A mastite bovina apresenta alta prevalência nos rebanhos leiteiros e a antibioticoterapia é o procedimento mais utilizado no tratamento da mesma. O Staphylococcus aureus, agente etiológico mais frequentemente isolado em casos de mastite, tem demonstrado em diversos estudos aumento crescente no padrão de resistência aos antimicrobianos. O desenvolvimento de bactérias resistentes e a presença de resíduos de antimicrobianos no leite estimulam o desenvolvimento de novos tratamentos que solucionem estes problemas. O muco dos moluscos Achatina fulica é composto por uma glicoproteína, denominada achacin, com atividade antimicrobiana sobre bactérias Gram positivas. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram avaliar a atividade antimicrobiana in vitro do muco de A. fulica sobre S. aureus, bem como determinar e avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) do muco de A. fulica purificado sobre S. aureus ATCC 25923 e isolados de S. aureus provenientes de infecções intramamárias bovina. O muco foi purificado mediante cromatografia líquida de alta eficiência e a fração com atividade antimicrobiana foi submetida à quantificação protéica e microdiluição em caldo. A CIM do muco purificado determinada para a cepa ATCC 25923 correspondeu a 50 µg/mL e para os isolados de S. aureus, variou entre 12,5 e 100 µg/mL. Sendo que destes, dois isolados (6,7 %) apresentaram CIM de 12,5 µg/mL, três (10 %) CIM de 25µg/mL, vinte e três (76,6 %) CIM de 50 µg/mL e dois (6,7 %) apresentaram CIM de 100 µg/mL. A CIM50 para os isolados correspondeu a 50 µg/mL e a CIM90 a 100 µg/mL. No presente estudo observou-se que o muco purificado apresentou atividade antimicrobiana com ação bactericida. Estes resultados proporcionam perspectivas para a compreensão e otimização de protocolos microbiológicos deste potencial biofármaco com a finalidade de empregá-lo futuramente na terapêutica veterinária para o controle de infecções intramamárias causadas por S. aureus. / The bovine mastitis is highly prevalent in dairy herds and antibiotic therapy is the procedure most commonly used to treat it. Staphylococcus aureus is the most frequently isolated etiologic agent in cases of mastitis and it has been shown in several studies the pattern of increasing antimicrobial resistance. Due to the development of resistant bacterias and the presence of antimicrobial residues in the milk the development of new treatments to solve those problems are required. The mucus of the molluscs Achatina fulica contains a glycoprotein called achacin that presents antimicrobial activity against Gram positive bacteria. The aim of this study was the evaluation of the in vitro antimicrobial activity of the A. fulica mucus of on S. aureus, as well the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of A. fulica mucus purified on S. aureus ATCC 25923 and isolates of S. aureus from bovine intramammary infections. The mucus was purified by high performance liquid chromatography. The protein content in portion presenting the was quantified and microdiluted. The MIC determined for the purified mucus strain ATCC 25923 was 50 µg/mL and for the isolates of S. aureus ranged between 12,5 and 100 µg/mL. Among these samples, two isolates (6,7 %) showed MIC of 12,5 µg/mL, three (10 %) of MIC 25 µg/mL, twenty-three (76,6 %) MIC of 50 µg/mL and two (6,7 %) had an MIC of 100 µg/mL. The MIC50 for isolates was 50 µg/mL and MIC90 to100 µg/mL. It was found that the purified mucus showed bactericidal activity. The results showed in the present work improved the understanding and optimization of the biopharmaceutical microbiological potential that could be applied in new protocols in future veterinary therapy for the control of intramammary infections caused by S. aureus.

O presente trabalho foi organizado em dois estudos. O objetivo do primeiro estudo foi determinar o efeito da infecção intramamária (IIM) causada por S. aureus e S. agalactiae na contagem de células somáticas (CCS) e na composição do leite (gordura, proteína, lactose, sólidos totais e extrato seco desengordurado), o efeito da contagem de S. aureus e S. agalactiae sobre a composição do leite e a estimativa da frequência de vacas e de quartos infectados com S. aureus e S. agalactiae por meio da contagem do tanque. O objetivo do segundo estudo foi avaliar a reação em cadeia da polimerase em Tempo Real (qPCR) como metodologia alternativa à cultura microbiológica, por meio da sensibilidade diagnóstica, da concordância e da equivalência entre as metodologias para identificação e contagem de S. aureus e S. agalactiae de origem das vacas com IIM. O experimento foi realizado em quatro rebanhos comerciais com histórico de mastite causada por S. aureus e S. agalactiae. Foram coletadas 785 amostras compostas de leite, 3049 amostras de leite de quartos mamários de todas as vacas em lactação e 12 amostras de leite de tanque dos rebanhos selecionados, durante 3 meses consecutivos, totalizando 3 coletas por rebanho. As amostras de leite foram submetidas à detecção e contagem de S. aureus e S. agalactiae por meio de cultura microbiológica e de qPCR, e à análise de composição e CCS. No primeiro estudo, foi observado que amostras compostas de leite com S. agalactiae apresentaram menores teores de lactose e maiores teores de gordura, proteína, sólidos totais e CCS, e com S. aureus apresentaram menores teores de lactose e maiores teores de proteína e de CCS do leite. O aumento da contagem de S. aureus