Thesis (Ph.D.) - University of Queensland, 2005. / Includes bibliography.

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1966. / Typescript. Vita. Nitrogen fixation by members of the tribe Klebsielleae [by] M.C. Mahl ... [et al.] : leaves 7-12. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Dissertação (mestrado)—Fundação Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-10-03T21:33:20Z No. of bitstreams: 1 2018_AlessandraGodoiCardoso.pdf: 1318780 bytes, checksum: 585433279bee92ac3733f82a14418b55 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-10-18T21:40:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_AlessandraGodoiCardoso.pdf: 1318780 bytes, checksum: 585433279bee92ac3733f82a14418b55 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-18T21:40:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_AlessandraGodoiCardoso.pdf: 1318780 bytes, checksum: 585433279bee92ac3733f82a14418b55 (MD5) Previous issue date: 2018-10-03 / O surgimento de estirpes com resistência múltipla aos fármacos mais potentes é motivo de preocupação dos profissionais de saúde e de toda comunidade científica reforçando a necessidade de formulação de novos medicamentos ou terapias coadjuvantes capazes de inibir a rápida proliferação de microrganismos multirresistentes. Neste contexto, os peptídeos antimicrobianos (PAMs) surgem como uma alternativa farmacológica podendo ser estudados isolados ou associados a outros antibióticos. Neste trabalho foi avaliado, in vitro, o efeito isolado e combinado dos peptídeos Synoeca-MP e IDR-1018 contra isolados clínicos multirresistentes de Klebsiella pneumoniae (Kp1410503; Kp1536816; Kp2016295 e Kp2177569 – LACEN). Além disso, o peptídeo Synoeca-MP também foi avaliado in vitro quanto a sua capacidade de combinação com antimicrobianos pertencentes a três classes distintas revelando atividade sinérgica quando combinado ao antimicrobiano levofloxacina. Nos experimentos in vivo, foi observada uma alta mortalidade de camundongos BALB/c quando os mesmos foram inoculados com as concentrações do peptídeo Synoeca - MP 0,64 mg.kg-¹; 6,4 mg.kg-¹; 12,8 mg.kg-¹ e 19,2 mg.kg-¹, definidas in vitro após a definição da Concentração inibitória Mínima (CIM), levando todos os animais a óbito em até 24 horas demonstrando a necessidade de análises complementares e/ou a utilização de outras concentrações para uma melhor avaliação da atividade antimicrobiana de Synoeca-MP in vivo. / The emergence of strains with multiple resistance to the most potent drugs is motive for concern of health professionals and the entire scientific community reinforcing the need of formulation of new drugs or adjuvant therapies capable of inhibiting the rapid proliferation of multiresistant microorganisms. In this context, antimicrobial peptides (PAMs) appear as a pharmacological alternative and can be studied isolation or associated with other antibiotics. This work was evaluated in vitro effect isolated and combined of the peptides Synoeca - MP and IDR - 1018 against multi-resistant clinical isolates of Klebsiella pneumoniae (Kp1410503; Kp1536816; Kp2016295 and Kp2177569 - LACEN). In addition, the Synoeca peptide was also evaluated in vitro for its ability to combine with antimicrobials belonging to three distinct classes revealing synergistic activity when combined with the antimicrobial levofloxacin. In the in vivo experiments, a high mortality of BALB/c mice was observed when they were inoculated with the concentrations of Synoeca – MP peptide 0,64 mg.kg-¹; 6,4 mg.kg-¹; 12,8 mg.kg- ¹ and 19,2 mg.kg-¹, defined in vitro after the definition of the Minimal Inhibitory Concentration (CIM), leading to all deaths within 24 hours, demonstrating the need for complementary analyzes and / or the use of other concentrations for a better evaluation of the antimicrobial activity of Synoeca-MP in vivo.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: K. pneumoniae e um importante patogeno no ambiente hospitalar. Os antimicrobianos da classe dos carbapenens tem sido amplamente utilizados para o tratamento das infeccoes causadas por amostras de K. pneumoniae produtoras de β-lactamases de amplo espectro. As metalo-β-Iactamases (MβL) sao enzimas bacterianas com habilidade de hidrolisar os carbapenens e, embora, ainda sejam raras, amostras de K. pneumoniae produtoras de MβL tem sido reportadas com uma frequencia cada vez maior. Objetivo: Avaliar os mecanismos de resistencia a carbapenens em amostras de K. pneumoniae. Metodologia: Nove amostras de K. pneumoniae isoladas ate o momento na cidade de São Paulo foram avaliadas. A relacao