O Platelia® Aspergillus EIA é um teste de ELISA sanduíche para diagnóstico precoce de aspergilose em pacientes neutropênicos que se baseia na detecção de um antígeno (galactomanana) da parede celular de Aspergillus spp. O trabalho objetivou avaliar a eficácia deste teste em outros hospedeiros suscetíveis à aspergilose e ainda, avaliar a interferência de potenciais falso-positivos no Platelia® Aspergillus EIA, como outras micoses sistêmicas e um antimicrobiano produzido a partir de fungos (piperacilina-tazobactam). Quatro experimentos foram realizados para contemplar os objetivos propostos. Amostras de lavado broncoalveolar de 60 pacientes transplantados de pulmão provenientes da Santa-Casa Complexo Hospitalar de Porto Alegre foram colhidas durante um período de aproximadamente 2 anos e testadas para detecção de galactomanana. Os pacientes foram classificados em aspergilose comprovada, provável e possível, colonização ou exame de vigilância de acordo com critérios do EORTC. Utilizando os casos comprovados (5) e prováveis (6) como positivos, foi calculada a curva ROC que demonstrou valores de sensibilidade de 90,9% e especificidade de 90,6% em um ponto de corte de 1,5. A eficácia do Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada também em pingüins em cativeiro. Soros de 35 animais foram incluídos no estudo, 9 com aspergilose, 3 com malária, 2 com caquexia e 21 saudáveis. Os soros foram testados por imunodifusão dupla e ELISA sanduíche, resultando em valores de sensibilidade de 33% e 100% e especificidade de 96% e 0, respectivamente. A reação cruzada de outras micoses sistêmicas no Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada a partir de 120 amostras de soro de pacientes com paracoccidioidomicose, histoplasmose, criptococose por Cryptococcus neoformans e criptococose por C. gattii. Todas as micoses foram responsáveis por resultados falso-positivos no ELISA sanduíche, sendo de 50%, 67%, 66% e 36,6% a taxa de positividade de cada micose, respectivamente. Em adição, 5 lotes de piperacilina-tazobactam foram testados em concentração de uso clínico (45mg/ml) para avaliação de interferência no Platelia® Aspergillus EIA. Destas, apenas uma resultou em valores maiores do que o ponto de corte (0,5), sendo submetida a sucessivas diluições até mimetizar concentrações plasmáticas do fármaco alcançáveis no soro humano, as quais resultaram em valores menores que 0,5, sendo consideradas negativas. Concluindo, utilizando um ponto de corte maior do que indicado pelo fabricante para uso em neutropênicos, a eficácia do teste foi comprovada para utilização em amostras de lavado broncoalveolar de pacientes transplantados de pulmão. Por outro lado, no hospedeiro animal testado, pingüins, o teste apresentou especificidade nula, não possuindo aplicabilidade como ferramenta diagnóstica para aspergilose neste grupo. Quanto aos fatores de interferência no Platelia® Aspergillus EIA avaliados, a alta taxa de resultados falso-positivos referentes à infecção por outras micoses sistêmicas reflete na necessidade de interpretar um teste positivo dentro do contexto epidemiológico do paciente. Por outro lado, as piperacilinas-tazobactam disponíveis no mercado brasileiro não interferiram no resultado do Platelia® Aspergillus EIA. No entanto como a variabilidade de galactomanana existe entre lotes, ainda é aconselhável que as amostras para realização do ELISA sanduíche sejam colhidas antes da próxima administração do fármaco. / Platelia® Aspergillus EIA is a sandwich ELISA to the diagnostic of aspergillosis in neutropenic patients. It detects an antigen (galactomannan) from Aspergillus cell wall. Here it was evaluated the performance of this test in other susceptible hosts and the interference of potentials false-positives factors in Platelia® Aspergillus EIA. Systemic mycosis and an antimicrobial produced from molds (piperacillin-tazobactam) were tested. Four experiments were executed to study conduce. Bronchoalveolar samples from 60 lung transplant recipients from Santa Casa-Complexo Hospitalar de Porto Alegre were collected during almost two years and tested for galactomannan detection. Patients were classified in proven, probable or possible aspergillosis according to EORTC criteria, or in colonization or surveillance. Considering proven (5) and probable (6) as true positive cases, ROC curve was calculated and showed 90.9% of sensitivity and 90.6% of specificity with 1.5 as optimal cutoff. Platelia® Aspergillus EIA efficacy was also tested in captive penguins. Sera from 35 animals were included in the study, 9 with aspergillosis, 3 with malaria, 2 with cachexia and 21 healthy. Samples were tested by double immunodiffusion and sandwich ELISA, resulting in sensitivity values of 33% and 100% and specificity of 96% and 0, respectively. Cross reaction in Platelia® Aspergillus EIA was evaluated with 120 serum samples of patients with paracocciddioidomicosis, histoplasmosis, criptococosis due to Cryptococcus neoformans and criptococosis due to C. gattii. False-positive results were observed in all mycosis, with rates of 50%, 67%, 66% and 36,6%, respectively. In addition, 5 piperacillin-tazobactam batches were tested, in a concentration of clinical use (45mg/ml), to evaluate it interference in Platelia® Aspergillus EIA. Those, only one showed positive value, and had been retest after serial dilutions until plasmatic concentration, resulting in value lower than 0.5, negative. In conclusion, with a higher cut-off than the indicated from the manufacturer, the efficacy of bronchoalveolar samples tested in Platelia® Aspergillus EIA for the diagnostic of aspergillosis in lung transplant recipients was proved. Controversially, in penguins, the test specificity was zero, showing non applicability as a diagnostic method for aspergillosis in this group of risk. Interference in Platelia® Aspergillus EIA due to other systemic mycoses shows the necessity to interpret a positive result after the evaluation of patient epidemiologic context. Finally, piperacillin-tazobactam available in the Brazilian market did not correspond to false-positive results in Platelia® Aspergillus EIA. However, given that variability occurs between distinct batches, still is indicating to collect samples for galactomannan detection before the next administration of the drug.

