nÃo hà / Resumo Os materiais cristalinos unidos por ligaÃÃes de hidrogÃnio tÃm recebido a atenÃÃo de pesquisas cientÃficas durante vÃrios anos. Entre estes sistemas se destacam os cristais de aminoÃcidos, que sÃo molÃculas fundamentais para a vida. Nessa Tese estudam-se as propriedades vibracionais do cristal de L-asparagina monohidratada (LAM) submetido a condiÃÃes de altas pressÃes atravÃs da tÃcnica de espectroscopia Raman no intervalo de frequÃncia entre 30 e 3600 cm-1. As pressÃes nas quais o material foi submetido chegaram atà a 30 GPa, se constituindo no maior valor de pressÃo no qual um cristal dessa famÃlia foi comprimido atà hoje. Tal fato aponta para um novo paradigma, haja vista que sob pressÃes dessa ordem de grandeza muitos materiais sofrem amorfizaÃÃo, ou seja, perdem a ordem de longo alcance (como acontece com a L-alanina, que se amorfiza a 15 GPa). Surpreendentemente, a LAM permanece com uma estrutura cristalina bem definida atà o valor de pressÃo acima especificado, proporcionando uma extraordinÃria sÃrie de transiÃÃes de fase. Um estudo anterior apontava para a ocorrÃncia de trÃs transiÃÃes de fase sofridas pela LAM no intervalo entre 0 e 2 GPa. Nesta Tese, investigando-se o cristal entre 2 e 30 GPa, inferiu-se que a LAM sofre mais cinco transiÃÃes de fase: (i) entre 2,1 â 3,1 GPa; (ii) entre 4,7 â 6,6 GPa; (iii) entre 9,3 â 9,9 GPa; (iv) entre 15,0 â 17,0 GPa; (v) entre 22,4 â 25,1 GPa. As transiÃÃes de fase nestes sistemas podem ser entendidas como conformaÃÃo molecular na cÃlula unitÃria; modificaÃÃo nas ligaÃÃes de hidrogÃnio intermoleculares; ou mudanÃa estrutural com modificaÃÃo no grupo espacial do cristal. A partir da avaliaÃÃo conjunta das bandas ativas no Raman associadas a modos da rede e a modos internos do material, foi possÃvel fornecer-se um quadro sobre as cinco diferentes transiÃÃes de fase. Uma dessas transiÃÃes, entre 9,3 e 9,9 GPa, que envolve modificaÃÃes em todas as regiÃes espectrais, aponta claramente para uma transiÃÃo de fase sÃlido-sÃlido com mudanÃa de grupo espacial do cristal. Todas as transiÃÃes de fase sÃo reversÃveis, uma vez que o espectro Raman original à recuperado quando a pressÃo à relaxada de 30 GPa à pressÃo atmosfÃrica. Uma anÃlise do comportamento da freqÃÃncia do modo associado à torÃÃo do NH3+ em funÃÃo da pressÃo e a conexÃo com as dimensÃes das ligaÃÃes de hidrogÃnio à apresentada, bem como à fornecida uma comparaÃÃo do presente resultado com outros resultados jà publicados na literatura. Finalmente, sÃo fornecidos os dados relativos aos ajustes experimentais d/dP das freqÃÃncias de todos os modos vibracionais em funÃÃo da pressÃo no intervalo completo de pressÃo investigado.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6101_1.pdf: 2746549 bytes, checksum: abed2f23df0227617a0224f4eed1196d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / O presente trabalho determina o perfil cromatográfico das plantas utilizadas na produção do fitoterápico ROBUSTERINA. Tal produto é constituído por Berberis vulgaris L, Gossypium herbaceum L. e Viburnum opulus L. As cascas da raiz de B. vulgaris são empregadas como tônico amargo e para litíase biliar. As cascas da raiz e sementes de G. herbaceum têm ações antiespasmódicas e uterotônicas. As cascas do caule de V. opulus são antiespasmódicas e tônicas. Três amostras de cada planta foram analisadas por cromatografia em camada delgada analítica (CCDA), buscando-se estabelecer a identidade dos grupos de metabólitos secundários presentes face aos relatos da literatura. Para as matérias-primas foram analisadas matéria orgânica estranha, perda por dessecação, cinzas (totais, insolúveis em ácido e sulfatadas) e metais pesados. Já para o produto acabado foram avaliados os aspectos macroscópicos (verificação da cor, odor sabor), características físicas (teor alcoólico (determinado em alcoômetro), densidade (pelo método do picnômetro), pH (determinado por potenciômetro) e resíduo