Le genre Bradyrhizobium est le genre de rhizobia qui nodule la plus grande diversité d’espèces de légumineuses. Certaines de ces bactéries ont la particularité d’établir une symbiose fonctionnelle avec des légumineuses du genre Aeschynomene en utilisant un processus Nod-indépendant. De plus, au sein des nodules d’Aeschynomene, les Bradyrhizobium subissent une différenciation terminale en bactéroïde qui s’accompagne de modifications métaboliques et morphologiques drastiques. A la différence de la majorité des autres rhizobia, des hopanoïdes sont retrouvés au sein des membranes de l’ensemble des souches de Bradyrhizobium, dont certains, de façon inédite, liés à l’une des très longue chaîne d’acide gras (VLCFA) présentent sur le lipide A du LPS de ces bactéries. De plus, le LPS des Bradyrhizobium photosynthétiques possède un antigène-O également inédit et non-immunogénique. Le but de cette thèse était de déterminer si les particularités de la membrane externe des Bradyrhizobium pouvaient être impliquées dans la physiologie de ces bactéries ainsi que dans l’initiation et le maintien de la symbiose avec Aeschynomene. Les résultats obtenus ont mis en évidence que les hopanoïdes et plus particulièrement ceux liés au lipide A, ainsi que les VLCFAs permettent de rigidifier la membrane externe des Bradyrhizobium. Ces propriétés leur confèrent ainsi une plus grande résistance face aux conditions de stress, dont celles présentes au sein des nodules d’Aeschynomene, ce qui permet aux Bradyrhizobium de maintenir une symbiose efficiente avec ces plantes. Ces travaux ont ainsi permis d’avancer dans la connaissance de la voie de biosynthèse et du rôle du LPS atypique et des hopanoïdes des Bradyrhizobium et pourrait conduire à la production d’inocula plus résistants. / The Bradyrhizobium genus is the genus of rhizobia which nodulates the widest range of legume species. Some of these bacteria have the peculiarity of establishing a functional symbiosis with legumes of the genus Aeschynomene using a Nod-independent process. Moreover, within Aeschynomene nodules, the Bradyrhizobium strains undergo a terminal differentiation into bacteroids which is accompanied by drastic metabolic and morphological changes. Unlike the majority of other rhizobia, hopanoids are found in the membranes of all the Bradyrhizobium strains, some of which linked to one of the very long chain fatty acid (VLCFA) on the lipid A of these bacteria. In addition, LPS of photosynthetic Bradyrhizobium have an O-antigen that is also unique and non-immunogenic. The aim of this thesis was to determine whether the peculiarities of the external membrane of Bradyrhizobium strains could be implicated in the physiology of these bacteria as well as in the initiation and maintenance of the symbiosis with Aeschynomene. The obtained results showed that hopanoids and more particularly those linked to the lipid A, as well as the VLCFAs rigidify and stabilize the outer membrane of Bradyrhizobium strains. These properties give them greater resistance to stress conditions, including those present in Aeschynomene nodules, which allows the Bradyrhizobium to maintain an efficient symbiosis with these plants. This work allowed us to advance in the understanding of the biosynthesis and the role of the atypical LPS and the hopanoids produced by the Bradyrhizobium strains and could lead to the production of more resistant inocula.

