Witsenia is a monospecific genus of the putatively basal group, the woody Iridaceae. This upright iris has extremely long black and yellow flowers ( see fig. 1) that are thought to have been pollinated by an extinct Sunbird. The role of the unusual black floral colouration is investigated as this colour is seldom associated with bird pollination. This plant typically exists in discreet and restricted populations in wet habitats in the South Western Cape (South Africa). The restricted nature of the plant is peculiar as it occurs in either low or high altitudes, yet appears to be extremely sensitive to altitude. Popular belief suggests that Witsenia maura occurs in the Peninsula only, and results from this study show the Peninsula population to be genetically separate from other populations, reflecting a long term separation. Samples from nine populations are sequenced to investigate haplotypic variation within the species, and dispersal of ancestral populations. This thesis investigates the current knowledge of Witsenia, its ecology, history and distribution. An examination of flowers under UV light reveals the first evidence of UV nectar guides in an ornithophilous flower. Conservation issues are also addressed, and it is established that although small and apparently shrinking due to global warming, populations are nonetheless viable if managed properly. A molecular study of the species and examinination of its variation revealed exceptional haplotype diversity. This diversity can best be explained by swamps acting as refugia during interglacial periods.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(人間・環境学) / 甲第20459号 / 人博第809号 / 新制||人||194(附属図書館) / 28||人博||809(吉田南総合図書館) / 京都大学大学院人間・環境学研究科相関環境学専攻 / (主査)教授 瀬戸口 浩彰, 教授 加藤 眞, 教授 市岡 孝朗 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Human and Environmental Studies / Kyoto University / DGAM

Hierarchical sampling from populations, incipient and recognized varieties within Phacelia dubia and P. maculata has revealed high levels of intraspecific polymorphism in chloroplast DNA. Much of the variation is partitioned between populations as evidenced by population-specific variants at fixation in all three populations of P. dubia var. interior and in both populations of P. maculata. Nine of 16 populations were polymorphic for cpDNA haplotypes. A total of 16 haplotypes was found in a sample of 106 individuals; the most common occurred in eight of the 16 populations and in 31 per cent of the individuals in the entire sample. A phylogenetic analysis revealed four basic plastome types. The two major groups of plastomes were separated by four independent base-pair mutations which suggests an ancient split in the evolution of plastid genomes. Representatives from each major plastome division were found in each of five populations spanning two allopatric varieties of P. dubia. The geographical distribution of haplotypes and lack of evidence for recent admixture argue against migration as a source of the polymorphism. It is more likely that the current taxonomic varieties are descendants of a polymorphic common ancestor.

Mating behavior has a profound impact on reproductive success and the resulting genetic structure of offspring. Extra-pair copulation is a widely observed behavior within avian species. This study explored the genetic effects of mating behaviors of Prothonotary warblers, Protonotaria citrea (Parulidae), using co-dominant microsatellite markers. Prothonotary warblers are migratory songbirds that build nests in cavities, commonly found in wetland habitats. A set of artificial nest boxes were initiated by Dr Robert Reilly in 2002 in Dutch Gap, Chesterfield County Virginia, USA, a tidal tributary off the James River. From this population, 28 nest boxes were surveyed yielding 47 adults and 110 offspring. All individuals were genotyped and the multilocus genotypes were used to identify parentage. Using paternity exclusion, 27.2% of offspring were identified as resulting from extra-pair mating. Surprisingly, an additional 11.8% of offspring were classified as genetically unrelated to the resident female, being presumably the result of an egg dumping from a female not caught at the nest box. The vast majority of nest boxes, 82.1% in this study, had at least one offspring that was a result of a mating behavior outside of the social pair. There was also positive spatial autocorrelation in extra-pair paternity suggesting that these matings are not randomly distributed across the sampling landscape. These data show that Protonotaria citrea engage in both extra-pair copulations and nest parasitism. Whether this is normal mating behavior for the species, or something that is unique to this population is unknown.

