A presença de resíduos de antimicrobianos no leite representa um problema de saúde pública, podendo causar reações alérgicas e a seleção de bactérias resistentes aos antimicrobianos. É também um problema econômico interferindo nas culturas lácteas utilizadas na fabricação de derivados. A mastite é a causa mais freqüente para o tratamento de bovinos leiteiros com antimicrobianos. Foram objetivos deste trabalho estudar a influência do processo inflamatório no tempo de eliminação de diferentes antimicrobianos, administrados por via sistêmica ou intramamária em vacas em lactação e avaliar a presença de resíduos detectáveis em tanques resfriadores de propriedades leiteiras, correlacionando com os níveis de mastite nos rebanhos. Foi utilizado teste microbiológico comercial (Delvotest) para a avaliação da corrência de resíduos de antimicrobianos em 60 amostras de leite de tanques resfriadores de propriedades leiteiras e individualmente de 135 vacas em lactação com e sem processo inflamatório na glândula mamária. Foi verificada correlação entre a ocorrência de resíduo de antimicrobiano no tanque resfriador e o aumento da freqüência de mastite clínica (r= 1,0; teste de Spearman).O aumento do período de carência, no leite de glândulas com processo inflamatório, foi observado tanto nos animais tratados por via sistêmica quanto naqueles tratados por via intramamária, ultrapassando o período estipulado pelo fabricante do medicamento. Tal fato foi observado em relação a todos os grupos tratados com diferentes antimicrobianos (betalactâmicos, aminoglicosídeos, tetraciclinas e sulfa) variando de 11 a 60 % das amostras analisadas. Após 72 horas da aplicação de medicamento por via sitêmica, houve diferença significante (p < 0,05, Fisher) entre as amostras de animais com mastite e as de animais com ausência de processo inflamatório, indicando uma maior persistência de resíduo nas amostras de animais com mastite. Na avaliação da influência de inibidores naturais observou-se que 33% das amostras de quartos com mastite clínica e 18% das amostras de quartos com mastite subclínica apresentaram resultados positivos, sendo que na ausência de processo inflamatório todas as amostras apresentaram resultados negativos. A diferença de positividade foi estatisticamente significante, quando foram comparadas as amostras de quartos mamários com mastite clínica com as amostras de quartos mamários com ausência de processo inflamatório (p < 0,05, Fisher). Em síntese concluiu-se que houve uma correlação entre o nível de ocorrência de mastite clínica e a presença de resíduo no leite dos tanques resfriadores de propriedades leiteiras e que glândulas mamárias com processo inflamatório apresentaram maior período de eliminação de resíduos de antimicrobiano pelo leite, em relação às glândulas sem processo inflamatório, muitas vezes ultrapassando o período estipulado pelos fabricantes de medicamentos. Observou-se também que as amostras de leite de animais não tratados, analisadas sem aquecimento prévio, apresentaram positividade demonstrando a influência dos inibidores naturais, produzidos em decorrência do processo inflamatório, nos resultados dos testes microbiológicos, indicando a necessidade de aquecimento das amostras antes da realização dos testes microbiológicos para a detecção de resíduos, para evitar a ocorrência de resultados falso positivos. Como conclusão geral, a análise dos resultados obtidos no presente estudo demonstrou que a mastite interferiu na ocorrência de antimicrobianos no leite. / The presence of antimicrobial residues im milk is a public health concern, because they may cause allergic reactions and may lead to the development of resistance to antimicrobial agents by bacterial strains. It is also an economic problem because it interferes with starter cultures used in dairy products. Mastitis, the inflammatory process of the mammary gla nd, is the main reason to treat dairy cows with antimicrobial agents. The purpose of this study was to verify the influence of mastitis on the withdrawal period of several intramammary and parenteral antimicrobial agents used in lactating cows, as well as to evaluate the presence of detectable antimicrobial residues in bulk tank milk, in relation to the mastitis rates among the studied dairy farms. A total of 60 bulk tank samples of dairy farms and 135 individual samples of healthy and mastitic dairy cows were screened to verify the occurrence of antimicrobial residues with a microbiologic test (Delvotest®). A correlation was detected between antimicrobial residues in bulk tank and high clinical mastitis rates (r= 1.0; Spearman\'s test). A higher withdrawal period, exceeding that determined by the manufacturer, was observed in the milk of mammary glands presenting inflammatory processes, both in animals treated by the parenteral route, and those treated by the intramammary route. This observation ranged from 11 to 60% of the analyzed samples and was verified in all groups treated with different antimicrobial agents (betalactam, aminoglycosides, tetracycline and sulfas). Statistically significant difference was detected (p<0.05, Fisher\'s test) at seventy two hours after the parenteral treatment in samples from animals presenting inflammatory processes, in relation to samples from animals that did not present mastitis. That is, there was a higher withdrawal period in the samples from animals presenting mastitis. In the evaluation of the influence of inflammatory reaction natural inhibitors on Delvotest®, it was verified that 33% of the samples from clinical mastitis quarters and 18% from subclinical mastitis quarters were positive, and that quarter samples without inflammatory processes were negative. These differences were statistically significant (p<0.05, Fisher\'s test). Among the main onclusions, it should be pointed out that there was a correlation between high clinical mastitis rates in the dairy herd and antimicrobial residues in bulk tank milk. Another important result was that mammary glands presenting inflammatory processes exhibited higher withdrawal periods when compared with mammary glands that did not present inflammatory processes, and that sometimes this withdrawal period exceeded the period recommended by the manufacturer. It was also observed that milk samples from untreated animals, when tested without preliminary heating at 80ºC, were positive, due to the occurrence of natural inhibitors produced by the inflammatory process, showing their interference on microbiologic tests. Therefore, it was demonstrated that previous heating is helpful to avoid false positive results when microbiologic tests are used to detect antimicrobial agents residues in milk samples. As an overall conclusion, it was well demonstrated that mastitis interferes in antimicrobial residues in milk.

