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Diagnostico histologico e expressão dos marcadores p53, c-erbB-2, Ki-67, PCNA e CD34 em pacientes portadoras de tumor de celulas da granulosa do ovario

Kusamura, Shigeki 10 September 2001 (has links)
Orientadores : Sophie Françoise Mauricette Derchain, Liliana Ap. Lucci de Angelo Andrade / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T20:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kusamura_Shigeki_M.pdf: 1370354 bytes, checksum: 947a904cf0349b72bf5c76419ada061d (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Objetivo: investigar em tumores de células da granulosa do ovário (TCGO) a credibilidade de seu diagnóstico com coloração H&E e a expressão do p53 mutante, do c-erbB-2, Ki-67, PCNA e a atividade angiogênica (CD34), bem como as correlações destes marcadores com características clínicas e histológicas. Sujeitos e método: Três patologistas (A,B e C) reavaliaram os 22 casos de TCGO tratados no CAISM/UNICAMP nos últimos 12 anos, sendo os marcadores detectados através de imuno-histoquímicas em cortes histológicos preparados a partir de blocos de parafina. Foram calculados os coeficientes kappa para avaliação da concordância interobservador entre os patologistas. A análise de associação entre as variáveis categóricas foi realizada com o teste exato de Fisher e entre variáveis categóricas e contínuas, com teste de Mann- Whitney. Resultados: Vinte e um casos foram confirmados como TCGO. Quatro casos foram diagnosticados como TCGO, mesmo sem unanimidade entre os patologistas devido à imunorreatividade para a inibina. Os coeficientes kappa foram de 0,42 (IC95%: -0,05; 0,88); 0,50 (IC95%: 0,13; 0,86); 0,24 (IC95%: -0,14 a 0,61), respectivamente para as duplas de patologistas A/B, A/C e B/C. A IHQ para os marcadores foi realizada em 18 pacientes. Nove (50%) pacientes apresentaram tumores <10cm. Treze (72%) pacientes apresentaram algum componente sólido difuso/sarcomatóide. Em 12 (66%) casos a atipia celular era ausente/leve e em 6 (33%) casos, moderada/intensa. A contagem mitótica foi < 2/10 CMA em 14 (78%) casos. Seis (33%) pacientes apresentaram extensão extra-ovariana da doença (estádios III/IV). O seguimento médio foi de 45,3 meses (0,7 a 128,8). Uma, zero e 11 pacientes apresentaram expressão para o p53 mutante, c-erbB-2 e Ki-67 (focal), respectivamente. Quatorze (78%) casos foram classificados como de alto índice de proliferação, quando avaliados pelo PCNA. A densidade microvascular média foi de 29,0/mm2 (CI95%: 21,8 a 36,1). Apenas o Ki-67, PCNA e o CD34 foram expressos em níveis adequados para uma adequada correlação com outras variáveis. Não houve associação estatisticamente significante entre o índice de proliferação dos tumores (avaliada pelo PCNA), ou Ki-67 ou densidade microvascular com o tamanho do tumor, extensão extra-ovariana da doença, atividade mitótica, atipia celular e padrão histológico. Conclusão: Em nossa casuística, o estudo dos TCGO através da IHQ revelou neoplasias cujo mecanismo de desenvolvimento aparentemente não envolve mutações do p53 e nem expressão aumentada do c-erbB-2; apresentaram resultados conflitantes no que diz respeito ao índice de proliferação celular conforme foram avaliados pelo Ki-67 ou PCNA e, finalmente, são pouco angiogênicos quando avaliados pelo CD34 / Abstract: The purpose of this study was to investigate the credibility of diagnosis of granulosa cell tumor of ovary (GCTO) through the morphological evaluation employing only H&E staining. We also evaluated the expression of mutant p53, c-erbB-2, Ki-67, PCNA as well as angiogenic activity (CD34) and the correlation of these variables with clinical and histological characteristics. Three well trained pathologists (A, B, and C) reevaluated the slides of 22 GCTO patients that had been treated and followed at the CAISM/UNICAMP in the last 12 years. The interobserver agreement was studied calculating kappa coefficient. We employed the Fisher Exact test to assess the correlation between categorical variables and the Mann-Whitney test for the correlation between categorical and continuous variables. Twenty one cases were deemed GCTO after evaluation. Four cases received the diagnosis of GCTO due to positive reaction to inhibin, despite the divergent opinion of one the pathologist. The kappa coefficients were 0.42 (IC95%: -0.05; 0.88); 0.50 (IC95%: 0.13; 0.86); and 0.24 (IC95%: -0.14 a 0.61), for pairs A/B, A/C and B/C observers, respectively. We performed immunohistochemistry for the biological markers in 18 cases. Concerning the clinical and histological variables: 9 (50%) patients presented tumor size <10cm; 13 (72%) patients presented some solid diffuse/sarcomatoid pattern; 12 (66%) cases presented no/slight atypia and 6 (33%) cases presented moderate/strong atypia; 14 cases presented < 2 mitoses/10 HPF; 6 (33%) patients presented extraovarian extension of the disease (stage III/IV). The mean follow-up was 45.3 months (range: 0.7 to 128.8). One, 0 and 11 cases presented positive expression for mutant p53, c-erbB-2 e Ki-67 (focal), respectively. Fourteen (78%) cases were classified as high proliferating index when evaluated by PCNA. The mean microvascular density was 29,0/mm2(IC95%: 21,8 to 36,1). Only Ki-67, PCNA and CD34 were expressed at adequate levels for further correlation with other variables. There was no statistically significant link between either the PCNA proliferating index or the Ki-67 expression or microvascular density with tumor size, extraovarian extension of disease, mitotic activity, cellular atypia and histological pattern. We concluded that the diagnosis of GCTO is difficult in some cases, suggesting the evaluation be complemented with a panel of markers such as inhibin. We also verified that GCTO is a neoplasm that apparently did not involve mutations of p53 nor overexpression/amplification of c-erbB-2; presented conflictings results concerning the proliferating activity when evaluated by PCNA and Ki-67; and finally presented a low angiogenic activity when evaluated by CD34 / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia
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Uma abordagem proteomica na identificação do citocromo P450 em Prochilodus Scrofa : uma nova ferramenta em ensaios ecotoxicologicos

Picoli, Maria Eleonora Feracin da Silva 25 October 2004 (has links)
Orientadores: Jose Camillo Novello, Nilce Correa Meirelles / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:31:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Picoli_MariaEleonoraFeracindaSilva_D.pdf: 2863691 bytes, checksum: 074616b1b6cea1416a4f26d7825c6220 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Citocromos P450 (CYP) constituem uma superfamília de heme proteínas envolvidas na fase I da biotransformação que participa da detoxificação de compostos endógenos e exógenos. Para que esta atividade seja exercida existe a necessidade da associação do CYP com o citocromo b5 e com a enzima NADPH citocromo P450. Esta associação só ocorre graças ao ambiente de membrana. Qualquer alteração na uniformidade do ambiente lipídico leva à alterações na funcionalidade do sistema CYP. Baseado nesta informação e no fato de que vários poluentes têm sua solubilidade aumentada pela adição destes compostos, realizamos testes in vitro utilizando microssomas hepáticos de Curimbatá (Prochilodus scrofa) - um peixe tropical brasileiro pertencente a família Prochilodontidae - e observamos que dois surfactantes normalmente utilizados na solubilização de pesticidas, o Triton X- 100 e o Tween 80. O conteúdo total de CYP e a atividade da EROD foram fortemente inibidos pelo Triton X-100 e pelo Tween 80 de uma maneira dose dependente; o conteúdo de CYP foi reduzido à zero. A atividade da EROD foi completamente inibida pelo Triton X-100 e inibida em mais de 40% na presença do Tween 80. A estrutura molecular do surfactante influencia na alteração que o sistema irá sofrer visto que ambos são hábeis em interagir com as proteínas do sistema microssomal, em especial as monooxigenases, alterando sua conformação e, consequentemente, destruindo sua função. Os resultados desta primeira parte mostraram que os surfactantes interagem com os componentes do sistema microssomal hepático levando a inibição do sistema. A atividade do CYP, que foi usada como biomarcadora de exposição ao xenobiótico pode ser utilizada como marcadora em associação com outras enzimas. Estes resultados levantaram a hipótese de que os surfactantes também poderiam alterar a atividade do CYP quando utilizados em processos de purificação. Por ser uma proteína de membrana, o CYP precisa ser solubilizado antes de ser purificado. No entanto os surfactantes utilizados durante o processo poderiam levar a destruição do CYP, mascarando a real concentração do CYP obtido durante o processo. Sendo assim, na segunda parte deste trabalho desenvolvemos um novo método de purificação que exclui a necessidade de surfactantes durante o processo de purificação. A purificação do CYP1A foi feita utilizando-se uma coluna C18 associada à HPLC de fase reversa. O CYP purificado foi caracterizado em relação as suas propriedades eletroforéticas, imunoquímica e atividade biocatalítica. A fração isolada como CYP produz uma única banda uniforme com massa molecular ao redor de 58.000 Da em SDS - PAGE e mostra uma forte reatividade cruzada com anticorpos produzidos contra o CYP1A de trutas. A fração isolada também foi encapsulada em dois tipos de sistemas reconstituídos, um composto por lipídeos neutros e outro por lipídios negativamente carregados. Em ambos os sistemas foi possível detectar a atividade da EROD, mas não a atividade da PROD, confirmando que a fração purificada corresponde a CYP1A e teve todas as suas características enzimáticas conservadas. Houve um aumento da atividade quando a o CYP1A foi encapsulado nas vesículas contendo lipídeos negativamente carregados, confirmando que a carga do lipídeo é essencial para a manutenção das características enzimáticas do CYP. O processo se mostrou eficaz para a purificação do CYP1A mantendo todas a suas características conservadas. No entanto não permitiu a separação das isoformas CYP1A. A terceira parte do projeto teve como objetivo a identificação das isoformas CYP1A1 e CYP1A3 através de eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF. Foram identificados 3 spots com a mesma massa molecular, mas com pIs variando entre 5,5 e 6,5, sugerindo a presença de três isoformas do CYP1. Os spots foram selecionados e tratados com tripsina. O mapa de peptídeos obtidos através da digestão dos spots selecionados teve suas massas identificadas por espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF e através da digestão teórica de seqüências de CYP já existentes no banco de dados. Houve a identificação de 10 picos que correspondem a 31% do total de aminoácidos traduzidos para a família CYP1A de peixes e mamíferos. Todos os três spots tiveram o mesmo padrão de fragmentação confirmando que eles são isoformas CYP1A1 e CYP1A3. Dentre estes peptídeos, dois demonstraram maior importância, o pico T3, que representaria um domínio conservado do CYP1A e o pico T2, que representaria uma região conservada apenas em peixes. Os resultados sugerem fortemente que este novo procedimento seria eficiente para identificar, simultaneamente, diferentes isoformas do CYP1A hepático e suas regiões conservadas. Dada a sensibilidade das técnicas de proteômica, nesta ultima fase do projeto propomos o uso da eletroforese