A eletroporação é um fenômeno que promove a formação de poros na membrana citoplasmática quando esta é submetida à exposição de um campo elétrico específico. Dentre as principais aplicações da eletroporação podemos citar a eletroquimioterapia, uma nova terapia contra o câncer, e a terapia gênica, ainda em desenvolvimento. As conexinas são unidades formadoras das junções gap, canais transmembrana responsáveis pela comunicação intercelular e que participam de uma serie de eventos fisiológicos como o crescimento e diferenciação celular. A importância desta família de genes na oncologia está cada vez mais clara dadas às evidencias de seu comportamento de supressor de tumor ou como facilitador da disseminação e metástases de acordo com a fase de em que o câncer se apresenta. A eletroporação como um fenômeno que promove perturbação em membrana poderia interferir de alguma forma na expressão das conexinas. O objetivo deste trabalho foi avaliar os possíveis efeitos de interferência na expressão gênica das células promovidos pela eletroporação em especial na família de genes das conexinas. Para tanto as células foram expostas a um campo semelhante a o utilizado para eletroquimioterapia e avaliadas em diferentes tempos após a exposição. Três linhagens, duas neoplásicas (melanoma B16/BL6 e E9) e uma linhagem não neoplásica (E10) foram utilizadas como modelo experimental para que pudesse ser feita uma analise comparativa e a avaliação dos possíveis diferentes comportamentos das mesmas frente à eletroporação. O estudo da expressão gênica foi realizado pelas técnicas de imunofluorescência, western blot e PCR em tempo real. A Cx 26 foi avaliada na linhagem B16/BL6 e a Cx 43 nas linhagens E9 e E10. Os resultados da imunofluorescência apontaram uma marcação no citoplasma em B16/BL6, predominantemente em núcleo para a linhagem E9 e em núcleo e citoplasma em E10. Somente a linhagem E9 apresentou diferentes marcações entre os grupos, com uma marcação em citoplasma no grupo t1/2 (30 minutos apos a eletroporacao) O western blot mostrou diminuição transiente para as Cxs apenas nas linhagens neoplásicas nos grupos t1/2 e t1 (1 hora apos a eletroporacao). A linhagem E10 apresentou aumento de expressão nos mesmos grupos. O PCR em tempo real apresentou diferenças significativas nos tempos t1/2 e t1 para as linhagens B16/BL6 e E10. A linhagem B16/BL6 teve diminuição de RNAm enquanto a linhagem E10 apresentou aumento de transcrição de RNAm. A linhagem E9 apresentou padrão de expressão bastante heterogêneo. Frente aos resultados apresentados podemos concluir que a eletroporação interferiu de maneira transiente na expressão de conexinas. / Electroporation is a phenomenon that promotes the formation of pores in the cytoplasmic membrane when it is exposed to a specific electric field. The main applications of electroporation include the electrochemotherapy, a new cancer therapy, and gene therapy, still in development. Connexins are forming units of gap junctions, transmembrane channels responsible for intercellular communication and participating in a series of physiological events such as cell growth and differentiation. The importance of this gene family in oncology is increasing. The evidence of its behavior as a tumor suppressor or facilitator of dissemination and metastases according to the stage where the cancer presents itself. Electroporation as a phenomenon that promotes membrane disruption could interfere somehow in the expression of connexins. The aim of this study was to evaluate the possible effects of interference in gene expression. of cells promoted by electroporation in particular gene family of connexins. For this purpose cells were exposed to a electric field similar to that used for Electrochemotherapy and evaluated at different times after exposure. Three cell lines, two neoplastic (melanoma B16/BL6 and E9) and one line non-neoplastic (E10) were used as experimental models that could provide a comparative analysis between the lines and an assessment of the possible different behaviors due to electroporation. Its expression was assessed by immunofluorescence, western blot and real-time PCR. Cx 26 was evaluated in the melanoma cell line B16/BL6 and Cx 43 in the cell lines E9 and E10. The results showed a cytoplasm immunofluorescence staining pattern in the in B16/BL6, predominantly in the nucleus in line E9 and in the nucleus and cytoplasm for cell line E10. Only the cell line E9 had different immunoflurescence stainings between the groups, with a positivity in the cytoplasm in the group t1/2. The western blot showed transient decrease of Cxs only in cell lines neoplastic in the times t1/2 and t1. The lung cell line E10 showed increased expression in the same time points. The real-time PCR showed significant differences in t1/2 and t1 for the cell lines B16/BL6 and E10. The melanoma cell line B16/BL6 had mRNA decreased while the cell line E10 showed increased transcription of mRNA. The cell line E9 showed a very heterogeneous expression pattern. According to our results, we can conclude that electroporation interfered transiently in the expression of connexins.