Os processos inflamatórios na glândula mamária são especialmente freqüentes e importantes em bovinos leiteiros, sendo responsáveis por grandes prejuízos à pecuária leiteira. A mastite infecciosa é a mais importante doença sob o ponto de vista econômico e de saúde pública. A contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL) de leite proveniente diretamente de uma glândula mamária permitiria avaliar o comportamento de cada um dos agentes etiológicos da mastite infecciosa. A comparação desta informação com a contagem de células somáticas (CCS/mL) na amostra de leite permitiria uma avaliação mais acurada do processo infeccioso e inflamatório na glândula mamária. O presente trabalho teve como objetivos: avaliar o \"status\" microbiológico de amostras de leite de vacas em lactação que apresentaram mastite e comparar a quantidade de UFC/mL de colônias dos diferentes microrganismos com as respectivas CCS/mL, levando em consideração a diferenciação de células polimorfonucleares (PMN/mL) e mononucleares (MN/mL) nas amostras. Quinhentas e seis amostras de 15 propriedades de exploração leiteira do Estado de São Paulo, Brasil, foram submetidas aos testes de Tamis e California Mastitis Test (CMT), e realizados os exames microbiológicos, contagem de UFC/mL e CCS/mL. Destas, 112 não apresentaram crescimento de microrganismos, e das amostras com crescimento foram isolados: 94 Corynebacterium spp., 104 Staphylococcus spp., 73 Streptococcus spp., 36 Prototheca zopfii, 08 Candida spp., 02 Nocardia spp. e 77 associações entre os microrganismos. Houve correlação entre o número de UFC/mL com a CCS/mL, assim como entre PMN/mL e entre MN/mL. Concluiu-se que existe um aumento da CCS/mL, PMN/mL e MN/mL no leite quando há um aumento das contagens de UFC/mL. As quantidades de UFC/mL no leite com isolamento de Streptococcus spp. foram maiores estatisticamente (P < 0,05) que as quantidades de UFC/mL com isolamento de Corynebacterium spp. e Staphylococcus spp. Concluiu-se também que, em havendo necessidade de tratamento de mastite clínica e subclínica no rebanho devido às altas contagens de UFC/mL, deve-se tratar inicialmente os quartos nos quais foram isolados Streptococcus spp. e deixar para uma segunda etapa ou para o processo de secagem o tratamento das mastites associadas à Staphylococcus coagulase-positivo, Staphylococcus coagulase-negativo e Corynebacterium spp. nessa mesma ordem. / Mastitis is a complex pathologic condition which may have different etiology and consequences. Mastitis usually starts with the penetration of microorganisms through the teat canal towards mammary parenchyma and secretory cells, and an inflammatory response occurs due to the products of the microbial growth. The aim of this work was to evaluate the microbial status of milk samples collected from lactating cows with mastitis and comparing the colonies forming units (CFU)/mL and the somatic cell counts (SCC)/mL, taking into consideration the differentiation of polymorphonuclear (PMN/mL) and mononuclear (MN/mL) cells. From primiparous and pluriparous dairy cows, 506 milk samples were collected from 15 dairy farms located in the State of São Paulo, Southeastern Brazil. Samples were submitted to strip cup test and California Mastitis Test (CMT) and evaluated for CFU and SCC procedures. For microbial examinations, 112 (22.13%) samples were found negative and from the other 394, the following microorganisms were isolated: 94 (18.58%) Corynebacterium spp., 104 (20.55%) Staphylococcus spp., 73 (14.42%) Streptococcus spp., 36 (7.11%) Prototheca zopfii, 8 (1.60%) Candida spp., 2 (0.39%) Nocardia spp., and 77 (15.21%) associations among distinct microorganisms. Significant correlations were found between the CFU/mL and SCC/mL, and also with the PMN and MN cell countings. With the increased CFU/mL countings, it was observed the increase in SCC, PMN, and MN countings. The CFU/mL counts in samples with Streptococcus spp were statistically higher (P < 0.05) than the ones positive for Staphylococcus spp. and Corynebacterium spp. In case of treatments of mastitis, target must be primarily oriented to treat the mammarial glands showing clinical or subclinical mastitis with Streptococcus spp. showing high CFU/mL, and at the second stage, in case of treatment or drying the cows, therapy must be directed against coagulase-positive Staphylococcus, coagulase-negative Staphylococcus and Corynebacterium spp.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de cepas de Staphylococcus aureus no ambiente de ordenha, analisar seu perfil genético e a produção de biofilme, provenientes de 10 propriedades localizadas nas regiões de Franca e Ribeirão Preto, estado de São Paulo, Brasil. Foram analisadas 220 amostras de leite individual de vacas positivas no teste CMT (California Mastitis Test), 120 amostras de leite de tanque de expansão, 389 swabs de utensílios e equipamento relacionados com ordenha e 120 swabs de mãos de manipuladores. As coletas de amostras foram realizadas mensalmente durante o período de agosto/2010 a janeiro/2011. Das 849 amostras analisadas, 56 cepas de S. aureus (6,6%) foram isoladas, sendo 12 (5,4%) de leite individual de vacas, 26 (21,6%) de leite de tanque de expansão, 14 (3,6%) de utensílios e equipamentos e 4 (6,9%) de mãos de manipuladores. Os resultados indicam uma baixa prevalência de S. aureus nas propriedades analisadas, não havendo diferença significativa entre as frequências encontradas nas