bidimenisonal associada à espectrometria de massas na identificação de isoenzimas de P450 diferencialmente expressas em microssomas hepáticos de Curimbatás tratados com 3 ¿ metilcloranteno (3-MC). A avaliação das proteínas expressas em cada tratamento foi feita através de eletroforese uni e bidimensional e a identificação feita através da análise de massa de peptídeos. Ambas as eletroforeses permitiram a identificação de proteínas induzidas de maneira diferencial pelo 3-MC, embora a eletroforese tenha sido mais efetiva na identificação de proteínas altamente homólogas, como a CYP1A1 e CYP1A3. Também foi possível a identificação de outras proteínas atuantes na detoxificação de xenobióticos, dentre elas o citocromo b5 (~15kDa) e a glutationa ¿ S ¿ Transferase microssomal (~20kDa). Os dados demonstrados no projeto mostram claramente que o sistema associado a abordagem proteômica têm um grande potencial para serem utilizados na identificação de proteínas expressas diferencialmente conforme a situação ambiental / Abstract: Cytochromes P450 constitute a superfamily of the phase I enzymes whose primary task is the detoxification of both endogenous and xenobiotic compounds. This activity is only possible through the association of CYP with cytochrome b5 and the enzyme NADPH cytochrome P450 reductase. This association is possible because of membrane environment. Any alteration in this environmet leads to altereation on the functionality of CYP system. Based on this information and in the fact that various pollutants have its solubility increased by the surfactant addition, we had done in vitro tests using hepatic microsomes of Curimbatá - a Brazilian fish belong the family Prochilodontidae ¿ and observed the effects of Triton X-100 and Tween 80 in CYP system. Both surfactants are commonly used in pesticides solubilization. Total CYP and EROD were strongly inhibited by Triton X-100 and Tween 80 in a concentration-dependent way; the content of CYP was reduced until zero while EROD activity was completely inhibited in the presence of Triton X-100 and more than 40% inhibited in the presence of Tween 80. Each surfactant causes a different effect on each antioxidant enzyme. No effect was detected in SOD activity in the presence of even Triton X-100 or Tween 80. Triton X-100 increase catalase activity, while Tween 80 decreases this enzyme activity. The molecular structure of the surfactants causes the alteration of this system, since they are able to interact with the microsomal protein, especially with monooxigenase¿s components, altering their conformation and, consequently destroying their function. Our results in this first part suggest that surfactants can interact with components of the microsomal system leading to inhibition of CYP. Therefore, CYP activity, which has been used as a biomarker of xenobiotic exposure, should be used as a marker in association with other enzymes. With those results we suggest the hypothesis that surfactants that are commonly used in the purification process could alter the CYP activity. Since that CYP is a membrane protein, the solubilization process is necessary before the purification process to separated membrane lipids of proteins. The use of surfactants in the process could mask the real concentration of CYP obtained. Then, in the second part of this project we develop a new method to of purification that excludes the necessity of surfactants. The purification of CYP1A was done by Reverse Phase HPLC on a C18 column. Purified CYP1A was characterized with respect to electrophoretic, immunochemical and biocatalyst properties. CYP1A fractions produced a single uniform band on SDS-PAGE with an apparent molecular mass of 58 kDa. Purified CYP1A of P. scrofa showed strong cross-reactivity with antibodies directed against CYP1A from trout. The fraction was also encapsulated in two different reconstituted systems; one composed of neutral lipids and another of negatively charged lipids. In both of them, we could detect EROD activity but not PROD activity, which confirms that the CYP1A was purified with all its enzyme activity. There was an increase of activity when CYP1A and NADPH cytochrome P450 (CYP) reductase were encapsulated in negatively charged lipids, which confirms that the charge of lipid is essential to CYP1A activity. All these characteristics strongly suggest that this new procedure is efficient for purifying hepatic CYP1A from P. scrofa, showing that the CYP1A isoform of this fish has a highly conserved protein region. However the process was not efficient to separate the isoforms of CYP1A. In the third part of project we aimed the identification of CYP1A1 and CYP1A3 isoforms through bidimensional electrophoresis and MALDI ¿ TOF mass spectrometry. Three major spots were detected. These spots had the same molecular weight, but presented pI in a range of 5.5 to 6.0, suggesting the presence of 3 isoforms of CYP1. Spots were collected, and treated with Trypsin and the resultant peptides were measured by MALDI-TOF Mass Spectrometry. Tryptic peptide mass fingerprint of CYP1A showed the presence of 10 masses that matched the expected tryptic peptides obtained through theory digestion of the database sequence. These values corresponded to 31% of the translated amino acids of CYP1A family of other fishes and mammals. All spots had the same profile of fragmentation, which confirms that they are isoforms. Among these peptides, two demonstrated major importance T3, which is a conservative domain of CYP1A and T2, which could represent a more conservative region that occurs only in fishes. All these characteristics strongly suggest that this new procedure efficiently identifies, simultaneously, different isoforms of hepatic CYP1A from P. scrofa and