Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-25T20:45:34Z No. of bitstreams: 1 Cleiton Silva Santos Desfecho da infecao experimental....pdf: 2262422 bytes, checksum: b3abf43dd8996e46ce0c116bfc304bf2 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-25T20:45:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cleiton Silva Santos Desfecho da infecao experimental....pdf: 2262422 bytes, checksum: b3abf43dd8996e46ce0c116bfc304bf2 (MD5) Previous issue date: 2011 / Universidade Federal da Bahia. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O modelo murino oferece múltiplas ferramentas para estudos imunológicos e genéticos. Alguns estudos avaliando a infecção por leptospiras patogênicas em camundongos mutantes ou transgênicos vêem sendo relatados, no entanto, o uso mais amplo desses modelos experimentais é limitado por nossa pouca compreensão sobre o desfecho da infecção por leptospiras patogênicas em linhagens murinas selvagens. Neste estudo, relatamos o desfecho da infecção por Leptospira interrogans sorovar Copenhageni cepa Cop em quatro linhagens murinas selvagens amplamente usadas em pesquisa básica: A, CBA, BALB/c e C57BL/6. Os desfechos avaliados foram sobrevida, presença de lesões renais, carga de leptospiras nos rins, títulos de anticorpos aglutinantes séricos e níveis séricos de IgG específica anti-Leptospira. Como esperado, nenhuma linhagem mostrou-se susceptível à doença aguda letal. As linhagens A e C57BL/6 apresentaram maior carga renal de leptospiras, enquanto os camundongos CBA e C57BL/6 apresentaram lesões renais mais graves. Por outro lado, camundongos BALB/c demonstraram notável resistência inclusive à leptospirose subclínica. / The mouse disease model has the advantage of a broad array of immunological and genetic tools available for basic research. Some studies on transgenic and/or mutant mouse strains as models for experimental leptospirosis have been reported; however, the wider use of such models is hampered by our poor understanding of the outcome of experimental leptospiral infection among the different mouse strains available. We studied the outcome of infection by a virulent strain of Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae strain Cop in four commonly used wildtype mouse strains: A, CBA, BALB/c and C57BL/6. The endpoints evaluated in this study were survival, presence of kidney lesions, leptospiral load in kidney samples, microscopic agglutination test (MAT) titre and anti-leptospiral IgG antibody levels. As expected, none of the mouse strains were susceptible to lethal leptospirosis. However, these strains developed specific pathologies associated with sub-lethal leptospirosis. The A and C57BL/6 strains exhibited a high leptospiral load in kidney samples, the CBA and C57BL/6 strains developed severe inflammatory lesions, while the BALB/c strain proved to be the most resistant to sub-clinical leptospirosis.

Orientador: Luis Antonio Mathias / Banca: Anna Monteiro Correia Lima / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Raul José Silva Gírio / Banca: Raphaella Barbosa Meirelles Bartoli / Resumo: Com o objetivo de analisar as diferentes formas de interpretação dos resultados em pesquisas epidemiológicas com Leptospira spp., em quatro espécies de hospedeiros, as concordâncias entre os resultados da soroaglutinação microscópica (SAM) contra 24 sorovariedades foram testadas por meio do coeficiente Kappa. Os resultados obtidos com o cálculo clássico da soroprevalência, o método da sorovariedade mais provável (SMP) com 24 e oito antígenos e três variações do SMP foram comparados por meio da intersecção entre os intervalos de confiança de 95%. As concordâncias entre sorovariedades nos resultados da SAM indicam que a maioria das coaglutinações ocorre dentro do esperado pelo acaso e que não é possível atribuí-las apenas a reações cruzadas. O SMP resultou em soroprevalências menores que as obtidas pelo método clássico. Quanto mais antígenos são utilizados na SAM, menores serão a soroprevalências para cada sorovariedade, demonstrando