This research considers the treatment of malignant melanoma. Data were collected from patient records for 78 individuals treated within the Yale Cancer Center Melanoma Unit. The patients were diagnosed with malignant melanoma prior to 1994 and progressed to stage I11 or N disease before their deaths.Due to the rapid progression of malignant melanoma, treatments are initiated at the time of diagnosis. Results of experimental Extreme Drug Resistance (EDR) tests subsequently become available. Physicians are warned the test results are not intended to guide therapy; however, assay directed therapies arguably result in better outcomes with other cancers. Thus, the question arises of whether the use of these tests might benefit patients in this context.This study evaluates the treatment decisions made using a multi-disciplinary approach within the Yale Cancer Center Melanoma Unit regarding patients with malignant melanoma relative to information contained in EDR tests conducted by Oncotech Inc. Within this comparison, three specific outcomes consistent with hypotheses of the study were assessed: the utilization of test results, drug toxicity and cost effectiveness and survival.Results were found to suggest that the initial treatment decisions of the Yale Cancer Center Melanoma Unit were in accord with tests results that were received henceforth for 74 of 78 patients. Two of those patients were in terminal stages of the disease thus treatments were unchanged; however two patients received a change in therapy.It is suggested that physicians made use of the tests as they became available. However, only two patients with therapies altered by the test results were shown to face reduced costs, drug toxicity, or have the benefit of improved survival. From the patient data collected, four patients receiving drugs to which their tumors exhibited EDR were found to exhibit shorter survival times. Literature review studies conducted to evaluate physician treatment approach and patient preference rate favorably the consideration of quality of life issues. The principle finding of this observational study which focuses upon the development of the Yale Cancer Center Melanoma Unit, suggest that a multidisciplinary approach to the treatment of malignant melanoma may offer quality of life benefits to the patient.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2003. / Härtill 5 uppsatser.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:04:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003 / Objetivo: Avaliar, por meio de estudo epidemiologico, a frequencia e a distribuicao corporea dos nevos melanociticos adquiridos (NMA) e observar a influencia das variaveis ambientais e constitucionais nos fenotipos heterogeneos, em uma regiao geografica de intensa exposicao solar. Metodos: Foi realizado estudo transversal das frequencias absoluta e relativa dos NMA de todos os tamanhos, com a inclusao de todas as regioes anatomicas padronizadas pelo protocolo internacional (IARCI OMS, 1990), em 1.279 criancas e adolescentes, com idades de 2 a 18 anos, de creches e escolas publicas na cidade de Votuporanga (20°S), São Paulo, Brasil. Resultados: Setenta e cinco por cento dos individuos apresentaram ate 13 nevos, 50 por cento ate seis nevos e 5 por cento mais de 30 nevos. A contagem de NMA de todos os tamanhos foi mais alta nas regioes toracica e abdominal superior, ombros, face e dorso. Os membros superiores apresentaram mais NMA do que os membros inferiores e houve baixa contagem de NMA nas maos e nos pes. O sexo feminino apresentou quantidade de NMA estatisticamente semelhante ao sexo masculino. As mulheres apresentaram maior contagem de NMA nas faces externas dos membros superiores, face interna do membro superior direito, faces anteriores e posteriores dos membros inferiores, e gluteos. Os homens apresentaram maior contagem de NMA na regiao posterior do pescoco. Observou-se aumento progressivo da contagem de NMA com a idade, com picos aos 13 e aos 16 anos. As regioes de exposicao solar apresentaram maior numero de NMA de maiores diametros (ombros, torax, abdome superior, face e dorso). Os tamanhos dos NMA apresentaram correlacao com a idade, exceto para os gluteos, faces internas dos membros superiores e face posterior da perna direita. Houve forte correlacao entre o numero de NMA e o complexo de pele tipo 3. Exposicao solar, cor dos cabelos e dos olhos, efelides e queimadura solar, tambem apresentaram associacao com alta contagem dos NMA. Conclusoes: Os NMA estao distribuidos