e S. agalactiae em amostras compostas de leite pode ocasionar aumento linear nos teores de lactose e de extrato seco desengordurado. Foi observado que as amostras compostas de leite e de quartos mamários apresentaram relação positiva referente às contagens de S. aureus e S. agalactiae e ao percentual (%) de amostras de leite com S. aureus e S. agalactiae. A partir de amostras compostas de leite pode-se estimar o percentual de quartos mamários com S. aureus e S. agalactiae. A contagem de S. aureus e de S. agalactiae de amostras de leite de tanque pode estimar o percentual de vacas com S. aureus e o percentual de quartos mamários com S. agalactiae. No segundo estudo, foi observado equivalência e concordância de resultados de identificação e contagem de S. agalactiae entre as metodologias de qPCR e cultura microbiológica somente em amostras de leite de tanque e de quartos mamários. Em amostras de leite com S. aureus e S. agalactiae, a qPCR apresentou sensibilidade diagnóstica de 71,54% e 90.20% em amostras de leite de quartos mamários, 71,79% e 87,72% em amostras compostas de leite e 50,00% e 90,91% em amostras de leite de tanque, respectivamente. Portanto, o leite de tanque e a qPCR podem se utilizadas para monitoramento da mastite bovina no rebanho leiteiro / This work was organized in two studies. The purpose of the first study was to determine the effect of intramammary infection (IMI) caused by S. aureus and S. agalactiae in somatic cell count (SCC) and composition of milk (fat, protein, lactose, total solids and nonfat dry), the effect of S. aureus count and S. agalactiae on milk composition and an estimated frequency of cows and quarters infected with S. aureus and S. agalactiae by counting the tank. The purpose of the second study was to evaluate the polymerase chain reaction in real time (qPCR) as an alternative methodology to microbiological culture, through the diagnostic sensitivity, for consistency and equivalence between the methodologies for identification and enumeration of S. aureus and S. agalactiae source of cows with IMI. The experiment was conducted in four commercial herds with mastitis history caused by S. aureus and S. agalactiae. We collected 785 samples composed of milk, 3049 milk samples from mammary glands of all lactating cows and 12 from the selected herds tank milk samples for 3 consecutive months, totaling 3 samples per herd. The milk samples were subjected to the detection and counting of S. aureus and S. agalactiae through microbial culture and qPCR, and the composition analysis and SCC. In the first study, it was observed that composite milk samples with S. agalactiae had lower lactose content and higher fat content, protein, total solids and SCC, and S. aureus showed lower lactose content and higher protein content and SCC milk. Increased count of S. aureus and S. agalactiae in composite samples of milk can cause a linear increase in the levels of lactose and nonfat dry. It was observed that the composite milk sample and mammary glands were closely related to the counts of S. aureus and S. agalactiae and the percentage (%) of samples of milk with S. aureus and S. agalactiae. From composite samples of milk can estimate the percentage of mammary quarters with S. aureus and S. agalactiae. The count of S. aureus and S. agalactiae of tank milk samples can estimate the percentage of cows with S. aureus and the percentage of mammary quarters with S. agalactiae. In the second study, it was observed equivalence agreement and identification results and S. agalactiae count between the methodologies of qPCR and microbiological culture only in tank milk samples and mammary glands. In milk samples with S. aureus and S. agalactiae, qPCR showed diagnostic sensitivity of 71.54% and 90.20% in milk samples from mammary quarters, 71.79% and 87.72% on composite samples of milk and 50.00% to 90.91% in tank milk samples, respectively. Therefore, the tank and the qPCR milk can be used for monitoring of bovine mastitis in dairy cattle

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-03-27T16:35:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Diane_Schiavon.pdf: 775620 bytes, checksum: ef7ee3eff59d2a06e02224b7b6522877 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-03-27T20:55:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Diane_Schiavon.pdf: 775620 bytes, checksum: ef7ee3eff59d2a06e02224b7b6522877 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T20:55:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_Diane_Schiavon.pdf: 775620 bytes, checksum: ef7ee3eff59d2a06e02224b7b6522877 (MD5) Previous issue date: 2015-09-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A utilização dos vegetais é uma prática usual, principalmente para as comunidades rurais. Uma das formas de se obter esses dados sobre as plantas medicinais é através de levantamentos etnobotânicos. É através da etnobotânica que se busca o conhecimento e o resgate do saber tradicional particularmente relacionado ao uso dos recursos da flora. O trabalho tem como objetivo resgatar o conhecimento etnobotânico de informantes sobre plantas medicinais do município de Pelotas e Capão do Leão e validar in vitro a ação antibacteriana das plantas que possuem este fim, frente às principais bactérias isoladas do úbere bovino com mastite. Foi realizado um resgate etnobotânico com três informantes. Foram identificadas 83 espécies vegetais distribuídas em 40 famílias botânicas, sendo as