Magíster en Alimentos, Mención Gestión Calidad e Inocuidad de los Alimentos / Los mitílidos son una de las especies de bivalvos más cultivadas y comercializadas. Existen variedad de mercados que exigen la veracidad de la información contenida en el etiquetado de estos productos, es por ello que independientemente del estatus taxonómico que puedan tener los mitílidos presentes en Chile, es importante para la industria establecer un etiquetado veraz y que evidencie de manera fiel la procedencia e identificación de la especie del producto que será consumido. Se realizó una evaluación de los marcadores moleculares usados internacionalmente para la identificación de especies de mitílidos en muestras provenientes de Chile, Canadá y Galicia para determinar la equivalencia y calidad de identificación de estos en relación al gen de la proteína adhesiva polifenólica (Me 15-16 AciI). Además, se evaluó la capacidad de identificar especies con los marcadores Me 15-16 AciI y COI XbaI en productos procesados. Al evaluar los marcadores moleculares se pudo concluir que el panel más informativo de marcadores para este propósito son Me 15-16 AciI y mac-1, utilizados en conjunto. El marcador nuclear mac-1 es equivalente a Me 15-16 AciI en la distinción de la especie M. galloprovincialis. Por su parte el marcador mitocondrial COI XbaI y mtDNA 16s rRNA resulta ser totalmente equivalente a Me 15 -16 AciI para distinguir a M. chilensis de las demás especies. Es posible utilizar los marcadores moleculares Me 15 16 AciI y COI XbaI empleados en productos procesados al natural, en ahumado en aceite y congelados. La amplificación de fragmentos grandes en productos procesados como los marcadores mac-1 y mtDNA 16s rRNA no resulta adecuada. Se recomienda el uso de Me 15-16 AciI en productos procesados / The mussels are one of the most cultivated and world wide commercialized species of bivalves. There are variety of countries of destination that require the accuracy of the information contained in the labeling of these products, which is why regardless of the taxonomic status that the mussel species have in Chile, it is important for the industry to establish a truthful labeling and that represent accurately the origin and identification of the species of the product to be consumed. An evaluation of the most internationally used molecular markers for species identification in mussels samples from Chile, Canada and Galicia was performed to determine the equivalence and quality of identifying these markers comparing them with the gene of the polyphenolic adhesive protein (Me 15-16 AciI). Ti was evaluated as well the ability to identify species with markers Me AciI 15-16 and COI XbaI in processed products . The most informative panel of markers evaluated were Me 15-16 AciI and mac- 1 combined. The nuclear marker mac-1 is equivalent to Me 15-16 AciI in identified M. galloprovincialis. Meanwhile mitochondrial marker COI XbaI and mtDNA 16s rRNA are fully equivalent to Me 15 -16 AciI to identified M. chilensis from other species. Me 15 16 AciI and COI XbaI can be used processed raw, smoked in oil and frozen. The amplification of large fragments from markers like mac -1 and mtDNA 16s rRNA in processed products is not applicable. The use of Me 15-16 AciI in processed products is recommended / Conicyt

Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações no processo de remodelação óssea após a suspensão do tratamento com alendronato e sua influência sobre a osseointegração de implantes. Para isso, setenta ratas Wistar foram divididas em 2 grupos que receberam no dia 0 placebo (grupo controle-CTLE, n = 10) ou alendronato, na dose de 1 mg/kg (grupo teste, n = 60), uma vez por semana, por 120 dias. No dia 120 o tratamento com alendronato foi interrompido em 50 animais. Um implante de titânio foi instalado na metáfise tibial esquerda nos dias 0, 7, 14, 28 e 45 dias após a interrupção do tratamento (n=10 em cada período). O grupo CTLE e um grupo que continuou a receber o alendronato até o fim do experimento (grupo ininterrupto - INT, n=10) foram submetidos à cirurgia para instalação do implante no dia 120. Todos animais foram sacrificados 28 dias após a instalação dos implantes. Foram avaliados a densidade mineral óssea do fêmur e das vértebras lombares, os marcadores bioquímicos de remodelação óssea osteocalcina (OCN), propeptídeo aminoterminal do colágeno tipo I (P1NP), telopeptídeo carboxiterminal do colágeno tipo I (CTX) no dia da instalação do implante e no dia do sacrifício. O tecido ósseo ao redor dos implantes foi analisado de forma descritiva, e por meio da avaliação da quantidade de tecido ósseo em contato com a superfície do implante (BIC) e da área de tecido ósseo presente entre as roscas do