por toda a superficie corporal, e em maior numero e tamanho nas regioes de exposicao solar. O aparecimento precoce dos NMA, a distribuicao corporea e a contagem baixa de NMA na populacao heterogenea sustentam a hipotese de que a miscigenacao racial e as regioes anatomicas especificas apresentam diferencas no potencial de proliferacao dos nevos / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Introdução: A incidência de melanoma maligno (MM) está aumentando mundialmente e o manejo de pacientes com doença avançada representa um difícil problema. Durante décadas, a quimioterapia foi o tratamento padrão no tratamento de pacientes com MM metastático. Entretanto, essa modalidade tem produzido resultados desapontadores. Recentemente, com os avanços no conhecimento sobre os eventos moleculares relacionados ao desenvolvimento do MM, novas drogas dirigidas a alvos moleculares de relevância na doença têm sido identificadas. O peptídeo liberador de gastrina (GRP) é um peptídeo neuroendócrino, o qual possui efeito estimulador no crescimento em vários tipos de neoplasias murinas e humanas. Poucos dados são conhecidos em relação à expressão de receptores de GRP (GRPR) em materiais de biópsia de pacientes portadores de MM. A identificação de uma expressão elevada destes receptores no MM poderá permitir uma maior compreensão sobre a biologia desta neoplasia, bem como embasar estudos com o uso de moduladores desta via de sinalização com potencial ação terapêutica. Objetivos: O objetivo desse estudo foi determinar a expressão de receptores de GRP em biópsias de pacientes com MM, bem como buscar eventuais correlações entre os níveis de expressão de GRPR e fatores prognósticos reconhecidos nesta doença. Métodos: Foi realizado um estudo imuno-histoquímico (IHQ) em blocos fixados em formalina e embebidos em parafina, contendo material de biópsia de 51 pacientes portadores de MM cutâneo. Utilizou-se um anticorpo policlonal de coelho anti-GRPR (OPA1-15619, Affinity Bioreagents, USA). Após a quantificação da expressão de GRPR nas amostras, foram analisadas as diferenças de expressão entre subgrupos prognósticos, com a aplicação do teste exato de Fisher. Resultados: A expressão de GRPR foi demonstrada no citoplasma de 42 das 51 (82,4%) amostras de MM cutâneo. A expressão foi considerada forte em 30 amostras (58,9%). Não foi observada diferença significativa na expressão de GRPR quando foram analisadas amostras de MM em sítio primário versus metastático. Foram correlacionados os escores da expressão de GRPR com os achados patológicos associados ao prognóstico do MM cutâneo primário, não tendo sido detectadas diferenças significativas com relação aos níveis de Clark (p=0,35) e Índice espessura de Breslow (p= 0,175). Conclusão: Nosso trabalho mostrou uma expressão de GRPR em amostras de MM cutâneo na vasta maioria dos casos (82,4%). Em 30 amostras (58.3%), a expressão de GRPR foi considerada de forte intensidade. Não houve associação entre a intensidade de expressão de GRPR quando comparadas amostras de sítio primário versus metastático, níveis de Clark ou índices de Breslow. Este estudo é um dos primeiros na literatura a descrever uma expressão de GRPR elevada em amostras obtidas de pacientes portadores de MM cutâneo. Estudos subsequentes, preferencialmente com um maior número amostral, são necessários para confirmar estes achados e permitir melhor análise da expressão deste receptor em distintos subgrupos prognósticos. Se confirmados, os nossos dados podem justificar a realização de estudos que explorem novas estratégias terapêuticas utilizando agentes moduladores da expressão de GRPR em pacientes com MM refratário ao tratamento convencional. / Background: The incidence of malignant melanoma (MM) is increasing worldwide and the management of patients with disseminated disease is a difficult problem. Chemotherapy was the treatment of choice in metastatic melanomas for many decades. However, this option produces disappointing results. Recently, the better understanding about molecular events related do the development of MM allowed the development of new drugs directed against specific molecular targets. The gastrin-releasing peptide (GRP) is a neuroendocrine peptide shown to have growth-stimulatory effects on many types of murine and human cancers. Few data are available about GRP receptor (GRPR) expression in MM. The understanding about the molecular biology of MM may allow the identification of novel intracellular pathways of relevance in this disease, and potential GRPR modulators