duas regiões analisadas. A técnica de PFGE (pulsed-field gel electrophoresis) permitiu identificar 31 perfis genéticos (pulsotipos), utilizando-se a enzima de restrição SmaI. Nos ensaios de produção de biofilmes em microplaca, 19 (63,3%) de 30 pulsotipos avaliados foram considerados produtores de biofilme. Nos ensaios conduzidos em aço inox, 13 (43,3%, N=30) foram positivos e, para o silicone, não houve produção de biofilme. O elevado percentual de isolados no leite de tanque de expansão evidencia um problema de saúde pública, considerando que no Brasil muitas vezes o leite é consumido sem pasteurização. A ocorrência de pulsitipos de S. aureus formadores de biofilmes indica a persistência do patógeno em diversos pontos no ambiente de ordenha, bem como provável envolvimento dos mesmos com casos de mastite e sua eliminação no leite, ressaltando a necessidade de práticas higiênicas para prevenir a formação de biofilmes nas propriedades estudadas. / The objective of the present study was to evaluate the occurrence of biofilm-producing strains of Staphylococcus aureus in the milking environment from 10 farms located in the regions of Franca and Ribeirão Preto, state of São Paulo, Brazil. Twohundred twenty samples of milk from individual cows previously tested for CMT (California Mastitis Test), 120 samples of bulk tank milk, 389 swabs of equipments and utensils related to milking and 120 swabs of milk\'s handlers hands were analyzed. A total of 56 (6.6%) S. aureus strains were isolated out of 849 samples analyzed, being 12 (5.4%) from milk samples from individual cows, 26 (21.6%) from bulk tank milk, 14 (3.6%) from swabs of equipments and utensils, and 4 (3.3%) from swabs hands of milk\'s handlers. Results indicated a low prevalence of S. aureus in the dairy farms analyzed, and there was no significant difference between the percentages found in the two regions evaluated. On the basis of PFGE results (using SmaI enzyme), 31 profiles (pulsotypes) were found. In the biofilm-production assay using microplates, 19 (63.3%) of 30 pulsotypes tested were considered positive (biofilm producers). For assays conducted in stainless steel, 13 (43.3%) of pulsotypes were biofilm producers, although no pulsotype was able to produce biofilms on the surface of silicon. Results of this trial showed a high percentage of bulk tank milk samples contaminated with S. aureus, hence indicating a public health problem especially in Brazil were milk is often consumed without pasteurization. The occurrence of S. aureus pulsotypes which were also biofilm-producers suggests the persistence of the pathogen in several sites at the milking environment, as well the probable involvement of S. aureus biofilms with mastitis and its excretion in the milk. The need for adoption of hygienic practices to prevent the formation of biofilms of S. aureus in the dairy farms evaluated is stressed.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-25T10:01:48Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 271416 bytes, checksum: 9eef4e18d4f3b9c8bf531f243c48c65e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-25T10:01:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 271416 bytes, checksum: 9eef4e18d4f3b9c8bf531f243c48c65e (MD5) Previous issue date: 2002-07-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A partir da abertura comercial brasileira nos anos 90, com a inserção da economia do País no mercado mundial devido à globalização, o leite e os demais produtos lácteos produzidos no Brasil sofreram a concorrência de produtos de melhor qualidade vindos de outros países. Neste cenário, para que os produtos brasileiros possam ser competitivos em nível mundial, é necessário que haja uma melhoria do processo produtivo do leite nas fazendas, já que o setor primário desta cadeia constitui-se num dos elos mais fracos com relação à qualidade. Este trabalho analisa a relação entre fatores de risco de mastite, um dos principais problemas na produção leiteira. Essa doença causa o aumento da contagem de células somáticas (CCS), que é um indicador da saúde da glândula mamária e, conseqüentemente, da qualidade do leite. O estudo fundamentou-se na teoria da Gestão da Qualidade, sendo selecionados por meio da Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC) os principais fatores que influenciam a CCS. Esses fatores de produção são os seguintes: idade das vacas em lactação (primeira cria, segunda cria, terceira cria e mais de três crias), sistema de produção (a pasto, semi-estabulado e free-stall), local de ordenha (curral e sala de ordenha), tipo de ordenha (manual e mecânica) e práticas de manejo que são utilizadas ou não pelas propriedades da amostra, que incluem o tratamento da água utilizada na ordenha, linha de ordenha, exame dos primeiros jatos, lavagem e secagem das tetas, desinfecção das tetas antes e após a ordenha, desinfecção do conjunto de teteiras, posição das vacas após ordenha (deitadas ou em pé), tratamento das vacas com antibiótico à secagem, manutenção da ordenhadeira, higiene dos ordenhadores e ambiente antes da ordenha. Foram analisados resultados em tabelas que relacionam a CCS média com os fatores críticos no controle da mastite. Também se verificou a relação desses fatores com a percentagem de propriedades com níveis de CCS que fornecem uma estimativa do problema de mastite, não havendo nenhum fator significativo estatisticamente. Concluiu-se que os fatores não influenciam