Este estudo avaliou pacientes portadores de cromoblastomicose, sendo feita uma categorização clínica em dois grupos, de acordo com a forma clínica da lesão dermatológica: o primeiro composto por indivíduos com lesões elevadas e o segundo formado por casos com lesões planas, com biópsias realizadas antes e depois dos tratamentos. Através de critérios semiquantitativos, os elementos anatomopatológicos foram analisados, constatando-se a presença do padrão granulomatoso chamado granuloma micótico misto organizado, com baixa intensidade em lesões planas e alta em elevadas. Evidenciou-se que pacientes com lesões planas evoluíram bem clinicamente, com exames micológicos negativos e sem recidivas (bons respondedores), porém aqueles com lesões elevadas apresentaram evolução clínica desfavorável, com exames micológicos positivos e doença recidivante ou recalcitrante, apesar dos tratamentos recebidos (maus respondedores). E, entre os componentes histopatológicos reacionais à invasão fúngica, verificou-se associação significativa para fibrose, podendo levar a um pior prognóstico. Estes achados clínicos e histopatológicos conferem a esta patologia uma idéia de polaridade, à guisa dos fenômenos das formas polares da hanseníase, da fagocitose, e dos agentes de baixa virulência. Os autores propõem uma classificação morfológica dos granulomas da CBM em dois tipos polares: granuloma micótico misto organizado (GMMO) polar com alta intensidade dos elementos celulares (que corresponderia ao polar não tuberculóide) e GMMO polar com baixa intensidade (que corresponderia ao polar tuberculóide). / Patients with chromoblastomycosis were studied and dichotomized into two groups according to the clinical lesions: flat and elevated ones which were biopsied before and after treatments. Histopathological structures underwent through semiquantitatively analisys evidencing the mixed organized mycotic granuloma with low intensity of histopathological elements in flat lesions and high in elevated ones. Flat lesions have improved clinically with negative micological studies (good responders) while elevated lesions’ patients did not (bad responders). It was found significant association between evidence of fungus and fibrosis with a poor prognosis. Clinical and histopathological findings suggest a polarity concept to this disease based on the fenomenal polar forms of hanseniasis, fagocitosis and the low virulence agents. The authors proposed a morphological classification of the chromoblastomycosis’ granulomas into two polar types: polar mixed organized mycotic granuloma (MOMG) with high intensity of the cellular elements (like the polar non tuberculoid type) and the polar MOMG with low intensity (like the polar tuberculoid type).

