Orientador: Iscia Lopes-Cendes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T04:41:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Conte_FabioFrangiotti_D.pdf: 13814383 bytes, checksum: 9a4218c46168df9b7544dbd102ee9756 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A epilepsia é uma condição bastante freqüente que atinge aproximadamente 1,5% da população geral, sendo mundialmente considerada um problema de saúde pública. O termo epilepsia engloba um grupo de distúrbios neurológicos crônicos com diferentes etiologias, manifestações e prognósticos, mas que possuem como característica comum as crises convulsivas recorrentes. A Epilepsia Mioclônica Juvenil (EMJ) é caracterizada por abalos mioclônicos principalmente ao despertar. A EMJ tem sido uma das formas de epilepsia mais amplamente estudadas do ponto de vista molecular. Recentemente, um dos genes causadores da EMJ foi clonado. Este gene, chamado de EFHC1, codifica uma proteína que possui 640 aminoácidos e que possui três domínios estruturais DM10, de função desconhecida, e um motivo de ligação a cálcio, chamado de EF-hand. A proteína EFHC1 associa-se a microtúbulos e, dessa forma, participa ativamente do processo de divisão celular. Além disso, esta proteína induz apoptose em neurônios através da sua associação com um canal de cálcio voltagem-dependente (Cav2.3). Foram identificadas cinco mutações no gene EFHC1 que co-segregam com o quadro epiléptico em pacientes acometidos por EMJ. As proteínas mutadas codificadas por estas variantes têm a capacidade pró-apoptótica reduzida. Os genes ortólogos de camundongo e rato, chamados de Efhc1, também foram isolados. O gene murino codifica uma proteína de aproximadamente 75KDa, homóloga à proteína Rib72 de Chlamydomonas reinhardtii. A proteína Efhc1 é abundante em tecidos e órgãos que possuem flagelos ou cílios móveis, como, por exemplo, os testículos, os ovidutos e, no sistema nervoso central (SNC), as células ependimárias. No epêndima, a proteína Efhc1 é essencial para a manutenção da freqüência de batimento ciliar destas células. Os principais objetivos desta tese foram a determinação do perfil de expressão do gene Efhc1 e a avaliação da viabilidade de estudos funcionais pela modulação de sua expressão no cérebro de roedores em diferentes estágios de desenvolvimento. Os experimentos de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real revelaram que não há diferença na expressão do transcrito do gene Efhc1 entre os hemisférios cerebrais nas duas espécies. Os ensaios de Western blot corroboraram este achado. Além disso, os maiores níveis do transcrito destes genes são observados nos estágios intra-uterinos nos camundongos e nos animais adultos em ratos. Em comum, há um decréscimo progressivo na expressão dos genes a partir de neonatos de 1 dia de vida (P1) até P14. Os estudos de hibridização in situ mostraram que o transcrito dos genes Efhc1 destas espécies é expresso nas células ependimárias, as quais revestem as paredes dos ventrículos cerebrais. Estes resultados sugerem que a expressão do gene Efhc1 é mais importante durante as fases iniciais do desenvolvimento do cérebro e que, neste estágio, a proteína Efhc1 pode estar envolvida no surgimento dos mecanismos epileptogênicos subjacentes a EMJ. A técnica de interferência por RNA (RNAi) promove o silenciamento gênico potente e específico e foi utilizada neste projeto com o intuito de estudar a função do gene Efhc1 em células de mamíferos em cultura e no cérebro de camundongos em desenvolvimento. Esta abordagem tem sido amplamente utilizada para esta finalidade. Tanto para os experimentos com cultura celular quanto para os experimentos in vivo, a confirmação do silenciamento gênico ocorreu via Real Time PCR e Western blot. Além disso, foram utilizados controles negativos (injeção apenas com tampão e siRNA irrelevantes). Inicialmente, foram desenhadas e sintetizadas duas moléculas de siRNA, as efetoras da RNAi, que promovem um silenciamento gênico temporário, e uma molécula de shRNA (short hairpin RNA), cujo efeito é duradouro. Nos experimentos com cultura de células, foram utilizados diferentes tipos celulares, desde cardiomiócitos de rato até células de camundongos derivadas de neuroblastoma (Neuro2A). Já para o silenciamento do gene no cérebro de camundongos em desenvolvimento, foram utilizadas diferentes metodologias de inoculação da molécula, como, por exemplo, cirurgia intra-uterina, transfecção hidrodinâmica, injeção na veia jugular e associação do siRNA com um peptídeo derivado de uma glicoproteína do vírus da raiva. Como resultado, obteve-se silenciamento duradouro e consistente do gene Efhc1 em cultura de células Neuro2A. A maior porcentagem de silenciamento gênico (60%) foi obtida após 48h de incubação do siRNA com as células e o gene permaneceu silenciado por até 6 dias. Além disso, o silenciamento do gene Efhc1 no Sistema Nervoso Central de roedores (redução da expressão em até 45%) foi alcançado pela complexação do siRNA com um peptídeo derivado do vírus da raiva, o RVG-9R. Espera-se que os resultados deste estudo sejam capazes de fortalecer a associação do gene EFHC1 e o fenótipo de EMJ, além de fornecer maiores subsídios para identificar os possíveis mecanismos biológicos envolvidos na fisiopatologia da EMJ, os quais permanecem ainda muito controversos. / Abstract: Epilepsy is a frequent condition that affects around 1.5% of general population and is considered worldwide as a public health problem. The term epilepsy refers to a group of chronic neurological disorders with different etiologies and prognostics. However, a common characteristic of all epilepsies is the recurrence of seizures. Juvenile myoclonic epilepsy (JME), one of the most common forms of epilepsy, is characterized by myoclonic seizures mainly at awakening. JME has been intensively studied at the molecular level. Recently, one of the putative causative genes for JME was cloned. This gene, called EFHC1, encodes a protein with 640 amino acids that has three DM10 domains, with unknown function, and a calcium binding motif, called Ef-Hand. EFHC1 protein associates with microtubules and, therefore, it actively participates in the cellular division process. In addition, it has been demonstrated that this protein induces apoptosis in cultured neurons through the association with an R-type voltage-dependent calcium channel (Cav2.3).To date, five different EFHC1 missense mutations identified in patients with JME were shown to decrease this proapoptotic function in cell models. The ortholog genes in mouse and rat, both named Efhc1, were also isolated. The murine gene encodes a protein with around 75KDa, homolog to Chlamydomonas reinhardtii Rib72 protein. Efhc1 protein presents its highest expression levels in tissues and organs that have mobile cilia and flagella, like testis, oviduct and, in the central nervous system, the ependymal cells. The aim of this study was to determine the distribution and expression profile of Efhc1 genes and evaluate the viability of functional studies by the modulation of the its expression during the development of the brain of