isoladamente a mastite, sendo sua ocorrência devida a um conjunto de fatores. Isso corrobora a importância de cada etapa do processo de obtenção de leite na etapa seguinte, que é o princípio básico da Gestão da Qualidade. / Since brazilian mercantile opening in the 90`s, with economic insert of the country in world market due to globalization, milk and the other dairy products made in brazil had to compete with high-quality products from other countries. At these conditions, it is necessary to make an improvement in the milk productive process of the farms, so that brazilian products may be competitive in all over the world, since primary sector of this chain is one of the weakest link in relation to quality. This study analyzes the relationship between mastits risk factors, which are one of the most important problems in milk production. This disease makes somatic cells count (SCC) increase, which is a good indicator for mammary gland health condition and, consequently, for milk quality. The study has been based on Quality Management theory, and the main factors which influence SCC, were selected through Hazard Analysis and Critical Control Point (HACCP). These production factors are the following: age of lactating cows (first lactation, second lactation, third lactation and more than three lactations), production system (animals keep on pasture, mixed-system and free-stall), milking place (corral and milking installations), systems of milking (hand milking and machine milking) and management measures which are used or not by the sampled farms, what includes the treatment of the water used in milking, milking order, forestrip, teats wash and drying, pré-dipping and pós-dipping, cluster disinfection, cows position after milking (lying or standing), cows treatment with antibiotic at drying, milk machine maintenance, hygiene of milkers and environment before milking. The results were analyzed in tables which relates the SCC average with the critical control points in mastits control. It has been either verified the relationship of these factors with the percentage of real states whose SCC levels provide an estimate for mastitis problem, and no statistical significant factor has been found. It has been concluded that the factors do not influence mastits separately, considering that its occurrence is due to a whole of factors. It corroborates the importance of each stage of milk obtaining process in the following stage, which is the basic principle of Quality Management. / Dissertação importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCV07MA017.pdf: 1501268 bytes, checksum: 0c5a0b4d77bc053bc7b71daf56488e43 (MD5) Previous issue date: 2007-02-05 / Staphylococcal mastitis causes considerable economic losses to the producer, the milk industry and to the consumers. Staphylococcus aureus is an important cause of bovine mastitis worldwide, and effective preventive or therapeutic alternatives are lacking. The predominance of staphylococcal capsular polysaccharide types 5 and 8 among human isolates from many sources is well documented, but there seems to be a greater variation in the distribution of capsular serotypes among isolates from cattle. This information is important for the rational design of a vaccine for the prevention of staphylococcal mastitis, because surface antigens capsular polysacharides of S. aureus are sorotype-specific immunogens and antibodies to these antigens should be present so that it happens the opsonophagocytic. Of the 256 samples of bovine staphylococci and 56 samples bubaline included in this study, isolated of mastitis milk in Brazil, between 1995 and 2006. They were identified as S. aureus 164 strains of bovine and 27 of bubaline, the other samples were identified as Staphylococcus coagulase-negatives. Sorotyping of the 164 samples of S. aureus isolated of bovine and 27 of bubalino for the technique of colony immunoblot. Capsular types 5 and 8 accounted approximately 70% of the bovine isolates and 85% of the bubaline isolates. Type 8 was significantly more frequent (51,83%), type 5 was less frequent, accounting for 17,07% of the isolates and rest were non-typeables (31,1%). Sorotype 5 was predominant in strains from bubaline sources (62,96%), among which the frequency of the sorotype 8 was of 22,22% and the smallest occurrence it was of non-typeables (14,81%). These results underscore the variability in capsule production by bovine isolates of S. aureus from different geographic regions. Therefore, was observed prevalence antigenic of CP5 and CP8 and that should be considered when of the development of capsular-vaccines for bovine and bubaline mastitis for S. aureus, to be used at national level, because it has direct influence on the efficiency of the same ones / A mastite estafilocócica ocasiona prejuízos consideráveis aos produtores, à indústria leiteira e aos consumidores. O Staphylococcus aureus é a mais importante causa de mastite bovina em todo o mundo, e inexistem alternativas preventivas e terapêuticas efetivamente eficientes para seu controle. A predominância de polissacarídeos capsulares estafilocócicos tipos 5 e 8 em amostras humanas isoladas de diversas origens geográficas é bem documentada, porém, em relação a isso parece existir uma grande variação na distribuição de sorotipos capsulares entre as amostras isoladas de bovinos. Esta informação é importante num projeto racional de uma vacina para prevenção da mastite