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-11-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:40Z : No. of bitstreams: 1 000851921.pdf: 11886045 bytes, checksum: 1cf15c01de888d44bc38aeeab19c7d88 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O aumento de micoses invasivas e o desenvolvimento de mecanismos de resistência de algumas espécies de fungos, frente aos fármacos utilizados na terapia, têm sido preocupante. O tratamento antifúngico, geralmente é agressivo e o surgimento da resistência antifúngica acrescenta dificuldades adicionais no tratamento dessas infecções. Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii são os principais agentes etiológicos da criptococose, e afetam principalmente pacientes imunodeprimidos. Nesse trabalho foi realizada a caracterização morfológica e da virulência de três isolados clínicos de C. neoformans e dois isolados ambientais de C. gattii em Galleria mellonella, além da análise do nível de expressão dos genes MDR1 e AFR1 envolvidos no funcionamento de bomba de efluxo, através da quantificação relativa por PCR (polimerase chain reaction) em tempo real. Uma vez esses genes quantificados, esses isolados foram usados na prospecção de moléculas sintéticas para verificação da atividade inibitória dos genes selecionados, após o contato com as mesmas. Os isolados foram classificados como sensível (26S), sensibilidade intermediária (27I) e resistente (30R) da espécie neoformans e da espécie C. gattii, um foi resistente (118R) e outro sensível (CL), in vitro, a fluconazol. As moléculas selecionadas para os testes foram o ácido gálico e seus derivados sintéticos, e os melhores resultados observados foram obtidos a partir dos galatos de alquila G11, G12, G14, G15, G16 e G17, apresentando ótima atividade antifúngica contra os isolados testados, em especial os galatos G14, G16 e G17, obtendo ótima atividade antifúngica. O galato de n-dodecila (G16), foi selecionado para os demais testes apresentando atividade aditiva no teste de sinergismo, quando utilizado em associação com fluconazol, reduzindo os valores de CIM para o mesmo, o que mostra a possível... / The increase of invasive mycoses and the development of antifungal resistance by some fungi species have been worrying. The antifungal treatment is usually aggressive and inefficient, and the emergence of antifungal resistance increases the difficulties in treating these fungi infections.Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii are the main etiologic agents of cryptococcosis andespecially affect immunocompromised patients. In this work the Galleria mellonella, was used to perform the morphologic characterization as well as determine the virulence of three sequential clinical isolates of C. neoformansand twoisolates environmental of C. gattii. In addition, was held the analysis of genes expressions (MDR1, ERG11 and AFR1), that are involved in efflux pumps and ergosterol synthesis, by real time PCR (polimerase chain reaction) assay. After these characterizations the isolates were used in the prospecting of synthetic molecules to verify the inhibitory activity of selected genes. After incubation in vitro with fluconazole the C.neoformans isolates were classified as sensitive (26S), intermediate sensitivity (27I) and resistant (30R), and the C. gattiiisolates were resistant (118R) and the other sensitive (LC). The galic acid molecules and their synthetic derivatives were tests against C.neoformans and C. gattii isolates.The best results were obtained from alkyl gallates G11, G12, G14, G15, G16 and G17 which shows a great antifungal activity, especially G14, G16 e G17. The gallate n-dodecyl (G16), was select to others tests once presented additive activity in synergism test with fluconazole, decreasing the MIC values. The gene expression assay shows that both isolates expressed MDR1 and AFR1 (encoding efflux pumps), and the G16 was capable to inhibit these genes which makes this molecule promising for inhibiting efflux. With virulence assays using the G. mellonella was possible ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T20:15:32Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_ac_me_arafcf.pdf: 721947 bytes, checksum: 2ac1a94e8c25ed57ddda5d2effa6d4d6 (MD5) / A esporotricose é uma doença micótica causada pelo fungo termodimórfico Sporothrix schenckii. A resposta imune inata permite o reconhecimento de um amplo espectro de agentes patogênicos através dos PRRs, como os NLRs. Esses receptores, moléculas adaptadoras ASC e proteases caspase-1 formam os inflamassomas, complexo multiprotéico responsável pela maturação da IL-1β e IL-18. Evidências experimentais mostram que o inflamassoma tem importante papel na defesa antifúngica do hospedeiro, entretanto não há informações disponíveis sobre seu envolvimento em infecções causadas pelo S. schenckii. A indução da imunidade celular depende da interação entre antígenos, macrófagos e linfócitos, pois quando ativadas essas populações celulares liberam mediadores imunológicos, estabelecendo uma ligação entre as respostas imunológicas inata e a adaptativa. O objetivo deste trabalho foi avaliar o envolvimento do inflamassoma, por meio da determinação de caspase-1, e citocinas na