Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7214_DISSERTAÇÃO_FINAL_corrigida - Nadmy.pdf: 1059919 bytes, checksum: bddf015e3219b09f72d173ed805157fa (MD5) Previous issue date: 2014-07-15 / O estudo objetivou caracterizar hemostática e bioquimicamente pacientes com diabetes mellitos tipo 2 (DM2) que evoluíram para insulinização. Compuseram o grupo em análise, 40 pacientes atendidos pela Unidade Básica de Saúde de Consolação, Vitória/ES, com idade entre 25 e 80 anos, diagnóstico de DM2 em utilização de insulina. Para o controle, foram selecionados 40 pacientes na mesma faixa etária, sem diagnóstico laboratorial e/ou clínico de DM. Foram dosados marcadores de inflamação, hipercoagulabilidade e fibrinólise: fibrinogênio, dímero-D (D-Di) e inibidor do ativador do plasminogênio tipo 1 (PAI-1). O polimorfismo (-675 4G/5G) na região promotora do gene do PAI-1 foi correlacionado com seus níveis plasmáticos. Foram medidos os parâmetros bioquímicos: glicemia de jejum (GJ), hemoglobina glicada (HbA1C), colesterol total (CT), colesterol HDL (HDLc), colesterol LDL (LDLc), triglicerídeo (TGC), proteína C reativa ultra sensível (PCRus), ureia e creatinina plasmáticas. Houve ainda a verificação do IMC, obesidade, tabagismo, hipotireoidismo, hipertensão, dislipidemia e resistência à insulina. A análise estatística mostrou diferença (p < 0,05) entre os grupos em relação aos valores médios de HDLc, VLDLc, TGC, ureia, PCRus e fibrinogênio. Houve diferença entre os grupos para VLDLc, TGC, creatinina e fibrinogênio alterados. No controle foram observadas as correlações: fibrinogênio e glicemia, fibrinogênio e PCRus, PAI-1 e glicemia, PAI-1 e IMC. No grupo DM2 em insulinização houve correlação para fibrinogênio e D-di, fibrinogênio e PCRus, D-Di e glicemia (negativa), PAI-1 e triglicerídeo, PAI-1 e IMC. Níveis de PAI-1 foram estatisticamente maiores no grupo controle em indivíduos com genótipo 5G5G, seguido de 4G5G e 4G4G. A Regressão Logística Binária confirmou que as variáveis hipertensão e fibrinogênio foram significantes ao p-valor (0.009) e (0.049) e ODDS Ratio ajustado (4,184; 1,426-12,276) e (3,293; 1,006-10,775) respectivamente, mostrando que hipertensos têm um risco 4,18 vezes maior de terem DM2 insulinizada e que indivíduos com hiperfibrinogenemia possuem um risco 3,29 vezes maior. Com o estudo espera-se contribuir para melhor entendimento das complexas alterações que acompanham o paciente diabético tipo 2 usuário de insulina numa expectativa de buscar adequado tratamento e prevenção para as complicações macrovasculares do diabetes. / The study aims to characterize biochemically and hemostatic mellitos patients with diabetes mellitus type 2 (DM2) who developed insulin regimen. Composed group under analysis, 40 patients attended the Basic Health Unit of Consolation, Vitória / ES, aged 25 to 80 years, diagnosed with DM2 and that were already evoluted to insulinization. As controls, 40 patients were selected in the same age group without laboratory and / or clinical diagnosis of DM. Markers of inflammation, hypercoagulability and fibrinolysis were measured: Fibrinogen, D-dimer (D-Di) and plasminogen activator type 1 inhibitor (PAI-1). The polymorphism (-675 4G/5G) in the promoter region of the PAI-1 gene was correlated with their serum levels. Biochemical parameters were measured: plasma glucose (PG), glycated hemoglobin (A1C), total cholesterol (TC), HDL cholesterol (HDL-C), LDL (LDLc) cholesterol, triglycerides (TGC), ultrasensitive C reactive protein (hsCRP), urea and serum creatinine. There was still checking BMI, obesity, smoking, hypothyroidism, hypertension, dyslipidemia and insulin resistance. Statistical analysis showed significant differences (p <0.05) between groups with regard to mean values of HDLC, VLDL-C, TGC, urea, hsCRP and fibrinogen. There was significant difference between groups for VLDLc, TGC, creatinine and fibrinogen. Controls present correlations between: fibrinogen and glucose, hsCRP and fibrinogen, PAI-1 and glucose, PAI-1 and BMI. In insulinization DM2 group correlation was observed correlation between: fibrinogen and D-di, hsCRP and fibrinogen, D-Di and glucose (negative), PAI-1 and triglycerides, PAI-1 and BMI. PAI-1 levels were higher in the control group in subjects with genotype 5G5G, 4G5G and 4G4G followed. Binary Logistic Regression confirmed that the variables hypertension and fibrinogen were significant at p-value (0.009) and (0.049) and adjusted odds ratio (4.184, 1.426 to 12.276) and (3.293, 1.006 to 10.775), respectively, showing that hypertensive patients have a risk 4.18 times more likely to have insulinization type 2 diabetes and that individuals with hyperfibrinogenemia have a 3.29 times greater risk. With this study we hope to contribute to better understanding of the complex changes that accompany the user insulinization type 2 diabetic patients in expectation of seeking appropriate treatment and prevention for the macrovascular complications of diabetes.