of therapeutic application in patients with refractory MM. Objectives: The aim of this study was to determine the GRPR expression in biopsy samples of patients with cutaneous MM, as well as to correlate its expression with known prognostic factors of relevance in this disease. Methods: Immunohistochemistry was performed on formalin-fixed, paraffin-embedded biopsy samples from 51 patients with cutaneous MM. A rabbit polyclonal anti-GRPR antibody (OPA1-15619, Affinity Bioreagents, USA) was used. Following the quantification of GRPR expression in the samples, the differences in GRPR expression among distinct prognostic MM subgroups were analyzed, using the Fisher´s test. Results: GRPR immunoexpression was demonstrated in cytoplasm of 42/51 (82.4%) cutaneous MM cases. It was strongly expressed in 30 (58.9%) of the samples. No significant differences between GRPR expression neither in relation to the primary or metastatic site, nor among known prognostic subgroups Clark´s level (p=0.35) and Breslow index ( p= 0.175) was observed. Conclusion: Our study has demonstrated the occurrence of a high GRPR expression in tumor specimens obtained from patients with cutaneous MM (82,4%). In 30 samples, a strong intensity of expression was documented (58.3%). No correlation was observed between the level of GRPR expression in primary or metastatic sites, nor for distinct Clark´s levels or Breslow index. This is one of the first studies demonstrating a high GRPR expression in tumor samples from patients with MM. Further studies are warranted, preferably including a larger patient population, to allow a better analysis of the expression of these receptors in different prognostic subgroups. If these observations are confirmed, the therapeutic use of GRPR inhibitors should be considered in patients with advanced MM who failed conventional treatments.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-05-20T17:51:21Z No. of bitstreams: 1 Nanashara Coelho de Carvalho. Avaliação... 2013.pdf: 833577 bytes, checksum: 03372af4fb8e4842dea6880a1dee5c9a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-20T17:51:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nanashara Coelho de Carvalho. Avaliação... 2013.pdf: 833577 bytes, checksum: 03372af4fb8e4842dea6880a1dee5c9a (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / O câncer é uma doença caracterizada pelo processo proliferativo descontrolado de células transformadas. Devido à possibilidade de metástase, o melanoma cutâneo é considerado um dos cânceres mais agressivos. Produtos naturais derivados de plantas e outros organismos têm sido utilizados como fonte para o desenvolvimento de quimioterápicos empregados no tratamento de diversos tipos de câncer, inclusive do melanoma. A própolis é um produto natural produzido por abelhas a partir de exudatos de brotos e botões florais, e apresenta uma composição química complexa que influência sua atividade biológica. O presente trabalho propõe a investigação da atividade antineoplásica do extrato etanólico da própolis G6 baiana (EEPG6), que apresenta uma composição química distinta de outras própolis, principalmente pela ausência de flavonóides. A citotoxicidade do EEPG6 frente a diferentes linhagens neoplásicas foi determinada através do modelo de incorporação de timidina tritiada. O padrão de morte celular e a influência das espécies reativas de oxigênio foram avaliados em células da linhagem B16-F10 após tratamento com a EEPG6. A eficácia da própolis G6 em reduzir o desenvolvimento neoplásico foi determinada em camundongos da linhagem C57Bl/6 portadores de melanoma subcutâneo. Os resultados encontrados demonstram uma atividade do EEPG6 frente a diferentes linhagens malignas, com valores de CI50 variando entre 13,2 μg/mL e 24,1 μg/mL. Através da dupla marcação com a anexina V e iodeto de propídio, e ensaio de ativação de caspase-3 foi possível determinar que o tratamento com o EEPG6 induz a morte celular por apoptose. Esses dados corroboram com o padrão morfológico de células, alteração do potencial transmembrânico mitocondrial, fragmentação do DNA e bloqueio do ciclo celular encontrados em células tratadas com a própolis G6 e que são alterações características da morte celular por apoptose. No modelo murino de melanoma subcutâneo, o tratamento com a EEPG6 na dose de 200 mg/kg foi capaz de inibir em cerca de 81,72% o peso médio dos tumores. Desse modo, a própolis G6 baiana revela-se como uma fonte de substâncias com potencial antineoplásico na terapia convencional. / Cancer is a