered to the same immunogens. The general objective of this work was to investigate the applicability of a hamster model for the study of immunity against congenital toxoplasmosis. The specific objectives were: to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the chronic phase of the infection; to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the acute phase of infection; to verify the occurrence of lactogenic transmission in the experimental trial which was proposed, and to question the protection against congenital toxoplasmosis given by the sterile immunity and by the means of premonition. The fulfillment of the objectives will enable the use of immunizations (with viable gondii Toxoplasma) in future studies, as well as, the knowledge of the efficacy about the challenges done in hamsters. It will also allow us to know whether the simplest immunogen available is enough to give protection against congenital toxoplasmosis. Regarding the immunity assay in the chronic phase of toxoplasmosis we were able to prove that it does not occur because 10 female hamsters inoculated with oocysts of ME- 49 strain before being coupled had negative offspring for anti-T. gondii antibodies. In the model of acute infection, 100% of females inoculated with 102 oocysts of Prugniaud strain during their gestation were positive and there were 60% of transplacental transmission for their offspring and 40% of transmammary transmission for foster offspring. Also, 100% of females inoculated with 103 oocysts of the same strain during the gestation time were positive and in their offspring there was 100% of transplacental transmission, and in 40% of their foster offspring there was transmammary transmission. In a third experiment, in females which were medicated and inoculated with RH strain there was a survival of 86.6% and the extinction of RH strain in 46.15% of the brains. In the model to test the protection with RH strain against oocysts of Toxoplasma gondii of heterologic strain, there was no transmission of congenital toxoplasmosis in 100% of mothers immunized with RH and challenged with Prugniaud and in 50% of mothers immunized with RH and challenged with M3. In this experiment, the heterologous challenge after the immunization with RH strain gave total protection (100%) in hamsters which were twice immunized with RH strain against challenge with bradyzoites and oocysts with Prugniaud and M-7741 strains, however, the protection with M3 oocysts was partial (67%). The conclusions were that the hamster is a promising model for the study of congenital toxoplasmosis, since chronic infection before pregnancy, with oocysts of ME49 strain protected their offspring and the acute infection during pregnancy, with Prugniaud strain, resulted in transplacental transmission. There was lactogenic transmission but it was not confirmed its epidemiologic importance with the methodology applied. Hamsters have also showed to be promising for the study of protection against T. gondii having in mind the infection with RH strain gave total protection (against Prugniaud and M7741) or partial (against M3) of offspring against heterologous strains.

Orientador: Iracema de Mattos Paranhos Calderon / Coorientador: Adenilda Cristina Honório França / Banca: Márcia Guimarães da Silva / Banca: Leandro Gustavo de Oliveira / Banca: Inês Aparecida Tozetti / Banca: Fábio Carmona / Resumo: No diabetes há controvérsias em relação ao equilíbrio entre citocinas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias, sendo carente na literatura estudos sobre o perfil de citocinas no sangue materno e no colostro de mães diabéticas. Assim, este estudo avaliou a imunofenotipagem de leucócitos e os perfis de respostas Th1, Th2 e Th17 no sangue materno, no sangue de cordão umbilical e no colostro de mães diabéticas e verificar a modulação de citocinas sobre a atividade funcional de fagócitos. Foram avaliadas 124 gestantes, assim distribuídas: não-diabético (ND; N=45), hiperglicemia gestacional leve (HGL; N=30), diabetes mellitus gestacional (DMG; N=15) e diabetes mellitus tipo 2 (DM2; N = 34). Observou-se que as porcentagens de células CD3+CD45RA+ foram menores no sangue do cordão do grupo DM2. As células TCD4+ foram menores no sangue do cordão dos grupos com HGL e DM2. O sangue materno do grupo de DM2 apresentou diminuição das subpopulações de células CD45RA+. As subpopulações de células CD45RO+ aumentaram no colostro de mães portadoras de DM2. O maior percentual de células TCD4+ foi observado no sangue materno e colostro de mães com DM2. Com relação a concentração de citocinas, observou que as concentrações de IL2, IL4 e IFN-γ foram similares em todos os grupos estudados. A concentração de IL6 foi superior no colostro quando comparado às concentrações encontradas no sangue materno e no sangue do cordão. As maiores concentrações de IL-17 foram observadas no sangue materno do grupo DM2. Na avaliação da atividade funcional de fagócitos observou-se que as células mononucleares do colostro e do sangue materno, tratados ou não com as citocinas (IFN-γ e TGF-β) e independente dos níveis glicêmico, exibiram índices fagocíticos similares para Escherichia coli enteropatogênica (EPEC). No grupo DM2, independente da presença de citocinas os fagócitos do sangue materno apresentaram menor liberação de ... / Abstract: In diabetes there is controversy regarding the balance between proinflammatory and anti-inflammatory cytokines, but there is lacking in the literature studies on the cytokine profile in maternal blood and colostrum of diabetic mothers. This study evaluated the subsets of cells and cytokine profile Th1, Th2 e Th17 of maternal blood, cord blood and colostrum of diabetic mothers and verify the modulation of cytokines on the functional activity of phagocytes. Were evaluated 124 pregnant women that were divided according to their glycemic status: non-diabetic (ND, ND=45), mild gestational hyperglycemia (HGL, N=30), gestational diabetes mellitus (GDM, N=15) and diabetes mellitus type 2 (DM2, N=34). We observed that the percentages of CD3+ CD45RA+ cells was lower in cord blood group DM2. The CD4+ cells were lower in cord blood groups with HGL and DM2. Maternal blood group DM2 exhibited reduced subset of CD45RA+ cells. Subsets of CD45RO+ cells increased in the colostrum of mothers with DM2. The higher percentage of CD4+ cells were observed in maternal blood and colostrum of mothers with DM2. The concentration of cytokines IL2, IL4 and IFN-γ were similar in all groups. The concentration of IL-6 was higher in colostrum when compared to concentrations in maternal and cord blood. Higher concentrations of IL-17 were found in the maternal blood DM2. In relation of the functional activity of phagocytes was observed that the mononuclear cells of colostrum and blood treated or not with cytokines (IFN-γ and TGF-β), independent of blood glucose levels, exhibited similar phagocytic activity for enteropathogenic Escherichia coli (EPEC). In DM2 group, irrespective of the presence of cytokines phagocytes maternal blood showed lower release of intracellular calcium. Phagocytes of the cord blood of the non-diabetic group when treated by TGF-β, showed an increase in the release of intracellular calcium. The cells of colostrum and maternal blood in the ... / Doutor