The general objectives of this thesis were: (i) to determine the etiological and molecular profile of clinical mastitis (CM) in 20 dairy herds of Southeast, Brazil; and (ii) to quantify antimicrobial used for treatment of CM in the study population. To achieve this goals, four studies were performed. In the Study 1, we characterized the pathogen frequency and severity of CM in dairy herds. In addition, we determined the incidence rate of clinical mastitis (IRCM) and its association with the following herd-level descriptors: bulk milk somatic cell count (BMSCC), bulk milk total bacterial count (BMTBC), herd size (number of lactating cows), milk yield, housing system and season. The association between herd-level descriptors and IRCM were determined by two groups of mixed regression models: one based on the overall IRCM, and five based on the following specific-pathogen groups: contagious, other Gram-positive, Gram-negative, other (composed of yeast and Prototheca spp), and negative culture. A total of 5,957 quarter-cases of CM were recorded and the most frequently isolated pathogens were Escherichia coli (6.6% of total cultures), Streptococcus uberis (6.1%), and Streptococcus agalactiae (5.9%). The majority of CM cases were mild (60.3%), while 34.1% were moderate and 5.6% severe. Overall, the IRCM was 9.7 quarter-cases per 10,000 quarter-days at risk (QDAR), and the only herd-level parameter associated with overall IRCM was BMSCC, in which the highest IRCM was observed for herds with BMSCC >600.000 × 103 cells/mL. In the models evaluating the specific-pathogen groups, IRCM with isolation of major contagious pathogens was associated with BMSCC, milk yield and housing system. For the evaluation of other Gram-positive pathogens, the IRCM was higher in the rainy season of 2015 in comparison with the other seasonal categories. In addition, for the model evaluating the Gram-negative group, the IRCM was highest in herds with BMTBC >30 × 103 cfu/mL. The Study 2 aimed to characterize the treatment profile and quantify the antimicrobial consumption for treatment of CM in dairy herds; and to determine the association of antimicrobial use (AMU) and the same herd-level descriptors as described in the Study 1. Data on treatment practices and AMU were obtained from 19 dairy herds for a period of 12 months per herd. The AMU for treatment of CM was quantified monthly in units of defined daily dose (DDD) and expressed as antimicrobial treatment incidence (ATI; number of DDD per 1,000 lactating cows-day). The overall monthly mean ATI was 17.7 DDD per 1,000 lactating cow-days (15.4 for intramammary compounds, and 2.2 for systematically administered antimicrobials). Among intramammary drugs, aminoglycosides had the highest ATI (11.7 DDD per 1,000 lactating cow-days), while for systematically administrated antimicrobials, fluoroquinolones (4.2 DDD per 1,000 lactating cow-days) were the most frequently used antimicrobials. Herd size and BMSCC were positively associated with ATI. In addition, herd-level ATI was higher in freestall herds than in compost bedded-pack barns. In the Study 3, we determined the phylogeny of E. coli strains isolated from CM in dairy cows and the association of most frequent phylogroups with antimicrobial susceptibility. A total of 100 E. coli isolates recovered from CM cases described in the Study 1 were categorized according to their phylogenetic group using a quadruplex PCR method; antimicrobial susceptibility pattern was also evaluated. Most isolates were assigned to phylogenetic group A (52%), followed by B1 (38%), B2 (2%), C (4%), D (3%), and E (1%). Resistant isolates were observed for all evaluated antimicrobials. Overall, more than 96% of E. coli isolates were resistant to ampicillin, and more than 23% were resistant to cephalothin, sulphadimethoxine or tetracycline. High levels of resistance (>70%) were also found to erythromycin, oxacillin, penicillin, penicillin associated with novobiocin, and pirlimycin. In contrary, high susceptibility was observed to ceftiofur (96.8%) among E. coli isolates. Difference in the antimicrobial susceptibility among phylogenetic groups was observed only for cephalothin, in which E. coli strains belonging to the phylogroup A were inhibited at lower antimicrobial concentrations than strains assigned to the phylogroup B1. In Study 4, we evaluated the genotypic diversity among Strep. agalactiae and Strep. uberis isolates recovered from CM in dairy cows; in addition, the study evaluated the association of genotypes clustered by genetic similarity with antimicrobial susceptibility pattern. Isolates were subtyped using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis. A great genotypic diversity was found for both Strep. agalactiae (45 subtypes out of 89 isolates) and Strep. uberis (56 subtypes out of 88 isolates). For evaluation of antimicrobial susceptibility, subtypes of Strep. agalactiae were clustered into three groups (Ia, Ib and II), while Strep. uberis subtypes were clustered into two groups (I and II) according to their genetic similarity. Overall, Strep. agalactiae isolates showed high susceptibility to most antimicrobials, except to tetracycline and erythromycin. Differences in the antimicrobial susceptibility among clusters of Strep. agalactiae were observed for ampicillin, ceftiofur, erythromycin, pirlimycin, sulphadimethoxine and tetracycline. In contrary, Strep. uberis isolates were categorized as resistant to most antimicrobials, except to cephalothin and penicillin+novobiocin. No differences were observed among clusters for all antimicrobials in the analysis of Strep. uberis. In conclusion, the results of this thesis indicated a high IRCM in the evaluated herds, and although environmental pathogens were the most common cause of CM in these herds, contagious pathogens such as Strep. agalactiae and Staph. aureus, are still a concern in some dairy herds of Brazil. Furthermore, high frequencies of AMU and off-label protocols were observed among the evaluated herds. The non-judicious use of antimicrobials can become a risk factor for the development of antimicrobial resistance, which was even observed for isolates belonging to the three most prevalent bacterial species identified from CM cases in our study (E. coli, Strep. agalactiae and Strep. uberis). Finally, because there were some herd-level descriptors associated with the IRCM and AMU in our study, there may be opportunity for management strategies aiming to improve the control of CM in dairy herds of southeastern Brazil. / Os objetivos gerais desta tese foram: (i) determinar o perfil etiológico e molecular da mastite clínica (MC) em 20 rebanhos leiteiros do Sudeste do Brasil; e, (ii) quantificar os antimicrobianos usados para tratamento da MC na população estudada. Para alcançar esses objetivos, quatro estudos foram realizados. No Estudo 