Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2018-06-19T18:22:47Z No. of bitstreams: 1 Simone Aparecida Penimpedo Calamita.pdf: 1350951 bytes, checksum: 877af65720abb256a060fcb1e6402439 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-19T18:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simone Aparecida Penimpedo Calamita.pdf: 1350951 bytes, checksum: 877af65720abb256a060fcb1e6402439 (MD5) Previous issue date: 2015-12-15 / The nonspecific neck pain (CI), can provide great personal suffering has as a possible consequence, disability and reduced quality of life and labor productivity, and generate high social and economic costs for patients and society. Thus, the aim of this study was to evaluate the immediate effect of low power laser irradiation (LBP) on the electromyographic (EMG) activity of the trapezius muscle descending fibers (PDT) in patients with IC. This was a crossover design, controlled, randomized double-blind, composed of 20 individuals with IC. Each individual received a radiation session with LBP continuous mode (wavelength: 880 nm, power of 30mW, power density: 1.07 W / cm; beam area: 0,028 cm2; energy density: 72J / cm2, energy total per point: J 2, irradiation time: 67 s) and LBP treatment with placebo (LBPP) (no dosimetric parameters). Randomization of the participants compared to the LBP or LBPP treatment was performed by drawing. The effects of therapy were verified through the Verbal Numeric Scale of Pain (EVND), it measures the area of pain, and the electromyographic activity of the PDT muscle. In the pre and post treatment with LBP and LBPP comparison was no significant change observed in pain intensity obtained by EVND (F = 1.93; p = 0.17) regardless of the type of intervention (treatment group vs) (F = 0, 02, p = 0.96) as well as the dad or area (p = 0.11) and LPBP (p = 0.06). An increase and a significant decrease in nerve conduction velocity and amplitude of the EMG signal respectively, were found in the treatment LBPP while no changes were found in for treatment with LBP. In this study, a single laser dose not provide analgesia to patients with IC however, the electromyographic analysis showed an ergogenic effect on muscle after PDT treatment. / A cervicalgia inespecífica (CI), pode proporcionar grande sofrimento pessoal tendo como possível conseqüência, a incapacidade e a redução da qualidade de vida e da produtividade laboral, além de gerar altos custos socioeconômicos para os pacientes e a sociedade. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito imediato da irradiação do laser de baixa potência (LBP) sobre a atividade eletromiográfica (EMG) do músculo trapézio fibras descendentes (TFD) em pacientes com CI. Esse foi um estudo cruzado, controlado, randomizado duplo cego, composto por 20 mulheres com CI. Cada indivíduo recebeu uma sessão de irradiação com LBP modo contínuo (comprimento de onda: 880 nm; potência de 30mW; densidade de potência: 1,07 W/cm; área do feixe: 0,028 cm2; densidade de energia: 72J/cm2; energia total por ponto: 2 J; tempo de irradiação: 67 s) e um tratamento com LBP placebo (LBPP) (sem parâmetros dosimétricos). A aleatorização dos participantes em relação ao tratamento LBP ou LBPP foi realizada por meio de sorteio. Os efeitos da terapia foram verificados por meio da Escala Numérica Verbal de Dor (EVND), mensuração da área de dor, e pela atividade eletromiográfica do músculo TFD. Na comparação pré e pós tratamento com LBP e LBPP não foi verificada alteração significativa na intensidade da dor obtida pela EVND (F=1,93; p = 0,17) independente do tipo de intervenção (tratamento vs grupo) (F=0,02; p = 0,96) assim como pela àrea da dor (p = 0,11) e LPBP (p= 0,06). Um aumento e uma diminuição significativa da velocidade de condução nervosa e da amplitude do sinal EMG respectivamente, foram encontradas no tratamento com LBPP enquanto que, nenhuma alteração foi encontrada para o tratamento com LBP. Nesse estudo, uma única dose de laser não proporcionou analgesia aos indivíduos com CI porém, a análise eletromiográfica demonstrou um efeito ergogênico no músculo TFD após o tratamento.