disease process characterized by uncontrolled proliferation of transformed cells. Due to the possibility of metastasis, cutaneous melanoma is considered one of the most aggressive cancers. Natural products derived from plants and other organisms have been used as a source for the development of chemotherapeutic agents used in the treatment of various cancers, including melanoma. Propolis is a natural product produced by bees from exudates shoots and buds, and has a complex chemical composition that influence their biological activity. This study aims to investigate the anticancer activity of ethanol extract of G6 propolis from Bahia (EEPG6), which has a different chemical composition of other propolis, especially in the absence of flavonoids. The cytotoxicity of the EEPG6 against different neoplastic strains was determined using the model of tritiated thymidine incorporation. The pattern of cell death and the influence of reactive oxygen species were assessed in cell line B16-F10 after treatment with EEPG6. The effectiveness of propolis G6 in reducing neoplastic development was determined in mice of strain C57BL/6 bearing subcutaneous melanoma. The results demonstrate the EEP G6 activity against different strains malignant, with IC50 values ranging from 13.2 mg/mL and 24.1 mg/mL. Through the double staining with Annexin V and propidium iodide, and testing the activation of caspase-3 was determined that treatment with EEPG6 induces cell death by apoptosis. These data corroborate with the cell morphology, alteration of mitochondrial transmembrane potential, DNA fragmentation and cell cycle arrest found in cells treated with propolis G6 and changes which are characteristic of apoptotic cell death. In a murine model of subcutaneous melanoma, treatment with EEPG6 at a dose of 200 mg/kg was able to reduce the average weight of the tumors in about 81.72%. Thus, G6 propolis from Bahia appears as a source of potential anticancer substances in conventional therapy

Os tumores de origem melanocítica representam as mais frequentes neoplasias intra-oculares diagnosticadas nos cães. O presente trabalho teve por objetivo realizar estudo retrospectivo das neoplasias melanocíticas da úvea do cão analisando suas características morfológicas e epidemiológicas. Foi estudado um total de 29 casos; destas, 51,7 % foram diagnosticadas como melanocitoma, enquanto que 48,3 % como melanoma. As raças mais acometidas foram SRD (sem raça definida), Cocker Spaniel Inglês e Labrador Retriver, porém não houve predominância racial significativa. A faixa etária foi de 6 a 15 anos, com média de 10,3 anos. Os tumores acometeram igualmente machos e fêmeas. A úvea anterior foi a localização mais comum, representando 96,5 % de todos os tumores, enquanto a úvea posterior representou 3,5 %, sendo o último, um melanoma. Em 5 casos, o tumor ocupava todo espaço intra-ocular, sendo todos melanomas. Os melanocitomas apresentaram predominância de células grandes, redondas ou poliédricas, densamente pigmentadas e núcleo pequeno. Os melanomas apresentaram 2 padrões celulares distintos. Dos 14 melanomas, 8 (57,2 %) eram compostos por células epitelióides, 2 (14,3 %) por células fusiformes, e 4 (28,5%) apresentaram padrão misto. Em 7 melanomas observou-se áreas de melanocitoma, sugerindo transformação maligna. / Melanocytic tumors are the most common intraocular neoplasia in dogs. The aim of the present work was to perform a retrospective study of the canine uveal melanocytic neoplasias analyzing the morphologic and epidemiologic features. It was 29 cases in total; 51,7 % was diagnosed as melanocitoma, while 48,3 % was diagnosed as melanoma. The most common breed was mixed breed dogs, English Cocker Spaniel and Labrador, but there was no significant racial predominance. The age range was 6 to 15 years old, with mean of 10,3 years old. The tumors affected equally males and females. The anterior uvea was the most common site, representing 95,5 % of all tumors and the posterior uvea represented 3,5 %, the latter, was a melanoma. In five cases (17,2%), the tumor occupied the entire intraocular space, all of them melanomas. The melanocitomas presented predominance of round or poliedric, plump cells, densely pigmented with small nucleus. The melanomas presented two distinct patterns. Of the 14 melanomas, eight (57,2 %) was composed of epithelioid cells, two (14,3 %) of spindle cells, and four (28,5 %) presented mixed pattern. There were 7 melanomas that presented melanocitoma areas, suggesting malignant transformation.