que a bateria de antígenos interfere nos resultados. As diferentes formas de calcular o resultado do SMP mostraram ser coeficientes diferentes, que podem confundir os leitores, caso não sejam bem definidos nos trabalhos. Conclui-se que o método clássico de cálculo da soroprevalência seria o mais indicado, respeitando-se as limitações da SAM na conclusão das pesquisas. / Abstract: Aiming to analyze the different ways of interpreting the results of epidemiological research with Leptospira spp. in four host species, the agreement between the results in the microscopic agglutination test (MAT) against 24 serovars was tested by the Kappa coefficient. The results with the classic seroprevalence method, the most likely serovar method (SMP) with 24 and eight antigens and three variations of the SMP were compared by the intersection of the 95% confidence intervals. Agreements between serovars in the results of MAT indicate that most co-agglutinations occur randonly, and cross-reactions can not assign as the only cause of them. The SMP resulted in lower seroprevalences than those obtained by the classical method. The more antigens are used in MAT, lower the seroprevalences for each serovar, demonstrating that the antigen battery interferes with the results. The different ways of calculating the result of the SMP proved to be different coefficients, which may confuse readers, if they are not well defined in the research. It was concluded that the classic seroprevalence would be the most appropriate method of calculation, respecting the limitations of the MAT in the research's conclusions. / Doutor

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6516_SISSERTAÇÃO PRISCILA CORTISIO.pdf: 1095651 bytes, checksum: 08a3dd467778ef812e3b401fe10ed401 (MD5) Previous issue date: 2013-03-05 / A produção ovina e caprina vêm ganhando destaque no Brasil, tornando-se um atrativo investimento alternativo. Esse trabalho teve como objetivo avaliar a soroprevalência e os riscos associados à leptospirose em rebanhos caprinos e ovinos no Estado do Espírito Santo, em um total de 24 rebanhos, com 737 animais. A técnica utilizada para determinar a soroprevalência foi o Teste de Soroaglutinação Microscópica (MAT), sendo que o sorovar Icterohaemorrhagiae foi encontrado em maior prevalência, tanto em caprinos (97%) quanto ovinos (78,26%). Os aspectos relacionados à criação foram estatisticamente analisados com o Teste de Qui Quadrado, a fim de se obter a associação entre as variáveis. Fatores como presença de áreas alagadas, abortos e partos prematuros tiveram associação direta com a presença da leptospirose nos rebanhos estudados. Com os resultados foi verificado que a leptospirose está presente no Estado do Espírito Santo, estando associada principalmente com o sistema de criação e a frequência de abortos, sendo necessárias intervenções a fim de proporcionar melhorias no controle sanitário dos rebanhos, contribuindo com a melhoria da produção capixaba de caprinos e ovinos.

Orientador: Hélio Langoni / Banca: Jussara Marcondes Machado / Banca: Simone Baldini Lucheis / Banca: Silvio Arruda Vasconcellos / Banca: Maria das Graças de Lima / Resumo: A leptospirose é uma importante zoonose que tem como hospedeiros primários os animais silvestres, sinantrópicos e domésticos. Os seres humanos comportam-se como hospedeiros terminais e acidentais. A sua distribuição é mundial, no entanto, na América Latina, África e Ásia, as prevalências são maiores devido às condições ambientais de ordem físico-química, bem como sócio-econômico-cultural, que favorecem a persistência e a disseminação da infecção. A distribuição geográfica da leptospirose está fortemente relacionada à questão ambiental e ao processo de urbanização das cidades. A prevalência deste agravo depende do animal portador que dissemina leptospiras, da sua sobrevivência ambiental e do contato de pessoas susceptíveis. Vários animais infectados podem ser hospedeiros ou reservatórios, e cada sorovar tem um ou mais hospedeiros com diferentes níveis de adaptação. A permanência