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2018-07-16T20:01:20Z No. of bitstreams: 1 Beatriz Guimarães Ribeiro.pdf: 1467862 bytes, checksum: d166e20babcfe778cdc4c7cf5708fc53 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-16T20:01:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beatriz Guimarães Ribeiro.pdf: 1467862 bytes, checksum: d166e20babcfe778cdc4c7cf5708fc53 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / The low level laser therapy (LLLT) is a resource capable of modulating in a positive way the different stages of the muscle repair process. However, little has been described about its effects when applied prior to injury, associated or not with post-injury treatment. The general objective of the present study was to evaluate the effect of LLLT applied prior to the muscle injury associated or not to the post-injury application on the rat skeletal muscle repair process. The aim of article 1 was to evaluate the effect of infrared LLLT applied prior to cryoinjury on the expression of IL-6, MyoD and myogenin. The aim of article 2 was to evaluate the effect of red and infrared LLLT prior to cryoinjury associated or not with post-injury application on oxidative stress. The aim of article 3 was to evaluate the effect of infrared LLLT applied prior to injury with or without post-injury application on the gene expression and protein synthesis of inflammatory cytokines TNF-α and IL-6, and muscle morphology. For the three studies, 205 Wistar rats were divided into the following experimental groups: Control; Injury; LLLT 660 nm prior to injury; LLLT 780 nm prior to injury; LLLT 660 nm pre- and post-injury; and LLLT 780 nm pre- and post-injury. The cryoinjury consisted of two applications of cane cooled in liquid nitrogen in the anterior tibial muscle (TA). The injured groups were evaluated at 1, 3, 7 and 14 days after injury (only for oxidative stress analysis, evaluation occurred at 1, 3, and 7 days). LLLT irradiation was performed with the AsGaAl laser (780 nm) at the parameters of 10 J/cm²; 40 mW; 10 seconds per point; 8 points; 3.2 J. At the end of the protocol, TA muscles were carefully removed for analysis of oxidative stress by lipid peroxidation (LPO) by chemiluminescence initiated by t-BOOH, protein oxidation through the carbonyl damage assay, and analysis of antioxidant enzymes: catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx). TNF-α and IL-6 cytokines were analyzed by quantitative real-time PCR for the detection of gene expression. In addition, a morphological analysis was performed by staining with hematoxylin and eosin. TNF-α and IL-6 cytokines were analyzed by ELISA for protein expression. Data were expressed as mean and standard error of the mean because they were parametric and the comparison between the groups was performed by ANOVA/Tukey (p<0.05). The results of article 1 demonstrate a reduction in the levels of IL-6 mRNA in the group irradiated prior to the injury, concluding that the LBP applied prior to injury was able to modulate positively this inflammatory cytokine, but had no effect on the myogenic regulatory factors MyoD and myogenin in the evaluated parameters. The results of article 2 containing the oxidative stress analysis showed that the irradiated groups presented reduction of the lipoperoxidation and positive modulation of the antioxidant enzymes during the muscle repair process, concluding the red and infrared laser were able to modulate positively the oxidative stress, being the most effective infrared laser in the modulation of antioxidant enzymes. The results of article 3 demonstrated a reduction in the gene expression of TNF-α in the group irradiated prior to injury. In the pre-and post-injury irradiated group, IL-6 and TNF-α mRNA levels increased during the skeletal muscle repair process, concluding that the infrared laser was able to positive modulation these inflammatory cytokines in the two forms of application. Therefore, it is concluded that the LLLT irradiated prior to injury associated or not with the post-injury application has a beneficial effect on inflammatory cytokines and oxidative stress during the repair of the skeletal muscle of rats. / O laser de baixa potência (LBP) é um recurso capaz de modular de forma positiva as diferentes etapas do processo de reparo muscular. Contudo, pouco há descrito sobre seus efeitos quando aplicado previamente a uma lesão, associado ou não a um tratamento pós-lesão. O objetivo geral do presente estudo foi avaliar o efeito do LBP aplicado previamente à lesão muscular associado ou não a aplicação pós-lesão sobre o processo de reparo musculo esquelético de rato. O objetivo do artigo 1 foi avaliar o efeito do LBP infravermelho aplicado previamente à criolesão sobre a expressão de IL-6, MyoD e miogenina. O objetivo do artigo 2 foi avaliar o efeito do LBP vermelho e infravermelho previamente a criolesão associado ou não a aplicação pós-lesão sobre o estresse oxidativo. O objetivo do artigo 3 foi avaliar o efeito do LBP infravermelho aplicado previamente à criolesão associado ou não a aplicação pós-lesão sobre a expressão gênica e síntese proteica das citocinas inflamatórias TNF-α e IL-6, e morfologia muscular. Para a realização dos três estudos, foram utilizados 205 ratos Wistar, divididos nos seguintes grupos experimentais: Controle; Somente lesão; LBP 660 nm previamente à lesão; LBP 780 nm previamente à lesão; LBP 660 nm pré e pós-lesão; e LBP 780 nm pré e pós-lesão. A criolesão consistiu de duas aplicações de bastão resfriado em nitrogênio líquido no músculo tibial anterior (TA). Os grupos lesionados foram avaliados em 1, 3, 7 e 14 dias após a lesão (somente para análise de estresse oxidativo, a avaliação ocorreu em 1, 3, e 7 dias). A irradiação com LBP foi realizada com o laser AsGaAl (780 nm) nos parâmetros de 10 J/cm²; 40 mW; 10 segundos por ponto; 8 pontos; 3.2 J. Ao término do protocolo, os músculos TA foram retirados cuidadosamente para análise de estresse oxidativo pela lipoperoxidação (LPO) por quimiluminescência iniciada por t-BOOH, pela oxidação proteica através do ensaio de dano as carbonilas, e pela análise das enzimas antioxidantes: catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx). Também foram analisadas as citocinas TNF-α e IL-6 por PCR em tempo real quantitativo para detecção da expressão gênica. Além disso, foi realizada análise morfológica por coloração com hematoxilina e eosina. As citocinas TNF-α e IL-6 também foram analisadas por ELISA para detecção da expressão proteica. Os dados foram expressos em média e erro-padrão da média por se apresentarem paramétricos e a comparação entre os grupos foi realizada pelo ANOVA/ Tukey (p<0,05). Os resultados do artigo 1 demonstram redução nos níveis de mRNA IL-6 no grupo irradiado previamente à lesão, concluindo que o LBP aplicado previamente à lesão foi capaz de modular positivamente essa citocina inflamatória, mas não teve efeito sobre os fatores regulatórios miogênicos MyoD e miogenina nos parâmetros avaliados. Os resultados do artigo 2 contendo a análise de estresse oxidativo demonstram que os grupos irradiados apresentaram redução da lipoperoxidação e modulação positiva das enzimas antioxidantes durante o processo de reparo muscular, concluindo que tanto o laser vermelho como infravermelho foram capazes de modular positivamente o estresse oxidativo sendo o laser infravermelho mais eficaz na modulação de enzimas antioxidantes. Os resultados do artigo 3 demonstram uma redução na expressão gênica de TNF-α no grupo irradiado previamente a lesão. Já no grupo irradiado pré e pós-lesão, houve aumento dos níveis de mRNA IL-6 e TNF-α durante o processo de reparo musculo esquelético, concluindo que o laser infravermelho foi capaz de modular de forma positiva essas citocinas inflamatórias nas duas formas de aplicação. Portanto, conclui-se de forma geral que o LBP utilizado previamente à lesão associado ou não a aplicação pós-lesão tem efeito benéfico sobre a modulação de citocinas inflamatórias e do estresse oxidativo durante o reparo do músculo esquelético de ratos.

Membranas celulares (MCs; Cell Sheets), constituídas por células-tronco (CTs), são autodestacáveis da placa de cultivo, e sem subcultivos geram grande quantidade de células que podem ser transplantadas de maneira mais próxima da fisiologia celular, mantendo-se as ligações celulares e a matriz extracelular produzidas em cultura. O ácido ascórbico ou vitamina C (VC) tem efeito indutor da formação destas MCs, aumentando a longevidade e tempo de indiferenciação das CTs. A similaridade observada entre respostas biológicas da VC em MCs e aquelas da Laserfototerapia (LFT) sobre células e tecidos, nos levou à hipótese de que estas terapias poderiam se complementar melhorando o prognóstico de futura aplicação clínica dessas MCs em regenerações de tecidos de interesse odontológico. Para testar essa hipótese, LFT e VC foram aplicadas associadas ou não na indução de MCs de células-tronco da polpa dentária humana (hDPSCs). Para tanto, hDPSCs descongeladas, que expressaram níveis típicos de marcadores de superfície de células-tronco mesenquimais, foram plaqueadas em placas de 6 poços (5x104 células por poço). Vinte e quatro horas depois do plaqueamento as culturas foram submetidas aos tratamentos dos grupos experimentais: Controle: hDPSCs em P3 cultivadas com meio clonogênico; Senescente: hDPSCs em P27 cultivadas com meio clonogênico; VC: P3 cultivadas com meio clonogênico acrescido de VC (20 ?g/ml); Laser: P3 cultivadas com meio clonogênico e submetido à LFT (contato e pontual - 5 pontos / poço, 660 nm, 20 mW, 0,028 cm², 0,71 W/cm², 7 segundos, 5 J/cm², 0,14 J por ponto, 48 horas de intervalo) e Laser+VC: P3 cultivadas com meio clonogênico acrescido de VC e submetido à LFT. Em 24 horas, 7 e 13 dias as hDPSCs dos diferentes grupos experimentais foram observadas macro e microscopicamente, e atividade da enzima telomerase foi avaliada por PCR-TRAP, complementado por ELISA. Para a avaliação da expressão de genes relacionados à natureza e indiferenciação (Mitofilina e Oct 4) e à longevidade (fase catalítica da enzima telomerase - hTERT); bem como à senescência das células do grupo senescente (?