resposta imunológica induzida pelo fungo S. schenckii em modelo experimental de esporotricose sistêmica utilizando camundongos Balb/c infectados e não infectados durante oito semanas. Os resultados encontrados mostraram que entre a 4ª e 6ª semanas de infecção ocorre imunossupressão do hospedeiro, com consequente agravamento da doença, pois a produção de NO permaneceu elevada neste período, assim como houve diminuição da liberação da IL-1β, IL-17, IL-23, citocinas pró-inflamatórias que agem protegendo o hospedeiro. Neste mesmo período, a diminuição do percentual de caspase-1 ativa, seguido pela menor liberação de IL-1β e IL-18, demonstrou que o inflamassoma estava com sua ativação inibida, colaborando para uma maior disseminação do patógeno, já que estão diretamente relacionada... / Sporotrichosis is a fungal disease caused by the thermo-dimorphic fungus Sporothrix schenckii. The innate immune response enables the recognition of a broad spectrum of pathogens through PRRs, such as NLRs. These receptor, ASC and caspase-1 form inflammasomes, complex multiprotein responsible for maturation of IL-1β and IL-18. Experimental evidence shows that inflammassome plays an important role in antifungal host defense, however there is no information available about his involvement in infections caused by S. schenckii. The induction of cellular immunity depends on the interactions between antigens, macrophages and lymphocytes because when activated, these cell populations release immune mediators to establishing a link between the innate and adaptive immune responses. The aim of this study was to evaluate the involvement of inflamassoma, through the determination of caspase-1, and cytokines in the immune response induced by the fungus S. schenckii in an experimental model of systemic sporotrichosis using Balb/c mice infected and uninfected for eight weeks. The results showed that between the fourth and sixth weeks of infection occurs immunosuppression of the host, with consequent worsening of the disease, because NO production encontrouse high during this period, as well as decreased release of IL-1β, IL-17, IL-23, pro-inflammatory cytokines that act to protect the host. In this same period, the decrease in the percentage of active caspase-1, followed by lower release of IL-1β and IL-18, showed that inflammasome was inhibited its activation, contributing to further spread of the pathogen, since it is directly related with the innate response and optimization of an adaptive response. The production of IFN-γ remained increased during all weeks... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-09-21Bitstream added on 2014-06-13T19:01:45Z : No. of bitstreams: 1 barbosa_asaa_dr_botfm.pdf: 739840 bytes, checksum: 72e238b6e0728303f96f7e2a53f98d98 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A doença de Jorge Lobo é micose cutânea-subcutânea de evolução crônica causada pelo fungo Lacazia loboi. Esta micose é predominante na região Amazônica e afeta principalmente trabalhadores rurais que vivem em contato constante com a vegetação e o solo, como é o caso dos seringueiros dessa região. Até o momento não existem estudos sobre a participação do estado nutricional na resposta imunológica abordando a doença de Jorge Lobo; assim, este estudo tem por finalidade avaliar os efeitos da desnutrição protéico-calórica na resposta imune de camundongos isogênicos da linhagem BALB/c inoculados com L. loboi, empregando parâmetros imunológicos e histopatológicos. O presente estudo foi desenvolvido com 120 camundongos do sexo masculino, da linhagem BALB/c, com idade aproximada de 12 semanas e cerca de 25g de peso corporal. Foram constituídos quatro grupos: G1: 30 camundongos inoculados com o fungo L. loboi, recebendo restrição dietética de 20% da dieta normal; G2: 30 camundongos não inoculados, recebendo restrição dietética de 20% da dieta normal; G3: 30 camundongos inoculados, recebendo dieta normal; G4: 30 camundongos sadios. Os animais dos grupos G1 e G2 foram submetidos previamente, por 20 dias, antes do início do estudo, a restrição dietética com oferta diária de 80% da quantidade ingerida pelos grupos G3 e G4. Após instalada a desnutrição, os animais foram inoculados no coxim plantar, via intradérmica, com fungo L. loboi e depois de 4 meses (período de aparecimento das lesões macroscópicas no coxim plantar), os animais foram sacrificados e submetidos ao lavado peritoneal e à necrópsia para a retirada dos órgãos: fígado e baço. Os coxins plantares foram removidos para determinação da viabilidade e do número total de fungos, além do histopatológico. As células do lavado peritoneal... / The Jorge Lobo’s disease is a cutaneous and subcutaneous mycosis with chronicle evolution caused by the fungus Lacazia loboi. This mycosis is predominant in the Amazon region and affects mainly rural workers who live in constant contact with the vegetation and the soil, such as the rubber tappers in this region. Up to this date there haven´t been studies about the participation of the nutritional state in the immunological response approaching the Jorge Lobo; thus, this study aims to evaluate the effects of the protein-calorie malnutrition in the immune response of the isogenic mice lineage