Les microvésicules (MVs) sont des petites vésicules membranaires libérées par les cellules, ayant des effets bénéfiques et/ou délétères dans le sepsis. Nous avons déjà démontré que la délétion de l’isoforme non musculaire de la kinase de la chaîne légère de la myosine (MLCKnm) protège les souris contre le choc endotoxique en réduisant l'inflammation. Ici, nous avons évalué les conséquences de la délétion de MLCKnm sur le phénotype et les effets inflammatoires des MVs au cours du choc endotoxique. La délétion de MLCKnm augmente le taux circulant des MVs et ceux dérivées des cellules progénitrices. Les souris MLCKnm-/- présentent une augmentation du nombre des plaquettes, mais leurs capacité à libérer les MVs est réduite et une diminution du nombre des leucocytes et des MVs leucocytaires. Une diminution du relâchement de l’aorte a été observé chez les souris injectées avec des MVs dérivées des souris MLCKnm+/+ (MVsMLCKnm+/+), mais pas les MVs dérivées des souris MLCKnm-/- (MVsMLCKnm-/-). En présence de lipopolysaccharide (LPS), MVsMLCKnm+/+ augmentent la sécrétion des cytokines pro-inflammatoires par les cellules endothéliales de l’aorte de souris alors que les MVsMLCKnm-/- induisent la libération des cytokines anti-inflammatoires. L’injection des MVsMLCKnm-/-, prévient partiellement l'augmentation du stress oxydatif, nitrosatif, et la dysfonction endothéliale induites au niveau des souris par le LPS. Ces résultats montrent que MLCKnm joue un rôle important dans l'activation cellulaire, la libération des MVs, ainsi que le nombre des cellules circulantes. La délétion de MLCKnm permet de générer des MVs circulantes moins inflammatoires avec un potentiel protecteur. / Microvesicles (MVs), small membrane vesicles released from cells, have beneficial and/or deleterious effects in sepsis. We previously reported that non-muscle myosin light chain kinase (nmMLCK) deletion protects mice against endotoxic shock by reducing inflammation. Here, we evaluated the consequences of nmMLCK deletion on the phenotype and inflammatory effects of cell-derived MVs during endotoxic shock. nmMLCK deletion increased circulating levels of MVs. In nmMLCK-/- mice, platelet count was increased but the platelet ability to release MVs was reduced, and both leukocyte-derived MVs and leukocyte count were reduced. Endothelium-dependent relaxation of aorta was reduced in mice injected with MVs from nmMLCK+/+ (MVsnmMLCK+/+) but not from nmMLCK-/- mice (MVsnmMLCK-/-). In presence of lipopolysaccharide, MVsnmMLCK+/+ increased pro-inflammatory cytokine release by mouse aortic endothelial cells whereas MVsnmMLCK-/- enhanced anti-inflammatory secretome. Injection of MVsnmMLCK-/-, but not MVsnmMLCK+/+, prevented the increase of oxidative and nitrative stresses and reduced endothelial dysfunction in aorta from lipopolysaccharide-treated mice. Altogether, nmMLCK plays an important role in cellular activation and release of circulating MVs. Moreover, nmMLCK deletion generates MVs with low inflammatory properties and high protective effects.

La maladie de Parkinson (MP) est la deuxième maladie neurodégénérative la plus répandue. Elle touche 0,3% de la population en général, avec un taux croissant de 1 à 2% chez les personnes de plus de 65 ans. À l’heure actuelle, le seul traitement pharmacologique disponible (L-Dopa) consiste à réduire la sévérité des symptômes moteurs. Plusieurs approches expérimentales sont actuellement à l‘étude pour tenter de ralentir la progression de la maladie, ou réduire à long terme la sévérité des symptômes, mais avec un succès limité.La transplantation cellulaire a déjà montré des effets encourageant dans les modèles animaux et en clinique, mais elle présente également plusieurs limites, notamment la faible survie des cellules greffées, une forte réponse immunitaire conduisant au rejet de la greffe.Les biomatériaux sont des matériaux utilisés et adaptés à des applications médicales. Ils sont conçus pour interagir avec différents systèmes biologiques. Parmi ceux-ci, les hydrogels à base de collagène ont attiré l'attention ces dernières années dans le domaine de la médecine régénérative et de la greffe cellulaire, largement utilisés pour la greffe de peau et la cicatrisation des plaies, la régénération de la moelle épinière, la réparation des os et des tendons. À ce jour, cette approche prometteuse n'a encore été étudiée que très rarement in vivo pour les maladies neurodégénératives telles que la MP. Dans ce