de focos de leptospirose se deve aos animais infectados, doentes e assintomáticos, considerados como fontes permanentes de contaminação ambiental. O objetivo desta pesquisa foi determinar áreas de risco e possíveis componentes ecológicos da infecção leptospírica em cães errantes e pacientes com diagnóstico de leptospirose, entre os anos de 2006 e 2008, no municípío de Maringá-PR. Foram estudados 335 cães errantes e 25 pacientes. Amostras de soro, tanto dos animais como dos pacientes, foram examinadas pela prova de soroaglutinação microscópica-SAM, para pesquisa de anticorpos anti-leptospíricos. Para determinar as áreas de risco e a distribuição espacial da doença, foram elaborados mapas temáticos e avaliados os indicadores ambientais e sociais por setores do perímetro urbano. Foram observados 41(12,2%) cães positivos para um ou mais sorovares de leptospiras, e os mais freqüentes foram: Pyrogenes (43,9%), Canícola (21,9%) e Copennhageni (19,5%)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leptospirosis is an important zoonosis which has as primary hosts savage, synantropic and domestic animals. Human beings behave as terminal and accidental hosts. Its distribution is worldwide, notwithstanding, in Latin America, Africa and Asia the prevalence is higher due to the environmental conditions either of physical-chemical or social-economical-cultural order, which favor persistence and dissemination of the infection. The geographic distribution of leptospirosis is strongly related to the environmental question and the process of the cities urbanization. This prevalence depends on the animal carrier which disseminates the leptospirosis, its environmental survival and the contact with susceptible host. Many infected animals may be a host or a reservoir and each serovar has one or more different hosts or reservoirs with diverse levels of adaptation. The persistence of the leptospirosis focus is due to the infected animals, sick or non-syntomatic, that are considered as sources of permanent environmental infection. The aim of this work was to determine the risky areas and the possible ecologic components of the leptospirosis infection in wandering dogs and patients with leptospirosis diagnosis between the years of 2006 to 2008 in Maringá city, Paraná state. 335 wandering dogs and 25 patients were studied. Either animal or patients serum samples were examined by the microscopic serum agglutination - MAT for search of the anti-leptospira antibodies. To determine the risky areas and the special distribution of the disease thematic maps were elaborated and the environmental and social indicators were evaluated by the urban perimeter sectors. In the study, 41 (12,2%) positive dogs were observed, with for one or more leptospirosis serovars and the most common were: Pyrogenes (43,9%), Canícola (21,9%) and Copennhageni (19,5%). For humans the positiveness was of 2 (8%)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2019-03-30T00:12:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2016-12-27 / Objective: To evaluate, from a group of children with suspected dengue fever, an overestimation of this diagnosis, in relation to other acute febrile diseases, mainly leptospirosis, when it is based only on non-specific clinical-epidemiological and laboratory criteria. Methodology: observational, descriptive and analytical cross - sectional study, from the active search of patients with acute febrile illness up to ten days of evolution. Participants were recruited in the Emergency and Infirmary of two pediatric hospitals located in the municipality of Fortaleza (CE), from September / 2015 to March / 2016. Clinical and epidemiological data were collected through questionnaires and the laboratories were evaluated for dengue through immunochromatographic and serological tests, and the negative samples were investigated for Lesptospira sp and Leishmania sp by molecular methods. Data analyzes were performed using the parametric analysis of variance (ANOVA) associated with the Tukey Post Hoc. And the categorical variables were evaluated by Chi-Square test or Fisher's exact test. The level of significance was 95%. The bilateral p-value less than 0.05 (p <0.05) was considered statistically significant. Results: the total sample was 99 individuals, with 86 participants validated. 