mice and rats. Real time polymerase chain reaction (Real Time PCR) revealed that there is no difference in the expression of Efhc1 transcript between right and left hemispheres in both species. Western blot experiments corroborated this finding. In addition, the highest levels of Efhc1 mRNA were found at intra-uterine stages in mouse and in adulthood in rat. In common, there was a progressive decrease in Efhc1 expression from 1-day-old neonates to 14-days-old animals in both species. In situ hybridization studies showed that rat and mouse Efhc1 mRNAs are expressed in ependymal cells of ventricle walls. Our findings suggest that Efhc1 expression is more important during initial phases of brain development and that at this stage it could be involved in key developmental mechanisms underlying JME. The technique of RNA interference (RNAi) promotes a potent and specific gene silence and it was employed in this project to study the function of Efhc1 gene in cultured mammal cells and in the brain of mice in different developmental stages. This approach has been widely used to achieve this aim. Both for cultured cells assays as for in vivo experiments, the percentage of gene silence was evaluated with Real Time PCR and Western blot. In addition, negative controls (injection only with buffer and the use of an irrelevant siRNA) were used in the experiments. Initially, we used two siRNAs, the effectors of RNAi. The siRNA molecules promote a temporary gene silence, whereas the short hairpin RNA (shRNA), another type of molecule, promotes long-term gene silence. In the experiments with mammal cells in culture, we used different cellular types, from rat cardiomyocytes to mouse neuroblastoma cells. For the in vivo experiments, different methodologies were used, such as intra-uterine surgery, hydrodynamic transfection, and association of the siRNA with a peptide derived from a rabies virus glycoprotein. A long-term Efhc1 gene silencing was obtained in Neuro2A cells. The greatest silencing percentage (60%) was observed after 48h of incubation with the siRNA and the gene remained silenced for up to 6 days. Besides, Efhc1 gene silencing in rodent Central Nervous System (decrease in gene expression of 45%) was achieved by the inoculation of the siRNA-RVG-9R complex. We believe that our results point to an association between putative EFHC1 gene function during brain development and the physiopathology of JME. / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Eliana Regina Forni Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:44:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferrari_Fernanda_M.pdf: 4024604 bytes, checksum: fadaeedca82d057b615fd5bfb85b4706 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A cana-de-açúcar assumiu grande importância no cenário econômico mundial, não só pela produção de açúcar, mas também de etanol. Variedades modernas de cana-de-açúcar são essencialmente derivadas de hibridações feitas no início do século XX entre duas spécies de Saccharum, S. officinarum (2n = 80) e S. spontaneum (2n = 40-128), seguidas de retrocruzamentos dos híbridos com S. officinarum. Devido à poliploidia natural do gênero e a aneuploidia das variedades híbridas o estudo citogenético em cana-de-açúcar é complexo. O advento da citogenética molecular, mediante a técnica de hibridização de DNA in situ (FISH e GISH), vem propiciando avanços no entendimento da organização genômica de Saccharum e de gêneros relacionados. O objetivo deste trabalho foi realizar análises cromossômicas, de número e sítios de rDNA, nas duas principais espécies do gênero, S. officinarum e S. spontaneum, e em mais três importantes variedades brasileiras, RB72454, RB835486 e RB867515. Foi possível confirmar as identidades das espécies S. officinarum (2n = 80) e S. spontaneum (2n = 64) mediante a contagem do número cromossômico. Foram caracterizados, pela primeira vez, os números cromossômicos das variedades RB72454 e RB835486 (2n = 112) e na RB867515 (2n = 110). Através de técnicas de hibridização in situ fluorescente foram quantificados os sítios de rDNA 45S e 5S. As espécies S. officinarum e S. spontaneum, conforme já descrito na literatura, apresentaram 8 sítios de cada locus. As variedades RB72454 e RB835486 apresentaram 12 sítios de cada locus e a variedade RB867515 apresentou 11 sítios do rDNA 45S e 9 sítios do rDNA 5S. Os loci de rDNA 45S e 5S encontram-se em grupos homó(eó)logos distintos e por isso, esses dois genes caracterizam-se dois marcadores cromossômicos em Saccharum spp. A localização do locus de rDNA 45S em posição distinta nos cromossomos de S. officinarum (terminais) e S. spontaneum (intersticiais), possibilitou a quantificação da contribuição dessas espécies, no respectivo grupo homeólogo, para as variedades RB72454 e RB867515 / Abstract: Sugarcane has assumed an eminent position in the world economical scenario, not only for sugar, but also for ethanol production. Current sugarcane varieties are hybrids from initial interspecific crosses involving mainly two species of Saccharum, S. officinarum (2n = 80) and S. spontaneum (2n = 40-128), followed by backcrossing with S. officinarum. Due to the polyploidy nature of the genus Saccharum and the aneuploidy occurring in the interspecific hybrids, the cytogenetic study of sugarcane is complex. Moreover, chromosomes are small and morphologically similar. The molecular cytogenetics, with technique of DNA in situ hybridization (GISH and FISH), has provided advances in the understanding of genomic organization of this crop. The goal of this study was to realize chromosomal analysis, including chromosome number and sites of rDNA of two species, S. officinarum and S. spontaneum, and of three Brazilian varieties, RB72454, RB835486 and RB867515. The identities of the species S. officinarum (2n = 80) and S. spontaneum (2n = 64) were confirmed counting their chromosome numbers. We also counted the chromosome numbers of the varieties RB72454 and RB835486 (2n = 112) and RB867515 (2n = 110). Using FISH techniques, we could quantify the rDNA 45S and 5S sites of all the accesses. S. officinarum and S. spontaneum, as described in the literature, had 8 sites at each locus. For the varieties RB72454 and RB835486, 12 sites at each locus were detected and for RB867515, 11 sites of rDNA 45S and 9 sites of rDNA 5S were detected. The loci rDNA 45S and 5S are in different homo(eo)logues groups being thus characterized as two chromosomal markers for Saccharum spp. Since the rDNA 45S is located in different positions in S. officinarum (terminals) and S. spontaneum (interstitial), this marker could be applied in the quantification, in this homeologue group, of the chromosome numbers inherited from S. officinarum and S. spontaneum by the varieties RB72454, RB867515 / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Biologia Vegetal