-galactosidase), as hDPSCs de todos os grupos experimentais foram submetidas ao RT-qPCR As hDPSCs foram capazes de formar MCs somente nos grupos VC e Laser+VC (100%), entre 10 e 13 dias. As MCs do grupo Laser+VC apresentaram maior facilidade na manipulação. Atividade de Telomerase nas hDPSCs foi observada somente em 24 horas (Controle e LFT) e em 7 dias (VC e Laser+VC). Os marcadores de indiferenciação (Oct 4) e mesenquimal (mitofilina), bem como a hTERT foram expressos nas hDPSCs de todos os grupos experimentais. O Oct4 e o hTERT, em 7 dias, apresentaram expressões significativamente maiores nos grupos VC e Laser+VC em comparação com os demais (p < 0,0001, p = 0,0009, respectivamente). A expressão da mitofilina foi significativamente maior no grupo Laser+VC, em 7 dias (p =0,033). A técnica de obtenção de MCs de hDPSCs por essa metodologia foi considerada adequada para ser testada em procedimentos regenerativos. A LFT quando associada à VC não interferiu na formação das MCs, nem na manutenção da longevidade e indiferenciação das hDPSCs. Adicionalmente, a LFT melhorou a manipulação das MCs. Assim sendo, a associação de VC e LFT na indução de MCs parece promissora para futura utilização de MCs na odontologia regenerativa. / Cell Sheets, consisting of stem cells (SCs) are self detachable from the cultivation plate, and with no subcultivation can generate large amount of cells. The cell sheets can be transplanted closer to cell physiology environment by keeping the cell connections and the extracellular matrix produced in culture. Ascorbic acid or Vitamin C (VC) has inductive effect on cell sheet formation, increasing the longevity and the stemness of the cell for long period of time. The similarity between biological responses of VC in cell sheets and those of Laserphototherapy (LPT, Laser) on cells and tissues led us to hypothesize that these therapies could improve the prognosis of future clinical application of these cell sheets in regeneration of dental tissues. To test this hypothesis, LPT and VC were applied, associated or not, to induce human dental pulp stem cells (hDPSCs). Therefore, hDPSCs, which expressed typical levels of mesenchymal stem cell surface markers, were plated in 6-well plates (5x104 cells per well). Twenty-four hours later they were subjected to the treatment of experimental groups: Control: hDPSCs in P3 cultured with regular medium; Senescent: hDPSCs in P27 cultured with regular medium; VC: P3 cultured with regular medium supplemented with VC (20 ?g/ml); Laser: P3 cultures with regular medium and submitted to LPT (punctual and contact mode-5 points / well, 660 nm, 20 mW, 0.028 cm², 0.71 W/cm², 7 sec, 5 J/cm², 0.14 J per point, 48 hours-intervals) and Laser+VC: P3 cultured with regular medium supplemented with VC and submitted to LPT Within 24 hours, 7 and 13 days the hDPSCs of the different experimental groups were observed macroscopically and microscopically, and the telomerase enzyme activity was assessed by PCR-TRAP, complemented by ELISA. To evaluate the expression of genes related to the nature and differentiation (Mitofilina and Oct 4), longevity (catalytic phase of telomerase-hTERT enzyme), and the senescence of the senescent group cells (?-galactosidase), the hDPSCs of all experimental groups were subjected to RT-qPCR. The RT-qPCR data were compared by ANOVA complemented by the Tukey\'s test (p <= 0.05). The hDPSCs were able to form cell sheets only in the VC and Laser+VC groups (100%). Additionally, the cell sheets of the Laser+VC group presented easier handling. Telomerase activity in hDPSCs was observed only in 24 hours (Control and Laser) and seven days (VC and Laser + VC). The undifferentiating marker (Oct 4) and mesenchymal marker (mitofilin), as well as hTERT were expressed in hDPSCs of all experimental groups. Oct4 and hTERT presented expressions significantly higher at 7 days in VC and Laser+VC groups than in all other groups (p < 0.0001, p = 0.0009, respectively). The expression of mitofilin was significantly higher in the Laser+VC group, in 7 days (p = 0.0338). The technique of obtaining cell sheets of hDPSCs by the methodology here presented was considered appropriate to be further tested in regenerative procedures. The LPT when combined with VC did not interfere with the formation of the cell sheets, neither in the maintenance of longevity and undifferentiating status of hDPSCs. Moreover, LPT improved the handling of the cell sheets. Thus, the association of VC and LPT in the induction of cell sheets seems promising for future use in regenerative dentistry.