45% of cases were confirmed for dengue, 5% were positive for leptospirosis, 1% for visceral leishmaniasis and 49% presented negative results for these agents, being this group denominated as dengue-like. The comparative analysis showed a great similarity between the subgroups in relation to the analyzed variables. The predominant age group was individuals between three and ten years old. There were no significant gender differences. And, during the analysis of the clinical manifestations, it was observed that in childhood the presence of gastrointestinal and respiratory symptoms is common, being nausea, vomiting and rhinorrhea, the most frequent ones. Conclusion: Although dengue is an important diagnosis of acute febrile syndrome, it is frequently more prevalent, in detriment to other similar pathologies, such as leptospirosis. Therefore, it is of paramount importance the specific laboratory diagnosis, especially in childhood, due to the lack of specificity of the clinical picture, because although there are clinical-epidemiological similarities among the diseases, they are treated in different ways. Key words: Dengue, leptospirosis, acute febrile syndrome, child. / Objetivo: Avaliar, a partir de um grupo de crianças notificadas com suspeita clínica de dengue, se há uma superestimação desse diagnóstico, em relação à outras patologias febris agudas, principalmente a leptospirose, quando o mesmo é baseado somente nos critérios clínicos-epidemiológicos e testes laboratoriais inespecíficos. Metodologia: estudo observacional, transversal descritivo e analítico, a partir da busca ativa de pacientes com quadro febril agudo até dez dias de evolução. Os participantes foram recrutados na emergência e na enfermaria de dois hospitais pediátricos situados no município de Fortaleza (CE), no período de setembro/2015 a março/2016. Os dados clínicos e epidemiológicos foram colhidos através de questionários e, os laboratoriais foram avaliados para dengue através dos testes imunocromatográficos, sorológicos, e moleculares, sendo as amostras negativas investigadas para Lesptospira sp e Leishmania sp através de métodos moleculares. As análises dos dados foram realizadas pelo teste paramétrico Análise de Variância (ANOVA) associado ao teste Post Hoc de Tukey. E as variáveis categóricas foram avaliadas pelo teste Qui-Quadrado ou o Teste exato de Fisher. O nível de significância utilizado foi de 95%. O valor de p bilateral menor que 0,05 (p<0,05) foi considerado estatisticamente significante. Resultados: a amostra total foi de 99 indivíduos, com 86 participantes validados. Obteve-se 45% de casos confirmados para dengue, 5% foram resultados positivos para leptospirose, 1% para leishmania e 49% apresentaram resultados negativos para esses agentes, sendo este grupo denominado como dengue-símile. A análise comparativa evidenciou grande similaridade entre os subgrupos em relação as variáveis analisadas. A faixa etária predominante foi de indivíduos entre três e dez anos de idade. Não houve diferenças significativas de gênero. E, durante a análise das manifestações clínicas constatou-se que na infância foi comum a presença de sintomas gastrointestinais e respiratórios, sendo náuseas, vômitos e rinorréia, os mais frequentes. Conclusão: Apesar da dengue ser um importante diagnóstico de síndrome febril aguda é frequente ocorrer uma maior valorização desta, em detrimento à outras patologias similares, como a leptospirose. Portanto, é de suma importância o diagnóstico laboratorial específico, principalmente na infância, em virtude da inespecificidade do quadro clínico, pois embora haja similaridade clínica-epidemiológica entre as doenças, são tratadas de modos distintos. Palavravas-chave: Dengue, leptospirose, síndrome febril aguda, criança.

