JORGE, Roberta Jeane Bezerra. Inibição dos efeitos locais do veneno de Bothrops pauloensis por alcalóides esteroidais de Solanum campaniforme Roem. & Schult (SOLANACEAE). 2011. 86 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-14T13:15:28Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_rjbjorge.pdf: 3539960 bytes, checksum: 5094a1a8ffcab73414467be964feed0f (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-14T16:02:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_rjbjorge.pdf: 3539960 bytes, checksum: 5094a1a8ffcab73414467be964feed0f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-14T16:02:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_rjbjorge.pdf: 3539960 bytes, checksum: 5094a1a8ffcab73414467be964feed0f (MD5) Previous issue date: 2011 / Snake envenoming is an important health problem widespread in tropical countries. Among the most dangerous species in South America is the Bothrops genus. Snakebites accidents caused by Bothrops species quickly develop severe local tissue damage, including swelling, hemorrhage, myonecrosis, skin ulceration and pain. The traditional serum therapy has limited effectiveness against these effects. Natural compounds isolated from plants, mainly from species used in folk medicine to treat snakebite, are a good choice to find new lead compounds to improve the snakebite treatment and minimize the sequelae of the victims. Antiophidic activity of the new steroidal alkaloids: 22-epoxy-solanide-1,4,9-trien-3-one (1), 22-epoxy-solanide-1,4-dien-3-one (2) and 3,9-dihydroxy-22,23-epoxy-9,10-secosolanida-1,3,5(10)-triene (3) isolated from leaves of Solanum campaniforme was tested through inhibition of phospholipasic activity, proteolytic activity, myotoxicity, hemorrhage and necrosis induced by Bothrops pauloensis venom. The three compounds were able to complete inhibit the creatine kinase release from skeletal muscles and minimize the histological changes, without inhibiting the phospholipasic A2 activity of whole venom. The inhibition of myotoxicity appears to be independent of catalytic activity of phospholipase A2 (PLA2) and may be related to inhibition of PLA2 Lys 49, enzymatically inactive, and / or an indirect action on metalloproteinases. There was also, the inhibition of proteolytic activity of the venom on different substrates with three alkaloids. Hemorrhage as well as skin necrosis, both induced by metalloproteases present in the venom, were reduced in the presence of alkaloids 1 and 2 , but not with the alkaloid 3. Inhibition of proteolytic activities and the reduction of hemorrhagic and necrotizing effects induced by vBp, mainly attributed to the alkaloids 1 and 2, may be associated with the interaction of these compounds with the metalloproteases present in the venom and / or divalent metal ions required for their action. / Envenenamentos por serpentes são um importante problema de saúde muito difundido em países tropicais. Entre as espécies mais perigosas da América do Sul encontra-se o gênero Bothrops. Acidentes ofídicos causados por espécies Bothrops podem desenvolver rapidamente dano tecidual local grave, incluindo edema, hemorragia, mionecrose, ulceração de pele e dor. A soroterapia tradicional tem eficácia limitada contra esses efeitos. Compostos naturais isolados de plantas, principalmente a partir de espécies usadas na medicina popular para tratar envenenamentos de serpente, podem ser uma boa alternativa para encontrar novos compostos para melhorar o tratamento do envenenamento e minimizar as sequelas das vítimas. Atividade antiofídica dos novos alcalóides esteroidais: 1 -22,23-epoxi-solanida-1,4,9-trien-3-ona (1), 2-22,23-epoxi-solanida-1,4-dien-3-ona (2) 3-3,9-dihidroxi-22,23-epoxi-9-10-secosolanida-1,3,5(10)-trieno (3) isolados das folhas de Solanum campaniforme foram testados através da inibição da atividade fosfolipásica, atividade proteolítica, miotoxicidade, hemorragia e necrose induzidas pelo veneno de Bothrops pauloensis. Os três compostos foram capazes de inibir completamente a liberação de creatina quinase de músculos estriados esqueléticos e minimizar as alterações histológicas sem inibir a atividade fosfolipásica A2 do veneno total de B. pauloensis. A inibição da miotoxicidade parece ser independente da atividade catalítica de fosfolipase (PLA2) e pode estar relacionada à inibição da PLA2 Lys 49, enzimaticamente inativas, e / ou uma ação indireta sobre metaloproteinases. Houve também, a inibição da atividade proteolitica do veneno em diferentes substratos com os três alcaloides A hemorragia, bem como a necrose de pele, ambas induzidas por metaloproteases presentes no veneno, foram reduzidas na presença dos alcalóides 1 e 2, mas não com o alcalóide 3. A inibição das atividades proteolíticas e a redução dos efeitos hemorrágicos e necrosantes induzidas pelo vBp, principalmente atribuídos aos alcalóides 1 e 2, podem estar associadas com a interação destes compostos com as metaloproteases presentes no veneno e/ou com íons metálicos bivalentes necessários para sua ação.