1, foi caracterizada a frequência de patógenos causadores de MC e a gravidade das infecções nos rebanhos leiteiros. Além disso, foi determinada a taxa de incidência de mastite clínica (TIMC) e sua associação com as seguintes variáveis em nível de rebanho: contagem de células somáticas em leite de tanque (CCSLT), contagem bacteriana total em leite de tanque (CBTLT), tamanho (número de vacas em lactação), produção de leite, sistema de alojamento e estação do ano. A associação entre as variáveis em nível de rebanho e a TIMC foi determinada por dois grupos de modelos de regressão logística multivariada: um baseado na TIMC geral, e cinco baseados nos seguintes grupos específicos de patógenos: contagiosos, outros Gram-positivos, Gram-negativos, outros patógenos (composto de leveduras e Prototheca spp.), e cultura negativa. Um total de 5.957 casos de MC em nível de quarto mamário foi registrado e os patógenos mais prevalentes foram Escherichia coli (6,6% de todas as culturas), Streptococcus uberis (6,1%), e Streptococcus agalactiae (5,9%). A maioria dos casos de MC foi de gravidade leve (60,3%), enquanto 34,1% dos casos foram moderados e 5,6% foram graves. A TIMC geral foi de 9,7 casos por 10.000 quartos-dia em risco (QDR), e o único parâmetro em nível de rebanho associado com a TIMC geral foi a CCSLT, em que a TIMC mais alta foi observada em rebanhos com CCSLT >600.000 × 103 células/mL. Nos modelos que avaliaram os grupos específicos de patógenos, a TIMC de patógenos contagiosos foi associada com a CCSLT, produção de leite e sistema de alojamento. Na avaliação de outros patógenos Gram-positivos, a TIMC foi maior na estação chuvosa de 2015 em comparação com as outras categorias referentes à estação do ano. Adicionalmente, para o modelo avaliando o grupo de patógenos Gram-negativos, a TIMC foi mais alta em rebanhos com CBTLT >30.000 × 103 ufc/mL. O Estudo 2 teve como objetivo caracterizar o perfil de tratamento e o consumo de antimicrobianos em rebanhos leiteiros; e determinar a associação de uso de antimicrobianos (UAM) e as mesmas variáveis em nível de rebanho descritas no Estudo 1. Dados sobre as práticas terapêuticas e UAM foram obtidos de 19 rebanhos leiteiros durante um período de 12 meses por rebanho. A frequência de UAM para tratamento da MC foi quantificada mensalmente em unidades de doses definidas diárias (DDD) e expressa como incidência de tratamento antimicrobiano (ITA: número de DDD por 1.000 vacas em lactação-dia). A média de ITA mensal foi de 17,7 DDD por 1.000 vacas em lactação-dia (15,4 para compostos intramamários, e 2,2 para compostos sistêmicos). Entre os produtos intramamários, os aminoglicosídeos tiveram a ITA mais alta (11,7 DDD por 1.000 vacas em lactação-dia), enquanto que para os compostos administrados pela via sistêmica, as fluoroquinolonas (4,2 DDD por 1.000 vacas em lactação-dia) foram os antimicrobianos mais frequentemente usados. O tamanho do rebanho e CCSLT foram positivamente associados com a ITA. Além disso, a ITA foi mais alta em rebanhos com freestall do que em rebanhos com sistema tipo compost barn. No Estudo 3, determinou-se a filogenia de cepas de E. coli isoladas de casos de MC em vacas leiteiras, e a associação dos filogrupos mais frequentes com a susceptibilidade aos antimicrobianos. Um total de 100 isolados de E. coli identificados nos casos de MC descritos no Estudo 1 foram categorizados de acordo com os grupos filogenéticos por meio de um método de PCR quadruplex; o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos também foi avaliado. A maioria dos isolados pertenceram ao grupo A (52%), seguido dos grupos B1 (38%), B2 (2%), C (4%), D (3%), e E (1%). Foram encontrados isolados resistentes para todos os antimicrobianos avaliados. De forma geral, mais de 96% dos isolados de E. coli foram resistentes a ampicilina, e mais de 23% foram resistentes a cefalotina, sulfadimetoxina ou tetraciclina. Altos níveis de resistência (>70%) foram encontrados também para eritromicina, oxacilina, penicilina e penicilina associada a novobiocina. Ao contrário, foi observado alta susceptibilidade ao ceftiofur (96.8%) entre os isolados de E. coli. Diferenças na susceptibilidade entre os grupos filogenéticos foi observada apenas para a cefalotina, em que os isolados de E. coli pertencentes ao filogrupo A foram inibidos em concentrações de antimicrobianas mais baixas que isolados pertencentes ao filogrupo B1. No Estudo 4, avaliou-se a diversidade genotípica entre isolados de Strep. agalactiae e Strep. uberis identificados em casos de MC em vacas leiteiras; adicionalmente, o estudo avaliou a associação dos genótipos agrupados de acordo com a similaridade genética com o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos. Os isolados foram genotipados por meio do método de amplificação randômica de DNA polimórfico (RAPD). Grande diversidade genotípica foi observada tanto para o Strep. agalactiae (45 subtipos de 89 isolados) quanto para Strep. uberis (56 subtipos de 89 isolados). Para a avaliação de susceptibilidade aos antimicrobianos, os subtipos de Strep. agalactiae foram agrupados em três clusters (Ia, Ib e II), enquanto que os subtipos de Strep. uberis foram agrupados em dois clusters (I e II) de acordo com a similaridade genética. De forma geral, os isolados de Strep. agalactiae apresentaram alta susceptibilidade à maioria dos antimicrobianos, exceto para tetraciclina e eritromicina. Diferenças na susceptibilidade aos antimicrobianos entre os clusters de Strep. agalactiae foram observadas para ampicilina, ceftiofur, eritromicina, pirlimicina, sulfadimetoxina e tetraciclina. Por outro lado, os isolados de Strep. uberis foram resistentes à maioria dos antimicrobianos, exceto para cefalotina e penicilina + novobiocina. Não foram encontradas diferenças entre os clusters para todos os antimicrobianos na análise de Strep. uberis. Em conclusão, os resultados desta tese indicaram alta TIMC nos rebanhos avaliados, e apesar de os patógenos ambientais serem a causa mais comum de MC nestes rebanhos, patógenos contagiosos como Strep. agalactiae e Staph. aureus, ainda são uma preocupação em alguns rebanhos do Brasil. Além disso, observaram-se altas frequências de UAM e de terapias não recomendadas em bula entre os rebanhos avaliados. O uso não judicioso de antimicrobianos pode se tornar um fator de risco para o desenvolvimento da resistência bacteriana aos antimicrobianos, o que foi inclusive observado para isolados pertencentes as três espécies bacterianas mais prevalentes nos casos de MC no nosso estudo (E. coli, Strep. agalactiae e Strep. uberis). Finalmente, pelo fato de algumas variáveis em nível de rebanho terem sido associadas com a TIMC e com o UAM em nosso estudo, é possível que hajam oportunidades para implementação de estratégias de manejo com o objetivo de melhorar o controle da MC em rebanhos leiteiros do sudeste do Brasil.

