Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Resumo: Dentre as biotecnologias de reprodução que visam acelerar os ganhos genéticos e econômicos dos rebanhos, a congelação de sêmen desponta como uma das principais. O sêmen congelado bovino é utilizado em larga escala há anos e não houve grandes evoluções nas técnicas de congelação visando minimizar os efeitos deletérios do processo nos espermatozóides, colaborando ativamente para o incremento da fertilidade dos rebanhos. Neste trabalho propôs inovações nas técnicas de congelação utilizando uma nova formulação de meio diluente, a introdução da centrifugação para a remoção do plasma seminal pré-congelação e a determinação do tempo ideal de estabilização do sêmen. Foram realizados três experimentos; o primeiro testou o efeito de três diferentes meios diluentes, com ou sem a remoção do plasma seminal, no ejaculado de 40 touros diferentes. Nos resultados exibidos o diluente M20 foi superior (p<0,01) aos demais diluentes na maioria das variáveis pesquisadas a remoção do plasma seminal melhorou (p<0,01) os índices de congelabilidade do sêmen. Outro experimento foi a verificação dos tempos de 60, 120, 180 e 240 min. de refrigeração do sêmen a 5ºC. O tempo de 180 minutos foi o considerado o melhor para a congelabilidade após a verificação dos resultados. No teste de fertilidade foram inseminados 418 vacas e o grupo que foi inseminado com sêmen congelado com M20 sem plasma seminal obteve uma tendência de superioridade (0,05<p<0,10) aos demais grupos. Com os resultados dos experimentos concluiu-se que as inovações propostas por este estudo incrementam os índices de congelabilidade do sêmen bovino / Abstract: Semen freezing is considered as one of the main reproduction biotechnologies that aim to accelerate genetic and economical gains of herds. Frozen bovine semen has been used in large scale for years and there were not great evolutions in freezing techniques to minimize the deleterious effects of the process in spermatozoa, actively contributing for the increase in herds fertility. Innovations in freezing techniques were proposed in this work by using a new formulation of the extenders, introducing centrifugation for the removal of prefreezing seminal plasma and determining the appropriate time for semen cooled. Three experiments were carried out: 1) the effect of three different extenders was tested, with or without the removal of seminal plasma, in the ejaculate of 40 different bulls; results showed that the extender M20 was superior (p<0,01) in relation to the other extenders in most of variables studied. The removal of the seminal plasma improved (P<0,01) semen freezability indexes. 2) verification of 60, 120, 180 and 240 min. times for semen cooling at 5ºC; after results, the time of 180 minutes was considered the most appropriate for freezability. 3) fertility test: 418 cows were inseminated and the group with frozen semen with M20 without seminal plasma obtained a superiority tendency (0,05<p<0,10) in relation to the other groups. The results of the experiments concluded that the innovations proposed in this work increase freezability indexes of bovine semen / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: José Antonio Dell'Aqua Júnior / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: A utilização de sêmen criopreservado na reprodução de eqüinos depara-se com obstáculos como: variabilidade entre garanhões e ejaculados ao processo de criopreservação, taxas de prenhez inferiores ao sêmen fresco e refrigerado, manejo mais trabalhoso e oneroso das éguas e ausência de padrões de qualidade na distribuição e comercialização do sêmen. Neste trabalho foram realizados dois experimentos, no qual primeiramente, avaliou-se o efeito de diferentes concentrações espermáticas em palhetas de 0,5 mL (100, 200 e 400 x 106 de espermatozóides totais/mL) sobre algumas variáveis de qualidade seminal pós-descongelação como: parâmetros de cinética espermática através de análise computadorizada, integridade de membrana plasmática e resistência à peroxidação lipídica. Posteriormente, realizou-se um estudo comparativo entre a inseminação pós-ovulação e a inseminação em tempo pré-determinado, avaliando-se os resultados de concepção e acúmulo de fluido intra-uterino pós-inseminação. Ao empregar a metodologia de inseminação pós-ovulação, realizou-se uma única inseminação dentro do intervalo de até 6 horas pós-ovulação com 800x106 de espermatozóides totais e para o método programado, realizaram-se duas inseminações após 24 e 40 horas pós-indução da ovulação, com 400x106 de espermatozóides totais cada. Foi observado efeito