My thesis is focused on nesting behaviour and population genetics of solitary bees. These two topics, although seemingly unrelated, bring much new information and thus contribute to the better understanding of solitary bee biology that is still insufficiently known. Although the solitary behaviour represents the necessary original state for the evolution of higher sociality or obligate cleptoparasitism, its role is largely unappreciated. Furthermore, intraspecific cleptoparasitism, which is an alternative and facultative nesting strategy in bees, is a probable antecedent state of obligate cleptoparasitism. Although the obligate cleptoparasitism is a very common strategy in solitary bees, the information about the frequency and the occurrence of intraspecific cleptoparasitism in solitary bees is rare. We studied the nesting behaviour of solitary bees to detect different behavioural patterns that could serve as preadaptations to sociality or cleptoparasitic behaviour and we also focused on the detection and description of intraspecific cleptoparasitism in solitary bees. We chose four model solitary species for these studies - Andrena vaga (Andrenidae), Anthophora plumipes (Apidae), Colletes cunnicularius (Colletidae) and Osmia rufa (Megachilidae). We described the behaviour of Andrena vaga at the...

O presente trabalho analisou as fases gametofítica e tetrasporofítica de morfos verde, vermelho e marrons de Gracilaria domingensis em laboratório. A capacidade reprodutiva foi testada considerando-se: i, número de cistocarpos diferenciados; ii, número de carpósporos e tetrásporos liberados; iii, diâmetro desses esporos; e iv, sobrevivência de carpósporos e tetrásporos, esse último em diferentes condições de irradiância, nutrientes, e radiação ultravioleta. A capacidade somática foi testada em diferentes fases do desenvolvimento por meio da análise dos seguintes parâmetros: i, taxas de crescimento em diferentes condições nutricionais; ii, taxas de crescimento em diferentes condições de radiação ultra-violeta; iii, atividade da enzima nitrato redutase em diferentes condições nutricionais; iv, taxas de fotossíntese; e v, síntese de aminoácidos semelhantes a micosporinas (MAAs) em diferentes condições de radiação UV-B. Uma das únicas diferenças observadas na capacidade reprodutiva entre as linhagens foi o maior período de liberação de carpósporos derivados dos cruzamentos envolvendo apenas gametófitos vermelhos. Essa característica disponibilizaria uma maior quantidade de propágulos dessa linhagem, trazendo vantagens competitivas em relação às demais no ambiente natural. Plantas verdes mostraram maiores valores de fotossíntese máxima, maior síntese de MAAs quando expostas à radiação UV-B, e maior teor de proteínas solúveis totais quando comparadas às plantas vermelhas. Essas respostas sugerem adaptações a ambientes oligotróficos e com intensa luminosidade. Foi observada heterose nas linhagens de tetrasporófitos marrons (VmVd ou VdVm) com relação a pelo menos um dos seguintes parâmetros: fotossíntese máxima e eficiência fotossintetizante; taxas de crescimento; conteúdo de proteínas solúveis totais; atividade da NR; e sobrevivência de carpósporos. Esse vigor híbrido, pelo menos quanto a alguns aspectos, favoreceria a manutenção do alelo verde na natureza. As linhagens de tetrasporófitos marrons apresentaram desempenho distinto quando comparadas entre si com relação a sobrevivência de esporos e taxas de crescimento, indicando que os dois genótipos se expressam de forma diferente frente a condições abióticas distintas. O número de carpósporos liberados foi semelhante ao de tetrásporos considerando-se a massa fresca das plantas férteis, porém, a sobrevivência desses últimos foi sempre maior. O desempenho somático e reprodutivo de tetrasporófitos foi maior que o de gametófitos na maior parte das condições testadas, independentemente da linhagem. Esses resultados demonstraram que as diferentes fases do histórico de vida de G. domingensis têm características metabólicas distintas, o que confere às plantas uma maior plasticidade fenotípica. As diferenças detectadas entre as linhagens no presente trabalho foram discretas. Caso as vantagens proporcionadas pelo alelo verde fossem muito superiores às apresentadas pelo alelo vermelho, ou vice-versa, seria esperado que, ao longo do tempo, uma das duas formas excluísse a outra. A coexistência dos morfos, porém, indica que cada um deles deve ocupar um nicho ligeiramente distinto do outro, o que confere à espécie vantagens frente a ambientes heterogêneos e/ou mudanças ambientais, possibilitando uma maior capacidade de adaptação. / This work investigated gametophytic and tetrasporophytic phases of green, red and brown morphs of Gracilaria domingensis in laboratory. The reproductive performance was tested considering the following: i, number of cystocarps produced; ii, number of carpospores and tetraspores released; iii, diameter of these spores; and iv, survival of carpospores and tetraspores in different nutrient, irradiance and UV-B conditions. The somatic performance of