Chez l’adulte, le facteur de transcription homéotique Cdx2 est spécifiquement exprimé dans l’intestin dont il maintient l’identité et contrôle l’homéostasie. Des études récentes menées chez l’homme ont identifié des formes de cancer colorectal de mauvais pronostic dans lesquelles l’expression de Cdx2 est très fortement réduite. Ce travail de thèse visait à étudier les conséquences physiopathologiques de la perte de fonction de Cdx2 dans l’intestin adulte. A partir d’un modèle murin d’invalidation conditionnelle et mosaïque de Cdx2, nos résultats montrent que la perte de Cdx2 conduit au développement de lésions caecales de type gastrique qui n’évoluent pas spontanément en cancer. Ces lésions créent cependant un microenvironnement inflammatoire qui favorise la transformation maligne de cellules épithéliales voisines intactes pour Cdx2 et prédisposées à la tumorigénèse. Globalement, ces résultats montrent que Cdx2 exerce une fonction suppresseur de tumeurs « cellule non-autonome » dans l’intestin. / The intestine-specific transcription factor Cdx2 is required throughout life for intestinal homeostasis and for the maintenance of intestinal identity. Several recent studies showed that Cdx2 expression is dramatically reduced in some human colon cancers of poor prognosis. This work aimed to investigate the pathophysiological consequences of the loss of Cdx2 in the adult gut. Conditional mosaic ablation of Cdx2 in mice causes gastric-type metaplasia in the cecum which do not spontaneously evolve to cancer. However, these lesions strongly modify the inflammatory microenvironment which facilitates the malignant transformation of adjacent Cdx2-intact and cancer-prone epithelial cells. Collectively, these results unravel a novel and original function of Cdx2, namely its non-cell autonomous tumor suppressor activity in the gut.

Quarenta e duas vacas Holandesas, em gestação e multíparas, e os respectivos bezerros recém-nascidos foram utilizados para determinar se as concentrações de IGF-I no colostro e secreções lácteas podem ser alteradas em resposta à mudanças na concentração sérica de IGF-I pré-parto, avaliar comparativamente a flutuação sérica pré-parto de IGF-I em relação a IgG, bem como as flutuações séricas de IGF-I e IgG nos bezerros na primeira semana de vida e, adicionalmente, alterações na mucosa intestinal dos mesmos. As vacas foram distribuídas ao acaso em dois grupos de 21 animais, o grupo tratado recebeu 500 mg de somatotropina bovina recombinante (rbST) e o grupo controle recebeu injeções de vitamina E. Ambos tratamentos iniciaram 35 dias pré-parto e foram administrados em intervalos de 14 dias. Semanalmente, foi observado o escore corporal e foram coletadas amostras de sangue até a data de parição. Foram coletadas amostras do colostro e das secreções lácteas, diariamente, por sete dias pós-parto. Os bezerros recém-nascidos foram distribuídos ao acaso, em um arranjo fatorial 2X3, correspondendo ao tratamento das mães (controle ou rbST) e às datas de abate (ao nascimento, aos dois dias de idade e aos sete dias de idade). Diariamente, foram coletadas amostras de sangue até a data de abate. Para as análises estereológicas amostras foram coletadas de cinco regiões do intestino delgado. O escore corporal e a concentração sérica de ácidos graxos não-esterificados não diferiram entre os grupos durante todo o período experimental (P>0,05). Os grupos rbST e controle apresentaram diferenças significativas quanto às concentrações séricas de IGF-I na segunda e quarta semanas após o início do período experimental (P<0,05), em resposta às aplicações do rbST, no entanto não foram encontradas diferenças entre os tratamentos no parto (P>0,05). A concentração de IGF-I foi superior no colostro das vacas tratadas com rbST (P<0,05), não diferindo nas secreções subseqüentes. As concentrações séricas de IgG não diferiram entre os tratamentos durante todo o período experimental, bem como as concentrações de IgG do colostro e demais secreções lácteas (P>0,05). Não foram encontradas diferenças entre os tratamentos nas concentrações séricas de IGF-I dos bezerros até o sétimo dia de vida, como também não foram encontradas diferenças entre as concentrações séricas de IgG nos bezerros após 24 horas de vida (P>0,05). O peso dos órgãos e o volume parcial (Vv) da mucosa absortiva não diferiram entre os tratamentos nas três datas de abate, observando-se somente diferenças significativas entre as datas de abate. A porção do jejuno médio apresentou maior Vv em relação aos outros segmentos do intestino delgado ao nascimento e aos sete dias de vida. A aplicação de rbST no período seco influenciou somente a concentração de IGF-I no colostro, não alterando as concentrações séricas nos bezerros até o sétimo dia de vida, como também o Vv da mucosa absortiva do intestino delgado. / Forty-two Holstein cows, in gestation and multiparous, and their newborn calves were used to evaluate if