Introdução: A incidência de melanoma maligno (MM) está aumentando mundialmente e o manejo de pacientes com doença avançada representa um difícil problema. Durante décadas, a quimioterapia foi o tratamento padrão no tratamento de pacientes com MM metastático. Entretanto, essa modalidade tem produzido resultados desapontadores. Recentemente, com os avanços no conhecimento sobre os eventos moleculares relacionados ao desenvolvimento do MM, novas drogas dirigidas a alvos moleculares de relevância na doença têm sido identificadas. O peptídeo liberador de gastrina (GRP) é um peptídeo neuroendócrino, o qual possui efeito estimulador no crescimento em vários tipos de neoplasias murinas e humanas. Poucos dados são conhecidos em relação à expressão de receptores de GRP (GRPR) em materiais de biópsia de pacientes portadores de MM. A identificação de uma expressão elevada destes receptores no MM poderá permitir uma maior compreensão sobre a biologia desta neoplasia, bem como embasar estudos com o uso de moduladores desta via de sinalização com potencial ação terapêutica. Objetivos: O objetivo desse estudo foi determinar a expressão de receptores de GRP em biópsias de pacientes com MM, bem como buscar eventuais correlações entre os níveis de expressão de GRPR e fatores prognósticos reconhecidos nesta doença. Métodos: Foi realizado um estudo imuno-histoquímico (IHQ) em blocos fixados em formalina e embebidos em parafina, contendo material de biópsia de 51 pacientes portadores de MM cutâneo. Utilizou-se um anticorpo policlonal de coelho anti-GRPR (OPA1-15619, Affinity Bioreagents, USA). Após a quantificação da expressão de GRPR nas amostras, foram analisadas as diferenças de expressão entre subgrupos prognósticos, com a aplicação do teste exato de Fisher. Resultados: A expressão de GRPR foi demonstrada no citoplasma de 42 das 51 (82,4%) amostras de MM cutâneo. A expressão foi considerada forte em 30 amostras (58,9%). Não foi observada diferença significativa na expressão de GRPR quando foram analisadas amostras de MM em sítio primário versus metastático. Foram correlacionados os escores da expressão de GRPR com os achados patológicos associados ao prognóstico do MM cutâneo primário, não tendo sido detectadas diferenças significativas com relação aos níveis de Clark (p=0,35) e Índice espessura de Breslow (p= 0,175). Conclusão: Nosso trabalho mostrou uma expressão de GRPR em amostras de MM cutâneo na vasta maioria dos casos (82,4%). Em 30 amostras (58.3%), a expressão de GRPR foi considerada de forte intensidade. Não houve associação entre a intensidade de expressão de GRPR quando comparadas amostras de sítio primário versus metastático, níveis de Clark ou índices de Breslow. Este estudo é um dos primeiros na literatura a descrever uma expressão de GRPR elevada em amostras obtidas de pacientes portadores de MM cutâneo. Estudos subsequentes, preferencialmente com um maior número amostral, são necessários para confirmar estes achados e permitir melhor análise da expressão deste receptor em distintos subgrupos prognósticos. Se confirmados, os nossos dados podem justificar a realização de estudos que explorem novas estratégias terapêuticas utilizando agentes moduladores da expressão de GRPR em pacientes com MM refratário ao tratamento convencional. / Background: The incidence of malignant melanoma (MM) is increasing worldwide and the management of patients with disseminated disease is a difficult problem. Chemotherapy was the treatment of choice in metastatic melanomas for many decades. However, this option produces disappointing results. Recently, the better understanding about molecular events related do the development of MM allowed the development of new drugs directed against specific molecular targets. The gastrin-releasing peptide (GRP) is a neuroendocrine peptide shown to have growth-stimulatory effects on many types of murine and human cancers. Few data are available about GRP receptor (GRPR) expression in MM. The understanding about the molecular biology of MM may allow the identification of novel intracellular pathways of relevance in this disease, and potential GRPR modulators of therapeutic application in patients with refractory MM. Objectives: The aim of this study was to determine the GRPR expression in biopsy samples of patients with cutaneous MM, as well as to correlate its expression with known prognostic factors of relevance in this disease. Methods: Immunohistochemistry was performed on formalin-fixed, paraffin-embedded biopsy samples from 51 patients with cutaneous MM. A rabbit polyclonal anti-GRPR antibody (OPA1-15619, Affinity Bioreagents, USA) was used. Following the quantification of GRPR expression in the samples, the differences in GRPR expression among distinct prognostic MM subgroups were analyzed, using the Fisher´s test. Results: GRPR immunoexpression was demonstrated in cytoplasm of 42/51 (82.4%) cutaneous MM cases. It was strongly expressed in 30 (58.9%) of the samples. No significant differences between GRPR expression neither in relation to the primary or metastatic site, nor among known prognostic subgroups Clark´s level (p=0.35) and Breslow index ( p= 0.175) was observed. Conclusion: Our study has demonstrated the occurrence of a high GRPR expression in tumor specimens obtained from patients with cutaneous MM (82,4%). In 30 samples, a strong intensity of expression was documented (58.3%). No correlation was observed between the level of GRPR expression in primary or metastatic sites, nor for distinct Clark´s levels or Breslow index. This is one of the first studies demonstrating a high GRPR expression in tumor samples from patients with MM. Further studies are warranted, preferably including a larger patient population, to allow a better analysis of the expression of these receptors in different prognostic subgroups. If these observations are confirmed, the therapeutic use of GRPR inhibitors should be considered in patients with advanced MM who failed conventional treatments.