famílias Asteraceae e Lamiaceae as de maior número de espécie sendo a folha a parte da planta mais utilizada. Das 83 plantas identificadas, 26 foram citadas como antimicrobianos e validadas através da Técnica de Microdiluição em Caldo. Foram 16 as espécies que apresentam alguma ação antibacteriana frente às bactérias testadas. Podemos concluir que as informantes utilizam uma grande diversidade de plantas medicinais tanto na cura como na prevenção das doenças e que as espécies pariparoba (Piper regnellii (Miq.) C. DC.) e teta de cadela (Zanthoxylum astrigerum (R.S.Cowan) P.G. Waterman) são as mais promissoras dentre as testadas, podendo ser posteriormente realizados estudos in vivo com a finalidade de determinar sua ação na prevenção da mastite bovina. / The use of plant is a common practice, especially for rural communities. One way to get this data on medicinal plants is through ethnobotanical surveys. It is through ethnobotany that seeks knowledge and the rescue of traditional knowledge particularly related to the use of flora resources. The study aims to rescue the ethnobotanical knowledge of informants on medicinal plants of Pelotas and Capão do Leão and validate the in vitro antibacterial activity of the plants that hold this end, against the major bacteria isolated from bovine udder with mastitis. An ethnobotanical rescue with three informants was conducted. We identified 83 plant species belonging to 40 botanical families, with the Asteraceae and Lamiaceae families the most representative in number of species and the sheet of the most used plant. Of the 83 plants identified, 26 were cited as antimicrobial and validated through the microdilution technique in broth. There were 16 plants that have some antibacterial action in the face of bacteria tested. We can conclude that the informants use a wide variety of medicinal plants both in healing and in disease prevention and the pariparoba species (Piper reginelli (Miq.) C. DC.) And bitch theta (Zanthoxylum astrigerum (RSCowan) PG Waterman ) are the most promising among the different and may be performed later in vivo studies with the purpose of determining its effect on the prevention of bovine mastitis.

Introdução: O leite pode ser considerado um dos alimentos mais completos por apresentar alto teor de proteínas e sais minerais, porém, também é considerado excelente meio de cultura para microrganismos. Objetivos: Identificar o número de UFC de Staphylococcus spp. e Klebsiella pneumoniae, cultivados isoladamente ou em associação, em leite integral estéril, a 6 oC, 27 oC e 37 oC e descrever a curva de morte térmica, quando submetidas ao processo de pasteurização lenta isoladamente ou em associação. Material e Métodos: Avaliação através da contagem das UFC, do comportamento de Staphylococcus spp. e K. pneumoniae, isoladas de tanque de refrigeração de leite, submetidas a temperaturas que simulam o leite em condições de refrigeração (6 °C), condições ambientais (25 °C) e na temperatura ideal de crescimento de patógenos mesófilos (36°C). Avaliação da sensibilidade de Staphylococcus spp. e K. pneumoniae isoladas e em associações ao processo de pasteurização lenta. Resultados: Na escala 1 de Mac Farland a média de UFC de K. pneumoniae foi maior que a de Staphylococcus spp. A 6 °C as bactérias no leite, isoladas ou em associação crescem na mesma velocidade. A 25 °C a K. pneumoniae cresce mais que o Staphylococcus spp. A 25 °C K. pneumoniae associada ao Staphylococcus spp. cresce mais do que quando encontra-se isolada. A 36 °C K. pneumoniae associada ao Staphylococcus spp. cresce mais do que quando encontra-se isolada e ainda mais que a 25 °C. A pasteurização lenta foi efetiva, pois reduziu em no mínimo 90% as UFC no leite após 30 minutos a 65 °C. Conclusão: a medida que aumenta a temperatura, até 36 °C, a Klebsiella pneumoniae apresenta crescimento superior ao Staphylococcus spp., a contaminação de leite por Klebsiella pneumoniae (contaminação ambiental) irá influenciar mais na qualidade do produto final, comparando-se à contaminação por Staphylococcus spp., oriundo de mastite e a interação de microrganismos altera a morte dos mesmos, recomendando-se que novos estudos sejam realizados para que se entenda melhor esse processo. / Introduction: The milk can be considered one of the most complete food for its high contents of protein and minerals, but also it is considered an excellent medium of culture for microorganisms. Objective: To identify the number of the Colony Forming Units of Staphylococcus spp. and Klebsiella pneumoniae, in integral sterile milk, at different temperatures (6ºC, 27ºC e 37ºC) and to describe a thermal curve death, when submitted to the process of slow pasteurization isolated or in association. Materials and methods: Evaluation by counting of the colony forming units and the behavior of the Staphylococcus spp. and Klebsiella pneumoniae, isolated and in association occurred in the cooling tank, submitted to temperatures that simulate the conditions of milk in cooling (6ºC), environmental condition (25ºC) and the optimal temperature for the growth of microorganisms (36ºC). Evaluation of the sensibility of Staphylococcus spp. and Klebsiella pneumoniae isolated and in association during the pasteurization process. Results: In Scale 1 of Mac Farland the average of the colony form units of the K. pneumoniae was greater than the colony of Staphylococcus spp. At 6ºC the microorganisms in the milk isolated or in