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O excesso ou a privação de nutrientes em períodos específicos do desenvolvimento, tais como a lactação, estimulam alterações no metabolismo celular, por exemplo. Estas modificações perpetuam-se ao longo da vida e em conseqüência tornam o organismo mais suscetível ao aparecimento de patologias na idade adulta (Programação Metabólica). Estudamos a influência da grelina na secreção de insulina em camundongos Swiss de 120 dias submetidos à hiperalimentação na lactação. Para induzir a hiperalimentação as ninhadas foram reduzidas a 3 filhotes machos por lactante no 3o dia de vida pós-natal. As ninhadas controle foram ajustadas para 9 filhotes machos por lactante. Na idade adulta os animais hiperalimentados (AH) exibiram em comparação aos animais controle (AC) um incremento de 20% no peso corporal, maior índice de Lee (1705,63 g/mm + 29,3 vs 1374,10 g/mm + 54,9; p< 0,001), elevação da gordura corporal (31,0% + 4,6 vs 21,5% + 3,6; p< 0,01), aumento da gordura retroperitoneal (0,79 g + 0,1 vs 0,44 g + 0,1; p< 0,001), hiperglicemia de jejum (151,83 mg/ dl + 8,3 vs 118,0 mg/ dl + 1,0; p< 0,001), hiperinsulinemia de jejum (54,06 UI/ml + 2,3 vs 19,28 UI/ml + 1,53; p< 0,001) e hipogrelinemia de jejum (98,64 pg/ml + 56,5 vs 201,14 pg/ml + 46,4; p< 0,05). Os AH apresentaram maior secreção de insulina in vitro em presença de glicose aos 10 minutos (209,66 UI/ml + 46,5; p< 0,05), 30 minutos (441,88 UI/ml + 30,2; p< 0,05) e 60 minutos (214,34 UI/ml + 29,8) em comparação aos AC, respectivamente 86,90 UI/ml + 9,5; 74,31 UI/ml + 7,7 vs 27,45 UI/ml + 6,1; p< 0,05. As ilhotas pancreáticas dos AH adultos demonstraram em relação aos AC diminuição do consumo de O2 (1,76 pmols O2/ s. ilhota-1 + 0,4 vs 4,85 pmols O2/ s. ilhota-1 + 1,5; p< 0,001) e elevação do conteúdo do receptor de grelina GHSR1A (3,05 % + 2,13 vs 0,95 % + 0,1; p< 0,05). A grelina acilada estimulou a secreção de insulina in vitro dos AC aos 30 minutos (controle com grelina: 208,50 UI/ml + 40,85 vs controle sem grelina: 74,31 UI/ml + 7,7; p< 0,05) e diminuiu a razão do controle respiratório (controle com grelina: 1,45 + 0,2 vs controle sem grelina: 2,51 + 0,7; p< 0,05). Nos AH, a grelina acilada elevou o conteúdo de GLUT2 nas ilhotas pancreáticas em relação aos AC (hiperalimentados com grelina: 2,07 % + 0,5 vs controle com grelina: 0,85 % + 0,4; p< 0,01); entretanto a grelina não foi capaz de estimular a secreção de insulina nestes animais. Concluímos que a hiperalimentação na lactação associou-se ao aumento da gordura corporal e elevou a secreção de insulina na fase tardia do desenvolvimento. A grelina acilada estimulou a secreção de insulina somente nos AC adultos. / Excess or lack of nutrients at specific times of development generates adaptive responses that can change the body causing the onset of chronic diseases in adulthood (Metabolic Programming). We studied the influence of the hormone ghrelin in insulin secretion of adult Swiss mice overfed during lactation. To induce early postnatal overnutrition, the litter size was reduced to 3 pups per litter at the 3rd day after birth. In the control group, the litter size was adjusted to 9 pups per litter. In adulthood, overfed group (OG) had an increase of 20% in body weight compared to control group (CG). OG had increased in Lee index (1705.63 g/mm + 29.3 vs 1374.10 g/mm + 54.9; p< 0.001), high body fat (31.0% + 4.6 vs 21.5% + 3.6; p< 0.01), and an elevated retroperitoneal fat (0.79 g + 0.1 vs 0.44 g + 0.1; p< 0.001), fasting hyperglycemia (151.83 mg/ dl + 8.3 vs 118.0 mg/ dl + 1.0; p< 0.001), high fasting insulinemia (54.06 UI/ml + 2.3 vs 19.28 UI/ml + 1.53; p< 0.001), and low fasting plasma ghrelin (98.64 pg/ml + 56.5 vs 201.14 pg/ml + 46.4; p< 0.05) compared to CG at 120 days. OG exhibited high insulin secretion in vitro at 10 minutes (209.66 UI/ml + 46.5), 30 minutes (441.88 UI/ml + 30.2), and 60 minutes (214.34 UI/ml + 29.8) compared to CG, respectively 86.90 UI/ml + 9.5; 74.31 UI/ml + 7.7 vs 27.45 UI/ml + 6.1; p< 0.05. Pancreatic islets from OG had a decrease of O2 consumption compared to CG (1.76 pmols O2/ s. islets-1 + 0.4 vs 4.85 pmols O2/ s. islets-1 + 1.5; p< 0.001) and an increased of GHSR1A content (3.05 % + 2.13 vs 0.95 % + 0.1; p< 0.05). Acylated ghrelin increased control groups insulin secretion in vitro at 30 minutes (CG with ghrelin: 208.50 UI/ml + 40.85 vs CG without ghrelin 74.31 UI/ml + 7,7; p< 0.05) and decreased the respiratory control ration (CG with ghrelin: 1.45 + 0.2 vs CG without ghrelin: 2.51 + 0.7; p< 0.05). Also acylated ghrelin increased the GLUT2 content of pancreatic islets from OG compared to CG, respectively 2.07 % + 0.5 vs 0.85 % + 0.4; p< 0.01; however acylated ghrelin was not able to stimulate insulin secretion in OG. We conclude that the overnutrition during lactation is associated with increased body fat percentage and changes in pancreatic &#946; cells in the late stage of development. Acylated ghrelin stimulated insulin secretion only in adult CG.

O objeto de estudo é o resultado do controle glicêmico proveniente da infusão contínua de insulina (ICI) em pacientes sépticos da terapia intensiva. Os objetivos foram determinar a incidência de hipoglicemia encontrada entre pacientes de duas Unidades de Terapia Intensiva (UTI), que receberam ICI e sua relação com os valores da faixa-alvo de cada protocolo e discutir as implicações para a prática de enfermagem relacionadas à incidência de hipoglicemia. Trata-se de estudo transversal, bicêntrico, retrospectivo, com técnica de coleta de dados por análise do prontuário e avaliação quantitativa dos mesmos. Desenvolvida em duas UTIs, uma de um hospital de oncologia da rede federal e outra de um hospital geral da rede estadual do estado do Rio de Janeiro. As medidas glicêmicas de pacientes sépticos que utilizaram ICI no ano de 2010 nas duas UTIs foram transcritas para o instrumento de coleta de dados, gerando 2213 medidas em 29 pacientes (11,88%) na UTI 1 e 923 medidas em 20 pacientes (9,85%) na UTI 2. Os registros de hipoglicemia foram divididos em duas categorias: as medidas com valores definidos pelo protocolo adotado e aquelas com valores inferiores a 50mg/dL, caracterizados como hipoglicemia grave pelo Institute for Healthcare Improvement; nas duas categorias houve a necessidade de intervenção com a administração de glicose hipertônica a 50%. Dezesseis pacientes da UTI 1 apresentaram hipoglicemia, sendo quatro (25,00%) com medidas entre 50 e 60mg/dL e doze (75,00%) com medidas inferiores a 50mg/dL; treze pacientes da UTI 2 apresentaram hipoglicemia, sendo dez (76,92%) com medidas entre 50 e 80mg/dL e três (23,08%) com medidas inferiores a 50mg/dL. O cálculo da incidência considerou o total dos episódios de hipoglicemia independente da categoria. Comparando as duas UTIs, foi encontrada na UTI 1 uma incidência global de hipoglicemia quase cinco vezes maior (22,60:4,54). Na UTI 1, dos 50 episódios de hipoglicemia, 20 registros foram menores que 50mg/dL; na UTI 2, dos 42 episódios de hipoglicemia, 03 registros foram menores que 50mg/dL. A hipoglicemia grave na UTI 1 é 1,5 vezes menor que a hipoglicemia pelo protocolo; na UTI 2, a hipoglicemia grave é treze vezes menor que a hipoglicemia pelo protocolo. Na UTI 1, das 2213 medidas realizadas, 375 medidas glicêmicas ficaram abaixo da faixa alvo. Destas medidas, 50 se caracterizaram como hipoglicemia (375:50) A cada sete ou oito medidas abaixo da faixa-alvo, uma era de hipoglicemia. Na UTI 2, das 923 mensurações, 223 medidas ficaram abaixo do alvo. Destas, 42 medidas foram de hipoglicemia (223:42). Portanto, para cada cinco medidas abaixo da faixa, uma era de hipoglicemia. Considerando-se que a ICI em