Orientador: Louis Bernard Klaczko / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T08:34:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brianti_MitsueTaukeuti_D.pdf: 10353784 bytes, checksum: 0344027abe18c39b3dd4826fe982299a (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Acredita-se que no gênero Drosophila, o subgênero Drosophila é procedente do subgênero Sophophora e deu origem a outros gêneros e subgêneros e, particularmente, a duas radiações: virilis-repleta e immigrans-Hirtodrosophila. Esta última teve uma origem paleotropical, onde inicialmente se diversificou e se expandiu, enviando a radiação tripunctata aos Neotrópicos. A radiação tripunctata sofreu uma diversificação neotropical importante e atualmente é composta por 9 grupos de espécies adaptadas a áreas florestais. Este projeto se insere num amplo contexto de compreender a evolução da radiação tripunctata de Drosophila. Para isso foram usadas duas abordagens: a) analisamos a posição do rDNA nos cromossomos mitóticos de 16 espécies da radiação tripunctata; b) e, com cromossomos politênicos, focalizamos nossa atenção no estudo detalhado de um agrupamento monofilético dentro do grupo tripuntata - o agrupamento de espécies relacionadas com D. mediopunctata (D. mediopunctata, D. unipunctata e D. roehrae) - usando métodos de citogenética clássica e molecular. Deste modo os objetivos deste trabalho foram: - Examinar a variação da posição dos genes codificantes do RNA ribossomal (rDNA) em espécies da radiação tripunctata. - Produzir fotomapas de cromossomos politênicos de D. roehrae e D. unipunctata. - Caracterizar as inversões cromossômicas (pontos de quebra) que ocorrem em populações de D. roehrae e D. unipunctata - Identificar os elementos cromossômicos de Muller pela localização, através de hibridação in situ, de genes de cópia única de D. melanogaster em cromossomos politênicos das espécies D. mediopunctata, D. roehrae e D. unipunctata. As conclusões gerais foram: - A presença de uma NOR em cada cromossomo sexual é uma condição ancestral no gênero Drosophila e este caráter é bem conservado neste gênero. - Os cromossomos politênicos das três espécies são bem similares, sendo possível determinar com relativa facilidade a homologia dos cromossomos menos polimórficos. - Existe um padrão de polimorfismo de inversões entres os elementos de Muller nestas espécies: o elemento E é o mais polimórfico, com muitas inversões em cada espécie; o elemento C é o segundo mais polimórfico, enquanto B e D são os menos polimórficos. - Drosophila unipunctata apresenta uma conformação cariotípica singular, a despeito das espécies D. mediopunctata e D. unipunctata serem consideradas filogeneticamente mais próximas que D. roehrae, o que sugere uma rápida evolução cromossômica / Abstract: In the genus Drosophila, the subgenus Drosophila arose from the subgenus Sophophora and subsequently gave rise to various subgenera and genera, and to two particularly important radiations: virilis-repleta and immigrans-Hirtodrosophila. The latter originated in the Paleotropics, where it initially diversified and expanded, taking the tripunctata radiation to the Neotropics. The tripunctata radiation suffered significant Neotropical diversification and, at present, is composed of nine species groups adapted to forest habitats. The ultimate aim underlying this project is to understand the evolution of the tripunctata radiation of Drosophila. To address this matter, two approaches were used: a) we investigated the rDNA position, on mitotic chromosomes, in 16 species of the tripunctata radiation; b) and, with polytene chromosomes, we focused our attention in the detailed study of three closely related species of the tripunctata group. (d. mediopunctata, D. unipunctata and D. roehrae) - using classical and molecular cytogenetic analysis. More specifically, we aimed to: - investigate the rDNA position in species of tripunctata radiation through in situ hybridization on mitotic chromosomes. - prepare photomaps of the polytene chromosome of D. roehrae and D. unipunctata, locating the breaking points of the inversions. - identify Muller's elements, in polytene chromosomes of D. mediopunctata, D. roehrae and D. unipunctata through in situ hybridization using genes of D. melanogaster as probes. Our conclusions were: - The presence of a single nucleolus organizer region (NOR) on each sex chromosome is an ancestral and conserved state in the genus Drosophila. - Drosophila mediopunctata, D. roehrae and D. unipunctata have similar polytene chromosomes, which allowed us to establish the homology of chromosomal elements through the comparison of banding patterns. - In these species, the distribution of breaking points through the Muller's elements is non-random: element E is the most polymorphic, with many inversions in each species; and element C is the second most polymorphic; while B and D are the least polymorphic. - With the help of molecular genetic markers it has been previously established that D. mediopunctata is more closely related to D. unipunctata than to D. roehrae. However, D. unipunctata shows a notably different karyotype configuration, which suggests rapid chromosomal evolution / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia

O Papilomavírushumano (HPV) é um DNA vírus do grupo papovavírus, que é altamente transmissível sexualmente, sendo bastante encontrado na região anogenital e mucosa oral. A sua implantação oral pode ser por auto-inoculação ou pelo contato oro-sexual. As principais manifestações orais associadas ao HPV são: papiloma, condiloma acuminado, verruga vulgar e hiperplasia epitelial focal. O papiloma é uma lesão epitelial associada ao HPV e pode ocorrer em vários locais da mucosa oral. Histopatologicamente, o papiloma oral é caracterizado por coilocitose, disceratose, papilomatose, hiperceratose e acantose. A literatura ressalta a importância do estudo dessas lesões, uma vez que estudos demonstram que mesmo com os achados macroscópicos e histológicos serem compatíveis com a presença do vírus, somente técnicas de detecção podem comprovar a presença viral.O objetivo deste estudo foi verificar a presença do HPV, por meio das técnicas de hibridização in situ e PCR, em lesões diagnosticadas histopatologicamente como papilomas e comparar esses resultados com características clínicas e histológicas. Cinqüenta casos foram selecionados da Disciplina de Patologia Bucal e da Disciplina de Estomatologia Clínica da FOUSP. Esta seleção de 50 casos foi submetida à reação de hibridização in situ, e 10 casos dentre os mesmos por técnica da PCR e 100% casos foram negativos. Nenhuma das características histológicas previamente analisadas puderam formar estreita relação com a hibridização in situ e PCR. Conclui-se que a análise histopatológica ao HE não se correlaciona com os resultados das técnicas de hibridização in situ e PCR, porém importante ressaltar para detecção do HPV nas lesões estudadas é imprescindível o uso de técnicas de Biologia Molecular otimizadas como a hibridização in situ e PCR realizadas nesse estudo. / The Humanpapillomavirus (HPV) is a DNA virus from the group of papovavirus, which is highly sexually transmitted and it can be often found in the anogenital area and in the oral mucosal. The oral implantation can be by self-inoculation or by the oral sexual contact. The main oral appearances