its conservative region of protein. Due to the sensibility of the technique, in this last part of the project we try to identify the CYP isoenzymes that are expressed in hepatic microsomes of Curimbatá using one ¿ dimensional (1 ¿ DE) and two dimensional (2 ¿ DE) gel electrophoresis followed by tryptic peptide mapping (PMF). Both 1 ¿DE and 2 ¿ DE showed that 3 ¿ MC induces not only CYP1A1 and CYP1A3, but other biotransformation enzymes presents in endoplasmic reticulum like cytochrome b5 (~15kDa), NADPH cytochrome P450 reductase (~75kDa) and microsomal Glutathione ¿ S ¿ Tranferase (~20kDa). There were 25 proteins that appeared only in 3 ¿ MC treated group and a matching of 38% between control and 3 ¿ MC gel. The results demonstrated here show that CYP system associated to the proteomic approach have great potential to be utilized in the identification of proteins differentially expressed according to environmental situation / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Celular e Estrutural
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Caracterização da Expressão Molecular da Podoplanina e do Ki-67 nas Displasias Epiteliais e Carcinomas de Células Escamosas Orais: Análise da Transformação Maligna

RIBEIRO, F. A. 18 December 2015 (has links)
Made available in DSpace on 2018-08-01T23:26:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9470_Dissertação completa Fabiano de Azevedo Ribeiro.pdf: 8115569 bytes, checksum: 306f9541ebd3016b1d21984298fc0476 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Introdução: O carcinoma de células escamosas oral(CCEO) é a lesão maligna mais comum na cavidade oral e o seu desenvolvimento envolve uma série de mecanismos moleculares, podendo ser precedido clinicamente pelas desordens orais com potencial de malignização (DOPM). Biomarcadores expressos na fase de proliferação celular e envolvidos na invasividade pode levar a um melhor entendimento do processo da carcinogênese. Objetivos: Caracterizar a expressão do ki-67 e D2-40 em DOPM e CCEO e suas respectivas margens clinicamente sadias e confrontar com os graus histopatológicos e os dados clinicopatológicos dessas lesões. Materiais e métodos: Neste estudo seccional, foram avaliadas 25 DOPM, 10 CCEO e seus respectivos tecidos perilesionais, entre Maio/2013 a Julho/2014, no Núcleo de Diagnóstico Bucal. As alterações histomorfológicas foram avaliadas nas DOPM e CCEO em hematoxilina-eosina e a expressão do Ki-67 e Podoplanina, qualitativa e quantitativamente, pela técnica de imunohistoquímica. Resultados: Para o grupo das DOPM, a maioria das lesões não apresentaram alterações displásicas em suas margens, já no CCEO, 50% apresentaram DEO severa e 20% DEO moderada e 30%, DEO leve. Na avaliação imunohistoquímica, comparando as lesões e seus tecidos perilesionais, o Ki-67 mostrou diferença nas DOPM (p=0,016), entre as lesões de DOPM e CCEO (p=0,006) e entre tecido perilesional e tecido peritumoral (p=0,001). Houve uma relação direta entre maior grau de DEO e maior expressão do ki-67 nas DOPM (p=0,010) e seus tecidos peritumorais (p=0,022). A podoplanina mostrou índice de expressão maior nas lesões propriamente ditas do que em seus tecidos perilesionais e peritumorais, embora não apresentou diferença significativa. Houve uma relação direta (p=0,001) entre severidade de DEO e expressão da podoplanina nas lesões de DOPM e correlação positiva entre expressão de ki-67 e podoplanina nas lesões de CCEO (p=0,000). Conclusões: Constatou-se um aumento gradual e em ordem crescente da expressão dos marcadores moleculares estudados nos tecidos perilesionais, DOPM, tecidos peritumorais e CCEO. Além da correlação significativa entre a proliferação celular e o grau de displasia epitelial oral e o grau de diferenciação do CCEO, sugerindo o Ki-67 como critério adicional para determinar a gravidade da DOPM. A correlação positiva entre Ki-67 e D2-40 no CCEO aponta-os como biomarcadores de prognóstico e terapias alvo contra o câncer. Mais estudos podem revelar uma melhor participação da podoplanina na carcinogênese.
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A tiroglobulina é ainda detectável no soro de indivíduos normais apos 3 meses de uso de L-Tiroxina em dose supressiva de TSH / Thyroglobulin is still detectable in the serum of normal individuals after a trial of TSH-supressive doses of L-74 during 3 months

Guerra, Ricardo Ayello [UNIFESP] January 2006 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / APRESENTAÇÃO - Nesta tese de mestrado, apresentamos, de acordo com recomendações do Conselho Especial do Programa de Pós-Graduação de Endocrinologia da Universidade Federal de São Paulo – Escola Paulista de Medicina, um trabalho completo em inglês entitulado: "Thyroglobulin is still detectable in the serum of normal individuals after a trial of TSH-suppressive doses of L-T4 during 3 months", traduzido para o português como "A tiroglobulina é ainda detectável no soro de indivíduos normais após 3 meses de uso de L-tiroxina em dose supressiva de TSH", de autoria de Ricardo A. Guerra, Felipe Crispim, Cláudia C. D. Nakabashi, Cléber P. Camacho, Teresa S. Kasamatsu e Rui M. B. Maciel. A idéia deste trabalho surgiu a partir da necessidade de conhecimento do comportamento dos níveis séricos de tiroglobulina na ausência de um dos três principais fatores determinantes de sua concentração, os níveis séricos de TSH (Spencer e cols., 1996; Torréns e Burch, 2001; Baloch e cols., 2003). Além do interesse fisiológico, há também uma questão prática envolvida, que é o diagnóstico precoce da tirotoxicose factícia (Mariotti e cols., 1982; Bogazzi e cols., 1999). / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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CA 125 e HER-2/neu em tumores e ovario do tipo borderline : estudo imunohistoquimico e por hibridização in situ por fluorescencia (FISH)