O objetivo geral do estudo foi avaliar os fatores de risco associados com práticas de manejo e a qualidade higiênica do leite cru, e caracterizar o nível de conhecimento e opiniões de produtores de leite sobre controle de mastite e qualidade do leite. Os objetivos específicos foram avaliar os fatores de risco associados com a qualidade higiênica do leite, determinar o efeito do tipo de agente causador de mastite sobre a qualidade do leite cru, e avaliar a associação entre o nível de conhecimento dos produtores e a contagem de células somáticas (CCS) do leite de tanque. O presente estudo foi dividido em três experimentos. No experimento 1, para avaliação de práticas de manejo associadas à qualidade higiênica do leite cru em rebanhos leiteiros, foram selecionados 120 rebanhos de acordo com a média geométrica da contagem bacteriana total (CBT) de 10 amostras de leite/ rebanho coletadas durante dois meses consecutivos, para compor dois grupos: 60 com alta CBT (1,11x104 UFC/mL) e 60 com baixa CBT (4,4x103 UFC/mL). Após a seleção, amostras de leite foram coletadas uma vez por semana durante dois meses para determinação da CBT, contagem do leite com incubação preliminar (CIP), contagem do leite pasteurizado (CLP), contagem de coliformes (CC), CCS e de concentrações de gordura, proteína e sólidos totais. Após a realização das análises, 63 rebanhos foram selecionados e visitados para aplicação de questionário sobre: a) informações gerais de manejo do rebanho; b) manejo de ordenha; c) procedimentos de limpeza de equipamento de ordenha e utensílios; d) programa de controle da mastite; e) condições de limpeza do úbere. Para o experimento 2, o nível de conhecimento e as opiniões dos produtores de leite sobre mastite e qualidade do leite, foram avaliados em 63 rebanhos selecionados e distribuídos de acordo com as médias geométricas da CCS (8 coletas semanais consecutivas durante dois meses) em três grupos: a) baixa CCS: ≤ 250.000 céls/mL(n = 16); b) média CCS: >250.000 ≤ 400.000 céls/mL (n = 24); c) alta CCS: > 400.000 céls/mL(n = 23). Nos rebanhos selecionados, foram aplicados questionários aos responsáveis pelo manejo do rebanho, com questões sobre: características socioeconômicas, conhecimentos a respeito de CCS, CBT e mastite e comportamentos dos produtores com relação a práticas de prevenção da mastite. No experimento 3, para avaliação da associação entre patógenos causadores de mastite e qualidade do leite, foram selecionados 90 rebanhos com base na CCS do tanque de 10 amostras/ rebanho coletadas durante dois meses consecutivos, para compor os seguintes grupos: a) ≤ 250.000 céls/mL (n = 30); b) >250.000 ≤ 600.000 céls/mL (n = 30); c) >600.000 céls/mL (n = 30). As amostras do leite de tanque foram coletadas, a cada 15 dias por um período de 3 meses, para determinação da contagem de Staphylococcus aureus, contagem de Streptococcus agalactiae, contagem de estafilococos coagulase-negativa, contagem de estreptococos ambientais, contagem de Escherichia coli, contagem de coliformes totais, CBT, CCS e de concentrações de gordura, proteína e sólidos totais. A alta quantidade de matéria orgânica presente na válvula de saída do tanque de expansão é um fator de risco para a qualidade higiênica do leite cru; o uso do desinfetante de tetos pré e pós-ordenha são práticas de manejo que reduzem a contagem dos principais indicadores de qualidade higiênica do leite e a prática de ordenha com o bezerro ao pé da vaca está associada ao aumento de CBT, CIP e CC. Outros fatores socioeconômicos como ter o leite como principal atividade econômica na propriedade, o tipo de ordenha utilizada no rebanho, o uso de métodos para detecção de mastite e o conhecimento das exigências legais de CCS e CBT foram fatores associados à CCS do leite de tanque. Adicionalmente, altas contagens de Streptococcus agalactiae reduzem a qualidade do leite de tanque por estarem correlacionadas com o aumento de CCS. / The overall objectve of this study was to evaluate risk factors associated with management practices and hygienic raw milk quality, and to caracterize the farmer\'s knowledge and opinions about mastitis control and milk quality. The specific objectives were to evaluate the risk factors associated with hygienic milk quality, to determine the effect of mastitis pathogens on raw milk quality and to assess the association between framers knowledge about mastitis control and somatic cell count (SCC) of bulk tank. Therefore, we proposed three experiments. For experiment 1, to evaluate management practices associated with hygienic quality of raw milk in dairy farms, 120 dairy herds were selected according to the geometric mean of the total bacterial count (TBC) from 10 milk samples collected during two consecutive months, which were distributed in two groups: high TBC (1.11 x104 CFU / mL, n = 60) and low TBC (4.4 x103 CFU / mL, n = 60). After selection of herds, milk samples were collected weekly for two months to perform analyzes of TBC, preliminary incubation count (PIC), laboratory pasteurization count (LPC), coliform count (CC), somatic cell count (SCC) and fat, protein and total solids concentrations. After laboratory analysis, 63 herds were visited for on-farm data collection by a questionnaire about: a) general aspects of farm management; b) milking management; c) milking equipment and utensils cleaning procedures; d) mastitis control; e) udder cleaning conditions. For experiment 2, to evaluate the knowledge and opinions of dairy farmers about mastitis control and milk quality, 63 herds were selected and distributed according to geometric means of SCC (8 weekly milk sampling during two consecutive months) into three groups: a) low SCC: ≤ 250,000 cells / mL (n = 16); b) medium SCC: >250,000 ≤ 400,000 cells / mL (n = 24); c) high SCC:> 400,000 cells / mL (n = 23). Previously formulated questionnaires were submitted to the herd manager, with questions about the following topics: socioeconomic characteristics, knowledge about SCC, TBC, mastitis and mastitis prevention practices. For experiment 3, to evaluate the association between mastitis pathogens, SCC and TBC, 90 herds were selected based on the SCC of 10 milk samples collected during two consecutive months, to compose the following groups: a) ≤ 250,000 cells / mL (n = 30), b) >250,000 ≤ 600,000 cells / mL (n = 30), c)> 600,000 cells / mL (n = 30). Bulk Tank milk samples were collected every 15 days for a period of three months, for Staphylococcus aureus count, Streptococcus agalactiae count, coagulase-negative staphylococci count, environmental streptococci count, Escherichia coli count, coliform count, TBC, SCC and fat, protein and total solids concentrations. The high amount of organic matter in the bulk tank outlet valve is a risk factor for the raw milk hygienic quality, the use of pre and post teat dipping is associated with a reduction of major indicators of raw milk hygienic quality and the presence of suckling calves before milking was associated with increased TBC, PIC and CC. Other social and economical factors, such as the milk as main economic activity in the farm, type of milking procedures used, the use of methods for mastitis detection and knowledge about legal requirements for SCC and TBC were correlated with CCS in bulk tank milk. Additionally, high Streptococcus agalactiae counts is associated with reduced bulk tank milk quality because of increased SCC.