O conhecimento de todas as facetas que envolvem o processo de envelhecimento é uma necessidade atual, uma vez que a população idosa vem aumentando em todo mundo. O sistema digestório é um importante alvo das alterações do envelhecimento, sendo a constipação um freqüente distúrbio referido. Por esta razão, estudos sobre os neurônios do plexo mioentérico são necessários. Ainda, sabendo que a atividade física é uma terapêutica indicada para se evitar a constipação, este trabalho teve por objetivos estudar quantitativamente e qualitativamente os efeitos do envelhecimento nos neurônios NADH- e NADPH-diaforase reativos do plexo mioentérico do colo de ratos adultos (GRUPO A) e de meia-idade (GRUPO B), assim como o possível efeito da atividade física (corrida) sobre os neurônios dos animais de meia-idade (GRUPO C). Ainda, a presente pesquisa objetivou verificar as possíveis alterações da camada muscular (circular e longitudinal) do colo, assim como a ultra-estrutura neuronal nos diferentes grupos. Quanto à morfologia, nenhuma alteração neuronal ou no arranjo do plexo foi constatada. Entretanto, uma maior quantidade de colágeno ao redor do gânglio foi verificada nos animais do Grupo B. Alterações quantitativas foram encontradas tanto nos neurônios NADH-d reativos como nos NADPH-d reativos. Ambas populações neuronais tiveram a densidade diminuída com o envelhecimento, sendo significativa (P>0,05) apenas nos neurônios NADPH-d reativos. Em relação à atividade física, somente os neurônios NADPH-d reativos tiveram a densidade significativamente diminuída (P>0,05), enquanto que os neurônios NADH-d reativos tiveram a densidade ligeiramente aumentada. Nenhuma alteração significativa (P>0,05) foi verificada na área do perfil neuronal e na espessura da camada muscular do colo. / The known of all facets that involve this process is an actual necessity, once time the aging population is increasing in whole world. The digestory system is an important target of the aging alterations, being the constipation a frequent disturbance related. For this reason, studies about the neurons of the myenteric plexus are necessary. Moreover, knowing that the physical activity is a therapeutic recommended to avoid the constipation, this research have as objectives study quantitatively and qualitatively the effects of aging in the NADH- and NADPH-diaphorase reactive neurons of the myenteric plexus of the colon of adult rats (group A) and middle-aged (group B), as well as the possible effects of physical activity (running) about the neurons of middle-aged animals (group C). Furthermore, the present research also aimed verifies possible alterations in the muscle layers (circular and longitudinal) of colon, as well as the neuronal ultra-structure in all groups. In relation to the morphology, no neuronal alteration or in the arrangement of the plexus was showed. However, a major amount of collagen around the ganglion was verified in the animals of the group B. The quantitative alterations were showed both in the neurons NADH-d reactive and in the NADPH-reactive. Both neuronal populations had a decrease in the density with the aging, being significant (P>0,05) only in the neurons NADPH-d reactive. In relation to the physical activity, only the neurons NADPH-reactive had a decrease significant in the density (P>0,05), while the neurons NADH-d reactive had the density a little increased. No significant alterations (P>0,05) were verified in the neuronal profile area and in the thickness of the muscle layers of the colon.