Dissertação (Mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-06-01T11:13:33Z No. of bitstreams: 1 2012_DanielMendesPereiraArdissondeAraujo.pdf: 1831896 bytes, checksum: b70d1a421b0235fc55aca44a22aab16f (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2012-06-02T12:15:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_DanielMendesPereiraArdissondeAraujo.pdf: 1831896 bytes, checksum: b70d1a421b0235fc55aca44a22aab16f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-02T12:15:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_DanielMendesPereiraArdissondeAraujo.pdf: 1831896 bytes, checksum: b70d1a421b0235fc55aca44a22aab16f (MD5) / Baculovírus são vírus de DNA dupla-fita circular que infectam insetos principalmente da ordem Lepidoptera. O problema de seu uso como inseticida é o tempo que este leva para matar o inseto hospedeiro. A fim de resolver este problema, inserção de genes inseticidas no genoma viral pode ser requerida. Uma importante fonte de proteínas inseticidas é o veneno de aracnídeos, cujo alvo e ação permanecem pouco elucidados. Assim, promopos o uso de baculovírus como ferramenta para entender mecanismo de ação de peptídeos tóxicos em células de inseto. Diante disso, diferentes versões da toxina putativa BaTx derivada de biblioteca de cDNA da glândula de veneno da aranha caranguejeira Brachypelma albiceps foram obtidas por PCR e usadas para construção de baculovírus recombinantes. Os recombinantes foram usados para infecção de duas linhagens de lepidópteros, IPLB-Sf1-AE e BTI-Tn5B1-4 e a viabilidade celular foi avaliada durante a infecção. As diferentes versões da toxina causaram morte celular precoce por necrose em níveis diferenciados. Análise estrutural e ultraestrutural mostraram clara mudança citomorfológica em células, corroborando perda de integridade da membrana plasmática e do conteúdo citoplasmático, permanência do núcleo com carioteca intacta e associada a restos de membranas circundantes. Esta característica criou um aspecto rugoso quando observado em microscopia de luz. Além disso, o gene da toxina BaTx foi expresso em sistema procariótico para obtenção de antisoro policlonal murino. Entretanto, quando testado contra extratos de células infectadas com recombinantes, não houve marcação. Fato este esperado, uma vez que a toxina não foi observada em gel SDS-PAGE. Não há relatos de genes de toxinas de aranha com ação citotóxica clonadas em baculovírus, provavelmente esta característica não permitiu que houvesse acúmulo da toxina em níveis diagnosticáveis por imunomarcação ou pode ter promovido instabilidade peptídica. Peptídeos formadores de canais apresentam alto conteúdo de resíduos básicos (arginina e lisina), de cisteínas e conformação em folha-beta. BaTx apresenta todas estas características, porém alvo e ação permanecem obscuros. Canais tipo-TRP são encontrados em insetos e há indícios da presença desses transportadores na membrana plasmática e em membranas intracelulares. Talvez estes canais possam ser o alvo de ação da toxina BaTx. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Baculoviruses are dsDNA circular virus infectives to insects mainly from the Order Lepidoptera. Its biopesticide use problem is the time of death during insect infection. To solve this problem, insecticide genes can be inserted into the viral genome. An important insectice protein source is the venom of arachinids. However, the target and action of many peptides remain unclear. Baculoviruses can be used as a tool to udersatand the toxic peptides playing in insect cells. Thus, different vesions of a putative toxin were obtained from cDNA library of the tarantula Brachypelma albiceps venom gland by PCR and used to construct recombinant baculoviruses. The recombinants were used to infect two lepidopteran cell lines, IPLB-Sf1-AE and BTITn5B1- 4, and cell viability was evaluated during infection. The toxin versions caused wide and early cell death by necrosis in different levels. Structural and ultrastructural analyses showed clear cytomorphological changes, corroborating loss of the plasma membrane integrity and cytoplasmic contents, and nucleus with intact karyotheca linked with surrounding plasma membrane remains. The features created a rough aspect when those infected cells were observed by light microscopy. Furthermore, the BaTx toxin gene was expressed by a prokaryotic system to obtain murine polyclonal antiserum. However, when the antiserum was tested against infected cells extract with recombinant virus carrying the BaTx toxin no reaction was detected. This observation was expected since the toxin was not observed by SDS-PAGE. There are no reports of spider toxin genes with necrotic action cloned into baculovirus, probably this feature did not allowed toxin accumulation in detectable levels by immunoblot or it could have promoted protein instability. Channel former peptides show high content of basic amino acid residues (lysine and arginine), cystein residues, and beta-sheet conformation. BaTx presents all those features, but its target and mode of action remain unknown. TRP-like channels are found in insects and there is evidence of the presence of these iontransporters in intracellular membranes as well as in plasma membrane. Perhaps TRPlike channels can be the BaTx toxin target of action.

Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2017-12-06T16:47:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) COLACAO CARLOS LACERDA - 23.01.17.pdf: 3092008 bytes, checksum: b2b2724eacb55e94829a67780f38b36b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-06T16:47:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) COLACAO CARLOS LACERDA - 23.01.17.pdf: 3092008 bytes, checksum: b2b2724eacb55e94829a67780f38b36b (MD5) Previous issue date: 2015-12-14 / Introdução: A abdominoplastia é o terceiro procedimento mais realizado em cirurgia plástica. Na intenção de evitar complicações cirúrgicas, foi realizado o estudo da Artéria Ilíaca Circunflexa Superficial do abdome (AICS), investigando a importância da sua preservação nestas cirurgias, como um dos fatores de relevante importância na prevenção das necroses. Métodos: O presente estudo anatômico prospectivo foi realizado no Serviço de Cirurgia Plástica do Hospital Agamenon Magalhães. Trinta e três pacientes foram submetidos a dermolipectomia abdominal a Pitanguy onde os retalhos cirúrgicos ressecados foram submetidos a estudos hemodinâmicos para análise do território anatômico irrigado pela AICS. Resultados: Foram operados 82 pacientes sendo selecionados 33 para este estudo que preencheram os critérios de inclusão, seis (18,9%) foram excluídos por motivos técnicos. O grupo de pacientes em estudo apresentou faixa etária entre 23 e 49 anos (36,6±7,5).O índice de Massa Corporal variou de 22,0 a 30,5 (24,9±2,1).O peso das peças cirúrgicas ressecadas variou de 450 a 1010 gramas(623,1±141,5),o teste de Pearson entre IMC e peso das peças demonstrou importante correlação r=0,91 e r2=0,83.Trinta e dois eram femininos(97%) e um masculino(3%).Uma paciente era portadora de hipertensão arterial sistêmica(3%). Vinte e sete eram pardos (81,8%),dois brancos (6,1%), três negros (9,1%) e um da raça indígena (3,0%). Nos estudos hemodinâmicos, as imagens e filmes obtidos demonstraram que a injeção do contraste iodado na AICS foram considerados adequados, compatíveis com o objetivo do trabalho em 25 (92%) pacientes e inadequados em 2(8%) pacientes. Conclusão: Os resultados hemodinâmicos deste estudo levam a conclusão que a preservação das AICS do abdome nas miniabdominoplastias tem relevante importância na prevenção das necroses da parede abdominal. / Introduction: The abdominoplasty is the third most performed procedure in plastic surgery. In an attempt to avoid surgical complications, a study was conducted of the Superficial Circumflex Iliac Artery of the abdomen (SCIA), investigating the importance of its preservation in these surgeries, as one of the factors of relevant importance in preventing necrosis. Methods: This prospective anatomic study was held at the Plastic Surgery Service of the Agamenon Magalhaes Hospital. Thirty three patients underwent a Pitanguy abdominoplasty where the resected surgical flaps underwent hemodynamic studies to analyze the anatomical territory irrigated by SCIA. Results: 82 patients were operated and 33 selected for this study met the inclusion criteria, 6 (18.9%) were excluded for technical reasons. The patients in the study showed age group between 23 and 49 years (36.6±7.5). The body mass index ranged from 22.0 to 30.5 (24.9±2.1). The weight of the resected surgical specimens ranged from 450 to 1010 grams (623.1±141.5), Pearson's test between BMI and weight of the pieces showed significant correlation r=0.91 and r2=0,83. Thirty two were females (97%) and one male (3%). One patient had hypertension (3%). Twenty seven were brown (81.8%), two whites (6.1%), three black (9.1%) and one Native South American race (3.0%). In the hemodynamic studies, images and films