different life phases was tested considering the following: i, growth rates on different nutritional conditions; ii, growth rates on different UV-B conditions; iii, nitrate reductase (NR) activity on different nutritional conditions; iv, photosynthetic rates; and v, mycosporine-like amino acids (MAAs) synthesis on different UV-B conditions. Carpospores originated by the cross of red males x red females were released by a longer period of time when compared to the other carpospores strains. This was almost the only difference found in the reproductive performance among different strains, and could make a greater number of the red strain propagules available for settling. This result could represent competitive advantages in the natural environment. Green plants showed greater values of maximum photosynthesis, a greater MAAs synthesis when exposed to UV-B radiation, and greater amounts of total soluble proteins when compared to the red plants. These responses suggest adaptations to high irradiances and oligotrophic environments. Heterosis was observed in one of the two brown tetrasporophyte strains considering, at least, one of the following parameters: maximum photosynthesis and photosynthetic efficiency; growth rates; total soluble proteins content; NR activity; and survival of carpospores. The heterosis related to these aspects could favor the maintenance of the green allele in nature. The two brown tetrasporophytic strains showed different performance considering the survival of spores and growth rates, which indicates that the two genotypes are expressed in different ways depending on the abiotic conditions. The number of spores released was the same for carpospores and tetraspores when expressed by the fresh biomass of the fertile plants. However, survival of tetraspores was always higher. The somatic and reproductive performance of tettrasporphytes were higher than the gametophytes ones for most of the conditions tested, regardless the strain. These results demonstrate that the different life phases of G. domingensis have specific metabolic characteristics, which contributes to a higher phenotypic plasticity of this species. The differences found among the strains were slight. If the green allele promoted very superior advantages when compared to the ones promoted by the red allele, or vice-versa, it would be expected that, within time, one of the two morphs would exclude the other. The coexistence of the morphs, however, indicates that each one of them must occupy a slightly different niche, which provides advantages to the species concerning heterogonous environments, and /or environmental changes, and enable it with a greater adaptative capacity.

Entender os processos responsáveis pela origem e manutenção da diversidade de espécies nas comunidades representa uma questão central em ecologia. Dos inúmeros processos aventados para explicar a diversidade de organismos, podemos destacar o filtro ambiental e a limitação de similaridade. O filtro ambiental atua restringindo a variação e a distribuição dos organismos em determinado ambiente, enquanto que a limitação de similaridade atua pressionando a diferenciação das características dos organismos, uma vez que a coexistência entre os indivíduos depende da divergência na utilização dos recursos. A abordagem funcional tem sido utilizada para testar os processos responsáveis pela coexistência de espécies e consiste na comparação da similaridade funcional entre as espécies de uma comunidade através da quantificação dos seus atributos. A combinação de diferentes atributos em um organismo define a sua estratégia ecológica e, consequentemente, a sua distribuição nos habitats. As florestas de restingas são ambientes propícios para testar as hipóteses de coexistência das espécies nas comunidades, por apresentarem gradientes ambientes bem marcados e que definem a disponibilidade de recursos. Nesse sentido, este trabalho teve como objetivo avaliar: i) o efeito da condição edáfica (seco e alagado) sobre os atributos funcionais e as estratégias ecológicas de espécies arbóreas de restinga alta e; ii) o efeito que os atributos funcionais e as estratégias ecológicas têm sobre a preferência de habitat pelas plantas. Realizamos este trabalho em uma área de restinga alta na Ilha do Cardoso (SP) que compreende dois tipos de solo: seco e alagado. Coletamos cinco atributos funcionais (área foliar, área foliar específica, espessura foliar, conteúdo de matéria seca foliar e densidade da madeira) de 44 espécies arbóreas. Selecionamos 30 indivíduos de cada espécie sendo 15 em cada tipo de solo. Utilizamos seleção de modelos para as análises estatísticas, sendo usados modelos lineares mistos e modelos lineares simples para avaliar o efeito do solo nos valores médios e na variação dos atributos e das estratégias ecológicas, respectivamente. Encontramos efeito do solo sobre os coeficientes de variação (CV) do conteúdo de matéria seca foliar (CMSF) e da área foliar específica (AFE), sendo maiores no solo alagado. No caso do CV da AFE, o efeito só foi significativo quando excluímos