estafilocócica, pois antígenos polissacarídeos de superfície do S. aureus são imunógenos sorotipo-específicos e, anticorpos para estes antígenos, devem estar presentes para que ocorra a opsonofagocitose. Das 256 amostras de estafilococos bovinas e 56 amostras bubalinas incluídas neste estudo, isoladas de leite mastítico no Brasil, entre 1995 e 2006, foram identificados como S. aureus 164 isolados de bovinos e 27 de bubalinos, as demais amostras foram identificadas como Staphylococcus coagulasenegativos. Foram sorotipificadas as 164 amostras de S. aureus isoladas de bovino e 27 de bubalinos pela técnica de colony immunoblot. Cápsulas tipo 5 e 8 foram encontradas em aproximadamente 70% dos isolados de bovino e 85% dos isolados bubalinos. O tipo 8 foi significativamente mais freqüente (51,83%), o tipo 5 foi o menos freqüente, encontrado 17,07% dos isolados e o restante foram nãotipificáveis (31,1%). O sorotipo 5 foi predominante nas cepas de origem bubalina (62,96%), entre as quais a freqüência do sorotipo 8 foi de 22,22% e a menor ocorrência foi de não-tipificáveis (14,81%). Os resultados ressaltam a variabilidade na produção de cápsula por isolados de S. aureus bovinos de diferentes regiões geográficas. Portanto, observou-se uma prevalência antigênica de CP5 e CP8 e isso deve ser considerado quando do desenvolvimento de vacinas-capsulares contra mastite bovina e bubalina por S. aureus, a ser utilizada a nível nacional, pois tem influência direta sobre a eficiência das mesmas

The objective was to evaluate the effect of the type of milking and the environment in the quality of raw milk by identification the Somatic Cell Count - CCS in samples obtained from farms in the mesoregion of south goiano and correlate it with the different types of milk, and the milk components: fat, protein, lactose and total solids (ST). Furthermore, we sought to diagnose the prevalence of subclinical mastitis by CCS, evaluate the correlation between CCS and milking type with antimicrobial residues, and check the influence of season, temperature and humidity index (THI) and Equivalent Temperature Index (ITE) on the CCS. The research developed in farms with different types of milking, being divided into manual and mechanical milking. The datas were collected from January 2011 to December 2013, and in each property was collected a monthly sample in the expansion tank, a total of 8242 samples, which were later sent for analysis. The diagnosis of the milk quality held by electronic count of somatic cells, for the FossomaticTM® and the levels of the components were analyzed using the MilkoscanTM FT®, the detection of antibiotic residues was performed using the Delvotest-P and meteorological data were obtained from the National Institute of Meteorology - INMET in Catalão-GO station. Among the variables type of it milks and subclinical mastitis, there was dependent relationship (p <0.05). The milking mechanics was the one with a higher prevalence of subclinical mastitis with 58% (910) of the samples presented CCS> 300.000 cells/mL. Among the variables type of milking and CCS advocated by Instruction n°62/2011 (BRASIL, 2011), there was a significant relationship (p <0.05). Only 19,53% (1610) of the samples had CCS > 500.000 cells/mL. According to the statistical analysis, there was a positive correlation between CCS and fat and ST, however, there was a negative correlation between the CCS and the protein and lactose contents. The type of milking and the somatic cell count did not affect the presence or absence of antimicrobial residues. During the rainy season has become a CCS elevation compared to the dry season, but there was no correlation between CCS and environmental indices (ITE and ITU). Regarding environmental indices can be seen that with the increase of the ITU occurred a decrease in fat and an increase in ST and lactose. It can be concluded that the type of manual milking showed the lowest prevalence of subclinical mastitis in relation to milking and with elevated CCS is a reduction in the concentrations of protein and lactose and an increase in fat and total solids in the raw milk. / Objetivou-se avaliar o efeito do tipo de ordenha e do ambiente na qualidade do leite cru por meio da identificação da Contagem de Células Somáticas - CCS nas amostras obtidas das propriedades rurais da mesorregião do sul goiano e correlacioná-las com os diferentes tipos de ordenha, bem como os componentes do leite: gordura, proteína, lactose e sólidos totais (ST). Ademais, buscou-se também diagnosticar a prevalência da mastite subclínica por meio da CCS, avaliar a correlação entre CCS e tipo de ordenha com os resíduos de antimicrobianos, verificar a influência do período do ano, Índice de Temperatura e Umidade (ITU) e Índice de Temperatura Equivalente (ITE) sobre a CCS. A pesquisa desenvolveu-se em fazendas com diferentes tipos de ordenha, sendo essas divididas em ordenha manual e mecânica. O trabalho de campo foi realizado de janeiro de 2011 a dezembro de 2013, sendo que em cada propriedade foi coletada uma amostra mensal no tanque de expansão, perfazendo um total de 8242 amostras, que posteriormente, foram enviadas para análise. O diagnóstico da qualidade do leite realizou-se por meio da CCS, pelo aparelho FossomaticTM®, os teores dos componentes foram analisados utilizando-se o MilkoscanTM FT®, a detecção de resíduos de antimicrobianos foi realizada através do Delvotest-P e os dados meteorológicos foram