insulin-like growth factor-I (IGF-I) in colostrum and subsequent mammary secretions could be influenced by changes in blood serum IGF-I and compare its temporal changes with the serum immunoglobulin G (IgG) in pre-partum period, as well as the temporal changes in serum IGF-I and IgG in newborn calves during the first week of life, and also, alterations in its intestinal mucosa. Cows were randomly assigned in two groups of twenty-one animals, treated group was injected 500 mg of recombinant bovine somatotropin (rbST), and the control group received vitamin E injection. Both treatments started 35 days pre-partum and were administered every 14 days until partum. Weekly body condition scores were measured and blood was collected until partum. Colostrum and mammary secretions were collected daily for seven days pos-partum. Newborn calves were randomly assigned to a 2X3 factorial arrangement, which the factors depended on mother’s treatment (control and rbST) and slaughter date (just after birth, two days of life and seven days of life). Blood was collected daily until slaughter. For stereological analysis samples were taken from five sites from small intestine. Body condition scores and nonesterified fatty acid concentration didn't differ between the groups during the experimental period (P>0,05). Groups differed about serum IGF-I during pre-partum (P<0,05), which showed differences on second and fourth weeks of experimental period in response to rbST administration. However, no treatment differences were found at partum (P>0,05). IGF-I concentration was higher in colostrum of cows treated with rbST (P<0,05), but it didn't differ in subsequent mammary secretions. IgG serum concentration didn't differ between treatments during the experimental period, neither IgG concentration in colostrum and subsequent mammary secretions (P>0,05). No differences were found either in calves’ IGF-I levels from birth to seven days old or in IgG serum concentration after 24 hours of life (P>0,05). Organ weight and mucosa partial volume (Vv) didn't differ between treatments in the three slaughter dates, only differences among the salughter dates were observed. Segment from the medium jejunum showed higher Vv in relation to others segments at birth and seven days old. The administration of rbST during the dry period influenced only IGF-I concentration in colostrum, however colostrum IGF-I didn’t affect calves’ serum concentration up to seven days old, neither the mucosa Vv of small intestine.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-15Bitstream added on 2014-06-13T19:36:22Z : No. of bitstreams: 1 sterzo_ev_me_jabo.pdf: 1236361 bytes, checksum: 5ce3ac3939cf7937dff4d6cd89d38f66 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O experimento foi realizado com o objetivo de avaliar os pesos corporal (PC), do fígado (PF) e da bursa de Fabrício (PB), o perfil hematológico (eritrograma, leucograma e glicemia), a integridade e o desenvolvimento da mucosa intestinal de pintos de corte de submetidos ao tratamento por exclusão competitiva (EC) antes e após infecção experimental por Salmonella Enteritidis (SE). Foram utilizados 128 pintos, distribuídos num delineamento ao acaso com esquema fatorial 2 x 4 [2 sexos e 4 tratamentos (NI: não infectados com SE; I: infectados com SE; IEC: infectados com SE e tratados com EC 24 h após infecção; ECI: tratados com EC e infectados com SE 24 h após tratamento)]. Os animais foram sacrificados com 1, 3, 5 e 7 dias pós-infecção (dpi) para obtenção do conteúdo cecal (microbiológico), fígado, bursa de Fabrício e fragmentos do intestino delgado. Os dados demonstram que o uso de EC após infecção não evita a colonização cecal por SE, mas que a mesma é evitada quando a EC é realizada antes da infecção. A partir do 7° dpi as aves infectadas apresentaram os menores valores de PC e PB, e não se evidenciou diferenças na glicemia e no PF. As alterações do eritrograma ficaram restritas aos três primeiros dpi e os resultados do leucograma mostraram uma resposta sexo-específica frente à infecção por SE. Em relação à integridade, o presente trabalho mostrou que os vilos do intestino delgado dos pintos de corte apresentam um grande processo de renovação celular ao final da primeira semana de vida e que EC acelera este processo. O desenvolvimento intestinal variou de acordo com o segmento, o sexo, o tratamento e a idade analisada. / The present experiment was carried out with the objective to evaluate the weights corporal 0NC), of the liver 0NF) and bursa of Fabrício (WB), the hematology profile (erytrogram, leucogram and glycemia), the integrity and the development of the intestinal mucosa by young chickens submitted to competitive exclusion treatment (CE) before and after experimental infection with Salmonella Enteritidis (SE). 