BALB/c inoculated with L. loboi, using hystopatological and immunological parameters. The present study was developed with 120 male mice lineage BALB/c, with approximately 12 weeks old and circa 25g of body weight. Four groups were made: G1: 30 mice inoculated with L. loboi fungus, receiving diet restriction of 20% of the normal diet; G2: 30 non inoculated mice, receiving diet restriction of 20% of normal diet; G3: 30 mice inoculated receiving normal diet; G4: 30 healthy mice. The animals in the groups G1 and G2 were previously submitted for 20 days before the beginning of the study to a diet restriction with a daily offer of 80% of the quantities ingested by groups G3 e G4. After malnutrition was installed the animals were inoculated in the plantar cushion, via intradermic, with L. loboi fungus and after 4 months (period of the appearance of the macroscopic lesions in the plantar cushion), the animals were sacrificed and submitted to a peritoneal washing and to a necropsy to remove the organs: liver and spleen. The plantar cushions were removed for determining the viability and the total number of fungi, besides the hystopatological. The cells in the peritoneal washing were used for: total cell culture for the dosage of cytokine IFN-γ, macrophage... (Complete abstract click electronic access below)

O Platelia® Aspergillus EIA é um teste de ELISA sanduíche para diagnóstico precoce de aspergilose em pacientes neutropênicos que se baseia na detecção de um antígeno (galactomanana) da parede celular de Aspergillus spp. O trabalho objetivou avaliar a eficácia deste teste em outros hospedeiros suscetíveis à aspergilose e ainda, avaliar a interferência de potenciais falso-positivos no Platelia® Aspergillus EIA, como outras micoses sistêmicas e um antimicrobiano produzido a partir de fungos (piperacilina-tazobactam). Quatro experimentos foram realizados para contemplar os objetivos propostos. Amostras de lavado broncoalveolar de 60 pacientes transplantados de pulmão provenientes da Santa-Casa Complexo Hospitalar de Porto Alegre foram colhidas durante um período de aproximadamente 2 anos e testadas para detecção de galactomanana. Os pacientes foram classificados em aspergilose comprovada, provável e possível, colonização ou exame de vigilância de acordo com critérios do EORTC. Utilizando os casos comprovados (5) e prováveis (6) como positivos, foi calculada a curva ROC que demonstrou valores de sensibilidade de 90,9% e especificidade de 90,6% em um ponto de corte de 1,5. A eficácia do Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada também em pingüins em cativeiro. Soros de 35 animais foram incluídos no estudo, 9 com aspergilose, 3 com malária, 2 com caquexia e 21 saudáveis. Os soros foram testados por imunodifusão dupla e ELISA sanduíche, resultando em valores de sensibilidade de 33% e 100% e especificidade de 96% e 0, respectivamente. A reação cruzada de outras micoses sistêmicas no Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada a partir de 120 amostras de soro de pacientes com paracoccidioidomicose, histoplasmose, criptococose por Cryptococcus neoformans e criptococose por C. gattii. Todas as micoses foram responsáveis por resultados falso-positivos no ELISA sanduíche, sendo de 50%, 67%, 66% e 36,6% a taxa de positividade de cada micose, respectivamente. Em adição, 5 lotes de piperacilina-tazobactam foram testados em concentração de uso clínico (45mg/ml) para avaliação de interferência no Platelia® Aspergillus EIA. Destas, apenas uma resultou em valores maiores do que o ponto de corte (0,5), sendo submetida a sucessivas diluições até mimetizar concentrações plasmáticas do fármaco alcançáveis no soro humano, as quais resultaram em valores menores que 0,5, sendo consideradas negativas. Concluindo, utilizando um ponto de corte maior do que indicado pelo fabricante para uso em neutropênicos, a eficácia do teste foi comprovada para utilização em amostras de lavado broncoalveolar de pacientes transplantados de pulmão. Por outro lado, no hospedeiro animal testado, pingüins, o teste apresentou especificidade nula, não possuindo aplicabilidade como ferramenta diagnóstica para aspergilose neste grupo. Quanto aos fatores de interferência no Platelia® Aspergillus EIA avaliados, a alta taxa de resultados falso-positivos referentes à infecção por outras micoses sistêmicas reflete na necessidade de interpretar um teste positivo dentro do contexto epidemiológico do paciente. Por outro lado, as piperacilinas-tazobactam disponíveis no mercado brasileiro não interferiram no resultado do Platelia® Aspergillus EIA. No entanto como a variabilidade de galactomanana existe entre lotes, ainda é aconselhável que as amostras para realização do ELISA sanduíche sejam colhidas antes da próxima administração do fármaco. / Platelia® Aspergillus EIA is a sandwich ELISA to the diagnostic of aspergillosis in neutropenic patients. It detects an antigen (galactomannan) from Aspergillus cell wall. Here it was evaluated the performance of this test in other susceptible hosts and the interference of potentials false-positives factors in Platelia® Aspergillus EIA. Systemic mycosis and an antimicrobial produced from molds (piperacillin-tazobactam) were tested. Four experiments