implante (BAFO). Todos os grupos submetidos ao tratamento com alendronato apresentaram valores de densidade óssea significativamente maiores quando comparados ao grupo CTLE. Os marcadores de remodelação óssea apresentaram concentrações séricas menores no grupo teste, sendo que após a suspensão do tratamento com alendronato observou-se discreto aumento nos períodos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate bone turnover alterations after alendronate withdrawal and its influence on dental implants osseointegration. Seventy female Wistar rats were divided in 2 groups that received on day 0 either placebo (control group - CTLE, n = 10) or alendronate 1mg/kg (test group, n = 60) once a week for 120 days. At day 120 alendronate treatment was suspended for 50 animals. A titanium implant was placed in rats' left tibiae on days 0, 7, 14, 28 and 45 after alendronate withdrawal (n=10 for each period). CTLE group and a group that received alendronate until the end of the experimental period (non interrupted group - INT, n = 10) underwent implant placement surgery on day 120. All animals were euthanized 28 days after implant surgery. Bone mineral density (BMD) of femur and lumbar vertebrae and biochemical markers of bone turnover of serum collected on implant placement surgery's and euthanization's days were analyzed. Bone tissue around implants was submitted to descriptive analysis, bone-to-implant contact (BIC) and bone area fraction occupancy between implant threads (BAFO). All groups receiving alendronate showed higher BMD values when compared to CTLE group. Bone turnover markers presented decreased concentrations in test group. After alendronate withdrawal these values were slightly increased in the initials periods followed by another decrease in biomarkers concentrations in the late periods. No difference was 17 observed between groups for the BIC ratio. However group 45 days BAFO were statically significant lower than group 0 day. Although there was not difference in the bone quantity around implants, its quality was apparently compromised in the groups that received alendronate. The findings of this study demonstrated that alendronate... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Silvana Regina Perez Orrico / Coorientador: Gabriela Giro / Banca: Jamil Awad Shibli / Banca: Paulo Sergio Cerri / Mestre

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La fisiopatología de la preeclampsia incluiría una disfunción endotelial, que estaría estar mediada por estrés oxidativo. El objetivo de esta memoria fue establecer la presencia de estrés oxidativo a través de parámetros bioquímicos del plasma, de eritrocitos y de la placenta y compararlos en mujeres con embarazos normales y con PE al término del embarazo. Se realizó un estudio de tipo retrospectivo seleccionando mujeres embarazadas chilenas controladas en el Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital Clínico de la Universidad de Chile. A un grupo de 30 mujeres con PE y a otro grupo de 30 mujeres con embarazo normal (control) se les tomó muestras de plasma, eritrocitos y placenta al término del embarazo. Se realizaron determinaciones de las defensas antioxidantes a nivel plasmático, tales como la capacidad antioxidante del plasma (FRAP, ferric reducing ability of plasma) y a nivel tisular (eritrocitos y placenta), a través de evaluar la actividad de enzimas antioxidantes como superóxido dismutasa (SOD), Catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GSH-Px). Por otro lado el estrés oxidativo se cuantificó mediante los índices de lipoperoxidación [F2-isoprostanos libres y malondialdehido (MDA)] y de carbonilación de proteínas (grupos carbonilos), analizando su impacto en la actividad enzimática de la (Na+ + K+) – ATPasa en eritrocitos y placenta. Las mujeres con PE, respecto de sus controles, presentaron valores menores de FRAP, en plasma, de actividad de SOD, CAT y GSH-Px en eritrocitos y de actividad de SOD y CAT en placenta (p<0.05). Por otra parte, se detectó una mayor lipoperoxidación en las mujeres con PE respecto de sus controles, lo que se reflejó tanto en los elevados niveles plasmáticos de F2-isoprostanos libres en plasma como en el contenido de malondialdehido en eritrocitos y placenta (p<0.05). La carbonilación de proteínas en plasma fue mayor en las pacientes preeclámpticas que sus controles (p<0.05), confirmando el mayor nivel de estrés oxidativo en las primeras. También se detectó que la actividad enzimática de la (Na+ + K+) – ATPasa, tanto en eritrocitos como en placenta, era menor en las pacientes con PE que en sus controles (p<0.05). Estos resultados apoyan la participación del estrés oxidativo en la patogenia de la PE y proporcionan las bases para la aplicación de un tratamiento precoz con antioxidantes, con el propósito de prevenir o atenuar aquellas manifestaciones derivadas de un aumento de la producción de especies reactivas del oxígeno