Este estudo teve por finalidade estudar os efeitos da fototerapia com laser em baixa intensidade (Low Level Laser Therapy LLLT) sobre a inflamação e reparação após lesão criogênica realizada no sitema nervoso central (SNC) de ratos. Foram realizados 3 experimentos. Em todos os experimentos foi utilizado um modelo de deformação cortical direta induzida por lesão criogênica. A LLLT foi realizada com laser de diodo em baixa intensidade emitindo no vermelho visível (InGaAlP, 660 nm) ou no infravermelho (AlGaAr, 780 nm). Os parâmetros de irradiação foram: potência de 40 mW, área do feixe de 0,04 cm2, densidades de energia de 3 J/cm2 (3 s) ou 5 J/cm2 (5 s) determinando energias por ponto de 0,12 J e 0,20 J, respectivamente. Foram realizadas 2 irradiações com intervalo de 3 h, no modo contato e em 2 pontos por lesão. No experimento 1, 50 ratos da linhagem Wistar foram utilizados para determinar os parâmetros de LLLT capazes de influenciar na dinâmica da produção de citocinas proinflamatórias (TNF-a, IL-1b, IL-6) e antiinflamatória (IL-10). As citocinas foram mensuradas pelo teste ELISA no cérebro e no sangue dos animais, 6 e 24h após a lesão. Os grupos experimentais foram: controle (não irradiado) e 4 grupos irradiados com 3 J/cm2 ou 5 J/cm2 para cada comprimento de onda (n=10 por grupo). Para os experimentos 2 e 3 foram utilizados 40 ratos (20 não irradiados controles e 20 irradiados). A LLLT foi realizada somente com o parâmetro de irradiação do laser no infravermelho e a densidade de energia de 3 J/cm2. Nestes experimentos o processo de reparação das lesões criogênicas no SNC foi acompanhado em 6 h, 1, 7 e 14 dias após a última irradiação (n=5 por grupo por tempo experimental). No experimento 2 foi realizada a análise morfométrica da região lesionada do SNC. No experimento 3 foi analisada a distribuição das células inflamatórias (linfócitos T, leucócitos e macrófagos). Os dados de cada experimento foram comparados estatísticamente por análise de variância (ANOVA) ou Kruskal-Wallis seguido dos testes de Tukey ou de Dunn, respectivamente (F=5%). O trauma criogênico foi capaz de criar lesões focais no córtex representadas por necrose, edema, hemorragia e infiltrado inflamatório. Os achados mais marcantes foram: no experimento 1 com a irradiação do laser no infravermelho e 3 J/ cm2, o TNF- a e a IL-6 se mantiveram nos mesmos níveis em 6 e 24 h, enquanto no controle houve aumento significativo. Experimento 2: as lesões não tratadas apresentaram maior perda tecidual em 6 h que as irradiadas. Experimento 3: as lesões irradiadas apresentaram menor quantidade de leucócitos e linfócitos T nas primeiras 24 h do que nas lesões controle. A quantidade de macrófagos foi similar nos dois grupos. Conclusões: Levando em consideração as condições experimentais deste estudo concluiu-se que LLLT exerce efeitos nos processos de inflamação e reparação diminuindo a concentração de citocinas próinflamatórias (TNF-F e IL-6) no sangue e mantendo a de IL-1I no cérebro. Adicionalmente, diminui a perda tecidual inicial pós- lesão criogênica e a infiltração inicial de leucócitos e linfócitos T. / This study aimed to study the effects of phototherapy with low-intensity laser (Low Level Laser Therapy - LLLT) on inflammation and repair after cryogenic injury held in central nervous system (CNS) of rats. There were 3 experiments. In all experiments a model of deformation induced by direct cortical cryogenic injury was used. The LLLT was carried out with a low intensity diode laser emitting in the visible red (InGaAlP, 660 nm) or infrared (AlGaAs, 780 nm). The irradiation parameters were: power of 40 mW, beam area of 0.04 cm2, energy densities of 3 J/cm2 (3 s) or 5 J/cm2 (5 s) providing energy per point of 0.12 J and 0.20 J, respectively. Two irradiations were performed at 3 h-intervals, in contact mode and in 2 points for lesion. In experiment 1, 50 Wistar rats were used to determine the parameters of LLLT able to influence the dynamics of production proinflammatory cytokines (TNF-, IL-1 and IL-6) and antiinflammatory cytokine (IL- 10). Cytokines were measured by ELISA in the brain and blood of animals, 6 and 24 hours after injury. The experimental groups were: control (non-irradiated) and 4 irradiated groups [3 J/cm2 and 5 J/cm2 for each wavelength (n = 10 per group)]. For experiments 2 and 3 40 rats (20 non-irradiated - controls and 20 irradiated).were used. The LLLT was performed only with the parameter of laser irradiation on the infrared and the energy density of 3 J/cm2. In these experiments, the process of repair of cryogenic injury in the CNS was followed in 6 h, 1, 7 and 14 days after the last irradiation (n = 5 per group and time trial). In experiment 2 a morphometric analysis of the injured area of the CNS was done. In experiment 3 the distribution of inflammatory cells (lymphocytes, leukocytes and macrophages) was analyzed. Data from each experiment were compared statistically by analysis of variance (ANOVA) or Kruskal-Wallis followed by tests of Tukey or Dunn, respectively ( = 5%). Cryogenic trauma was able to create focal lesions in the cortex represented by necrosis, edema, hemorrhage and inflammatory infiltrate. The most striking findings were: in experiment 1 with the laser irradiation in the infrared and 3 J/cm 2, TNF- and IL-6 remained at the same levels at 6 and 24 h, while in the control there was a significant increase. Experiment 2: untreated lesions showed greater tissue loss than irradiated lesions in 6 h. Experiment 3: lesions irradiated had fewer leukocytes and lymphocytes in the first 24 h than control lesions. The amount of macrophages was similar in both groups. Conclusions: Considering the experimental conditions of this study it was concluded that LLLT has effects in the processes of inflammation and repair by decreasing the concentration of proinflammatory cytokines (TNF- and IL-6) in blood and holding the IL-1 in the brain. Additionally, decreases the initial tissue loss after cryogenic injury and the initial infiltration of leukocytes and lymphocytes T.