128 young chickens, distributed in completely randomized design in 4 x 2 factorial arrangement [had been used 2 sex and 4 treatments (NI: not infection with SE - Control; I: infection with SE; ICE: infection with SE and treated with CE 24 h after infection; CEI: treated with CE and infection with SE 24 h after treatment)]. The animais had been sacrificed with 1, 3, 5 and 7 days post infection (dpi) for attainment of the cecal content (microbiological), liver, bursa of Fabrício and fragments of the thin intestine. The data demonstrate that the CE use after infection does not prevent the cecal settling for SE, but that the same one is prevented when the CE is carried through before the infection. From 7° dpi the infections birds had presented the lesser values of WC and WB, and it did not prove differences in the glycemia and the WF. The alterations of the erytrogram had been restricted to three first dpi, and the results of the leucogram had shown to a sex-specific reply front to the infection for SE. In relation to the integrity, the present work showed that the vilos of the thin intestine of young chickens present a great process of cellular renewal to the end of the first week of life and that CE speeds up this processo The intestinal development in accordance with varied the segment, the sex, the treatment and the analyzed age.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-25Bitstream added on 2014-06-13T20:49:44Z : No. of bitstreams: 1 remedio_rn_me_rcla.pdf: 6045362 bytes, checksum: b200e2d82d3a5807c249841374c8c9b4 (MD5) / O diabetes mellitus resulta de uma complexa interação entre vários graus de susceptibilidade genética e fatores ambientais. Sua principal característica é a secreção deficiente de insulina (hipoinsulinemia), ou ainda a baixa sensibilidade dos tecidos periféricos a este hormônio, fatos que resultam em uma elevação característica nos níveis de glicose no sangue (hiperglicemia). O diabetes tipo I caracteriza-se pela hipoinsulinemia, sendo acompanhado por alterações metabólicas e bioquímicas, além de prejuízos morfológicos em diversos tecidos, como o fígado e o intestino grosso. A prática regular de exercícios é reconhecida como um fator preventivo muito importante para os casos de diabetes, aumentando a sensibilidade e resposta à insulina e diminuindo sua necessidade em indivíduos diabéticos. A fim de analisar estas alterações, ratos Wistar foram distribuídos em quatro grupos: controle sedentário (CS), controle treinado (CT), diabético sedentário (DS) e diabético treinado (DT). O diabetes foi induzido por aloxana monoidratada Sigma. Amostras de fígado e intestino grosso foram coletadas para a realização de técnicas histoquímicas e ultraestruturais. Desta forma, este estudo teve como objetivo principal investigar os prejuízos provenientes do desenvolvimento do diabetes nos tecidos analisados e, a partir desta análise, avaliar os efeitos do treinamento físico na amenização ou prevenção destas alterações. Resultados histoquímicos bastante expressivos foram encontrados no fígado, principalmente em relação ao acúmulo de glicogênio e de fibras colágenas perisinusoidais nas células hepáticas que, após a realização de treinamento físico moderado, atingiram níveis mais próximos dos considerados normais. Os resultados ultraestruturais demonstraram grandes alterações na presença de mitocôndrias e retículo... / Diabetes mellitus results from a complex interaction between various degrees of genetic susceptibility and environmental factors. Its main feature is a deficient insulin secretion (hypoinsulinemia), or the low sensitivity of peripheral tissues to this hormone, facts that result in a characteristic elevation of blood glucose levels (hyperglycaemia). Type I diabetes is characterized by hypoinsulinemia, and is followed by metabolic and biochemical alterations, besides morphological impairment in various tissues, such as liver and large intestine. Regular exercise is recognized as an important preventative factor in cases of diabetes, increasing sensitivity and response to insulin and decreasing its necessity in diabetic individuals. In order to analyze these changes, Wistar rats were divided into four groups: Sedentary Controls (SC), Trained Controls (TC), Sedentary Diabetics (SD) and Trained Diabetics (TD). Diabetes was induced by monohydrate alloxan Sigma. Liver and large intestine samples were collected for carrying out histochemical and ultrastructural techniques. Thus, this study aimed to investigate the damage proceeding from the development of diabetes in the analyzed tissues and evaluate, from this analysis, the effects of physical training in alleviating or preventing these changes. Very promising histochemical results were found in the liver, especially related to the accumulation of glycogen and perisinusoidal collagen fibers in liver cells that, after performing moderate physical training, reached levels near those considered normal. Ultrastructural results showed important variations in the presence of mitochondria and rough endoplasmic reticulum in the cytosol of diabetic rats’ hepatocytes. Slight recovery was observed as result of exercise. Large intestine, in turn, presented significant histochemical changes in the amount of mucin secreted, besides alterations... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Ramon Kaneno / Coorientador: Graziela Gorete Romagnoli / Banca: Maria Teresinha Serrão Peraçoli / Banca: Orlando Garcia Ribeiro Filho / Resumo: Estudos prévios têm demonstrado que baixas concentrações de agentes antineoplásicos como ciclofosfamida e paclitaxel (PAC) modulam positivamente a resposta imune, estimulando linfócitos T e células dendríticas (DCs). Além disso, são capazes de aumentar a imunogenicidade de células de câncer colorretal humano HCT-116, e de induzir a transcrição de genes de proteínas de choque térmico (HSPs). No presente trabalho, tivemos como objetivo avaliar a expressão das HSPs 40, 70 e 90 e comparar o efeito da concentração efetiva mínima (CEM) com a concentração não-tóxica (CNT) de PAC sobre a imunogenicidade das células HCT-116. Células HCT-116 foram tratadas com a CEM ou com a CNT de PAC. Lisados tumorais foram analisados quanto à expressão das HSPs e utilizados para sensibilizar DCs derivadas de monócitos de sangue periférico de indivíduos normais. As DCs foram avaliadas quanto ao seu fenótipo e foram co-cultivadas com linfócitos T alogênicos para a avaliação da capacidade de estimulação desses linfócitos. O tratamento das células tumorais com ambas as concentrações da droga induziu o aumento da expressão de HSP40, enquanto a produção de HSP70 e HSP90 foram aumentadas apenas pela CEM e pela CNT, respectivamente. Observou-se ligeiro, mas não significante aumento da capacidade de indução da resposta alogênica. Houve também uma tendência ao aumento da expressão de CD40 nos grupos HCT, CEM e CNT. É possível que a expressão das HSPs contribua para o aumento de imunogenicidade induzido pelo PAC. A CEM é menos eficiente que a CNT em aumentar a imunogenicidade das células tumorais, mas não prejudica a capacidade das DCs de induzir a resposta alogênica nem seus marcadores fenotípicos de ativação / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is one of the main causes of death worldwide and its conventional treatment is based on surgery, cytotoxic chemotherapy and radiotherapy, or a combination of these therapeutic modalities. The main chemotherapeutic agents for fighting CRC are metrotexate, 5-aza-2-deoxycitidine, taxans and 5-fluorouracil. Usually, their administration is based on maximum tolerable doses, but it has been shown that low concentrations of most of these drugs upregulate the immune system, both enhancing the immune responsiveness and increasing the immunogenicity of tumor cells. These features are associated with translational changes of a couple of genes, among them, there is an increased expression of heat-shock proteins (HSPs). Although the expression of HSPs may represent an adaptive response of tumor cells to the drug-induced damages, there is evidence that some of these proteins are fundamental for antigen processing and presentation by antigen-presenting cells. Then, in the present review we aimed to show that increased expression of HSPs by drug-treated tumor cells may be favorable for the development of an effective immune response, and that this phenomenon should enhance the combinatory schedules of chemotherapy and immunotherapy / Mestre

Resumo: A oclusão e a reperfusão das artérias esplâncnicas provoca alterações locais e sistêmicas derivadas principalmente da liberação de substâncias citotóxicas e da interação entre neutrófilos e células endoteliais. Buscando-se estudar os efeitos da pentoxifilina e da n-acetilcisteína em lesões provocadas em um modelo de isquemia e reperfusão (I/R), 60 ratos foram divididos em 6 grupos: SAL/CONT (salina/controle): animais submetidos à cirurgia, mas não à I/R, tratados com solução fisiológica; SAL/ISQ (salina/isquemia): animais submetidos à oclusão da artéria celíaca (AC), artéria mesentérica cranial (AMCr) e artéria mesentérica caudal (AMCa) durante 30 minutos, seguidos de 120 minutos de reperfusão, tratados com solução fisiológica; PTX/CONT: animais submetidos à cirurgia, mas não à I/R, tratados com pentoxifilina; PTX/ISQ: animais submetidos à I/R, tratados com pentoxifilina; NAC/CONT: animais submetidos à cirurgia, mas não à I/R, tratados com n-acetilcisteína; NAC/ISQ: animais submetidos à I/R, tratados com n-acetilcisteína. Os parâmetros avaliados foram pressão arterial média (PAM) carótida, pressão venosa jugular, fluxo sangüíneo na aorta e na AMCr, temperatura esofágica, hematócrito, hemogasometria, histologia intestinal, dosagem de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) em duodeno, jejuno e íleo e de malondialdeído (MDA) plasmático e do íleo. Nos grupos submetidos à I/R, a PAM teve queda significativa após 120 minutos de reperfusão; a pressão venosa não mostrou alterações no decorrer do experimento; houve queda do fluxo sangüíneo na aorta após os 30 minutos de isquemia, com queda mais acentuada ao final do período de reperfusão; o fluxo sangüíneo na AMCr diminuiu significativamente após 120 minutos de reperfusão, porém, em menor grau no grupo NAC/ISQ; a freqüência... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Splanchnic artery occlusion and reperfusion result in local and remote tissue destruction caused by toxic factors released into the circulation and by neutrophil-endothelial cell interactions. In order to evaluate the effects of pentoxifylline (PTX) and n-acetilcysteine (NAC) on ischemia/reperfusion model (I/R), sixty rats were allocated into six groups: 1) SAL/CONT: Sham operation + saline; 2) SALI/ISQ: 30 min celiac, cranial and caudal mesenteric arteries occlusion + 120 min reperfusion + saline; 3) PTX/CONT: Sham operation + PTX (50 mg/kg); 4) PTX/ISQ: I/R + PTX; 5) NAC/SAL: Sham operation + NAC (430 mg/kg) and 6) NAC/ISQ: I/R + NAC. In all groups above mean arterial blood pressure (MABP), vein pressure, aorta and cranial mesenteric artery blood flow, heart rate, esophagus temperature, hematocrit, blood gas determination, histology, thiobarbituric acid reaction species (TBARS) and malondialdehyde (MDA) levels were determined. In I/R groups, MABP decreased significantly 120 minutes after reperfusion (p<0,05); as no difference in vein pressure were observed. Aorta blood flow decreased 30 minutes after ischemia, decreasing dramatically following restoration of blood flow. Cranial mesenteric artery blood flow decreased significantly after reperfusion, although the fall in NAC/ISQ group was attenuated. During the assays, heart rate was reduced, temperature decreased progressively and metabolic acidosis took place. Pentoxiffyline prevented histopathologic signs of injury in duodenum, jejunum and ileum, as well as n-acetilcysteine prevented ileum histopathologic signs of injury. I/R caused TBARS increase in NAC group jejunum and saline group ileum, but no difference was observed in plasmatic and ileal MDA. The present study allowed concluding that PTX was more efficient in preventing histophatologic injury than NAC, but neither PTX nor NAC... (Complete abstract, click electronic address below). / Orientador: Carlos Alberto Hussni / Coorientador: Winston Bonetti Yoshida / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-05-26Bitstream added on 2014-06-13T18:40:28Z : No. of bitstreams: 1 goncalvesjunior_i_dr_botfm.pdf: 14978707 bytes, checksum: bc384bf4e8557c0376c390efbcb98d16 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O uso de diferentes inibidores selectivos da COX-2 em vários estudos mostraram resultados conflitantes, relacionados principalmente a uma elevada taxa de deiscências nas suturas intestinal.Basedo na hipótese de que o uso de um antibiótico de largo espectro pode reduzir a carga bacteriana no sítio de lesão e, inversamente, reduzir a migração celular de PMNLs, o objetivo deste estudo foi determinar os efeitos do Paracoxibe, uma droga inibidora da COX- 2,disponível comercialmente, associada ou não ao Imipenem na cicatrização de anastomoses no ileo ecólon de ratos. Trezentos e sessenta e oito ratos brancos Wistar foram submetidos a laparotomia, a transecção do cólon esquerdo e do íleo terminalreanastomose randomizados para receber paracoxibe (0,66 mg / Kg), imipenem (30mg/Kg) ou solução salina (controles) por via intramuscular por 4 dias. Os ratos foram distribuídos em quatro grupos de 92 ratos: Grupo 1 (controle), grupo 2 (Paracoxib), grupo 3 (Imipenem) e grupo 4 (paracoxib / imipenem) Os animais em cada grupo foram sacrificados após 4,7,14 e 21 dias, sendo as anastomoses avaliadas por meio de medidas de força de ruptura e pelo exame histológico do processo de cicatrização. Doze animais do grupo paracoxibe (13%) e oito do grupo paracoxibe / Imipenem (8,7%) foram a óbito no 5° e 7° dia de pós operatóriopor deiscências da anastomose ileal. A força de ruptura nos ratos tratados com paracoxibe foi significativamente menor do que no grupo controle no 7°, 14° e 21° dias de pósoperatório das anastomoses do íleo (87,6 g, 184,3 g e 212,5 g<127,8 g, 243,6 g e 251G , P = 0,026) e no 4°,7°,14° e 21° dias de pós operatório as anastomoses de cólon (139,3 g, 170,4 g, 202,9 g e 299,9 g<203,3 g, 254,3 g, 364,2 g e 401g, p = 0,026). Não houve diferenças significativas entre os grupos paracoxibe, imipenem e paracoxib / imipenem. A tendência de aumento da força de... / The use of different selective COX-2 inhibitors in several studies showed conflicting results, related mostly from a high rate of dehiscence’s on intestinal sutures. Based on the hypothesis that the use of a broad spectrum antibiotic can decrease the bacterial load at the injured site and conversely reduce PMNLs cell migration, the aim of this study was to determine the effects of a new commercially available