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La preeclampsia (PE) es una de las complicaciones más frecuentes del embarazo, siendo una de las principales causas de morbi-mortalidad materna y perinatal. A pesar de la importancia de este síndrome, el conocimiento que se tiene sobre su etiopatogenia es limitado. Sin embargo, existen diversas teorías que incluyen la participación de factores genéticos, nutricionales, vasculares y autoinmunes. Existe evidencia que indica que el estrés oxidativo de la placenta está involucrado en la fisiopatología de la PE y se le ha propuesto como promotor de disfunción de células endoteliales y de un desarrollo insuficiente de la placenta, por una disminución de la angiogénesis normal, ambos característicos en los casos de PE. El presente estudio incluyó 220 muestras sanguíneas obtenidas de 1051 pacientes con control perinatal completo, que acudieron a la Unidad de Medicina Fetal del Hospital Clínico de la Universidad de Chile con 11-14 semanas de gestación entre los meses de Agosto 2004 y Marzo 2006. Las pacientes resultantes después de aplicar los criterios de exclusión detallados más adelante, se separaron en 3 grupos: preeclámpticas (32), pacientes con restricciones de crecimiento fetal (45) y el grupo control (143). Las determinaciones incluyeron: concentración de marcadores de estrés oxidativo (ácido úrico y MDA), marcadores de disfunción endotelial (PAI-1, PAI-2, ICAM, VCAM) y marcadores de actividad angiogénica (sFlt1, PIGF) en plasma de mujeres embarazadas durante el primer tercio de la gestación. Para esto se utilizaron las técnicas de HPLC, espectrofotometría, ELISA y FRAP. El análisis estadístico se realizó mediante la prueba t de Student (p<0,05) y prueba de correlación de Pearson (p<0,05). Se incluyó un control obtenido de forma aleatoria por cada paciente con patología. Los resultados mostraron que el promedio para sFlt1 en el grupo de pacientes con PE (1846,05 ± 222,30 nM/ml) fue estadísticamente diferente del grupo control (1176,44 ± 131,61 nM/ml) (p = 0,016). Para las demás variables no se observaron diferencias significativas entre los grupos. Al aumentar los niveles séricos de sFlt1, los niveles séricos de FRAP disminuyen (r = -0,56; p = 0,002), lo que indica que existe una relación inversa entre estas 2 variables. Las demás variables no presentaron correlación estadísticamente válida en esta edad gestacional. De esto se deduce que existe asociación entre la concentración plasmática de esta variable y la presentación de la enfermedad. Se concluye que de las variables medidas precozmente, la única que se encuentra asociada a la presentación de la enfermedad en este estado de gestación precoz es sFlt1. Con esto se confirma la participación de esta molécula en la patogénesis de la PE, lo cual deja abierto el tema a nuevos estudios que se realicen en etapas tempranas de gestación y que comprendan tratamientos posibles de realizar en una etapa temprana con miras a la prevención de la enfermedad / Proyecto FONDECYT N°1050482

Orientador: Mirela Tinucci-Costa / Banca: Erika Maria Terra / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Resumo: A expectativa de vida dos cães está aumentando e com isso, o diagnóstico de diferentes neoplasias, particularmente os linfomas, um dos tipos tumorais mais prevalentes. O prognóstico desses pacientes tem se pautado nas avaliações clínicas, laboratoriais e de imagem, as quais podem não indicar a presença da doença em início de curso. Com este estudo, objetivou-se avaliar a eficácia de marcadores sorológicos para melhor estabelecer o prognóstico de cães com linfoma cutâneo e multicêntrico. Foram realizadas dosagens do receptor solúvel de Interleucina 2 (sIL 2R) no soro de 9 cães sadios (grupo 1), 20 cães com linfoma cutâneo (grupo 2) e 9 cães com linfoma multicêntrico (grupo 3), e do Antígeno do câncer 125 (CA 125) em 14 cães sadios (grupo 4), 13 cães com linfoma cutâneo (grupo 5) e 11 cães com linfoma multicêntrico (grupo 6). Adicionalmente foram avaliados os tempos de sobrevida, os resultados de exames hematológicos e de imagem dos pacientes, os quais foram relacionados com as concentrações séricas dos marcadores sorológicos. Os resultados mostraram que não houve diferença estatística (p > 0,05) entre as dosagens dos marcadores sIL 2R nos grupos 1, 2 e 3 e de CA 125 entre os grupos 4, 5 e 6. Houve diferença (p < 0,05) entre os grupos 2 e 5 (linfoma cutâneo) e 3 e 6 (linfoma multicêntrico) em relação ao tempo de sobrevida, o qual foi menor nos animais diagnosticados com linfoma cutâneo. Em relação às contagens hematológicas, apenas o linfócitos diferiram entre os grupos 2 e 3 (... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The life expectancy of dogs is increasing and with that the diagnosis of different neoplasms, particularly the lymphomas, one of the more prevalent tumor types. The prognosis of these patients has been based on clinical, laboratory and imaging evaluations, which may not indicate the diagnosis at the initial stages of the disease. The aim of this study was to evaluate the efficacy of serological markers to better predict the prognosis of dogs with cutaneous and multicentric lymphoma. Serum level of the soluble Interleukin 2 receptor (sIL 2R) were performed in 9 healthy dogs (group 1), 20 dogs with cutaneous lymphoma (group 2) and 9 dogs with multicentric lymphoma (group 3), and the cancer antigen 125 (CA 125) in 14 healthy dogs (group 4), 13 dogs with cutaneous lymphoma (group 5) and 11 dogs with multicentric lymphoma (group 6). In addition, survival times, hematological tests and imaging exams of oncological patients were performed to better evaluate the aggressiveness of the neoplasms and to correlate these results with the dosed serum markers. The results showed that there was no statistical difference (p > 0.05) in the dosages of sIL 2R between groups 1, 2 and 3 and CA 125 between groups 4, 5 and 6. There was difference (p < 0,05) between the groups 2 and 5 (cutaneous lymphoma) and 3 and 6 (multicentric lymphoma) in relation to the survival time, which was lower in the animals diagnosed with cutaneous lymphoma. In relation to hematological counts, only lymphocytes counts d... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: James Venturini / Resumo: Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por fungos do gênero Paracoccidioides; suas principais formas clinicas são aguda/subaguda, crônica (FC) e residual. A maioria dos pacientes com a FC da doença, mesmo após tratamento eficaz, apresenta sequelas, principalmente fibrose pulmonar (FP) e enfisema. Os problemas sociais, econômicos e psicológicos desencadeados pela FP são subestimados. Apesar da fibrogênese na PCM ser reconhecida como um processo precoce, seus mecanismos não são totalmente conhecidos. No presente estudo, determinamos o perfil proteômico sérico de pacientes com PCM-FC com diferentes desfechos de FP. Vinte e nove pacientes com PCM pulmonar foram acompanhados periodicamente e as amostras de soro sanguíneo foram coletadas em quatro momentos: antes do tratamento (M0), cura clínica (M1), cura sorológica (M2) e cura aparente (M3). O grupo controle foi constituído por amostras de quinze indivíduos fumantes, pareados com idade e sexo dos pacientes avaliados. Ao final do tratamento (M3), os pacientes foram submetidos à avaliação de tomografia computadorizada e dois grupos de pacientes foram formados com base nos resultados de PF: PF menor (n = 17) e PF maior (n = 12). As proteínas de elevada abundância no soro foram removidas e, em seguida, submetidas à análise proteômica shotgun através do sistema nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS. A identificação e quantificação das proteínas foram realizadas usando o software PLGS Expression E. Análise de enriquecimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is systemic mycosis caused by fungi of the genus Paracoccidioides; its main clinical forms are acute / subacute, chronic (CF) and residual. Most FC-PCM patients, even after effective treatment, present sequelae, mainly pulmonary fibrosis (PF) and emphysema. The social, economic and psychological problems triggered by PF are underestimated. Although fibrogenesis in PCM is recognized as an early process, its mechanisms are not fully known. In the present study, we aimed to determine the serum proteomic profile of patients with FC-PCM with different (PF) outcomes. Twenty-nine patients with pulmonary PCM patients were followed up periodically, and blood serum samples were collected in four moments: before treatment (M0), clinical cure (M1), serological cure (M2), and apparent cure (M3). For control group (n=15), serum samples of sex and age-matched smokers were also collected. At the end of treatment (M3), the patients were submitted to CT Scan evaluation and two groups of patients were formed based on PF outcomes: minor PF (n=17) and major PF (n=12). High-abundance proteins were removed from serum and submitted to shotgun proteomic assay using a nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS system. The identification and quantification of proteins were performed using PLGS Expression E software. Enrichment analysis and protein-protein interaction (PPI) network analysis were performed using String software. Before treatment, patients with minor PF, in comparison to c... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_3348_.pdf: 255132 bytes, checksum: 7f4f8f3cbf7b659ab215399b7cedd555 (MD5) Previous issue date: 2010-08-30 / O Perfil Metabólico (PM) é utilizado de maneira confiável para avaliar o estado nutricional do animal, podendo ser usado para monitorar a adaptação metabólica, diagnosticar desequilíbrios da homeostase de nutrientes e revelar as causas da manifestação das doenças nutricionais, também conhecidas como doenças metabólicas. No Brasil, a utilização de cruzamentos de raças européias especializadas na produção de leite com raças zebuínas adaptadas às condições tropicais, contribui significativamente na produção leiteira do país. Entretanto, os estudos do PM de vacas leiteiras são direcionados principalmente para as raças puras, geralmente presentes em regiões de clima temperado e subtropical. Por meio da revisão bibliográfica, buscou-se descrever aspectos importantes sobre as condições particulares da produção leiteira nos trópicos, a importância dos marcadores bioquímicos utilizados na avaliação do PM, bem como os principais metabólitos utilizados para avaliar o PM protéico, e, com a pesquisa, aferir os valores e avaliar o comportamento dos marcadores bioquímicos protéicos em dois grupos genéticos de vacas primíparas holandês x gir, em dois períodos da lactação, no período da seca, nos trópicos. O experimento foi realizado no município de Passos MG. Utilizou-se dados coletados nos meses de maio e agosto de 2009, referente ao período da seca na região. O rebanho foi composto por 45 vacas ½ Holandesa x ½ Gir (½ HG) com produção leiteira média de 13,8 kg/vaca/dia e 39 vacas ¾ Holandesa x ¼ Gir (¾ HG) com produção leiteira média de 16,3 kg/vaca/dia, todas primíparas, com escore de condição corporal inicial entre 2,5 e 3,0 pontos, não variando mais que 0,5 pontos. Concentrou-se os estudos em dois períodos da lactação, de 28 a 60 dias (P1 da lactação) e de 110 a 130 dias (P2 da lactação). A dieta foi composta por ração total. Foram analisados os indicadores bioquímicos do perfil metabólico protéico por meio da quantificação da uréia, albumina, proteínas totais, hemoglobina e globulinas. Utilizou-se a estatística descritiva para obtenção de médias, desvio padrão e coeficiente de variação, analisados pelo t de Student, com nível de significância de 5%, para se estabelecer possíveis diferenças entre os períodos de lactação e os grupos genéticos. Houve diferença significativa (P<0,05) dos dias em lactação sobre os teores séricos de uréia e albumina para as primíparas ½ e ¾ HG, do P1 para o P2 da lactação. Para efeito do grau genético, não se observou diferença significativa (P>0,05) para a uréia, enquanto para a albumina, foi observado diferença significativa (P<0,05) apenas no P2 da lactação, podendo presumir a existência de possíveis diferenças na capacidade de recuperação dos teores séricos de albumina entre grupos genéticos. Em manejo onde a ingestão protéica não foi limitante, obteve-se intervalos de normalidade para animais cruzados ½ e ¾ HG mais restritos que os intervalos propostos pela literatura científica para a espécie bovina. Os teores séricos de uréia observados denotam ter havido subutilização de proteína da dieta no P1 da lactação.

Memoria para optar al título de Bioquímico / En la depresión se postula una reducción en la neurotransmisión serotoninérgica y/o noradrenérgica y en péptidos neuroprotectores como el factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF). Además del riesgo genético, existe una relación entre el estrés y el desarrollo de la depresión. En el estrés crónico y en la depresión se observa atrofia neuronal, reducción del BDNF y fallas cognitivas. Estos efectos se relacionan con el aumento de los glucocorticoides (GCs) circulantes debido a una sobreactivación del eje hipotálamo-hipófisis-glándula adrenal (HHA). La actividad del eje HHA se controla por la secreción de la hormona liberadora de corticotropina (CRH) hipotalámica, la cual estimula la secreción de la hormona adrenocorticotropa (ACTH) de la hipófisis; este efecto es potenciado por el péptido arginina-vasopresina (AVP) durante el estrés. La ACTH estimula la secreción de los GCs adrenales los que se unen a su receptor (GR) a nivel del eje HHA inhibiendo su activación, efecto que está reducido en la depresión quizás debido a variaciones polimórficas funcionales del GR. Los fármacos antidepresivos que son inhibidores selectivos de la recaptación de noradrenalina (ISRN) y no de serotonina (ISRS) normalizan el eje HHA y aumentan el número del GR en linfocitos. Los fármacos antidepresivos aumentan la expresión de genes neuroprotectores como el gen del BDNF y el de la proteína de