associated to HPV are: papilloma, condylomata acuminata, verruca vulgaris and focal epithelial hyperplasia. Papilloma is an epithelial lesion that is associated to HPV and can occurs in many places of the oral mucosal. Histopathologically, the oral papilloma is characterized by koylocitosis, dyskeratosis, papillomatosis, hyperkeratosis and acanthosis. The literature shows the importance of these lesions once studies show that macroscopic and histologic founds suggest the presence of the virus, only detection technics can prove the viral presence. The target of this study is to check the presence of HPV, by means of In situ hybridization and PCR, in lesions diagnosed histopathologically as papillomas and compare these results with clinic and histologic features. Fifty cases were selected from the Discipline of Oral Pathology and the Discipline of Oral Diagnose of FOUSP. This selection of 50 cases were submitted to the reaction of In situ hybridization, and 10 cases among the same by PCR and 100% of the cases were negative. None of the histologic features were previously analyzed could form a narrow relation with the In situ hybridization and PCR. Therefore it is concluded that the histopathologic analysis to HE do not correlate with the results of the In situ hybridization and PCR, however the detection of the HPV in the studied lesions it is absolutely necessary the use of Molecular Biology techniques as the In situ hybridization and PCR done in this study.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-02-01T15:58:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Eduardo Rodolfo da Costa - 2015.pdf: 928757 bytes, checksum: 00509c031fbbc19cebf0b06a7ea65979 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-02T06:52:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Eduardo Rodolfo da Costa - 2015.pdf: 928757 bytes, checksum: 00509c031fbbc19cebf0b06a7ea65979 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-02T06:52:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Eduardo Rodolfo da Costa - 2015.pdf: 928757 bytes, checksum: 00509c031fbbc19cebf0b06a7ea65979 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-10-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The nutritional value and fermentative characteristics of the silage grass mombaça with sunflower meal inclusion were evaluated. The treatments consisted of four levels of inclusion: 0%, 10%, 15% and 20%. The levels of dry matter determined in silage grass mombaça, differed depending on the sunflower meal inclusion levels, ranging from 24.69 % to 28.50%. The CP content ranged from 11.63 % to 21.651 % and significant differences were observed between the inclusion levels (P<0.05). The highest level of sunflower meal inclusion - 20% - resulted in smaller losses by effluent. The pH values found varied between 4.89 and 5.57. The average levels of ammonia nitrogen (NH3-N) remained between 1.33 and 6.42. The average levels of residual soluble carbohydrates ranged between 4.63 and 8.38, with significant similarity only between the levels of 15% and 20 % of sunflower meal (P> 0.05). The contents of lactic acid, acetic, propionic and butyric ranged from the 1,245 to 3,898; the 2.428 to 8.670; the 0.248 to 0.135 and the 0.016 to 0.027 respectively, and differed significantly (P<0.05) between the sunflower meal levels. The degradability of the dry matter of silage varied as a function of sunflower meal inclusion levels , having the potential degradability (PD) between 71.46 % and 81.96 %, being to 27.86 % to 32.83 % variation to the fraction "a" and between 39.01 % and 52.07 % for the "b" fraction . Regarding the CP, PD ranged from 83.09 % to 92.57 %, and the contents of the fraction "a", fractions "b" and part "c", were significantly influenced by the addition levels sunflower meal (P < 0.05) showing variation of 24.79 % to 61.50 %, 28.68 % to 59.73 %, and 0.0194 % to 0.0411 %, respectively. / Avaliou-se o valor nutricional e as características fermentativas da silagem de capim-mombaça com inclusão de farelo de girassol. Os tratamentos foram constituídos por quatro níveis de inclusão: 0%, 10%, 15% e 20%. Os teores médios de matéria seca determinados nas silagens de capim-mombaça diferiram em função dos níveis de inclusão do farelo de girassol, com variação de 24,69% a 28,50%. Os teores PB variaram de 11,63% a 21,651% e foram observadas diferenças significativas entre os níveis de inclusão (P<0,05). O maior nível de inclusão de farelo de girassol - 20% - resultou nas menores perdas por efluentes. Os valores de pH encontrados variaram de 4,89 a 5,57. Os teores médios de nitrogênio amoniacal (N-NH3) se mantiveram entre 1,33 e 6,42. Os teores médios de carboidratos solúveis residuais variaram entre 4,63 e 8,38, não havendo diferença significativa, apenas entre os níveis de 15% e 20% de farelo de girassol (P>0,05). Os teores de ácido lático, acético, propiônico e butírico variaram de 1,245 a 3,898; de 2,428 a 8,670; de 0,135 a 0,248 e de 0,016 a 0,027 respectivamente, e diferiram significativamente (P<0,05) entre os níveis de farelo de girassol. A degradabilidade da matéria seca da silagem variou em função dos níveis de inclusão de farelo de girassol, tendo a degradabilidade potencial (DP) entre 71,46% e 81,96%, sendo de 27,86% a 32,83% a variação para a fração “a”, entre 39,01% e 52,07% para a fração “b”. Em relação à proteína bruta, a DP variou entre 83,09% e 92,57%, sendo que os teores da fração “a”, frações “b” e fração “c”, foram significativamente influenciados pelos níveis de adição de farelo de girassol (P<0,05), apresentando variação de 24,79% a 61,50%, 28,68% a 59,73% e 0,0194% a 0,0411%, respectivamente.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-07-13T20:52:05Z No. of bitstreams: 2 Tese - Advaldo Carlos de Souza Neto - 2016.pdf: 7882520 bytes, checksum: fc1dbbcc9d2125e1ceb756bd966db55f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-07-14T13:02:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Advaldo Carlos de Souza Neto - 2016.pdf: 7882520 bytes, checksum: fc1dbbcc9d2125e1ceb756bd966db55f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T13:02:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Advaldo Carlos de Souza Neto - 2016.pdf: 7882520 bytes, checksum: fc1dbbcc9d2125e1ceb756bd966db55f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Understanding the processes that guide species distribution is a classic aim of Ecology. Several approaches were used to reach this objective. The use of phylogenetic data to elucidate and comprehend ecological patterns and processes has grown recently. However, the use of phylogeny as proxy to species traits, considering the premise that species phylogenetically closely related are functionally related, has been contested along the years. From these questions, several authors have thought about what is the best way to use the phylogenetic knowledge to better understand ecological and biogeographical patterns and processes. The Cerrado is the second largest biome of Brazil and has great biodiversity and many endemic species. The knowledge about the biome