seco total). Devido à presença de alcalóides em Berberis vulgaris e, ausência de metodologias analíticas de quantificação para o produto, foi proposta validação de método, de acordo com as exigências atuais. A metodologia fundamenta-se na determinação espectrofotométrica de alcalóides utilizando-se Dragendorff como reagente precipitante e Sulfato de Berberina Merck como referência padrão. Os perfis fitoquímicos obtidos foram confrontados com dados da literatura, comprovando a autenticidade da matéria-prima. Para as matérias-primas foram determinadas especificações de controle de qualidade para matéria orgânica estranha, perda por dessecação, cinzas (totais, insolúveis em ácido e sulfatadas) e metais pesados. Para o produto Robusterina foram analisadas as características organolépticas (verificação da cor, odor, sabor), características físicas (limpidez, teor alcoólico, densidade, pH, resíduo seco total e solubilidade). Os estudos obtidos permitem sugerir especificações de valores mínimos e máximos para o controle de qualidade para Tintura de Robusterina. Quanto à validação a curva de calibração foi determinada com seis concentrações entre 40 e 200 g/mL. A equação da reta é y = 0,0038x + 0,0092 com R2 de 0,9996. Os parâmetros robustez, precisão, especificidade, limite de detecção e quantificação e exatidão foram avaliados estatisticamente com intervalo de 95% de confiança (teste t de Student, ANOVA). De acordo com as análises estatísticas, observou-se que o método é linear, robusto, preciso e exato. Os limites de detecção e de quantificação foram respectivamente 3,1578 e 10,5263 g/mL

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:22:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Yuri Eulalio Raposo Lacerda.pdf: 1715184 bytes, checksum: 89f994246a819dc2d82c46e1b1584483 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / It was the objective of the present study to analyze the effects of two types of liquid fertilizers (T 1 = based on bovine manure enriched with MB4, Leguminosae and wood ashes and T = based on the urine of lactating cows) and 6 concentrations (C x 1 = 0, C 2 = 10, C 3 = 20, C = 40 and C 6 = 50 ml L -1 ), in the production and quality of production of carrots and beets. The work was conducted in field conditions, in the period of May to September, at the Escola Agrotécnica de Cajueiro, Campus-IV, from the Universidade Federal da Paraíba UEPB, 2 km away from Catolé do Rocha-PB city seat, which is located in the semiarid region of the Northeast of Brazil, northwest of the state of Paraíba. The experimental delineation used was the blocks by chance, in a factorial scheme 2 x 6, therefore, 12 treatments, with 4 repetitions, in a total of 48 experimental units, containing 40 Brasilia carrot plants and 30 Tall Top Early Wonder beets per parcel. The variables analyzed in the production of carrots and beets were diameter, length and weight of the tuberose roots. The quality of the production of these roots measured through the determination of pH, total soluble solids, total titratable acidity, humidity and total solids. The results of the research show evidence that the types and concentrations of the fertilizers didn t affect in a significant way the production of tuberose roots of carrots and beets, as the quality of the production of carrots and beets was not affected by them, with the exception of the parameter total soluble solids ( o Brix) of beets, being the fertilizer concentration of 16,7 ml L which provided the higher value for total soluble solids for the beets. Fertilizers in concentrations over this value provided reduction of total soluble solids of the tuberose roots of beets. The contents of nitrogen and potassium present in the fertilizers applied may have influenced the results of the variables studied. The quantity of bovine manure applied as base fertilizer had a remarkable influence in the non-significant effects of types and concentrations