unión al elemento de respuesta al AMP cíclico (CREB): los sujetos depresivos tienen niveles séricos del BDNF menores que los pacientes tratados farmacológicamente. En esta memoria se determinó si los niveles periféricos del BDNF, la CREB y el GR, así como si ciertas variantes polimórficas del GR, sirven como marcadores predictivos de la respuesta clínica de pacientes con depresión mayor tratados con venlafaxina, un fármaco antidepresivo de acción dual (ISRS/ISRN). La severidad y evolución de la depresión se determinó por el test de Hamilton de depresión (HAM-D). Los sujetos depresivos (n=18) y sanos (n=10) presentaron niveles similares del cortisol en orina de 24 h y en el ritmo de secreción circadiana del cortisol salival indicando una actividad normal del eje HHA. Ambos grupos suprimieron la secreción de cortisol luego de la ingesta de dexametasona (agonista del GR). El 61% de los pacientes redujeron el puntaje del HAMD ≥ al 25% en la primera semana de tratamiento, considerándose como respondedores tempranos. El 39% restante, respondedores tardíos, comenzaron a reducir el puntaje del HAM-D a la segunda semana de tratamiento. Estos últimos presentaron niveles mayores de la ACTH basal y de la inducida por la inyección de un análogo de AVP (DDAVP) que los respondedores tempranos y los sujetos sanos, indicando una mayor sensibilidad de los receptores de AVP. La DDAVP provocó una mayor secreción del cortisol en ambos grupos de pacientes con respecto al grupo control. El 44 % de los pacientes remitieron (HAMD ≤ 7) y presentaron un nivel más bajo de la ACTH y del cortisol basal. Se buscaron polimorfismos descritos en el gen del GR en los sujetos del estudio y en una muestra poblacional de Santiago (n=105) mediante la amplificación de ADN genómico por PCR. No se encontraron los polimorfismos de los codones 22, 23, 363, 641 y 729 salvo en el codón 22 en un paciente respondedor temprano y el del codón 363 en un sujeto del grupo poblacional. Los niveles del GR en relación a la β-actina en linfocitos no variaron durante el tratamiento con venlafaxina en los dos grupos de respondedores. La relación entre las isoformas del GRα (A y B) aumentó en las primeras semanas de tratamiento en los respondedores tardíos; en contraste, esta razón disminuyó en los respondedores tempranos. En ambos grupos de pacientes se observó un leve aumento de los niveles de la CREB total en las primeras semanas, aumento que en los respondedores tardíos se mantuvo hasta la tercera semana de tratamiento. Se observó un leve aumento, aunque no significativo, en los niveles de la CREB activa (fosforilada) en la primera semana de tratamiento en el grupo de respondedores tempranos. Este resultado se correlacionó con el aumento en los niveles séricos del BDNF y la respuesta clínica del grupo de respondedores tempranos a la semana de tratamiento. Se concluye que la secreción de la ACTH basal e inducida por la DDAVP antes del tratamiento, y los niveles del BDNF durante la terapia con venlafaxina se correlacionan con la respuesta clínica. Este es el primer estudio en que se evalúan tanto potenciales marcadores periféricos y genéticos como la funcionalidad del eje HHA en relación a la respuesta al tratamiento con un solo antidepresivo en un período de seis semanas.

Submitted by Amanda Ribeiro dos Santos null (amandashalar@hotmail.com) on 2018-04-09T20:47:32Z No. of bitstreams: 1 2018-04-09_Dissertação_AmandaRibeiro-VersãoFinal.pdf: 5828961 bytes, checksum: d332ff1b02f6b315b3c46c6eb3e0fe4c (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br) on 2018-04-10T18:58:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_ar_me_bot.pdf: 5828961 bytes, checksum: d332ff1b02f6b315b3c46c6eb3e0fe4c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-10T18:58:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_ar_me_bot.pdf: 5828961 bytes, checksum: d332ff1b02f6b315b3c46c6eb3e0fe4c (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por fungos do gênero Paracoccidioides; suas principais formas clinicas são aguda/subaguda, crônica (FC) e residual. A maioria dos pacientes com a FC da doença, mesmo após tratamento eficaz, apresenta sequelas, principalmente fibrose pulmonar (FP) e enfisema. Os problemas sociais, econômicos e psicológicos desencadeados pela FP são subestimados. Apesar da fibrogênese na PCM ser reconhecida como um processo precoce, seus mecanismos não são totalmente conhecidos. No presente estudo, determinamos o perfil proteômico sérico de pacientes com PCM-FC com diferentes desfechos de FP. Vinte e nove pacientes com PCM pulmonar foram acompanhados periodicamente e as amostras de soro sanguíneo foram coletadas em quatro momentos: antes do tratamento (M0), cura clínica (M1), cura sorológica (M2) e cura