Os cecos gástricos de Rhynchosciara americana e de outros insetos são órgãos envolvidos em digestão terminal e/ou absorção de nutrientes. Devido a isso, a sua disposição na região anterior do ventrículo é intrigante. Uma explicação para essa localização seria a existência de uma circulação endo-ectoperitrófica de fluidos e de enzimas digestivas, como foi proposto anteriormente em R. americana. Afim de procurar reforçar o modelo proposto procurou-se obter dados sobre a ultraestrutura das células do tubo digestivo e sobre a composição enzimática de suas microvilosidades. As células dos cecos e do ventrículo posterior distal tem uma ultraestrutura bastante semelhante; elas possuem grandes microvilosidades apicais e a membrana plasmática basal apresenta invaginações com mitocôndrias associadas, embora a maioria dessas organelas sejam encontradas no citoplasma apical. O compartimento extracelular delimitado por essas invaginações da membrana basal apresenta poucas aberturas para a hemolinfa, o que dá à célula a possibilidade de concentrar solutos nesse compartimento. As células do ventrículo anterior possuem microvilosidades apicais muito pequenas e um sistema elaborado de invaginações da membrana basal, com muitas mitocôndrias associadas, e que se estendem até quase o ápice das células. O compartimento extracelular delimita do por essas invaginações apresenta, nessas células, grande número de aberturas para a hemolinfa. O ventrículo posterior proximal representa uma região de transição entre o ventrículo anterior e o ventrículo posterior distal. A ultraestrutura dos cecos e ventrículo posterior distal é coerente com uma função na absorção de fluidos, enquanto que aquela do ventrículo anterior e coerente com uma função de secreção de fluidos. A análise da composição de enzimas nas microvilosidades das diferentes regiões do intestino médio mostrou novamente que as células dos cecos e do ventrículo posterior distal são semelhantes e também que devem estar envolvidas na digestão terminal dos nutrientes, pois possuem alta atividade específica para hidrolases de oligômeros. As células do ventrículo anterior (e do ventrículo posterior proximal) possuem microvilosidades com atividade específica muito baixa para as hidrolases de oligômeros, corno seria de esperar para urna célula que estivesse secretando fluidos, pois o substrato seria continuamente arrastado para longe da enzima. Os dados obtidos permitiram reforçar e refinar o modelo da circulação endo-ectoperitrófica de enzimas em R.americana. Para melhor compreensão da digestão terminal de proteínas em R.americana, aminopeptidases de diferentes regiões do tubo digestivo foram estudadas. As aminopeptidases do lúmen e do citossol das células dos cecos são semelhantes, e ambas diferem daquelas presentes na membrana plasmática dessas células. Os dados obtidos apoiam a hipótese de que a maioria das aminopeptidases solúveis nas células dos cecos são enzimas em via de serem secretadas para o lúmen e somente urna quantidade muito pequena pode ter urna função intracelular. Para iniciar o estudo das propriedades das enzimas envolvidas na digestão terminal, a celobiase ligada a membrana plasmática dos cecos foi escolhida. A celobiase solubilizada por Triton X-100 apresenta um peso molecular de 106.000 e um pI de 5,4, enquanto que a solubilização por papaína resulta em urna molécula com peso molecular de 65.000 e um pI de 4,7. A celobiase solubilizada por papaína e purificada por centrifugação em gradientes de densidade hidrolisa β-glicosídeos, β-galactosídeos e β-fucosídeos em um mesmo sítio ativo. Com base na comparação entre os Kis e os Kms para celobiose e para pNPβGli e na constância do Km obtido em diferentes pHs, tem-se uma forte evidência que essa enzima opera segundo uma cinética de equilíbrio rápido e não de estado estacionário. O fato da hidrólise da ligação β-glicosídica ocorrer sem inversão da configuração, ocorrer uma grande inibição da celobiase pela δ-gliconolactona e substituintes do radical aglicone influenciarem a constante catalítica sugere que, no mecanismo de catálise da celobiase, há formação de um íon carbônium intermediário e que não há formação de um complexo covalente enzima-substrato. / The gastric caeca of Rhynchosciara americana and other insects are involved in terminal digestion and/or absorption of nutrients. Due to that, their occurrence near the oesophagus is puzzling. One explanation for this should be the existence of an endo-ectoperitrophic circulation of fluids and digestive enzymes as previously proposed for R. americana. In order to support the proposed model of endo-ectoperitrophic circulation of digestive enzymes, fine structural and enzymological data on the midgut cells were obtained. Midgut caecal and distal posterior ventricular cells have a similar ultrastructure characterized by large apical microvilli and a basal plasma membrane infolded with associated mitochondria which are, nevertheless, more conspicuous in the apical cytoplasm. The fact that the basal plasma membrane infoldings constitute an extracellular compartment, with few openings into the underlying extracellular space, should permit the cell concentrate solutes in that compartment. The anterior ventricular cells possess small microvilli disposed in the cell apexes and elaborate mitochondria-associated basal plasma membrane infoldings extending almost to the tips of the cells. These infoldings display regular openings into the underlying extracellular space. The proximal posterior ventriculus represents a transition region between the anterior ventriculus and the distal posterior ventriculus. The fine structure of caeca and distal posterior ventricular cells is in accordance to their presumed function in fluid absorption, whereas the fine structure of anterior ventricular cells suggests a function in fluid secretion. Hydrolase assays in microvilli samples prepared from cells of different midgut regions showed that caeca and distal activities for digestive enzymes, suggesting a role in terminal posterior ventricular cells are alike in displaying high specific digestion. In contrast, very low specific activities of digestive enzymes were found in anterior ventricular cells, in accordance to their proposed function in fluid secretion. The results lend support to the model of the endo-ectoperitrophic circulation of digestive enzymes in R. americana. In order to extend our knowledge on protein terminal digestion, the aminopeptidases from cytosol and lumen were found to be similar and to differ from caecal microvillar aminopeptidades. The data support the assumption that the majority of the soluble aminopeptidases from the caecal cells are enzymes en route to their being secreted and only a minor amount would have a typical intracellular function. Caecal plasma membrane-bound cellobiase was chosen to initiate a detailed study of the properties of the enzymes involved in terminal digestion. The Triton X-100-solubilized cellobiase displays a molecular weight of 106.00 and a pI of 5.4, whereas the papaintreated cellobiase shows a molecular weight of 65.000 and a pI of 4.7. The papain-solubilized cellobiase, after being purified by density gradient centrifugation, hydrolyze β-g1ucosides, β-galactosides and β-fucosides in the same active site. The cellobiase seems to operate according to a rapid equilibrium kinetics, since the Km for cellobiose is constant over a wide range of pHs and the Km for cellobiose and pNPβGlu are identical to their Kis in a experiment of competition between substrates. The hydrolysis of the β-g1ucosidic bound occurs without inversion of configuration, δ-gluconolactone is a strong inhibitor of cellobiase and substituints in the substrate aglycone affects the catalytic constant of the reaction. These data support the assumption that the mechanism of the reaction catalysed by cellobiase involves the intermediary formation of a carbônium ion, instead of a glucosyl-enzyme intermediate.