obtidos do Instituto Nacional de Meteorologia- INMET na estação de Catalão-GO. Entre as variáveis tipo de ordenha e mastite subclínica, houve relação de dependência (p<0,05). A ordenha mecânica foi a que obteve maior prevalência de mastite subclínica, 58% (910) com CCS > 300.000 células/mL. Entre as variáveis tipo de ordenha e a CCS preconizada pela Instrução Normativa n°62/2011 (BRASIL, 2011), houve relação significativa (p<0,05). Apenas 19,53% (1610) apresentaram CCS > 500.000 células/mL. De acordo com a análise estatística, existiu correlação positiva entre a CCS e o teor de gordura e ST, porém houve uma correlação negativa entre a CCS e os teores de proteína e lactose. O tipo de ordenha e a contagem de células somáticas não interferiram na presença ou ausência de resíduos de antimicrobianos. No período da chuva tem-se uma elevação de CCS se comparado ao período da seca, porém não houve correlação entre CCS e os índices ambientais (ITE e ITU). Em relação aos índices ambientais pode-se observar que com a elevação do ITU ocorreu uma redução nos teores de gordura e ST e um aumento no teor de lactose. Pode-se concluir que o tipo de ordenha manual obteve a menor prevalência de mastite subclínica em relação à ordenha mecânica e com a elevação da CCS tem-se uma redução nas concentrações dos teores de proteína e lactose e um aumento nos teores de gordura e sólidos totais do leite cru. / Mestre em Ciências Veterinárias

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Resumo: Escherichia coli é o principal agente de mastite clínica bovina de origem ambiental, caracterizado pela complexidade de fatores de virulência (FV). O patógeno causa sinais clínicos que variam desde alterações exclusivamente no leite (grau 1 ou leve), no quarto afetado (grau 2 ou moderado), até manifestações sistêmicas (grau 3 ou grave). No entanto, até o momento, não está estabelecido o perfil de genes deste patógeno relacionados à virulência em infecções mamárias em vacas, tampouco com a gravidade clínica dos casos. Neste cenário, o presente estudo investigou 18 genes associados com E. coli extraentérica (ExPEC), o perfil “in vitro” de motilidade swimming e swarming, e a sensibilidade/resistência aos antimicrobianos em 114 isolados de E. coli obtidos de vacas com mastite clínica com escores de gravidade 1 (45/114=39,5%), 2 (62/114=54,4%) e 3 (7/114=6,1%). Os principais genes codificadores de FV detectados foram de adesinas (fimH, 114/114=100%; ecpA, 73/114=64,0%; fimA, 36/114=31,6%), resistência ao soro (traT, 93/114=81,6%; ompT, 40/114=35,1%), sideróforos (irp2, 11/114=9,6%) e hemolisina (hlyA, 8/114=7%). Os isolados apresentaram 99,1% (113/114) de resistência in vitro a bacitracina e cloxacilina, 98,2% (112/114) a lincosamina e 54,4% (62/114) a eritromicina. Do total de isolados, 98,2% (n=112/114) foram multirresistentes pelo cálculo do índice de resistência múltipla aos antimicrobianos (IRMA). Não houve diferença estatística significante entre as medianas para motilidade ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Escherichia coli is the major pathogen involved in the etiology of bovine mastitis from the environment origin. This pathogen is characterized by a complexity of virulence factors (VF). Mammary infections by E. coli has shown a wide range of clinical signs causing changes in milk (score 1 or mild), quarters (score 2 or moderate), and systemic signs (score 3 or severe). Nevertheless, to date, the profile of the genes related to the virulence of this pathogen in mammary infections and the severity scores of the cases are not fully understood. In this scenario, a panel of 18 genes associated with extra-intestinal E. coli (ExPEC) were investigated, in addition to in vitro swimming and swarming motility profile, and antimicrobial susceptibility/resistance pattern among 114 E. coli strains isolated from cows with clinical mastitis showing severity scores 1 (45/114=39.5%), 2 (62/114=54.4%) and 3 (n=7/114=6.1%). The main genes related to VF harbored by isolates were adhesins (fimH, 114/114=100%; ecpA, 73/114=64.0%; fimA, 36/114=31.6%), serum resistance (traT, 93/114=81.6%; ompT, 40/114=35.1%), siderophores (irp2, 11/114=9.6%) and hemolysin (hlyA, 8/114=7%). Among studied isolates, 99.1% (113/114) showed in vitro resistance to bacitracin and cloxacillin, 98.2% (112/114) to lincosamin, and 54.4% (62/114) to erytromycin. Out of the total isolates, 98.2% (112/114) were considered multidrug resistant based on multiple antimicrobial resistance (MAR) index. No statistical difference was obs... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica de espectrometria de massas por ionização/dessorção a laser assistida por matriz tempo-de-vôo (MALDI-TOF) para a identificação direta em amostras de leite (sem cultivo microbiológico) de bactérias causadoras de mastite. Para tanto foram realizados dois experimentos (1 e 2). No experimento 1, o objetivo foi determinar a sensibilidade diagnóstica da técnica MALDI-TOF MS para a identificação direta em amostras de leite de Staphylococcus aureus, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae e Escherichia coli. Foram realizadas contaminações experimentais de S. aureus, S. uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae e E. coli em amostras de leite, para a obtenção de contagens de 103 a 109 ufc/mL. As amostras de leite contaminadas foram processadas com o uso do kit Maldi Sepsityper&reg; (Bruker Daltonics) e submetidas ao