Os objetivos deste trabalho foram os de avaliar a eficácia da cimetidina como única forma de tratamento para reduzir o tamanho de melanomas localizados em região ventral de cauda e períneo em equinos tordilhos, determinar a eficácia da droga no controle do aparecimento de novas formações nas mesmas regiões e avaliar a duração do tratamento com cimetidina após a sua suspensão com relação à manutenção da redução de tamanho e do aparecimento de novas formações. Para o desenvolvimento do trabalho foram utilizados 32 equinos tordilhos, sem restrições de raça ou sexo, com idade entre sete e 30 anos, com melanomas em região de cauda e períneo de até 5,0 cm de diâmetro e sem histórico anterior de tratamento com cimetidina ou procedimento cirúrgico para esta finalidade. Os animais foram divididos em dois grupos: 21 animais no grupo tratamento que receberam 18 mg/kg de cimetidina por via oral, BID durante noventa dias e 11 animais no grupo controle, que não receberam nenhuma medicação ou placebo. Os equinos foram avaliados quinzenalmente durante o período de tratamento e monitorados mensalmente durante 150 dias após o término da administração da droga. A cimetidina, na dose de 18 mg/kg VO BID, apresenta ação sobre os melanomas em equinos tordilhos, mas sua ação mostrou-se bastante variável e individual, além de não apresentar efetividade na manutenção da redução do volume após o término do tratamento. / The purpose of this study was to evaluate the efficacy of cimetidine as treatment for melanoma present in the perineal area and ventral tail of Grey horses. Reduction in tumor volume and the capability of the drug to control the appearance of new nodules were evaluated. Thirty two grey horses with ages ranging between sete and 30 years and no predilection of breed or gender were used in this study. All the animals selected had no attempted treatment prior to this study. The animals were divided in two groups: the treatment group, consisting of 21 horses and the control group consisting of 11 animals. Cimetidine was administered at a dosage of 18 mg/kg orally twice a day for a total of ninety days. During the lenght of treatment, the group was evaluated every two weeks, and all the animals were monitored once a month for another 150 days after the end of therapy. The efficacy of the treatment with cimetidine was observed in 11 animals of the treatment group which showed size reduction of the masses during the drug administration period followed by a slight increase and stabilization at lower volumes than the initial measures. In addition, the animals that responded to the treatment presented a very variable and individual response.