pacientes sépticos pode contribuir para melhores resultados, a equipe de enfermagem deve estar apta a realizar um controle glicêmico eficaz e com menor risco de hipoglicemia. Subsidiar a equipe com conhecimentos acerca dos fatores predisponentes à hipoglicemia, além de incrementar o nível da assistência de enfermagem prestada, possibilita que haja redução real na incidência deste evento adverso grave. / This study aims to get the glycemic control result from the insulin continuous infusion (ICI) in septic patients in intensive care. The objectives were to determine the hypoglycemia incidence in patients from two Intensive Care Units (ICU) who received ICI and its relation to the target range values for each protocol, and discuss the implications for nursing practice related to hypoglycemia incidence. It is a bi-centric and retrospective cross-sectional study with data collection technique, by analyzing the records and their quantitative assessment. It was developed in two ICUs, one oncology hospital belonging to Union and another to state of Rio de Janeiro. Glycemic measures from septic patients who used ICI in 2010 in both ICUs were collected to data, yielding two thousand, two hundred and thirteen measured in twenty-nine patients (11.88%) from ICU 1, and nine hundred and twenty-three measures in twenty (9.85%) patients from ICU 2. Hypoglycemia records were divided into two categories, measures with values defined by the adopted protocol and measures with values less than 50mg/dL, characterized as severe hypoglycemia by the Institute for Healthcare Improvement. In both categories, it was necessary to intervene, administering hypertonic glucose of 50%. Sixteen patients from ICU 1 had hypoglycemia, four (25%) measuring between 50 and 60mg/dL and twelve (75%) with measures less than 50mg/dL. Thirteen patients from ICU 2 had hypoglycemia, ten (76.92%) measuring between 50 and 80mg/dL and three (23.08%) with measures less than 50mg/dL. For the incidence calculation, the total hypoglycemia episodes were considered independently of category. Comparing the two ICUs, global incidence of hypoglycemia was found in ICU 1 almost five times higher (22.60:4.54). In ICU 1, from fifty hypoglycemia episodes, twenty records were lower than 50mg/dL; in ICU 2, from forty-two hypoglycemia episodes, three records were lower than 50mg/dL. Severe hypoglycaemia in ICU 1 was 1.5 times smaller than the hypoglycemia by protocol; in ICU 2, severe hypoglycaemia was thirteen times smaller than the hypoglycemia by protocol. In ICU 1, from two thousand, two hundred and thirteen measurements, three hundred and seventy-five glucose measurements were below the target range. Of these measures, fifty were characterized as hypoglycemia (375:50). From seven or eight measures below the target range, one was hypoglycemia. In the ICU 2, from nine hundred and twenty-three measurements, two hundred and twenty-three measurements were below the target. From them, forty-two measures were hypoglycaemia (223:42). Therefore, for every five measures below the range, one was hypoglycemia. Considering that ICI in septic patients may contribute to better results, the nursing staff must be capable of making an effective glycemic control with less risk of hypoglycemia. Subsidizing the team with knowledge about the factors predisposing to hypoglycemia, as well as increase the nursing care level, provides indeed to reduce incidence of serious adverse events.

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-04-27T21:09:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Vanessa da silva Constancio.pdf: 942110 bytes, checksum: 6717a1cf057a2ec174a97dbd7025d8c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-04-30T20:17:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Vanessa da silva Constancio.pdf: 942110 bytes, checksum: 6717a1cf057a2ec174a97dbd7025d8c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-30T20:17:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Vanessa da silva Constancio.pdf: 942110 bytes, checksum: 6717a1cf057a2ec174a97dbd7025d8c9 (MD5) Previous issue date: 2015-02 / O excesso de gordura corporal induz a um quadro inflamatório associado à endotoxemia metabólica e aumento da resistência à insulina, bem como altera o perfil lipídico que resulta em prejuízos a função hepática e renal. Estudos sugerem que a ingestão de alimentos antioxidantes, como os polifenóis, proporcionam efeitos benéficos sobre os metabolismos glicídico e lipídico. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da casca de jabuticaba (Myrciaria cauliflora), da polpa do açaí juçara (Euterpe edulis Martius) e do jambolão (Syzygium cumini) sobre o perfil lipídico, a glicemia e a endotoxemia em camundongos Swiss submetidos à dieta de cafeteria. Inicialmente, os frutos foram liofilizados e submetidos à avaliação da composição centesimal. O ensaio biológico contou com 50 camundongos machos adultos da raça Swiss distribuídos em 5 grupos (n=10/grupo), a saber: grupo tratado com dieta comercial padrão (controle negativo), grupo tratado com dieta de cafeteria (controle positivo) e grupos teste que receberam por 14 semanas a dieta de cafeteria suplementada com 2% de casca de jabuticaba, ou polpa do jambolão ou polpa do açaí juçara liofilizados. Na 13ª e 14ª semana foram determinadas a tolerância à insulina e à glicose dos animais. Ao final do período experimental, avaliaram-se o ganho de peso, os parâmetros bioquímicos sanguíneos, histopatológicos e endotoxemia. Os parâmetros bioquímicos avaliados foram: colesterol total (CT) e as frações HDL-c, LDL-c, triacilgliceróis (TAG), bem como proteína C reativa (PCR), aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT). Na histopatologia foram avaliados os efeitos da dieta hipercalórica sobre a área dos adipócitos, esteatose hepática e função renal a partir do número e área dos glomérulos. A endotoxemia foi avaliada pela concentração de lipopolissacarídeos (LPS) no soro dos animais. Aplicou-se o teste t para comparação dos resultados entre os grupos controle e ANOVA, complementada com teste de Tukey (α=5%), para comparação dos grupos suplementados com os frutos e o controle positivo. A suplementação com 2% de jambolão à dieta de cafeteria resultou em redução significativa (p<0,05) do conteúdo de CT, LDL-c, TAG, da razão CT/HDL, bem como diminuição da área dos adipócitos dos animais tratados com os frutos. A suplementação com açaí juçara também foi capaz de reduzir o conteúdo de CT, TAG e a área dos adipócitos, além de elevar a tolerância à glicose. Por outro lado, a jabuticaba não foi eficaz na melhoria dos parâmetros relacionados ao metabolismo lipídico, ao metabolismo da glicose e dos aspectos histopatológicos. A suplementação com 2% dos frutos liofilizados não promoveu efeitos positivos na redução do ganho de peso, resistência à insulina e endotoxemia provocada pela ingestão da dieta de cafeteria. Além disso, os frutos também não foram eficientes na preservação da histologia renal e infiltração lipídica no fígado. Conclui-se que a inclusão do jambolão e do açaí juçara na dieta pode apresentar efeitos positivos sobre danos causados por dietas hiperlipídicas, especialmente no que se refere à dislipidemia, à tolerância à glicose e à hipertrofia dos adipócitos. / The excess body fat leads to an inflammatory reaction associated with metabolic endotoxemia and increased insulin resistance, as well as altering the lipid profile which results in damages to liver and renal function. Studies suggest that intake of antioxidant foods, such as polyphenols, provide beneficial effects on glucose and lipid metabolism. The objective of this study was to investigate the jabuticaba bark effect (Myrciaria