travail, nous avons développé un modèle pertinent de la MP pour les rongeurs, capable de montrer une dégénérescence progressive des neurones DA dans la SNpc. En utilisant un vecteur viral adéno-associé (AAV), nous avons surexprimé le domaine C-terminal de la forme LRRK2 mutée (G2019S) avec ou sans α-synucléine mutée (α-synA53T) dans la SNpc. Nos résultats ont montré que, alors que LRRK2G2019S seule ne produisait aucune toxicité, l’α-syn co-exprimé avec LRRK2G2019S produisait une plus grande perte de neurones DA dans la SNpc par rapport à l’α-synA53T seule. La toxicité de l'a-syn est probablement facilitée par l'activité kinase du LRRK2 mutant par le biais d'un mécanisme « cell-autonomous ». Une fois que le modèle neurodégénératif de la maladie de Parkinson a été développé et prêt à tester le potentiel du bio-polymère de collagène en tant que système d'administration, nous avons procédé à la caractérisation de l'échafaud en hydrogel. En utilisant l'imagerie par résonance magnétique (IRM) à champ élevé (11,7 T) et l'analyse histologique, nous avons caractérisé notre hydrogel à base de collagène après polymérisation in vitro et, in vivo, après injection intracérébrale chez le rat. Nos résultats indiquent que les hydrogels à base de collagène peuvent être injectés dans le cerveau sans effets délétères majeurs et que l'IRM est un outil de choix pour le suivi direct et non invasif de la polymérisation et de la greffe d'hydrogel de collagène. L'hydrogel de collagène a montré une réponse immunitaire transitoire et limitée essentiellement localisée autour du site d'injection.Ces résultats suggèrent que notre hydrogel à base de collagène qui polymérise in situ pourrait être utilisé en toute sécurité comme système d'administration intracérébrale de cellules et / ou de molécules trophiques et/ou neuroprotectrices pour la MP. / Parkinson’s disease (PD) is the second most common neurodegenerative disease, affecting 0.3% of general population, with an increasing rate of 1 to 2% in persons over 65. At the moment the only available pharmacological treatment (L-Dopa) focuses on mitigating symptoms; nowadays treatments to slow down the disease’s progression, or suppress symptoms on the long term remain to be validated.Cellular transplantation had showed encouraging results, but it has some limitation, including the poor survival of the grafted cells, strong immune response and rejection of the graft. Biomaterials are materials used and adapted for medical applications and are designed to interact with different biological systems. Among them, collagen-based hydrogels recently gained attention in the field of regenerative medicine and cellular transplantation, being widely used for skin graft and wound healing, spinal cord regeneration, bones and tendon repair. To date, such promising approach has not been often investigated in vivo for neurodegenerative diseases as PD.In this work we developed a rodent relevant model of PD that is able to show a progressive neurodegeneration of DA neurons in the SNpc. Using adeno-associated viral vector (AAV), we overexpressed the C-terminal domain of mutated LRRK2 form (LRRK2G2019S) with or without mutant α-synuclein (α-synA53T) in the SNpc. Our results showed that, while LRRK2G2019S alone did not produce any toxicity, α-synA53T co-expressed with LRRK2 G2019S produced a greater loss of dopaminergic cells in the SNpc. α-synA53T toxicity is likely to be facilitated by the kinase activity of mutant LRRK2 through a cell autonomous mechanism.Once the neurodegenerative rat model of PD was developed and ready for testing the potential of the collagen scaffold as a delivery system, we proceeded with characterization of the hydrogel scaffold. Using high field (11.7T) magnetic resonance imaging (MRI), and histological analysis we characterized our collagen-based hydrogel after in vitro and, in vivo polymerization after intracerebral injection in rats.Our results indicate that collagen-based hydrogels can be safely injected into the brain without any major adverse effect and that MRI is a tool of choice for a direct and non-invasive in vivo follow-up of collagen hydrogel polymerization and grafting in the brain. The collagen scaffold showed a transitory and limited immune response localized around the site of injection.This results suggest that our in-situ polymerizing collagen-based hydrogel could be safely employed as a delivery system for cells and/or molecules during neuronal transplantation.