genetica entre estas amostras foi estudada utilizando-se a tecnica de PFGE. Os testes de sensibilidade aos antimicrobianos foram realizados pela tecnica de diluicao em agar, segundo as padronizacoes do NCCLS. A tecnica da reacao em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para determinar a presenca dos genes responsaveis pela codificacao das MβL, assim como para 0 contexto genetico que abriga estes genes. A deteccao de outros mecanismos de resistencia, como alteracoes da permeabilidade da membrana externa e a presenca de efluxo, tambem foi realizada em todas as amostras. Resultados: Todas as amostras foram altamente resistentes a ceftazidima (MIC, 128 µg/ml), apresentando tambem resistencia a imipenem (MIC, 128 µg/ml) e a meropenem (MIC, 64 µg/ml). Dentre as nove amostras de K. pneumoniae, todas apresentaram produto de amplificacao de PCR positivo para o gene blaIMP-1. A resistencia aos carbapenens tambem foi correlacionada a ausencia de uma proteina de membrana externa de aproximadamente 36 kDa. A diminuicao da expressao...(au) / Background: The increasing prevalence of multi-drug resistant Klebsiella pneumoniae (KPN) isolates is an emerging problem worldwide. Integrons are common among these bacteria and play an important role in the development, capture and expression of resistance genes. Methods: The genetic context around the blaIMP-1 gene was evaluated in 8 clonally related KPN isolates, recovered from a hospital from the city of Sao Paulo (SP), Brazil. The integron was revealed by a walking sequencing strategy. The plasmid obtained from the index isolate was electroporated into Escherichia coli XL1 Blue. Selection of recipient cells was performed in 5 µg/ml ceftazidime plates. Plasmid size was calculated based on the size of the plasmid restriction fragments. The amplicon of the dfr gene was cloned in TOPO vector and transformed into E. coli host. Trimethoprim MICs were performed by NCCLS agar dilution. Results: PCR and sequence analysis revealed that the strain carried two different class 1 integrons, a copy of the previously described In86 and a new integron, named In87. In86 carried blaIMP-1 in the first position, followed by aacA30 and aadA1 genes. The second integron, In87, carried a single gene cassette closely related to dfr22. The product of dfr23 showed 99% of amino-acid homology with DFR22 (one amino-acid substitution, Ser121-Tyr). Further characterization of the isolates revealed that In86 was likely to be located in a non-transferable 30 Kb plasmid. Conclusions: IMP-1 producing Acinetobacter spp. recently isolated in SP was the likely source of In86 acquisition since they carry an identical integron to those encountered in the studied KPN isolates. The presence of trimethoprim resistance gene cassettes in class 1 integrons which normally harbor sul1 gene at the 3’CS is most likely driven by the use of trimethoprimsulfamethoxazole combination. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo – FAPESP / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O gênero Klebsiella faz parte da família Enterobacteriaceae e pode ser encontrado no meio ambiente e nas mucosas de seres humanos e animais. Atualmente, o gênero é composto de cinco espécies, das quais a K. pneumoniae, e mais raramente, a K. oxytoca, são causadoras de infecções. As infecções por K. pneumoniae acometem primordialmente indivíduos hospitalizados, geralmente fragilizados por outras condições, que acabam, na maioria das vezes, desenvolvendo infecções do trato urinário, lesões supurativas, bacteremias e septicemia. Além disso, a K. pneumoniae encontra-se entre as espécies mais comumente implicadas em infecções por microorganismos resistentes a antibióticos, sendo, depois de Escherichia coli, a causa mais comum de septicemia por Gramnegativos. O primeiro estágio da infecção hospitalar por K. pneumoniae consiste na colonização do trato gastrointestinal. A translocação bacteriana (TB), definida como a passagem de bactérias viáveis através da mucosa intestinal, é um processo endógeno que se coloca como hipótese para a ocorrência dessas infecções. A colonização intestinal demanda que as bactérias estejam firmemente estabelecidas na superfície da mucosa para resistir aos movimentos peristálticos do intestino. A proteína CF29K, descrita em uma amostra clínica de K. pneumoniae, é uma adesina não fimbrial que demonstrou mediar uma adesão do tipo difuso em células cultivadas de origem intestinal. Praticamente, não há relatos sobre o papel desta adesina no potencial patogênico de K. pneumoniae. Tampouco há demonstração da capacidade