protocolo de lise bacteriana para posterior análise por MALDI-TOF MS. Espectros de massas foram coletados na faixa de massas de 2.000-20.000 m/z e foram analisados pelo programa MALDI Biotyper 3.0 (Bruker Daltonics) com as configurações padrão para obtenção da identificação bacteriana. A identificação direta de patógenos causadores de mastite a partir de amostras de leite foi possível em contagem &ge;106 ufc/mL para S. aureus, &ge;107 ufc/mL para E. coli, e &ge;108 ufc/mL para S. agalactiae, S. dysgalactiae e S. uberis. No experimento 2, o objetivo foi avaliar o efeito da pré-incubação de amostras de leite de quartos mamários com mastite subclínica sobre a eficácia da identificação sem cultivo de patógenos causadores de mastite por MALDI-TOF MS. Foram selecionados 2 rebanhos leiteiros para coletas de leite de quartos mamários de todas as vacas em lactação. As amostras de leite foram submetidas às análises de: a) cultura microbiológica; b) pré-incubação seguida de identificação por espectrometria de massas diretamente do leite; c) contagem bacteriana total (CBT). Para a realização da CBT, as amostras de leite foram submetidas à citometria de fluxo; e para a identificação direta de patógenos causadores de mastite a partir do leite, as amostras foram submetidas ao desnate por centrifugação (10.000 Xg por 10 minutos), e pré-incubação a 37&ordm;C por 12 horas. Posteriormente, as amostras foram processadas com o uso do kit Maldi Sepsityper&reg; (Bruker Daltonics) e submetidas ao protocolo de lise bacteriana para posterior análise por MALDI-TOF MS. Do total de 810 amostras de leite analisadas por cultura microbiológica (método referência), 347 apresentaram crescimento bacteriano, sendo 305 identificadas como agentes de interesse na identificação direta pelo método MALDI-TOF MS: Staphylococcus coagulase negativa (n=191), S. aureus (n=31), S. agalactiae (n=42), S. uberis (n=37), S. dysgalactiae (n= 4). Sendo assim, 305 amostras foram analisadas pelo método de idenfificação direta MALDI-TOF MS, a qual apresentou baixa sensibilidade quando comparado com a cultura microbiológica (método referência): Staphylococcus coagulase negativa (14,08%), S. agalactiae (15,25%), S. uberis (1,69%) S. aureus (6,12%) e S. dysgalactiae (0%). A pré-incubação de amostras de leite não aumentou a sensibilidade de identificação direta de microrganismos causadores de mastite pelo método MALDI-TOF MS. / The purpose of the present study was to evaluate the technique of mass spectrometry by desorption / ionization assisted laser array time-of-flight (MALDI-TOF MS) for the direct identification in milk samples (no microbiological culture) of mastitis causing bacteria. Therefore, we carried out two experiments (1 and 2). In experiment 1, we determined the diagnostic sensitivity of MALDI-TOF MS technique for the direct identification in milk samples of Staphylococcus aureus, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae and Escherichia coli. Experimental contamination of S. aureus, S. uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae and E. coli in samples of milk to a concentration of 103-109 cfu/mL were performed. The contaminated milk samples were processed using kit Maldi Sepsityper&reg; (Bruker Daltonics) and subjected to bacterial lysis protocol for analysis by MALDI-TOF MS. Mass spectra were collected in the mass range of 2000-20000 m/z and were analyzed by MALDI Biotyper 3.0 software (Bruker Daltonics) with default settings to obtain bacterial identification. Direct identification of mastitis causing pathogens from milk samples was possible at &ge;106 cfu/mL for S. aureus, &ge;107 cfu/mL for E. coli and &ge;108 cfu/mL for S. agalactiae, S. dysgalactiae and S. uberis. In experiment 2, the objective was to evaluate the effect of pre-incubation of milk samples from mammary quarters with subclinical mastitis on the effectiveness of identification without cultivation, of mastitis-causing pathogens by MALDI-TOF MS. We selected mammary quarter milk samples from all lactating cows on two dairy herds. The milk samples were subjected to analyzes of: a) microbiological culture; b) pre-incubation followed by identification by mass spectrometry directly from milk; c) total bacterial count (TBC). Flow cytometry was used to determine TBC and; to directly identify the mastitis-causing pathogens from milk, fat was separated by centrifugation (10,000 Xg for 10 minutes) and; samples were pre-incubated at 37°C for 12 hours. Subsequently, the skim milk samples were submitted to kit Maldi Sepsityper&reg; (Bruker Daltonics) and to the bacterial lysis protocol for analysis by MALDI-TOF MS. A total of 810 milk samples were analyzed by microbiological culture (reference method), of which 347 showed bacterial growth. Considering all culture positive samples 305 were identified as agents of interest in the direct identification by MALDI-TOF MS method: coagulase negative staphylococci (n = 191), S. aureus (n = 31), S. agalactiae (n = 42), S. uberis (n = 37) and S. dysgalactiae (n = 4). Therefore, 305 samples were directly identified by MALDI-TOF MS, which presented low sensitivity when compared to microbiological culture (Reference method): coagulase-negative staphylococci (14.08%), S. agalactiae (15.25 %), S. uberis (1.69%), S. aureus (6.12%) and S. dysgalactiae (0%). Pre-incubation of milk samples did not increase the sensitivity of the MALDI-TOF MS method directly identify mastitis-causing microorganisms.