Este estudo teve por finalidade estudar os efeitos da fototerapia com laser em baixa intensidade (Low Level Laser Therapy LLLT) sobre a inflamação e reparação após lesão criogênica realizada no sitema nervoso central (SNC) de ratos. Foram realizados 3 experimentos. Em todos os experimentos foi utilizado um modelo de deformação cortical direta induzida por lesão criogênica. A LLLT foi realizada com laser de diodo em baixa intensidade emitindo no vermelho visível (InGaAlP, 660 nm) ou no infravermelho (AlGaAr, 780 nm). Os parâmetros de irradiação foram: potência de 40 mW, área do feixe de 0,04 cm2, densidades de energia de 3 J/cm2 (3 s) ou 5 J/cm2 (5 s) determinando energias por ponto de 0,12 J e 0,20 J, respectivamente. Foram realizadas 2 irradiações com intervalo de 3 h, no modo contato e em 2 pontos por lesão. No experimento 1, 50 ratos da linhagem Wistar foram utilizados para determinar os parâmetros de LLLT capazes de influenciar na dinâmica da produção de citocinas proinflamatórias (TNF-a, IL-1b, IL-6) e antiinflamatória (IL-10). As citocinas foram mensuradas pelo teste ELISA no cérebro e no sangue dos animais, 6 e 24h após a lesão. Os grupos experimentais foram: controle (não irradiado) e 4 grupos irradiados com 3 J/cm2 ou 5 J/cm2 para cada comprimento de onda (n=10 por grupo). Para os experimentos 2 e 3 foram utilizados 40 ratos (20 não irradiados controles e 20 irradiados). A LLLT foi realizada somente com o parâmetro de irradiação do laser no infravermelho e a densidade de energia de 3 J/cm2. Nestes experimentos o processo de reparação das lesões criogênicas no SNC foi acompanhado em 6 h, 1, 7 e 14 dias após a última irradiação (n=5 por grupo por tempo experimental). No experimento 2 foi realizada a análise morfométrica da região lesionada do SNC. No experimento 3 foi analisada a distribuição das células inflamatórias (linfócitos T, leucócitos e macrófagos). Os dados de cada experimento foram comparados estatísticamente por análise de variância (ANOVA) ou Kruskal-Wallis seguido dos testes de Tukey ou de Dunn, respectivamente (F=5%). O trauma criogênico foi capaz de criar lesões focais no córtex representadas por necrose, edema, hemorragia e infiltrado inflamatório. Os achados mais marcantes foram: no experimento 1 com a irradiação do laser no infravermelho e 3 J/ cm2, o TNF- a e a IL-6 se mantiveram nos mesmos níveis em 6 e 24 h, enquanto no controle houve aumento significativo. Experimento 2: as lesões não tratadas apresentaram maior perda tecidual em 6 h que as irradiadas. Experimento 3: as lesões irradiadas apresentaram menor quantidade de leucócitos e linfócitos T nas primeiras 24 h do que nas lesões controle. A quantidade de macrófagos foi similar nos dois grupos. Conclusões: Levando em consideração as condições experimentais deste estudo concluiu-se que LLLT exerce efeitos nos processos de inflamação e reparação diminuindo a concentração de citocinas próinflamatórias (TNF-F e IL-6) no sangue e mantendo a de IL-1I no cérebro. Adicionalmente, diminui a perda tecidual inicial pós- lesão criogênica e a infiltração inicial de leucócitos e linfócitos T. / This study aimed to study the effects of phototherapy with low-intensity laser (Low Level Laser Therapy - LLLT) on inflammation and repair after cryogenic injury held in central nervous system (CNS) of rats. There were 3 experiments. In all experiments a model of deformation induced by direct cortical cryogenic injury was used. The LLLT was carried out with a low intensity diode laser emitting in the visible red (InGaAlP, 660 nm) or infrared (AlGaAs, 780 nm). The irradiation parameters were: power of 40 mW, beam area of 0.04 cm2, energy densities of 3 J/cm2 (3 s) or 5 J/cm2 (5 s) providing energy per point of 0.12 J and 0.20 J, respectively. Two irradiations were performed at 3 h-intervals, in contact mode and in 2 points for lesion. In experiment 1, 50 Wistar rats were used to determine the parameters of LLLT able to influence the dynamics of production proinflammatory cytokines (TNF-, IL-1 and IL-6) and antiinflammatory cytokine (IL- 10). Cytokines were measured by ELISA in the brain and blood of animals, 6 and 24 hours after injury. The experimental groups were: control (non-irradiated) and 4 irradiated groups [3 