aparente (M3). O grupo controle foi constituído por amostras de quinze indivíduos fumantes, pareados com idade e sexo dos pacientes avaliados. Ao final do tratamento (M3), os pacientes foram submetidos à avaliação de tomografia computadorizada e dois grupos de pacientes foram formados com base nos resultados de PF: PF menor (n = 17) e PF maior (n = 12). As proteínas de elevada abundância no soro foram removidas e, em seguida, submetidas à análise proteômica shotgun através do sistema nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS. A identificação e quantificação das proteínas foram realizadas usando o software PLGS Expression E. Análise de enriquecimento e análise de rede de interação proteína-proteína (PPI) foram realizadas usando o software String. Antes do tratamento, os pacientes com PF menor, em comparação aos controles, apresentavam 91 proteínas diferencialmente expressas (60 sub-reguladas 31 superreguladas). Soro de pacientes com maior PF apresentaram 70 proteínas diferencialmente expressas (66 sub-reguladas 4 reguladas). A maioria dessas proteínas estavam envolvidas na regulação do processo celular e resposta inflamatória. Nas condições ensaiadas, o estudo permitiu identificar as proteínas APOH, A2M, GC e SERPINA1 como alvos envolvidos nos mecanismos moleculares da fibrogênse pulmonar na paracoccidioidomicose. Foi observado, ainda, que o momento de cura clínica apresentou maior atividade pró-fibrótica durante o seguimento dos pacientes. Além disso, foram identificadas 20 proteínas candidatas a biomarcadores no prognóstico da fibrose pulmonar, conforme segue: família das hemoglobulinas (HBB, HBD, HBG2, HBE1, HBG1, HBA1), ENO3, A2M, APOH, GC, IGHG-1, -2 e 3, IGLC1, -2 e -3, HP, SERPINA1, LRG1 e PZP. Nossos achados fornecem novos alvos para estudos futuros envolvendo a FP na PCM, assim como biomarcadores séricos em potencial. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is systemic mycosis caused by fungi of the genus Paracoccidioides; its main clinical forms are acute / subacute, chronic (CF) and residual. Most FC-PCM patients, even after effective treatment, present sequelae, mainly pulmonary fibrosis (PF) and emphysema. The social, economic and psychological problems triggered by PF are underestimated. Although fibrogenesis in PCM is recognized as an early process, its mechanisms are not fully known. In the present study, we aimed to determine the serum proteomic profile of patients with FC-PCM with different (PF) outcomes. Twenty-nine patients with pulmonary PCM patients were followed up periodically, and blood serum samples were collected in four moments: before treatment (M0), clinical cure (M1), serological cure (M2), and apparent cure (M3). For control group (n=15), serum samples of sex and age-matched smokers were also collected. At the end of treatment (M3), the patients were submitted to CT Scan evaluation and two groups of patients were formed based on PF outcomes: minor PF (n=17) and major PF (n=12). High-abundance proteins were removed from serum and submitted to shotgun proteomic assay using a nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS system. The identification and quantification of proteins were performed using PLGS Expression E software. Enrichment analysis and protein-protein interaction (PPI) network analysis were performed using String software. Before treatment, patients with minor PF, in comparison to controls, showed 91 differentially expressed proteins (60 down-regulated and 31 up-regulated). Serum of patients with major PF exhibited 70 differentially expressed proteins (66 down-regulated and 4 up-regulated). Most of these proteins are involved in the regulation of cellular process and inflammatory response. The results allowed the identification of APOH, A2M, GC and SERPINA1 as targets involved in the molecular mechanisms of pulmonary fibrogenesis in paracoccidioidomycosis. It was also observed that the clinical cure presented greater pro-fibrotic activity during the follow-up of the patients. In addition, 20 candidate biomarkers were identified in the prognosis of pulmonary fibrosis, as follows: hemoglobin family (HBB, HBD, HBG2, HBE1, HBG1, HBA1), ENO3, A2M, APOH, GC, IGHG-1, -2 and 3, IGLC1, -2 and -3, HP, SERPINA1, LRG1 and PZP. Our findings provide new targets for further studies involving mechanisms of PF in PCM, as well as for promising potential biomarkers. / CNPq 470221/2014-3