Este trabalho foi realizado com o escopo de determinar a ocorrência de infecção leptospirótica em gatos, utilizando-se tanto da pesquisa de anticorpos específicos como de tentativas de isolamento e demonstração do agente a partir de fragmentos de rins destes espécimen. Visou-se, também, estudar aspectos clínico-laboratoriais, bacteriológicos e epidemiológicos da leptospirose felina, pela inoculação de gatos adultos com cepas autóctones, patogênicas, de L interrogans. Utilizando-se da reação de soroaglutinação microscópica, tendo como antígenos 18 sorotipos representativos de 17 sorogrupos de Leptospira, obteve-se, dentre as 172 amostras séricas examinadas, 22 sororeagentes (12,8 por cento ), com título >= 100. A maior frequência de soropositividade demonstrada foi para o sorotipo pomona. Não se observaram diferenças estatisticamente significantes (ao nível de = 0,05) com relação ao sexo, todavia, através da análise estatística (ao nível de = 0,05, demonstrou-se que a frequência da infecção é maior nos felinos adultos. Nas 172 amostras de pares de rins submetidas à cultura em meio de Fletcher, não se obteve êxito no isolamento do agente. Ademais, não se demonstrou a presença de leptospira em cortes de rins dos animais sororeagentes através da impregnação argêntica, segundo a técnica de Warthin-Starry. Após a inoculação, por via subcutânea, de 5 animais com cepa do sorotipo icteroharmorrhagiae (R-192) e de outros 5 com cepa do sorotipo canicola (CCZ-8), estes gatos ficaram sob observação durante um per1odo de 8 a 12 semanas. Em nenhum deles se manifestou qualquer alteração do estado de higidez, do quadro hemático e nos exames de urina realizados. Foram detectadas aglutininas antileptospira em 90 por cento dos animais inoculados, entre a 1ª e a 6ª semanas a contar da inoculação. Dos 9 animais que se soroconverteram, 8 permaneceram soropositivos durante 8 a 12 semanas. Apenas os animais inoculados com o sorotipo canicola eliminaram leptospiras pela urina, iniciando-se a leptospirúria entre a 2a e 4a semanas da inoculação e as sim persistinto por 2 a 8 semanas. Não se obteve nenhuma hemocultura ou nefrocultura positiva e nem se pôde demonstrar a presença de leptospiras no parênquina renal dos 10 anmais inoculados. / The occurrence of leptospiral infection in cats was determined through the detection of specific antibodies based on the results of microscopic agglutination test and the attempts of isolation and histological demonstration of leptospires from the kidneys of these animals. Clinical, laboratorial and epidemiological aspects of experimental feline leptospirosis were also studied; for this purpose, adult cats were inoculated with patogenic autochthonal strains of Leptospira interrogans. Of 172 serum samples examined by microscopic agglutination test, 22 (12,8 per cent ) were positive with titers >= 100. The most frequent serovar was pomona. In relation to the sex, statistical significant differences (level of ~ = O, 05) were not seen; however the age distribution showed that feline leptospirosis is more frequent in adult cats. The attempts for isolation and de monstration of L· interrogans from renal parenchyma either by culture or Warthin-Starry technics were unsuccessfull. Ten adult cats of mixed breed and both sexes were used for experimental infection. Five animals were inoculated subcutaneously, with serovar icterohaemorrhagiae (R-192) and other five with serovar canicola (CCZ-8) by the same route. The clinical and laboratorial findings presented no alterations in the inoculated animals. Antileptospiral agglutinins were detected in 90 per cent of the infected cats between 1st and 6th week after inoculation. From 9 cats with leptospiral agglutinins, 8 persisted seropositive for 8 to 12 weeks. The elimination of leptospires through urine was observed only in the animals infected with serovar canicola, begining 2 to 4 weeks after inoculation and lasting for 2 to 8 weeks. The hemoculture as well the kidney cultures from inoculated cats were also unsuccessfull.