of fertilizers in the variables studied. Independently from the type of fertilization, pH and total titratable acidity of the tuberose roots of carrots and beets, being intrinsic characteristics of the plant itself, they suffered little influence from the mean. / Objetivou-se estudar os efeitos de 2 tipos de fertilizantes líquidos (T = à base de esterco bovino enriquecido com MB4, leguminosa e cinza de madeira e T 2 1 = à base de urina de vaca em lactação) e 6 concentrações (C 1 = 0, C 2 = 10, C 3 = 20, C 4 = 30, C 5 = 40 e C ) na produção e na qualidade da produção de cenouras e de beterrabas. O trabalho foi conduzido em condições de campo, no período de maio a setembro, na Escola Agrotécnica do Cajueiro, Campus-IV, da Universidade Estadual da Paraíba - UEPB, distando 2 km da sede do município de Catolé do Rocha-PB, que está situado na região semiárida do Nordeste brasileiro, no Noroeste do Estado da Paraíba. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, num esquema fatorial 2 x 6, ou seja, 12 tratamentos, com 4 repetições, totalizando 48 unidades experimentais, contendo 40 plantas de cenoura Brasília e 30 de beterraba Tall Top Early Wonder por parcela. As variáveis analisadas na produção da cenoura e da beterraba foram diâmetro, comprimento e peso das raízes tuberosas. A qualidade da produção dessas raízes foram mensuradas através da determinação do pH, sólidos solúveis totais, acidez total titulável, umidade e sólidos totais. Os resultados da pesquisa evidenciam que os tipos e as concentrações dos fertilizantes não afetaram de forma significativa a produção de raízes tuberosas de cenoura e de beterraba e a qualidade da produção das raízes tuberosas de cenoura e de beterraba não foram afetadas pelos mesmos, com exceção do parâmetro sólidos solúveis totais ( o Brix) da beterraba, sendo a concentração de fertilizante de 16,7 ml L -1 a que proporcionou o maior valor para os sólidos solúveis totais da beterraba. Concentrações de fertilizantes acima deste valor proporcionaram reduções dos sólidos solúveis totais das raízes tuberosas de beterraba. Os teores de nitrogênio e potássio presentes nos fertilizantes aplicados podem ter influenciado nos resultados das variáveis estudadas. A quantidade de esterco bovino aplicada na adubação de fundação teve influência marcante nos efeitos não significativos de tipos e concentrações de fertilizantes nas variáveis estudadas. Independentemente do tipo de adubação, o pH e a acidez total titulável das raízes tuberosas de cenoura e de beterraba, sendo características intrínsecas da própria planta, sofreram pouca influência do meio.

Subprojeto 1: Determinação do efeito anti-inflamatório e citoprotetor da suplementação com L-glutamina e L-alanina, ou com L-alanil-L-glutamina (DIP) em ratos submetidos a treinamento resistido. Exercícios intensos reduzem a disponibilidade de glutamina, comprometendo a função imune e a recuperação de atletas. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos da suplementação oral crônica com L-glutamina e L-alanina, nas formas livres ou como dipeptídeo (DIP), sobre parâmetros de lesão, inflamação e citoproteção em ratos Wistar adultos submetidos a treinamento resistido (TR). Neste estudo, o TR reduziu a concentração de glutamina no plasma e no músculo EDL. No entanto, este efeito foi atenuado pelos suplementos contendo L-glutamina, os quais aumentaram os conteúdos da proteína de resposta ao estresse (HSP70) em células do sistema imune (PBMC) e no EDL, concomitantemente à redução da ativação do NF-kB e a da concentração de citocinas no EDL. O efeito protetor das suplementações também foi evidenciado pela atenuação de marcadores de lesão (CK e LDH) e inflamação (TNF-&#945 e IL-1&#946), bem como pelo aumento nas concentrações de marcadores anti-inflamatórios (IL-6, IL-10 e MCP-1) no plasma. Nossos resultados sugerem que a suplementação oral crônica com L-glutamina (administrada com L-alanina livre ou como DIP) promoveu efeitos citoprotetores mediados pela HSP70 em resposta à lesão e inflamação induzidas pelo TR. Subprojeto 2: Efeitos da L-alanil-L-glutamina sobre as vias de sinalização da insulina e da mTOR/S6K, e citoproteção em células musculoesqueléticas C2C12. O dipeptídeo L-alanil-L-glutamina é conhecido por modular o metabolismo e a viabilidade celular. Contudo, os efeitos sobre os componentes clássicos das vias de sinalização da insulina e da mTOR/S6K, bem como o efeito citoprotetor em células musculares, são pouco esclarecidos. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito do DIP sobre as vias de sinalização da insulina e da mTOR/S6K em miotubos C2C12, em condições normais ou resistentes à insulina. A exposição crônica à insulina (24h) promoveu resistência à insulina, reduzindo os conteúdos totais do receptor beta (IR-β) e do substrato do receptor de insulina (IRS-1), e diminuindo a fosforilação de IRS-1, AKT e P44/42 MAPK. Adicionalmente, houve redução na expressão do transportador de glicose (GLUT4) e HSP70, redução da viabilidade celular e menor fosforilação de p70S6k e S6, proteínas relacionadas à síntese proteica. Em contraste, a suplementação com DIP aumentou os conteúdos totais de IR-&#946 e IRS-1 e a fosforilação de IRS-1 e AKT. A glicólise anaeróbia e a capacidade glicolítica, além da fosforilação de p70S6k e S6, foram aumentadas pelo DIP em condições normais e na resistência à insulina. Nestas condições experimentais, nossos resultados sugerem que a suplementação com DIP melhorou as vias de sinalizações da insulina e da mTOR/S6K, aumentou a captação e metabolização da glicose, independente da estimulação com insulina e, finalmente, promoveu citoproteção resgatando parcialmente as células de um estado resistente à insulina, por meio do aumento de HSP70 e ativação das etapas finais da via mTOR/S6K. / Subproject 1: Determination of the anti-inflammatory and cytoprotective effects of supplementation with L-glutamine and L-alanine, or with L-alanyl-L-glutamine in rats submitted to resistance training. Intense exercise reduces glutamine availability, compromising immune function and recovery of athletes. The objective of the study was to evaluate the effects of chronic oral supplementation with L-glutamine and L-alanine, in their free form or as dipeptide (DIP), on muscle damage, inflammation and cytoprotection in adult Wistar rats submitted to resistance training (RT). In this study, RT reduced glutamine concentration in plasma and EDL muscle. However, this effect was attenuated by supplements containing L-glutamine, which increased the contents of the stress response protein (HSP70) in immune system cells (PBMC) and EDL, concomitantly with the reduction of NF-kB activation and the concentration of cytokines in EDL. The protective effect of supplementation was also evidenced by attenuation of lesion markers (CK and LDH) and inflammation (TNF-α and IL-1β), as well as by the increase in anti-inflammatory plasma markers (IL-6, IL-10 and MCP-1). Our results suggest that chronic oral supplementation with L-glutamine (administered along with free L-alanine or as DIP) promoted HSP70-mediated cytoprotective effects in response to RT-induced injury and inflammation. Subproject 2: Effects of L-alanyl-L-glutamine on the components of insulin and mTOR/ S6K signaling pathways and cytoprotection in C2C12 musculoskeletal cells. The dipeptide L-alanyl-L-glutamine is known to modulate metabolism and cell viability. However, the effects on the classical components of insulin and mTOR/ S6K signaling pathways, as well as the cytoprotective effect on muscle cells, are poorly understood. The aim of this study was to investigate the effect of DIP on insulin and mTOR/ S6K signaling pathways in C2C12 myotubes, under normal or insulin resistant conditions. Chronic insulin exposure (24h) promoted insulin resistance, reducing the total contents of the insulin receptor (IR-&#946) and