significativo da concentração espermática (p<0,05) sobre algumas variáveis de cinética espermática como: motilidade total, motilidade progressiva, velocidade ao longo de uma trajetória média, velocidade progressiva, velocidade curvilinear, freqüência de batimento flagelar e espermatozóides rápidos, com superioridade para a criopreservação em concentrações mais baixas. No entanto, para as variáveis de integridade de membrana plasmática e resistência à peroxidação lipídica não foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The cryopreserved semen application in equine reproduction appears with obstacles as variability between stallions and ejaculates at the cryopreservation process, lower pregnancy rates compared to the fresh and cooled semen, harder and onerous mares' management and absence of quality pattern in distribution and semen commercialization. In this study were realized two experiments which one, firstly, was evaluated the effect of different sperm concentrations in straws of 0.5 mL (100, 200 and 400x106 total sperm/mL) over some variables of seminal quality after thaw as: parameters from sperm kinetics by computer analysis, plasmatic membrane integrity and resistance to lipid peroxidation. Subsequently, it was realized a comparative study between the insemination after ovulation and the insemination in fixed-time, evaluating the results of conception and intrauterine fluid collection after insemination. When the methodology of insemination after ovulation was employed, it was realized a single insemination during the interval of 6 hours after ovulation with 800x106 total spermatozoa and for the programmed method, two inseminations with 400x106 doses of total spermatozoa each one, were done after 24 and 40 hours after induction of ovulation. It was observed significant effect from sperm concentration (p<0,05) over some variables of sperm kinetics like: total motility, progressive motility, velocity in the average path velocity, straight line velocity, curvilinear velocity, beat cross frequency and rapid spermatozoa, with superiority for cryopreservation in lower concentrations. However, for the variables of plasmatic membrane integrity and resistance to lipid peroxidation were not observed significant effects. In respect to the insemination methods, it was not observed significative effect (p<0.05) over the pregnancy rates between one insemination after ovulation and two inseminations... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Resumo: Este estudo avaliou o efeito de injeções de GnRH (hormônio liberador de gonadotrofina) ou hCG (gonadotrofina coriônica humana) no dia 5 após inseminação artificial (IA) nas taxas de concepção em vacas lactantes durante o verão. Vacas holandesas, n=158, produzindo 26±9 kg de leite/dia e 213±112 dias pós-parto (DPP), foram aleatoriamente distribuídas em 3 grupos: Controle (GC; n=52); GnRH (GG; n=55), 100 mcg IM. de gonadorelina (Cystorelinâ); e hCG (GH; n=51), 2500 UI IM de hCG (Vetecorâ). A temperatura retal foi verificada no momento da IA, e as amostras de sangue coletadas nos dias 5; 7 e 12 após IA para avaliar as concentrações séricas de progesterona (P4). A prenhez foi determinada entre os dias 42 e 49 após IA. Os dados foram analisados pelo procedimento MIXED do SAS, e foram incluídos no modelo efeitos do tratamento, ordem de lactação, produção de leite, temperatura retal no momento da IA e suas interações. O tratamento com GnRH ou hCG aumentou a P4 sérica (P<0,01). As concentrações séricas de P4 (ng/ml; média ± EPM) para GC, GG, e GH foram, respectivamente, no dia 5: 2,71±0,43; 2,45±0,44 e 3,23±0,45, no dia 7: 4,79±0,43; 4,15±0,44 e 5,75±0,45, e no dia 12 após IA: 5,21±0,43; 6,91±0,44 e 8,50±0,45. Devido ao aumento proporcional na concentração sérica de P4 entre os dias 5 e 7 após IA (GC: 77, GG: 69, GH: 77%; P<0,01) é provável que os tratamentos não tenham induzido o efeito luteotrópico no CL existente, porém devido ao grande aumento na P4 sérica no dia 12 nos animais tratados (GG: 112, GH: 87%; P<0,01) em relação aos animais controle (GC: 16%; P=0,31), provavelmente houve a indução de um novo CL. A temperatura retal média das vacas no momento da IA foi de 39,7°C e o tratamento com GnRH ou hCG aumentou as taxas de concepção (média ± EPM) nas vacas com temperatura retal abaixo de 39,7°C... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study evaluated the effect of GnRH (gonadotropin releazing hormone) or hCG (human chorionic gonadotropin) injection on day 5 after artificial insemination (AI) on conception rates in lactating dairy cows during the summer. Holstein cows, 158, producing 26 ± 9 kg milk/d and 213 ± 112 days in milk, were randomly assigned to one of 3 treatments groups: control (CG: n=52); GnRH (GG: n=55), injection of 100 mcg i.m. of gonadorelin (Cystorelin®) and hCG (HG: n=51), injection of 2500 UI hCG i.m. (Vetecor®). Rectal temperature was checked at the moment of AI and blood samples collected on days 5, 7 and 12 after AI to evaluate serum progesterone (P4) concentrations. Pregnancy was determined between 42 and 49 d after AI. Data were analyzed by the MIXED procedure of SAS and were included in the model the effects of treatment, parity, milk production, rectal temperature at the moment of AI and interactions. Treatment with GnRH or hCG increased serum P4 (P<0,01). Serum P4 concentrations (ng/ml, mean±SEM) for CG, GG and HG were, respectively, on day 5 2.71±0.43, 2.45±0.44 and 3.23±0.45, on day 7, 4.79±0.43, 4.15±0.44 and 5.75±0.45 and on day 12 after AI, 5.21±0.43, 6.91±0.44, 8.50±0.45. Due to the proportional increase in serum P4 concentration from d 5 to 7 after AI (CG: 77, GG: 69, HG: 77%, P<0,01), it is likely that treatments did not have luteotropic effect on the existing CL, but due the higher increase in serum P4 on day 12 in the treated animals (GG: 112, HG: 87%; P<0,01) in relation to the control group animals (GC: 16%; P=0,31), probably induced the formation of a new CL. The average rectal temperature of cows at time of AI was 39,7°C. Treatment with GnRH and hCG increased conception rates (mean±SEM) in cows with rectal temperature below 39,7°C (CG: 10.1±0.075, n= 26, GG: 36.8±0.073, n=27, HG: 32.8±0.088%, n=21; p<.01)... (Complete abstract click electronic address below) / Mestre

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Lucianao Andrade de Silva / Banca: Rubens Paes de Almeida / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a relação entre a intensidade de alterações degenerativas endometriais e da idade com a hemodinâmica uterina durante o período posterior à infusão de sêmen (Experimento 1) e durante a fase inicial da gestação (Experimento 2). Vascularidade, contratilidade e índices Doppler do útero foram mensurados durante as 12 primeiras horas pós-inseminação artificial (IA) no experimento1. Não foi observado (P>0,1) efeito da posição do folículo pré-ovularório sobre a hemodinâmica e contratilidade uterina. Um aumento na vascularidade foi detectado (P<0,001) em éguas velhas e com degeneração endometrial moderada (GII) e intensa (GIII) nas duas primeiras horas pós-IA. Índices de pulsatilidade (PI) e resistência (RI) uterina mantiveram-se constante durante as 12 horas pós-IA em éguas dos grupos GII, jovens e velhas (P>0,05). Um aumento na atividade contrátil do útero foi detectado (P<0,0001) nas horas 1 e 2, independente do grupo experimental (P>0,05). No experimento 2, os parâmetros citados acima, além de características luteais (área e vascularidade) e diâmetro da vesícula embrionária foram avaliados diariamente em éguas gestantes e não gestantes. Aumento e diminuição, respectivamente, na vascularidade e índices Doppler uterinos foram detectados (P<0,05) em D4 (D0=dia da ovulação) em éguas gestantes e não gestantes. Um aumento progressivo na perfusão sanguínea com pronunciada vascularidade no corno ipsi-lateral ao embrião foi observado em éguas gestantes a partir de D12 (P<0,001). Efeito da idade e da intensidade das alterações degenerativas endometriais sobre a vascularidade e índices Doppler do útero gravídico foram detectados (P<0,01). A contratilidade uterina foi máxima (P<0,001) entre D10 e D17 da gestação independente da classificação histológica do... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The overall purpose of the present study was to evaluate the relationship between endometrial degenerative changes and age on the uterine hemodynamics of mares during the post-breeding (Experiment 1) and early gestation phases (Experiment 2). Vascularity, contractility and Doppler indices from the uterus were measured hourly during the first 12 hours post-artificial insemination (AI) in experiment 1. Hemodynamics and contractility of the uterus did not change (P>0.1) by pre-ovulatory follicle position. Increased uterine vascularity was observed (P<0,001) on hours 1 and 2 in older and moderate (GII) and intense (GIII) endometrial degeneration mares. Pulsatility and resistance indices (PI and RI, respectively) did not change (P>0.05) through the experiment 1 age groups (younger and older mares) mares with moderate endometrial degeneration. Independently of the age and endometrial degenerative changes, increased uterine contractility was observed (P<0,0001) in the first two hours