were executed to study conduce. Bronchoalveolar samples from 60 lung transplant recipients from Santa Casa-Complexo Hospitalar de Porto Alegre were collected during almost two years and tested for galactomannan detection. Patients were classified in proven, probable or possible aspergillosis according to EORTC criteria, or in colonization or surveillance. Considering proven (5) and probable (6) as true positive cases, ROC curve was calculated and showed 90.9% of sensitivity and 90.6% of specificity with 1.5 as optimal cutoff. Platelia® Aspergillus EIA efficacy was also tested in captive penguins. Sera from 35 animals were included in the study, 9 with aspergillosis, 3 with malaria, 2 with cachexia and 21 healthy. Samples were tested by double immunodiffusion and sandwich ELISA, resulting in sensitivity values of 33% and 100% and specificity of 96% and 0, respectively. Cross reaction in Platelia® Aspergillus EIA was evaluated with 120 serum samples of patients with paracocciddioidomicosis, histoplasmosis, criptococosis due to Cryptococcus neoformans and criptococosis due to C. gattii. False-positive results were observed in all mycosis, with rates of 50%, 67%, 66% and 36,6%, respectively. In addition, 5 piperacillin-tazobactam batches were tested, in a concentration of clinical use (45mg/ml), to evaluate it interference in Platelia® Aspergillus EIA. Those, only one showed positive value, and had been retest after serial dilutions until plasmatic concentration, resulting in value lower than 0.5, negative. In conclusion, with a higher cut-off than the indicated from the manufacturer, the efficacy of bronchoalveolar samples tested in Platelia® Aspergillus EIA for the diagnostic of aspergillosis in lung transplant recipients was proved. Controversially, in penguins, the test specificity was zero, showing non applicability as a diagnostic method for aspergillosis in this group of risk. Interference in Platelia® Aspergillus EIA due to other systemic mycoses shows the necessity to interpret a positive result after the evaluation of patient epidemiologic context. Finally, piperacillin-tazobactam available in the Brazilian market did not correspond to false-positive results in Platelia® Aspergillus EIA. However, given that variability occurs between distinct batches, still is indicating to collect samples for galactomannan detection before the next administration of the drug.

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Coorientador: Francisco Javier Enguita / Banca: Daniel de Assis Santos / Banca: Nádia Rezende Barbosa Raposo / Banca: Cláudia Viana Maurer Morelli / Banca: Valéria Valente / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por fungos do gênero Paracoccidioides e endêmica na América Latina. Três aspectos são de grande importância nessa doença: o desenvolvimento de antifúngicos e modelos alternativos para estudo dos mesmos e a busca de biomarcadores para o diagnóstico. O número de antifúngicos disponíveis é restrito, e problemas como efeitos adversos, interações medicamentosas e a ocorrência de isolados fúngicos resistentes são descritos. Neste contexto, a busca por novos compostos tem aumentado. Adicionalmente, modelos animais alternativos como Caenorhabditis elegans, zebrafish (Danio rerio) e Galleria mellonella são utilizados para o estudo de novos fármacos de forma simples e em grande escala. Neste trabalho, utilizou-se desses modelos para avaliação da eficácia antifúngica e toxicidade do ácido gálico e seus derivados ésteres de alquila (galatos). O composto com melhor atividade nesses modelos foi testado em camundongos. O galato de dodecila apresentou melhor eficácia e menor toxicidade no modelo C. elegans - C. albicans e menor efeito tóxico em embriões de zebrafish. Entretanto, em G. mellonella e camundongos infectados com Paracoccidioides, o composto não apresentou eficácia antifúngica, o que pode ser decorrente de sua baixa biodisponibilidade. Para resolver tal problema, os galatos foram associados a um sistema lipídico nanoestruturado. Tal associação foi benéfica, resultando em menor toxicidade em fibroblastos pulmonares e em z... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the fungi of the genus Paracoccidioides, which is endemic in Latin America. Three aspects are of great importance in this disease: the development of new antifungals and the use of alternative models for their study and also, the search of biomarkers for diagnosis. The number of antifungal agents available is restricted, and problems such as adverse effects, drug interactions and the development of resistance are related to them. In this context, the search for new compounds has increased. In addition, alternative animal models such as Caenorhabditis elegans, zebrafish (Danio rerio) and Galleria mellonella have been used for the study of new drugs in a simple and large scale manner. In this work, these models were used to evaluate the antifungal efficacy and toxicity of gallic acid and its alkyl esters derivatives (gallates). The compound with the best activity in these models was tested in mice. Dodecyl gallate presented better efficacy and lower toxicity in the C. elegans - C. albicans model and lower toxic effect in zebrafish embryos. However, in G. mellonella and in mice infected with Paracoccidioides sp., the compound showed no antifungal efficacy, which may be explained due to its low bioavailability. To resolve such a problem, gallates were associated with a nanostructured lipid system. Such association was beneficial, resulting in lower toxicity in lung fibroblasts and zebrafish, as well as in greater efficacy in the murine model. Another aspect of this study concerns the investigation of microRNAs for PCM. MicroRNAs are small non-coding RNAs that perform functions in biological processes and diseases. Thus, with the aid of RT-qPCR, eight microRNAs were differentially expressed in the serum of patients with chronic PCM. In the lung cells, distinct microRNAs were observed according to... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis e é considerada a 10º causa de morte dentre doenças infecciosas e parasitárias no Brasil. As células dendríticas (DCs) são as mais eficientes na apresentação de antígenos, e sendo de 100 a 1000 vezes mais eficientes que um adjuvante não específico. P10, motivo específico de 15 aminoácidos derivado da gp43 excretada pelo fungo, é reconhecido por linfócitos T, direciona para resposta Th1 e confere proteção no modelo experimental. Nesse sentido, analisamos a capacidade de DCs pulsadas com P10 em ativar uma resposta protetora. In vitro observamos que a proliferação de esplenócitos foi maior quando a reestimução era feira com P10 e DCs juntos. In vivo, camundongos infectados e tratados com DCs pulsadas com P10 apresentaram diminuição da carga fúngica e melhoria do tecido pulmonar, aumento de IFN-<font face=\"Symbol\">g/IL-12 e diminuição de IL-4/IL-10. Esses resultados evidenciam o potencial das DCs atuando como adjuvante para o P10 em uma vacina para o tratamento e cura da PCM. / Paracoccidiodomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the fungus Paracoccidioides brasiliensis. In Brazil, it is ranked as the tenth cause of death among the chronic infectious and parasitic diseases. Dendritic cells (DCs) are the most efficient antigen presenting cells, and they are at least 100-1000 times more efficient than a non specific adjuvant. The P10, 15-amino acid peptide motif derived from gp43 secreted by the fungus, is recognized by T cells, induces Th1 response and protects mice in a murine model of the disease. In the present work we analyzed the ability of DCs pulsed with P10 to elicit a protective response. In vitro results showed that a stronger proliferation of the splenocytes was reached when induced by DCs with P10. In vivo, mice infected and treated with DCs pulsed with P10 showed reduce of the fungi burden with less inflamed areas, higher levels of IFN-<font face=\"Symbol\">g/IL-12 and lower levels of IL-10/IL-4. All that point out the importance of the adjuvant role of DCs when developing a vaccine using P10 for the treatment or cure of PCM.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-14Bitstream added on 2014-06-13T20:35:39Z : No. of bitstreams: 1 gullo_fp_me_arafcf.pdf: 1209208 bytes, checksum: eb8202940f1c96815dc70f8524aa0063 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A criptococose é uma micose sistêmica e oportunista causada principalmente pelas leveduras Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. Entre as principais manifestações clínicas estão o desenvolvimento de meningite, encefalite, meningoencefalite e infecções pulmonares. Estima-se que mais de um milhão dos casos de criptococose ocorrem por ano em indivíduos HIV positivos, o que classifica esta doença como a terceira mais importante entre as infecções fúngicas sistêmicas. A ecologia deste gênero está diretamente relacionada ao meio ambiente, sendo a espécie C. neoformans, comumente encontrada em excretas secas de pombos (Columbia livia) e a espécie C. gattii é encontrada, principalmente, em plantas, como espécies de Eucalyptos. O tratamento da criptococose é realizado com os fármacos antifúngicos, anfotericina B e fluconazol, sendo este último de ação fungistática utilizado para tratamento de longo prazo, que apesar de eficiente, pode causar uma série de reações adversas e ainda desenvolvimento de resistência. Tendo em vista o difícil controle da levedura e o tratamento, este trabalho tem como objetivo principal, a pesquisa de substâncias naturais com alto potencial antifúngico com finalidade saneante e medicamentosa, combatendo a levedura em seu nicho ecológico natural e também atuando no combate à infecção no hospedeiro. Uma forma de diminuir os casos desta infecção é através do processo de desinfecção ambiental com produtos saneantes, os quais apresentam capacidade fungicida. Por meio do projeto Biota/FAPESP, foram selecionados dois triterpenóides quinonamétideos extraídos de Maytenus ilicifolia, a maitenina e a pristimerina, as quais apresentaram potentes CIMs anti-Cryptococcus, mais de 90 % de eficiência na desinfecção e baixa toxicidade, o que revela que... / Cryptococcosis is a systemic mycosis caused mainly by opportunistic yeast Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. Among the main clinical manifestations are the development of encephalitis, meningoencephalitis and pulmonar infections. It is estimated that more