evolution has grown, but more studies still are necessary do deeply understand the origin of its biodiversity. Our aim was to use phylogenetic knowledge to try clarifying the evolutionary history of Cerrado biome. The first chapter brings a scientometric analysis of “Phylogenies and community ecology” paper by Webb et al. (2002). We conclude that the paper was very important to establish the “Ecophylogenetics” field, because even with a contested initial view, the work was important to bring the researchers attention about the use of phylogenies in ecological and evolutionary studies. The second chapter brings a phylogenetic approach to understand the Cerrado biome evolution and its relationship with other biomes surrounding it, using the Caesalpinioideae subfamily (Fabaceae) as model. In this chapter we observed that Cerrado biodiversity was originated by habitat shifting, which species from another biome, Caatinga in this case, can colonize a new environment and establish. However, some clades evolved in situ, diversifying in the Cerrado biome. The third chapter bring a deeper study on Cerrado evolution, using as model all trees that occur on Cerrado biome. In this chapter we studied the phylogenetic relationships among species that occur in different phytophisiognomies. We conclude that, although cerrado sensu stricto and cerradão be very similar, the other phytophysiognomies have independent evolutionary histories. Lastly, we conclude that phylogenetic knowledge is useful to understand historical and biogeographical processes. The vegetal biodiversity diversification of Cerrado was influenced by historical events like the C4 plants diversification and the uplift of Brazil Central shield. Besides, there are evidences that the Cerrado phytofisiognomies have independent evolutionary histories. The chapters add up previous studies to favour a better comprehension of Cerrado origin and evolution of its biodiversity, bringing new perspectives for future studies. / Entender os processos que norteiam a distribuição geográfica de espécies é um objetivo clássico da Ecologia. Diversas abordagens foram utilizadas para atingir essa meta. O uso de dados filogenéticos para a elucidação e compreensão de processos e padrões ecológicos tem crescido muito nos últimos anos. Entretanto o uso de filogenias para substituir características das espécies, usando a premissa de que espécies filogeneticamente mais próximas são funcionalmente próximas, vem sido contestado ao longo do tempo. A partir desses questionamentos, diversos autores têm pensado qual seria a melhor maneira de se usar o conhecimento filogenético para melhor compreender padrões e processos ecológicos e biogeográficos. O Cerrado é o segundo maior bioma brasileiro e possui uma grande biodiversidade e endemismo de espécies. O conhecimento acerca da evolução do bioma vem crescendo, mas ainda são necessários mais estudos para entender a fundo a origem dessa grande diversidade biológica. Este trabalho teve como objetivo utilizar os conhecimentos filogenéticos para tentar esclarecer a história evolutiva do bioma Cerrado. No primeiro capítulo temos uma análise cienciométrica do artigo “Phylogenies and community ecology” de Webb et al. (2002). Podemos concluir que o artigo foi muito importante para o estabelecimento do campo da “Ecophylogenetics”, pois mesmo apresentando uma visão inicial contestada o trabalho foi importante para chamar a atenção dos pesquisadores acerca da aplicação de filogenias em estudos ecológicos e evolutivos. No segundo capítulo usamos uma abordagem filogenética para compreender a evolução do bioma Cerrado e sua relação com os biomas vizinhos que o cercam, tendo como modelo a subfamília Caesalpinioideae (Fabaceae). Nesse capítulo observamos que a biodiversidade do bioma pode ter se originado por meio do processo de mudança de habitats, no qual espécies de outros biomas, em especial da Caatinga, conseguem colonizar o novo ambiente e se estabelecer. Entretanto, alguns clados passaram pelo processo de evolução in situ, tendo se diversificado dentro do bioma Cerrado. No terceiro capítulo, aprofundamos no estudo da evolução do bioma, tendo como modelo de estudo todas as espécies de árvore que ocorrem no Cerrado. Nesse capítulo estudamos mais a fundo as relações de proximidade filogenética entre as espécies que ocorrem as diferentes fitofisionomias do bioma, chegando à conclusão que, embora o cerrado sensu stricto e o cerradão sejam bastante similares, as demais fitofisionomias possuem histórias evolutivas independentes. Por fim, concluí-se a partir do trabalho, que o conhecimento filogenético é bastante útil para entender processos históricos e biogeográficos. A diversificação da biodiversidade vegetal do Cerrado sofreu influência de eventos tais como a diversificação de plantas C4 e o soerguimento do escudo do Brasil central. Além disso, existem evidências de que o bioma apresente fitofisionomias com histórias evolutivas distintas. Os capítulos somam-se aos demais estudos já realizados para fornecerem uma maior compreensão da origem e evolução da biodiversidade do bioma Cerrado, trazendo novas perspectivas para estudos futuros.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-29T14:33:58Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ariany Rosa Gonçalves - 2016.pdf: 3073896 bytes, checksum: d5b9b860bddb8f75b0e4b5fd48ec6403 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-29T14:34:40Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ariany Rosa Gonçalves - 2016.pdf: 3073896 bytes, checksum: d5b9b860bddb8f75b0e4b5fd48ec6403 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T14:34:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ariany Rosa Gonçalves - 2016.pdf: 3073896 bytes, checksum: d5b9b860bddb8f75b0e4b5fd48ec6403 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The study of genetic variation in plant populations, especially in native Brazilian savanna, is fundamental to understanding the magnitude of biodiversity in ecosystems. Understanding how this variability is structured, gives us evidence of how evolution is acting in these populations, bringing subsidies to trace relevant conservation strategies for these species. Its economic potential is significant, mainly due to its nutritional value. The extractive use of native plants is a warning, because the genetic resources of these plants can be exhausted without even discover their full potential. Given this, the germplasm collections that conserve genetic resources ex situ and in vivo, are an alternative to access information about the species at the same time helps conserve their genetic variability. This study was therefore to characterize, genotypically, individuals of the collection of germplasm Hymenaea stigonocarpa, located in the Escola de Agronomia of the Universidade Federal de Goiás. For this, we used ten microsatellite markers with detection methods by capillary electrophoresis. Individuals in the collection are from fruit collections occurred in 24 locations spanning the Brazilian savanna. In total, were evaluated 353 individuals in 119 