de K. pneumoniae translocar por via intestinal em modelo animal imunologicamente competente e que não apresente lesão da barreira mucosa. O objetivo geral deste trabalho foi estudar o envolvimento da adesina afimbrial CF29K no processo de translocação de K. pneumoniae por via intestinal. O ensaio de TB realizado em modelo in vivo, mostrou que a K. pneumoniae CF504, protótipo de CF29K, é capaz de translocar para linfonodos do mesentério, fígado e baço. Este achado reveste-se de grande consistência na medida em que o modelo de TB empregado não expõe o animal a fatores que levam ao dano da barreira intestinal. A supressão da expressão da adesina CF29K, obtida por mutagênese específica do gene cf29A, da amostra K. pneumoniae CF504, não interferiu na sua capacidade de aderir a células Caco-2, sugerindo que outra(s) adesina(s) também deva desempenhar este papel na amostra selvagem. Da mesma forma, a ausência de CF29K não resultou em menor eficiência de translocação por via intestinal. Além disso, o estudo de 27 amostras clínicas de K. pneumoniae não detectou o gene cf29A em nenhum dos isolados. No entanto, o teste de TB realizado com 15 dessas amostras resultou positivo. Concluise, portanto, que a translocação bacteriana por via intestinal é um processo que independe da adesina CF29K e que deve refletir um possível mecanismo de patogenicidade de K. pneumoniae envolvido, seja na instalação da infecção per se, seja no agravamento de quadros infecciosos sistêmicos já instalados. / Klebsiella is a member of the family Enterobacteriaceae and can be isolated from the environment and from the mucosal surfaces of human beings and animals. There are five known species of Klebsiella, being K. pneumoniae and K. oxytoca the most associated with infections. Mainly hospitalized patients are infected and can present urinary tract infections, supurative lesions, bacteremia, and septicemia. K. pneumoniae strains presenting high resistance to antibiotics are the most common Gram negatives causing septicemia after Escherichia coli. Colonization of the intestinal tract is the first stage in the nosocomial infections by K. pneumoniae. Being so, bacterial translocation (BT), defined as the passage of viable bacteria through the intestinal barrier, is an endogenous process that applies as a hypotheses for the occurrence of those infections. Intestinal colonization demands a firm interaction between the bacteria and the mucosal surface so they can resist to the intestinal peristalses. The CF29K protein discovered in a clinical isolate of K. pneumoniae, is an afimbrial adhesin responsible for diffuse adhesion to intestinal cells in vitro. There is no acknowledge on the role of this adhesin to the pathogenesis of K. pneumoniae, neither on the ability of these bacteria to translocate through the intact intestinal barrier of immunological competent animal models. The aim of this study was to evaluate the involvement of the adhesin CF29K in the BT process. It was shown that CF504, the prototype K. pneumoniae strain for CF29K, is able to translocate trough the intestinal barrier of rats, being recovered from mesenteric lymph nodes, liver, and spleen, after two hours of inoculation. This fact gains importance since the BT assay used causes no physical damage to the intestinal mucosa. The suppression of the CF29K protein expression obtained by site-direct mutagenesis of the cf29A gene of the prototype strain did not change its ability to adherer to Caco-2 cells, suggesting that there might be other (s) adhesin(s) also involved in this interaction. Nevertheless, the absence of CF29K did not abolish the BT capacity of the strain. Besides, the study of 27 clinical isolates of K. pneumoniae did not detect the presence of cf29A gene in any strain. Even so, the BT test carried out with 15 of those isolates resulted positive. We conclude that BT across the intestinal mucosa is a process not related to the adhesin CF29K. We propose that BT may reflect a possible mechanism of pathogenicity of K. pneumoniae involved either in the installation of the infection, or in the worsening of already installed systemic infection. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-15T19:46:55Z No. of bitstreams: 1 2018_LauraFernandesGonçalves.pdf: 1541641 bytes, checksum: 343bb09af189640ebaaa4ef409e26ac4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-27T18:10:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_LauraFernandesGonçalves.pdf: 1541641 bytes, checksum: 343bb09af189640ebaaa4ef409e26ac4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-27T18:10:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_LauraFernandesGonçalves.pdf: 1541641 bytes, checksum: 343bb09af189640ebaaa4ef409e26ac4 (MD5) Previous issue date: 2018-08-15 / Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Hospital da Universidade de Brasília (FAHUB). / Klebsiella pneumoniae é considerada um dos patógenos mais importantes causadores de infecções entre indivíduos imunocomprometidos. Os problemas clínicos causados pelo bacilo podem levar a graves complicações, incluindo infecções do trato urinário, septicemia, pneumonia e morte. Apesar de estarem primariamente associadas às infecções oportunistas, existem linhagens de K. pneumoniae hipervirulentas (hvKp) que possuem uma grande quantidade de fatores de virulência que atuam estrategicamente as capacitando de se multiplicar, proteger do sistema imune do hospedeiro e causar patogenias em hospedeiros sem imunocomprometimento. Os fatores de transcrição denominados receptores ativados por proliferadores de peroxissoma γ (PPAR-γ) tem sido amplamente estudados por seu papel na imunoregulação e estabelecimento de infecções bacterianas já que esses receptores são expressos por uma grande quantidade de células do sistema imune e apresentam um papel duplo promovendo a inibição de moléculas pró-inflamatórias e auxiliando no clearence bacteriano, mas também desencadeando apoptose em diversas células do sistema imune, diminuindo a migração e adesão de neutrófilos. Portanto, nesse trabalho, tivemos por objetivo avaliar o papel do PPAR-γ na capacidade de colonização de células epiteliais da linhagem HEp-2 por três isolados hipervirulentos de K. pneumoniae (HvKp) obtidos de um paciente com bacteremia no Hospital Universitário de Brasília. Caracterizamos os três isolados como geneticamente idênticos, multirresistentes, KPC e pertencentes ao clone ST11. Os isolados também apresentaram produção forte de biofilme em superfícies abióticas bem como a capacidade de sobreviver em sangue e em soro por 30 minutos. As células infectadas com os isolados hipermucoides apresentaram expressão de PPAR-γ 24 e 48 horas após a infecção. Os isolados mostraram-se capazes de sobreviver no interior de células Hep-2 3,6 e 24 horas após a infecção. Também apresentaram maior capacidade de sobrevivência nas células quando PPAR-γ estava presente do que quando este foi inibido por GW9662. Foi observado também que os isolados são citotóxicos para as células diminuindo a viabilidade celular nos tempos de 3 e 6 horas após a infecção e recuperação da viabilidade 24 horas após a infecção. Também, observou-se a produção de óxido nítrico após a infecção e constatou-se que esta ocorre mais acentuadamente 24 e 48 horas pós-infecção e que ocorre um aumento na produção de NO quando PPAR-γ encontra-se inibido. Dessa forma, os isolados mostraram-se resistentes aos efeitos microbicidas da célula. / Klebsiella pneumoniae is considered one of the most important pathogens causing infections among immunocompromised individuals. Clinical problems caused by this bacillus can lead to severe complications, including urinary tract infections, septicemia, pneumonia, and death. Although they are primarily associated with opportunistic infections, there are hypervirulent K. pneumoniae (hvKp) strains that have a large number of virulence factors that act strategically to enable them to multiply, protect from the host's immune system and cause pathogenies in hosts without immunocompromising. Transcription factors called peroxisome proliferator-activated receptors (PPAR-γ) have been extensively studied for their role in immunoregulation and establishment of bacterial infections since these receptors are expressed by a large number of immune system cells and have a double role promoting the inhibition of proinflammatory molecules and assisting in bacterial clearence, but also triggering apoptosis in several cells of the immune system, decreasing neutrophil migration and adhesion. Therefore, the objective of this study was to evaluate the role of PPAR-γ in the ability to colonize epithelial cells of the Hep-2 lineage by three hypermucoid isolates of K. pneumoniae (HvKp) obtained from a patient with bacteremia at the Hospital Universitário de Brasília. In this work, we characterize the three isolates as genetically identical, multiresistant, KPC and belonging to clone ST11. The isolates also showed strong biofilm production on abiotic surfaces as well as the ability to survive in blood and serum for 30 minutes. Cells infected with the hypermucoid isolates showed PPAR-γ expression 24 and 48 hours post-infection. Isolates were able to survive within HEp-2 cells 3,6 and 24 hours post-infection. They also showed greater survival ability in the cells when PPAR-γ was present than when it was inhibited by GW9662. It was also observed that the isolates are cytotoxic to the cells reducing cell viability 3 and 6 hours post infection and viability recovery 24 hours post infection. The production of nitric oxide after infection has also been verified and it has been observed that this occurs more markedly 24 and 48 hours post infection and that an increase in NO production occurs when PPAR-γ is inhibited. Thus, the isolates were resistant to the microbicidal effects of the cell.