COX-2 inhibitor Paracoxib, associated or not to Imipenem on the healing of ileal and colonic anastomosis in rats. Three hundred and sixty eight white Wistar rats underwent laparotomy, ileal and left colon transection and reanastomosis and randomized to receive paracoxib (0,66 mg/Kg ), imipenem ( 30mg/Kg) or saline solution ( controls ) by intramuscular injections for 4 days. The rats were distributed in four groups of 92 rats: group1 (control); group 2 ( Paracoxib); group 3 ( Imipenem ) and group 4 (paracoxib/imipenem). Animals in each group were killed after 4,7,14 and 21 days, and the anastomosis evaluated by means of breaking strength measures and by histological examination of the healing process. Twelve animals in paracoxibe group (13% ) and eight on paracoxib/Imipenem group ( 8,7% ) died on on days 5 and 7 related to ileal anastomotic dehiscences. Breaking strength in rats treated with paracoxib was significantly lower than in the control group in post-operative day 7, 14 and 21 in ileal anastomoses ( 87,6g, 184,3g and 212,5g < 127,8g, 243,6g and 251g, p=0.026 ) and on days 4,7,14 and 21 in colonic anastomoses ( 139,3g, 170,4g, 202,9g and 299,9g < 203,3g, 254,3g, 364,2g and 401g, p=0.026 ). There were no significant diferences between imipenem, paracoxib and paracoxib/imipenem treated animals. A tendency of increased breaking strength were observed in paracoxib/imipenem group when compared to imipenem and paracoxib groups. The breaking strength increased progressivelly ... (Complete abstract click electronic access below)

Com o objetivo de estudar os possíveis efeitos da administração sistêmica de glutamina ou da associação de hidrocortisona, dimetilsulfóxido, ácido ascórbico e pentoxifilina nas lesões de isquemia e reperfusão no cólon maior, foram utilizados dezoito equinos. Sob anestesia geral e controle da oximetria de pulso e pressão arterial, os equinos foram submetidos a laparotomia e em um segmento do cólon maior foi induzida isquemia venosa total. Após uma hora de isquemia, seis equinos do Grupo G receberam glutamina (25mg/Kg IV), seis equinos do Grupo A receberam uma associação de hidrocortisona (4mg/Kg IV), dimetilsulfóxido (20mg/Kg IV), ácido ascórbico (50mg/Kg IV), e pentoxifilina (10mg/Kg IV) e os seis equinos do Grupo C receberam apenas solução de Ringer com lactato e constituíram o Grupo controle. Após duas horas de isquemia o fluxo sanguíneo local foi restabelecido. Decorridas duas horas de reperfusão foi realizada a laparorrafia e permitiu-se a recuperação anestésica. Seis horas após o início da reperfusão os equinos do Grupo G receberam novamente 25mg/Kg de glutamina, enquanto os equinos dos Grupos A e C receberam apenas solução de Ringer com lactato. Doze horas após o início da reperfusão os equinos foram eutanasiados. Foram colhidas amostras de cólon antes da indução da isquemia, após duas horas de isquemia e após duas e doze horas de reperfusão, que foram submetidas a avaliação histomorfológica, ultra-estrutural e determinação da atividade de mieloperoxidase. Os resultados para todas as variáveis estudadas foram semelhantes entre os grupos, permitindo concluir que os tratamentos, nas condições em que foram empregados neste estudo, não foram eficazes em atenuar as alterações decorrentes de isquemia e reperfusão no cólon maior de equinos. / This study was designed to evaluate the effects of intravenous administration of glutamine or the association of hydrocortisone, dimethyl sulphoxide, ascorbic acid and pentoxifylline on ischemia reperfusion lesions of the large colon. A segment of the large colon was isolated in 18 horses under inhalant general anesthesia and total venous ischemia was induced. One hour after the onset of ischemia, glutamine (25mg/Kg IV) was administered to six horses (G group), an association of hydrocortisone (4mg/Kg IV), dimethyl sulphoxide (20mg/Kg IV), ascorbic acid (50mg/Kg IV) and pentoxifylline (10mg/Kg IV) was administered to six horses, and the others received only isotonic fluids and remained as the control group (C). After 2 hours of ischemia and 2 hours of reperfusion the abdomen was closed and the horses were allowed to recover from anesthesia. After 6 hours of reperfusion, horses of group G received another dose of glutamine (25mg/Kg IV) whereas groups A and C received only isotonic fluids. Horses were euthanatized 12 hours after reperfusion. Biopsies were taken from the large colon before and after 2 hours of ischemia and after 2 and 12 hours of reperfusion. Alterations were evaluated under light and scanning electronic microscopy and scored. Additionally, mieloperoxidase (MPO) activity was measured. Results showed that scores for mucosal lesion, edema, hemorrhage, neutrophil infiltration and MPO activity during IR were similar between groups G, A and C. It was concluded that treatments were not effective in attenuating effects of ischemia and reperfusion in the equine large colon.