progenies. Subpopulations showed moderate level of genetic diversity for the evaluated loci and mean heterozygosity was 0,59. Significant genetic structure was detected on subpopulations (𝜃𝑃 = 0,14), with intrapopulation inbreeding coefficient (f) of 0,12 and total inbreeding (F) 0,25. These results suggest that these subpopulations are not behaving as a panmitic population. Analyses of genetic diversity through the genetic distance of Nei (1972), showed two distinct groups subdivided. The correlation between genetic and geographic distances, doesn’t show a strong relationship between these arrays (r = 0.27), suggesting that the physical distance between subpopulations is not sufficient to differentiate them genetically. The germplasm collection has an effective size of 60, an amount considered sufficient to conduct breeding programs (minimum 50), and presents an allelic representation of 78.84% compared to 32 natural subpopulations. Thus, it can be concluded that the collection of germplasm,satisfactorily, represents the genetic variability of H. stigonocarpa while preserving their diversity, which is essential to support future work of conservation and improvement of the species. / O estudo da variabilidade genética em populações de plantas é fundamental para a compreensão da magnitude da biodiversidade nos ecossistemas. Entender como essa variabilidade está estruturada fornece evidências de como a evolução está atuando nessas populações, trazendo subsídios para traçar estratégias de conservação pertinentes àquela espécie. Uma das espécies nativas do Cerrado que vem sendo alvo de estudos em diversas áreas é Hymenaea stigonocarpa (Fabaceae). Seu potencial econômico é significativo, principalmente graças a seu valor nutricional. O uso extrativista de plantas nativas serve de alerta, pois os recursos genéticos dessas plantas podem se esgotar, sem ao menos descobrirmos seu total potencial. Diante disto, as coleções de germoplasma, que conservam os recursos genéticos de organismos ex situ e in vivo, são uma alternativa para ter acesso às informações sobre a espécie, ao mesmo tempo em que auxilia na conservação de sua variabilidade genética. Este trabalho teve o objetivo de caracterizar, do ponto de vista molecular, os indivíduos que compõem a coleção de germoplasma de H. stigonocarpa, localizada na Escola de Agronomia da Universidade Federal de Goiás. Para tanto, foram utilizados dez marcadores microssatélites com métodos de detecção por eletroforese capilar. Os indivíduos da coleção são provenientes de coletas de frutos ocorridas em 24 localidades de abrangência no Cerrado. No total, foram avaliados 353 indivíduos distribuídos em 119 progênies. As subpopulações apresentaram nível moderado de diversidade genética, para os locos avaliados, com heterozigosidade média esperada de 0,59. Foi detectada estruturação genética significativa nas subpopulações (𝜃𝑃 = 0,14), com coeficiente de endogamia intrapopulacional (𝑓) de 0,12 e endogamia total (𝐹) de 0,25. Estes resultados sugerem que essas subpopulações não estão se comportando como uma população panmítica. As análises de divergência genética, por meio da distância genética de Nei (1972), apresentaram dois grupos distintos subdivididos. A correlação entre as distâncias genética e geográfica, demonstra que não há uma relação muito forte entre essas matrizes (𝑟 = 0,27), sugerindo que a distância física entre as subpopulações não é suficiente para diferenciá-las geneticamente. A coleção de germoplasma detém um tamanho efetivo de 60, valor considerado suficiente para a condução de programas de melhoramento (mínimo 50), além de apresentar uma representatividade alélica de 78,84% com relação a 32 subpopulações naturais. Assim, pode-se concluir que a coleção de germoplasma representa satisfatoriamente a variabilidade genética de H. stigonocarpa, preservando sua diversidade, o que é fundamental para subsidiar futuros trabalhos de conservação e melhoramento da espécie.

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-09-08T17:05:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Brayan Maurício Rodrigues Garzon - 2016.pdf: 1077822 bytes, checksum: 22f0f3e54ede997e3bbec84f88406474 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-09-08T17:05:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Brayan Maurício Rodrigues Garzon - 2016.pdf: 1077822 bytes, checksum: 22f0f3e54ede997e3bbec84f88406474 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-08T17:05:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Brayan Maurício Rodrigues Garzon - 2016.pdf: 1077822 bytes, checksum: 22f0f3e54ede997e3bbec84f88406474 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In this work we study and show the existence of traveling waves solutions for a system of parabolic partial differential equations (PPDE’s) which model in-situ combustion process in porous medium. The in-situ combustion process is a thermal method to recovery oil from petrolific reservoirs. The system deduction is making considering two layers of porous rock and aplying the physical laws of balance energy, fuel mass, oxygen mass, total gas mass, and the Darcy’s law which link the pressure and volumetric flow rate. The traveling waves are obtained making an useful variavel change such that convert the PPDE’s system in an ordinary differential equations system (ODE’s) where the existence of heteroclinic orbits is equivalent to the existence of a traveling waves for the system of PPDE’s which connect the burned state to the unburned state. In the proof of the existence and uniquess of such orbits are used basic tools in Qualitative Ordinary Differential Equations Theory, Dynamical Systems, Perturbation Theory and TravelingWaves Theory with special mention to Singular Perturbation Theory and Melnikov Method inside of the perturbation theory. / Neste trabalho estudamos e mostramos a existência de soluções do tipo onda viajante para um sistema de equações diferenciais parciais parabólico (EDPP’s) que modela um processo de combustão in-situ através de um meio poroso. A combustão in-situ é um método térmico de recuperação de óleo de reservatórios petrolíferos. O sistema é deduzido considerando duas camadas de rocha porosa e aplicando as leis físicas de balanço de energia, de massa de combustível, oxigênio, gás total, e a lei de Darcy que relaciona a pressão e a vazão volumétrica dos fluidos considerados. As ondas viajantes são obtidas fazendo uma mudança de variáveis apropriada de modo que o sistema de EDPP’s se transforme num sistema de equações diferenciais ordinárias (EDO’s), onde a existência de uma orbita conectando dois equilíbrios corresponde-se com a existência de uma onda viajante do sistema de EDPP’s, conectando um estado totalmente queimado com um estado não queimado. Para a prova de existência e unicidade das referidas órbitas são utilizadas ferramentas básicas da Teoria qualitativa das Equações Diferenciais Ordinárias, Sistemas Dinâmicos, Teoria da Perturbação e Teoria de Ondas Viajantes, ressaltando dentro da teoria da perturbação a técnica da Perturbação Singular Geométrica e o Método de Melnikov.