association grew at the same speed. At 25ºC K. pneumoniae associated with Staphylococcus spp. grew more than when they were isolated. At 36ºC K. pneumoniae associated with Staphylococcus spp. grew more then when it was isolated and more than at 25ºC. So we can conclude that the slow pasteurization was effective, because it has reduced at least 90% of the colony form unity in the milk after 30 minutes at 65ºC. Conclusion: By raising the temperature up to 36ºC, a Klebsiella pneumoniae had a superior growth when compared with Staphylococcus spp.; the contamination of milk by Klebsiella pneumoniae (environmental contamination) influences the most the quality of the final product when compared to the contamination by Staphylococcus spp. from mastitis, we can also conclude that the interaction of microorganisms modify the death rate of them. New studies and researches are recommended to a deeper and better comprehension of this process.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-02-04T11:34:12Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Antunha de Freitas - 2014.pdf: 1434433 bytes, checksum: dc31fc189484df358ff2c4b1c41491b3 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-05T14:21:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Antunha de Freitas - 2014.pdf: 1434433 bytes, checksum: dc31fc189484df358ff2c4b1c41491b3 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-05T14:21:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Antunha de Freitas - 2014.pdf: 1434433 bytes, checksum: dc31fc189484df358ff2c4b1c41491b3 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Staphylococcus aureus can produce a wide variety of virulence factors secreted or associated with bacterial wall, among them the exotoxins. The pathogenicity of S. aureus to the bovine udder is not quite clarified, but the staphylococcal exotoxins and their combinations may play a role in the pathogenic potential of the microorganism. Considering that knowing the virulence factors of S. aureus provides an important information of the establishment of effective control strategies of intramammary infections we aimed to detect the DNA of S. aureus isolates from milk of cows with clinical or subclinical mastitis and identify genes encoding bacterial exotoxins and superantigens. For this purpose, in the present study were used 55 isolates of S. aureus, obtained from milk samples from cows with clinical or subclinical mastitis. The isolates were electronically identified using the methodology described by Vitek 2® device manual. Genomic DNA extrac ted using the High Pure PCR Template Preparation Kit. The laboratory analysis for detection of species and genes encoding the exotoxins were performed at the Laboratório de Especialidades Biológicas of Centro de Pesquisa em Alimentos of Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás (LEB/CPA/EVZ/UFG). The gene eta was detected in 85,5% of the isolates, the pvl gene in 63,6% and the tst gene in 14,5%. The etb gene was not isolated. It was verified that the Real Time PCR technique for detection of sodA gene proved to be effective in identifying the species S. aureus, and may become an important tool in the diagnosis of the bovine mastits causing microorganisms. The isolates of S. aureus mastitis harbor genes exotoxins, such as pvl, tst and eta, which the last one may play an important role in the pathogenesis of bovine mastitis since the majority of the isolates showed to be positive for its presence. / Staphylococcus aureus é capaz de produzir uma grande variedade de fatores de virulência associados à parede bacteriana ou secretados, entre eles as exotoxinas. Sua patogenicidade para o úbere bovino não está completamente elucidada, mas as exotoxinas estafilocócicas e suas combinações podem desempenhar papel no potencial patogênico do microrganismo. Levando em consideração que o conhecimento dos fatores de virulência de S. aureus fornece informações importantes para o estabelecimento de estratégias efetivas de controle de infecções intramamárias, objetivou-se detectar o DNA de S. aureus isolados de leite provenientes de vacas com mastite clínica ou subclínica e identificar genes codificadores de superantígenos bacterianos e exotoxinas. Para tanto, no presente estudo foram utilizados 55 isolados de S. aureus, obtidos a partir de amostras de leite provenientes de vacas com mastite clínica ou subclínica. Os isolados foram identificados eletrônicamente a partir da metodologia descrita pelo manual do equipamento Vitek 2 ® . O DNA genômico extraído utilizando o High Pure PCR Template Preparation Kit. As análises laboratoriais de detecção da espécie e dos genes codificadores das exotoxinas foram realizadas no Laboratório de Especialidades Biológicas do Centro de Pesquisa em Alimentos da Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás (LEB/CPA/EVZ/UFG). Detectou-se o gene eta em 85,5% dos isolados, o gene pvl em 63,6% e o gene tst em 14,5%. O gene etb não foi isolados. Verificou-se que a técnica de PCR em tempo real para detecção do gene sodA, mostrou-se eficaz na identificação da espécie S. aureus, podendo se tornar uma ferramenta importante no diagnóstico dos microrganismos causadores de mastites bovinas. Os isolados de S. aureus de mastite carream genes de exotoxinas, como pvl, tst e eta, sendo que este último pode ter um papel importante na patogênese de mastites bovinas, visto que a maioria dos isolados se mostraram positivos para a sua presença.