cauliflora), pulp of açai juçara (Euterpe edulis Martius) and jambolan (Syzygium cumini) on the lipid profile, blood glucose and endotoxemia in Swiss mice underwent diet cafeteria. Initially, the fruits were freeze-dried and evaluated for their chemical composition. The biological assay included 50 adult male mice of the Swiss race divided into 5 groups (n = 10 / group), namely: the group treated with standard commercial diet (negative control), group treated with cafeteria diet (positive control) and groups test for 14 weeks who received the cafeteria diet supplemented with 2% jabuticaba bark, or pulp jambolan or pulp açai juçara lyophilized. In the 13th and 14th week were determined tolerance to insulin and glucose of animals. At the end of the experiment, we assessed weight gain, blood biochemistry, histopathology and endotoxemia. The biochemical parameters were: total cholesterol (TC) and HDL-C fractions, LDL-C, triglycerides (TAG) and C-reactive protein (CRP), aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT). Histopathology studies the effects of calorie diet over the area of adipocytes, fatty liver and kidney function from the number and area of the glomeruli. The endotoxemia was assessed by the concentration of lipopolysaccharide (LPS) in serum of the animals. We used the t test for comparison of results between the control group and ANOVA, and Tukey's test (α = 5%), to compare the groups supplemented with fruit and the positive control. Supplementation with 2% jambolan the cafeteria diet resulted in a significant reduction (p <0.05) CT content, LDL-C, TAG, the TC / HDL and decreased adipocyte animal area treated with the fruits. The supplementation of açai juçara was also able to reduce the content of TC, IGT, and adipocytes area, in addition to increasing glucose tolerance. On the other hand, the blemish was not effective in improving the lipid parameters related to metabolism, glucose metabolism and histopathological aspects. Supplementation with 2% lyophilized fruits did not cause positive effects in reducing weight gain, insulin resistance and endotoxemia caused by ingestion of a cafeteria diet. Furthermore, the fruits were not effective in preserving renal histology and fatty infiltration of the liver. It follows that the inclusion of jambolan and açai juçara in the diet can have positive effects on the damage caused by high fat diets, especially with regard to dyslipidemia, glucose tolerance and adipocyte hypertrophy.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-20T16:31:37Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_DesenvolvimentoProdutoLiofilizado.pdf: 1353740 bytes, checksum: 0dbb3f77e20473254bde70eca12d48c3 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-08-25T12:37:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_DesenvolvimentoProdutoLiofilizado.pdf: 1353740 bytes, checksum: 0dbb3f77e20473254bde70eca12d48c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-25T13:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_DesenvolvimentoProdutoLiofilizado.pdf: 1353740 bytes, checksum: 0dbb3f77e20473254bde70eca12d48c3 (MD5) Previous issue date: 2013 / O objetivo desse trabalho foi desenvolver um produto liofilizado a partir de soluções aquosas micelares de Pluronic® F-127 (F127) contendo insulina (INS) e ácido oleico (AO). Espera-se que este produto liofilizado se transforme em gel no trato gastrintestinal e promova a absorção de INS na mucosa do intestino. Primeiramente avaliou-se o efeito de diferentes concentrações de F127 e AO sobre a capacidade das soluções alcançarem o estado gel a 37 °C. O perfil de liberação de INS a partir das formulações no estado gel foi avaliado in vitro em meio de dissolução tampão fosfato pH 7,4. A partir deste estudo, ajustes nas concentrações de F127 e AO foram feitos e dois produtos liofilizados foram desenvolvidos. A reidratação do produto liofilizado, bem como, o perfil de liberação de INS e o tamanho médio das micelas/partículas formadas no meio de dissolução (HCl 0,1M, tampão fosfato pH7,4, solução de sais biliares 0,1 e 1,0%) foram avaliados. Na parte final do trabalho, cápsulas liofilizadas contendo INS e AO e diferentes concentrações de F127 e sais biliares (SB) foram desenvolvidas. A reidratação e o perfil de liberação de INS em tampão fosfato pH 7,4 a partir dos produtos liofilizados foram avaliados. De um modo geral, levando-se em conta o menor tamanho encontrado para as micelas/partículas nos meios de dissolução contendo SB e uma liberação da INS mais efetiva de algumas das formulações que as contém, acredita-se que a presença desses sais, em formulações de F127, juntamente com a presença de ácidos graxos insaturados são potenciais candidatos à administração de INS por via oral. _______________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The purpose of this study was to develop a lyophilized product from aqueous micellar solutions of Pluronic® F-127 (F127) containing insulin (INS) and oleic acid (OA). This product is expected to become a gel in the gastrointestinal tract and to promote the INS absorption in the mucosa of the intestine. Firstly, solutions containing different concentrations of F127 and OA were prepared, and their ability to reach the gel state at 37 °C was evaluated. The INS release profile of gelled formulations were evaluated in vitro in phosphate buffer pH 7.4. From this study, adjusts in the concentration of F127 and OA were done and two lyophilized formulations were developed. The rehydration of the lyophilized product, as well as the INS release profile and the average size of the micelles/particles in the dissolution media (HCl 0.1 M, phosphate buffer pH 7,4, bile salts solution 0,1 and 1,0%) were evaluated. Finally, freeze-dried products containing INS and OA and different concentrations of F127 and bile salts (BS) were developed. The rehydration and the INS release profile from the lyophilized products in phosphate buffer pH 7.4 were evaluated. In resume, considering the smaller size of micelles/particles formed in the dissolution media containing BS and the most effective INS release from some formulations containing them, it is believed that the combination of BS and unsaturated fatty acids within F127 formulations are potential candidates for improving the intestinal absorption of INS orally administered.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2013-06-25T19:45:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 309548.pdf: 4712083 bytes, checksum: 1e0a3781fbbeb47dd57377a6e8ce818b (MD5) / A insulina é o principal hormônio anabólico responsável pelo controle da captação, utilização e armazenamento dos nutrientes celulares como carboidratos, proteínas e lipídios, sendo essencial para a manutenção da homeostasia da glicose, o crescimento e diferenciação celular. Defeitos na ação e/ou na secreção de insulina podem levar à hiperglicemia, característica da diabetes melito. A diabetes melito é uma patologia complexa e multifatorial de elevada morbidade e mortalidade e, por esse motivo, é considerada uma epidemia, caracterizando um problema de saúde pública mundial. Muitas plantas são conhecidas na medicina popular de diferentes culturas pelas propriedades hipoglicemiantes e tem um uso crescente no tratamento da diabetes. Os compostos fenólicos derivados de plantas, especialmente os flavonóides, apresentam diversas propriedades e tem um potencial terapêutico muito investigado. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar o efeito de extratos e frações de Bacharis articulata (carqueja) e de Musa x paradisiaca (banana), assim como do flavonóide rutina, na homeostasia da glicose em modelos experimentais in vivo e in vitro. As duas espécies foram avaliadas quanto às atividades anti-hiperglicêmica e/ou hipoglicemiante na curva de tolerância à glicose e em modelos de diabetes induzidos experimentalmente, como a secreção de insulina, o conteúdo de glicogênio hepático e muscular, a inibição das enzimas ?-glicosidases e a propriedade anti-glicação, assim como o conteúdo de flavonóides. Além disso, foi estudado o mecanismo de ação da rutina na captação de glicose e de cálcio em músculo sóleo, e também a secreção de insulina in vivo e o mecanismo de ação da rutina na captação de cálcio em ilhotas pancreáticas isoladas. Para tanto, foram utilizados ratos Wistar machos entre 50-55 dias de idade. Para a realização da curva de tolerância à glicose as coletas de sangue, para determinação da glicose e insulina sérica, foram realizadas nos tempos zero, 15, 30, 60, 120 e 180 minutos. Nos ensaios para a determinação do conteúdo de glicogênio os tecidos foram retirados dos animais 3 h após os tratamentos. As atividades das dissacaridases intestinais e a propriedade anti-glicação foram realizadas in vitro. A captação de 14C-glicose e de 45-cálcio (45Ca2+) foi estudada após a incubação do músculo sóleo com a rutina. As ilhotas pancreáticas foram isoladas e incubadas com 45Ca2+ e rutina, na presença ou não de diferentes inibidores e ativadores. Os extratos brutos, as frações n-butanol e residual aquosa de B. articulata e de M. x paradisiaca reduziram significativamente a glicemia de ratos normais hiperglicêmicos e potencializaram a secreção de insulina induzida por glicose. Além disso, observou-se um aumento no conteúdo de glicogênio no músculo sóleo e fígado após os tratamentos, principalmente com as frações n-butanol das duas espécies vegetais. Os extratos e as frações reduziram a atividade da maltase e preveniram a glicação. A rutina estimulou a captação de glicose e cálcio no músculo, estimulando a captação de glicose através da ativação de uma via insulinomimética e uma via independente da sinalização clássica da insulina. Além disso, a rutina estimulou a secreção de insulina in vivo e a captação de cálcio em ilhotas pancreática isoladas, atuando como um potencial agente secretagogo de insulina. Desta forma, apoiado nos resultados obtidos neste trabalho, propõe-se que as espécies vegetais, Baccharis articulata e Musa x paradisiaca, e o flavonóide rutina aqui estudados possam regular a homeostasia da glicose. Os mecanismos envolvem a inibição da enzima que permite a absorção intestinal da glicose, a inibição da glicação, o estímulo da secreção de insulina e o aumento na utilização de glicose pelos tecidos periféricos, evidenciando que estas duas espécies e a rutina podem atuar por múltiplos mecanismos de ação para regular a homeostasia da glicose e colaborar na prevenção das complicações da diabetes. / Insulin is the main anabolic hormone responsible for controlling the uptake, use and storage of cellular nutrients such as carbohydrates, proteins and lipids. It is essential for the maintenance of glucose homeostasis, growth and cellular differentiation. Defects in action and / or secretion of insulin may lead to hyperglycemia, which characterizes diabetes mellitus. Diabetes mellitus is a complex and multifactorial disease with high morbidity and mortality, therefore is considered epidemic causing a public health problem worldwide. Many plants are known in folk medicine of different cultures for their hypoglycemic properties showing an increasing use in the treatment of diabetes. The plant-derived phenolic compounds, especially flavonoids, have several properties and their therapeutic potential has been investigated. The aim of this study was to characterize the effect of extracts and fractions of Baccharis articulata ("carqueja") and Musa x paradisiaca ("banana"), as well as the flavonoid rutin, in glucose homeostasis using in vivo and in vitro experimental models. Antihyperglycemic and / or hypoglycemic activity in the curve of glucose tolerance and in models of experimentally induced diabetes, insulin secretion, the hepatic glycogen content and muscle, inhibition of the enzymes á-glucosidases and anti-glycation property were investigated, as well as the content of flavonoids. In addition, was also studied the mechanism of action of rutin in glucose and calcium uptake in soleus muscle, and also the in vivo insulin secretion and the mechanism of action of rutin on calcium uptake in rat isolated pancreatic islets. For in vivo experiments, Wistar male rats with 50-55 days of age were used. To glycemia and serum insulin determination blood samples were collected at zero, 15, 30, 60, 120 and 180 min in glucose tolerance curve. Tissues were removed from animals 3 h after oral administration of treatments to determine glycogen contents. The intestinal disaccharidases activities and anti-glycation property were performed in vitro. The glucose and calcium uptake was studied after incubation of the soleus muscle with rutin, in the presence or not of different inhibitors and of 14C-glucose or calcium (45Ca2+). The pancreatic islets were isolated and incubated with 45Ca2+ and rutin in the presence or absence of various inhibitors or activators. The crude extracts and n-butanol and residual aqueous fractions of B. articulata and of M. x paradisiaca showed potential anti-hyperglycemic activity in hyperglycemic normal rats and potentiated glucose-induced insulin secretion. Additionaly, it was observed an increase on glycogen content in muscle and liver after treatments, mainly with the n-butanol fractions of two species. The extracts and fractions reduced the activity of maltase and prevented glycation. Also, rutin stimulated glucose and calcium uptake in soleus muscle, stimulating glucose uptake via activation of an insulin-mimetic and an insulin-independent signaling pathways. Additionally, rutin stimulated insulin secretion in vivo and calcium uptake in isolated pancreatic islets, as a potential insulin secretagogue agent. Thus, these results suggest that Baccharis articulata, M. x paradisiaca and rutin are able to regulate glucose homeostasis. The mechanisms involve the inhibition of the enzyme that allows the intestinal absorption of glucose, the inhibition of glycation, the stimulation of insulin secretion and increase in glucose utilization by peripheral tissues showed that these plant species and rutin may act by multiple mechanisms of action to regulate glucose homeostasis, thereby contributing to the prevention of diabetes-related complications.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pos-Graduaçao em Bioquímica, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-06-26T01:08:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317199.pdf: 1995162 bytes, checksum: c5f2bf6816dc29a5ca478c754678dd4b (MD5) / O diabetes mellitus (DM) é uma síndrome metabólica de etiologia múltipla caracterizada por hiperglicemia persistente, decorrente da falta de insulina e/ou da resistência dos tecidos a ação do hormônio. Estima-se que até o ano de 2030, cerca de 552 milhões de indivíduos no mundo estejam acometidos por esta doença. A alta morbidade e mortalidade característica desta condição estão fortemente associadas ao desenvolvimento de alterações patológicas na vasculatura. Estas alterações parecem estarem relacionadas com mudanças epigenéticas, que ocorrem nas fases iniciais do DM e favorecem a expressão patológica de determinados genes, provocando desta forma danos irreversíveis no organismo mesmo que a glicemia seja controlada posteriormente. Desta forma o objetivo deste trabalho foi melhor entender o efeito do estrito controle da glicemia, pela administração de insulina, em animais que desenvolveram hiperglicemia