A furosemida é um fármaco de ação diurética e amplamente utilizado em tratamentos de doenças renais, cardíacas e pulmonares. Sua absorção é problemática e de alta variabilidade inter e intraindividual. Este fármaco tem sido classificado como pertencente às classes II (baixa solubilidade e alta permeabilidade) ou IV (baixa permeabilidade e baixa solubilidade) do Sistema de Classificação de Biofarmacêutica (SCB). Em estudos anteriores da equipe de pesquisa, SPRICIGO e colaboradores (2008) e SILVA (2014) desenvolveram complexos de furosemida com hidroxipropil-&#946;-ciclodextrina que permitiram a otimização da solubilidade deste fármaco. Entretanto, dados sobre a sua permeabilidade intestinal, quando complexado, não foram determinados. Somando-se a isto, a literatura apresenta informações distintas em relação a este parâmetro, o que corrobora a importância de se avaliar a permeabilidade deste fármaco. Diversas técnicas têm sido empregadas para a avaliação da permeabilidade intestinal dos fármacos. No presente trabalho empregou-se o modelo de perfusão in situ de passagem tripla, cuja técnica possibilita avaliar a permeabilidade em três segmentos diferentes em um mesmo animal e ainda, apresenta características interessantes, pois trata-se de um método que proporciona, durante todo o experimento, condições mais próximas daquelas encontradas durante o processo in vivo de absorção de fármacos no intestino tais como: suprimento sanguíneo, inervação intacta, preservação das proteínas transportadoras de membranas e presença da camada de muco. O presente trabalho foi dividido nas seguintes etapas: (i) obtenção da furosemida complexada com hidroxipropil-&#946;-ciclodextrina, (ii) caracterização dos fármacos utilizando técnicas de análises térmicas, (iii) estudo de perfusão in situ de passagem tripla nos três segmentos intestinais (duodeno, jejuno e íleo) de ratos machos Wistar na ausência e na presença de inibidores da glicoproteína P e de enzimas metabolizadoras CYP3A4 com posterior análise estatística do impacto da ciclodextrina e inibidores na permeabilidade da furosemida e; (iv) análise histológica das microvilosidades intestinais após o ensaio de perfusão in situ nos três segmentos intestinais. Os valores encontrados em cada segmento para furosemida complexada foram: 8,58 ± 0,002 x 10-5 cm.s-1; 9,15 ± 0,003 x10-5 cm.s-1 e; 8,06 ± 0,002 x 10-5 cm.s-1, respectivamente para duodeno, jejuno e íleo enquanto que para furosemida pura encontraram-se os seguintes: 3,42 ± 0,08 x 10-5 cm.s-1 para duodeno; 3,87 ± 0,11 x 10-5 cm.s-1 para jejuno e 3,08 ± 0,001 x 10-5 cm.s-1 para íleo. Assim sendo, os valores obtidos para a permeabilidade da furosemida complexada foram significativamente superiores (p < 0,05) aos da furosemida pura, sugerindo que, a ciclodextrina pode ter influência no mecanismo de transporte da furosemida, que é via passiva paracelular. Quanto aos mecanismos envolvidos na permeabilidade da furosemida através dos enterócitos, pode-se sugerir que observou-se pouca influência dos inibidores da glicoproteína P (P-gp) e da enzima CYP3A4, sugerindo que não há uma participação importante destes mecanismos em sua absorção intestinal. / Furosemide, which is a diuretic drug, is widely used in heart, kidney and pulmonary disease treatments. The absorption is problematic with high variability inter and intra individuals. This drug has been classified as belonging to class II (low solubility and high permeability) or IV (low permeability and low solubility) of the Biopharmaceutical Classification System (BCS). In previous studies of the research team, Spricigo and colleagues (2008) and Silva (2014) developed complex of furosemide with hydroxypropyl-&#946;-cyclodextrin which allowed the optimization of the solubility of this drug. However, datas concerning it\'s intestinal permeability, when complexed, have not been determined. Addicted to this, the literature shows many information regarding to this parameter, which confirms the importance of the evaluation of the permeability of this drug. Some techniques have been employed in order to evaluate the intestinal permeability of drugs. In the present work, a triple single-pass intestinal perfusion technique was used for three different segments. This technique enables the evaluation of the permeability of different segments in the same animal and also has interesting features such as: it provides during all the experiment conditions closer to those found in in vivo process of a drug absorption in the gut; blood supply; intact innervations; preservation of membrane transporter proteins and presence of mucus layer. This study was divided into the following steps: (i) obtaining furosemide complexed with hydroxypropyl-&#946;-cyclodextrin, (ii) characterization of drugs using techniques of thermal analysis, (iii) perfusion study in situ triple passage in three segments (duodenum, jejunum and ileum) from male Wistar rats in the absence and presence of inhibitors of P-glycoprotein and metabolizing enzymes CYP3A4 and subsequential statistical analysis of the impact of the cyclodextrin and the inhibitors in the permeability of furosemide and (iv) histological analysis of intestinal microvilli after in situ perfusion assay in three segments. The values found in each segment for complexed furosemide were: 8,58 ± 0,002 x 10-5 cm.s-1; 9,15 ± 0,003 x 10-5 cm.s-1; 8,06 ± 0,002 x 10-5 cm.s-1, respectively for duodenum, jejunum and ileum while for pure furosemide, the values were: 3,42 ± 0,08 x 10-5 cm.s-1 to duodenum; 3,87 ± 0,11 x 10-5 cm.s-1 to jejunum and 3,08 ± 0,001 x 10-5 cm.s-1 to ileum. Thus, the values obtained for the permeability of the complexed furosemide were significantly higher (p < 0,05) than those found for pure furosemide, suggesting that the cyclodextrin might have an influence on the transport mechanism of furosemide, which is passive paracellular route. About the mechanisms involved in the permeability of furosemide through the enterocytes, it can be suggested that there was little effect of P-glycoprotein (P-gp) inhibitors and CYP3A4 enzyme, suggesting that there is an important role of these mechanisms in the furosemide intestinal absorption.