J/cm2 and 5 J/cm2 for each wavelength (n = 10 per group)]. For experiments 2 and 3 40 rats (20 non-irradiated - controls and 20 irradiated).were used. The LLLT was performed only with the parameter of laser irradiation on the infrared and the energy density of 3 J/cm2. In these experiments, the process of repair of cryogenic injury in the CNS was followed in 6 h, 1, 7 and 14 days after the last irradiation (n = 5 per group and time trial). In experiment 2 a morphometric analysis of the injured area of the CNS was done. In experiment 3 the distribution of inflammatory cells (lymphocytes, leukocytes and macrophages) was analyzed. Data from each experiment were compared statistically by analysis of variance (ANOVA) or Kruskal-Wallis followed by tests of Tukey or Dunn, respectively ( = 5%). Cryogenic trauma was able to create focal lesions in the cortex represented by necrosis, edema, hemorrhage and inflammatory infiltrate. The most striking findings were: in experiment 1 with the laser irradiation in the infrared and 3 J/cm 2, TNF- and IL-6 remained at the same levels at 6 and 24 h, while in the control there was a significant increase. Experiment 2: untreated lesions showed greater tissue loss than irradiated lesions in 6 h. Experiment 3: lesions irradiated had fewer leukocytes and lymphocytes in the first 24 h than control lesions. The amount of macrophages was similar in both groups. Conclusions: Considering the experimental conditions of this study it was concluded that LLLT has effects in the processes of inflammation and repair by decreasing the concentration of proinflammatory cytokines (TNF- and IL-6) in blood and holding the IL-1 in the brain. Additionally, decreases the initial tissue loss after cryogenic injury and the initial infiltration of leukocytes and lymphocytes T.

Membranas celulares (MCs; Cell Sheets), constituídas por células-tronco (CTs), são autodestacáveis da placa de cultivo, e sem subcultivos geram grande quantidade de células que podem ser transplantadas de maneira mais próxima da fisiologia celular, mantendo-se as ligações celulares e a matriz extracelular produzidas em cultura. O ácido ascórbico ou vitamina C (VC) tem efeito indutor da formação destas MCs, aumentando a longevidade e tempo de indiferenciação das CTs. A similaridade observada entre respostas biológicas da VC em MCs e aquelas da Laserfototerapia (LFT) sobre células e tecidos, nos levou à hipótese de que estas terapias poderiam se complementar melhorando o prognóstico de futura aplicação clínica dessas MCs em regenerações de tecidos de interesse odontológico. Para testar essa hipótese, LFT e VC foram aplicadas associadas ou não na indução de MCs de células-tronco da polpa dentária humana (hDPSCs). Para tanto, hDPSCs descongeladas, que expressaram níveis típicos de marcadores de superfície de células-tronco mesenquimais, foram plaqueadas em placas de 6 poços (5x104 células por poço). Vinte e quatro horas depois do plaqueamento as culturas foram submetidas aos tratamentos dos grupos experimentais: Controle: hDPSCs em P3 cultivadas com meio clonogênico; Senescente: hDPSCs em P27 cultivadas com meio clonogênico; VC: P3 cultivadas com meio clonogênico acrescido de VC (20 ?g/ml); Laser: P3 cultivadas com meio clonogênico e submetido à LFT (contato e pontual - 5 pontos / poço, 660 nm, 20 mW, 0,028 cm², 0,71 W/cm², 7 segundos, 5 J/cm², 0,14 J por ponto, 48 horas de intervalo) e Laser+VC: P3 cultivadas com meio clonogênico acrescido de VC e submetido à LFT. Em 24 horas, 7 e 13 dias as hDPSCs dos diferentes grupos experimentais foram observadas macro e microscopicamente, e atividade da enzima telomerase foi avaliada por PCR-TRAP, complementado por ELISA. Para a avaliação da expressão de genes relacionados à natureza e indiferenciação (Mitofilina e Oct 4) e à longevidade (fase catalítica da enzima telomerase - hTERT); bem como à senescência das células do grupo senescente (?