O saco vitelino é a principal fonte de nutrição do embrião durante o período em que a placenta verdadeira ainda não está completamente formada. É responsável pela hematopoiese, pois dele se desenvolvem os primórdios das células sanguíneas, bem como parte do sistema circulatório primitivo do embrião. Tivemos como objetivo caracterizar a área transicional do saco vitelino para o intestino primitivo através de análise macroscópica, microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e reação imunohistoquímica para detecção de células germinativas (Oct-4). Foram realizados cortes seqüenciais de todos os embriões para permitir a visualização da estrutura como um todo. Nas amostras obtidas, pudemos observar a presença do saco vitelino com a área de conexão com intestino primitivo composto por inúmeras ilhotas vasculares que correspondem aos vasos envolvidos pelas células vitelínicas e células mesenquimais. No interior dos vasos identificamos hemangioblastos em grande quantidade. A camada correspondente ao mesênquima é delgada e com células alongadas e endoderma da membrana vitelínica é composto por células endodérmicas, grandes, uni ou binucleadas. Tal arranjo celular se assemelha a uma glândula devido a sua arquitetura em ilhas vasculares somado às camadas teciduais. O epitélio do intestino primitivo inicia sua diferenciação com células colunares estratificadas e bordadura em escova seguido de células mesenquimais indiferenciadas. A área transicional entre o saco vitelínico e o intestino primitivo é estreita em relação à luz destas duas estruturas com células de formato irregular, constituindo um delicado revestimento no lúmen contendo hemangioblastos. No mesênquima da área transicional inúmeros e pequenos capilares foram observados com hemangioblastos em seu interior. Em embriões e fetos submetidos à imunohistoquímica, verificamos células reativas como o metanefro, gônadas, parênquima hepático e saco vitelino. / The yolk sac is the main source of embryo nutrition during the period that true placenta are not still formed and responsible by hematopoieses because from it were developed the blood cells, as a part of embryo primitive circulatory system. We aimed to characterize the transitional area between the yolk sac and the primitive intestine by light microscopy, transmission electron microscopy and detection of germ cell lines by Oct-4 immunohistochemistry. Were done in all embryos serial sections to permit the identification for all structures. Were possible identify the yolk sac connection with primitive intestine composed by many blood islet corresponding to relation with yolk and mesenchymals cells. Inside the vessels were identified hemangioblasts. The layer corresponding to mesenchyme is thin and with elongated cells and the vitellinic membrane endoderm is composed by large, uni or binucleate endodermic cells. This shape is similar to a gland related to their architecture, vessels islets and tissue layers. Primitive intestine epithelium begins their differentiation with stratified columnar cells and undifferentiated mesenchymals cells. This transitional area is thin related to their lumen with irregular shape and constituted by delicate lumen basement and hemangioblast. Inside the mesenchyme there are many smaller capillaries observed with hemangioblast in it. Embryos and fetus submitted to immunohistochemistry and were verified positive cells like metanefrons, gonads, hepatic parenchyma and yolk sac.

Os cecos gástricos de Rhynchosciara americana e de outros insetos são órgãos envolvidos em digestão terminal e/ou absorção de nutrientes. Devido a isso, a sua disposição na região anterior do ventrículo é intrigante. Uma explicação para essa localização seria a existência de uma circulação endo-ectoperitrófica de fluidos e de enzimas digestivas, como foi proposto anteriormente em R. americana. Afim de procurar reforçar o modelo proposto procurou-se obter dados sobre a ultraestrutura das células do tubo digestivo e sobre a composição enzimática de suas microvilosidades. As células dos cecos e do ventrículo posterior distal tem uma ultraestrutura bastante semelhante; elas possuem grandes microvilosidades apicais e a membrana plasmática basal apresenta invaginações com mitocôndrias associadas, embora a maioria dessas organelas sejam encontradas no citoplasma apical. O compartimento extracelular delimitado por essas invaginações da membrana basal apresenta poucas aberturas para a hemolinfa, o que dá à célula a possibilidade de concentrar solutos nesse compartimento. As células do ventrículo anterior possuem microvilosidades apicais muito pequenas e um sistema elaborado de invaginações da membrana basal, com muitas mitocôndrias associadas, e que se estendem até quase o ápice das células. O compartimento extracelular delimita do por essas invaginações apresenta, nessas células, grande número de aberturas para a hemolinfa. O ventrículo posterior proximal representa uma região de transição entre o ventrículo anterior e o ventrículo posterior distal. A ultraestrutura dos cecos e ventrículo posterior distal é coerente com uma função na absorção de fluidos, enquanto que aquela do ventrículo anterior e coerente com uma função de secreção de fluidos. A análise da composição de enzimas nas microvilosidades das diferentes regiões do intestino médio mostrou novamente que as células dos cecos e do ventrículo posterior distal são semelhantes e também que devem estar envolvidas na digestão terminal dos nutrientes, pois possuem alta atividade específica para hidrolases de oligômeros. As células do ventrículo anterior (e do ventrículo posterior proximal) possuem microvilosidades com atividade específica muito baixa para as hidrolases de oligômeros, corno seria de