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:16:20Z : No. of bitstreams: 1 nobrega_db_me_botfmvz.pdf: 839809 bytes, checksum: cf66e109eac48d5e6d7140e6607bfbf2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho objetivou o isolamento de Klebsiella pneumoniae do ambiente de sala de ordenha e do ambiente dos animais, incluindo a sala de pré-ordenha, piquetes e, em algumas propriedades os galpões de free stall, do reto e membros posteriores dos animais, do leite do tanque de refrigeração e do leite dos tetos positivos ao teste do Califórnia Mastitis Test (CMT), pesquisar cepas produtoras de β-lactamases de espectro ampliado (ESβL) e, a partir da identificação clonal, verificar a semelhança entre as cepas. Em 28 (2,14%) amostras de leite coletadas dos animais foi detectada a presença de Klebsiella pneumoniae como patógeno responsável pela infecção intramamária (IMI). A partir de swabs ambientais, da pele dos animais e do leite oriundo do tanque de expansão das dez propriedades, foram isoladas 79 cepas de K. pneumoniae. Os resultados da prova de detecção fenotípica da produção de enzimas do tipo ESβL foram positivos em oito (7,47%) das cepas bacterianas isoladas. No Brasil ainda não há relatos de coliformes produtores destas enzimas oriundos de animais de produção, e no presente estudo uma das cepas foi isolada do tanque de expansão, representando um potencial perigo à saúde pública. Pelo resultado da PFGE, observou-se grande diversidade genética da bactéria dentro da propriedade e entre as propriedades. Demonstrou-se que patógenos ambientais multirresistentes estão presentes em rebanhos bovinos leiteiros, não apenas isolados de quadros de infecção intramamária como também de galpões de free stall, membros posteriores dos animais, sala de ordenha e tanque de expansão. Confirmou-se também, a alta variabilidade genética da K. pneumoniae em rebanhos bovinos leiteiros mesmo dentro de um mesmo rebanho, e a importância da PFGE como recurso na epidemiologia molecular / The present study aimed the isolation of Klebsiella pneumoniae from the milk parlor and the animal’s environment, including the pre milking room, paddocks and, in some properties the free stall, animal’s rectum and hind limbs, bulk tank milk and from all teats positive to the California Mastitis Test (CMT), search for strains producers of extended spectrum β-lactamases (ESβL) and, by the clonal identification, verify if similarities between the strains ocurred. In 2.14% (28) of the milk samples collected from the animals it was detected the presence of Klebsiella pneumoniae as the pathogen responsible for the intramammary infection (IMI). From environmental swabs and bulk milk tank of the ten properties, it was isolated 79 strains of K. pneumoniae. The results of phenotypic detection of the ESβL enzymes production were positive in eight (7.47%) bacterial strains isolated. It is important to know that, in Brazil there are no reports of coliforms producers of these enzymes isolated from livestock animals, and in the present study one of the strains was isolated from the bulk tank milk, representing a potential hazard to public health. The results of PFGE showed high genetic diversity of the bacteria within and between the dairy farms. It was demonstrated that environmental multidrug resistant pathogens are present in dairy herds, isolated from intramammary infections cases, free stall parlors, animal’s hindlimbs, milking parlor and bulk tank milk. This study also confirmed the high genetic diversity of K. pneumoniae in dairy herds within the same herd, and the importance of PFGE as a molecular epidemiology tool. Keywords: environment, extended-spectrum β-lactamases (ESβL), Klebsiella pneumoniae, mastitis, milk, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE)