Estudos têm mostrado a incidência de mastite bovina associada à alga Prototheca zopfii. O objetivo deste trabalho foi estudar a interação da P. zopfii com neutrófilos recuperados de leite bovino e avaliar o efeito do sistema ácido indol-3-acético/peroxidase de raiz forte (AIA/HRP) sobre a viabilidade deste microrganismo em experimentos in vitro. A P. zopfii foi recuperada de vacas com mastite clínica e, no laboratório, foram realizadas a caracterização molecular, morfológica e crescimento exponencial do microrganismo. Em seguida, neutrófilos recuperados de leite bovino foram incubados na ausência e na presença de P. zopfii opsonizada e foram avaliadas a produção de peróxido de hidrogênio, enzimas antioxidantes dos neutrófilos e microrganismo, e a capacidade fagocitária. Em outro estudo, a P. zopfii foi incubada com o sistema AIA/HRP e foram avaliadas a viabilidade por unidades formadoras de colônias (UFC), atividade de enzimas antioxidantes, integridade de membrana por exclusão com azul de Trypan e integridade do DNA. Os resultados foram analisados pela análise de variância com significância de 5% usando o teste Tukey. Foram observados diversos tamanhos celulares da P. zopfii, presença de autofluorescência, crescimento exponencial ao longo do tempo de incubação em que não foi possível determinar o início da fase de morte. Ainda, foram encontrados os genótipos 1, 2 e 3 nos isolados em estudo. A produção de peróxido de hidrogênio pelos neutrófilos na presença da alga foi estimulada 5 vezes em relação ao controle, estimulou a atividade das enzimas catalase (CAT) em 21% e glutationa redutase (GR) em 27% e não houve diferença significativa quanto à atividade de CAT, GR e superóxido dismutase (SOD) produzido pela P. zopfii. Também foi verificado que a P. zopfii não foi englobada pelo neutrófilo. O sistema AIA/HRP inibiu o crescimento do microrganismo em 45, 82 e 88% nos tempos de 4, 6 e 9 horas de incubação; a atividade da SOD, CAT, Glutationa Peroxidase (GPx) e GR aumentou respectivamente em 90, 120, 150% e 3,4 vezes; houve redução da viabilidade da P. zopfii em 10, 15, 20, 25 e 32% após os tempos de 4, 6, 8, 10 e 12 horas de incubação; e não afetou a integridade do DNA após 6 horas de incubação. Conclui-se que a P. zopfii é altamente resistente frente aos neutrófilos e demonstrou ser susceptível quanto ao efeito microbicida do sistema AIA/HRP. / Studies have shown the incidence of bovine mastitis associated with the algae Prototheca zopfii. The objective of this work was to study the interaction of P. zopfii with neutrophils recovered from bovine milk and to evaluate the effect of system indole-3-acetic acid/horseradish peroxidase (IAA/HRP) on the viability of this microorganism in vitro experiment. P. zopfii was recovered from cows with clinical mastitis and both the molecular and morphological characterization were performed besides the evaluation of exponential growth of the microorganism in the laboratory. Next, neutrophils recovered from bovine milk were incubated in the absence and presence of opsonized P. zopfii and were evaluated the production of hydrogen peroxide, antioxidant enzymes on neutrophils and microorganism, and phagocytic capacity. In another study, P. zopfii was incubated with the system IAA/HRP and the viability assessed by colony forming units (CFU), antioxidant enzymes activity, membrane integrity by exclusion with Trypan blue and DNA integrity. The results were analyzed by analysis of variance with a 5% significance using the Tukey test. Results from P. zopfii characterization showed various cellular sizes, presence of autofluorescence, exponential microorganism growth throughout the incubation time and was not possible to determine the beginning of the death. Moreover it was found genotypes 1, 2 and 3 in the isolates in study. The production of hydrogen peroxide by neutrophils in the presence of algae was stimulated 5 times compared to the control, increase the activity of catalase (CAT) in 21% and glutathione reductase (GR) in 27% was seen in neutrophils; and there was no significant difference in CAT, GR and superoxide dismutase (SOD) activity produced by P. zopfii. P. zopfii was not engulfment by neutrophils. The system IAA/HRP inhibited the growth of the microorganism in 45, 82 and 88% in the times of 4, 6 and 9 hours of incubation, the activity of SOD, CAT, glutathione peroxidase (GPx) and GR increased respectively by 90, 120, 150%, and 3.4 times, decreased the viability of P. zopfii 10, 15, 20, 25 and 32% after the times of 4, 6, 8, 10 and 12 hours of incubation, and did not affect the integrity of DNA after 6 hours of incubation. As a conclusion, P. zopfii is highly resistant to the neutrophils and demonstrated to be susceptible to the effect microbicidal of system IAA/HRP.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Alziro Vasconcelos Carneiro.pdf: 455403 bytes, checksum: 96b519d909bc30f30ddc42546978acfb (MD5) Previous issue date: 2006-07-31 / There are several pathogens causing bovine mastitis, but only Streptococcus agalactiae is feasible to be eradicated from a herd. Two herd data ( A and B ) were used to evaluate the economic and technical viability of the eradication of this pathogen, based on this pathogen attack program. It was used a 24 month period data from production; somatic cells count (SCC), clinical mastitis and expenditures. A cost-benefit analysis was carried out through mathematical models. It was identified 16 infected cows with S. agalactiae in herd A , and in herd B , there were 42, from which 31 associated with Staphylococcus aureus. The therapy effectiveness in eliminating S. agalactiae was about 100% in both herds. However, 18 cows kept the infection of S. aureus after the therapy (42% of effectiveness). The number of cases and cows with mastitis decrease was about 18% and 21%, respectively. For herd B it was found a SCC growing tendency on infected group and