than one million cases of cryptococcosis occur per year in HIV positive individuals, which classifies the disease as the third among the most importante systemic fungal infections. The ecology of this genus is directly related to the environment. Specie C. neoformans is commonly found in dried excremento of pigeons (Columbia livia) and the species C. gattii is found primarily in plants such as Eucalyptus species. Cryptococcosis treatment is performed with the antifungal drugs amphotericin B and fluoconazole, the later being of a fungistatic used to treat long-term, while effective, may cause a number of adverse reactions and also the development of resistence. Given the difficult control of the yeast and treatment, this work has as main objective, the research of natural substances with high potential antifungal drug with purpose and saneante, fighting yeast in their natural ecological niche and also acting in fighting infection in the host. One way to reduce the cases of infection is through the capacity fungicide. Through the Project BIOTA / FAPESP, we selected two quinonametides triterpenids extracted from Maytenus ilicifolia, the maitenin and pristimerin, which showed potente anti-Cryptococcus MICs, more than 90 % of the disinfection efficiency and low toxicity... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-11Bitstream added on 2014-06-13T18:31:22Z : No. of bitstreams: 1 barboza_ls_me_sjrp_parcial.pdf: 54066 bytes, checksum: 3901016bbfd3977caa34c67746541ca7 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-28T16:08:50Z: barboza_ls_me_sjrp_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-28T16:09:56Z : No. of bitstreams: 1 000642588.pdf: 349486 bytes, checksum: eea3a5247c5cd27a996061bb9441acaa (MD5) / A criptococose é uma micose sistêmica que afeta principalmente o sistema nervoso central, causando meningite. Causada pela inalação de propágulos de fungos do gênero Cryptococcus sp, C neoformans acomete hospedeiros com imunodepressão celular, cujo maior contingente é representado por indivíduos com AIDS. A fonte principal de aquisição desta levedura são fezes de aves, principalmente pombos (Columba livia). C. gattii infecta indivíduos aparentemente imunocompetentes, sendo isolado principalmente em espécies de eucaliptos. C. albidus e C. laurentii aparece em casos de meningites, fungemias, pneumonias, abscessos pulmonares e infecções cutâneas. C.uniguttulatus é encontrado no trato gastrointestinal, fezes de pássaros e contaminante de leitos de animais e habitats de roedores. Termo-tolerância, parede celular, cápsula, adesão, e produção de enzimas são fatores importantes de virulência do gênero. São José do Rio Preto é a 5ª cidade entre os 100 municípios do estado de São Paulo em de casos de AIDS. Analisou-se morfologicamente e bioquimicamente 48 amostras clínicas e 155 ambientais. Amostras de líquor resultaram em 30 isolados da espécie C. neoformans, 17 de C. gattii e um de C. luteolus. Foram identificados 26 isolados de C.albidus, 22 de C. laurentii, 9 de C. neoformans, 5 de C. gattii e um de C.uniguttulatus nas amostras ambientais. A concentração inibitória mínima para antifúngicos foi determinada para todos os isolados por meio do teste de microdiluição em caldo padronizado pelo NCCLS. Os resultados obtidos mostraram resistência à anfotericina B e itraconazol nas cepas clínicas de C. neoformans e C. gattii, e as cepas de C.albidus e C. laurentii apresentaram resistência a 5-fluorcitosina, itraconazol e anfotericina B / Cryptococcosis is a systemic mycosis that mainly affects the central nervous system, causing meningitis. Caused by inhalation of seedlings of fungi of the genus Cryptococcus sp, C. neoformans affects hosts with immunosuppression cellular, whose largest contingent is represented by individuals with AIDS. The main source of acquiring this yeast is feces of birds, especially pigeons (Columba livia). C. gattii infects individuals apparently immunocompetent, being isolated mainly in species of eucalyptus. C. albidus and C. laurentii appear in cases of meningitis, nosocomial fungemia, pneumonia, lung abscesses and skin infections. C. uniguttulatus is found in the gastrointestinal tract and feces of birds and contaminant of beds of animals and habitats of rodents. Thermo-tolerance, cell wall, capsule, accession, and production of enzymes are important factors in the virulence of the genus. São José do Rio Preto is the 5th city among the 100 cities in the state of São Paulo in cases of AIDS. We analyzed morphologically and biochemically 48 clinical samples and 155 environmental. Liquor samples resulted in 30 isolates of the species C. neoformans, 17 of C. gattii and one of C. luteolus. We identified 26 isolates of C. albidus, 22 of C. laurentii, 9 of C. neoformans, 5 of C. gattii and one of C. uniguttulatus in environmental samples. The minimal inhibitory concentration for antifungal agents was determined for all isolates by means of the test of broth microdilution standardized by the NCCLS. The results obtained showed resistance to amphotericin B and itraconazole in clinical strains of C. neoformans and C. gattii, C. albidus and C. laurentii exhibited resistance to 5-fluorocytosine, itraconazole and amphotericin B