post-AI. In experiment 2, the same end points were measured every day. Additionally, luteal vascularity and embryonic vesicle diameter were evaluated. On D4 (D0 = day of ovulation), increased vascularity and decreased Doppler indices were detected (P <0.05) in pregnant and nonpregnant mares. A progressive increase on the uterine vascular perfusion and greater vascularity in the horn with embryo were observed in pregnant mares from D12 (P <0.001). Effect of age and intensity of endometrial degenerative changes on the vascularity and Doppler indices of the gravidic uterus were detected (P<0.01). Uterine contractility was greater (P<0.001) between days 10 and 17 of pregnancy regardless of the uterine histological classification and age of mares (P> 0.05). Mean luteal vascularity and plasmatic... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Ana Paula Coelho Ribeiro / Banca: Maria Isabel de Mello Martins / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a taxa de concepção em cadelas após inseminação artificial intrauterina por videolaparoscopia. Um total de 20 cadelas foram inseminadas, sendo 10 com sêmen fresco e 10 com sêmen congelado. Os animais se encontravam em estro natural e sob acompanhamento da citologia vaginal. Quando aproximadamente 90% das células se apresentaram cornificadas, foram realizadas dosagens séricas de progesterona afim de se determinar o momento exato da inseminação. Três machos foram utilizados como doadores de sêmen e as coletas foram realizadas por manipulação digital. Após coleta o ejaculados foram analisados quanto ao volume, motilidade, vigor e concentração espermática. Para a inseminações utilizando sêmen fresco, a coleta foi realizada momentos antes do procedimento, e o sêmen acondicionados em banho-maria a 37°C até o momento da inseminação. Amostras destinadas a inseminação com sêmen descongelado, obtiveram mesmo processo de análises após coleta, seguindo para o processo de congelação, permanecendo congeladas por no mínimo uma semana, e então descongeladas momentos antes do procedimento. De acordo com os concentrações séricas de progesterona, as inseminações intrauterinas por videolaparoscopia foram realizadas, sendo cada corno uterino inseminado com 1mL de sêmen, em concentração de 250x106 espermatozóides/mL nas cadelas inseminadas com sêmen fresco e 80x106 espermatozóides/mL naquelas inseminadas com sêmen congelado. Após 7 dias as cadelas foram ováriosalpingohisterectomizadas, sendo o lúmen das tubas e cornos uterinos lavados com solução de PBS. Embriões foram encontrados nos lavados de 7 cadelas inseminadas com sêmen fresco, e em 5 inseminadas com sêmen descongelado. Concluiu-se que o procedimento de inseminação artificial intrauterina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the fertility in bitches after intrauterine artificial insemination by videolaparoscopy. A total of 20 bitches were inseminated, being 10 with fresh semen and 10 with frozen. The animals were in natural oestrus, and their vaginal cytology was followed. When approximately 90% of the cells were cornificated, evaluation of serum levels of progesterone was performed, with the objective to determinate the exact moment of the artificial insemination. Three males were used as donors, and the samples collection was performed by digital manipulation. After collection the ejaculates were analysed considering volume, motility, vigor and sperm concentration. For the inseminations using fresh semen the collection was performed minutes before the process, and the semen sample was maintained at 37°C. Samples destined to inseminations using frozen semen were submitted to the same analysis process after collection, followed by the freezing process, being frozen during a minimum period of one week, and thawing moments before the procedure. According to the serum levels of progesterone, the intrauterine inseminations by videolaparoscopy were performed, being each uterine corn inseminated with 1 mL of semen, with 250x106 espermatozoa/mL in bitches with fresh semen and 80x106 espermatozoa/mL in bitches with frozen semen. After 7 days the bitches were ovariohysterectomized, and the lumen of the uterine tube and corns were flushed with PBS solution. Embryos were found in 7 bitches inseminated with fresh semen, and in 5 inseminated with frozen semen. It was concluded that the intrauterine artificial insemination by videolaparoscopy seems to be an interesting reproductive biotechnology method, especially in what refers to the use of frozen semen. / Doutor