on total milk, 12 months before the therapy (980x10P 3 P and 968x10P 3 P cells/ml averages, respectively) and stabilization after treatment (577x10P 3 P cells/ml and 563x10P 3 P cells/ml averages, respectively). Treatment cost was about R$ 175.95 per cow considering the following higher cost items: laboratory exams (39%); milk discard (31%); veterinary medicaments and labor for additional operations (20%); and veterinary fees (10%). Payment due to quality and to the decrease in clinical mastitis cases represented about 55% e 34% of total benefit. However, it was not found significant milk production increase for treatment program (p>0.05), in treated group, nor in herd B . It was estimated about 11.67; 6.45 and 2.61 monetary unit return for each unit invested. Prophylactic procedures were important to eradicate and maintain the herd free from S. agalactiae, they have also contributed for lower incidence of clinical mastitis, decreasing SCC and discard/precocious mortality, so its adoption is recommended. Considering Brazilian requirements relative to somatic cells and milk total bacterial as well as S. agalactiae role in increasing these parameters, it is suggested an eradication program of this pathogen, which may help farmers to maintain production under standard requirements, as well as the consumers reducing risk and Government income loss due to taxes collection. / Entre os v?rios pat?genos causadores de mastite, o ?nico que pode ser erradicado do rebanho ? Streptococcus agalactiae. Dados de dois rebanhos, 'A' e 'B', foram utilizados para avaliar a viabilidade t?cnica e econ?mica de um programa de erradica??o deste pat?geno. Foram utilizados dados de produ??o, contagem de c?lulas som?ticas (CCS), mastite cl?nica e financeiros, de 24 meses. An?lise custo/benef?cio foi realizada com aux?lio de modelos matem?ticos. Identificaram-se 16 vacas infectadas com S. agalactiae no rebanho 'A' e 42 no rebanho 'B', sendo que destas ?ltimas, 31 apresentaram infec??o associada com Staphylococcus aureus. A efic?cia da terapia de ataque foi de 100% nos dois rebanhos. Entretanto, 18 vacas no rebanho B mantiveram a infec??o por S. aureus ap?s a terapia (42% de efic?cia). No rebanho 'B', a redu??o do n?mero de casos e de vacas com mastite cl?nica foi de 18 e 21%, respectivamente. A CCS apresentou tend?ncia crescente no grupo infectado e no leite total, nos 12 meses antecedentes ? terapia, com as m?dias de 980x103 e 968x103 c?l/ml, respectivamente. Ap?s o tratamento, as m?dias estabilizaram-se em 541x103 e 563x103 c?l/ml, respectivamente. O custo do tratamento foi de R$ 175,95 por vaca/tratada, sendo 39% deste com exames laboratoriais, 31% descarte de leite, 20% medicamentos e m?o-de-obra devido a opera??es adicionais e 10% honor?rios do m?dico veterin?rio. O pagamento por qualidade e a redu??o dos custos com a mastite cl?nica representaram 55% e 34% do benef?cio. Aumento significativo n?o foi observado (p>0,05) na produ??o m?dia de leite dos grupos tratados e do rebanho 'B'. Estimaram-se retornos de 11,67, 6,45 e 2,63 unidades monet?rias para cada unidade investida no programa de erradica??o de S. agalactiae. As medidas terap?uticas e profil?ticas foram eficazes para erradicar e manter o rebanho livre de S. agalactiae, al?m de contribu?rem para reduzir a CCS do leite, a incid?ncia de mastite cl?nica, o descarte/mortalidade precoce e proporcionou ganhos em programa de pagamento por qualidade, sendo sua ado??o recomend?vel. Considerando as exig?ncias brasileiras com rela??o ao limite de c?lulas som?ticas e de bact?rias totais no leite e o papel de S. agalactiae no aumento desses par?metros, o programa de erradica??o deste pat?geno pode significar a perman?ncia do produtor na atividade formal, al?m de reduzir risco para os consumidores e perdas de receitas do Governo com recolhimento de impostos.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-07-29T13:36:35Z No. of bitstreams: 1 2011 - Bruno Rocha Pribul.pdf: 1463809 bytes, checksum: ba7b3b0f00c0b4469b45fe02ec9f8a7f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-29T13:36:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011 - Bruno Rocha Pribul.pdf: 1463809 bytes, checksum: ba7b3b0f00c0b4469b45fe02ec9f8a7f (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / PRIBUL, Bruno Rocha. Evaluation of Vancomycin Resistance and Susceptibility Profile Bacteriocins of staphylococci isolated from bovine mastitis in Southern State of Rio de Janeiro. 41p Thesis (Master of Veterinary Science). Instituto de Veterin?ria, Departamento de Parasitologia Animal, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Serop?dica, RJ, 2011. Bacteria of the genus Staphylococcus are among the most implicated in the etiology of mastitis. An additional difficulty in controlling bacterial infections by this genus is represented by its frequent resistance to antibiotics. The glycopeptides (eg vancomycin) appear as an alternative therapy because of the increasing strains of staphylococci resistant to beta-lactams, which are the drugs of choice in these infections. Thus, glycopeptide resistance represents a threat to the future of antimicrobial therapy in humans and animals. This study aimed to evaluate the profile of vancomycin resistance pheno-genotypically in Staphylococcus spp. milk samples from cows with mastitis. All 150 isolates (50 isolates of Staphylococcus aureus, 50 isolates of Staphylococcus intermedius and 50 isolates of Coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) were evaluated using the tests of disk diffusion, agar microdilution and detection of vanA e vanB genes. The antimicrobial susceptibility test showed high resistance to beta-lactam antibiotics for all groups. In the disk diffusion test, 24% of coagulase-positive isolates showed resistance to teicoplanin (24/100) and 23% to vancomycin (23/100). In the agar microdilution test for detection of CIM, 16% of the isolates were