Orientadores: Sergio Marangoni, Maria Ligoa Rodrigues Macedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:08:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pando_SilvanaCristina_D.pdf: 10029993 bytes, checksum: ad9db9a8d51acb16d319ba5e9f510538 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Os objetivos deste trabalho foram purificar e caracterizar bioquimicamente uma lectina e determinar a estrutura primária de um inibidor de serinoproteinases tipo Kunitz de sementes da espécie D. regia (Leguminosae-Caesalpinioideae) e também verificar o efeito in vitro do inibidor sobre a atividade das enzimas digestivas dos insetos lepidópteros A. kuehniella e C. cephalonica. Para a purificação da lectina e do inibidor de serinoproteinases, as sementes foram trituradas e a farinha foi submetida a uma extração salina 10%. Após centrifugação, o sobrenadante (extrato total) foi dialisado, liofilizado e aplicado em colunas de exclusão molecular, troca iônica e coluna de fase reversa C18 em sistema de HPLC. As frações eluídas foram monitoradas a 280 nm de absorbância. A lectina e o inibidor purificados foram designados como DRL (Delonix regia lectin) e DrTI (Delonix regia trypsin inhibitor), respectivamente. Após a identificação e purificação, a lectina foi analisada em SDS-PAGE 12,5%, revelando que esta proteína tem massa molecular aparente de 12 kDa sob condições redutoras (DTT 0,1 M) e não redutoras. O gel nativo revelou que DRL é uma proteína constituída por apenas uma cadeia polipeptídica. Os testes de inibição da atividade hemaglutinante foram realizados com eritrócitos de ratos, utilizando-se os seguintes açúcares: D-glicose, D-glicosamina, D-frutose, D-manose, D-sacarose, D-galactose, D-galactosamina, D-rafinose, Dlactose e D-maltose e verificamos que a atividade hemaglutinante de DRL foi inibida mais especificamente por glicose a uma concentração de 0,048 mM, indicando que esta lectina pertence ao grupo glicose-manose. A composição de aminoácidos da lectina mostrou alto conteúdo de ácido aspártico, ácido glutâmico e glicina, mas nenhum resíduo de cisteína foi observado. A determinação da região N-terminal da lectina revelou alta homologia com outras lectinas de leguminosas tais como, con A, lentilha e ervilha. A faixa de pH para a atividade da lectina foi de 8-9 com perda total da sua atividade em faixa de pH ácido (2-4). Além disso, a lectina manteve sua atividade após tratamento térmico a 70°C, durante 30 minutos, com perda de 50% de sua atividade a 100°C. DRL não necessitou de cálcio para sua atividade, mas é dependente de manganês, sugerindo que DRL é uma metaloproteína. O tratamento de DRL com uréia resultou em perda total da AHE, enquanto que na presença do DTT, a lectina manteve sua atividade normal provavelmente devido à ausência de pontes dissulfeto na molécula. A determinação da estrutura primária do DrTI, comprovou que este inibidor pertence à família Kunitz de inibidores de proteinases. A região do sítio reativo possui um resíduo de ácido glutâmico ao invés de arginina ou lisina, mas a molécula apresentou dois "Ioops" compostos por quatro resíduos de cisteína com alta similaridade com outros inibidores tipo Kunitz. Os estudos de inibição in vitro mostraram que, numa concentração de apenas 5J.lg, o DrTI inibiu cerca de 92% da atividade das proteases dos insetos A. kuehniella e C. cepha/onica, indicando alta afinidade do inibidor por estas enzimas. A digestibilidade in vitro do DrTI pelas proteases dos insetos foi analisada em SDS-PAGE 12,5% e revelou que o inibidor foi resistente à proteólise após 72h. Entretanto, a incubação do DrTI com a tripsina bovina resultou em clivagem nos primeiros 30 minutos de reação. A atividade residual máxima do inibidor, após estes ensaios de digestibilidade pelas proteases de A. kuehniella, C. cephalonica e tripsina bovina foi de 69,5%, 64,9% e 34,57%, respectivamente / Abstract: The aims of this work were to purify and to characterize biochemically a lectin and to determine the primary structure of a Kunitz-type serineproteinase inhibitor from seeds of Delonix regia specie (Leguminosae-Caesalpinioideae) and also to verify the in vitro effect of the inhibitor towards to digestive enzymes activities of the lepidoptera insects A. kuehniella and C. cephalonica. For lectin and serine proteinase inhibitor purification, the seeds were tritured and the flour was submitted to saline extraction 10%. After centrifugation , the supernatant (total extract) was dialised, Iyophylized and applied in molecular exclusion, ion exchange and reverse phase C18 HPLC columns. The eluted fractions were monitored by absorbance at 280 nm. The lectin and the inhibitor purified were designated DRL (Delonix regia lectin) and DrTI (Delonix regia trypsin inhibitor), respectively. After identification and purification, the lectin was analyzed in SDS-PAGE 12.5%, showing that this protein has an apparent molecular mass of 12 kDa under reduced (DTT 0.1 M) and non reduced conditions. Analysis of native gel revealed that DRL is a protein constituted by only one polypeptide chain. The inhibition tests of hemagglutinating activity were realized with rat erytrocytes, using the following sugars: D-glucose, D-glucosamine, D-fructose, Dmannose, D-sucrose, D-galactose, D-galactosamine, D-raffinose, D-Iactose and Dmaltose and we verified that hemagglutinating activity of DRL was more specifically inhibited by glucose at 0.048 mM concentration, indicating this lectin belongs to the glucose-mannose group. The lectin aminoacid composition showed high content of aspartic acid, glutamic acid and glycine, but cysteine residue was not detected. The determination of the N-terminal region of the lectin revealed high homology with other leguminous lectins such as, con A, lentil and pea. The pH range for the lectin activity was 8-9 and DRL lost activity totally in range of acid pH (2-4). Furthermore, the