the insulin receptor substrate (IRS-1), and decreasing the phosphorylation of IRS-1, AKT and P44/ 42 MAPK. In addition, there was a reduction in the expression of glucose transporter (GLUT4) and HSP70, reduction of cell viability and defective phosphorylation of p70S6k and S6, which are related to protein synthesis. On the other hand, DIP supplementation increased the total contents of IR-&#946 and IRS-1 and the phosphorylation of IRS-1 and AKT. Anaerobic glycolysis and glycolytic capacity, in addition to phosphorylation of p70S6k and S6, were increased by DIP under normal conditions and in insulin resistance. In our experimental conditions, our results suggest that DIP supplementation improved the signaling pathways of insulin and mTOR/ S6K, increased glucose uptake and metabolism, independent of insulin stimulation, and finally promoted cytoprotection by partially rescuing the cells of an insulin resistant state, by increasing HSP70 and activating the final stages of the mTOR/ S6K pathway.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:04:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9582_1.pdf: 2865684 bytes, checksum: babad16c05a71899acf2da6763796ce3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Estudaram-se os efeitos do treinamento físico moderado e da suplementação com glutamina sobre parâmetros imunológicos de ratos submetidos ou não a estresse agudo na idade adulta. Foram avaliadas: eventuais alterações qualitativas e quantitativas nas séries vermelha e branca do sangue, a taxa de fagocitose e a liberação de radical superóxido em macrófagos alveolares. Animais jovens recebiam dietas suplementadas com L-glutamina ou com L-glicina durante 10 dias prévios a realização dos estudos. Outro grupo foi submetido a treinamento de natação durante 45 minutos por dia, 5 dias por semana, durante 6 semanas, com aumento progressivo de carga, segundo o peso corporal do animal até atingir um máximo de 3%. Após 24 horas do término do período de suplementação ou do treinamento, eram submetidos ou não a estresse agudo de contenção durante 40 minutos.. O estresse, a aplicação de programa controlado de treinamento moderado ou o emprego de suplementação com glutamina, não modificaram os níveis hematimétricos nos animais. Demonstrou-se que o estresse agudo reduz o número total de leucócitos periféricos com aumento no percentual de neutrófilos (p < 0,002) e eosinófilos(p < 0,02) e, redução de linfócitos (p < 0,001). Foi demonstrado que o estresse causa redução na taxa de fagocitose (p < 0,001) e na liberação de radicais superóxido (p < 0,001) por macrófagos. O modelo do treinamento evitou a redução de leucócitos periféricos (p<0,001) e diminuição da fagocitose (p<0,001) ocorrida após estresse, mas não alterou a liberação de superóxido. A suplementação com glutamina não induziu proteção à redução de leucócitos ou na taxa de fagocitose após o estresse e nem alterou a liberação de superóxido. Porém, suprimiu a neutrocitose (p<0,002) e linfopenia (p<0,001). Os achados constituem um alerta acerca dos efeitos deletérios que o estresse pode vir a causar no organismo, sugerem que a realização de exercícios moderados regulares fortalece algumas funções do sistema imune contra as reações adversas do estresse psicológico. Além disso indicam que mais estudos devem ser realizados para discernirem o real efeito de imunonutrientes como a glutamina, uma vez que não foi detectada mudanças globais na imunidade ou proteção contra reações deletérias do estresse agudo em indivíduos sadios, mas, detectou-se efeitos específicos em subpopulações leucocitárias

This thesis intends to point out the religious thoughts that Clemens encountered. It will present the various religious groups with which he dealt the most and the clergymen with whom he associated both casually and intimately. It will also attempt to indicate at least one reason why he never found in religion the peace which he sought.