O controle de mastite consiste em um conjunto de medidas de manejo e prevenção da doença em um rebanho, pois estudos realizados em todo estado de São Paulo estimaram um prejuízo de 17% da produção por propriedade devido à mastite considerando perdas como os gastos com tratamentos; descarte de leite; queda na produção; além de perdas por resíduos de antibióticos. O trabalho mostra que a população microbiana da mucosa dos tetos não varia conforme a sua posição no úbere do animal e a identificação dos microorganismos predominantes foram como sendo de Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Klebsiella pneumoniae e Acinetobacter junii. O objetivo deste trabalho foi determinar a eficácia do muco de escargot nos tetos de vacas leiteiras utilizando-o como \"pré e pós dipping\" e o comparado com a aplicação de solução de iodo, visando à prevenção ou a redução da incidência de infecções intramamárias. O muco de escargot possui uma propriedade antibacteriana bastante efetiva, conhecida como Achacin. Sua ação bactericida ocorre principalmente na fase de crescimento da bactéria agindo como agente quimioterápico. O muco de escargot mostrou ser igualmente eficiente no controle da população de microorganismo presente na superfície dos tetos, quando comparados ao uso da solução de iodo, além de que o seu efeito sobre a pele e mucosa dos tetos foi de deixá-los mais hidratados e com melhor elasticidade evitando rachaduras e focos de infecção, quando comparado ao agente mineral, podendo ser até mesmo um produto alternativo no controle e prevenção de mastite em vacas leiteiras. / The control of mastitis is a set of measures for management and prevention of disease in a herd, because studies from every state of Sao Paulo have estimated a loss of 17% in a property considering losses due to mastitis as spending on treatments; discarded milk, drop in production, and losses due to antibiotic residues. The study shows that the microbial population of the mucosa of the teats doesnt vary according to their position in the animal\'s udder and identification of microorganisms were predominant as Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, Klebsiella pneumoniae and Acinetobacter junii. The objective of this study was to determine the effectiveness of snail mucus teats of dairy cows using it as a \"pre and post dipping\" and compared with the application of iodine solution, aiming at preventing or reducing the incidence of mammary infections. The mucus of snail has a very effective antibacterial property, known as Achacin. Its bactericidal action occurs mainly in the growth of bacteria by acting as a chemotherapeutic agent. The mucus of snail proved to be equally effective in controlling the population of microorganisms present on the surface of the teats, compared to the use of iodine solution, and that its effect on the skin and mucous membrane of the teats was leaving them more hydrated and with improved elasticity avoiding cracks and foci of infection, when compared to mineral agent, which may even be an alternative product in the control and prevention of mastitis in dairy cows.

A mastite representa um grande desafio na pecuária leiteira, visto que é uma das afecções que mais acometem o rebanho bovino ocasionando grande impacto econômico. As bactérias são importantes agentes associados à enfermidade, sendo que as mais comumente encontradas são as do gênero Staphylococcus, associadas tanto às manifestações clínicas quanto subclínicas. A terapia antimicrobiana é usualmente requerida como tratamento, auxiliando as defesas do animal para a eliminação do agente invasor, sendo assim, de suma importância monitorar a sensibilidade dos patógenos aos antimicrobianos. Visto que a resistência aos medicamentos utilizados tem se tornado frequente, há a necessidade de estudos mais abrangentes sobre o assunto. Desta forma, o presente estudo avaliou 300 isolados de Staphylococcus provenientes de amostras de leite de bovinos com mastite clínica e/ou subclínica de propriedades de exploração leiteira. A espécie mais detectada nas análises foi S. aureus, e dentre os genes que codificam para adesinas e biofilmes os mais frequentes foram (eno, fib e fnbA) e (bap, icaA, icaD). A combinação mais frequente no tocante às adesinas foi eno-fib-fnbA, e para os biofilmes foram bap e bap-icaD. Os maiores índices de resistência foram verificados para os antimicrobianos betalactâmicos (amoxicilina, ampicilina e penicilina). Identificou-se as maiores frequências de sensibilidade para cefalotina, seguida pela oxacilina e gentamicina, e não foi detectada relação de concordância da oxacilina com os betalactâmicos. Avaliou-se a concentração mínima inibitória (MIC) para ampicilina, gentamicina, oxacilina e penicilina, para todas as cepas resistentes no antibiograma. Posteriormente, investigou-se os genes responsáveis pela codificação de resistência antimicrobiana, com os genes femA e femB sendo os mais comuns, porém o gene femA não foi detectado em todas as cepas de S. aureus. Os genes mecA e bla<//i>Z foram identificados, porém em baixa frequência, e o homólogo de mecA, o mecALGA251, somente em duas cepas. As informações obtidas podem ajudar em diferentes aspectos acerca dos perfis dos microrganismos no tocante aos fatores de virulência dos mesmos, permitindo novas abordagens relativas a terapias e medidas de prevenção à mastite. / Mastitis represents a major challenge in dairy farming, since it is one of the affections that most impact the cattle herd, causing great economic distress. Bacteria are important agents associated with the disease, and the most commonly found are those of the genus Staphylococcus, associated with both clinical and subclinical manifestations. Antimicrobial therapy is usually required as a treatment, assisting the animal\'s defenses to eliminate the invading agent, and it is therefore of paramount importance to monitor the susceptibility of pathogens to antimicrobials. Since resistance to drugs commonly used has become frequent, there is a need for more comprehensive studies on the subject. Thus, the present study evaluated 300 isolates of Staphylococcus from samples of dairy cattle from dairy farms. The most prevalent species in the analyses were S. aureus, and among the genes coding for adhesins and biofilms the most frequent combinations were (eno, fib and fnbA) and (bap, icaA, icaD). The most frequent combination for adhesins was eno-fib-fnbA, and for biofilms they were bap and bap-icaD. The highest resistance indices were verified for betalactam antibiotics (amoxicillin, ampicillin and penicillin). The highest frequencies of sensitivity were identified for cephalothin, followed by oxacillin and gentamicin, and no concordance relationship was found between oxacillin and betalactam. Minimum inhibitory concentration (MIC) for ampicillin, gentamicin, oxacillin and penicillin were performed for all strains resistant to the antibiogram. Subsequently, the genes responsible for the encoding of antimicrobial resistance were investigated, with the femA and femB genes being the most common, but the femA gene was not detected in all strains of S. aureus. The mecA and blaZ genes were identified, but at low frequency, and the mecA homolog, mecALGA251, was only found in two strains. The information obtained can help in different aspects about the microorganisms\' profiles regarding their virulence factors, allowing new approaches to therapies and mastitis prevention measures.