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_elizabeth_schwegler.pdf: 1198143 bytes, checksum: 306f08a6253b951c8751a8eba9c7194c (MD5) Previous issue date: 2012-08-15 / The peripartum in dairy cows (three weeks before and three weeks after calving) is characterized by large changes in physiological demands in the animal where management practices, particularly nutrition, strongly influences the incidence of peripartum disorders and subsequent milk production. Most of the studies in that period in dairy cows are focused on confined systems where milk production is high. Therefore, the aim of this study was to assess metabolic markers associated with the occurrence of clinical and subclinical mastitis and insulin resistance in dairy cows in semi extensive system. Our study was divided into two major experiments with the following hypothesis: 1) medium milk production primiparous cows in semi extensive system have predictive metabolic markers of clinical and subclinical mastitis in the prepartum, 2) medium milk production pluriparous dairy cows with low rate of glucose metabolism during the prepartum, which is an indicative of insulin resistance, have higher minerals excretion in the postpartum period. In experiment 1, blood concentrations of NEFA in the prepartum period were higher, in contrast, phosphorus and glucose were lower (P <0.05) in animals with clinical mastitis postpartum. In experiment 2, pluriparous dairy cows with low rate of glucose metabolism in the prepartum had higher urinary calcium excretion in both prepartum and postpartum periods, and also the highest NEFA concentration in the prepartum period (P <0.05). The blood concentrations of calcium in dairy cows with high rate of glucose metabolism in the postpartum was elevated from the prepartum period and remained in the postpartum (P <0.05). Dairy cows kept in semi extensive system with moderate production level had predictive markers of mastitis in the prepartum, as previously demonstrated by other authors in more intensified systems of higher requirements for the animal. The highlighted marker was NEFA, however, in the second study it was shown in higher concentrations in the pluriparous dairy cows with low rate of glucose metabolism at prepartum, emphasizing the importance of this marker also in the insulin resistance. / O periparto nas vacas leiteiras (três semanas anteriores e as três posteriores ao parto) é caracterizado por grandes mudanças nas demandas fisiológicas do animal, sendo que, as práticas de manejo, principalmente nutricionais, influenciam intensamente a incidência de desordens no periparto e a subsequente produção de leite. A maioria dos estudos neste período na vaca leiteira é em sistemas confinados de alta produção leiteira, por essa razão o objetivo desta tese foi identificar marcadores metabólicos preditivos com a ocorrência de mastite clínica e subclínica e com a excreção de minerais em vacas leiteiras em sistema semi-extensivo. Nosso estudo foi estratificado em dois trabalhos com as seguintes hipóteses: 1) vacas leiteiras primíparas de média produção em sistema semi-extensivo possuem marcadores metabólicos preditivos de mastite clínica e subclínica no pré-parto; 2) vacas leiteiras pluríparas de média produção com menor taxa de metabolização de glicose, que é um indicativo de resistência da insulina, no pré-parto possuem maior excreção de minerais no pós-parto. No experimento 1 as concentrações sanguíneas de NEFA no pré-parto foram maiores e de fósforo e glicose menores (P<0,05), em animais com mastite clínica no pós-parto. No experimento 2 as vacas leiteiras pluríparas com menor taxa de metabolização de glicose no pré-parto apresentaram maior excreção urinária do cálcio no pré e pós-parto, e ainda, o NEFA mais alto no pré-parto (P<0,05). As concentrações sanguíneas de cálcio em vacas leiteiras com maior taxa de metabolização de glicose no pós-parto foi elevada desde o pré parto, mantendo-se no pós (P<0,05). Nas condições estudadas, em vacas leiteiras mantidas em sistema semi-extensivo de mediana produção foi observado que há marcadores preditivos de mastite já no pré-parto, como previamente comprovado por outros autores em sistemas mais intensificados de maiores exigências para o animal. O marcador em destaque foi o NEFA, sendo que o mesmo no segundo estudo se apresentou de forma mais elevada nas vacas leiteiras pluríparas com menor taxa de metabolização de glicose no pré-parto, enfatizando a importância deste marcador também na resistência à insulina.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_angela_faccin.pdf: 701455 bytes, checksum: 1aba9406a434f486abae1d2bd069feeb (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / The scientific interest in herbal medicine has led to the development of research based on the popular practices. This study aimed to evaluate the antibacterial activity of the hydroalcoholic extract and essential oil from the leaves and fruits of Schinus terebinthifolius Raddi at two growth stages against bacteria related to bovine mastitis, besides testing a plant extract with antibacterial action, to be used antisepsis in milking. The thesis is presented in two papers. The first refers to the in vitro antibacterial activity of hydroalcoholic extract and essential oil from leaves and fruits at two growth stages, tested by serial microdilution plates against bovine mastitis bacteria. The results were expressed as Minimal Bactericidal Concentration. All extracts showed antibacterial activity. The second paper shows results for the in vivo experiment, which tested the hydroalcoholic extract of the leaves of the plant before and after dipping for twelve consecutive weeks, was used as control iodine commercial, weekly data were collected regarding clinical mastitis, subclinical and new intramammary infections, and biweekly health data sphincter and skin from the ceiling. None of the indices analyzed apresentraram difference between treatments, suggesting that the plant extract can be used to teat antisepsis as a replacement of conventional products. In our study we have obtained satisfactory results from the use of this plant, it has antibacterial activity against bacteria in bovine mastitis and teat disinfection has similar results to the conventional product. / O interesse científico pela fitoterapia levou ao desenvolvimento de pesquisas baseadas nas práticas populares. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antibacteriana do extrato hidroalcoólico e óleo essencial das folhas e frutos de Schinus terebinthifolius Raddi em dois estádios fenológicos frente a bactérias relacionadas a mastite bovina, além de testar um extrato da planta, com ação antibacteriana, para ser utilizado na antissepsia da ordenha. A dissertação está apresentada em dois artigos científicos. O primeiro, refere-se a atividade antibacteriana in vitro do extrato hidroalcoólico e óleo essencial das folhas e frutos em dois estádios fenológicos, testados pela técnica de microdiluição serial em placas contra bactérias da mastite bovina. Os resultados foram expressos pela Concentração Bactericida Mínima. Todos os extratos apresentaram atividade antibacteriana. O segundo trabalho demonstra resultados referentes ao experimento in vivo, onde foi testado o extrato hidroalcoólico das folhas da planta no pré e pós dipping, durante doze semanas consecutivas, como controle se utilizou iodo comercial, foram coletados dados semanais referentes a mastite clínica, subclínica, e novas infecções intramamárias, e dados quinzenais da saúde do esfíncter e da pele do teto. Nenhum dos índices analisados apresentraram diferença estatísticas entre os tratamentos, sugerindo que o extrato da planta pode ser usado para antissepsia dos tetos como substituinte dos produtos convencionais. Em nosso estudo obtivemos resultados satisfatórios da utilização desta planta, ela apresenta ação antibacteriana frente as bactérias da mastite bovina e na desinfecção dos tetos tem resultados semelhantes aos do produto convencional.

Le virus d'Epstein-Barr (EBV), est un gamma herpes virus exclusivement humain qui infecte près de 95% de la population adulte. EBV établit un cycle de latence dans les cellules B mémoires et les cellules épithéliales. EBV entre périodiquement dans une réplication lytique avec sécrétion des virions dans la salive. L’infection EBV est associée à l’apparition de lymphomes, de cancers et de maladies auto-immunes. Les conditions favorisant le développement de ces pathologies restent mal connues mais l’immunodépression et potentiellement l’activation des lymphocytes B nécessaire à la réplication d’EBV jouent un rôle clé.Nous avons examiné l’association entre activation des cellules B dans le compartiment systémique et le contrôle sur le réservoir de l’EBV. Deux situations cliniques d’activation chronique des cellules B ont été explorées ; le syndrome de Gougerot-Sjögren et la mastite subclinique dans le contexte de l’infection par le VIH.Dans ce travail de thèse, nous avons tout d’abord développé une PCR en temps réel pour la quantification de l'ADN de EBV ciblant la région répétée BamHI-W du génome. Le travail de validation de la technique a permis d’évaluer précisément le gain de sensibilité comparativement à une qPCR LMP2 (cible unique). L’impact des variations de répétition de la séquence BamHI-W suivant les souches et isolats EBV a également été analyse.Dans un deuxième travail, nous avons montré que, la mastite subclinique était fréquente au cours de l’allaitement et qu’elle était un facteur indépendant associé à une augmentation de l'excrétion EBV par le lait maternel. Cette sécrétion est associée localement à l’inflammation et à l’excrétion du VIH ce qui témoigne de phénomène de synergie entre les deux virus. Nous avons également démontré que l'ADN EBV dans le lait maternel peut être résistant à la DNase et que le virus était est probablement encapsidé dans le lait, donc potentiellement infectieux.Enfin, bénéficiant d’un accès aux prélèvements de la cohorte ASSESS nous avons recherché de possible anomalie du contrôle de l’infection EBV dans le compartiment sanguin au cours du syndrome de Gougerot-Sjögren primaire dans lequel les lésions glandulaires salivaires et lacrymales sont associées à la présence d’EBV. Nous avons démontré que le réservoir EBV et la réplication EBV dans le compartiment systémique sont bien contrôlées au cours du syndrome de Gougerot-Sjögren primaire. La réponse anticorps contre l’antigène précoce d’EBV (EA) n'était pas associée à une augmentation de l'ADN de EBV.Ce travail de thèse, souligne le lien entre l'activation des lymphocytes B, l'inflammation chronique et le contrôle sur le réservoir d’EBV. Dans la glande mammaire le contrôle de l’infection EBV est perturbé en cas de mastite subclinique. Au contraire dans le syndrome de Gougerot-Sjögren l’infection reste bien contrôlée dans le compartiment sanguin malgré l’activation des lymphocytes B et la présence renforcée du virus dans les lésions glandulaires. / TEpstein-Barr virus (EBV), an ubiquitous human gammaherpesvirus affects 95% of adult human population and establishes a lifelong latency in memory B cells periodically entering into lytic replication with further propagation in oropharyngeal epithelia and shedding through saliva. Latent EBV infection is associated with lymphomas, carcinomas and autoimmune diseases. Although the conditions favoring the development of these pathologies are not completely understood, the immunosuppression and B cell activations play an important role in EBV-associated diseases.We examined the control over the EBV reservoir in a diseases associated with B cell activation. Two clinical situations associated with altered B cell activation were explored: primary Sjogren’s syndrome and subclinical mastitis in HIV-infected mothers.Primarily, we developed an in-house real-time PCR for EBV DNA quantification targeting the repetitive BamHI-W region of EBV DNA. The validation analyses enabled to evaluate the gain in sensitivity of the BamHI-W test relative to single repeat LMP2 qPCR. The impact of the variations in BamHI-W reiteration on EBV DNA quantification was further assessed on different EBV strains and clinical samples.In a second study, we showed that subclinical mastitis was common during breastfeeding, and it was an independent factor associated with increased EBV breast milk shedding. This secretion was associated with local inflammation and HIV shedding, reflecting synergy between the two viruses. We have also demonstrated that breast milk EBV DNA may be resistant to DNase, and the virus was probably encapsidated in the breast milk and thus potentially infectious.Finally, with an access to ASSESS cohort we looked for possible abnormal control over EBV infection in the blood compartment in primary Sjögren's syndrome, where salivary and lacrimal gland lesions were shown to be associated with the local activation of EBV. We have demonstrated that in primary Sjogren's syndrome EBV reservoir and replication in the systemic compartment are well controlled. The antibody response against EBV early antigen (EA) was not associated with increased DNA EBV.This thesis points out the link between the activation of B cells, chronic inflammation and control over the reservoir of EBV. In the mammary gland disturbed control of EBV infection is linked with subclinical mastitis. In contrast, in primary Sjogren’s syndrome EBV infection remains well controlled in the blood compartment despite the activation of B cells and the increased presence of the virus in glandular lesions.

