CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O presente trabalho descreve o estudo fitoquÃmico de Pilocarpus sulcatus Skorupa e o levantamento acerca dos metabÃlitos secundÃrios jà isolados do tÃxon Pilocarpus. O trabalho envolveu a extraÃÃo e identificaÃÃo dos constituintes volÃteis das folhas, casca do caule, lenho do caule, cascas das raÃzes e lenho das raÃzes alÃm do isolamento e determinaÃÃo estrutural dos constituintes fixos das folhas e lenho do caule de P. sulcatus. Trata-se de uma espÃcie com descriÃÃo botÃnica recente, ainda sem estudo fitoquÃmico publicado, com localizaÃÃo geogrÃfica restrita ao sul do estado da Bahia e norte de Minas Gerais. Foram extraÃdos e identificados dezoito constituintes volÃteis dos Ãleos essÃncias das diversas partes de P. sulcatus estando as metilcetonas alifÃticas, pentadecan-2-ona e tridecan-2-ona, presentes em todos os cinco Ãleos analisados, onde, com exceÃÃo do Ãleo essencial das folhas, a tridecan-2-ona foi identificada como o constituinte majoritÃrio. No desenvolvimento deste trabalho foram isoladas e determinadas as estruturas de seis substÃncias. Do extrato etanÃlico das folhas de P. sulcatus foram isolados o triterpeno do tipo taraxerano taraxerol, a furanocumarina isopimpinelina e o esterÃide β-sitosterol. Do extrato etanÃlico do lenho do caule foram isoladas as furanocumarinas elisina e amirina alÃm da piranocumarina xantiletina. A determinaÃÃo estrutural dos metabÃlitos secundÃrios isolados envolveu o uso de tÃcnicas espectromÃtricas como IV e RMN 1H e 13C, incluindo tÃcnicas bidimensionais (COSY, HSQC e HMBC), bem como comparaÃÃo com dados descritos na literatura. Os Ãleos essenciais extraÃdos foram analisados por CG-EM e a identificaÃÃo dos constituintes ocorreu atravÃs da interpretaÃÃo dos respectivos espectros de massa, pesquisa na espectroteca e comparaÃÃo com dados descritos na literatura. / The present work describes the phytochemical study of Pilocarpus sulcatus Skorupa and survey about the secondary metabolites isolated from the taxon Pilocarpus. The work involved the extraction and identification of volatile leaves constituents, stem bark, stem wood, bark root and wood root besides the isolation and determination of the fixed constituents of the leaves and stem wood of P. sulcatus. This is a species with recent botanical description, still without a published phytochemical study. It is restricted located in the south of Bahia and the north of Minas Gerais. It was extracted and identified eighteen volatile constituents of essential oils from different parts of P. sulcatus, with the aliphatic methyl ketones, pentadecan-2-one and tridecan-2-one, present in all five essential oils tested, which, aside from the essential oil of leaves, tridecan-2-one was identified as the major constituent. In this work, six substances were isolated and had its structures determined. From the ethanolic extract of P. sulcatus were isolated the triterpene taraxerol, the furanocumarin isopimpinellin and the steroid β-sitosterol. From the ethanolic extract of the stem wood were isolated the furanocoumarins elisin and amyrin besides the pyranocoumarin xanthyletin. The structural determination of all secondary metabolites isolated in this work involved spectrometric techniques such as: IR e NMR including 2D experiments (COSY, HSQC e HMBC), as well as, comparison with published data. The essential oils extracted were analyzed by GC-MS and the constituents identification occurred by interpretation of their respective mass spectra, in spectra library search and comparison with previously reported data.