lectin maintained activity after thermal treatment to 70°C, during 30 minutes, with lost of 50% in activity at 100°C. DRL does not require calcium for the activity but is manganese dependent, suggesting that DRL is a metalloprotein. The treatment of DRL with urea resulted in total lost of hemagglutinating activity, while in the presence of DTT, the lectin maintained normal activity probably due absence disulfide bridges in the molecule. The primary structure determination of DrTI, proved that this inhibitor belongs to the Kunitz family of proteinase inhibitors. The region of reactive site presented a glutamic acid residue instead of an arginine or Iysine, but the molecule presented two "loops", composed by four cysteine residues, with high similarity with other Kunitz type inhibitors. The in vitro inhibition studies with insect proteases from A. kuehniella and C. cephalonica showed at concentration of only 5mg, DrTI inhibited about of 92% of the proteases these insects, indicating high affinity of the inhibitor by these enzymes. In vitro digestibility of DrTI by insect proteases was analyzed in SDS-PAGE 12.5% and revealed that the inhibitor was resistant to the proteolysis after 72h. However, the incubation of DrTI with bovine trypsin resulted in cleavage in the first 30 minutes of reaction. The maximal residual activity of the inhibitor, after these digestibility assays by proteases from A. kuehniella, C. cephalonica and bovine trypsin was 69.5%, 64.9% and 34.57%, respectively / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Benedito Oliveira Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T00:30:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rego_EvandroJoseLima_D.pdf: 2631101 bytes, checksum: 36faf195b04a371b72d3cedc478ca815 (MD5) Previous issue date: 2000 / Doutorado

No description available.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-05-31T04:09:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339613.pdf: 3611153 bytes, checksum: 3f8c794d29b943c788477e63cfdb3f2e (MD5) Previous issue date: 2016 / Gliomas, tumores originados de células gliais (astrócitos, oligodendrócito ou epêndima), são os tumores cerebrais primários mais comuns. Lectinas são proteínas de reconhecimento e ligação específicos a carboidratos. O objetivo do presente trabalho foi analisar o possível efeito citotóxico das lectinas ConA, ConBr, ConM, CoxyL, ConGF, DSL (nativa e recombinante), DwL, DvioL, DmrL, DLL, DrfL e CTL, que são extraidas de plantas leguminosas, sobre células C6 de glioma de rato, um glioma com características astrocitárias. Após 24h de incubação com as respectivas lectinas e nas concentrações de 10, 30, 50 e 100µg/mL, foi observado que apenas a lectina CTL não provocou redução da viabilidade, avaliada através do teste de redução do MTT. Baseado na potência de ação citotóxica observada nesse screening as lectinas ConA, ConBr, DvioL e DSL recombinante foram escolhidas para realizar o mesmo teste do MTT, porém também nos tempos 1, 3, 6 e 12 horas, sendo então selecionadas as lectinas ConA e Dviol para investigação das possíveis vias de morte celular envolvidas. Dessa forma, através de ensaios de microscopia de fluorescência, citometria de fluxo e microscopia eletrônica conclui-se que o principal mecanismo responsável pelo efeito citotóxico de ConA e DvioL é a indução de morte celular autofágica, efeito obtido a partir das concentrações de 30µg/mL. Ao realizar ensaios com as lectinas desnaturadas, concluiu-se que o efeito biológico depende da estrutura terciária da lectina, porém, mais estudos sobre a importância do sítio de reconhecimento a carboidratos devem ser realizados, uma vez que os ensaios de bloqueio do sítio de ligação ao açúcar não mostraram claramente uma ação bloqueadora do efeito citotóxico de ConA e DvioL. Os resultados também mostraram que DvioL possui maior potência em relação a ConA na indução de morte autofágica. Este trabalho sugere DvioL com uma molécula com potencial para fututros estudos de terapia anti-tumoral.<br> / Abstract : Gliomas, tumors originating from glial cells (astrocytes, oligodendrocytes or ependymal) are the most common primary brain tumors. Lectins are proteins of specific recognition and binding to carbohydrates. The aim of this study was to analyze the possible cytotoxic effect of the lectins ConA, ConBr, ConM, CoxyL, ConGF, DSL (native and recombinant), DWL, DvioL, DmrL, DLL, DrfL and CTL, which are extracted from leguminous plants, on C6 rat glioma cells, which have astrocytes features. After 24 hours of incubation with the respective lectins and at concentrations of 10, 30, 50 and 100µg/mL, it was observed that only the CTL lectin did not cause reduction in viability as measured by MTT test. Based on the potency of cytotoxic activity observed in this screening, ConA, ConBr, DvioL and DSL recombinant lectins were chosen for the same MTT test after 1, 3, 6 and 12 hours incubation, and then ConA and Dviol lectins were selected for further investigation concerning the possible cell death pathways involved. Thus, by fluorescence microscopy, flow cytometry and electron microscopy assays, it was concluded that the main mechanism responsible for the cytotoxic effect of ConA and DvioL is the induction of autophagic cell death, the effect obtained from the concentration of 30µg/mL. When performing tests with denatured lectins, it was concluded that the biological effect depends on the tertiary structure of the lectin. However, further studies regarding the role of the carbohydrate recognition domain (CRD) deserve to be conducted, since the CRD blocking protocol did not completely abrogated the cytotoxic action of ConA and DvioL. The results also showed that DvioL have greater potency compared to the ConA to induce autophagic death. This study suggests DvioL as a potential molecule to undertake future studies for anti-tumor therapy.

Orientador : Maria Ligia Rodrigues Macedo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T21:47:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Damico_DanielaCarladaSilva_M.pdf: 6991056 bytes, checksum: 1b665aca158424a5ce67d7d78fdab540 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Neste trabalho, uma lectina presente em sementes de Koelreuteria paniculata (família: Sapindaceae), conhecida como "flor-da-china", foi isolada e purificada a partir de extração em tampão fosfato 0,1 M (pH 7,6), cromatografia de exclusão molecular (Sephadex G-100), cromatografia de afinidade (Sepharose-tripsina) e coluna de fase reversa C-18 Jl- ondapack (sistema HPLC). A pureza da lectina de K. paniculata (KpLec) foi verificada por eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de SDS, que revelou que esta lectina apresenta duas subunidades de massa molecular aparente de 22 e 44 kDa. Quando submetida ao tratamento com DTT, a lectina se encontra predominantemente em sua forma monomérica de 22 kDa. A massa molecular relativa estimada por gel filtração foi de 22 kDa. a extrato bruto de KpLec hemaglutinou todas as hemáceas humanas do sistema ABa e hemáceas de alguns animais como camundongo, rato, carneiro, boi e coelho. A atividade hemaglutinante de KPLEC mostrou ser estável a diferentes pHs e temperaturas. Dentre os carboidratos testados, a atividade hemaglutinante foi melhor inibida por N-acetil-glicosamina. a tratamento de KpLec com EDT A mostrou que esta lectina requer cátions divalentes para sua atividade hemaglutinante. A determinação da seqüência N-terminal de KpLec mostrou que ela apresenta homologia com outras lectinas de plantas, principalmente com a Urtica dióica aglutinina. A lectina não inibiu o crescimento dos fungos Fusarium oxysporum, Colletotrichum lindemuthianum e Saccharomyces cerevisiae e nem inibiu ou estimulou a agregação plaquetária. Entretanto, KpLec foi capaz de causar efeitos citotóxicos em células Vero (células de rim de macaco verde Africano) e apresentou atividade inseticida contra duas espécies de insetos, Callosobruchus maculatus (Coleoptera:Bruchidae) e Anagasta kuehniella (Lepidóptera:Pyralidae) / Abstract: A lectin from Koelreuteria paniculata (Sapindaceae) seeds, commonly known as "Goldenrain tree", was isolated and purified by 0,1 M phosphate buffer, pH 7,6, gel filtration chromatography (Sephadex G-100), affinity column (trypsin-sepharose) and reverse phase column C-18 _-Bondapack (HPLC system). K. paniculata lectin's was assayed by polyacrylamide gel electrophoresis yielding two bands of 22 e 44 kDa. In reduced conditions, one main polypeptide chain of 22 kDa was obtained. A molecular weight of 22 kDa was estimated by gel filtration on Superdex G-75 column (FPLC system). The crude extract of KpLec agglutinated all human (ABO) system and animal erythrocytes from mice, rats, sheep, cow and rabbit. The hemagglutination activity of Kplec showed stability to distincts pHs and temperatures. Of the various sugars tested, the lectin was best inhibited by N-acetil glucosamine. The treatment of KpLec with EDT A shows that this lectin need metal ions for its hemagglutination activity. Determination of the lectin N-terminal sequence showed that KpLec present homology with plant lectins, mainly with Urtica dioica agglutinin. The lectin did not inhibit the growth of the fungi Fusarium oxyporum, Colletotrichum inndemuthianum and Saccaromyces cerevisiae. KpLec didn't induce nor inhibited the platelet aggregation. However, KpLec showed citotoxical effects in Vero cells and presented insecticidal activity against two insects pests, Callosobruchus maculatus and Anagasta kuehniella / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-18T19:08:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Nataly Diniz de Lima Santos.pdf: 10292410 bytes, checksum: 26c8d3a16e9515dbf18fb5acfd5d739d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T19:08:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Nataly Diniz de Lima Santos.pdf: 10292410 bytes, checksum: 26c8d3a16e9515dbf18fb5acfd5d739d (MD5) Previous issue date: 2013-05-29 / FACEPE / O mosquito Aedes aegypti é o vetor de três arboviroses denominadas febre Chikungunya, febre amarela e dengue. Esta última é uma das doenças infecciosas mais importantes mudialmente e epidemias de dengue vêm ressurgindo em países tropicais e subtropicais. O controle do vetor é a melhor estratégia de combate à doença. Os inseticidas químicos atualmente utilizados são tóxicos para o meio ambiente e seu uso excessivo tem levado ao desenvolvimento de populações resistentes. Neste cenário, tem aumentado a busca por inseticidas naturais para controle de populações de A. aegypti. Lectinas, proteínas que reconhecem carboidratos, isoladas de plantas apresentam atividade inseticida. A lectina solúvel em água isolada de sementes de Moringa oleifera (WSMoL) promoveu mortalidade (CL50 de 0,197 mg/mL) contra larvas de A. aegypti no quarto estágio (L4) e extrato das sementes contendo WSMoL retardou o desenvolvimento larval. Uma vez conhecidos os efeitos deletérios de WSMoL sobre as larvas dessa espécie de mosquito, o presente trabalho investigou: 1) o efeito de WSMoL sobre a oviposição de fêmeas grávidas de A. aegypti em condições de laboratório e utilizando ovitrampas (armadilhas para captura de ovos) em ensaios de campo simulado; 2) a eficácia de WSMoL em aumentar a eficiência de armadilhas para captura de fêmeas (MosquiTRAPTM); 3) a atividade ovicida de WSMoL sobre ovos de A. aegypti frescos e estocados; 4) o envolvimento de sensores olfatórios das fêmeas na resposta de oviposição frente a WSMoL; 5) a influência de diferentes doses de radiação gama nos efeitos da lectina sobre larvas, ovos e oviposição. A lectina foi isolada através de protocolo previamente estabelecido. Ensaio de oviposição em laboratório foi realizado em gaiolas (33 x 21 x 30 cm) contendo um par de recipientes de vidro, sendo um deles preenchido com 50 mL do extrato de sementes, fração proteica 0-60% ou WSMoL isolada (concentração final: 0,1 mg/mL de proteínas) e o outro com 50 mL de água destilada (controle negativo). Cada recipiente continha uma peça de papel de filtro como suporte para oviposição. As fêmeas grávidas (25) foram liberadas no interior das gaiolas e após 16 h o número de ovos foi determinado. A eclodibilidade dos ovos depositados pelas fêmeas foi também avaliada. Para isso, 50 ovos foram selecionados e imersos na mesma solução em que foram depositados. Após 144 h, o número de larvas foi registrado. A resposta de oviposição das fêmeas grávidas em condições de campo simulado foi avaliada em uma área experimental localizada no campus da Universidade Federal de Minas Gerais contendo grandes gaiolas (2,5 x 2,5 x 2 m) em seu interior. Em cada gaiola foram colocadas duas ovitrampas contendo palhetas de madeira, uma preenchida com WSMoL (0,1 mg/mL) e outra com água de torneira (controle negativo). Em seguida, 40 fêmeas grávidas previamente selecionadas em laboratório foram liberadas no centro da gaiola. Após 2 h, as ovitrampas foram retiradas e o número de ovos determinado. Ensaios utilizando par de ovitrampas contendo infusão de Panicum maximum (um eficiente estimulante de oviposição) e água destilada foram realizados como controle positivo. Amostra da lectina foi avaliada quanto à presença de compostos voláteis por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS) e ensaio de olfatometria utilizando olfatômetro horizontal de dupla escolha foi realizado para investigar o envolvimento de sensores olfatórios na resposta das fêmeas frente a WSMoL. MosquiTRAP™ (versão 1.0) foi utilizada para avaliar a eficácia de WSMoL como um atraente para captura de fêmeas de A. aegypti em condições de campo simulado. As armadilhas foram preenchidas com WSMoL (teste), infusão de P. maximum (controle positivo) ou água de torneira (controle negativo). Quarenta fêmeas grávidas foram liberadas no centro de cada gaiola contendo um par de armadilhas. O número de fêmeas capturadas foi avaliado após 180 min. A capacidade do extrato de sementes, fração 0-60% e WSMoL em impedir a eclosão de ovos estocados de A. aegypti foi também avaliada. Por fim, foi determinado o efeito da irradiação gama de WSMoL, nas doses de 10 mGy e 10 Gy, sobre as atividades larvicida, ovicida e efeito na oviposição. As preparações brutas (extrato de sementes e fração proteica 0-60%) não afetaram a oviposição de A. aegypti. Diferentemente, WSMoL apresentou significante (p<0,05) efeito estimulante sobre a oviposição tanto em condições de laboratório (73 ± 2,1%) quanto em condições de campo simulado (65 ± 14%) utilizando ovitrampas. O efeito de WSMoL em condições de campo foi similar ao da infusão de P. maximum (67 ± 11 %). Nas ovitrampas contendo WSMoL, o número de ovos presentes na superfície do líquido foi maior que o de ovos depositados na palheta. A presença de compostos voláteis não foi detectada na solução de WSMoL e os resultados do ensaio de olfatometria revelaram que as fêmeas não foram atraídas por WSMoL através de resposta envolvendo sensores olfativos. A não-volatilidade de WSMoL, a presença da maioria dos ovos na superfície do líquido nas ovitrampas contendo WSMoL e os resultados do ensaio de olfatometria indicam que os mecanismos de percepção de WSMoL pelas fêmeas provavelmente envolvem sensores de contato (gustatórios). WSMoL não interferiu na eficiência da armadilha MosquiTRAPTM para captura de fêmeas grávidas, provavelmente devido ao fato de que nesse tipo de armadilha, as fêmeas não podem entrar em contato com a solução. Extrato de sementes, fração proteica 0-60% e WSMoL reduziram a eclosão dos ovos depositados no ensaio de oviposição em condições de laboratório. Extrato, fração e WSMoL também apresentaram atividade ovicida contra ovos estocados, sendo os valores de CE50 (concentração efetiva de proteínas necessária para reduzir em 50% o número de ovos eclodidos) de 0,28, 0,18 e 0,1 mg/mL de proteínas, respectivamente. Análise por microscopia óptica revelou que WSMoL interferiu no desenvolvimento do embrião em ovos frescos, bem como causou a morte dos embriões presentes nos ovos estocados. A irradiação de WSMoL na dose de 10 mGy potencializou as atividades hemaglutinante, larvicida e ovicida da lectina, enquanto o efeito estimulante de oviposição foi abolido. Em conclusão, o presente trabalho relata, pela primeira vez, os efeitos ovicida e estimulante de oviposição de uma lectina e demonstra a atuação de uma molécula fixa (não volátil) como uma pista química utilizada pelas fêmeas grávidas de A. aegypti para seleção do sítio de oviposição. As atividades estimulante de oviposição, ovicida e larvicida de WSMoL fazem desta lectina uma molécula com excelentes características para controle de A. aegypti. / The mosquito Aedes aegypti is the vector of three arboviruses named Chikungunya fever, yellow fever and dengue. This last is one of the most important infectious diseases worldwide and dengue epidemics are re-emerging in tropical and subtropical countries. The vector control is the best strategy to combat the disease. The chemical insectides currently used are toxic to environment and their excessive use has led to developing of resistant populations. In this scenario, the search for natural insecticides for A. aegypti control has increased. Lectins, carbohydrate-binding proteins, isolated from plants show insecticidal activity. The watersoluble lectin isolated from Moringa oleifera seeds (WSMoL) promoted mortality (LC50 of 0.197 mg/mL) of A. aegypti fourth-stage larvae (L4) and seed extract containing WSMoL delayed larval development. Once known the deleterious effects of WSMoL on larvae of this mosquito species, the present work investigated: 1) the effect of WSMoL on oviposition by A. aegypti gravid females under laboratory conditions and using ovitraps (traps to capture eggs) in assays under semi-field conditions; 2) the efficacy of WSMoL in enhance the efficiency of traps used to capture females (MosquiTRAPTM); 3) the ovicidal activity of WSMoL on fresh and stored A. aegypti eggs; 4) the involvement of female olfactory sensilla in the oviposition response toward WSMoL; 5) the influence of different doses of gamma radiation on the effects of lectin on larvae, eggs and oviposition. Oviposition assay in laboratory was performed in cages (33 x 21 x 30 cm) containing a pair of glass vessels; one filled with 50 mL of seed extract, 0-60% protein fraction or isolated WSMoL (final concentration: 0.1 mg/mL of protein) and the other with 50 mL of distilled water (negative control). Each vessel contained a piece of filter paper as support for oviposition. The gravid females (25) were released inside the cages and after 16 h the number of eggs was determined. The hatchability of the eggs laid by females was also evaluated. For this, 50 eggs were selected and imersed in the same solution at which they were laid. After 144 h, the number of larvae was recorded. The oviposition response by gravid females under semi-field conditions was evaluated in an experimental area located at the campus of the Universidade Federal de Minas Gerais containing wide cages (2.5 x 2.5 x 2 m) inside. In each cage, two ovitraps containing a wood paddle were placed and one was filled with WSMoL (0.1 mg/mL) and another with tap water (control). Next, 40 gravid females previously selected in laboratory were released in the center of the cage. After 2 h, the ovitraps were removed and the number of eggs was determined. Assays using a pair of ovitraps containing Panicum maximum infusion (an effective oviposition-stimulant) and tap water were performed as positive control. Lectin sample was evaluated for presence of volatile compounds by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS) and olfactometry assay using double-choice horizontal olfactometer was performed aiming to investigate the involvement of olfactory sensilla in the response of females toward WSMoL. The MosquiTRAP™ (Version 1.0) was used to evaluate the efficacy of WSMoL as an attractant for capturing A. aegypti females under semi-field conditions. The traps were filled with WSMoL (test), P. maximum infusion (positive control) or tap water (negative control). Forty gravid A. aegypti females were released in the center of each cage containing a pair of traps. The number of captured females was evaluated in the cages after 180 min. The ability of seed extract, 0-60% fraction and WSMoL to impair the hatching of stored A. aegypti eggs was also evaluated. Finally it was determined the effect of gamma irradiation of WSMoL, at doses of 10 mGy and 10 Gy, on the larvicidal and ovicidal activities as well as effect on oviposition. The crude preparations (seed extract and 0-60% fraction) did not affect the A. aegypti oviposition. Differently, WSMoL showed a significant (p<0.05) oviposition-stimulant effect both under laboratory conditions (73 ± 2.1 %) and in ovitraps at field-simulated conditions (65 ± 14 %). The effect at field conditions was similar to that of P. maximum infusion (67 ± 11 %). In ovitraps containing WSMoL, the number of eggs found at liquid suface was higher than that of eggs laid on the paddles. The presence of volatile compounds was not detected in WSMoL solution and the results from olfatometry assay revealed that the females were not attracted by WSMoL through response involving olfactory sensilla. The non-volatilty of WSMoL, the presence of eggs majority at the liquid surface in WSMoL ovitraps and the results from olfatometry assay indicated that the mechanisms of WSMoL perception by females probably involve contact (gustatory) sensilla. WSMoL did not interfere in the efficiency of MosquiTRAPTM in capture gravid females, probably due to the fact that in this type of trap the females cannot have contact with the solution. Seed extract, 0-60% protein fraction and WSMoL reduced the hatching of eggs laid in the oviposition assay under laboratory conditions. Extract, fraction and WSMoL also showed ovicidal activity against stored eggs, being the EC50 (effective protein concentration required to reduce the number of hatched eggs in 50%) values of 0.28, 0.18 and 0.1 mg/mL, respectively. Analysis by optical miscroscopy revealed that WSMoL interfered on embryo developmente in fresh eggs as well as caused the death of the embryos present in stored eggs. The irradiation of WSMoL at 10 mGy dose potencialized the hemagglutinating, larvicidal and ovicidal activities of the lectin while the oviposition-stimulant effect was abolished. In conclusion, the present work reports for the first time the ovicidal and oviposition-stimulant effects of a lectin and demonstrate the acting of a fix (non-volatile) molecule as a chemical cue used by A. aegypti gravid females for selection of the oviposition site. The ovipositionstimulant, ovicidal and larvicidal activities of WSMoL make this lectin a molecule with excellent characteristics for A. aegypti control.

Orientadores: João Santana da Silva, Antonio Campos Neto / Resumo: As duas lectinas presentes em sementes de A. intergrifolia foram obtidas por cromatografia de afinidade. Uma é a lectina não mitogênica Jacalina, ligante de D galactose; e a outra é a lectina mitogênica Artocarpina que possue especificidade para resíduos manosídeos. Essas duas lectinas foram utilizadas para se estudar o perfil de citocinas produzidas por células esplênicas murinas quando estimuladas por lectinas com distintas especificidade para carboidratos. Os resultados mostraram que a F. Arto é capaz de estimular a síntese de IL-2, IL-4, TNF e IFN-?. Esta lectina não foi no entanto capaz de induzir a síntese de TGF-ß. Em contraste a Jacalina induziu altos níveis de TGF-ß, baixos níveis de TNF mas não induziu a secreção de IL-2, IL-4 e IFN-?. As citocinas IL-3/GM-CSF e IL-6 foram estimuladas igualmente por ambas lectinas. Estes resultados sugerem por conseguinte que: as sínteses de TNF, IL-3/GM-CSF e IL-6 estão associadas aos resíduos glicídicos de D manose ou D-galactose; as sínteses de IL-2, IL-4, IFN-? estão associados ao resíduo de D-manose e a síntese de TGF- ß está associada ao resíduo de D-galactose / Abstract: In the present thesis we investigated the pattem of cytokine secretion by murine spleen cells after the stimulation with two lectins specific for distinct carbohydrates. The lectins Jacalin and Artocarpin, specific for D-galactose and D-mannose respectively were obtained from the seeds of Artocarpus integrifolia by affnity chromatography and were used in these studies. Both lectins bind to murine spleen cells but the fate of this binding is different. The binding to the D-mannose containing cell surface molecules caused the spleen cells to proliferate. In contrast the cell activation via D-galactose containing cell surface molecules did not induce the spleen cells to proliferate. Consistent with these results was the pattern of cytokine secreted by the spleen cells. Thus, the activation of the spleen cells with F. Artocarpin caused the secretion of IL 2, IL 4, IFN-? and TNF. However the binding of F.Artocarpin to the spleen cells did not induce the secretion of TGF-ß. In contrast the activation of the spleen cells via the D-galactose cell surface molecules, induced by Jacalin, resulted in large production of TGF-ß, little production of TNF and no secretion of IL 2, IL 4 and IFN-?. The secretion of IL3/GM-CSF and IL 6 was equally induced by the binding of the lectins to either D-mannose or D-galactose containing cell surface molecules / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biolgia / Made available in DSpace on 2018-07-19T01:42:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delgado_Maristela_M.pdf: 2676142 bytes, checksum: 8c382e538652cd9b31d0d9a814dc35b7 (MD5) Previous issue date: 1993 / Mestrado / Mestre em Imunologia

Orientador: Celso Paulino da Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-19T21:34:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moral_NilsonJose_M.pdf: 1599288 bytes, checksum: fa3c278a73cf06a6c0bba35d083871fe (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: A interaçao entre lectina de jaca e glicoproteinas que compoem a pelicula adquirida in vitro foi estudada através de ele troforese em acrilamida, dupla difusão em agarose e imunoeletrofo rese em agarose. Saliva humana inicial foi incubada com hidroxiapatita por duas horas à temperatura ambiente e sob agitação constante, sendo, em seguida, elulda primeiramente em tampão fosfato O,2M pH 6,8 e em seguida em tampão fosfato 1,OM pH 6,8. O sobrenadante e os eluatos foram analizados eletroforéticamente e testados em dupla difusao contra lectina de jaca e soro de cabra anti-IgA humana. Paralelamente a estes experimentos foi conduzida a imunoeletroforese das proteinas salivares contra lectina de jaca e soro anti-IgA humana. Os resultados mostraram que a IgA está presente na composição da pellcula adquirida in vitro e que a lectina de jaca reage com as glicoprote1nas sal ivares que possuem afinidade pela hidroxiapatita in vitro / Abstract: The interaction between lectin from jackfruit and glycoproteins that compose the acquired pellicle in vitro lllas studied by poliacrilamide gel electrophoresis, double-difusion in . agarose and immunoelectrophoresis. Human sa 1 i va was incubated with hydroxyapatite for 2 hours at room temperature under continous agitation and then eluted in O,2M phosphate buffer pH 6,8 and in the same buffer at 1,OM. The supernatant and the eluted proeins were analysed electrophoretically and tested by double difusion against lectin from jackfruit and anti-IgA goat serum. At the same time immunoeletectrophoresis of human saliva anti-IgA I serum and lectin from jackfruit (IJere performed. The' results Ishowed that IgA is present in the proteins that comp.ose the acquired pellicle in vitro and that the lectin from jackfrui t . reacts with salivary glycoproteins that have affinity for the hydroxiapatite in vitro / Mestrado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Mestre em Odontologia

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-10-05T21:01:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf: 1181753 bytes, checksum: 89a37733de8897f3c823b8580482186d (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-22T19:51:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf: 1181753 bytes, checksum: 89a37733de8897f3c823b8580482186d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-22T19:51:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alcides Jairon Lacerda Cintra.pdf: 1181753 bytes, checksum: 89a37733de8897f3c823b8580482186d (MD5) Previous issue date: 2017-02-14 / CAPES / CNPq / FACEPE / Moléculas com propriedades biológicas são extraídas de diversos organismos, a exemplo de plantas, como a Crataeva tapia, que pertence à família Caparidaceae, e da qual foi purificada uma lectina denominada CrataBL, com diversas propriedades, entre elas, antitumoral e anti-inflamatória. Mas apesar de suas propriedades promissoras, a aplicação dessa lectina encontra problemas como a degradação por fluidos biológicos e a rápida eliminação da corrente sanguínea. No propósito de obter uma nova formulação para superar esses problemas e de obter dados preliminares sobre a toxicidade da formulação e da lectina, a mesma foi encapsulada em lipossomas e foram avaliadas a toxicidade do nanossistema e da CrataBL frente a eritrócitos, além da avaliação da toxicidade da lectina em diferentes ensaios biológicos. A lectina foi purificada por cromatografia clássica de troca catiônica e os lipossomas preparados pelo método de congelamento/descongelamento. Os lipossomas exibiram tamanho médio de partícula de 168 ± 0,56 nm com uma distribuição de tamanho estreita e monodispersa (PDI = 0,407) e potencial zeta de 31,55 ± 0,77. A eficiência de encapsulação foi de 73 ± 5,72 %. No ensaio hemolítico a lectina, a fração e o extrato apresentaram os seguintes graus de hemólise (0,55; 0,68; 0,72 e 0,88 %), (1,38; 1,47; 1,67 e 1,87 %), (1,02; 1,08; 1,12 e 1,15 %), para as seguintes concentrações (50; 300; 600 e 1000 μg / mL). A lectina encapsulada apresentou (0,34; 0,91; 0,93; 1,25 e 5,37 %), para (62,5; 125; 250; 500 e 1000 μg / mL). A lectina apresentou atividade citotóxica e genotóxica significativa apenas em 1000 μg / mL, porém muito baixa em relação ao controle positivo, e não apresentou atividade mutagênica nas concentrações testadas. No ensaio embriotoxida a lectina apresentou mortalidade de 94% dos embriões, apenas em 500 μg / mL. No cercaricida, a lectina em 300 e 400 μg / mL, apresentou 100% das cercárias vivas e móveis, e em 500 μg / mL, menos de 50% das cercárias mortas, a fração e extrato apresentaram em 300 e 400 μg / mL, toxicidade média: 50-90 % de cercárias mortas, e 500 μg / mL, 90 % ou mais das cercárias mortas. Portanto, a CrataBL foi encapsulada com alta eficiência e tamanho de partícula de 168 nm, ideal para atividade antitumoral. A formulação lipossomal não apresentou atividade hemolítica, assim como a lectina livre, que também não apresentou ação mutagênica. Sendo esses dados importantes para futuras aplicações antitumorais in vivo. No ensaio com embriões e cercárias, a lectina apresentou toxicidade para os diferentes organismos apenas em 500 μg / mL. / Molecules with biological properties are extracted from some organisms, an example of plants, such as a Crataeva tapia, which belongs to the family Caparidaceae, and the quality of a recipe called CrataBL, with several properties, including antitumor and anti-inflammatory. But despite its promising properties, the application of this lectin encounters problems such as degradation by biological fluids and rapid elimination of the bloodstream. The purpose of obtaining a novel formulation to overcome the problems and to obtain preliminary data on the toxicity of the formulation and the lectin, a fiction encapsulated in liposomes and evaluated forces, a nanosystem and CrataBL toxicity to erythrocytes, besides the evaluation of lectin toxicity in different biological assays. The lectin was completed by classical cation exchange chromatography and the liposomes prepared by the freeze / thaw method. Liposomes exhibited a 168 ± 0.56 nm portion average size with a narrow and monodispersed size distribution (PDI = 0.407) and zeta potential of 31.55 ± 0.77. An encapsulation efficiency of 73 ± 5.72%. (0.55, 0.68, 0.72 and 0.88%), (1.38, 1.47, 1.67 and 1.16, 1.67, 1.67, 1.67, 1, 87%), (1.02, 1.08, 1.12 and 1.15%) for the following concentrations (50, 300, 600 and 1000 μg / ml). An encapsulated lectin presented (0.34, 0.91, 0.93, 1.25 and 5.37%), to (62.5, 125, 250, 500 and 1000 μg / mL). The lectin presented significant cytotoxic and genotoxic activity only at 1000 μg / mL, but very low in relation to the positive control, and did not present the mutagenic activity at the tested concentrations. In the embryotoxid assay the lectin presented mortality of 94% of the embryos, only in 500 μg / mL. Without cercaricide, a lectin at 300 and 400 μg / mL presented 100% of the live and mobile cercariae at 500 μg / mL, less than 50% of the dead cercariae, a fraction and extract showed at 300 and 400 μg / mL, toxicity mean: 50-90% of dead cercariae, and 500 μg / mL, 90% or more of the cercariae deaths. Thus, a CrataBL was encapsulated with high efficiency and part size of 168 nm, ideal for antitumor activity. A liposomal formulation showed no hemolytic activity, as well as a free lectin, and also did not present mutagenic action. These data are important for future in vivo antitumor applications. In the test with embryos and cercariae, one lectin showed toxicity to the different organisms only in 500 μg / mL.

CARNEIRO, Victor Alves. Inibição de formação de biofilme bacteriano através de lectinas vegetais. 2007. 89 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-15T13:40:45Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_vacarneiro.pdf: 1083928 bytes, checksum: e8c87c7ccb243cae82022d5153e98560 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:25:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_vacarneiro.pdf: 1083928 bytes, checksum: e8c87c7ccb243cae82022d5153e98560 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:25:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_vacarneiro.pdf: 1083928 bytes, checksum: e8c87c7ccb243cae82022d5153e98560 (MD5) Previous issue date: 2007 / Natural and complementary medicine, especially phytotherapy, is becoming more and more useful to fulfill the needs of great part of the population when it comes to oral health, particularly in the developing countries. Among the phytotherapics, lectins may be valuable as anti-plaque and antimicrobial agents, since they can be intimately related with inference in biofilm formation, given that these proteins recognize carbohydrates in a specific and reversible way. Within that context, this study aimed to test the ability of five lectins (extracted from Canavalia ensiformis, Canavalia maritima, Cymbosema roseum, Acacia farnesiana and Hypnea cervicornis) in inhibiting the formation of biofilm and killing oral microorganisms(Streptococcus sanguis ATCC10556 e S. mutans UA159). The antimicrobial activity of the five lectins tested was determined by the convetional test of microdilution in polystyrene plaques. The lectin concentrations assayed against the microorganisms varied from 2mg/mL to 31. 5μ g/mL. To evaluate the adherence, a semi -quantitative assay was perfomed within microtitulation plaques (96 wells), to where were added 100μL of each lectin, and then 100μL of bacterial suspension (108 CFU/mL). This material was incubated in 10% CO 2 atmosphere at 37ºC. Adherence was revealed and quantified by violet crystal staining. Absorption of violet crystal was determined by spectophotometry (595nm). Only ConA presented bactericide or bacteriostatic activity against the strains tested. The assay of inhibition of biofilm formation revealed that almost all lectins had this kind of activity, reducing the adherence in a significant way (p<0.05). ConA had no effect on the formation of biofilm for any bacteria tested. / A medicina natural e complementar, especialmente a fitoterapia, se torna cada vez mais utilizada no combate as necessidades de grande parte da população em saúde bucal, particularmente nos países em desenvolvimento. Dentre os fitoterápicos, as lectinas podem ter um valor como agentes antiplaca e antimicrobianos, uma vez que podem estar intimamente relacionadas com a interferência da formação do biofilme dos microrganismos, já que se tratam de proteínas que reconhece carboidratos de forma específica e reversível. O objetivo deste estudo foi testar in vitro a capacidade de inibição das lectinas isoladas das espécies de Canavalia ensiformis, Canavalia maritima, Cymbosema roseum, Acacia farnesiana e Hypnea cervicornis, na formação de biofilmes bacterianos e atividade antimicrobiana contra microrganismos orais (Streptococcus sanguis ATCC10556 e S. mutans UA159). A atividade antimicrobiana das cinco lectinas testadas foi determinada pelo teste convencional da microdiluição em placas de poliestireno, sendo testada as concentrações de 2mg/mL à 31,5μg/mL contra os microrganismos em estudo. Para avaliação de aderência foi feito um ensaio semiquantitativo de aderência em placas de microtitulação de poliestireno (96 poços), onde foi adicionado 100 μL de cada uma das lectinas, em seguida adicionada 100 μL de suspensão bacteriana (108 UFC/mL) e incubado a 37ºC em uma atmosfera de 10% de CO2. A aderência foi revelada e quantificada por tintura com cristal violeta. A absorção do cristal violeta foi determinada através da leitura no espectrofotômetro (595nm). Somente a lectina de ConA apresentou a atividade bactericida ou bacteriostática contra os microorganismos estudados. No teste de inibição da formação do biofilme, todas as lectinas testadas foram favoráveis na inibição, reduzindo significativamente a aderência (p< 0,05). A lectina de ConA não teve ação sobre a formação do biofilme de nenhumas das bactérias testadas.