Orientador: José Gonçalves Franco Júnior / Banca: Anagloria Pontes / Banca: José Carlos Peraçoli / Banca: Valdemar Ortiz / Banca: Mario Cavagna Neto / Resumo: Desde o primeiro relato de sucesso em humanos, a Injeção Intracitoplasmática de Espermatozóide (ICSI) tem sido particularmente indicada para casos de alterações seminais graves, sendo já demonstrada uma relação diretamente proporcional entre os resultados deste procedimento e a qualidade seminal. Tem sido sugerido que a incapacidade de o espermatozóide iniciar a ativação oocitária seja uma das principais causas de falha de fertilização após a ICSI. Estudos prévios identificaram o cálcio como um importante segundo mensageiro durante a ativação oocitária e que o tratamento com ionoforo do calcio e capaz de favorecer a ativação oocitária, resultando em fertilização, desenvolvimento embrionário e gestações normais. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da Ativação Oocitária Artificial (AOA) com ionoforo do calcio A23187 em ciclos de ICSI quando utilizados espermatozóides de diferentes origens. Foram avaliados 314 ciclos de ICSI divididos em tres Grupos: EJACULADO (n = 92), EPIDIDIMARIO (n = 82) e TESTICULAR (n = 140), sendo cada um deles dividido em subgrupos, dependendo da realizacao (Subgrupo AOA) ou nao de AOA (Subgrupo Controle . CT). Foram avaliados tambem separadamente os ciclos de mulheres com idade inferior a 36 anos, objetivando minimizar o efeito da idade sobre os resultados dos tratamentos. Para a ativação oocitária, os oócitos foram mantidos por 30 minutos apos a ICSI em meio de cultivo para AOA, contendo 5ÊM de ionoforo de calcio A23187 e em aproximadamente 20 horas a fertilizacao foi confirmada pela presenca de 2 Pro-Nucleos. Para cada grupo experimental foram comparados, entre os Subgrupos AOA e CT, os seguintes parametros: taxa de fertilizacao normal, taxa de falha parcial de fertilizacao, porcentagem de bons embrioes no dia da transferencia, taxa de gestacao clinica, taxa de implantacao e taxa de abortamento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Since the first report of a birth after ICSI, it has been specially used for severe male factor of infertility and it was demonstrated that the semen quality influences the ICSI outcomes. Previous studies suggested that failure of fertilization after ICSI may be due to a spermatozoa inability in trigger the oocyte activation. Calcium has long been identified as a universally important second messenger during oocyte activation and many studies demonstrated that treatment with calcium ionophore may increase the free intracellular calcium, promoting oocyte activation, resulting in fertilization, embryo development and pregnancies. The aim of this study was to evaluate the effect of artificial oocyte activation (AOA) with calcium ionophore A23187 in ICSI cycles using sperm from different origins. It was evaluated 314 ICSI cycles divided in groups according to the origin of spermatozoa: EJACULATED group (n = 92), EPIDIDYMAL group (n = 82) and TESTICULAR group (n = 140). Each group was split into sub-groups depending on the AOA treatment: sub-group AOA, when it was performed AOA and sub-group Control-CT, when it was not performed AOA. Furthermore, it was evaluated separately only cycles in each woman were younger then 36 years old. After ICSI, oocytes were incubated in culture medium containing calcium ionophore A23187 (5ìM concentration) for 30 minutes and in approximately 20 hours oocytes were checked for normal fertilization, defined as observation of two distinct pronucleous. For each experimental group the following parameters were compared between the sub-groups AOA and CT: normal fertilization rate; partial fertilization fail rate; percentage of high quality embryos on the transfer day; implantation rate; pregnancy rate and miscarriage rate. For all the evaluated parameters, it was not observed any significant difference between the subgroups for the three spermatozoa origin groups.... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Cássia Maria Barroso Orlandi / Resumo: Estudos recentes têm demonstrado diferentes respostas do CL quando da administração de prostaglandina F2α em diferentes doses e momentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do tratamento com baixas doses de PGF2α sobre características funcionais e estruturais de CLs em fases distintas do diestro em éguas. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em 8 grupos: D2-NaCL (n=6; 2 mL de solução de NaCl à 0,9%); D2-Pgf (n=9; 10 mg de Dinoprost Trometamina); D2-1/10Pgf (n=6; 1 mg de Dinoprost Trometamina); D2-1/20Pgf (n=6; 0,5 mg de Dinoprost Trometamina); D8-NaCl (n=7; 2 mL de solução de NaCl à 0,9%); D8-Pgf (n=6; 10 mg de Dinoprost Trometamina); D8-1/10Pgf (n=7; 1mg Dinoprost Trometamina); D8-1/20Pgf (n=7; 0,5 mg de Dinoprost Trometamina). A área total do CL (AT), a perfusão sanguínea objetiva (PVO) e subjetiva (PVS) do CL e as concentrações plasmáticas de progesterona (P4) foram avaliados a cada 6 horas durante 48 horas (H0 = momento imediatamente antes do tratamento). A AT não sofreu interferência da dose de PGF2α independente do dia de tratamento. A P4 apresentou uma correlação positiva com a PVO e PVS, sendo esta última mais sensível na detecção das alterações de P4. O tratamento no D2 não foi capaz de induzir a luteólise completa em nenhuma égua enquanto que o tratamento no D8 promoveu luteólise completa em todas as éguas do grupo controle positivo e parcial e completa em algumas éguas dos grupos D8-1/10Pgf e D8-1/20Pgf. Resposta dose-dependente da PGF2α foi observada, ou seja, quanto menor a dose aplicada menor as quedas em PVS e P4. Conclui-se que a resposta do CL ao tratamento com diferentes doses de PGF2α depende da fase de desenvolvimento do CL / Abstract: Recent studies have demonstrated different response of the CL to different doses of prostaglandin F2α on differente moments. The present experiment aims to evaluate the effect of treatments with PGF2α low doses over functional e structural characteristics of the CLs at two distintic stages. Mares were randomly assigned into groups: D2-NaCL (n=6; 2 mL of saline solution); D2-Pgf (n=9; 10 mg of Dinoprost Tromethamine); D2-1/10Pgf (n=6; 1 mg of Dinoprost Tromethamine); D2-1/20Pgf (n=6; 0,5 mg of Dinoprost Tromethamine); D8-NaCl (n=7; 2 mL of saline solution; D8-Pgf (n=6; 10 mg of Dinoprost Tromethamine); D8-1/10Pgf (n=7; 1mg of Dinoprost Tromethamine); D8-1/20Pgf (n=7; 0,5 mg of Dinoprost Tromethamine). Total area (AT), objective (PVO) and subjective (PVS) vascular perfusion of the CL and plasmatic progesterone (P4) were evaluated every six hours for 48h after treatment (H0 = immediately before treatment). PGF2α did not influenced on AT or day of treatment. P4 showed a positive correlation to PVO and PVS, and PVS was strongly correlated to P4. Treatment on D2 was not able to induce total luteolysis in any mare while treatment on D8 promoted total luteolysis in all mares in group D8-Pgf and 29% and 14% of the mares for the groups D8-1/10Pgf and D8-1/20Pgf, respectively. Parical luteolysis were also detected in groups on D8. The response to PGF2α seems to be dose-dependent, the decrease in PGF2α dose proportionally decreases PVS and P4. It is concluded that CL response to treatment with different doses of PGF2α depends os the CL developmental stage / Mestre

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Frederico Ozanan Papa / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Banca: Isabel Candia Nunes da Cunha / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: A inseminação artificial (IA) utilizando sêmen congelado é uma ferramenta importante na reprodução de cães, visa o melhoramento genético e melhor aproveitamento do reprodutor. Além disso, a melhor metodologia para avaliar o potencial fecundante de uma amostra de sêmen é o teste in vivo. Por isso, os objetivos deste trabalho foram determinar a taxa de gestação de cadelas, utilizando sêmen congelado em meio diluente TRIS/OEP/Frutose/8%Glicerol, e comparar duas técnicas de IA: intra-uterina, por laparotomia e intravaginal. O sêmen foi colhido de um único macho, por manipulação digital do pênis e analisado, imediatamente, após a colheita e após a descongelação a 70°C, por 8 segundos. A cinética do movimento foi verificada pelo CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), e a integridade das membranas por: sondas fluorescentes (iodeto de propídio e carboxifluoresceína), pelo teste supra vital com a coloração de eosina, e pela associação de sondas (iodeto de propídio, JC-1 e FITC-PSA). A morfologia espermática foi avaliada por meio de esfregaços corados com Karras. A congelação do sêmen foi realizada pelo método descrito por Chirinéa et al. (2006). As fêmeas foram monitoradas desde o início da fase do proestro utilizando a citologia vaginal seriada e a dosagem de progesterona sérica, a cada 48 horas. Para as inseminações, as cadelas foram divididas em dois grupos: Grupo 1 (n=6) inseminadas uma única vez, via intra-uterina, por laparotomia, com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2mL; e Grupo 2 (n=6) inseminadas duas vezes, via intravaginal com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2 mL por inseminação. Os resultados das análises do sêmen pré e pós-descongelação não apresentaram diferenças significativas, com exceção da