-galactosidase), as hDPSCs de todos os grupos experimentais foram submetidas ao RT-qPCR As hDPSCs foram capazes de formar MCs somente nos grupos VC e Laser+VC (100%), entre 10 e 13 dias. As MCs do grupo Laser+VC apresentaram maior facilidade na manipulação. Atividade de Telomerase nas hDPSCs foi observada somente em 24 horas (Controle e LFT) e em 7 dias (VC e Laser+VC). Os marcadores de indiferenciação (Oct 4) e mesenquimal (mitofilina), bem como a hTERT foram expressos nas hDPSCs de todos os grupos experimentais. O Oct4 e o hTERT, em 7 dias, apresentaram expressões significativamente maiores nos grupos VC e Laser+VC em comparação com os demais (p < 0,0001, p = 0,0009, respectivamente). A expressão da mitofilina foi significativamente maior no grupo Laser+VC, em 7 dias (p =0,033). A técnica de obtenção de MCs de hDPSCs por essa metodologia foi considerada adequada para ser testada em procedimentos regenerativos. A LFT quando associada à VC não interferiu na formação das MCs, nem na manutenção da longevidade e indiferenciação das hDPSCs. Adicionalmente, a LFT melhorou a manipulação das MCs. Assim sendo, a associação de VC e LFT na indução de MCs parece promissora para futura utilização de MCs na odontologia regenerativa. / Cell Sheets, consisting of stem cells (SCs) are self detachable from the cultivation plate, and with no subcultivation can generate large amount of cells. The cell sheets can be transplanted closer to cell physiology environment by keeping the cell connections and the extracellular matrix produced in culture. Ascorbic acid or Vitamin C (VC) has inductive effect on cell sheet formation, increasing the longevity and the stemness of the cell for long period of time. The similarity between biological responses of VC in cell sheets and those of Laserphototherapy (LPT, Laser) on cells and tissues led us to hypothesize that these therapies could improve the prognosis of future clinical application of these cell sheets in regeneration of dental tissues. To test this hypothesis, LPT and VC were applied, associated or not, to induce human dental pulp stem cells (hDPSCs). Therefore, hDPSCs, which expressed typical levels of mesenchymal stem cell surface markers, were plated in 6-well plates (5x104 cells per well). Twenty-four hours later they were subjected to the treatment of experimental groups: Control: hDPSCs in P3 cultured with regular medium; Senescent: hDPSCs in P27 cultured with regular medium; VC: P3 cultured with regular medium supplemented with VC (20 ?g/ml); Laser: P3 cultures with regular medium and submitted to LPT (punctual and contact mode-5 points / well, 660 nm, 20 mW, 0.028 cm², 0.71 W/cm², 7 sec, 5 J/cm², 0.14 J per point, 48 hours-intervals) and Laser+VC: P3 cultured with regular medium supplemented with VC and submitted to LPT Within 24 hours, 7 and 13 days the hDPSCs of the different experimental groups were observed macroscopically and microscopically, and the telomerase enzyme activity was assessed by PCR-TRAP, complemented by ELISA. To evaluate the expression of genes related to the nature and differentiation (Mitofilina and Oct 4), longevity (catalytic phase of telomerase-hTERT enzyme), and the senescence of the senescent group cells (?-galactosidase), the hDPSCs of all experimental groups were subjected to RT-qPCR. The RT-qPCR data were compared by ANOVA complemented by the Tukey\'s test (p <= 0.05). The hDPSCs were able to form cell sheets only in the VC and Laser+VC groups (100%). Additionally, the cell sheets of the Laser+VC group presented easier handling. Telomerase activity in hDPSCs was observed only in 24 hours (Control and Laser) and seven days (VC and Laser + VC). The undifferentiating marker (Oct 4) and mesenchymal marker (mitofilin), as well as hTERT were expressed in hDPSCs of all experimental groups. Oct4 and hTERT presented expressions significantly higher at 7 days in VC and Laser+VC groups than in all other groups (p < 0.0001, p = 0.0009, respectively). The expression of mitofilin was significantly higher in the Laser+VC group, in 7 days (p = 0.0338). The technique of obtaining cell sheets of hDPSCs by the methodology here presented was considered appropriate to be further tested in regenerative procedures. The LPT when combined with VC did not interfere with the formation of the cell sheets, neither in the maintenance of longevity and undifferentiating status of hDPSCs. Moreover, LPT improved the handling of the cell sheets. Thus, the association of VC and LPT in the induction of cell sheets seems promising for future use in regenerative dentistry.