as palmeiras das análises. Não encontramos efeito do solo sobre a variação dos demais atributos funcionais, das estratégias ecológicas e tampouco do tipo de estratégia ecológica. Os resultados encontrados apontam que no ambiente alagado, a limitação de similaridade seja o processo preponderante na estruturação dessa comunidade. Tal resultado difere dos reportados por outros estudos em florestas tropicais. Não encontramos efeito dos atributos e das estratégias ecológicas sobre a preferência de habitat das espécies, com exceção do CV de CMSF e de AFE. Novamente, no caso do CV de AFE, o efeito só foi significativo quando excluímos Euterpe edulis (palmito-juçara) das análises. Este resultado reforça a importância da plasticidade fenotípica para definir a ocorrência das espécies em diferentes habitats / Understanding the processes underlying the origin and maintenance of species diversity in communities is a central goal in ecology. Among the numerous processes proposed to explain the organisms\' diversity, we can highlight environmental filter and limiting similarity. Environmental filter operates by restricting the variation and distribution of organisms in a given environment, while the process of limiting similarity acts by pressing differentiation in the organisms\' characteristics, because the coexistence of individuals depends on difference in resource utilization. The functional approach has been used to test the processes responsible for species coexistence and consists in the comparison of species functional similarities in a community through their traits. The combination of different traits in an organism defines its ecological strategy and, therefore, their distribution on habitats. Restinga forests are suitable to test species coexistence hypotheses in communities, because it presents a well marked environmental gradient, which is defined by resource availability. Thus, this study aimed to evaluate: i) the effect of soil condition (drained and flooded) on functional traits and on ecological strategies of restinga trees species and, ii) the effect of functional traits on plant´s habitat preference. We conducted this study in an area of high restinga at Cardoso Island (SP), which comprises two soil types: drained and flooded. We collected five functional traits (leaf area, specific leaf area, leaf thickness, leaf dry matter content and wood density) of 44 tree species. We selected 30 individuals of each species, 15 in each soil type. We used model selection for statistical analyses, being linear models to assess soil type effect on trait and ecological strategies variances and linear mixed models to assess ecological strategies mean values. We found soil effect on the coefficients of variation of leaf dry matter content (LDMC) and of specific leaf area (SLA), which was higher in the flooded soil. In the case of SLA coefficient of variance, the effect was only significant when we excluded the palms from analyses. We found no soil effect on the other functional traits and on ecological strategies variation, neither on ecological strategy type. As for the results, it was found that in the flooded soil, limiting similarity is the dominant process structuring this community. This result differs from those reported by other tropical forests researches. We found no effect of traits and ecological strategies on habitat species preference, with the exception of LDMC and SLA coefficients of variations. Again, for SLA coefficient of variation, the effect was only significant when we exclude Euterpe edulis (juçara palm) from analyses. This result reinforces the importance of phenotypic plasticity to define species occurrence in different habitats

As espécies do gênero Leishmania parasitam mamíferos do Novo e Velho Mundo e possuem ciclos de vida com alternância entre vertebrados e invertebrados. A maioria das espécies se desenvolve em artrópodes hematófagos, que podem pertencer a diversas ordens e famílias. A Leishmaniose visceral é uma importante zoonose e possui canídeos silvestres e domésticos como importantes reservatórios conhecidos na diversidade genética de Leishmania infantum chagasi no Brasil ainda não é conhecida. Leishmaniose é uma doença severa com ampla distribuição geográfica com uma incidência de dois milhões de casos por ano e 350 milhões de pessoas em áreas de risco de infecção. O objetivo deste projeto foi avaliar a variação intraespecífica e biogeografia de isolados brasileiros de Leishmania infatum chagasi baseados em genes nucleares e mitocondriais. Os marcadores SSUrDNA, gGAPDH, Citocromo b, Hsp 70, Quitinase e ITS1rDNA foram amplificados, sequenciados e comparados filogeneticamente pelos métodos de parcimônia e bayesiana através de análises concatenadas. As sequencias obtidas apresentaram variabilidade entre 0 e 1% e a topologia gerada não evidenciou diferenças intraespecíficas entre os isolados brasileiros de Leishmania infantum chagasi e consequentemente padrões biogeográficos. Apesar dos resultados obtidos não refletirem a variabilidade esperada, as diversas sequencias obtidas