morfologia espermática e da associação de sondas fluorescentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Artificial insemination (AI) using frozen semen is an important tool on dog's reproduction, aiming to genetic improvement and better use of a stud. Besides, the better way to evaluate the fecundate potential of a semen sample is an in vivo test. That way, the aim of this work was to determine the pregnancy rate in bitches, using TRIS/OEP/Fructose/8%Glycerol as the diluent medium, and to compare two AI techniques: intrauterine and intravaginal. Semen was collected from one male only, by digital manipulation. Semen was analyzed immediately after collection and after thawed at 70°C for 8 seconds. Movement kinetics were analyzed by CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), membrane integrity using fluorescents probes (propidium iodide and carboxyfluorescein), supravital test, eosin staining, integrity of plasmatic, nuclear and mitochondrial membranes using the association of fluorescent probes (FITC-PSA, propidium iodide and JC-1) and sperm morphology. Semen was frozen using the method described by Chirinéa, 2006. Females were monitored since the beginning of proestrus, using vaginal smear and progesterone measurement, each 48hours. To inseminations, bitches were divided into two groups: Group 1, composed by 6 females, which were inseminated just once via intrauterine, with an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2mL and Group 2 constituted by 6 females, which were inseminated twice, via intravaginal, using an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2 mL/insemination. Results from semen analyses made before and after freezing did not show any difference, except for sperm morphology and association of fluorescents probes. Pregnancy rate was 66,6% (4/6) on Group 1 and 16,6% (1/6) on Group 2. In conclusion, the success of artificial insemination depends not only on semen quality after thawed, but also on the AI technique used. In our work, intrauterine technique by laparotomy was better than intravaginal. / Doutor

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The procedure of artificial insemination in cattle requires preparation and professional dexterity. In most cases, the training of fertilization is done through direct contact with animal itself. During periods of practical training, often is not possible a lot of students have contact with the animal, by factors like costs, risks to animal health and user, inappropriate physical space, cio and animal management. These factors end up making the learning process extremely theoretical, culminating no same unpreparedness. Accordingly, it is proposed a simulator of Artificial Insemination (SISTIA-ARITIFICIAL INSEMINATION TRAINING SYSTEM) with a model of appliance Reproduction veal, seen, among other factors, on: conduct training in a virtual environment, before leaving for the need of the practice in the real environment; decrease training costs, reduce expenses for the purchase of equipment, reduce risk with the student's health, since it is not exposed to contact with viruses and bacteria, reduce the risk of injury to the animal or real training error, monitor the results of training through the visualization of your data stored in a database of the simulation. The Virtual reality training simulation will be developed with the help of the Phantom haptic technology device Omini. The use of this type of device allows a closer interaction of the real world, since, among other factors, returns the user the sensation of stiffness, texture, size and strength of the object can improve performance, and intensify the feeling of immersion. / O procedimento de inseminação artificial em bovinos exige preparo e destreza do profissional. Na maioria das vezes, o treinamento da fecundação é feito através de contato direto com próprio animal. Nos períodos de treinamento prático, muitas vezes, não é possível a uma grande quantidade de alunos terem contato com o animal, por fatores como: custos, riscos à saúde do animal e do usuário, espaço físico inadequado, cio e manejo do animal. Tais fatores acabam tornando o processo de aprendizado extremamente teórico, culminando no despreparo dos mesmos. Nesse sentido, propõe-se um simulador de Inseminação Artificial (SISTIA SISTEMA DE TREINAMENTO DE INSEMINAÇÃO ARITIFICIAL) com um modelo do aparelho reprodutor bovino, que visa, dentre outros fatores, a: realizar o treinamento em um ambiente virtual, antes de partir para a necessidade da prática no ambiente real, diminuir os custos com treinamento, diminuir gastos com a compra de