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Periconia hispidula is an endophytic fungus isolated from dried leaves from semi-arid dunes of Bahia. The fungus was subjected to cultivation by varying nutritional factors in four different culture mediuns: MPD (malt, peptone and dextrose), BD (potato dextrose), BDL (potato, dextrose and yeast) and MntPL (mannitol, peptone and yeast), and analyzing the extracts on different incubation days (7, 14, 21, 28 days). A survey of primary cytotoxic activity was carried out from the extracts against tumor cell line of colon cancer (HCT-116). The MPD extracts - 28 days BDL - 28 days and BD - 21 days showed a promising cytotoxic activity and were preliminarily selected for the chemical study. The chromatographic fractionation of MPD-28 days extract resulted in the isolation of 11 secondary metabolites characterized as {4-chromanone, 6-hydroxy-(R) -methyl- (PS-1)}, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, {E, 1-(2,5 dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one (PS-3)}, {1-(2, 5 dihydroxyphenyl)-butan-1-one (PS-4)}, {Z-methyl-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate (PS-5)}, modiolide A (PS-7), fusanolide B (PS-8), stagonolide E (PS-9), {(3R,4R)-3,4-dihydro, 3,4,8- trihdroxy, naphthalen-1(2H)-one (PS-11)}, {(4S) isosclerona (PS-12)}, furtermore PS-10 without structural characterization yet. The BDL-BD-28 days and 21 days extracts presented a chromatographic profile very similar to MPD-28 days extract, thus, the chromatographic fractionations of both extracts were targeted for isolation of substances absent in MPD-28 days. The 3,4 dihydoxy-benzoic acid was isolated just from the BD-extract 21 days, while the fractionation of the extract BDL 28days gave (PS-13 without structural characterization yet) as different. Among the isolated metabolites, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, fusanolido B and PS10 (probably) showed were new compounds. The isolated compounds were shown to be inactive in cytotoxicity assays against strains of HCT-116 and MC-27 (breast adenocarcinoma). However, the 1- (2,5-dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one showed strong inhibition with a MIC of 62.5 Âg/mL to be subjected to antimicrobial test against strains of fungi Candida Krusei (ATCC 142432TM) and Candida albicans (ATCC 10231TM) and CIM of 125 Âg/mL against Candida parapsilosis (ATCC 22019TM), while {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl-}, Z-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate methyl, modiolide A, estagonolide E, fusanolido B and 3R,4R-dihydro-3,4,8-trihydroxy-1-(2H) -naftalelone showed moderate activity with MIC of 500 Âg / mL.Usual chromatographic techniques including liquid-liquid partitioning, flash chromatography and high pressure liquid chromatography (HPLC) were used for the isolation of secondary metabolites, while the structural characterization was possible through the use of spectrometric techniques using infrared (IR), mass spectrometry (MS), and uni and bidimensional techniques of nuclear magnetic resonance (NMR), and comparison with literature data. / Periconia hipidula à um fungo endofÃtico isolado de folhas secas provenientes de dunas do semiÃrido do estado da Bahia. O fungo foi submetido ao cultivo atravÃs da variaÃÃo de fatores nutricionais em quatro meios diferentes: MPD (malte, peptona e dextrose), BD (batata, dextrose), BDL (batata, dextrose e levedura) e MntPL (manitol, peptona e levedura), e anÃlise dos extratos em diferentes dias de incubaÃÃo (7, 14, 21, 28 dias). A prospecÃÃo da atividade citotÃxica preliminar foi realizada a partir dos extratos obtidos frente à linhagem de cÃlulas tumorais de cÃncer de cÃlon (HCT-116). Os extratos MPD â 28 dias, BDL - 28 dias e BD - 21 dias apresentaram uma atividade citotÃxica promissora e foram preliminarmente selecionados para o