O saco vitelino é a principal fonte de nutrição do embrião durante o período em que a placenta verdadeira ainda não está completamente formada. É responsável pela hematopoiese, pois dele se desenvolvem os primórdios das células sanguíneas, bem como parte do sistema circulatório primitivo do embrião. Tivemos como objetivo caracterizar a área transicional do saco vitelino para o intestino primitivo através de análise macroscópica, microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e reação imunohistoquímica para detecção de células germinativas (Oct-4). Foram realizados cortes seqüenciais de todos os embriões para permitir a visualização da estrutura como um todo. Nas amostras obtidas, pudemos observar a presença do saco vitelino com a área de conexão com intestino primitivo composto por inúmeras ilhotas vasculares que correspondem aos vasos envolvidos pelas células vitelínicas e células mesenquimais. No interior dos vasos identificamos hemangioblastos em grande quantidade. A camada correspondente ao mesênquima é delgada e com células alongadas e endoderma da membrana vitelínica é composto por células endodérmicas, grandes, uni ou binucleadas. Tal arranjo celular se assemelha a uma glândula devido a sua arquitetura em ilhas vasculares somado às camadas teciduais. O epitélio do intestino primitivo inicia sua diferenciação com células colunares estratificadas e bordadura em escova seguido de células mesenquimais indiferenciadas. A área transicional entre o saco vitelínico e o intestino primitivo é estreita em relação à luz destas duas estruturas com células de formato irregular, constituindo um delicado revestimento no lúmen contendo hemangioblastos. No mesênquima da área transicional inúmeros e pequenos capilares foram observados com hemangioblastos em seu interior. Em embriões e fetos submetidos à imunohistoquímica, verificamos células reativas como o metanefro, gônadas, parênquima hepático e saco vitelino. / The yolk sac is the main source of embryo nutrition during the period that true placenta are not still formed and responsible by hematopoieses because from it were developed the blood cells, as a part of embryo primitive circulatory system. We aimed to characterize the transitional area between the yolk sac and the primitive intestine by light microscopy, transmission electron microscopy and detection of germ cell lines by Oct-4 immunohistochemistry. Were done in all embryos serial sections to permit the identification for all structures. Were possible identify the yolk sac connection with primitive intestine composed by many blood islet corresponding to relation with yolk and mesenchymals cells. Inside the vessels were identified hemangioblasts. The layer corresponding to mesenchyme is thin and with elongated cells and the vitellinic membrane endoderm is composed by large, uni or binucleate endodermic cells. This shape is similar to a gland related to their architecture, vessels islets and tissue layers. Primitive intestine epithelium begins their differentiation with stratified columnar cells and undifferentiated mesenchymals cells. This transitional area is thin related to their lumen with irregular shape and constituted by delicate lumen basement and hemangioblast. Inside the mesenchyme there are many smaller capillaries observed with hemangioblast in it. Embryos and fetus submitted to immunohistochemistry and were verified positive cells like metanefrons, gonads, hepatic parenchyma and yolk sac.