Heinrich, Juliana Karina Ruiz 23 March 2001 (has links)
Orientador : Fatima Aparecida Bottcher Luiz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T17:22:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Heinrich_JulianaKarinaRuiz_M.pdf: 18386840 bytes, checksum: c19d3d316185e0ce073e85707046d04e (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Marcadores para a caracterização biológicade tumores de ovário borderfíne são pouco explorados. Assim sendol foram investigados o marcador tumoral CA125 e o oncogene HER-2jneuatravés de ensaios imunohistoquímicos(lHQ) e de hibridização ín sítu por fluorescência (FISH). Foram incluídos 45 tumores serosos e mucinosos de estágios clínicos 11II e TIl.A expressão de CA125foi positiva em 49% dos casos (22/45) e pôde ser associada ao tipo seroso. Embora superexpressão da proteína Her-2jneu não tenha sido encontrada através de lHQI resultados alterados de F1SHforam encontrados em 16% dos casos (7/45). Os ganhos foram detectados em baixo número de cópias (máximo de 4/célula) e, assim, não foram considerados como amplificação. Não foi encontrada associação entre a expressão do marcador CA125e os resultados de FISH,bem como entre este último e o tipo histológico. Por outro ladol resultados anormais de FISH representados por extensa aneussomia do cromossomo 17 puderam ser associados ao estágio clínico avançado. Mesmo na ausência de confirmação estatístical os dois casos que apresentaram recidiva eram do tipo serosol estágio clínico TI11positivos para CA125e apresentaram anomalias por FISH. Os dados apresentados sugerem que HER-2/neupOde não estar envolvidona iniciação desses tumores masl possivelmentel na progressão destes para fenótipos mais agressivos / Abstract: Since Borderline Ovarian Tumors (BOTs) biological markers and behavior are not well understood, we studied CA125and HER2-neugene status by either immunohistochemical and fluorescence in situ hybridization of 45 mucinous and serous borderline specimensof clinical stage l, TI and TIl. CA 125 expression was found in 49% of the samples(22/45) and associatedwith serous histological type. Although HER2 protein overexpression was not found with the HercepTest immunohistochemical assay, abnormal FISHresults were detected in 16% (7/45) involving specific chromosome 17 gain, specific HER2gain or both chromosome and gene gain. The gains for either gene or chromosome were detected at low levels (maximum 4 copies/cell)and in a low percentageof cellsper specimenor analyzed area which was consideredgene copy number gain and not gene amplification. Association was not found between CA 125 expression and HER2 FISH status. No significant relationship was found between FlSH status and histological type. Abnormal FISH results were associated to advanced clinical stage. Even in the absence of statistical support, the two patients with tumor recurrence had a serous histological type, clinical stage lTI, CA125 positive tumor with both gene and chromosome gains. The data suggest that the HER2-neugene may not be involved on tumor initiation but on its progression / Mestrado / Mestre em Ciências Médicas
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Ação do curcumin sobre os períodos iniciais da carcinogênese bucal induzida por 4-NQO em modelo murino /

Gonçalves, Vinícius de Paiva. January 2014 (has links)
Orientador: Luis Carlos Spolidorio / Banca: Helio Massaiochi Tanimoto / Banca: Rosemary Adriana Chierici Marcantonio / Resumo: O Curcumin apresenta potencial terapêutico no tratamento e prevenção de doenças crônicas, inclusive câncer. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o impacto do tratamento sistêmico do curcumin sobre os períodos iniciais da carcinogênese bucal induzida pelo 4-NQO em ratos. Quarenta ratos distribuídos em quatro grupos (n=10) foram tratados com solução de 50 ppm de 4-NQO dissolvido na água de beber ad libitum durante todo período experimental, que ocorreu em 8 e 12 semanas, sendo que dois desses grupos foram tratados com 30 ou 100 mg/kg de peso corporal de curcumin diariamente por gavagem oral, e um grupo tratado com veículo no volume correspondente à maior dose de curcumin. Os animais do grupo controle negativo (n=10) foram sacrificados no início do experimento. Os cortes histológicos, provenientes da língua dos animais, foram corados por H&E ou submetidos à reação de imunohistoquímica para detecção de PCNA, Bcl-2, SOCS1 e -3 , e STAT3. Parte das peças foi utilizada para a verificação da expressão de Vimentina, Cdh1, Cdh2 e TWIST1 por RT-qPCR. O tratamento com 100mg/kg de peso corporal de curcumin por 12 semanas, principalmente, diminuiu os valores do H-score de PCNA, Bcl-2, SOCS3, STAT3, enquanto aumentou SOCS1, além de reduzir as atipias celulares observadas na análise morfológica do epitélio lingual. A expressão dos genes avaliados por RT-qPCR também foi reduzida pelo tratamento com curcumin, independentemente da dose utilizada. Os resultados do presente estudo demonstram que o curcumin acaba por intervir e atenuar o desenvolvimento do processo carcinogênico. / Abstract: Curcumin has therapeutic potential in the treatment and prevention of chronic diseases , including cancer. The aim of this study was to evaluate the impact of systemic treatment of curcumin on the initial periods of oral carcinogenesis induced by 4 - NQO in rats. Forty rats were distributed into four groups (n = 10) and treated with 50 ppm of 4-NQO solution dissolved in the drinking water ad libitum throughout the experimental period, which occurred at 8 and 12 weeks , with two of these groups were treated with 30 or 100 mg / kg body weight daily by oral gavage