esperar para urna célula que estivesse secretando fluidos, pois o substrato seria continuamente arrastado para longe da enzima. Os dados obtidos permitiram reforçar e refinar o modelo da circulação endo-ectoperitrófica de enzimas em R.americana. Para melhor compreensão da digestão terminal de proteínas em R.americana, aminopeptidases de diferentes regiões do tubo digestivo foram estudadas. As aminopeptidases do lúmen e do citossol das células dos cecos são semelhantes, e ambas diferem daquelas presentes na membrana plasmática dessas células. Os dados obtidos apoiam a hipótese de que a maioria das aminopeptidases solúveis nas células dos cecos são enzimas em via de serem secretadas para o lúmen e somente urna quantidade muito pequena pode ter urna função intracelular. Para iniciar o estudo das propriedades das enzimas envolvidas na digestão terminal, a celobiase ligada a membrana plasmática dos cecos foi escolhida. A celobiase solubilizada por Triton X-100 apresenta um peso molecular de 106.000 e um pI de 5,4, enquanto que a solubilização por papaína resulta em urna molécula com peso molecular de 65.000 e um pI de 4,7. A celobiase solubilizada por papaína e purificada por centrifugação em gradientes de densidade hidrolisa &#946;-glicosídeos, &#946;-galactosídeos e &#946;-fucosídeos em um mesmo sítio ativo. Com base na comparação entre os Kis e os Kms para celobiose e para pNP&#946;Gli e na constância do Km obtido em diferentes pHs, tem-se uma forte evidência que essa enzima opera segundo uma cinética de equilíbrio rápido e não de estado estacionário. O fato da hidrólise da ligação &#946;-glicosídica ocorrer sem inversão da configuração, ocorrer uma grande inibição da celobiase pela &#948;-gliconolactona e substituintes do radical aglicone influenciarem a constante catalítica sugere que, no mecanismo de catálise da celobiase, há formação de um íon carbônium intermediário e que não há formação de um complexo covalente enzima-substrato. / The gastric caeca of Rhynchosciara americana and other insects are involved in terminal digestion and/or absorption of nutrients. Due to that, their occurrence near the oesophagus is puzzling. One explanation for this should be the existence of an endo-ectoperitrophic circulation of fluids and digestive enzymes as previously proposed for R. americana. In order to support the proposed model of endo-ectoperitrophic circulation of digestive enzymes, fine structural and enzymological data on the midgut cells were obtained. Midgut caecal and distal posterior ventricular cells have a similar ultrastructure characterized by large apical microvilli and a basal plasma membrane infolded with associated mitochondria which are, nevertheless, more conspicuous in the apical cytoplasm. The fact that the basal plasma membrane infoldings constitute an extracellular compartment, with few openings into the underlying extracellular space, should permit the cell concentrate solutes in that compartment. The anterior ventricular cells possess small microvilli disposed in the cell apexes and elaborate mitochondria-associated basal plasma membrane infoldings extending almost to the tips of the cells. These infoldings display regular openings into the underlying extracellular space. The proximal posterior ventriculus represents a transition region between the anterior ventriculus and the distal posterior ventriculus. The fine structure of caeca and distal posterior ventricular cells is in accordance to their presumed function in fluid absorption, whereas the fine structure of anterior ventricular cells suggests a function in fluid secretion. Hydrolase assays in microvilli samples prepared from cells of different midgut regions showed that caeca and distal activities for digestive enzymes, suggesting a role in terminal posterior ventricular cells are alike in displaying high specific digestion. In contrast, very low specific activities of digestive enzymes were found in anterior ventricular cells, in accordance to their proposed function in fluid secretion. The results lend support to the model of the endo-ectoperitrophic circulation of digestive enzymes in R. americana. In order to extend our knowledge on protein terminal digestion, the aminopeptidases from cytosol and lumen were found to be similar and to differ from caecal microvillar aminopeptidades. The data support the assumption that the majority of the soluble aminopeptidases from the caecal cells are enzymes en route to their being secreted and only a minor amount would have a typical intracellular function. Caecal plasma membrane-bound cellobiase was chosen to initiate a detailed study of the properties of the enzymes involved in terminal digestion. The Triton X-100-solubilized cellobiase displays a molecular weight of 106.00 and a pI of 5.4, whereas the papaintreated cellobiase shows a molecular weight of 65.000 and a pI of 4.7. The papain-solubilized cellobiase, after being purified by density gradient centrifugation, hydrolyze &#946;-g1ucosides, &#946;-galactosides and &#946;-fucosides in the same active site. The cellobiase seems to operate according to a rapid equilibrium kinetics, since the Km for cellobiose is constant over a wide range of pHs and the Km for cellobiose and pNP&#946;Glu are identical to their Kis in a experiment of competition between substrates. The hydrolysis of the &#946;-g1ucosidic bound occurs without inversion of configuration, &#948;-gluconolactone is a strong inhibitor of cellobiase and substituints in the substrate aglycone affects the catalytic constant of the reaction. These data support the assumption that the mechanism of the reaction catalysed by cellobiase involves the intermediary formation of a carbônium ion, instead of a glucosyl-enzyme intermediate.