As células NKT compreendem um grupo distinto de linfócitos caracterizados pela reatividade a glicolipídios apresentados pela molécula CD1d. Em nosso trabalho, nós investigamos a participação das células NKT na homeostase intestinal utilizando animais nocautes para essas células e também caracterizamos os subtipos de NKT no intestino. Nos animais nocautes observamos que a ausência de células NKT influencia a microbiota e a homeostase intestinal. Os animais nocautes possuem diminuição no filo Firmicutes, diminuição dos níveis de IgA nas fezes e de TGF-β no intestino. Esses animais também são mais suscetíveis à colite induzida por DSS, apresentando menor sobrevida, menor tamanho do cólon e aumento no score. Nos animais selvagens, a indução do subtipo NKT10 diminuiu a inflamação intestinal, não causou intensa redução do cólon e reduziu a frequência de células NKT e do subtipo NKT17 no intestino. Nossos resultados indicam que as células NKT intestinais são peças importantes para a homeostase intestinal e para a composição da microbiota intestinal. / NKT cells comprise a distinct group of lymphocytes characterized by their reactivity to glycolipids presented by CD1d. In our work, we investigated the involvement of NKT cells in intestinal homeostasis using knockout (KO) mice and we also characterized NKT subtypes in the intestine. The absence of NKT cells in KO mice influenced the intestinal microbiota and homeostasis. KO mice had a decrease in the Firmicutes phyla, in the levels of fecal IgA and TGF-β in the intestine. These mice are also more susceptible to DSS-induced colitis, exhibiting worse survival, severe shortening of the colon and higher score. In wild type mice, the induction of the NKT10 subtype decreased intestinal inflammation, did not cause intense reduction of colon and reduced the frequency of NKT cells and the NKT17 subtype in the intestine. Our results indicate that intestinal NKT cells are important for intestinal homeostasis and microbiota composition.

Com o objetivo de estudar os possíveis efeitos da administração sistêmica de glutamina ou da associação de hidrocortisona, dimetilsulfóxido, ácido ascórbico e pentoxifilina nas lesões de isquemia e reperfusão no cólon maior, foram utilizados dezoito equinos. Sob anestesia geral e controle da oximetria de pulso e pressão arterial, os equinos foram submetidos a laparotomia e em um segmento do cólon maior foi induzida isquemia venosa total. Após uma hora de isquemia, seis equinos do Grupo G receberam glutamina (25mg/Kg IV), seis equinos do Grupo A receberam uma associação de hidrocortisona (4mg/Kg IV), dimetilsulfóxido (20mg/Kg IV), ácido ascórbico (50mg/Kg IV), e pentoxifilina (10mg/Kg IV) e os seis equinos do Grupo C receberam apenas solução de Ringer com lactato e constituíram o Grupo controle. Após duas horas de isquemia o fluxo sanguíneo local foi restabelecido. Decorridas duas horas de reperfusão foi realizada a laparorrafia e permitiu-se a recuperação anestésica. Seis horas após o início da reperfusão os equinos do Grupo G receberam novamente 25mg/Kg de glutamina, enquanto os equinos dos Grupos A e C receberam apenas solução de Ringer com lactato. Doze horas após o início da reperfusão os equinos foram eutanasiados. Foram colhidas amostras de cólon antes da indução da isquemia, após duas horas de isquemia e após duas e doze horas de reperfusão, que foram submetidas a avaliação histomorfológica, ultra-estrutural e determinação da atividade de mieloperoxidase. Os resultados para todas as variáveis estudadas foram semelhantes entre os grupos, permitindo concluir que os tratamentos, nas condições em que foram empregados neste estudo, não foram eficazes em atenuar as alterações decorrentes de isquemia e reperfusão no cólon maior de equinos. / This study was designed to evaluate the effects of intravenous administration of glutamine or the association of hydrocortisone, dimethyl sulphoxide, ascorbic acid and pentoxifylline on ischemia reperfusion lesions of the large colon. A segment of the large colon was isolated in 18 horses under inhalant general anesthesia and total venous ischemia was induced. One hour after the onset of ischemia, glutamine (25mg/Kg IV) was administered to six horses (G group), an association of hydrocortisone (4mg/Kg IV), dimethyl sulphoxide (20mg/Kg IV), ascorbic acid (50mg/Kg IV) and pentoxifylline (10mg/Kg IV) was administered to six horses, and the others received only isotonic fluids and remained as the control group (C). After 2 hours of ischemia and 2 hours of reperfusion the abdomen was closed and the horses were allowed to recover from anesthesia. After 6 hours of reperfusion, horses of group G received another dose of glutamine (25mg/Kg IV) whereas groups A and C received only isotonic fluids. Horses were euthanatized 12 hours after reperfusion. Biopsies were taken from the large colon before and after 2 hours of ischemia and after 2 and 12 hours of reperfusion. Alterations were evaluated under light and scanning electronic microscopy and scored. Additionally, mieloperoxidase (MPO) activity was measured. Results showed that scores for mucosal lesion, edema, hemorrhage, neutrophil infiltration and MPO activity during IR were similar between groups G, A and C. It was concluded that treatments were not effective in attenuating effects of ischemia and reperfusion in the equine large colon.