estudo quÃmico. O fracionamento cromatogrÃfico do extrato MPD-28 dias, resultou no isolamento de 11 metabÃlitos secundÃrios caracterizados como {(R), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-1)}, { (S), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-2)}, {E, 1-(2,5 diidroxi-fenil) but-2-en-1-ona (PS-3)}, {1-(2, 5 diidroxi-fenil)-butan-1-ona (PS-4)}, Z-3-(3 hidroxifenil) propenoato de metila (PS-5), modiolido A (PS-7), fusanolido B (PS-8), estagonolido E (PS-9), {(3R,4R)-3,4diidro,3,4,8 triidroxi,naftalen-1-(2H)-ona (PS-11)}, (4S)-isosclerona (PS-12), alÃm de PS-10 que se encontram em fase de caracterizaÃÃo estrutural. Os extratos BDL-28 dias e BD-21 dias apresentaram um perfil cromatogrÃfico bastante semelhante ao extrato MPD-28 dias, desta forma, os fracionamentos cromatogrÃficos de ambos os extratos foram direcionados para o isolamento de substÃncias ausentes em MPD-28 dias. O Ãcido 3,4 diidroxi-benzÃico (PS-6) foi isolado apenas do extrato BD-21 dias, enquanto que o fracionamento do extrato BDL 28d forneceu PS-13 (em fase de caracterizaÃÃo estrutural) como diferente. Dentre os metabÃlitos isolados, os compostos (2S)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, fusanolido B apresentaram carÃter inÃdito na literatura. Os compostos isolados mostraram-se inativos em ensaios de atividade citotÃxica frente a cepas de HCT-116 e MC-27 (adenocarcinoma de mama). No entanto, o composto 1-(2,5-diidroxifenil)-but-2-en-1-ona apresentou elevada inibiÃÃo com CIM de 62,5 Âg/mL ao ser submetido à ensaio antimicrobiano frente a cepas de fungos Candida Krusei (ATCC 142432TM) e Candida albicans (ATCC 10231TM) e 125 Âg/mL frente à Candida parapsilosis (ATCC 22019TM), enquanto que o (2R)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, Z-3-(3-hidroxifenil)-propenoato de metila, o modiolido A, o estagonolido E, o fusanolido B e a 3,4-diidro- 3,4,8-triidroxi-1(2H)-naftalelona apresentaram moderada atividade com CIM de 500 Âg/mL. TÃcnicas cromatogrÃficas usuais, incluindo partiÃÃo lÃquido-lÃquido, coluna de sÃlica flash e cromatografia de alta eficiÃncia (CLAE) foram utilizadas para o isolamento dos metabÃlitos secundÃrios, enquanto que a caracterizaÃÃo estrutural foi possÃvel atravÃs do uso de tÃcnicas espectromÃtricas utilizando infravermelho (IV), espectrometria de massa (EM) e ressonÃncia magnÃtica nuclear (RMN) com experimentos uni e bidimensionais, alÃm de comparaÃÃo com dados da literatura.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Instituto Dr. Josà Frota / Foram investigados os efeitos metabÃlicos da L-alanil-glutamina nas concentraÃÃes sanguÃneas e teciduais dos metabÃlitos (piruvato, lactato, glicose, acetoacetato, 3-hidroxibutirato, corpos cetÃnicos e ATP) em ratos Wistar submetidos à isquemia/reperfusÃo do membro pÃlvico. Utilizaram-se 96 ratos adultos, machos, distribuÃdos aleatoriamente em 4 grupos numericamente iguais e prÃ-tratados com soluÃÃo salina 2,0 mL (G-1 e G-3) ou L-alanil-glutamina 0,75 g Kg-1(G-2 e G-4), durante 7 dias. Uma hora apÃs a Ãltima gavagem, todos os ratos foram submetidos ao pinÃamento da artÃria ilÃaca esquerda ou operaÃÃo simulada. ApÃs 3 horas a pinÃa foi removida; nos grupos simulados realizou-se nova intervenÃÃo cirÃrgica. Amostras (mÃsculo, fÃgado, rim e sangue) foram coletadas ao final da isquemia mÃxima (T-0) e durante a reperfusÃo (1, 3 e 6h). Os metabÃlitos foram determinados por ensaio enzimÃtico e expressos como MÃdia  E.P.M. Testes nÃo paramÃtricos (Mann-Whitney e Kruskal-Wallis/Dunn) foram utilizados para a anÃlise estatÃstica. O nÃvel de significÃncia foi de p<0,05. NÃo foi evidenciada elevaÃÃo nas concentraÃÃes de lactato, piruvato e glicose durante a lesÃo de isquemia ou reperfusÃo, comparando-se os grupos