Parasitos do gênero Leishmania causam um espectro de doenças chamadas de leishmaniose. Para compreender de melhor forma a imunobiologia da Leishmania, o estudo de outras células envolvidas no processo de infecção do parasito se torna importante. As células B-1 são encontradas principalmente nas cavidades peritoneal e pleural, tendo como característica a capacidade de se diferenciar em células fagocíticas. Este trabalho teve como objetivo avaliar o papel das células B-1 na infecção por L. (L.) amazonensis. Os resultados mostraram que, assim como os macrófagos, os B-1CDPs são infectados pelo mecanismo de fagocitose e permitem a multiplicação da Leishmania no seu interior. Além disso, os vacúolos parasitóforos formados nos B-1CDPs apresentaram ser maiores do que dos macrófagos. Portanto, os dados com B1CDPs sugerem que estas células podem possuir um papel relevante na infecção por L. (L.) amazonensis, podendo ser considerados células hospedeiras importantes durante a infecção devido à incapacidade de responder de maneira eficaz para a eliminação dos parasitos. / The genus Leishmania parasites cause a spectrum of diseases called leishmaniasis. To better understand the immunobiology of Leishmania, the study of other cells involved in parasite infection process becomes important. The B-1 cells are found predominantly in the peritoneal and pleural cavities, whose feature consist on an ability to differentiate into phagocytic cells. This study aimed to evaluate the role of B-1 cells in the infection by L. (L.) amazonensis. The results showed that, like macrophages, B-1CDPs are infected by a mechanism of phagocytosis and allow the multiplication of Leishmania within. Furthermore, the parasitophorous vacuoles in the B-1CDPs showed to be larger than those formed in the macrophages. Therefore, B1CDPs can have an important role in infection by L. (L.) amazonensis and can be considered important host cells during infection due to inability to respond effectively to the elimination of parasites.

A catepsina L é uma cisteína proteinase da família da papaína (clã CA, família C1), sendo esta família a mais conhecida entre as cisteína proteinase. A catepsina L, como outras proteinases da família C1, é sintetizada como uma pró-enzima inativa que é ativada através da remoção do pró-peptídeo. Os pró-peptídeos das catepsinas da subfamília catepsina L apresentam um motivo consenso, denominado motivo ERFNIN. A catepsina L corresponde a principal proteinase digestiva em Tenebrio molitor. No nosso laboratório 3 pró-catepsinas L (pCALs) foram clonadas e seqüenciadas a partir de uma biblioteca de cDNA de intestino médio de larvas de T. molitor: pCAL1 (CAL lisossomal), pCAL2 e pCAL3 (enzimas digestivas). Estas proteinases apresentam o motivo ERFNIN e os resíduos envolvidos na catálise: Cys25, His169, e Asn175 com Gln19 (numeração da papaína). Neste trabalho descrevemos a clonagem em vetores de expressão e a expressão em bactérias das sequências codificadoras de pCAL1, pCAL2 e pCAL3. As pró-catepsinas L recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade e a incubação em pH ácido resultou na formação das enzimas maduras CAL1, CAL2 e CAL3 com atividade sobre o substrato Z-FR-MCA. O anticorpo policlonal anti-pCAL2 foi produzido em coelho e reconheceu pCAL2 e CAL2 em immunoblots. Experimentos de immunoblots com diferentes tecidos de T. molitor mostraram que o anticorpo policlonal anti-pCAL3 reconheceu pCAL3 e CAL3 nos dois terços anteriores do intestino médio de larvas de T. molitor. Estudos de imunocitolocalização indicam que a catepsina L 3 ocorre em vesículas no intestino médio anterior e em microvilosidades no intestino médio posterior. Para os experimentos de cristalização, nós expressamos pCAL1, pCAL2 e pCAL3 como mutantes Cys25&#8594;Ser inativos. pCAL3Cys26Ser foi cristalizada por difusão de vapor (gota sentada) contra 0,1-1,6M de dihidrogênio fosfato de amônio. Os cristais são monoclínicos com grupo espacial C2 e parâmetros de célula: a=57,634 Å, b=89,322 Å, c=70,076 Å, &#945;=&#947;=90°, &#946;=92,502° e uma molécula na unidade assimétrica. A e strutura foi determinada por substituição molecular usando a estrutura de Fasciola hepatica (42% de identidade) como modelo. O modelo foi refinado a 2,1 Å com fator R final de 16,19% (Rfree=20,5%). pCAL2Cys25Ser foi cristalizada por difusão de vapor (gota sentada) contra acetato de sódio 0,2M, cacodilato de sódio 0,1M pH6,6-6,7 e 20% de PEG 8000. Os cristais são triclínicos com grupo espacial P1 e parâmetros de célula: a=51,669 Å, b=52,37 Å, c=59,716 Å, &#945;= 91,278°, &#947;=109,586°, &#946;=91,547° e duas moléculas na unidade assimétrica. A estrutura foi determinada por substituição molecular usando a estrutura da pCAL3 (44% de identidade) como modelo. O modelo foi refinado a 2,0 Å com fator R final de 17,61% (Rfree=22,48%). A estrutura terciária da pró-catepsinas L digestivas é muito similar as estruturas de cisteína proteinases da família da papaína / Cathepsin L is a cysteine proteinase of the papain family (clan CA, family C1), which is the most known among the cysteine proteinases. Cathepsin L, like other proteinases of family C1, is synthesized as an inactive proenzyme that is activated by propeptide removal. The propeptide of cathepsin L-like subfamily contain a highly conserved motif, the so called ERFNIN motif. Cathepsin L corresponds to the major digestive proteinase in Tenebrio molitor. In our laboratory, 3 procathepsins L (pCALs) were cloned and sequenced from a cDNA library prepared from T. molitor larval midguts: pCAL1 (lysosomal CAL), pCAL2 and pCAL3 (digestive enzymes). These proteinases have ERFNIN motif and 3 residues directly involved in catalysis: Cys25, His169, Asn175 with Gln19 (papain numbering). In this work we report the cloning into the expression vector and bacterial expression of the sequences coding pCAL1, pCAL2 and pCAL3. The recombinant procathepsins L were purified by affinity chromatography and activation of these enzymes occurs under acidic conditions. The cathepsins L (CAL1, CAL2 and CAL3) were able to hydrolyse Z-FR-MCA. The polyclonal antibody anti-pCAL2 was produced in rabbit and recognized pCAL2 and CAL2 on immunoblots. Immunoblot analyses of different T. molitor larval tissues demonstrated that the polyclonal antibody anti-pCAL3 recognised pCAL3 and CAL3 in the anterior two-thirds of midgut tissue of T. molitor larvae. Immunolocalization studies indicate that cathepsin L 3 occurs in vesicles in the anterior midgut and microvilli in posterior midgut. To crystallographic studies we expressed pCAL1, pCAL2 and pCAL3 as inactive Cys25&#8594;Ser mutants. pCAL3Cys26Ser was crystallized by vapor diffusion in sitting drops against 0.1-1.6 M mono-ammonium dihydrogen phosphate. The crystals are monoclinic, belonging to space group C2, with cell parameters: a = 57.634 Å, b = 89.322 Å, c = 70.076 Å, &#945; = &#947; =90°, &#946; = 92.502° and contain one molecule in the asymmetric unit. The structure was determined by molecular replacement using the structure of Fasciola hepatica procathepsin L (42.5% identity) as a model. The model was refined at 2.1 Å resolution with an R factor of 16.19% (Rfree = 20.5%). pCAL2Cys25Ser was crystallized by vapor diffusion in sitting drops against 0.2M sodium acetate, 0.1M sodium cacodylate pH 6.6-6.7 and 20% polyethylene glycol 8,000. The crystals are triclinic, belonging to space group P1, with cell parameters: a = 51.669 Å, b = 52.37 Å, c = 59.716 Å, &#945; = 91.278° &#947; = 109.586°, &#946; = 91.547° and contain two molecules in the asymmetric unit. The structure was determined by molecular replacement using the structure of procathepsin L 3 (44 % identity) as a model. The model was refined at 2.0 Å resolution with an R factor of 17.61% (Rfree = 22.48%). The tertiary structure ofdigestive procathepsins L is very similar to papain-like cysteine proteinases structures