Orientador: Prof. Dr. Felipe F. Tuon / Co-orientadora: Drª. Sueli M. Nakatani / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 27/06/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Doenças infecciosas / Resumo: A disseminação de micro-organismos resistentes, produtores de KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase) é um problema de saúde pública emergente. A disseminação rápida e a crescente lista de patógenos em qual o gene blaKPC é devida a presença do gene em um elemento móvel, denominado transposon, Tn4401. Este estudo teve como objetivo avaliar as características dos isolados suspeitos de produção de carbapenemase KPC e realizar a caracterização epidemiológica, fenotípica e genotípica dos isolados enviados de outubro de 2009 a maio de 2012. De um total de 1028 isolados analisados, foram encontrados 770 positivos para KPC (75%) e 258 foram negativas (25%). A maioria das amostras recebidas foram de swab de vigilância 334 (32%), seguidas de amostras de urina 232 (22%), amostras respiratórias 134 (13%), sangue 99 (10%) dentre outras menos prevalentes. Para a determinação dos perfis clonais foi utilizada a técnica do repPCR e para a determinação da variante KPC foi realizado sequenciamento do gene da enzima. Foi avaliado também o valor da técnica fenotípica do teste de Hodge modificado em comparação com o padrão ouro PCR em tempo real. A tipagem molecular da enzima KPC foi compatível com a variante KPC-2, uma variante frequentemente reportada nas Américas. A análise dos perfis clonais pelo Diversilab mostrou 8 perfis clonais com 2 predominantes para o micro-organismo Klebsiella pneumoniae, 7 perfis clonais para Enterobacter spp com um predominante. Não foi observada clonalidade para os isolados de Escherichia coli, sugerindo que esta pode ter recebido o transposon Tn4401 por conjugação. A sensibilidade e especificidade do teste de Hodge modificado para a detecção de KPC utilizando ertapenem e meropenem como substratos foram 99,61% e 97,83% respectivamente. Este estudo mostrou que a técnica do teste de Hodge é sensível e específica e pode ser utilizada para a detecção de KPC quando esta enzima é endêmica e outras carbapenemases não são prevalentes por ser acessível a qualquer laboratório e de fácil realização pelos laboratórios clínicos. Palavras chave: KPC, carbapenêmicos, epidemiologia. / Abstract: The spread of carbapenem-resistant microorganisms harboring KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase) carbapenemase is an emerging public health threat. The rapid spread and growing list of pathogens in which gene blaKPC is reported is due to its carriage in a mobile element, a transposon, called Tn4401. This study aims to evaluate the characteristics of isolates suspected of harboring KPC carbapenemase and perform molecular and phenotypic characterization of these bacterial isolates. The period of analysis was from October 2009 to May 2012.An amount of 1028 isolates analyzed, 770 were KPC producing (75%) and 258 were not KPC producing (25%). Isolates was recovered mostly of vigilance swabs 334 (32%), followed by urinary samples 232 (22%), respiratory tract 134 (13%) and blood 99 (10%) among others less prevalent. We used repPCR for determination of clonal profiles, sequence the enzyme gene for detection of KPC's variant. We also evaluate the value of phenotypic technique modified Hodge test by comparing it to the gold standard technique PCR. Molecular typing of KPC enzyme was compatible with KPC-2 gene, a variant frequently reported in Americas. Cluster analysis from Diversilab fingerprints showed 8 clonal profiles with 2 predominant for Klebsiella pneumoniae, 7 clonal profiles for Enterobacter spp with one predominant. No clonal similarity was observed in Escherichia coli, suggesting that it may have received transposon Tn4401 through conjugation. The sensitivity and specificity of modified Hodge test for the detection of KPC, when using ertapenem and meropenem, were respectively 99.61% and 97.83%. This study showed that MHT technique is highly sensitive for detecting KPC producers when this enzyme is endemic, and has its value for being affordable and easy to perform by clinical laboratories. Keywords: KPC, carbapenem, epidemiology