Este trabalho foi realizado com o escopo de determinar a ocorrência de infecção leptospirótica em gatos, utilizando-se tanto da pesquisa de anticorpos específicos como de tentativas de isolamento e demonstração do agente a partir de fragmentos de rins destes espécimen. Visou-se, também, estudar aspectos clínico-laboratoriais, bacteriológicos e epidemiológicos da leptospirose felina, pela inoculação de gatos adultos com cepas autóctones, patogênicas, de L interrogans. Utilizando-se da reação de soroaglutinação microscópica, tendo como antígenos 18 sorotipos representativos de 17 sorogrupos de Leptospira, obteve-se, dentre as 172 amostras séricas examinadas, 22 sororeagentes (12,8 por cento ), com título >= 100. A maior frequência de soropositividade demonstrada foi para o sorotipo pomona. Não se observaram diferenças estatisticamente significantes (ao nível de = 0,05) com relação ao sexo, todavia, através da análise estatística (ao nível de = 0,05, demonstrou-se que a frequência da infecção é maior nos felinos adultos. Nas 172 amostras de pares de rins submetidas à cultura em meio de Fletcher, não se obteve êxito no isolamento do agente. Ademais, não se demonstrou a presença de leptospira em cortes de rins dos animais sororeagentes através da impregnação argêntica, segundo a técnica de Warthin-Starry. Após a inoculação, por via subcutânea, de 5 animais com cepa do sorotipo icteroharmorrhagiae (R-192) e de outros 5 com cepa do sorotipo canicola (CCZ-8), estes gatos ficaram sob observação durante um per1odo de 8 a 12 semanas. Em nenhum deles se manifestou qualquer alteração do estado de higidez, do quadro hemático e nos exames de urina realizados. Foram detectadas aglutininas antileptospira em 90 por cento dos animais inoculados, entre a 1ª e a 6ª semanas a contar da inoculação. Dos 9 animais que se soroconverteram, 8 permaneceram soropositivos durante 8 a 12 semanas. Apenas os animais inoculados com o sorotipo canicola eliminaram leptospiras pela urina, iniciando-se a leptospirúria entre a 2a e 4a semanas da inoculação e as sim persistinto por 2 a 8 semanas. Não se obteve nenhuma hemocultura ou nefrocultura positiva e nem se pôde demonstrar a presença de leptospiras no parênquina renal dos 10 anmais inoculados. / The occurrence of leptospiral infection in cats was determined through the detection of specific antibodies based on the results of microscopic agglutination test and the attempts of isolation and histological demonstration of leptospires from the kidneys of these animals. Clinical, laboratorial and epidemiological aspects of experimental feline leptospirosis were also studied; for this purpose, adult cats were inoculated with patogenic autochthonal strains of Leptospira interrogans. Of 172 serum samples examined by microscopic agglutination test, 22 (12,8 per cent ) were positive with titers >= 100. The most frequent serovar was pomona. In relation to the sex, statistical significant differences (level of ~ = O, 05) were not seen; however the age distribution showed that feline leptospirosis is more frequent in adult cats. The attempts for isolation and de monstration of L· interrogans from renal parenchyma either by culture or Warthin-Starry technics were unsuccessfull. Ten adult cats of mixed breed and both sexes were used for experimental infection. Five animals were inoculated subcutaneously, with serovar icterohaemorrhagiae (R-192) and other five with serovar canicola (CCZ-8) by the same route. The clinical and laboratorial findings presented no alterations in the inoculated animals. Antileptospiral agglutinins were detected in 90 per cent of the infected cats between 1st and 6th week after inoculation. From 9 cats with leptospiral agglutinins, 8 persisted seropositive for 8 to 12 weeks. The elimination of leptospires through urine was observed only in the animals infected with serovar canicola, begining 2 to 4 weeks after inoculation and lasting for 2 to 8 weeks. The hemoculture as well the kidney cultures from inoculated cats were also unsuccessfull.