através da administração de estreptozotocina (STZ) sobre parâmetros metabólicos, alterações a nível de DNA, expressão gênica, sinalização celular de proteínas relacionadas à insulina, e conteúdo mitocondrial em sangue ou cérebro de ratos Wistar. Os resultados deste estudo mostraram que os animais que receberam STZ se tornaram hiperglicêmicos e hiperlipidêmicos por um marcado prejuízo na arquitetura das ilhotas de Langerhans, que como consequência provocou o comprometimento na síntese do hormônio insulina. Estas alterações metabólicas periféricas, que foram acompanhadas por uma marcada redução do peso corporal, desencadearam uma série de eventos no sistema nervoso central, principalmente evidenciados por i) redução na expressão genica hipocampal da insulina e da citocina anti-inflamatória interleucina-10 (IL-10); i) manutenção da fosforilação de proteínas alvos do receptor da insulina, como o substrato do receptor da insulina -1 (IRS-1) e Akt no córtex cerebral; iii) aumento no número de mitocôndrias no bulbo olfatório; e iv) hipermetilação do DNA em hipocampo. As alterações sobre a expressão de IL-10 e de hipermetilação no sistema nervoso central destes animais, foi prevenido/revertido com pela administração com insulina. A partir destes dados as seguintes conclusões podem ser formuladas: i) no cérebro existe um metabolismo de síntese, produção e sinalização de insulina independente do periférico e com objetivos diferentes; ii) o controle da glicemia mediante pela administração de insulina previne das alterações epigenéticas decorrentes da hipermetilação do DNA; iii) a melhor caracterização do modelo de hiperglicemia induzido por STZ aqui realizada permitirá a sua utilização em diferentes desafios metabólicos.<br> / Abstract : Diabetes mellitus (DM) is a metabolic syndrome of multiple etiologies characterized by persistent hyperglycemia resulting from lack of insulin and/or resistance of tissues to the hormone action. It is estimated that in 2030, nearly 552 million individuals in the world will be affected by this disease. The high morbidity and mortality characteristic of this entity are known to be strongly associated with the development of pathological changes in the vasculature. These changes seem to be related to epigenetic modulations, which occur in the initial stages of diabetes and promote the pathological expression of certain genes, thus resulting in irreversible damage in the organism, even when the blood glucose is subsequently controlled. In this scenario, the main objective of this project was to better understand the effect of the strict glycaemia control by the administration of insulin, on biochemical metabolic measurements, DNA methylation, genic expression and cell signaling of proteins related to insulin, and the content of mitochondria in blood or brain of streptozotozin (STZ)-induced hyperglycemic animals. It was here observed, that animals receiving STZ showed an altered islets of Langerhans architecture that provoked reduced blood insulin concentration, hyperglycemia and hyperlipidemia, and marked bodyweight lost. These peripheral chronic metabolic alterations elicited a series of events in the central nervous system (CNS) characterized by: i) reduced gene expression of hippocampal insulin and interleukin-10 (IL-10); ii) correct phosphorylation of target proteins of the insulin receptors, including insulin receptor substrate-1 (IRS-1) and Akt in the cerebral cortex; iii) increased number of mitochondria in the olfactory bulbs; and iv) increased DNA methylation in hippocampus. The alterations linked to reduced IL-10 expression and DNA methylation were significantly prevented and/or reverted by the exogenous insulin. According to these data, the following conclusions could be formulated: i) there is a peripheral independent insulin metabolism in the CNS, with specific objectives for insulin synthesis, maturation and signaling; ii) the insulin-induced control of hyperglycemia prevents from epigenetic alterations; iii) this better characterization of the STZ-induced hyperglycemia animal model will allow further utilization for different metabolic challenges.

O estilo de vida baseado no sedentarismo e no consumo de dietas palatáveis com alto conteúdo de carboidratos (principalmente sacarose) e lipídeos tem sido associado com o aumento na incidência do diabetes e das suas complicações. As complicações do diabetes têm uma origem multifatorial, mas em particular, o processo bioquímico de formação dos Produtos Finais de Glicação Avançada (AGEs), acelerado no diabetes como resultado de uma hiperglicemia crônica, tem um papel importante nestas complicações. Glicação avançada envolve a geração de um grupo heterogêneo de moléculas químicas conhecidas como AGEs, esta formação é resultado da reação não enzimática da glicose com proteínas, lipídeo e ácidos nucléicos e envolve intermediários altamente reativos como o metilglioxal. AGEs são responsáveis pelas complicações do diabetes, por alterarem a estrutura e a função de moléculas nos sistemas biológicos e pelo aumento do estresse oxidativo. Exposição dos alimentos ao calor é um importante mecanismo gerador de AGEs. O consumo de alimentos termolizados aumenta a concentração de AGEs na circulação e isso é acompanhado pelo aumento no estresse oxidativo (EO). Estuda-se uma relação positiva entre estresse oxidativo e o aumento do dano ao DNA os quais podem estar associados com o diabete melitus tipo 2 e suas complicações. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da ingestão de uma dieta hiperpalatável e uma dieta hiperpalatável aquecida (com a finalidade de torná-la enriquecida em AGEs), sobre parâmetros de resistência à insulina e estresse oxidativo, bem como diminuição na defesa antiglicante e aumento no dano ao DNA. Ratos machos com 8 semanas de vida foram submetidos a uma dieta controle, uma dieta hiperpalatável, aquecida (130°C/30minutos) ou não, durante quatro meses. Parâmetros metabólicos, dano ao DNA, atividade da enzima Glioxalase I, parâmetros de estresse oxidativo e quantificação da proteína RAGE foram avaliados. Os resultados são apresentados sempre em relação ao grupo controle. O consumo das dietas hiperpalatável (HP) e hiperpalatável aquecida (HPTD) levou a um aumento no peso corporal e tecido adiposo e diminuiu a tolerância à glicose. O grupo HPTD reduziu a síntese de glicogênio no fígado e a oxidação de glicose e síntese de lipídeos no tecido adiposo. Os grupos HP e HPTD apresentam aumento significativo peroxidação lipídica e carbonilação de proteínas no fígado, rim e plasma e a diminuição dos grupos tiol não protéicos no fígado e rim, bem como mudanças na atividade das enzimas Catalase (CAT), diminuída em ambos tecidos, fígado e rim, e Superóxido dismutase (SOD), diminuída no fígado e aumentada no rim. O consumo das dietas causou um aumento na atividade da Glioxalase I no rim e a sua diminuição no fígado. Observamos ainda um aumento na quantificação da proteína RAGE no grupo HPTD no fígado. Dano ao DNA no sangue foi significantemente maior nos animais submetidos a uma dieta hiperpalatável, mas o dano provocado pela dieta aquecida foi ainda maior. A partir destes dados concluímos que a ingestão de uma dieta hiperpalatável prejudica a tolerância à glicose, altera parâmetros de estresse oxidativo e a defesa antiglicação, e aumenta o dano ao DNA. O processo de aquecimento agrava esta condição possivelmente pela elevação dos níveis de AGEs, confirmando o papel importante dos AGEs na patogênese das complicações do diabetes pelo aumento do estresse oxidativo e redução da defesa antiglicação. / In modern societies the consumption of high fat and high sugar diets as well as a sedentary life style