material, diminuir riscos com a saúde do aluno, uma vez que, ele não será exposto ao contato com vírus e bactérias, diminuir os riscos de lesões ao animal por excesso ou erro de treinamentos reais, acompanhar os resultados de treinamento por meio da visualização de seus dados armazenados em um banco de dados da simulação. O treinamento em Realidade Virtual na simulação será desenvolvido com ajuda do dispositivo Háptico Phantom Omini. O uso desse tipo de dispositivo permite uma interação mais próxima do mundo real, uma vez que, dentre outros fatores, retorna ao usuário a sensação de rigidez, textura, tamanho e força do objeto tocado, podendo melhorar o desempenho do usuário e intensificar o sentimento de imersão. / Mestre em Ciências

The objective of this study was to evaluate the efficiency of auxiliary tools for the detection of estrus in cows. In experiment 1, we evaluated the efficiency of Estrotect ® in comparison with visual observation in 58 crossbred cows. The animals were divided into two groups: the TAI (n = 21) was subjected to a protocol of a fixed timed insemination (TAI) and 10 days after insemination device was fixed to the animals. In the group PG (n = 37) was administered prostaglandin (Dinoprost Tromethamine, Lutalyse ®, Pfizer) and immediately 25mg/animal/IM pasted adhesive. In the experiment 2, aimed to compare the Estrotect ® with chalk marker in crossbred heifers. After synchronization of estrus with P4 (CIDR) + GnRH - 7 days - PGF2a, heifers were randomly divided into two groups: Group 1 (n = 56) received the Estrotect ® and Group 2 (n = 56) received in the insertion of the marking tail with the chalk marker. The visual detection of estrus was performed daily in the same way in first experiment, from 07:00 to 08:00 and from 17:00 until 18:00. In experiment 2, the devices were only reached two times a day. After detection were artificially inseminated and diagnosed by ultrasound after 30 days in both estudies. In experiment 1, there was no effect of group (P> 0.05) on the efficiency of visual detection of estrus or auxiliary tool. There was no detectable difference between the efficiency of estrus and the visual detection device (P> 0.05) 92.5%. In experiment 2, not detected a group effect (P> 0.05) in the detection of estrus or the range of CIDR removal to the manifestation of estrus. The heat detection and conception rate was 92.86% (52/56), and 46,15% (24/52) for Estrotect® and 85,71% (48/56), and 58.33% (28/48) to chalk marker. It is concluded that the methods of estrus detection aids are effective and help in improving the efficiency of artificial insemination programs. / Objetivou-se neste estudo avaliar a eficiência de métodos auxiliares de detecção de estro em fêmeas bovinas. No experimento 1, avaliou-se a eficiência do Estrotect® em comparação com a observação visual em 58 vacas mestiças leiteiras. Os animais foram divididos em dois grupos: o grupo IATF (n= 21) foi submetido a um protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e 10 dias após a inseminação foi fixado o dispositivo nos animais. No grupo PG (n=37), foi administrado prostaglandina (Dinoprost Trometamina, Lutalyse®, Pfizer) 25mg/animal/IM e imediatamente colado o adesivo. No experimento 2, objetivou-se comparar o Estrotect® com o Bastão marcador em novilhas mestiças. Após a sincronização do estro com P4 (CIDR) + GnRH 7 dias - PGF2&#945;, as novilhas foram divididas aleatoriamente em dois grupos: Grupo Estrotect (n = 56): recebeu o Estrotect® e Grupo Bastão marcador (n = 56): recebeu a marcação na inserção da cauda com o Bastão marcador. A detecção visual de estro foi realizada diariamente, apenas no experimento 1, das 07:00h às 08:00h e das 17:00h até 18:00h. No experimento 2 os dispositivos foram apenas checados duas vezes ao dia. Após detecção foram inseminadas artificialmente e diagnosticadas após 30 dias por ultrassonografia nos dois estudos. No experimento 1 não foi detectado efeito de grupo (P>0,05) na eficiência da detecção visual de estro ou do método auxiliar. Não foi detectado diferença entre a eficiência da detecção visual de estro e o dispositivo (P>0,05) 92,5%. No experimento 2, não foi detectado efeito de grupo (P>0,05) na detecção de estro nem no intervalo da retirada do CIDR até a manifestação do estro. A detecção de estro e a taxa de concepção foi de 92,86% (52/56) e 46,15%(24/52) para o Estrotect® e de 85,71% (48/56) e 58,33% (28/48) para o Bastão marcador. Conclui-se que os métodos auxiliares de detecção de estros são eficientes e ajudam na melhoria da eficiência dos programas de inseminação artificial. / Mestre em Ciências Veterinárias