Universiẗat, Diss., 2004--München.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / A leptospirose constitui uma importante zoonose, encontrada em regiões de clima tropical, ocorrendo principalmente em épocas chuvosas. O controle da infecção depende do adequado reconhecimento do microorganismo pelos receptores de reconhecimento de padrão de patógenos, os TLRs, presentes nas células do sistema imune inato do hospedeiro. A ativação dos TLRs é fundamental para o desencadeamento da resposta inflamatória, mediadora da resposta de proteção e de lesão no processo infeccioso. Objetivos: Avaliar a expressão dos receptores TLR2, TLR4 e CD14 na superfície de monócitos e a resposta in vitro aos estímulos LipL32 (extraído de Leptospira sp.), MALP-2 (antígeno sintético de Mycoplasma fermentans) e LPS (antígeno extraído de Salmonella abortus equi) ligantes dos TLRs, medida pela produção de citocinas, em pacientes com leptospirose. Métodos: Foram incluídos 07 pacientes com quadro clínico e laboratorial de leptospirose e 07 voluntários sadios, utilizados como controle. As células mononucleares do sangue periférico (CMSP) foram separadas utilizando ficoll-paque, congeladas e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelamento, verificação da viabilidade e acerto da concentração de células para 1x106 células/mL foi mensurada a expressão de TLR2, TLR4 e CD14 na superfície de monócitos. O restante da suspensão de células foi incubada por 6 horas com os estímulos de 1000ng/mL de LipL32, 0,4U/mL de MALP-2 ou 100ng/mL de LPS. Após a primeira hora de incubação foi adicionado monensina para bloqueio da secreção de citocina. Em seguida, as CMSP foram marcadas com CD14, fixadas, permeabilizadas e expostas aos anticorpos anti-IL-6 e anti-TNF-α para detecção intracelular da produção destas citocinas inflamatórias nos monócitos. Foram adquiridos 10.000 eventos combinado-se morfologia e positividade para CD14 em citometria de fluxo. Resultados: Não foi observada diferença significativa na resposta inflamatória entre pacientes com leptospirose e voluntários sadios quando CMSP foram estimuladas in vitro com MALP-2 e LipL32 para indução da produção de citocinas inflamatórias (IL-6 e TNF-α) em monócitos. Todavia, a produção de TNF-α foi menor após estímulo com LPS (p=0,035), o que não ocorreu com a produção de IL-6. Em relação à expressão de receptores de superfície, foi observado aumento da expressão de TLR2 (p=0,025) na superfície de monócitos dos pacientes, porém não houve diferença na expressão de TLR4 e CD14. Conclusões: Neste estudo demonstramos que a capacidade de reconhecimento de antígenos pelos monócitos do sangue periférico de pacientes com leptospirose está preservada ou aumentada. Além disso, observamos que a produção de citocinas inflamatórias frente a antígeno da própria Leptospira (LipL32) e outro antígeno agonista de TLR2 (MALP-2) está mantida. Entretanto, a produção de citocina inflamatória frente ao LPS (agonista de TLR4) mostrou-se complexa podendo estar influenciada pela tolerância cruzada. / The Leptospirosis is one of the world's most important zoonoses, found in regions of tropical climate, occurring mainly in rainy seasons. The control of infection depends on the proper recognition of the microorganism by receptors for recognition of patterns of pathogens, the TLRs present in the cells of the innate immune system of the host. The activation of TLRs is crucial for triggering the inflammatory response, mediator of the response of protection in case of injury and infection. Objectives: To evaluate the expression of receptors TLR2, TLR4 and CD14 on the monocytes surface in vitro and response to stimuli LipL32 (extracted from Lestospira sp.), MALP-2 (synthetic antigen of Mycoplasma fermentans) and LPS (antigen extracted from bacteria-gram negative) binders of TLRs, as measured by production of cytokines in patients with leptospirosis. Methods: 07 patients with clinical and laboratory of leptospirosis were included and 07 healthy volunteers, used as controls. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were separated using ficoll-paque, frozen and stored in liquid nitrogen. After thawing, checking the feasibility and wisdom of the concentration of cells to 1x106 células/mL was measured the expression of TLR2, TLR4 and CD14 on the monocytes surface. The rest of the cell suspension was incubated for 6 hours with the stimuli of 1000ng/mL of LipL32, 0.4 U / mL of MALP-2 or 100ng/mL of LPS. After the first hour of incubation was added monensin for blocking the secretion of cytokine. Then the PBMC were stained with CD14, set, permeabilizaded and exposed to anti-IL-6 and anti-TNF-α for detection of intracellular production of inflammatory cytokines in monocytes. They were acquired 10,000 events combined to morphology and positive for CD14 in flow cytometry. Results: There was no significant difference in the inflammatory response among patients with leptospirosis and healthy volunteers when PBMC were stimulated in vitro with MALP-2 and LipL32 to induce the production of inflammatory cytokines (IL-6 and TNF-α) in monocytes. However, the production of intracellular of TNF-α was lower after stimulation with LPS (p = 0035), which did not occur to the production of IL-6. Regarding the expression of surface receptors, it was observed increased expression of TLR2 (p = 0025) on the monocytes surface of patients, but there was no difference in the expression of TLR4 and CD14. Conclusions: This study demonstrated that the ability of recognition of antigens by peripheral blood monocytes of patients with leptospirosis is preserved or increased. Also, we observed that the production of inflammatory cytokines in front of the Leptospira antigen (LipL32) and another antigen agonist of TLR2 (MALP-2) is maintained. Meanwhile, the production of inflammatory cytokine front of LPS (agonist of TLR4) proved to be complex may be influenced by cross tolerance. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-05-31T19:55:30Z No. of bitstreams: 1 Adenizar Chagas Júnior. O Imprint como método para detecção de Leptospira SSP. 2009.pdf: 396164 bytes, checksum: 8f423288d4f795e861df22e9de3acb59 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-31T19:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adenizar Chagas Júnior. O Imprint como método para detecção de Leptospira SSP. 2009.pdf: 396164 bytes, checksum: 8f423288d4f795e861df22e9de3acb59 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Na determinação da eficácia de novas candidatas à vacina para leptospirose, o marcador primário considerado é a mortalidade, e um marcador secundário importante é a indução de uma imunidade estéril. Entretanto, a avaliação da imunidade estéril é dificultada pelo tempo demandado e pela complexidade de métodos como o isolamento pela cultura. Neste estudo, foi avaliado o uso do método do imprint (ou touch preparation) na detecção da presença de leptospiras em tecidos de hamsters infectados com L. interrogans sorovar Copenhageni. Comparado com a cultura, o imprint demonstrou igual ou melhor detecção de leptospiras em amostras de rim, fígado, pulmão e sangue coletadas após a infecção obtendo uma concordância geral boa (κ = 0.61). Além disso, na avaliação de hamsters imunizados com uma proteína recombinante de Leptospira candidata à vacina e subsequente desafio com leptospiras patogênicas, a concordância entre a cultura e o imprint foi alta (κ = 0.84). Estes achados indicam que o imprint é um método rápido para a observação direta de Leptospira spp. e que pode ser facilmente aplicado na avaliação de animais infectados experimentalmente com leptospiras e na determinação de imunidade esterilizante durante avaliações de potenciais candidatas à vacina. / In determining the efficacy of new vaccine candidates for leptospirosis the primary endpoint is death and an important secondary endpoint is sterilizing immunity. However, evaluation of this endpoint is often hampered by the time consuming demands and complexity of methods such as culture isolation (CI). In this study, we evaluated the use of an imprint (or touch preparation) method (IM) in detecting the presence of leptospires in tissues of hamsters infected with L. interrogans serovar Copenhageni. Compared to CI, the IM exhibited equal or improved detection of leptospires in kidney, liver, lung and blood samples collected post-infection and the overall concordance was good (κ = 0.61). Furthermore, in an evaluation of hamsters immunized with a recombinant Leptospira protein-based vaccine candidate and subsequently challenged with leptospires, the agreement between the CI and IM was very good (κ = 0.84). These finding indicate that the IM is a rapid method for the direct observation of Leptospira spp. that can be readily applied to evaluating Leptospira infection in experimental animals and determining sterilizing immunity when screening potential vaccine candidates.