tratados com soluÃÃo salina (G-1 vs. G-2). Por outro lado houve reduÃÃo nas concentraÃÃes de corpos cetÃnicos em tecido muscular no tempo de isquemia mÃxima e hiperglicemia durante o perÃodo de reperfusÃo. Houve elevaÃÃo nas concentraÃÃes hepÃticas de lactato e glicose muscular e reduÃÃo de lactato no mesmo tecido, nos ratos prÃ-tratados com o dipeptÃdeo. Observou-se ainda, nos mesmos animais, elevaÃÃo das concentraÃÃes de corpos cetÃnicos no fÃgado, no sangue, no mÃsculo e nas concentraÃÃes renais de lactato. Conclui-se, portanto, que o modelo de pinÃamento da artÃria ilÃaca esquerda promove alteraÃÃes metabÃlicas decorrentes da lesÃo de isquemia/reperfusÃo. O dipeptÃdeo L-ALA-GLN induz aumento nas concentraÃÃes hepÃticas de lactato, promove elevaÃÃo de glicose muscular e reduÃÃo de lactato no mesmo tecido indicando aumento no âturn overâ de glicose. O dipeptÃdeo causou aumento da cetogÃnese, cetonemia e captaÃÃo de corpos cetÃnicos durante a reperfusÃo, assim como hiperlactacemia e aumento nas concentraÃÃes renais de lactato. Maior atividade glicolÃtica em tecidos perifÃricos, via ativaÃÃo do ciclo malato-aspartato, levou a diminuiÃÃo da resistÃncia insulÃnica com possÃvel queda de insulinemia, com aumento da cetogÃnese. / A study has been conducted to investigate the effects of L-alanyl-glutamine upon blood and tissue concentrations of metabolites (pyruvate, lactate, glucose, acetoacetato, 3-hydroxybutyrate, ketone bodies and ATP) in Wistar rats subjected to ischemia/reperfusion of hind limb. Ninety-six adult male rats were randomized in 4 groups and pre-treated with saline 2.0 mL (G-1,G-3) or L-alanyl-glutamine solution 0.75 mgKg-1(G-2, G-4) during 7 days. One-hour after the last gavage all rats were submitted to clamping of the left iliac artery or sham operation. The clamp was removed after 3 h; sham rats were operated once more. Muscle, liver, kidney and blood samples were collected at the end of ischemia and at 1-3-6 h during reperfusion. Metabolites were submitted to enzymatic analyses. Results were expressed as Mean  S.E.M. Non-parametric tests (Mann-Whitney and Kruskal-Wallis/Dunn) were utilized for statistical analyses. P<0.05 was accepted as significant. Lactate, pyruvate and glucose concentrations did not increase during ischemia or reperfusion in rats pre-treated with saline (G-1 vs. G-2). On the other hand ketone bodies concentrations were decreased in T-0 and blood glucose was elevated during reperfusion. Liver lactate and muscle glucose were increased and lactate concentration was decreased in L-alanyl-glutamine pre-treated rats. Ketone bodies were elevated in the liver, muscle and blood and renal lactate was also elevated in the aforementioned rats. It is concluded that the model utilized in this study promotes significant metabolic alterations due to ischemia/reperfusion injury. L-Ala-Gln dipeptide induced increased hepatic lactate and muscle glucose concentrations and decreased of muscle lactate concentrations point out to increased turnover of glucose. L-Ala-Gln also induced increased ketogenesis, ketonemia and ketone bodies uptake during reperfusion along with increased lactacidemia and kidney lactate concentrations. Increased glycolytic activity in peripheral tissues via malate-aspartate shuttle activation lead to decreased insulin resistance with possible decrease in plasma insulin levels and increased ketogenesis.