Plus de 80% des cancers colorectaux sont initiés par la perte de fonction du gène Apc. Afin d’identifier de nouvelles cibles thérapeutiques, nous avons utilisé des modèles murins présentant des mutations du gène Apc et recherché par des analyses de puces à ADN de nouveaux événements moléculaires impliqués au cours de la carcinogenèse intestinale.Cette approche nous a permis d’identifier une activation de la signalisation Notch tout au long du processus tumoral. Toutefois, cette activation n’est pas un élément clé de la progression tumorale puisque son inhibition n’empêche pas le phénotype tumoral induit par la perte du gène Apc. En parallèle, nos travaux ont permis d’identifier une induction de l’autophagie tout au long de la carcinogenèse intestinale. L’activation de ce processus biologique ouvre, quant à lui, de nouvelles perspectives thérapeutiques dans le traitement du CCR. / Over 80% of colorectal cancers are linked to an Apc mutation. To identify new therapeutic targets, we used mouse models with Apc mutations and performed microarray experiments to identify key molecular events involved in intestinal carcinogenesis. This approach allowed usto identify an activation of the Notch signaling all along tumor progression. However, this induction is dispensable for tumor development since its inhibition did not prevent the Apc phenotype. In addition, we have identified an induction of autophagy throughout intestinal carcinogenesis which appears to be an attractive therapeutic target in the treatment of CRC patients.

Considéré comme un cancer de l'âge mûr, l'incidence du cancer colorectal ne cesse d'augmenter avec l'allongement de la vie. Dans la majorité des cas, le cancer colique est associé à une mutation du gène suppresseur de tumeur Apc, contrôlant l’activation de la signalisation Wnt/β-caténine. Afin, d'identifier de nouveaux acteurs de la tumorigenèse colique, notre laboratoire a développé des modèles murins de mutation du gène Apc qui ont pour avantage de mimer la pathologie humaine (Colnot et al, 2004 ; Andreu et al, 2005). La création de ces modèles a permis à l’équipe de démontrer i) qu’une activation physiologique de cette voie contrôle la prolifération des cellules souches et des progéniteurs ainsi que leur différenciation et ii) qu’une activation aigüe est suffisante pour déclencher l’initiation tumorale intestinale (Andreu et al, 2005; Andreu et al, 2008). Les travaux antérieurs à mon arrivée ont permis d’identifier différents évènements moléculaires et cellulaires induits en cascade suite à l’activation pathologique de la voie Wnt/β-caténine. Parmi ceux-ci, une induction transcriptionnelle de gènes impliqués dans l'autophagie a été mise en évidence. Ce processus d'auto-cannibalisme cellulaire est associé à de nombreuses pathologies telles que les maladies neurodégénératives ou infectieuses. Cependant, le rôle de l'autophagie dans le cancer reste ambivalent et son implication dans le cancer colique demeure inconnue.Dans ce contexte, mon travail de doctorat a consisté à répondre aux questions suivantes :L’induction transcriptionnelle de gène Atg s’accompagne-t-elle d’une activation du processus d’autophagie à tous les stades de la progression tumorale intestinale murine et humaine?Des études de transcriptomique à haut débit nous ont permis d’identifier une induction transcriptionnelle de gènes clés du processus d’autophagie tels qu’Atg7. Cependant, l’activation fonctionnelle de l’autophagie n’est pas toujours associée à une augmentation de la transcription des acteurs de ce processus. Nous nous sommes donc intéressés aux marqueurs couramment décris dans la littérature et permettant d’établir l’état d’activation du flux autophagique. Ainsi, nous avons étudié le niveau d’expression de ces marqueurs par des expériences de western-blot et d’immuno-marquages sur des échantillons tumoraux humains et murins à différents stades de la progression du CRC. L’inhibition de l’autophagie impacte-t-elle la carcinogénèse colorectale?Dans ce contexte, nous avons généré un modèle murin de délétion conditionnelle et simultanée d'un allèle du gène Apc et des deux allèles du gène Atg7 (gène clé de l'autophagie) spécifiquement dans les cellules épithéliales intestinales. Afin de suivre l'apparition et l'évolution des tumeurs au cours du temps, nous avons mis au point une nouvelle méthode non-invasive de reconstruction tridimensionnelle de côlons de souris, issue d'imagerie échographique à haute résolution. Dans le but de caractériser l’impact de l’inhibition de l’autophagie, les modifications propres à la cellule déficiente en autophagie ont été explorées, notamment le