Submitted by biblioteca unifenas (biblioteca@unifenas.br) on 2016-09-28T13:54:49Z No. of bitstreams: 1 Poliana Silvia Garcia Rosa Dissertacao.pdf: 823674 bytes, checksum: 729179eaf82075941fd1280b8b99f1e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-28T13:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Poliana Silvia Garcia Rosa Dissertacao.pdf: 823674 bytes, checksum: 729179eaf82075941fd1280b8b99f1e2 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this research was to evaluate the physicochemical characteristics of the Dutch and crossbred cows milk originating from dairy tournaments, in the southern region of Minas Gerais, in the period from March to October 2012, using the nonparametric data for protein, fat, lactose, total solids, nonfat dry extract and somatic cell count variables. Normative Instruction 62 establishes maximum levels of somatic cell count of 500,000 cells / ml of milk, minimum fat content of 3.0%, total solids 11.4%, 2.9% protein, dry extract 8.4%. The somatic cell count reflects the health of the mammary gland of the animal. Of the 108 samples of milk collected from cows participants on the last day of the milk match, after complete milking and weighing of milk, 24% of the animals showed somatic cell counts that do not fit the parameters established by the Normative Instruction 62. The other parameters evaluated as lactose, fat, total solids and nonfat dry extract showed significant differences by comparing the milk with high somatic cell count, milk with low somatic cell count. The level of milk protein with high somatic cell count remained in the Normative Instruction 62 standard, because of the increase of plasma proteins in milk as a result of the inflammatory response. Most milk samples from dairy tournaments did not fit in Instruction 62, as the increase in somatic cells interfered in the chemical physical quality. / Objetivou-se nesta pesquisa avaliar as características físico-químicas do leite de vacas holandesas e mestiças oriundas de torneios leiteiros na região do Sul de Minas Gerais, no período de março a outubro de 2012, sendo utilizados os dados não paramétricos para as variáveis de proteína, gordura, lactose, sólidos totais, extrato seco desengordurado e contagem de células somáticas. A Instrução Normativa 62 estabelece níveis máximo de contagem de células somáticas de 500.000 células/mL de leite, teores mínimos de gordura de 3,0%, sólidos totais de 11,4%, proteína 2,9%, extrato seco desengordurado 8,4%. A contagem de células somáticas reflete na saúde da glândula mamária do animal. Das108 amostras de leite coletadas das vacas participantes no último dia do torneio leiteiro, após a ordenha completa e pesagem do leite, 24% dos animais apresentaram contagem de células somáticas que não se enquadram nos parâmetros estabelecidos pela Instrução Normativa 62. Os demais parâmetros avaliados como lactose, gordura, sólidos totais e extrato seco desengordurado não apresentaram diferenças significativas, comparando o leite com contagem de células somáticas altas, com leite com contagem de células somáticas baixas. O nível de proteína em leite com contagem de células somáticas altas se mantiveram no padrão da Instrução Normativa 62, pois houve um aumento das proteínas plasmáticas no leite em decorrência da resposta inflamatória. Conclui-se que a maioria das amostras de leite coletadas em torneios leiteiro não se enquadraram na Instrução Normativa 62.

Um total de 107 S. aureus isolados de casos de mastite, glândulas portadoras, pele do úbere, ordenhadores e insufladores, em rebanhos de São Paulo e Pernambuco, foram tipados por técnicas moleculares PCR-RFLP do gene coa e PCR de spa distinguiram seis perfis. Todas as amostras amplificaram genes coa, spa, icaA e 69% produziram biofilme glicose-induzido in vitro. PFGE identificou 31 perfis e 12 linhagens. Uma linhagem foi predominante (P < 0,0001) e amplamente disseminada em ambas as regiões. Um mesmo perfil foi isolado de mastite clínica, subclínica e portadoras. Houve heterogeneidade genética entre isolados de fazenda. Isolados de origem humana e animal constituíram populações distintas. Poucos isolados de leite, insufladores e pele do úbere tiveram igual perfil. Uma amostra extramamária, 77% dos isolados de leite e. 99% de S. aureus de portadoras produziram biofilme. Não foi detectada correlação entre produção de biofilme e CCS. O isolamento sucessivo do mesmo perfil de PFGE de glândulas assintomáticas por mais de 16 dias caracterizou o estágio de portador. / A total of 107 S. aureus isolated from bovine milk, udder skin, milkers and milking machine, from São Paulo and Pernambuco herds was typed by molecular techniques. PCR-RFLP coa gene and PCR spa gene distinguished six amplicons. All strains amplified coa, spa, icaA genes and, 69% produced in vitro glucose-induced biofilm. PFGE identified 31 pulsotypes, 12 lineages. One of the lineages was predominantly isolated (P<0.0001) and widely disseminated. A same pulsotype was isolated from clinical and, subclinical mastitis as well as from carriers. There was genetic heterogeneity among isolates from the herds. Strains from human and animal origin were genetically different. Few isolates from milk, milking machine and udder skin showed similar pulsotype. An extramammary strain, 77% of the milk isolates and, 99% of the S. aureus isolated from carriers produced biofilm. It was not detected any correlation between SCC and biofilm production. The successive isolation during more than 16 days of a same pulsotype from the asymptomatic glands characterized the carrier status.