O conhecimento do genoma humano e os avanços na biologia molecular levaram a descoberta de mecanismos celulares importantes. A terapia gênica surgiu com a proposta de interferir na fisiologia das células, que apresentam alguma disfunção causadora de uma doença, trazendo a possibilidade de tratamento para incontáveis enfermidades. Na tecnologia de RNA de interferência pequenos fragmentos de RNA de fita dupla (small interference RNA, siRNA) são utilizados para inibir a expressão de genes específicos. O olho tem sido um dos órgãos alvo para o uso desse tipo de tecnologia e, além disso, a córnea é uma membrana atrativa devido ao fácil acesso e a existência de diversas enfermidades que acometem a visão. Para aumentar a biodisponibilidade e viabilizar a administração de siRNA utilizando um polímero catiônico, uma formulação termorreversível com quitosana e outra composta de cristais líquidos funcionalizados com ácido hialurônico foram estudadas como possíveis sistemas de liberação ocular de siRNA, sendo que ambas são inéditas para aplicação tópica e oftálmica de siRNA. O gel termorreversível de poloxamer 407 foi associado a dois diferentes tipos de quitosana (LMW com 92,2% de desacetilação e MMW com 77,0% de desacetilação). Ambas as formulações apresentaram características desejáveis tanto como sistema de liberação de genes, tanto por apresentarem residual positivo e capacidade de complexar o siRNA, quanto como sistema compatível com via tópica ocular, devido ao comportamento reológico pseudoplástico. A quitosana LMW e a adição de NaCl à formulação alteraram a Tsol/gel do poloxamer; somente a associação com a quitosana MMW apresentou Tsol/gel adequada. Os sistemas contendo poloxamer em associação com os dois diferentes tipos de quitosana não promoveram a penetração do siRNA in vitro em córnea bovina nas condições experimentais utilizadas. O sistema líquido cristalino foi desenvolvido com monoleína (MO), polietilenimina (PEI), ácido hialurônico (HA) e fase aquosa. A formação de fases cristalinas foi avaliada por microscopia de luz polarizada e a estrutura das mesofases foi confirmada pela difração de raios X a baixo ângulo. O sistema líquido cristalino, composto de uma mistura de cristais de fase cúbica e hexagonal, foi disperso em nanopartículas de tamanho satisfatório, de aproximadamente 166 nm. Os sistemas apresentaram características desejáveis como sistema de liberação de genes, como potencial zeta adequado, capacidade de complexar sem degradar o siRNA e não foram citotóxicos em fibroblastos L929, além de serem compatíveis com a via ocular por serem isotônicos. A dispersão de cristais de MO/PEI foi capaz de transfectar as células L929, entretanto a incorporação do HA diminuiu a absorção celular, provavelmente devido ao elevado peso molecular do ácido hialurônico empregado. O presente estudo permite delinear o futuro desenvolvimento de formulações tópicas para administração de siRNA na córnea. / The understanding of human genome and the evolvement of molecular biology led to discovery of important cellular mechanisms. Gene therapy has emerged as an approach to interfere with cell physiology, whenever it has a dysfunction that causes a disease, bringing new possibility of treatment to countless illnesses. In RNA interference mechanism, small double-stranded RNAs (small interference RNA, siRNA) inhibit specific gene expression. The eye has been one of the targeted organs for the use of such technology and, moreover, the corneal membrane is an attractive tissue due to the easy access and the existence of several diseases that can impair vision. To enhance bioavailability and facilitate the delivery of siRNA using a cationic polymer, a thermoreversible formulation containing chitosan and a liquid crystalline formulation functionalized hyaluronic acid were studied as potential delivery systems for ocular delivery of siRNA and both this systems are inedited as topical and ocular delivery of siRNA. A poloxamer 407 thermoreversible gel of was associated with two different types of chitosan (LMW with 92.2% deacetylation and MMW with 77.0% deacetylation). Both formulations showed desirable characteristics not only as gene delivery systems due to positive residual charge and capacity for complexing the siRNA, but also as a compatible ocular delivery system, due to pseudoplastic rheological behavior. The LMW chitosan and addition of NaCl to the formulation influenced the Tsol/gel of poloxamer gel; only the association with MMW chitosan showed desirable Tsol/gel. The systems containing poloxamer in combination with two different types of chitosan did not promote in vitro penetration of siRNA using bovine cornea under the used experimental conditions. The liquid crystalline system was developed with monoolein (MO), polyethylenimine (PEI), hyaluronic acid (HA) and aqueous phase. The formation of crystalline phases was observed by polarized light microscopy and the mesophases structures were confirmed by small angle X-ray diffraction. The liquid crystalline system composed of a mixture of hexagonal and cubic phases was dispersed into nanoparticles of suitable size, of approximately 166 nm. The formulations showed desirable characteristics as gene delivery systems, such as suitable zeta potential, ability to complex without degrading the siRNA and were not cytotoxic to fibroblasts L929, moreover, were compatible with the ocular administration due to isotonicity. The dispersion of crystals of MO/PEI was able to transfect L929 cells, however the incorporation of the HA decreased cellular uptake, probably due to high molecular weight hyaluronic acid employed. This study provides an outline for the future development of topical formulations to deliver siRNA to the cornea.