Orientador: Thiago Assis Rodrigues Nogueira / Resumo: Alguns micronutrientes são limitantes para o cultivo agrícola em solos da região do Cerrado brasileiro, sendo necessária a suplementação desses elementos químicos via fertilizantes. O composto de lodo de esgoto (CLE) apresenta em sua composição elevada quantidade de matéria orgânica e nutrientes, podendo ser utilizado como um fertilizante orgânico. Porém, ainda há pouca pesquisa com CLE como fonte de nutrientes em condições de Cerrado. Dessa forma, objetivou-se, com o presente estudo, avaliar a viabilidade agronômica da aplicação do CLE como fonte de micronutrientes para as culturas de soja e milho em solo de Cerrado de baixa fertilidade. O experimento foi desenvolvido em condições de campo em Selvíria/MS, sendo cultivadas em sucessão as culturas de soja (safra) e milho (segunda safra). Adotou-se o delineamento experimental em blocos casualizados, com quatro repetições. Os tratamentos foram originados de esquema fatorial 4 x 2 + 2, sendo: quatro doses de CLE (10, 15, 20 e 25 t ha-1, base úmida), dois modos de aplicação (área total e nas entrelinhas das culturas) e dois tratamentos adicionais: i) = controle, sem aplicação do composto e ii) = adubação mineral convencional, com NPK e fontes solúveis de B e Zn. Ao final do ciclo de cada cultura, foram coletadas amostras de terra (camada de 0–20 e 20–40 cm de profundidade) para avaliação da fertilidade do solo (M.O., pH, CTC, H+Al, Al, SB, V, P, K, Ca, Mg, S, B, Cu, Fe, Mn, Ni e Zn). Em ambas as culturas, foram avaliados: o estado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Field crops in soils of the Brazilian Cerrado region are becoming increasingly deficient in some micronutrients, making supplemental fertilizer application an indispensable management practice. Sewage sludge compost (SSC) contains considerable amounts of organic matter and crop nutrients and could be used as an organic fertilizer. However, minimal research has been conducted to evaluate the potential of SSC as a nutrient source in the Cerrado region. The objective of this study was to evaluate the agronomic viability of SSC as a micronutrient source for soybean and maize crops grown successively on a typical, low fertility Cerrado soil. The experiment was conducted under field conditions in Selvíria, MS, Brazil, with soybean as a summer crop and maize as a winter crop. A randomized complete block design with four replications was implemented. The treatment structure used in the study followed a 4 × 2 + 2 factorial arrangement: 1. SSC: 10, 15, 20, and 25 Mg ha-1, on a wet basis); 2. Application method: whole area or between rows for both crops. The two additional treatments were: i) a control where neither CSS nor mineral fertilizers were applied; ii) an area treated with conventional fertilization (CF, hereafter) only. In this last case, NPK mineral fertilizers were applied along the plot directly on the sowing line; B and Zn were applied after the emergence of soybean and maize plants. At the end of each crop cycle, soil samples were collected (layer 0.0–0.2 and 0.2–0.4 m de... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Taxa of Mentha L. were evaluated during 2011-2014. Thirty-five taxa were evaluated in terms of morphological parameters, in term of constituents (quantity and quality of essential oil, content of phenols and flavonoids) and insecticidal activity of essential oils on Musca domestica and Culex quinquefasciatus Say. Essential oils were obtained by steam-distillation and their composition was determined by GC/MS. Content of phenolics was evaluated by Folin-Ciocalteu assay, content of flavonoids was determined by aluminium chloride colorimetric assay and antioxidant capacity was determined by DPPH method. Insecticidal activities were evaluated according to the modified WHO methodology. The best insecticidal activity, for Musca and Culex, was observed in case of essential oil with majority stake of piperitenone oxide, namely essential oils obtained form taxa M. suaveolens 'Variegata' and M. sp. 'Cinderella'.