statut énergétique ainsi que les changements dans l’environnement immunitaire et microbien de l’épithélium intestinal. Finalement, l’inhibition génétique de l’autophagie dans notre modèle murin, prédisposé au développement de tumeurs intestinales, nous a permis de caractériser l’implication de l’autophagie dans la carcinogénèse colique, ainsi que les mécanismes moléculaires et cellulaires liant l’auto-cannibalisme cellulaire à la pathologie tumorale. / Colorectal cancer is one of the major causes of cancer-related deaths. We took advantage of Apc mutant mice that mimic the adenomatous polyps that affect humans with an inactivated Apc gene, to gain insight into the critical events that affect the development of colorectal cancer. We show that autophagy, a catabolic pathway involved in the degradation of intracellular proteins and organelles, is activated in intestinal murine and human cancer and its inhibition has a crucial role in controlling tumorigenesis. We report that the in vivo conditional deletion of the essential autophagy gene Atg7 in intestinal epithelial cells inhibits the formation of pre-cancerous lesions resulting from Apc loss by enhancing immunosurveillance. The antibody-mediated depletion of CD8+ T cells demonstrated a critical role for CD8+ T cells in antitumoral responses resulting from the inhibition of autophagy. We used a broad-spectrum antibiotics treatment to show that the expansion of IFN-producing CD8+ T cells following the deletion of Atg7 is dependent on the intestinal microbiota and is associated with Paneth and goblet cell defects. In addition, the inhibition of autophagy affected tumor cell growth and restrained cancer growth for extended time periods. We demonstrate that the inhibition of autophagy in Apc tumor cells results in a stress response accompanied by metabolic defects, characterized by AMPK activation and p53 cell cycle arrest. This study suggests that autophagy inhibitors may suppress tumorigenesis in patients at high risk of developing colorectal cancer.

Resumo: O uso de diferentes inibidores selectivos da COX-2 em vários estudos mostraram resultados conflitantes, relacionados principalmente a uma elevada taxa de deiscências nas suturas intestinal.Basedo na hipótese de que o uso de um antibiótico de largo espectro pode reduzir a carga bacteriana no sítio de lesão e, inversamente, reduzir a migração celular de PMNLs, o objetivo deste estudo foi determinar os efeitos do Paracoxibe, uma droga inibidora da COX- 2,disponível comercialmente, associada ou não ao Imipenem na cicatrização de anastomoses no ileo ecólon de ratos. Trezentos e sessenta e oito ratos brancos Wistar foram submetidos a laparotomia, a transecção do cólon esquerdo e do íleo terminalreanastomose randomizados para receber paracoxibe (0,66 mg / Kg), imipenem (30mg/Kg) ou solução salina (controles) por via intramuscular por 4 dias. Os ratos foram distribuídos em quatro grupos de 92 ratos: Grupo 1 (controle), grupo 2 (Paracoxib), grupo 3 (Imipenem) e grupo 4 (paracoxib / imipenem) Os animais em cada grupo foram sacrificados após 4,7,14 e 21 dias, sendo as anastomoses avaliadas por meio de medidas de força de ruptura e pelo exame histológico do processo de cicatrização. Doze animais do grupo paracoxibe (13%) e oito do grupo paracoxibe / Imipenem (8,7%) foram a óbito no 5° e 7° dia de pós operatóriopor deiscências da anastomose ileal. A força de ruptura nos ratos tratados com paracoxibe foi significativamente menor do que no grupo controle no 7°, 14° e 21° dias de pósoperatório das anastomoses do íleo (87,6 g, 184,3 g e 212,5 g<127,8 g, 243,6 g e 251G , P = 0,026) e no 4°,7°,14° e 21° dias de pós operatório as anastomoses de cólon (139,3 g, 170,4 g, 202,9 g e 299,9 g<203,3 g, 254,3 g, 364,2 g e 401g, p = 0,026). Não houve diferenças significativas entre os grupos paracoxibe, imipenem e paracoxib / imipenem. A tendência de aumento da força de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of different selective COX-2 inhibitors in several studies showed conflicting results, related mostly from a high rate of dehiscence's on intestinal sutures. Based on the hypothesis that the use of a broad spectrum antibiotic can decrease the bacterial load at the injured site and conversely reduce PMNLs cell migration, the aim of this study was to determine the effects of a new commercially available COX-2 inhibitor Paracoxib, associated or not to Imipenem on the healing of ileal and colonic anastomosis in rats. Three hundred and sixty eight white Wistar rats underwent laparotomy, ileal and left colon transection and reanastomosis and randomized to receive paracoxib (0,66 