darão subsídios para a determinação e padronização de novos testes diagnósticos da Leishmaniose visceral canina. / The Leishmania species parasite mammals in the New World and have life cycles with alternating between vertebrates and invertebrates. Most species develops in blood-sucking arthropods, which may belong to different orders and families. Visceral leishmaniasis is an important zoonosis and has wild and domestic canids as important known reservoirs and genetic diversity of Leishmania infantum chagasi in Brazil is not yet known. Leishmaniasis is a severe disease with wide geographical distribution with an incidence of two million cases per year and 350 million people at risk in endemic areas. The aim of this study was to evaluate the intraspecific variation and biogeography based on nuclear and mitochondrial genes. The SSUrDNA markers, gGAPDH, cytochrome b, hsp 70, chitinase and ITS1rDNA were amplified, sequenced and compared phylogenetically by maximum parsimony and Bayesian methods in concatenated analysis. The variability of sequences was 0 to 1%, and the topology generated showed no intraspecific differences between Brazilian strains of Leishmania infantum chagasi and consequently biogeographic patterns. Although the results do not reflect the expected variability, the various sequences obtained will provide subsidies for the establishment and standardization of new diagnostic tests of canine visceral leishmaniasis.

A criação de inimigos naturais em laboratório pode resultar em mudanças genéticas e fenotípicas drásticas devido às alterações ocasionadas principalmente pela deriva genética, endogamia e seleção natural. Estas alterações podem afetar o fitness das populações e reduzir a capacidade adaptativa às condições naturais. Além disto, a criação de inimigos naturais em hospedeiros alternativos pode comprometer a eficiência em campo. Poucos estudos tiveram como objetivo estudar estratégias para minimizar estes efeitos em condições de laboratório. Quantificar a variação genética em características biológicas pode auxiliar a estimar a resposta adaptativa às condições de criação, além de fornecer informações importantes para o melhoramento de agentes de controle biológico. A hibridização intraespecífica, ou seja, o cruzamento entre populações divergentes também pode ser um método relevante e eficaz para aumentar a aptidão biológica de agentes de controle, uma vez que permite a introdução de variação genética externa capaz de recuperar o fitness de populações mantidas em laboratório por muito tempo. Desta forma, este trabalho teve como objetivo estudar as mudanças genéticas e fenotípicas associadas à criação de Trichogramma galloi nos hospedeiros natural e alternativo, bem como investigar a herdabilidade de caracteres fundamentais para o desempenho do parasitoide e identificar os efeitos da hibridização intraespecífica em populações já estabelecidas em laboratório. Os resultados mostraram que a longevidade, a porcentagem de emergência e o número de parasitoides por ovo do hospedeiro apresentaram um aumento entre gerações para a população mantida no hospedeiro natural, indicando haver sinais de adaptação às condições de criação. No entanto, para a população mantida no hospedeiro alternativo foi observada uma redução na fecundidade e porcentagem de emergência quando oferecido o hospedeiro natural para o parasitismo, indicando haver um custo adaptativo associado à utilização de um novo hospedeiro. Foi possível verificar a existência de variação genética significativa na fecundidade. Em média, 46% da variância fenotípica observada foi determinada pela variância genética aditiva, sendo os demais 54% devido à variância ambiental e componentes genéticos dominantes. Nos cruzamentos intraespecíficos não foram observados casos de heterose, no entanto, foi observada a recuperação do fitness em híbridos obtidos a partir da população que apresentava desempenho inferior. Como conclusões deste trabalho, (i) foi possível detectar sinais de adaptação às condições de laboratório na população mantida no hospedeiro natural e uma menor eficiência sobre a praga alvo ao longo das gerações na população mantida no hospedeiro alternativo; (ii) verificou-se variação genética significativa na fecundidade da população estudada e; (iii) a hibridização intraespecífica se mostrou eficaz para amenizar os efeitos da depressão por endogamia em uma das populações de T. galloi estudada. / The rearing of natural enemies in laboratory conditions can result in drastic genetic and phenotypic changes due to natural selection, inbreeding, and genetic drift. These changes may affect population fitness and reduce the adaptive potential in natural conditions. Moreover, rearing on alternative hosts may compromise field efficiency. Few studies have focused in strategies to minimize these effects in laboratory conditions. Quantify the genetic variation in biological traits can help estimate the adaptive response to rearing conditions in addition to provide important information for the improvement of biological control agents. Intraspecific