Introdução: A incidência de melanoma maligno (MM) está aumentando mundialmente e o manejo de pacientes com doença avançada representa um difícil problema. Durante décadas, a quimioterapia foi o tratamento padrão no tratamento de pacientes com MM metastático. Entretanto, essa modalidade tem produzido resultados desapontadores. Recentemente, com os avanços no conhecimento sobre os eventos moleculares relacionados ao desenvolvimento do MM, novas drogas dirigidas a alvos moleculares de relevância na doença têm sido identificadas. O peptídeo liberador de gastrina (GRP) é um peptídeo neuroendócrino, o qual possui efeito estimulador no crescimento em vários tipos de neoplasias murinas e humanas. Poucos dados são conhecidos em relação à expressão de receptores de GRP (GRPR) em materiais de biópsia de pacientes portadores de MM. A identificação de uma expressão elevada destes receptores no MM poderá permitir uma maior compreensão sobre a biologia desta neoplasia, bem como embasar estudos com o uso de moduladores desta via de sinalização com potencial ação terapêutica. Objetivos: O objetivo desse estudo foi determinar a expressão de receptores de GRP em biópsias de pacientes com MM, bem como buscar eventuais correlações entre os níveis de expressão de GRPR e fatores prognósticos reconhecidos nesta doença. Métodos: Foi realizado um estudo imuno-histoquímico (IHQ) em blocos fixados em formalina e embebidos em parafina, contendo material de biópsia de 51 pacientes portadores de MM cutâneo. Utilizou-se um anticorpo policlonal de coelho anti-GRPR (OPA1-15619, Affinity Bioreagents, USA). Após a quantificação da expressão de GRPR nas amostras, foram analisadas as diferenças de expressão entre subgrupos prognósticos, com a aplicação do teste exato de Fisher. Resultados: A expressão de GRPR foi demonstrada no citoplasma de 42 das 51 (82,4%) amostras de MM cutâneo. A expressão foi considerada forte em 30 amostras (58,9%). Não foi observada diferença significativa na expressão de GRPR quando foram analisadas amostras de MM em sítio primário versus metastático. Foram correlacionados os escores da expressão de GRPR com os achados patológicos associados ao prognóstico do MM cutâneo primário, não tendo sido detectadas diferenças significativas com relação aos níveis de Clark (p=0,35) e Índice espessura de Breslow (p= 0,175). Conclusão: Nosso trabalho mostrou uma expressão de GRPR em amostras de MM cutâneo na vasta maioria dos casos (82,4%). Em 30 amostras (58.3%), a expressão de GRPR foi considerada de forte intensidade. Não houve associação entre a intensidade de expressão de GRPR quando comparadas amostras de sítio primário versus metastático, níveis de Clark ou índices de Breslow. Este estudo é um dos primeiros na literatura a descrever uma expressão de GRPR elevada em amostras obtidas de pacientes portadores de MM cutâneo. Estudos subsequentes, preferencialmente com um maior número amostral, são necessários para confirmar estes achados e permitir melhor análise da expressão deste receptor em distintos subgrupos prognósticos. Se confirmados, os nossos dados podem justificar a realização de estudos que explorem novas estratégias terapêuticas utilizando agentes moduladores da expressão de GRPR em pacientes com MM refratário ao tratamento convencional. / Background: The incidence of malignant melanoma (MM) is increasing worldwide and the management of patients with disseminated disease is a difficult problem. Chemotherapy was the treatment of choice in metastatic melanomas for many decades. However, this option produces disappointing results. Recently, the better understanding about molecular events related do the development of MM allowed the development of new drugs directed against specific molecular targets. The gastrin-releasing peptide (GRP) is a neuroendocrine peptide shown to have growth-stimulatory effects on many types of murine and human cancers. Few data are available about GRP receptor (GRPR) expression in MM. The understanding about the molecular biology of MM may allow the identification of novel intracellular pathways of relevance in this disease, and potential GRPR modulators of therapeutic application in patients with refractory MM. Objectives: The aim of this study was to determine the GRPR expression in biopsy samples of patients with cutaneous MM, as well as to correlate its expression with known prognostic factors of relevance in this disease. Methods: Immunohistochemistry was performed on formalin-fixed, paraffin-embedded biopsy samples from 51 patients with cutaneous MM. A rabbit polyclonal anti-GRPR antibody (OPA1-15619, Affinity Bioreagents, USA) was used. Following the quantification of GRPR expression in the samples, the differences in GRPR expression among distinct prognostic MM subgroups were analyzed, using the Fisher´s test. Results: GRPR immunoexpression was demonstrated in cytoplasm of 42/51 (82.4%) cutaneous MM cases. It was strongly expressed in 30 (58.9%) of the samples. No significant differences between GRPR expression neither in relation to the primary or metastatic site, nor among known prognostic subgroups Clark´s level (p=0.35) and Breslow index ( p= 0.175) was observed. Conclusion: Our study has demonstrated the occurrence of a high GRPR expression in tumor specimens obtained from patients with cutaneous MM (82,4%). In 30 samples, a strong intensity of expression was documented (58.3%). No correlation was observed between the level of GRPR expression in primary or metastatic sites, nor for distinct Clark´s levels or Breslow index. This is one of the first studies demonstrating a high GRPR expression in tumor samples from patients with MM. Further studies are warranted, preferably including a larger patient population, to allow a better analysis of the expression of these receptors in different prognostic subgroups. If these observations are confirmed, the therapeutic use of GRPR inhibitors should be considered in patients with advanced MM who failed conventional treatments.