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Le sepsis est l'une des principales causes de mortalité en Amérique du nord (taux de mortalité : 30 à 60%). Les patients en sepsis qui décèdent sont souvent en"insuffisance surrénalienne relative", caractérisée par leur incapacité de produire suffisamment de glucocorticoïdes (GC) après stimulation à l'ACTH et une dysfonction de l'axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien (HHS). La sécrétion de GC est contrôlée par l'hormone adrénocorticotrope (ACTH), la vasopressine (AVP) et des cytokines comme le Macrophage Migration Inhibitory Factor (MIF), un puissant agent pro-inflammatoire. MIF inhibe les effets du cortisol et de l'AVP. Hypothèses : MIF est impliqué dans l'incapacité de la glande surrénale à répondre adéquatement au stress induit par le sepsis. Son action s'exerce au niveau hypophysaire, altérant la sécrétion d'ACTH ou directement au niveau de la glande surrénale, interférant avec l'action de l'ACTH et de l'AVP. Méthodes : Modèle de rat soumis à un sepsis subaigu endotoxinique (10 mg/kg de LPS 055: B5 E.coli, 18 « 2 hs, avec ou sans coinfusion d'anti-MIF) et cultures primaires de cellules corticosurrénaliennes. Résultats : Validation du modèle animal. Les signes cliniques, l'hypertrophie des glandes surrénales accompagnée de modifications de la structure cellulaire et tissulaire, l'augmentation des taux plasmatiques d'ACTH et de corticostérone, la dissociation ACTH/corticostérone et l'augmentation d'AVP valident le modèle. Impact du traitement anti-MIF. Bien qu'aucune amélioration clinique n'ait été observée, le traitement avec de l'anti-MIF restaure une structure des glandes surrénales proche de la normale chez les animaux en sepsis subaigu. Ceci confirme de façon indirecte que, dans ce contexte, le MIF contribue à modifier la structure de ces glandes avec des impacts fonctionnels potentiels. Validation du modèle cellulaire.Le traitement à l'ACTH (10[indice supérieur -8]M) des cellules fasciculées induit une augmentation de corticostérone et le LPS induit une hypertrophie des cellules. Présence de MIF et CD74. In vivo, les immunobuvardages confirment la présence de MIF et CD74 dans l'hypophyse et les glandes surrénales avec une diminution d'expression de MIF hypophysaire opposée à une augmentation au niveau surrénalien lors du sepsis. In vitro, l'immunofluorescence confirme la présence de MIF et CD74 dans les cellules fasciculées, avec une colocalisation après traitement au LPS (0.1 mg/ml). MIF active la voie de p42/44[indice supérieur mapk] confirmant la présence de son récepteur CD74, son co-récepteur CD44 dans la glande surrénale et leur fonctionnalité. Conclusion : Nos modèles valident l'implication de MIF dans la régulation de l'axe hypothalamo-hypophyso-surrénalien et sa fonction surrénalienne.