mg/Kg ), imipenem ( 30mg/Kg) or saline solution ( controls ) by intramuscular injections for 4 days. The rats were distributed in four groups of 92 rats: group1 (control); group 2 ( Paracoxib); group 3 ( Imipenem ) and group 4 (paracoxib/imipenem). Animals in each group were killed after 4,7,14 and 21 days, and the anastomosis evaluated by means of breaking strength measures and by histological examination of the healing process. Twelve animals in paracoxibe group (13% ) and eight on paracoxib/Imipenem group ( 8,7% ) died on on days 5 and 7 related to ileal anastomotic dehiscences. Breaking strength in rats treated with paracoxib was significantly lower than in the control group in post-operative day 7, 14 and 21 in ileal anastomoses ( 87,6g, 184,3g and 212,5g < 127,8g, 243,6g and 251g, p=0.026 ) and on days 4,7,14 and 21 in colonic anastomoses ( 139,3g, 170,4g, 202,9g and 299,9g < 203,3g, 254,3g, 364,2g and 401g, p=0.026 ). There were no significant diferences between imipenem, paracoxib and paracoxib/imipenem treated animals. A tendency of increased breaking strength were observed in paracoxib/imipenem group when compared to imipenem and paracoxib groups. The breaking strength increased progressivelly ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Alexandre Bakonyi Neto / Coorientador: Luiz Eduardo Naresse / Banca: Luiz Henrique Cury Saad / Banca: José Gulherme Minossi / Banca: Luiz Roberto Montolar Verderesi / Banca: Roberto Marius de Carvalho / Doutor

Introdução: O dióxido de titânio (TiO2) é um corante encontrado na forma de partículas em diversos produtos industrializados. Muitos estudos, a maioria envolvendo o trato respiratório, alertam sobre os efeitos prejudiciais advindos da exposição ao TiO2. Embora partículas da dieta, tais como o TiO2, sejam ingeridas diariamente, ainda existem poucos estudos investigando seus efeitos sobre o trato gastrointestinal. Objetivos: O objetivo principal desse trabalho é investigar a ação de nano (NP) e micropartículas (MP) de TiO2 sobre a resposta inflamatória no intestino delgado de camundongos. Material e Métodos: Camundongos Bl 57/6 foram divididos em 2 grupos experimentais, os quais receberam NP TiO2 (66 nm) ou MP TiO2 (260 nm) a uma dose de 100 mg/Kg/dia, e um grupo controle, o qual recebeu água destilada. O tratamento foi administrado por gavagem, durante 10 dias, uma vez ao dia. Ao final, o intestino delgado foi coletado para a análise de citocinas (IL-1b, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IL-23, TNFa, IFNg e TGFb) por ELISA e quantificação de células T CD4+, T CD8+, células dendríticas e natural killers por imunohistoquímica. Resultados: Os resultados demonstram maior concentração de citocinas IL-12, TNFa, IFNg, IL-4, IL-23 e TGFb, e células T CD4+ nos grupos que receberam TiO2. O aumento de citocinas foi mais importante no íleo, onde há maior concentração de células M, as quais representam a principal via de captação de partículas no intestino. Conclusão: As partículas de TiO2 provocaram uma resposta pró-inflamatória, predominantemente do tipo Th1, no intestino delgado dos camundongos, especialmente no íleo. Esses dados representam uma evidência in vivo do potencial inflamatório de partículas de TiO2 sobre o trato gastrointestinal / Introduction: Titanium dioxide (TiO2) is a white pigment widely found as micro and nano-sized particles added to food, drugs, cosmetics, etc. Studies involving the pulmonary tract warn about adverse effects resulting from exposure to TiO2, emphasizing its inflammatory potential. Although the gastrointestinal tract is considerably exposed to TiO2 particles at daily basis there are few information regarding its adverse effects on intestine. Objectives: We aimed to investigate the effects of TiO2 nanoparticles (NP) and microparticles (MP) on inflammatory response in the small intestine of mice. Methods: Bl 57/6 mice received suspensions containing TiO2 (100 mg/Kg/day) as TiO2 NP (66 nm), or TiO2 MP (260 nm) by gavage for 10 days, once a day; control group received only distilled water. At the end of the treatment, the small intestine were extracted for assessment of cytokines (IL-1b, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IL-23, TNFa, IFNg e TGFb) by ELISA and quantification of inflammatory cells (T CD4+, T CD8+, dendritic cells, and natural killer) by immunohistochemistry. Results: We found increased levels of T CD4+ cells and cytokines (IL-12, TNFa, IFNg, IL-4, IL-23, and TGFb) on groups receiving TiO2 when compared to control group. Cytokines production was more important on the ileum, local presenting greater concentration of M cells, which represent the main pathway of particles uptake on gut. Conclusion: Our findings indicate that TiO2 particles induce a Th1 mediated inflammatory response on small bowel in mice. These results represent an in vivo evidence of the inflammatory potential of TiO2 particles on the gastrointestinal tract