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / nÃo hà / Foram investigados os efeitos do prÃ-tratamento com l-alanil-glutamina (L-Ala-Gln) sobre as concentraÃÃes de glicose, piruvato, lactato e ATP na medula espinhal e sangue em ratos submetidos à isquemia/reperfusÃo medular. Utilizaram-se 72 ratos Wistar adultos, machos, distribuÃdos em dois grupos, numericamente iguais e prÃ-tratados com soluÃÃo salina (2,0 ml) ou soluÃÃo de L-Ala-Gln a 20% (0,75g/Kg peso) ApÃs 30 minutos os ratos de cada grupo foram aleatoriamente distribuÃdos em dois subgrupos (n=18). Os ratos prÃ-tratados com soluÃÃo salina (n=18) foram submetidos ao trauma cirÃrgico (G1) ou ao trauma seguido de pinÃamento da aorta abdominal infra-diafragmÃtica durante 30 minutos (G2), seguido por 10 ou 20 minutos de reperfusÃo Os animais prÃ-tratados com L-Ala-Gln foram submetidos aos mesmos procedimentos. Amostras (medula espinhal e sangue arterial) foram coletadas ao tÃrmino de perÃodo de isquemia e 10/20 minutos mais tarde. Os metabÃlitos foram determinados por ensaio enzimÃtico e expressos como MÃdia  E.P.M. Os testes âtâ de Student ou Mann-Whitney foram utilizados nas anÃlises estatÃsticas. O nÃvel de significÃncia foi de p<0,05. O trauma cirÃrgico seguido de isquemia/reperfusÃo (G2) nÃo induziu alteraÃÃes nas concentraÃÃes de glicose e lactato no sangue ou na medula dos animais prÃ-tratados com soluÃÃo salina, comparados ao grupo G1. Entretanto, a concentraÃÃo de piruvato medular reduziu-se significativamente aos 20 minutos de reperfusÃo, na medula no G2 e nos ratos prÃ-tratados com L-Ala-Gln (G3), comparados ao grupo G1. As concentraÃÃes de ATP reduziram-se significativamente no grupo G4, refletindo um maior consumo para a produÃÃo de energia. As concentraÃÃes de lactato aumentaram significativamente durante a reperfusÃo nos ratos prÃ-tratados com L-Ala-Gln, possivelmente por uma maior conversÃo de piruvato a lactato. Conclui-se que o modelo utilizado nÃo foi eficiente na produÃÃo de uma isquemia medular importante. Por outro lado, o prÃ-tratamento com L-Ala-Gln na vigÃncia do aumento das concentraÃÃes de lactato no sangue e na medula pode ser devido à glicÃlise aumentada, possivelmente secundÃria a maior disponibilidade de glutamato, produzindo ativaÃÃo da lanÃadeira malato-aspartato / A study has been conducted to investigate the effects of L-alanyl-glutamine (L-Ala-Gln) upon blood and tissue (spinal cord) concentrations of glucose, pyruvate, lactate and ATP in rats subjected to spinal cord ischemia/reperfusion. Seventy-two male Wistar rats distributed in 2 equal groups received either saline 2.0 ml or 20% solution of L-Ala-Gln (0.75g/Kg). Thirty minutes later rats of each group were randomized in two subgroups (n=18) and subjected to surgical trauma (G1) or to surgical trauma and infradiafragmatic aortic clamping for 30 minutes (G2), followed by 10 or 20 minutes of reperfusion. L-Ala-Gln treated rats were subjected to the same procedures (G3 and G4, respectively). Arterial blood and spinal cord samples were collected and the end of ischemia and 10/20 minutes later. Metabolites were submitted to enzymatic analyses. Results were expressed as Mean  S.E.M. Studentâs âtâ and Mann-Whitney tests were utilized for statistical analyses. P<0.05 was accepted as significant. Blood and spinal cord glucose and lactate were not different in G1 and G2 rats. However, spinal cord pyruvate concentrations decreased significantly after 20 minutes of reperfusion in L-Ala-Gln treated rats (G3) compared with G1. ATP concentrations decreased significantly in G4 rats, reflecting an increased utilization for energy production. Lactate concentrations were also increased during reperfusion in ischemic L-Ala-Gln treated rats (G4) possibly due to an increased turnover of pyruvate to lactate. It is concluded that the model utilized in this study did not induce an important spinal cord ischemia. Increased blood and spinal cord lactate concentrations could be related to enhanced glycolysis possibly secondary to increased glutamate availability leading to malate-aspartate shuttle activation