Les lésions cérébrales du nouveau-né sont majoritairement causées par un manque d'oxygène et/ou une infection périnatale. Le profil des lésions cérébrales retrouvées chez le nouveau-né prématuré diffère de celui retrouvé à terme, malgré les mêmes facteurs de risque qui sont décrits. Une corrélation positive de l'expression de cytokines et la présence de dommages cérébraux est établie. Pourtant, bien qu'il soit connu que la réponse anti-inflammatoire vienne contrebalancer les effets pro-inflammatoires pouvant être délétères, très peu de données sont disponibles sur l'expression intracérébrale de cytokines anti-inflammatoires dans le contexte de lésions cérébrales du nouveau-né. De plus l'apport de l'immunité systémique est connu dans les dommages cérébraux chez l'adulte, mais peu connu chez le nouveau-né. Ce projet a pour but de comparer la réponse neuroinflammatoire dans les lésions cérébrales d'un cerveau prématuré versus à terme. Méthodes : Dans un modèle animal de ratons ayant une maturation cérébrale correspondant à un humain prématuré (jour post-natal (P)1) versus un humain à terme (P12), l'expression intracérébrale de cytokines anti-inflammatoires (IL-6, TGF[bêta]1, IL-10 et IL-1ra) et pro-inflammatoires (IL-1[bêta] et du TNF[alpha]) est déterminée par ELISA et IHC suite à une exposition au LPS et/ou à l'HI postnatale. L'expression des chimiokines CINC-1 et MCP-1 respectivement impliquée dans le recrutement des neutrophiles et des macrophages sera étudiée, en plus des cellules infiltrantes elles-mêmes. Résultats : Le cerveau de ratons à P1 ne démontre aucune augmentation de l'expression de ces cytokines anti-inflammatoires, contrairement aux cerveaux à P12 des ratons exposés à l'HI et au LPS+HI qui présente une augmentation de cytokines dans l'hémisphère ipsilatérale à l'ischémie. Cette augmentation est détectée autant dans la substance grise que blanche. L'augmentation des cytokines pro-inflammatoires est retrouvée seulement par IHC à P1 dans les conditions HI et LPS+HI, mais est retrouvé aussi à P12. Le recrutement de neutrophiles et macrophages est détecté à P12 suite à l'exposition à l'HI avec ou sans LPS. Conclusion : Notre travail démontre que la réponse neuroinflammatoire chez le prématuré est immature, comparativement à celle chez le nouveau-né à terme exposé à de mêmes agressions.

With increasing problem of resistance development in bacteria against conventional antibiotics, as well as problems associated with diseases either triggered or enhanced by infection, there is an urgent need to identify new types of effective therapeutics for the treatment of infectious diseases and its consequences. Antimicrobial and anti-inflammatory peptides have attracted considerable interest as potential new antibiotics in this context. While antimicrobial function of such peptides is being increasingly understood demonstrated to be due to bacterial membrane disruption, the mechanisms of their anti-inflammatory function are poorly understood. Since bacterial membrane component lipopolysaccharide triggers inflammation, this thesis aims at clarifying importance of lipopolysaccharide (LPS)-peptide interactions while investigating possible modes of action of peptides exhibiting anti-inflammatory effect. Furthermore, effect of poly(ethylene)glycol (PEG)-conjugation was investigated to increase performance of such peptides. Results presented in this thesis demonstrate that peptide-induced LPS- and lipid A binding/scavenging is necessary but not sufficient criterium for anti-inflammatory effects of peptides. Furthermore, preferential binding to LPS over lipid membrane, as well as higher binding affinity to the lipid A moiety within LPS, are seen for these peptides. In addition, results demonstrate that apart from direct LPS scavenging, membrane-localized peptide-induced LPS scavenging seem to contribute partially to anti-inflammatory effect. Furthermore, fragmentation and densification of LPS aggregates, in turn dependent on the peptide secondary structure on LPS binding, as well as aromatic packing interactions, correlate to the anti-inflammatory effect, thus promoting peptide-induced packing transition in LPS aggregates as key for anti-inflammatory functionality. Thus, peptide-induced LPS aggregate disruption together with reduction of the negative charge of LPS suggests the importance of phagocytosis as an alternative to the inflammatory pathway, which needs to be further investigated. Furthermore, PEG conjugation of peptide results in strongly reduced toxicity at a cost of reduced antimicrobial activity but markedly retained anti-inflammatory effect. Taken together, the results obtained in this work have demonstrated several key issues which need to be taken into consideration in the development of effective and selective anti-inflammatory peptide therapeutics for the treatment of severe Gram-negative bacterial infections.