Tesis Magíster en Bioquímica, área de especialización en Bioquímica Clínica y Memoria para optar al título de Bioquímica / El receptor de alta afinidad de la neurotrofina NGF, TRKA, ha sido asociado con distintos tipos de cáncer, pudiendo encontrarse isoformas de este receptor. En el cáncer ovárico no se han descrito isoformas de este receptor, sin embargo, se ha determinado un aumento de la forma activa de TRKA, relacionándolo con una baja sobrevida. En una línea celular de ovario de hámster chino, el ectodominio de TRKA puede ser liberado mediante un corte proteolítico, quedando activado constitutivamente un fragmento del receptor formado por los dominios intracelular y transmembrana. La detección de este fragmento disminuye al expresar una forma inactiva de ADAM17 (una de las proteasas más estudiadas de la familia de proteínas ADAMs). Estos antecedentes llevaron a postular que en el cáncer ovárico epitelial humano se expresan isoformas del receptor TRKA, siendo una o más de ellas, cortada por ADAM17, resultando en la detección de una forma proteica fosforilada adicional del receptor, constituida sólo por sus dominios intracelular y transmembrana. Para lograr los objetivos de este trabajo se realizaron experimentos ex–vivo en muestras de tejidos ováricos humanos, con el fin de determinar la presencia de transcritos e isoformas del receptor TRKA, además de los niveles proteicos de ADAM17. También, se realizaron experimentos in-vitro con líneas celulares de ovario humano, para evaluar las isoformas de TRKA que experimentan un corte por efecto de ADAM17. Resultados de este trabajo mostraron la presencia de tres transcritos del receptor TRKA en ovario, con mayores niveles en muestras de cáncer más avanzado. Detectamos tres isoformas de este receptor en muestras de ovario y, adicionalmente, una isoforma de TRKA-p de 41kDa, cuyos niveles se encuentran aumentados en muestras de cáncer ovárico. Adicionalmente, encontramos mayores niveles proteicos de ADAM17 en muestras de cáncer ovárico avanzado, en comparación con muestras de tumores borderline. También se encontró una correlación positiva entre los niveles proteicos de ADAM17 y de TRKA en cáncer ovárico e, interesantemente, se observó una sob posici n (“merge”) s tincion s ambas proteínas al realizar la Inmunofluorescencia. Nuestros resultados muestran por primera vez la presencia de tres transcritos e isoformas de TRKA en ovario humano, además de una forma corta de TRKA-p (41 kDa), posiblemente producto de un corte proteolítico por la potencial acción de ADAM17. La presencia de una isoforma truncada fosforilada del receptor TRKA en cáncer ovárico epitelial tendría gran utilidad clínica, ya que podría servir como marcador pronóstico y como posible blanco terapéutico / TRKA is the high affinity receptor for the neurotrophin NGF. There are reports about isoforms of this receptor, but so far none have been detected in ovary. Phosphorylated TRKA receptor (p-TRKA) is highly expressed in epitelial ovarian cancer; nevertheless, it is not known if TRKA is post-translationally processed to smaller molecular forms in ovarian carcinoma. Earlier studies in cell lines have shown that TRKA is proteolytically cleaved by the metalloprotease ADAM17, resulting in an isoform containing the phosphorylated transmembrane and cytosolic domains of the receptor. Therefore, the aim of this study was the detection of isoforms of TRKA receptor in epithelial ovarian cancer, being one or more of them cleaved by ADAM17, resulting in an additional phosphorylated form of TRKA, containing its transmembrane and cytosolic domains. We analyzed the TRKA mRNA and protein levels, as well as protein levels of ADAM17, in human tissues. We also studied the cellular localization of these proteins in human cell lines. Using PCR analysis, we found three transcripts of TRKA in ovary, with higher levels in poorly differentiated epithelial ovarian cancer tissues. On the other hand, we found three isoforms of the receptor, as well as an additional form of 41 kDa by Western blot; with higher levels of these isoforms of TRKA in cancer samples. When ADAM17 was evaluated in ovarian tissues by immunohistochemistry, we found that this protein was mostly seen in epithelial cells, and a progressive increase in protein abundance with the progression of epithelial ovarian cancer. We also found a positive correlation between ADAM17 and TRKA protein levels in ovarian cancer, as well as a merge between both proteins by immunofluorescence. These results show for the first time the presence of isoforms of TRKA in ovary, as well as an additional form of 41 kDa of the receptor Besides, ADAM17 and the different isoforms of the TRKA receptor levels were found to be higher in more advanced stages of the disease. Also, a positive correlation was found between ADAM17 and TRKA receptor levels during different stages of ovarian cancer. This additional phosphorylated form of the TRKA receptor found in ovarian cancer tissues may be of great clinical significance, since it could be used as a new therapeutic target