resistant to vancomycin (16/100). Among the resistant isolates in the agar microdilution testing, 56.25% of the isolates (9 / 16) had MIC values ranging from 4-8?g/ml. Staphylococcus coagulase-negative showed no resistance to the evaluated glycopeptides. Genes for resistance to vancomycin were detected in 37.5% of vancomycin-resistant isolates (6 / 16). To seek a correlation between the presence of glycopeptide resistance and the ability of producing biofilm, tests were performed to characterize growth in Congo red agar and also detection of the biofilm adherence test in microplates. It were detected 66.66% and 90, 00%, respectively, of isolates producing biofilm. The production of "slime" presented no statistical correlation with resistance to glycopeptides. The sensitivity profile of Staphylococcus spp. was assessed against the bacteriocins produced by Lactobacillus paracasei, Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus fermentum. Lactobacillus paracasei bacteriocins presented the highest inhibition capacity. / PRIBUL, Bruno Rocha. Avalia??o da Resist?ncia a Vancomicina e do Perfil de Suscetibilidade a Bacteriocinas de Staphylococcus spp Isolados de Mastite Bovina da Regi?o Sul do Estado do Rio de Janeiro. 41p Disserta??o (Mestrado em Ci?ncias Veterin?rias). Instituto de Veterin?ria, Departamento de Parasitologia Animal, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Serop?dica, RJ, 2011. As bact?rias do g?nero Staphylococcus est?o entre as mais implicadas na etiologia das mastites. Uma dificuldade adicional no controle das infec??es bacterianas por este g?nero ? representada por sua freq?ente resist?ncia aos antimicrobianos. Os glicopept?deos, como a vancomicina, aparecem como uma alternativa terap?utica devido ao crescente aumento de cepas estafiloc?cicas resistentes aos betalact?micos, que s?o os f?rmacos de elei??o nestas infec??es. Desse modo, a resist?ncia aos glicopept?deos representa uma amea?a ao futuro da terapia antimicrobiana em humanos e animais. O presente trabalho buscou avaliar o perfil de resist?ncia ? vancomicina em isolados de Staphylococcus spp. oriundos de amostras de leite de vacas com mastite. Todos os 150 isolados estudados (50 Staphylococcus aureus, 50 Staphylococcus intermedius e 50 Staphylococcus spp. coagulase negativos), foram avaliados atrav?s dos testes de difus?o em disco simples, microdilui??o em ?gar e detec??o dos genes vanA e B. O teste de suscetibilidade antimicrobiana revelou elevada resist?ncia aos beta-lact?micos para todos os grupos avaliados. No ensaio de difus?o em disco, os isolados coagulasepositivos apresentaram um perfil de resist?ncia de 24% a teicoplanina (24/100) e 23% a vancomicina (23/100). No teste de microdilui??o em ?gar para detec??o da CIM, 16% dos isolados apresentaram resist?ncia ? vancomicina (16/100). Entre os isolados resistentes no teste de microdilui??o em ?gar, 56,25% dos isolados (9/16) apresentaram valores de CIM que variaram entre 4-8?g/ml. Os Staphylococcus coagulase-negativos n?o apresentaram resist?ncia aos glicopeptideos. Os genes de resist?ncia ? vancomicina foram detectados em 37,5% dos isolados vancomicina-resistentes (6/16). Para se buscar uma correla??o entre a presen?a de resist?ncia aos glicopeptideos e a capacidade de forma??o de biofilme foram realizados os testes de caracteriza??o de crescimento em ?gar vermelho congo e detec??o de biofilme pelo teste de ader?ncia em microplacas, onde foram detectados 66,66% e 90,00% respectivamente, de isolados produtores de biofilme. A produ??o de ?slime? n?o apresentou correla??o estat?stica com a resist?ncia aos glicopept?deos. O perfil de sensibilidade dos isolados de Staphylococcus spp. foi avaliado frente as bacteriocinas produzidas pelos Lactobacillus paracasei, Lactobacillus acidophillus e Lactobacillus fermentum. As bacteriocinas que apresentaram maior capacidade de inibi??o frente aos Saphylococcus spp. testados foram as produzidas pelos Lactobacillus paracasei

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2017-11-16T11:05:06Z No. of bitstreams: 1 MARCILON FONSECA DE LIMA.pdf: 1087364 bytes, checksum: 6e2761fa0ab9a541085cc0bf42f4bc54 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-16T11:05:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARCILON FONSECA DE LIMA.pdf: 1087364 bytes, checksum: 6e2761fa0ab9a541085cc0bf42f4bc54 (MD5) Previous issue date: 2017-09-19 / The goal of this study is to diagnose subclinical mastitis in cattle using multivariate classification applying images, Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectra and a bovine data survey set (DIB). The interest objects classification in milk images, NMR and DIB are processed with the algorithm of successive projections, linear discriminant analysis, and partial least squares discriminant analysis. The best diagnostic results obtained by image classification was 75% and 78% with NMR. As a result it can be observed that there is the possibility of classification for the diagnosis of mastitis by image and NMR, however, it is interesting to increase the number of samples for increasing the precision of two evaluated diagnosis methods. / O objetivo do trabalho é fazer o diagnóstico de mastite subclínica em gado bovino empregando classificação multivariada usando imagens, espectros de ressonância magnética nuclear (Nuclear Magnetic Resonance, NMR) e um conjunto de dados de inventário bovino (DIB). A classificação de objetos de interesse nas imagens de leite, NMR e DIB é feita com os algoritmos de projeções sucessivas, análise discriminante linear e análise discriminante por mínimos quadrados parciais. O resultado do diagnóstico obtido por classificação por imagem no melhor caso foi de 75% e com NMR de 78%. Como resultado pode-se observar que há possibilidade de classificação para diagnóstico da mastite por imagem e por NMR, porém é interessante aumentar a quantidade de amostras para um melhor termo.