A estrongiloidíase é uma parasitose intestinal sendo considerada a quarta maior causada por nematódeos. O mecanismo de defesa contra a estrongiloidíase é mediada pela ativação de células de perfil Th2, que amplificam a resposta celular através da secreção de mediadores inflamatórios. O que faz da estrongiloidíase um grave problema de saúde pública, é o desenvolvimento da hiperinfecção, principalmente devido ao uso de glicocorticóides, onde ocorre aumento do número de larvas e fêmeas que se disseminam por todo organismo. Estudos demonstraram que algumas infecções helmínticas têm sido acompanhadas por hipertrofia e hipercontratillidade da musculatura intestinal, via JAK-STAT 6. Entretanto pouco se sabe sobre a influência desta via nas alterações da parede muscular do duodeno durante infecção pelo Strongyloides venezuelensis. O presente trabalho objetivou investigar as alterações morfológicas, imunológicas e patológicas da musculatura lisa intestinal que ocorrem em decorrência da infecção experimental pelo S. venezuelensis, bem como a interferência do tratamento com Dexametasona e o papel da via JAK - STAT 6 neste processo. Ratos Wistar foram inoculados com larvas de S. venezuelensis, tratados com dexametasona e sacrificados nos dias 5, 7, 14 e 21. Foram realizadas diversas colorações com a finalidade de quantificar as fêmeas adultas no duodeno, realizar morfometria da musculatura duodenal, quantificar eosinófilos e células caliciformes. Foi realizada análise da expressão gênica do gene STAT 6. Nossos resultados mostraram hiperplasia das células caliciformes, infiltrado eosinofílico e espessamento da musculatura lisa duodenal. Houve aumento na expressão de STAT 6 nos animais infectados. O tratamento com a Dexametasona inibiu drasticamente estas alterações. Entretanto o número de parasitas foi significativamente maior nos ratos infectados tratados quando comparados aos infectados. As alterações intestinais durante a infecção ocorreram na tentativa de expulsar o parasita e resolução da infecção. Contudo, a inibição deste processo provocada pela Dexametasona possivelmente retardou ou impediu a resolução da infecção. / Strongyloidiasis is an intestinal parasitosis with an obligatory pulmonary cycle, which represents the fourth largest parasitosis caused by nematodes. The mechanism of defense against strongyloidiasis is mediated by activation of Th2 cells, which amplify the cellular response through the secretion of inflammatory mediators. Strongyloidiasis is a serious public health problem due the development of hyperinfection, due to the use of glucocorticoids, where the number of worms and females increases, and disseminate to other organs. Studies have shown that some helminth infections have been accompanied by hypertrophy of intestinal muscles and hypercontractility, JAK-STAT 6 pathway. However little has been reported about on the influence of JAK-STAT 6 pathway in changes of the muscular wall of the duodenum during Strongyloides venezuelensis infection. The aim of this study was to identify the morphological, immunological and pathological changes of the intestinal smooth muscle during Strongyloides venezuelensis in Wistar rats and to determine the effects of Dexamethasone treatment and role of JAK-STAT 6 pathway in these process. Wistar rats were inoculated with S. venezuelensis larvae, treated with dexamethasone and killed at 5, 7, 14 and 21 days. Morphological and morphometric analyzes with routine stains to quantify globet cells, eosinophils and measure the circular and longitudinal layers of duodenal smooth muscle. Performed gene expression analysis of STAT 6. Goblet cell hyperplasia and increased of intestine smooth muscle wall thickness and eosinophils levels were elevated throughout the course of the infection. Moreover, an increase in the expression of STAT 6 in infected animals. The morphological findings and the immunomodulatory response to the infection were drastically reduced in dexamethasone-treated rats. However, the number of worms was significantly higher on infected and treated rats with Dexamethasone compared to just infected ones. The intestinal changes during infection ocurred in an attempt of expel the parasite and elucidate the infection. Although, the inhibition of the process caused by Dexamethasone possibly delay or prevent the resolution of infection