Lipopolysaccharides (LPS), major virulence determinants in Gram–negative bacteria, are responsible for many pathophysiological responses and can elicit strong immune responses. In order to better understand the role of LPS in host–pathogen interactions and elucidate the immunogenic properties of LPS outer core oligosaccharide, an all α–linked Escherichia coli R3 outer core pentasaccharide was first synthesized with a propyl amino linker at the reducing end. This oligosaccharide was also covalently conjugated to a carrier protein (CRM197) via the reducing end propyl amino linker. An immunological analysis demonstrated that this glycoconjugate can elicit specific anti-pentasaccharide antibodies with in vitro bactericidal activity. These findings will contribute to further exploring this pentasaccharide antigen as a vaccine candidate. Human milk oligosaccharides (HMOs) are a family of diverse unconjugated glycans that exist in human milk as one of the major components. Characterization, quantification and biofunctional studies of HMOs remain a big challenge due to their diversity and complexity. The accessibility of homogenous HMOs library is essential to solve these issues which have beset academia for several decades. In this study, an efficient chemoenzymatic strategy, namely Core Synthesis/Enzymatic Extension (CSEE), for rapid production of diverse HMOs was reported. Based on 3 versatile building blocks and 4 robust glycosyltransferases, a library of 31 HMOs were chemoenzymatically synthesized and characterized by MS and NMR. CSEE indeed provides a practical approach to harvest structurally defined HMOs for various applications. Glycoproteins are extremely important for all life on the planet. Glycoproteins play important roles in various biological processes. Increasing evidences demonstrate that glycosylation of proteins could improve stability of proteins by stabilizing their tertiary structure and protecting them from proteolysis. Besides, glycosylation of proteins could provide targeting effects through glycan-lectin interaction. Furthermore, carbohydrates play crucial roles in humoral immunity in that many sugar epitopes are identified as antigens for antibodies. Glycoprotein could boost strong T cells mediated intercellular immune responses because homogeneous antigens present on the surface of proteins by multivalent bonds. In this study, the three advantages of glycoproteins, namely stabilizing proteins, targeting effects and eliciting immunological response, were extensively explored by broad collaboration with other groups.

[pt] O ciclo do combustível nuclear é o conjunto de etapas do processo industrial que transforma o mineral urânio até sua utilização como combustível nuclear. Em todas as etapas do ciclo os trabalhadores estão expostos a partículas contendo urânio. Para avaliar os riscos é necessário conhecer a taxa de deposição, a concentração e a cinética da partícula no trato respiratório. Os testes de solubilidade in vitro, permitem um estudo sistemático da solubilidade de qualquer composto. Nesse estudo foram utilizadas amostras de DUA, TCAU e UO2 em contato com o liquido pulmonar simulado e estas foram analisadas pela técnica de PIXE (Particle Induced X rays Emission) para determinação da fração de urânio solubilizada e pela técnica de 252 Cf-PDMS (Plasma Desorption Mass Spectrometry) para a determinação da especiação química. Os objetivos específicos foram: (i) Identificar os compostos de urânio na fração respirável do aerossol nas etapas selecionadas do ciclo de combustível nuclear; (ii) identificar e determinar a solubilidade dos compostos de urânio em líquido pulmonar simulado; (iii) Determinar os parâmetros de solubilidade dos compostos de urânio. Os valores dos parâmetros de solubilidade determinados neste estudo para o DUA, TCAU e UO2 são: fr, = 0,83; sr = 0,51 d -1 e ss = 0,0075 d -1 ; fr = 0,60; sr = 0,70 d -1 e ss = 0,00089 d -1 e fr = 0,19; sr = 0,47 d -1 e ss = 0,0019 d -1 , respectivamente. / [en] The nuclear fuel cycle is the industrial process that converts the uranium ore, to its use as fuel, inside of a nuclear power station. In all steps from the nuclear cycle workers are exposure to uranium dust particles. To evaluate the risk due particles incorporation data like deposition, concentration and kinetics of the particles in the respiratory tract must be know The in vitro solubility test allows a systemic understanding about the compound solubility. Samples of DUA, TCAU e UO2 and SLF was collected in different time interval and the uranium concentration was determined by PIXE (Particle Induced X rays Emissions) technique and the uranium compounds were identified by 252 Cf-PDMS (Plasma Desorption Mass Spectrometry). The specific objectives were: (i) identifying uranium compounds in the respirable fractions of aerosol (ii) identified and determinated the uranium coumpounds solubility in simulated lung fluid (iii) determinated the solubility parameters to this uranium compounds. The solubility parameters to DUA, TCAU and UO2 are: fr, = 0,83; sr = 0,51 d -1 and ss = 0,0075 d -1; fr = 0,60; sr = 0,70 d -1 and ss = 0,00089 d -1 e fr = 0,19; sr = 0,47 d -1 e ss = 0,0019 d -1, respectively.

Esse trabalho teve por objetivo contribuir para o entendimento das novas dinâmicas de criação, difusão e exploração de conhecimento a partir da análise de dois SLPs de cerâmica de revestimento, um Santa Gertrudes/SP e outro em Criciúma/SC. Para compreender este fenômeno foi realizado um estudo exploratório em que foram identificadas a estrutura produtiva e de comercialização de algumas empresas, as formas de governança e o arcabouço institucional dos SLPs, bem como os processos de aprendizagem ocorridos entre os agentes ao longo do tempo. Apesar do escopo do trabalho estar mais relacionado com a geração de conhecimento via interação, a pesquisa também buscou investigar os processos de aprendizagem gerados a partir de fontes internas de conhecimento, isto é, aquelas em que o conhecimento pode ser gerado dentro da firma. O modelo interativo de inovação ressalta a relevância da cooperação entre firmas e demais instituições e, portanto, o papel dos vínculos e redes envolvendo diferentes organizações. Assim, ficou evidente que o conhecimento externo é um input essencial ao processo de geração de novos conhecimentos. O conhecimento nesses SLPs resulta das interações entre agentes heterogêneos capazes de aprender e estabelecer redes de relações, embora em um limitado espectro de atividades, mas enraizada em um espaço técnico e de produção limitados onde cada agente acumula competência por meio de processos de aprendizagem através de rotinas e de uso (learning-by-doing e learning-byusing). As chances de que seja gerado um novo conhecimento depende dos níveis de acumulação de habilidades e competências, educação e acesso à informação de outros agentes tanto de fora como internos aos SLPs. Esses agentes estão espalhados no espaço e cada um possui partes de conhecimento que podem se complementar. / The aim of this work is to understand the new dynamics on creation, diffusion and exploration of knowledge concerning SLPs, assuming that geography and innovation are deeply connected. This environment was studied taking an analysis of two local system of ceramic tile located in Criciúma/SC and Santa Gertrudes/SP. It was developed an exploratory study to understand this phenomena in which were identified the sale and productive structure of some firms, their governance and SLP’s institutional range, with a special focus on the learning processes occurring among the agents. The way the clusters interact with each other and with different agents reveals the importance of the cooperation as well the role of good connections among them. Thus, it became clear that external knowledge is an essential ingredient in the process of acquiring new methods. The union of all knowledge accumulated results in interactions among all the parts involved. They all are able to learn, to stabilish networks in a spectrum limited according to the technical space of each firm competence which is produced by means of learning processes derived from learning-by-doing and learning-by-using. The probabilities of generating a new knowledge depends on the levels of acquiring competence, abilities, educational level as well as the access to information of external and internal SLPs agents. These same agents are distributed in a certain space and each one of them possesses parts of the knowledge that can be complementary.