has been associated with the increased of the incidence of diabetes and its complications. Diabetic complications appear to be multifactorial in origin, but in particular, the biochemical process of advanced glycation, which is accelerated in diabetes as a result of chronic hyperglycemia, has been postulated to play a central role in these disorders. Advanced glycation involves the generation of a heterogenous group of chemical moieties known as advanced glycated end-products (AGEs), this process occurring as a result of a non-enzymatic reaction of glucose interacting with proteins, lipids and nucleic acids, and involves key intermediates such as methylglyoxal. Advanced glycation end products (AGEs) are implicated in the complications of diabetes by alter the structure and function of molecules in biological systems and increase oxidative stress. Heat exposure of animal and human food is an important generator of variable amounts of glycoxidants, or advanced glycation end products, which are absorbed (about 10%) and partly are retained in the body or eliminated in the urine. An ingestion of an advanced glycation end products (AGEs) rich diet is accompanied by increased oxidative stress (OS) and induced inflammation. Many studies have demonstrated a positive relationship of oxidative stress and an increased in DNA damage, this may be associated with type 2 diabetes mellitus (T2DM) and its complications. The aim of this study was to investigate the acute effects of dietary AGEs on parameters of insulin resistance and redox state, as well as impairment of antiglycation defense, increased in RAGE and in DNA damage. Male rats 8 week old was submitted to a high palatable diet, heated (130ºC/30minut) or not, during 4 month. Metabolic parameters, DNA damage, Glyoxalase I activity and oxidative stress status were evaluated. The high palatable diet (HP) and high palatable thermolyzed diet (HPTD) showed increased body weight and adipose mass, and impaired glucose tolerance at the studied time-points in glucose tolerance test (GTT). We show which HPTD have the capacity to reduce glycogen synthesis in liver and reduced glucose oxidation and lipid syntesis in adipose tissue. HP and HFTD promoted lipid peroxidation and protein carbonylation in kidney, liver and plasma, and oxidation of non protein thiol groups in kidney and liver, as well as change in catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and Glyoxalase I activity in kidney and liver. HFTD promoted increased im RAGE concentration in liver. Blood DNA damage was significantly higher in animals subjected to High palatable diets, and the highest damage was observed in animals that received the high palatable termolizated diet. Ingestion of a high palatable diet impairs the glucose tolerance, altered the redox homeostase and antiglication defense and increased DNA damage. And the thermolyzation process aggravates such a condition because of the elevated levels of AGEs, in addition to playing a role in the pathogenesis of diabetic complications by the impairs of redox homeostasis and reduced antiglycation defense. This model of treatment simulate a nutritional condition that is very common in an important percentage of the population, observed concerning the consequences of its consumption must be carefully evaluated and considered.

A Síndrome dos Ovários Policísticos (PCOS) é uma endocrinopatia freqüente em mulheres em idade reprodutiva, sendo caracterizada por uma variedade de manifestações clínicas, incluindo resistência à insulina (RI). A adiponectina está associada com a sensibilidade à insulina e as variantes do gene desta adipocina podem estar envolvidas com aspectos fisiopatológicos da RI. No estudo 1, o objetivo foi verificar possíveis associações entre polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) do gene da adiponectina (SNPs G276T, T45G, C11377G e G11391A) e a composição corporal, presença de comorbidades relacionadas à obesidade, bem como perfil hormonal e metabólico, em 80 mulheres com PCOS e 37 controles da região sul do Brasil. A análise genotípica foi avaliada por PCR convencional e digestão enzimática para os SNPs T45G e G276T, localizados no éxon 2 e íntron 2, respectivamente, e PCR em tempo real para os SNPs da região promotora, C11377G e G11391A. As pacientes com PCOS eram mais jovens do que as participantes do grupo controle (21,30 ± 6,01 e 29,86 ± 5,15 anos, p=0,0001). Pressão arterial sistólica e diastólica (p<0,03), escore de Ferriman para hirsutismo (p=0,0001) e relação cintura/quadril (p=0,002) foram mais elevados nas mulheres com PCOS, bem como triglicerídeos, colesterol total e LDLc comparado às controles (p<0,02). Os níveis de insulina em jejum, HOMA, testosterona e IAL foram também significativamente maiores em mulheres com PCOS e a concentração de SHBG mostrou-se significativamente menor do que nas controles (p=0,0001). A freqüência dos genótipos do SNP G276T para mulheres com PCOS foi de 52,6% G/G, 33,3% G/T, 14,1% T/T e para controles foi de 27% G/G, 62,2% G/T, 10,8% T/T. Para o SNP T45G a freqüência dos genótipos T/T, T/G e G/G foi de 79,5%, 17,9% e 2,6%, respectivamente, em mulheres com PCOS, e de 62,2%, 37,8% e 0%, respectivamente, nas controles. Ambos os SNPs foram associados à PCOS, sendo o genótipo polimórfico G/T+T/T do SNP G276T menos freqüente em mulheres com PCOS (p=0,010; Odds ratio: 2,992; 95% Intervalo de Confiança: 1,278-7,006) comparado a controles, enquanto que para o SNP T45G o genótipo selvagem mostrou-se mais freqüente em mulheres com PCOS (p=0,048). Na amostra estudada as freqüências dos SNPs foram similares às freqüências observadas em outras populações. Em relação aos polimorfismos da região promotora, para o SNP C11377G a freqüência genotípica foi de 52,2% para C/C, 36,2% para C/G e 11,6% para G/G em pacientes com PCOS, e em controles foi de 64,9% para C/C, 32,4 para C/G e 2,7% para G/G. A freqüência dos genótipos do SNP G11391A foi G/G 89%, G/A 9,6% e A/A 1,4% em mulheres com PCOS; e G/G 75,7%, G/A 24,3% e A/A 0% em mulheres sem a síndrome. Foram consideradas alterações polimórficas a presença de genótipos C/G+G/G para o SNP C11377G e o genótipo C/C como ausência de polimorfismo. Para o SNP G11391A considerou-se G/A+A/A a presença de polimorfismo e G/G a ausência de alteração polimórfica. Todos os SNPs estão em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Os SNPs da região promotora do gene da adiponectina não mostraram associação com a PCOS, e não houve diferença estatisticamente significativa entre os genótipos nas variáveis clínicas, antropométricas, metabólicas e hormonais em ambos os grupos. Para o estudo 2, foi utilizada uma linhagem de camundongos obesos Neo-Zelandeses (New Zealand Obese mouse ou NZO mouse), modelo poligênico de obesidade, RI e hiperinsulinemia. As fêmeas apresentam também fertilidade reduzida. Por apresentarem características similares às observadas em pacientes com PCOS, estabeleceu-se a hipótese que estes camundongos poderiam ser um modelo promissor para o estudo da síndrome, que pudesse expressar tanto as características reprodutivas quanto metabólicas da PCOS. Os objetivos deste estudo foram caracterizar as alterações metabólicas relacionadas com resistência insulínica, os aspectos morfológicos da estrutura ovariana e os níveis de hormônios reprodutivos em fêmeas de camundongos obesos, em três diferentes etapas da vida: jovens, adultos e de meia idade, e em animais controles. As fêmeas de camundongos foram pesadas e submetidas ao teste de tolerância à insulina, e à coleta de sangue para dosagens hormonais. Os ovários foram removidos para a análise histológica. Como esperado, as fêmeas NZO apresentaram maior peso corporal (p=0,001), aumento dos níveis de glicose (p=0,007) e insulina (p=0,001) basais, bem como RI, comparado a controles. Nas NZO observou-se também um aumento no volume ovariano, menor número de corpus lúteos e número mais elevados de folículos totais (p=0,0001), representados principalmente por folículos atrésicos (p=0,03), e associados com níveis diminuídos de LH e aumentados de Estradiol, em relação as controle. Concluímos que fêmeas de camundongos obesos apresentaram ambas as características, ovariana e metabólica da PCOS humana, sugerindo ser um modelo adequado na investigação de mecanismos patofisiológicos ligados a alterações metabólicas com anormalidades reprodutivas. / Polycystic ovary syndrome (PCOS) is the most common endocrine disorder in women of reproductive age. It is characterized by many clinic manifestations, including insulin resistance (IR). Adiponectin is associated to insulin sensitivity and adiponectin polymorphisms might be related to pathophysiological aspects of IR in PCOS. In study 1, we aimed to verify the association between Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) of the adiponectin gene (SNPs G276T, T45G, C11377G and G11391A) and the body composition, obesity-associated comorbities and the hormonal and clinical profile, in 80 women with PCOS and 37 controls from south of Brazil. Genotypic analyses were evaluated by Conventional PCR and Cleavage for the G276T and T45G polimorphisms and Real Time PCR for the SNPs C11377G and G11391A. PCOS patients were younger than controls (21.30 ± 6.01 and 29.86 ± 5.15 years old, p=0.0001). Systolic and diastolic blood pressure (p<0.03), Ferriman score for hirsutism (p=0.0001) and waist/hip ratio (p=0.002) were higher in PCOS group as well as TG, CT and LDLc compared to control group (p<0.02). Fasting insulin levels, HOMA-IR index, testosterone concentrations and FAI were also significantly greater in PCOS women, but SHBG concentration was lower (p=0.0001). Genotype frequency for SNP G276T in women with PCOS was 52.6% G/G, 33.3% G/T, 14.1% T/T and for controls was 27% G/G, 62.2% G/T, 10.8% T/T. In SNP T45G the frequency for genotypes T/T, T/G and G/G was 79.5%, 17.9% and 2.6%, respectively, in PCOS women, and 62.2%, 37.8% e 0%, respectively, in controls. Both SNPs G276T and T45G were associated to PCOS, being less frequent in this group compared to controls (p=0.010 and p=0.048, respectively). Our study showed similar genotypic frequency distribution compared to other populations. For the SNP C11377G, genotypic frequency distribution was 52.2% for C/C, 36.2% for C/G and 11.6% for G/G in women with PCOS, and in controls it was 64.9% for C/C, 32.4 for C/G and 2.7% for G/G. Genotypic frequency distribution of SNP G11391A was G/G 89%, G/A 9.6% and A/A 1.4% in women with PCOS; and G/G 75.7%, G/A 24.3% and A/A 0% in healthy women. Polymorphisms were in Hardy-Weinberg equilibrium. SNPs C11377G and G11391A of the adiponectin gene were not associated to PCOS or other clinical, anthropometric, metabolic and hormonal variables in both groups. In the study 2, we studied New Zealand Obese (NZO) mice, a polygenic model of obesity, IR and hyperinsulinemia. Importantly NZO mice are poor breeders; Since they display similar metabolic features of human PCOS we hypothesized they might be a suitable model to study PCOS further. The aim of this study was to assess sex hormone levels and ovarian structure in female NZO and lean C57BL/6J control mice in three different ages: young, adult and middle age. Twenty-five NZO and twenty female control mice at three different ages (young, adult and aged) were studied. The animals were weighed, an insulin tolerance test (ITT) was carried out and the blood was collected for hormonal level measurement. The ovaries were removed for histological analysis. As expected, NZO mice presented higher BW (p=0.001), increased basal plasma glucose (p=0.007) and insulin levels (p=0.001), as well as insulin resistance compared with control mice. NZO mice showed an increased ovarian volume, reduced numbers of corpora lutea, higher total follicles numbers (p=0.0001), but an increased amount of atretic follicles (p=0.03) associated with reduced plasma luteinising hormone levels and increased estradiol levels. In conclusion, NZO mice presented both the ovarian and metabolic features of human PCOS suggesting that they are suitable for investigating pathophysiological mechanisms linking metabolic alterations with reproductive defects.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-08. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:36Z : No. of bitstreams: 1 000854416.pdf: 813378 bytes, checksum: cb0295b5397a350e0deab683401988e0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Álcool e cigarro são as drogas psicoativas lícitas mais consumidas no mundo, sendo na maioria das vezes, consumidas em associação. Alterações metabólicas estão associadas com consumo de álcool e cigarro, envolvendo prejuízos na expressão de proteínas envolvidas no metabolismo celular. O objetivo do presente estudo foi avaliar se a prática regular de exercício físico pode ter efeitos positivos sobre possíveis alterações encontradas na expressão de proteínas do metabolismo celular, GLUT4 e AMPK, em músculo esquelético de ratos tabagistas e/ou alcoolistas. Foram utilizados 80 ratos Wistar, divididos em 8 grupos C: controle, F: fumante, A: alcoolista, FA: fumante alcoolista, CE: controle exercitado, FE: fumantes exercitado, AE: alcoolista exercitado, FAE: fumantes alcoolista exercitado. Grupos de fumantes foram expostos à combustão de quatro cigarros, 1h/dia, 2x/dia, 5x/semana durante 60 dias. Uma mistura de 10% v/v de etanol absoluto e água foi oferecida aos grupos alcoolistas. Grupos exercitados realizaram treinamento em esteira 5x/semana, 1h/dia, 10m/min, durante 60 dias. Teste de Tolerância à insulina, Teste de Tolerância a Glicose foram realizados para avaliação da sensibilidade à insulina.RT-PCR foi utilizada para a quantificação dos genes Slc2a4 (GLUT4) e Prkaa2 (AMPK) e para a quantificação do conteúdo proteico de GLUT4 e AMPK foi usada a técnica de Western blotting... / Alcohol and cigarettes are the lawful psychoactive drugs more consumed in the world, usually being consumed in association. Metabolic alterations are linked to alcohol consumption and tobacco use involving impairment in the expression of proteins related to cellular metabolism. The objective of this study was to evaluate if the regular physical exercise can promote positive effects on the possible impairment related to expression of GLUT4 and AMPK in the skeletal muscle of smoker and/or alcoholic rats. Eighty Wistar rats were divided into 8 groups C:control, S:smoker, A:alcoholic, SA: smoker alcoholic, CE: control exercised, SE: smoker exercised, AE: alcoholic exercised, SAE: smoker alcoholic exercised. Smoker groups were exposed to combustion of four cigarettes, 1h a day, 2x a day, 5x a week for 2 months. A mixture of 10% v/v of ethanol plus water was offered to alcoholic groups. Exercised groups were trained on a treadmill (vel=10 m/min) 5x a week, 1h a day, during two months. Insulin Tolerance Test, Glucose Test tolerance were performed for the insulin sensitivity evaluation. RT-PCR was used for quantification of genes Slc2a4 (codes GLUT4) and Prkaa2 (codes AMPK). Western blotting was used for protein content (GLUT4 and AMPK) analysis. One-way Anova and Student t-test were used to analyze the statistical differences among the groups. P values less than 5% were considered significant. S, A and SA groups showed a reduction in body weight (P< 0.05), and SE, AE and SAE groups showed a normal weight gain compared to the others... / FAPESP: 2013/10564-9