Introdução: O leite pode ser considerado um dos alimentos mais completos por apresentar alto teor de proteínas e sais minerais, porém, também é considerado excelente meio de cultura para microrganismos. Objetivos: Identificar o número de UFC de Staphylococcus spp. e Klebsiella pneumoniae, cultivados isoladamente ou em associação, em leite integral estéril, a 6 oC, 27 oC e 37 oC e descrever a curva de morte térmica, quando submetidas ao processo de pasteurização lenta isoladamente ou em associação. Material e Métodos: Avaliação através da contagem das UFC, do comportamento de Staphylococcus spp. e K. pneumoniae, isoladas de tanque de refrigeração de leite, submetidas a temperaturas que simulam o leite em condições de refrigeração (6 °C), condições ambientais (25 °C) e na temperatura ideal de crescimento de patógenos mesófilos (36°C). Avaliação da sensibilidade de Staphylococcus spp. e K. pneumoniae isoladas e em associações ao processo de pasteurização lenta. Resultados: Na escala 1 de Mac Farland a média de UFC de K. pneumoniae foi maior que a de Staphylococcus spp. A 6 °C as bactérias no leite, isoladas ou em associação crescem na mesma velocidade. A 25 °C a K. pneumoniae cresce mais que o Staphylococcus spp. A 25 °C K. pneumoniae associada ao Staphylococcus spp. cresce mais do que quando encontra-se isolada. A 36 °C K. pneumoniae associada ao Staphylococcus spp. cresce mais do que quando encontra-se isolada e ainda mais que a 25 °C. A pasteurização lenta foi efetiva, pois reduziu em no mínimo 90% as UFC no leite após 30 minutos a 65 °C. Conclusão: a medida que aumenta a temperatura, até 36 °C, a Klebsiella pneumoniae apresenta crescimento superior ao Staphylococcus spp., a contaminação de leite por Klebsiella pneumoniae (contaminação ambiental) irá influenciar mais na qualidade do produto final, comparando-se à contaminação por Staphylococcus spp., oriundo de mastite e a interação de microrganismos altera a morte dos mesmos, recomendando-se que novos estudos sejam realizados para que se entenda melhor esse processo. / Introduction: The milk can be considered one of the most complete food for its high contents of protein and minerals, but also it is considered an excellent medium of culture for microorganisms. Objective: To identify the number of the Colony Forming Units of Staphylococcus spp. and Klebsiella pneumoniae, in integral sterile milk, at different temperatures (6ºC, 27ºC e 37ºC) and to describe a thermal curve death, when submitted to the process of slow pasteurization isolated or in association. Materials and methods: Evaluation by counting of the colony forming units and the behavior of the Staphylococcus spp. and Klebsiella pneumoniae, isolated and in association occurred in the cooling tank, submitted to temperatures that simulate the conditions of milk in cooling (6ºC), environmental condition (25ºC) and the optimal temperature for the growth of microorganisms (36ºC). Evaluation of the sensibility of Staphylococcus spp. and Klebsiella pneumoniae isolated and in association during the pasteurization process. Results: In Scale 1 of Mac Farland the average of the colony form units of the K. pneumoniae was greater than the colony of Staphylococcus spp. At 6ºC the microorganisms in the milk isolated or in association grew at the same speed. At 25ºC K. pneumoniae associated with Staphylococcus spp. grew more than when they were isolated. At 36ºC K. pneumoniae associated with Staphylococcus spp. grew more then when it was isolated and more than at 25ºC. So we can conclude that the slow pasteurization was effective, because it has reduced at least 90% of the colony form unity in the milk after 30 minutes at 65ºC. Conclusion: By raising the temperature up to 36ºC, a Klebsiella pneumoniae had a superior growth when compared with Staphylococcus spp.; the contamination of milk by Klebsiella pneumoniae (environmental contamination) influences the most the quality of the final product when compared to the contamination by Staphylococcus spp. from mastitis, we can also conclude that the interaction of microorganisms modify the death rate of them. New studies and researches are recommended to a deeper and better comprehension of this process.