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-11T19:15:47Z No. of bitstreams: 2 TESE Dyana Leal Veras.pdf: 6559035 bytes, checksum: 43988c4ed7fb791a6e593067fb17b1eb (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T19:15:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Dyana Leal Veras.pdf: 6559035 bytes, checksum: 43988c4ed7fb791a6e593067fb17b1eb (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / O objetivo deste trabalho foi determinar a ação in vitro de antibióticos β-lactâmicos em isolados de Klebsiella pneumoniae portadores dos genes blaKPC, blaSHV, blaTEM ou blaCTX-M, desenvolvendo embasamento teórico para futura proposição de novas combinações terapêuticas. Sete isolados de K. pneumoniae foram utilizados, sendo 3 clínicos, 2 de comunidade e 2 de microbiota. Os isolados clínicos e de comunidade são portadores de genes codificantes de ESBL ou KPC e os de microbiota de -lactamases clássicas. Os genes de resistência foram identificados por PCR e seqüenciados utilizando primers específicos. A primeira fase deste estudo identificou os efeitos ultra-estruturais causados por -lactâmicos in vitro nos isolados clínicos e de microbiota de K. pneumoniae. Os isolados clínicos foram submetidos a concentrações clinicamente relevantes de ceftazidima, cefotaxima, aztreonam e/ou imipenem e os isolados de microbiota a ampicilina e amoxicilina, para análise pela Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET) e Varredura (MEV). Diferentes alterações morfológicas e ultra-estruturais foram identificadas, como filamentação celular, perda de material citoplasmático e deformação dos septos de divisão, após submissão aos antibióticos, tanto nos isolados clínicos de K. pneumoniae como nos obtidos de microbiota. A segunda fase deste estudo determinou a influência destes antibióticos na produção de cápsula polissacarídica (CPS) nos isolados clínicos e de comunidade de K. pneumoniae. Os isolados foram submetidos a concentrações clinicamente relevantes de cefotaxima, ceftazidima, aztreonam e/ou imipenem para analise pela MET, utilizando citoquímica de carboidratos. Todos os isolados tiveram confirmação da presença da região promotora do operon envolvido na produção de CPS, identificado através de PCR e sequenciamento. A ceftazidima e o aztreonam foram capazes de inibir a produção de CPS nos isolados de K. pneumoniae produtores de ESBLs mas não no isolado produtor de KPC, o qual teve sua síntese fortemente inibida apenas pelo imipenem. A cefotaxima não interferiu na produção de CPS em nenhum dos isolados analisados. Nossos resultados demonstraram que antibióticos -lactâmicos possuem ação residual in vitro nos isolados analisados, sugerindo que a produção de ESBL e KPC por isolados de K. pneumoniae não são capazes de evitar completamente a interação de antibióticos β-lactâmicos com as PBPs bacterianas. Podemos concluir ainda que a ceftazidima, o aztreonam e o imipenem, podem ser capazes de inibir a produção de CPS em isolados clínicos e de comunidade de K. pneumoniae, contribuindo para diminuir a expressão do fator de virulência mais importante desta espécie bacteriana.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:30:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3544_1.pdf: 1186230 bytes, checksum: 16504522cb56cdc3bce40429245fb4fd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / O objetivo do presente trabalho foi verificar se isolados de K. pneumoniae provenientes de Recife-PE, Brasil, estão agrupados em diferentes grupos filogenéticos e se esses grupos estão relacionados com origem de isolamento e perfil fenotípico de resistência a antimicrobianos. Portanto, foram analisados 94 isolados de K. pneumoniae, provenientes de infecções hospitalares e comunitárias e da microbiota normal de crianças saudáveis, pelo método de difusão de disco para detecção de susceptibilidade a agentes antimicrobianos, pelo teste de sinergia do disco duplo para detecção de ESBLs e pela fermentação do adonitol. Também foi realizada a PCR com primers específicos para amplificação do gene gyrA e o produto de amplificação foi digerido com as enzimas de restrição TaqI e HaeIII para identificação dos grupos filogenéticos (KpI, KpII, KpIII), como foi descrito para esta espécie em outros países. A PCR-RFLP também mostrou uma maior ocorrência do grupo KpI nos isolados hospitalares e comunitários. Por outro lado, os grupos KpII e KpIII foram encontrados principalmente em isolados da microbiota normal e em menor proporção em isolados patogênicos. A resistência às cefalosporinas de 3ª geração, aztreonam, imipenem, amoxicilina/ácido clavulânico e estreptomicina somente foi observada em isolados do grupo KpI. Os maiores percentuais de resistência foram encontrados no grupo KpI, seguido dos grupos KpII e KpIII. As diferenças na distribuição, freqüência, origem e resistência dos grupos filogenéticos de K. pneumoniae observadas neste estudo sugerem características patogênicas e epidemiológicas distintas entre os três grupos, o que pode ser relevante para o controle de infecções causadas por K. pneumoniae