obtained have shown that the injection of iodinated contrast in SCIA were considered adequate, consistent with the objective of working in 25 (92 %) patients and inadequate in 2 (8%) patients. Conclusion: Hemodynamic results of this study lead to the conclusion that the preservation of the abdomen SCIA in miniabdominoplasty has a relevant importance in the prevention of abdominal wall necrosis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:23:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2016Bitstream added on 2016-09-27T04:02:31Z : No. of bitstreams: 1 340520.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / A osteonecrose medicamentosa dos maxilares (OMM) local é um efeito adverso do uso contínuo de drogas antirreabsortivas. A OMM está associada a procedimentos odontológicos, como extrações dentárias. O presente trabalho teve o objetivo de analisar a influência de dois fármacos supressores do metabolismo ósseo, Zoledronato (ZOL) e Denosumab (DNB), no reparo ósseo mandibular de roedores submetidos a extração dentária.. Foram utilizados 33 ratos Wistar, machos de 120 dias divididos em três grupos: controle (n=11), ZOL (n=11) e DNB (n=11), os quais foram submetidos a duas aplicações semanais na dosagem de 0,1 mg/kg, 0,125 mg/kg e 0,250 mg/kg, via de administração intraperitoneal, respectivamente. O término das infusões medicamentosas foi após 4 semanas. Após uma semana do início da pesquisa, os animais foram submetidos à extração dentária do primeiro molar esquerdo. Após 28 dias os animais foram sacrificados. As peças foram fotografadas, tomografadas e, posteriormente, processadas para análise histológica e imunoistoquímica, a fim de verificar a expressão do ligante do receptor ativador nuclear kB (RANKL) e da osteoprotegerina (OPG). Os resultados demonstraram que o grupo ZOL foi superior na reparação alveolar em comparação somente com o DNB na análise tomográfica, p<0,05. Nas demais análises executadas, não foi possível observar diferença estatisticamente significativa entre os grupos. Na posologia utilizada na pesquisa foi possível constatar que o ZOL teve resultados que demonstram sua influência no metabolismo ósseo de forma mais intensa. <br> / Abstract : Medication-Related Osteonecrosis of the Jaw (MRONJ) is an adverse effect that comes from continuous administration of antirresorptive drugs associated with local injury, such as teeth extraction. The aim of this study was to analyze the effect of two drugs which supress bone metabolism, Zoledronate (ZOL) and Denosumab (DNB). It was chosen 33 male Rat Wistar, with 120 days of age. They were splitted in three groups: control (n=11), ZOL (n=11) and DNB (n=11), and were submitted to two doses weekly with 0,1 mg/kg, 0,125 mg/kg and 0,250 mg/kg for control, ZOL and DNB, respectivally. The end of the drug infusion was 4 weeks after the beginning of the treatment. After one week of starting the medications protocols, the first left molar was extracted. Twenty eight days after the start point, the animals were sacrificed. The jaws were removed and photographed. After the pieces were subjected to tomographic analysis and processed for histological and imunohistochemistry analysis , using the receptor activator nuclear kB ligant (RANKL) and osteoprotegerin (OPG) markers. The results showed that ZOL group had a better alveolar bone healing on tomographic analysis, p<0,05. In other analyzes there was no difference between groups. The doses used in this research were able to conclude that ZOL had effects more prominent that demonstrate the in influence of this drug on bone metabolism.

Proefschrift Universiteit Maastricht. / Met bibliogr., lit. opg. - Met samenvatting in het Nederlands.