curcumin, and a group treated with vehicle corresponding to larger dose of curcumin volume. The animals in the negative control group (n = 10 ) were sacrificed at the beginning of the experiment. Histological sections, from the language of animals, were stained with H&E or subjected to immunohistochemical analysis for detection of PCNA, Bcl-2, SOCS1 and -3, and STAT3. Part of the pieces was used to check the expression of vimentin, Cdh1, Cdh2 and TWIST by RT - qPCR . Treatment with 100mg/kg body weight of curcumin for 12 weeks, mainly, decreased the values of the H -score of PCNA, Bcl-2, SOCS3, STAT3 , while increased SOCS1 , and reduce cellular atypia observed in the morphological analysis of lingual epithelium. The gene expression assessed by RT- qPCR was also reduced by treatment with curcumin, regardless of the dose used. The results of this study demonstrate that curcumin eventually intervene and attenuate the development of the carcinogenic process. / Mestre
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Estudo da carcinogênese bucal experimental utilizando-se o óxido de nitroquinolina (4-NQO) em ratos /

Cabrera Ortega, Adriana Alicia. January 2014 (has links)
Orientador: Luiz Carlos Spolidorio / Banca: Helio Massaiochi Tanimoto / Banca: Silvana Regina Perez Orrico / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi validar as alterações teciduais e moleculares durante os estágios iniciais do processo de carcinogênese oral experimental em ratos, utilizando-se 4-NQO. Foram utilizados 20 ratos com aproximadamente 4 meses de idade, aleatoriamente separados em grupos controle (n=10) e tratados com solução de 50 ppm de 4-NQO dissolvido na água de beber (n=10). Os animais do grupo controle foram sacrificados no primeiro dia do experimento e os animais do grupo experimental foram sacrificados após 8 e 12 semanas de tratamento. Os cortes histológicos provenientes da língua foram corados por H&E ou submetidas à reação de imunohistoquímica para detecção de PCNA, Bcl-2, SOCS1 e -3 , e STAT3. Parte dos espécimes foi utilizada para a verificação da expressão de Vimentina, Cdh1, Cdh2 e TWIST1 por RT-qPCR. Os resultados demonstraram que o tratamento com 4-NQO após 8 semanas causou displasia epitelial severa e que houve exacerbação da atipia celular após 12 semanas de tratamento. A positividade dos anticorpos analisados, com exceção do STAT3, foi aumentada em ambos os períodos experimentais. Os resultados do presente estudo apontam que tratamento com 4-NQO por 8 ou 12 semanas viabiliza avaliar as displasias epiteliais experimentais tanto a nível morfológico quanto molecular. / Abstract: The aim of this study was to validate the tissue and molecular changes during the early stages of experimental oral carcinogenesis in rats, using 4-NQO. Were used 20 rats with approximately 4 months of age, randomly divided into control group (n = 10) and treated with 50 ppm of 4- NQO solution dissolved in drinking water (n = 10). The control group animals were sacrificed on the first day of the experiment and the experimental rats were sacrificed after 8 and 12 weeks of treatment. Histological sections from the tongue were stained with H&E or subjected to immunohistochemistry analysis for detection of PCNA, Bcl - 2, SOCS1 and -3, and STAT3. Part of the specimens was used to verify the expression of vimentin, Cdh1, Cdh2 and TWIST1 by RT - qPCR. The results showed that treatment with 4-NQO after 8 weeks caused severe dysplasia and cellular atypia was exacerbation after 12 weeks of treatment. The positivity of antibodies analyzed, with the exception of STAT3 was increased in both experimental periods. The results of this study indicate that treatment with 4-NQO for 8 or 12 weeks enables evaluating experimental epithelial dysplasias both morphological as molecular level. / Mestre
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Determinação de transcritos de prostasina em neoplasia de ovário: um potencial marcador tumoral

Costa, Fernanda Pires January 2006 (has links)
Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000386693-Texto+Completo-0.pdf: 647781 bytes, checksum: df4d4b4d3a7d05a89224f7f819325fbd (MD5) Previous issue date: 2006 / Background: The diagnosis of epithelial ovarian cancer is generally performed in advanced stages of the disease. The main hurdle for early diagnosis of ovarian cancer is the lack of characteristic symptoms and efficient screening tests. The development of a tumor marker that could detect early curable stages of this disease is therefore of utmost importance. Prostasin is a protease that in normal tissues is highly expressed only in the prostate gland and in seminal fluid. A previous study has indicated that epithelial ovarian cancer may overexpress prostasin. The present study sought to further evaluate prostasin as a possible candidate tumor marker in epithelial ovarian cancer. Patients and Methods: Fresh tumor samples of ovarian epithelial cancers (n: 12) and nonepithelial ovarian cancers (n: 3) were analyzed for the expression of prostasin mRNA. The samples were analyzed for prostasin expression by conventional PCR and real time quantitative PCR. As a standard control indicating high expression of prostasin in normal tissue, prostate samples were analyzed. Results: Using conventional PCR, prostasin was detected in all samples (epithelial and non-epithelial) except in 1 case of epithelial cancer. Using quantitative PCR, prostasin was overexpressed in the samples from epithelial ovarian cancer compared to prostate samples whereas it was not in the non-epithelial tumors. Conclusion: Prostasin mRNA is overexpressed in epithelial ovarian cancer and the findings warrant further studies of prostasin as a biomarker candidate for the early detection