The present study aimed to evaluate bacterial isolates and the microbiome of dairies. The specific aims were: to characterize Staphylococcus spp. isolated from mastitic milk, to evaluate the presence of Lactococcus in mastitic milk as a potential causative agent of mastitis, to evaluate the association between microbiome and milk quality parameters, and to characterize Staphylococcus spp. isolated from production lines of Minas Frescal cheese. The detection of genes encoding virulence factors (enterotoxins (sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, sei, selj, selk, sell, selm, seln, selo, selp, seIq, ser, ses, set, selu, selv, and selx), hemolysins (hla, hlb, hld, hlg, and hlgv), exfoliative toxins (eta, etb, and etd), Panton-Valentine leukocidin (pvl), and toxic shock syndrome toxin (tst)), genes encoding antibiotic resistance (resistance to tetracycline (tetK, tetL, and tetM), erythromycin (ermA, ermB, and ermC), methicillin (mecA and mecC), and tobramycin (ant(4\')-Ia)), molecular typing (spa, SCCmec, and agr types), and phenotyping regarding antibiotic resistance were performed in staphylococci isolates from mastitic milk, and from cheese processing plant samples. Staphylococcus aureus was identified in the majority of isolates from both origins. Several virulence factor genes were detected. The distribution of genes encoding staphylococcal enterotoxins (85.0% - 85.7% of isolates were positive for one or more enterotoxin gene) was highlighted and the gene related to H toxin was the most prevalent. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus were identified in isolates from mastitic milk (4.1%) and cheese processing (6.0%); the genotyping and phenotyping of these isolates were described. t605 had the highest frequency in the S. aureus population studied. In mastitic milk, Lactococcus was suggested as the causative agent of an outbreak of mastitis in a dairy farm. Using next generation sequencing, the abundance of Lactococcus was observed in microbiome samples. Bacterial isolation and DNA sequencing confirmed the presence of Lactococcus lactis and Lactococcus garvieae. The microbiome of environmental samples and bulk tank milk from the dairy farm showed the Lactococcus genus among the most common bacterial taxa, suggesting other sources of this genus. Regarding milk quality parameters, the microbiome of bulk tank milk from several dairy farms was associated with somatic cell count and bacterial count. The core microbiome was described and many genera of importance were identified. Among the associations performed between microbiome and milk quality parameters, the identification of Streptococcus in samples classified with high somatic cell count and high bacterial count was highlighted. Several bacterial taxa with relative abundance significantly higher in samples classified as high and low cell count and bacterial count were shown. Real-time polymerase chain reaction was also performed associated with bacterial diversity, bacterial taxa, and bacterial count. These findings highlight the need to control and prevent bacterial contamination in the dairy industry, from herd to consumers. / O presente estudo apresentou como objetivo avaliar isolados bacterianos e microbioma de lácteos. Os objetivos específicos foram: caracterizar Staphylococcus spp. isolados de leite de vacas com mastite, avaliar a presença de Lactococcus em leite de vacas com mastite como um potencial agente causador de mastite, avaliar a associação entre microbioma de leite de tanque e parâmetros da qualidade de leite, e caracterizar Staphylococcus spp. isolados de linhas de processamento de queijo Minas frescal. A detecção de genes codificadores de fatores de virulência (enterotoxinas (sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, sei, selj, selk, sell, selm, seln, selo, selp, seIq, ser, ses, set, selu, selv, e selx), hemolisinas (hla, hlb, hld, hlg, e hlgv), toxinas exfoliativas (eta, etb e etd), leucocidina de Panton-Valentine (pvl), toxina da síndrome do choque tóxico (tst)), genes codificadores de resistência a antibióticos (resistência a tetraciclina (tetK, tetL e tetM), eritromicina (ermA, ermB e ermC), meticilina (mecA e mecC) e tobramicina (ant(4\')-Ia)), tipagem molecular (spa, SCCmec e agr types), e fenotipagem quanto à resistência a antibióticos foram realizadas em estafilococos isolados de leite de vacas com mastite e de amostras de planta de processamento de queijo. Staphylococcus aureus foi identificado na maioria dos isolados de ambas as origens. Diversos genes de fatores de virulência foram detectados, com destaque para a distribuição de genes codificadores de enterotoxinas estafilocócicas (85,0%-85,7% dos isolados foram positivos para um ou mais genes codificadores de enterotoxinas), sendo o gene relacionado com a toxina H o mais frequente. Staphylococcus aureus meticilina resistente foram identificados em isolados de leite de vacas com mastite (4.1%) e em processamento de queijo (6.0%); o perfil genotípico e fenotípico destes isolados foram descritos. t605 foi o mais freqüente na população de S. aureus estudada. Em leite de vacas com mastite, Lactococcus foi sugerido como o agente causador de um surto de mastite numa fazenda leiteira. Usando sequenciamento de nova geração, a abundância de Lactococcus foi observada no microbioma das amostras. O isolamento e sequenciamento de DNA confirmaram a presença de Lactococcus lactis e Lactococcus garvieae. O microbioma de amostras ambientais e de leite de tanque da fazenda mostrou o gênero Lactococcus entre os mais comuns, sugerindo outras fontes deste gênero. Contemplando parâmetros da qualidade de leite, o microbioma de leite de tanque de várias fazendas leiteiras foi relacionado com contagem de células somáticas e contagem bacteriana. O core microbiome foi descrito e muitos gêneros bacterianos de importância foram identificados. Dentre as análises realizadas associando microbioma com parâmetros da qualidade de leite, foi destacada a identificação de Streptococcus em amostras classificadas com alta contagem de células somáticas e alta contagem bacteriana. Diversos táxons bacterianos com abundância relativa significativamente maior em amostras classificadas com alta e baixa contagem de células somáticas e contagem bacteriana foram mostrados. Reação em cadeia da polimerase em tempo real também foi realizada e associada com diversidade bacteriana, táxons bacterianos e contagem bacteriana. Estes levantamentos confirmam a necessidade de controlar e prevenir a contaminação bacteriana na indústria de lácteos, do rebanho leiteiro até os consumidores.