hybridization, that is, the crossing between different populations may also be an important and effective method to increase fitness, since it introduces genetic variation able to recover the fitness of populations under laboratory for a long time. Thus, the aims of this work were to: study the genetic and phenotypic changes in laboratory populations of Trichogramma galloi on the natural and alternative host, investigate the heritability of fundamental traits to parasitoid success and identify the effects of intraspecific hybridization in populations already established in the laboratory. The results showed that longevity, emergence rate and the number of parasitoids per host egg increased between generations for the population maintained on the natural host, which corresponds to adaptation signs to the rearing conditions. However, the population reared on the alternative host had a reduction in fecundity and emergence rate when exposed to the natural host, indicating that there is a fitness cost associated with the utilization of a new host. It was possible to verify the existence of significant genetic variance in fecundity. On average, 46% of the observed phenotypic variance was determined by the additive genetic variance, with the remaining 54% due to environmental variance and dominant genetic components. In the intraspecific crosses there were no cases of heterosis, however, the recovery of fitness was observed in hybrids obtained from the population with lower performance. In summary, (i) it was possible to detect signs of adaptation to the rearing conditions in the population maintained on the natural host and a reduction in the efficiency on the target pest over the generations in the population reared on the alternative host; (ii) there was significant genetic variation in fecundity of the population studied and (iii) intraspecific hybridization proved to be effective to mitigate the effects of inbreeding depression in one of the populations of T. galloi studied.

O presente trabalho avalia a variação não-geográfica de Necromys lasiurus (Lund, 1840) dentro do território brasileiro, utilizando a morfometria craniana. Os dados foram obtidos a partir de 20 medidas craniodentárias tomadas de 1.572 indivíduos depositados em diversas coleções brasileiras. Foram descritas classes etárias baseadas exclusivamente no desgaste dos molares superiores e as mesmas foram utilizadas como índices etários para a avaliação da variação etária. Foram realizadas análises uni e multivariadas para descrever a variação sexual e etária de N. lasiurus considerando primeiramente toda a amostra e, em seguida, separadamente para cada localidade ou agrupamento cujo número amostral se mostrou suficiente para a condução dos testes estatísticos. N. lasiurus revelou dimorfismo relacionado às classes etárias intermediárias tanto na amostra total quanto nas amostras locais. No entanto, a ocorrência de dimorfismo sexual não se repetiu em todas as localidades avaliadas. A análise da variação etária com a amostra total revelou importantes padrões de variação craniana, como o rápido desenvolvimento da região orofacial em relação a outras regiões do crânio. No entanto, a avaliação da ontogenia nas amostras locais revelou diversos padrões ontogenéticos distintos. Além disso, as análises multivariadas apontam para a existência de uma estruturação geográfica da variação, corroborando estudos anteriores com a espécie. Os resultados obtidos indicam que futuras análises de cunho geográfico e taxonômico sobre N. lasiurus devem abordar os sexos de maneira separada e as classes etárias podem ser homogeneizadas para a formação de amostras com indivíduos suficientes para permitir a realização de análises estatísticas. / The present study assess the non-geographic variation of Necromys lasiurus (Lund, 1840) in Brazil, using skull morphometrics. A total of 20 craniometric measurements were taken from 1,572 specimens deposited in many Brazilian zoological collections. Age classes were described based on the wear stage of the superior molars and used as index to asses the variation due to age. Uni and multivariate analyses were used in order to describe the sexual and ontogenetic variation of N. lasiurus, first using the total sample and then using geographic samples that contained sufficient individuals for the application of the statistical tests. N. lasiurus presented sexual dimorphism related to intemediate age classes in total and in some local samples. The age assessment revealed important ontogenetic patterns of the skull development, like the rapid growth of orofacial region compared to other parts. The local analyses revealed individual patterns of variation for each sample. Besides, the multivariate approach showed geographic patterns of variation, just like previous studies said. The results of this study indicate that future geographic and taxonomic investigations on N. lasiurus should keep both sexes separated and the age classes could be homogenized in order do form adequate samples that allow the application of statistical tests.