of ovarian epithelial cancer. Quantitative PCR may add specificity as a tumor marker method of analysis. / Introdução: Pacientes com neoplasia epitelial de ovário geralmente são diagnosticadas tardiamente, o que significa uma sobrevida em 5 anos de menos de 30%. A dificuldade em se diagnosticar precocemente esta neoplasia ocorre devido à falta de sintomas característicos, à ausência de um teste adequado de rastreamento e detecção precoce e ao fato de a localização dos ovários ser profunda na pelve, tornando a biópsia difícil, sendo necessário para isto, procedimentos cirúrgicos invasivos. A descoberta de um marcador tumoral que fosse detectado precocemente no sangue destas pacientes permitiria um diagnóstico precoce. A prostasina é uma protease que em condições normais está superexpressa somente na glândula prostática e no líquido seminal. Um estudo prévio sugere que a neoplasia epitelial de ovário possa superexpressar esta protease. O presente trabalho avalia a prostasina como um possível candidato a marcador tumoral em neoplasia epitelial de ovário. Pacientes e Métodos: Amostras tumorais de pacientes com neoplasia epitelial de ovário (n: 12 - grupo 1) e de outros tumores ovarianos (n: 3 – grupo 2), operadas nos hospitais São Lucas da PUCRS, Fêmina e Conceição, foram analisadas através das técnicas de RTPCR e RT-PCR em tempo real para detectar e quantificar, respectivamente, a presença da prostasina. Todas as amostras foram coletadas prospectivamente, após a assinatura do termo de consentimento. Nenhuma das pacientes possuía diagnóstico prévio de outras neoplasias e nunca tinham recebido qualquer forma de tratamento oncológico para a neoplasia de ovário. Amostras de tecido prostático foram utilizadas como controle para a expressão da prostasina. Resultados: A análise da presença de prostasina em amostras de tumores epiteliais e não epiteliais de ovário através da técnica de RT-PCR demonstra que ela está presente na xiv grande maioria das amostras e que este não é um método adequado para a diferenciação destes tumores. Já a quantificação deste potencial marcador através de RT-PCR em tempo real sugere uma superexpressão da prostasina em amostras de tumores epiteliais encorajando novos estudos para investigação da mesma como um marcador tumoral para a patologia em estudo. Conclusão: Os resultados sugerem que os tumores epiteliais de ovário superexpressam a prostasina e que esta deva ser melhor estudada como um novo marcador tumoral em neoplasia de ovário.
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Análise quantitativa da expressão de genes relevantes para o envelhecimento e para a Doença de Alzheimer / Quantitative expression analysis of genes related to aging and Alzheirmer’s Disease

Mazzotti, Tatiane Katsue Furuya [UNIFESP] 22 February 2011 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A Doenca de Alzheimer e uma das causas mais comuns de demencia na populacao idosa. Esta doenca e caracterizada por um complexo processo neurodegenerativo que afeta diversos genes e proteinas. Desta forma, genes diferencialmente expressos tem sido investigados como possiveis biomarcadores para condicoes tais como o envelhecimento e a Doenca de Alzheimer. Objetivos: A expressao dos genes LR11, SNAP25 e SIRT1, envolvidos respectivamente com processamento da proteina precursora ƒÀ-Amiloide, transmissao sinaptica e neuroprotecao, foram quantificados em tecido cerebral e sanguineo. Alem disso, tambem foi comparada a expressao entre estes dois tecidos a fim de identificar marcadores sistemicos que pudessem estar correlacionados ao cerebro. Metodos: A quantificacao de RNAm foi realizada por meio de qRT-PCR em tres regioes cerebrais post mortem (cortices entorrinal e auditivo e hipocampo) de 10 pacientes com Doenca de Alzheimer e 10 idosos saudaveis, assim como em leucocitos de sangue periferico de 25 jovens, 20 idosos saudaveis e 35 pacientes com Doenca de Alzheimer. Foi utilizado o metodo ƒ¢ƒ¢CT e a formula 2-ƒ¢ƒ¢CT foi empregada no calculo da quantificacao relativa. Resultados: A quantificacao do RNAm de LR11 nao diferiu entre as regioes cerebrais de pacientes com Doenca de Alzheimer e de idosos saudaveis. Em leucocitos, porem, sua expressao foi cerca de tres vezes maior em pacientes com Doenca de Alzheimer e idosos saudaveis em relacao ao grupo de jovens. Em relacao ao gene SIRT1, sua expressao foi duas vezes maior em pacientes com Doenca de Alzheimer do que em idosos saudaveis para as tres regioes cerebrais estudadas. Em leucocitos, por sua vez, a quantificacao do RNAm de SIRT1 nao diferiu entre os tres grupos estudados. Alem disso, leucocitos de sangue periferico apresentaram maior expressao dos genes LR11 e SIRT1 quando comparados ao cerebro. Para o gene SNAP25, foi observada ausencia de expressao em leucocitos de sangue periferico. Em relacao ao tecido cerebral de idosos saudaveis, o cortex entorrinal e o hipocampo apresentaram menor expressao de SNAP25 do que o cortex auditivo. Alem disso, a quantificacao relativa de SNAP25 nas regioes cerebrais de pacientes com Doenca de Alzheimer variou entre 34 e 39% do total de expressao observada em idosos saudaveis. Conclusoes: Os resultados deste estudo indicaram alguns potenciais marcadores para o envelhecimento e para a Doenca de Alzheimer. O nivel de expressao de LR11 pode ser considerado um marcador de envelhecimento em tecido sanguineo. A maior expressao de SIRT1 no cerebro de pacientes com Doenca de Alzheimer sugere que este gene possa estar envolvido em mecanismos compensatórios nos estágios tardios da doença. A expressão cerebral dos genes LR11 e SIRT1 não se correlacionou com a de leucócitos, não sendo possível utilizá-los como biomarcadores sistêmicos da doença. O gene SNAP25 não se expressou em tecido sanguíneo