TARGINO, C. S. P. C. Estudo da atividade antifúngica e dos mecanismos de ação do peptídeo Ctn[15-34], um fragmento c- terminal da Crotalicidina, derivado de uma catelicidina expressa nas glândulas de veneno de cascavéis. 2017. 131 f. Tese (Doutorado em Ciências Farmacêuticas) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by ciências farmacêuticas pgcf (pgcf.ufc@gmail.com) on 2017-06-12T13:41:28Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_cspctargino.pdf: 6282751 bytes, checksum: 5fc1e8e14aea822773a453246b9ae64c (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-12T16:36:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_cspctargino.pdf: 6282751 bytes, checksum: 5fc1e8e14aea822773a453246b9ae64c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T16:36:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_cspctargino.pdf: 6282751 bytes, checksum: 5fc1e8e14aea822773a453246b9ae64c (MD5) Previous issue date: 2017-04-27 / Crotalicidin (Ctn), a 34-residue cathelicidin from a South American rattlesnake, and its fragment (Ctn[15–34]) have shown anti-infective and cytotoxic activities against Gramnegative bacteria and certain tumor lines, respectively. The extent of such effects has been related to physicochemical characteristics such as helicity and hydrophobicity. We now report the anti-fungal activity of Ctn and its fragments (Ctn[1–14]) and (Ctn[15–34]) And characterize the possible mechanisms of action of peptides against Candida albicans.MIC determination and luminescent cell viability assays were used to evaluate the anti-infective activity of Ctn and its fragments (Ctn[1–14]) and (Ctn[15–34]) as anti-fungal agents against opportunistic yeast and dermatophytes. Cytotoxicity towards healthy eukaryotic cells was assessed in vitro with healthy human kidney-2 (HK-2) cells and erythrocytes. Fragments Ctn[1–14] and Ctn[15–34] lost activity against dermatophytes, but became more active against pathogenic yeasts, including several Candida species and Cryptococcus laurentii, with MICs as low as 5 μM. Interestingly, the two peptide fragments were less cytotoxic to healthy HK-2 cells and less hemolytic to human erythrocytes than the standard-of-care amphotericin B (AMB).The checkerboard technique was performed to estimate the effects of combining either one of the peptides with AMB against C. albicans strains, and it was the synergy between Ctn peptides and AMB, with consequent reduction in MICs of both drug and peptides. In general, the Ctn[15-34] presented the smallest MICs against the different Candida species, and low cytotoxicity against eukaryotic cells. To characterize the anti- Candida activity of Ctn[15-34] were performed the phospholipase activity assay, time killing assay, and flow cytometry techniques.The plasmatic membrane damage was roughly estimated based on the amount of product generated by phospholipase activity after treatment of 4N3OBA lipid (substrate) with Ctn[15-34]; At 10 μM a big increase in phospholipase activity could be noticed compared to non-treated and treated lipids at 5μM. Analysis of the time killing assays of cells treated with Ctn [15-34] and AMB, showed that they did not reduce the number of CFUs in the same fashion, which suggested that Ctn[15-34] and AMB could have different mechanisms of action against C.albicans. Ctn[15-34] alone promoted cell membrane disruption, like other AMPs, in yeasts. Moreover, the C. albicans cell death pathway detected after the peptide treatment was necrosis, which further confirmed cell membrane damage capacity by Ctn[15-34].Together, Ctn and its fragments are promising for the treatment of fungal diseases, and the Ctn [15-34] is a most valuable candidate for further 12 development as an antifungal therapeutic peptide lead, particularly against yeast infections where it could be usedfully applied either alone or in combination with a standard antibiotic such as AMB. / A crotalicidina (Ctn), uma catelicidina de 34-resíduos isolada de cascavel da América do Sul, e o seu fragmento (Ctn[15-34]) demonstraram previamente atividades antimicrobiana contra bactérias Gram negativas e citotóxica contra células tumorais. A extensão de tais efeitos tem sido relacionada com suas características físico-químicas, como a forma helicoidal e hidrofobicidade. O presente trabalho teve o objetivo geral de avaliar a atividade antifúngica do Ctn e seus fragmentos (Ctn[1-14] e Ctn[15-34]) e caracterizar os possíveis mecanismos de ação dos peptídeos contra Candida albicans. Determinação de Concentração inibitória mínima (CIM) e ensaios de viabilidade celular por ensaios de luminescência foram utilizados para avaliar a ação do Ctn e seus fragmentos (Ctn[1-14] e Ctn[15-34]) como agentes antifúngicos contra cepas clínicas de leveduras oportunistas e dermatófitos. A citotoxicidade em relação a células eucarióticas foi avaliada in vitro com células renais da linhagem HK-2 e eritrócitos. Ctn foi o peptídeo mais ativo contra dermatófitos e também o mais tóxico para células eucarióticas saudáveis. Os fragmentos Ctn[1-14] e Ctn [15-34] não demonstraram atividade contra dermatófitos, mas foram ativos contra leveduras patogênicas, incluindo várias espécies de Candida sp. e Cryptococcus laurentii, com CIMs de até 5μm. É interessante notar que os dois fragmentos peptídicos foram menos citotóxicos para as células HK-2 e menos hemolíticos para os eritrócitos humanos do que a Anfotericina B (ANF). A técnica checkerboard foi realizada para estimar os efeitos da combinação dos peptídeos com ANF frente a cepas de C. albicans. Foi observado o efeito sinérgico entre as crotalicidinas e a ANF, com a consequente redução nas CIM de ambos, fármaco e peptídeos. De modo geral, o fragmento Ctn[15-34] apresentou as menores CIMs contra as diferentes espécies de Candida, e baixa citotoxicidade contra células eucariotas. