Orientador: Julieta Rodini Engracia de Moraes / Banca: Ana Maria Ferreira Roselino / Banca: Angela Cleusa de Fatima Banzatto de Carvalho / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Resumo: A leishmaniose é uma enfermidade provocada por protozoários do gênero Leishmania, que pode produzir manifestações cutâneas, mucocutâneas ou viscerais. Os objetivos deste ensaio foram os de identificar a espécie Leishmania (Leishmania) chagasi, utilizando o método PCR-RFLP em amostras de tecido de cães com leishmaniose visceral; seqüenciar o fragmento amplificado de DNA das amostras de linfonodos de diferentes animais, em busca de homologia e polimorfismos; comparar os métodos de imunoistoquímica e de PCR dos rins, na identificação da Leishmania e comparar as técnicas sorológicas em relação à PCR como auxílio diagnóstico da leishmaniose. Para tanto, foram utilizadas amostras de 48 cães com leishmaniose, diagnosticados por meio de testes IFI, ELISA e por PCR. Realizou-se PCR com amostras de linfonodo poplíteo, baço e rins, utilizando 'primers' específicos para o gênero Leishmania. A partir de amostras amplificadas, o DNA foi submetido à digestão enzimática (técnica PCR-RFLP) com as enzimas Hae III, Bsr I e Rsa I. Para o seqüenciamento de DNA, produtos de PCR foram amplificados com 'primer sense', precipitados e submetidos ao seqüenciamento automático. Com fragmentos histológicos renais, realizou-se a técnica imunoistoquímica utilizando anticorpo policlonal anti-Leishmania produzido em coelho. O método PCR-RFLP permitiu identificar a espécie Leishmania (Leishmania) chagasi em todas as amostras de DNA dos diferentes tecidos. No seqüenciamento de DNA, os fragmentos amplificados mostraram-se pertencentes às espécies causadoras de leishmaniose visceral, porém não foi possível diferenciá-las. A técnica de imunoistoquímica mostrou presença de formas amastigotas íntegras em meio ao infiltrado inflamatório intersticial em dois (4%) dos 48 animais avaliados, enquanto a PCR confirmou Leishmania sp em 77% dos cães. Conclui-se que a técnica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis is a disease caused by organisms belonging to the genus Leishmania. Clinical forms of leishmaniasis are found as being cutaneous, mucocutaneous or visceral. The objectives of the present study were to identify the Leishmania (Leishmania) chagasi species in tissue specimen from dogs presenting visceral disease diagnosed by PCR-RFLP assay; to determine the fragment sequence (120bp) from lymph node samples from different animals searching for homologies and polymorphism; and to compare immunohistochemistry method to PCR assay with renal tissue and Leishmania local identification. Forty eight samples from dogs clinically diagnosed positive to leishmaniasis by IFAT, ELISA and PCR assays were used in this study. The PCR were performed with samples of popliteo lymph node, spleen and kidneys, and specific oligonucleotides to genus Leishmania. PCR products were digested with enzymes Hae III, Bsr I and Rsa I. The nucleotide sequences were determined automatically. For immunohistochemical purposes the sections of kidneys and anti-Leishmania polyclonal antibody were used. PCR-RFLP assay allowed us to identify the Leishmania (Leishmania) chagasi specie in all DNA samples from different tissues samples. DNA sequencing revealed products amplified belonging to specie responsible to cause visceral leishmaniasis, but it was not possible to distinguish the species. The immunohistochemical study revealed the presence of amastigotes organisms on intersticial inflammatory infiltrate from two dogs (4%), while the PCR assay detected the Leishmania sp in 37 dogs (77%). Based on the PCR-RFLP results, we concluded that it characterized as being Leishmania (Leishmania) chagasi species, etiologic agents of visceral leishmaniasis, in this group of animals; DNA sequence presented homology of 55 bp among all Leishmania spp studied. Additionally, the PCR performed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Leishmania is a protozoan parasite of vertebrates transmitted by the bite of infected phlebotomine sandflies. In humans, it causes a disease called leishmaniasis, which ranks as one of the most serious neglected tropical diseases. In the vectorial part of the life cycle, the crucial moment is when the flagellate forms (promastigotes) attach to the midgut epithelium of the sandfly. For most leishmania species, little is known about which types of phlebotomine receptors and leishmania surface antigens participate in the binding. Phage display was used to screen for Leishmania mexicana peptide ligands which may play a role in such binding. By affinity selection of phages incubated with promastigote cells, 16 unique peptides were identified. Fluorescent labelling of peptide-bearing phages indicated their putative binding sites on the leishmania surface. Based on the hypothesis that the identified peptides may be a part of receptors found in the phlebotomine midgut, experiments were performed where the sandflies were infected with promastigotes whose binding sites were blocked by two different peptide-bearing phages. The extent of the infection was different between the two cases. However, no statistically significant difference from the control group was observed. Despite unsuccessful attempts to identify a...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-24Bitstream added on 2014-06-13T19:44:13Z : No. of bitstreams: 1 soares_mjv_dr_jabo.pdf: 432886 bytes, checksum: 76cfc7d7c9a96733b63b45c9424324b3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose é uma enfermidade provocada por protozoários do gênero Leishmania, que pode produzir manifestações cutâneas, mucocutâneas ou viscerais. Os objetivos deste ensaio foram os de identificar a espécie Leishmania (Leishmania) chagasi, utilizando o método PCR-RFLP em amostras de tecido de cães com leishmaniose visceral; seqüenciar o fragmento amplificado de DNA das amostras de linfonodos de diferentes animais, em busca de homologia e polimorfismos; comparar os métodos de imunoistoquímica e de PCR dos rins, na identificação da Leishmania e comparar as técnicas sorológicas em relação à PCR como auxílio diagnóstico da leishmaniose. Para tanto, foram utilizadas amostras de 48 cães com leishmaniose, diagnosticados por meio de testes IFI, ELISA e por PCR. Realizou-se PCR com amostras de linfonodo poplíteo, baço e rins, utilizando ‘primers’ específicos para o gênero Leishmania. A partir de amostras amplificadas, o DNA foi submetido à digestão enzimática (técnica PCR-RFLP) com as enzimas Hae III, Bsr I e Rsa I. Para o seqüenciamento de DNA, produtos de PCR foram amplificados com ‘primer sense’, precipitados e submetidos ao seqüenciamento automático. Com fragmentos histológicos renais, realizou-se a técnica imunoistoquímica utilizando anticorpo policlonal anti-Leishmania produzido em coelho. O método PCR-RFLP permitiu identificar a espécie Leishmania (Leishmania) chagasi em todas as amostras de DNA dos diferentes tecidos. No seqüenciamento de DNA, os fragmentos amplificados mostraram-se pertencentes às espécies causadoras de leishmaniose visceral, porém não foi possível diferenciá-las. A técnica de imunoistoquímica mostrou presença de formas amastigotas íntegras em meio ao infiltrado inflamatório intersticial em dois (4%) dos 48 animais avaliados, enquanto a PCR confirmou Leishmania sp em 77% dos cães. Conclui-se que a técnica... / Leishmaniasis is a disease caused by organisms belonging to the genus Leishmania. Clinical forms of leishmaniasis are found as being cutaneous, mucocutaneous or visceral. The objectives of the present study were to identify the Leishmania (Leishmania) chagasi species in tissue specimen from dogs presenting visceral disease diagnosed by PCR-RFLP assay; to determine the fragment sequence (120bp) from lymph node samples from different animals searching for homologies and polymorphism; and to compare immunohistochemistry method to PCR assay with renal tissue and Leishmania local identification. Forty eight samples from dogs clinically diagnosed positive to leishmaniasis by IFAT, ELISA and PCR assays were used in this study. The PCR were performed with samples of popliteo lymph node, spleen and kidneys, and specific oligonucleotides to genus Leishmania. PCR products were digested with enzymes Hae III, Bsr I and Rsa I. The nucleotide sequences were determined automatically. For immunohistochemical purposes the sections of kidneys and anti-Leishmania polyclonal antibody were used. PCR-RFLP assay allowed us to identify the Leishmania (Leishmania) chagasi specie in all DNA samples from different tissues samples. DNA sequencing revealed products amplified belonging to specie responsible to cause visceral leishmaniasis, but it was not possible to distinguish the species. The immunohistochemical study revealed the presence of amastigotes organisms on intersticial inflammatory infiltrate from two dogs (4%), while the PCR assay detected the Leishmania sp in 37 dogs (77%). Based on the PCR-RFLP results, we concluded that it characterized as being Leishmania (Leishmania) chagasi species, etiologic agents of visceral leishmaniasis, in this group of animals; DNA sequence presented homology of 55 bp among all Leishmania spp studied. Additionally, the PCR performed... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:05:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6280_1.pdf: 6554113 bytes, checksum: a5c056dd5ab8aaddb6aaf6d92bd9a8ae (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / A síntese protéica é um processo básico e essencial para a sobrevivência dos seres vivos. Um dos pontos chave deste processo é a etapa de iniciação da tradução que é regulada pela ação de ao menos doze fatores protéicos chamados eIFs (eukaryotic Initiation Factor Fator de Iniciação de Eucariotos) perfazendo, aproximadamente, 30 polipeptídios em mamíferos. Os tripanossomatídeos, protozoários patogênicos de interesse médico e veterinário, apresentam características celulares próprias como a regulação da sua expressão gênica que ocorre em nível pós-transcricional. Nesse contexto a síntese de proteínas é um alvo em potencial para mecanismos de regulação, entretanto pouco se sabe sobre esse processo nos tripanossomatídeos. Em estudos prévios, foi iniciado nestes parasitas o estudo do fator eIF4F e observou-se a existência de múltiplos homólogos para cada uma de suas três subunidades. Neste trabalho utilizou-se ferramentas de bioinformática para identificar e caracterizar homólogos aos demais eIFs em Leishmania major, Trypanosoma brucei e T. cruzi. Foram identificados homólogos dos fatores eIF1, eIF1A, eIF5, eIF5A, eIF5B, eIF6 e sete subunidades do complexo eIF3 (b, c, d, e, f, i, k). Ao contrário do observado para as subunidades do eIF4F, e com a exceção da subunidade eIF3b, um único homólogo foi identificado para cada fator. A análise das seqüências protéicas mostrou que existe variabilidade no grau de conservação destes homólogos quando comparados com outros eucariotos (de 22% de identidade para o eIF3k até 58% para o eIF6). Em alguns casos foi possível mapear mutações exclusivas dos tripanossomatídeos. Também foram gerados modelos 3D de vários dos homólogos previamente identificados de subunidades do eIF4F facilitando sua caracterização funcional. Os resultados obtidos indicam que boa parte da iniciação da síntese protéica é conservada entre tripanossomatídeos e demais eucariotos. Todavia, diferenças significativas parecem ocorrer e merecem um estudo mais aprofundado

Orientador: Selma Giorgio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T09:19:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_AlexandraPaivaAraujo_D.pdf: 50601825 bytes, checksum: 773a42abde5c534f0e89ea97289c90b3 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A leishmaniose experimental murina causada por Leishmania amazonensis é um modelo parasitário que apresenta variações no desenvolvimento da lesão dependendo da linhagem de camundongo utilizada, bem como do local de inoculação do parasito, e tem contribuído para o entendimento da imunopatologia das doenças infecciosas. Observação: o resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The experimental murine leishmaniasis caused by Leishmania amazonensis parasite is a useful model to understanding the immunopathogenesis of the infectious diseases. It has some differences on the lesion development in according with the mouse strain and the site of the parasite inoculation. We evaluated the lesion development, hypoxia microenvironments¿The Abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fatty acids, especially those from phospholipids (PLFA), are essential membrane components, present in a relatively constant proportion in the biological membranes under natural conditions. However, under harmful growth conditions such as diseases, environmental changes and chemical exposure, the proportion of lipids may vary. Once these changes could be identified and revel to be specific for such adverse situation, it could be used as a biomarker. Thus, the biomarkers can help, for example, to identify a virulence and resistance mechanism to a particular chemotherapeutic agent. Therefore, to make treatment more effective, a specific biomarker could lead to a better therapeutic decision, regarding candidate drugs and their indications. The objective of this study was to compare the fatty acid profiles of L. chagasi and L. amazonesis isolates resistant and sensitive to antimony (Glucantime ®) and to nitric oxide (NO). We studied 2 isolates of L. amazonensis and 8 of L. chagasi. Total lipids were extracted from lyophilized promastigotes forms in late logarithmic growth phase (50 mL; 5x108/mL cells). Fatty acid methyl esters (FAMEs) were obtained from total lipids, ester-linked lipids and ester-linked phospholipids by MIDI, ELFA and PLFA techniques respectively. FAMEs were analyzed by chromatography and mass spectrometry. Differences in FAME profiles associated with species or resistance were assessed by non-metric multidimensional scaling, multiresponse permutation procedures and indicator species analyses using PC-ORD 6.0. Previously to these analyses, molar masses of individual FAMEs were relativized by FAMEs totals within each sample. Isolates resistant and sensitive to NO and antimony had different MIDI-FAME profiles, regardless the species. However, neither ELFA nor PLFA profiles differed between sensitive and resistant isolates. The fatty acid 18:1 δ9c was increased in sensitive isolates (p<0,001), whereas an yet unidentified peak showed the opposite trend (p<0,01). We can conclude that these two fatty acids are potential biomarkers for NO and antimony resistance in L. chagasi and L. amazonesis and they can be helpful for therapeutical diagnosis. / Acidos graxos, especialmente aqueles de fosfolipideos (PLFA), sao componentes essenciais das membranas biologicas que estao em proporcao relativamente constante em condicoes naturais. No entanto, sob condicoes adversas de crescimento, como doencas, mudancas ambientais e exposicao a substancias quimicas, pode ocorrer uma variacao na proporcao dos lipideos. A identificacao destas modificacoes especificas pode revelar um biomarcador. Assim, os biomarcadores podem ajudar, por exemplo, na identificacao de um mecanismo de virulencia e de resistencia a um agente quimioterapico particular. Portanto, um biomarcador especifico pode levar a uma melhor decisao terapeutica, a respeito da indicacao e escolha de drogas, tornando o tratamento mais eficaz. O objetivo deste estudo foi comparar os perfis de acidos graxos de L. chagasi e L. amazonesis em isolados resistentes e sensiveis a antimonio (Glucantime R) e oxido nitrico (NO). Os lipidios totais foram extraidos a partir de formas promastigotas liofilizadas em fase tardia de crescimento logaritmico (50 mL celulas 5x108/mL). Foram estudados 2 isolados de L. amazonensis e 8 de L. chagasi. Os esteres metilicos de acidos graxos (FAMEs) foram obtidos a partir de lipideos totais, lipideos e fosfolipideos ester ligados, respectivamente, pelas tecnicas MIDI, ELFA e PLFA. Os FAMEs foram analisados por espectrometria de massa e cromatografia gasosa. Diferencas nos perfis de acidos graxos associadas a especies ou resistencia foram avaliadas por escalonamento multidimensional nao metrico, procedimentos de permutacao de respostas multiplas e analises indicadoras de especies, usando o PC-ORD 6.0. Anteriormente a essas analises, as massas molares individuais dos FAMEs foram relativizadas por FAMEs totais dentro de cada amostra. Os isolados resistentes e sensiveis ao NO e ao antimonio apresentaram diferentes perfis FAME-MIDI, independentemente da especie. No entanto, os perfis de ELFA e PLFA nao diferiram entre os isolados sensiveis e resistentes. O acido graxo 18:1 Â9c foi aumentado em isolados sensiveis (p <0,001), ao passo que um pico ainda nao identificado mostrou a tendencia oposta (p <0,01). Assim, podemos concluir que esses dois acidos graxos sao potenciais biomarcadores para sensibilidade e resistencia ao NO e ao antimonio em L. chagasi e L. amazonesis e podem ajudar no diagnostico terapeutico.