na DA, desse modo, não foi indicado como biomarcador para a doença nesse tecido. No cérebro, porém, a diminuição de sua expressão em pacientes com DA sugere disfunção sináptica e de neurotransmissão associada à doença. / Alzheimer Disease is the most common cause of dementia in elderly people. This disorder is characterized by a complex neurodegenerative process affecting multiple genes and proteins. Therefore, efforts have been made in identifying differentially expressed genes to be used as biomarkers in conditions such as aging and Alzheimer fs Disease. Purpose: Quantitative expression analysis of LR11, SNAP25 and SIRT1 genes, involved respectively in APP processing, synaptic transmission and neuroprotection, were investigated in brain and blood tissues. Furthermore, the expression between both tissues was also compared in order to find systemic markers that could represent the brain. Methods: mRNA quantification was performed using qRT-PCR in three post mortem brain regions (entorhinal and auditory cortices and hippocampus) of 10 Alzheimer fs Disease patients and 10 healthy elderly as well as in peripheral blood lymphocytes of 25 young, 20 healthy elderly and 35 Alzheimer fs Disease patients. We used the ƒ¢ƒ¢CT method in the analysis and the 2-ƒ¢ƒ¢CT formula to calculate the relative quantification. Results: LR11 mRNA quantification did not differ significantly concerning brain regions between Alzheimer fs Disease and healthy elderly subjects. However, in lymphocytes, its expression was threefold higher in Alzheimer fs Disease and healthy elderly subjects in comparison to the young group. Regarding SIRT1 gene, its expression was twofold higher in Alzheimer fs Disease patients than in healthy elderly for all brain regions. In lymphocytes, however, SIRT1 mRNA quantification was not significantly different among the three studied groups. Furthermore, lymphocytes showed a higher gene expression than brain regions for both LR11 and SIRT1 genes. In addition, a lack of SNAP25 expression was observed in blood lymphocytes. In brain tissues of the healthy elderly group, SNAP25 mRNA quantification was lower in the entorhinal cortex and hippocampus than in the auditory cortex. Furthermore, relative quantification of SNAP25 mRNA in brain regions of Alzheimer fs Disease patients was 34-39% of the total expression observed in the healthy elderly group. Conclusions: Our results presented some potential markers of Alzheimer fs Disease and aging processes. LR11 expression may be considered an age-related marker in blood tissue. The higher SIRT1 expression in Alzheimer fs Disease patients f brain suggested that this gene might be involved in compensatory mechanisms in the late stages of Alzheimer fs Disease. Both LR11 and SIRT1 brain expression was not correlated with blood expression, not being possible to consider them as systemic biomarker of the disease. Furthermore, it was not possible to use SNAP25 gene as a biomarker in blood once it was not expressed in this tissue. However, in the Alzheimer’s Disease patients’ brain, the decrease of SNAP25 expression might suggest an impairment of the synaptic function and neurotransmission found in the disease. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Uso da acetilcolinesterase e metalotioneína em peixes na avaliação do efeito da contaminação na Baía de Guanabara / Use of the acetylcholinesterase and metallothionein in fish in the evaluation of the effect of the contamination in the Baia da Guanabara

Albuquerque, Carla de January 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2012-09-06T01:11:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 948.pdf: 2916320 bytes, checksum: 5eadca1c274a8ae35ad5ef499c4fa8de (MD5) Previous issue date: 2007 / A Baia de Guanabara BG é um dos mais importantes sistemas estuarinos do Brasil, com uma grave condição de degradação ambiental. A BG apresenta uma complexa situação de poluição por diversas substâncias entre as quais se destacam os metais e os inseticidas. A simples medida destes poluentes não mostra o efeito real que estes exercem sobre a biota. (...) O objetivo deste trabalho é avaliar o efeito da contaminação na BG utilizando MT e AChE como biomarcadores específicose FC e ISF como índices brutos. (...) A quantificação dos níveis MT se deu por Polaroia de Pulso Diferencial. E a analise da atividade da AChE foi por espectrofotometria, por meio da reação de Ellman. Os resultados mostram que o sexo e a maturação sexual de ambas as espécies não influencia significativamente nos valores dos biomarcadores específicos e nos índices brutos, e desta maneira os sexos puderam ser agrupados. O FC apresentou valores significativamente maiores na região controle para as duas espécies, o que indica que os peixes dessa região apresentaram melhores condições gerais de saúde que dos da BG, mostrando-se como um bom índice bruto de avaliação dos efeitos contaminação. Isso difere do ISF que não se mostrou uma boa ferramenta de avaliação, pois os valores encontrados, em contra do esperado, nas duas espécies, foram maiores na região controle que na BG. Já nas análises dos biomarcadores específicos, os níveis de MT de ambas as espécies foram significativamente maiores na BG quena região controle, mostrando uma indução nos níveis desta proteína ocasionado pelo efeito que a contaminação por metais vem causando na biota da BG. (...) Isso mostra uma inibição por agentes anticolinesterásicos (organofosforados e carbamatos ) na biota marinha desta região. Este trabalho mostrou que o uso dos biomarcadores específicos - Mt e Ache - e do FC nas duas espécies de peixes permitiu avaliar os efeitos diferenciados de uma situação complexa de poluição na BG.

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