Os antimicrobianos são amplamente utilizados no tratamento e prevenção de doenças do gado leiteiro. A ocorrência de resíduos de gentamicina, resultante principalmente do tratamento da mastite bovina é uma das principais causas o aparecimento de resíduos no leite. Neste estudo utilizando como técnica LC/MS-MS, foram analisadas 48 amostras de leite adquiridas em estabelecimentos comerciais, apenas uma apresentou resíduos de gentamicina no valor de 0, 112 ug/mL, superior ao LMR de 100 &#181;g/ml estabelecido pela União Européia (UE), já para o leite in natura, das 55 amostras analisadas, quatro amostras foram positivas apresentando os valores 0,155 ug/mL, 0,192 ug/mL, 0,130 ug/ml e 0,167 ug/mL, todos acima do LMR estabelecido pela União Européia (UE). O método apresentou limite de quantificação de e 0,1 ng/mL, linearidade de 0,1-1500 ng/mL e coeficientes de determinação de 0,992557, recuperação de 91,5 % e com precisão e exatidão adequadas. Conhecer a dimensão da exposição da população a esses compostos é de fundamental importância para promover as ações de controle visando à proteção do consumidor. Desta forma as políticas de inspeção e qualidade do leite criadas pelo governo devem ser aplicadas e servir de garantia para o consumo seguro deste alimento pela população. / The antibiotics are widely used to treat and preventions diseases for dairy cattle. The occurrence of residues of gentamicin, resulting mainly from treatment of bovine mastitis are a major cause the appearance of residues in milk. In this study using the technique LC/MS-MS, were analyzed 48 samples of milk purchased in shops, only one sample present residues of gentamicin showing the value 0,112 ug/ml, exceeding the MRLs of &#181;g/ml established by the European Union (EU) already for milk in nature, from 55 samples, four samples were positive showing the values 0,155 ug/mL, 0,192 ug/mL, 0,130 ug/ml and 0,167 ug/mL, All above the MRLs set by the European Union (EU). The method presented limit of quantification, and 0.1 ng/mL, linearity of 0,1-1500 ng/mL and coefficients of determination of 0.992557, recovery of 91.5% and with precision and accuracy appropriate. know the size of population\'s exposure to these compounds is of fundamental importance to promote measures to control aimed at protecting the consumer. Thus the politics of inspection and quality of milk created by the government should be implemented and serve as a guarantee for the safe consumption of food by the population.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-28T17:55:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_MastiteBovinaRebanhos.pdf: 573848 bytes, checksum: b413b24293523fe5703bf9a397087d4d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-03T18:05:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_MastiteBovinaRebanhos.pdf: 573848 bytes, checksum: b413b24293523fe5703bf9a397087d4d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-03T18:05:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_MastiteBovinaRebanhos.pdf: 573848 bytes, checksum: b413b24293523fe5703bf9a397087d4d (MD5) Previous issue date: 2008 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A mastite em sua forma subclinica é a responsável pelas maiores perdas de produção leiteira representando elevados prejuízos econômicos. Com o objetivo de estudar a etiologia da mastite subclinica bovina no município de Parauapebas-Pa, foram submetidas ao California Mastitis test. - CMT 174 (8,4%) vacas em sua maioria mestiças, aparentemente saudáveis de 15 propriedades leiteiras localizadas no referido município, situado na Mesorregião Sudeste do estado do Pará. Observou-se que 84 (48,33%) animais apresentaram resultados de +,++,+++ ao CMT. O leite de cada teto que reagiram ao CMT num total de 178 amostras foi analisado bacteriologicamente visando o isolamento e a identificação dos microorganismos, foram analisadas as características macroscópicas, microscópicas e bioquímicas das culturas isoladas. Do total de amostras foram isoladas 208 cepas de agentes microbianos em culturas puras ou em associações sendo todos provenientes de leite mamitico, das quais 141(67,79%) cepas eram cocos Gram positivos- S.aureus (29%) e S.epidermidis (19,14%) e 67 (32,21%) eram enterobactérias. Entre as enterobacterias destacaram-se Pseudomonas sp.com 12 (17,91%) cepas esisoladas, Citrobacter sp. com 12( 17,95%) cepas e Shigella sp. com 10(14,92%), Outras 15 cepas de enterobacterias que não foram identificadas. O isolamento dos agentes apresentou variação significativa, pois se consideraram as observações quanto ao manejo de ordenha dos animais estudados, as condições higiênicas sanitárias da obtenção do leite através da aplicação de um questionário visando a observação das seguintes variáveis: sistema de criação, manejo adotado na propriedade, higiene e nível de exposição, infecciosidade dos agentes isolados o que reafirma a complexidade da infecção na área de estudo e seu aspecto multifatorial, necessitando o investimento por parte dos órgãos fiscalizadores de melhores praticas de higiene e obtenção na atividade de exploração de leite. / The mastite in its subclinica form is the responsible one for the biggest losses of milk production representing raised economic damages. With the objective to study the etiology of the bovine subclinica mastite in the city of Parauapebas-Pará, they had been submitted to California Mastitis test. - CMT 174 (8.4%) cows in its majority crossbred, pparently healthful of 15 located milk properties in the related city, situated in the Southeastern Mesorregião of the state of Pará. ++ were observed that 84 (48.33%) animal ones had presented resulted of +, +++ to the CMT. The milk of each ceiling that had reacted to the CMT in a total of 178 samples was analyzed bacteriologically aiming at the isolation and the identification of the microorganisms, had been analyzed the macrocospic, microscopical characteristics and biochemists of the isolated cultures. Of the total of samples 208 had been isolated cepas of microbianos agents in pure cultures or in associations being all proceeding ones from mamitico milk, of which 141 (67.79%) cepas was positive coconuts Gram S.aureus (29%) and S.epidermidis (19.14%) and 67 (32.21%) were enterobactérias. Among the enterobacterias they had been distinguished Pseudomonas sp.com 12 (17.91%) cepas esisoladas, Citrobacter sp. with 12 (17.95%) cepas and Shigella sp. with 10 (14.92%), Others 15 cepas of enterobacterias that had not been identified. The isolation of the agents presented significant variation, therefore the comments had been considered how much to the handling of it milks of the studied animals, the sanitary hygienical conditions of the attainment of milk through the application of a questionnaire aiming at the comment of the following 0 variable: creation system, handling adopted in the property, hygiene and level of exposition, infecciosidade of the isolated agents what it reaffirms the complexity of the infection in the area of study and its multifactorial aspect, needing the investment on the part the agencies fiscalizadores of better you practise of hygiene and attainment in the activity of milk exploration.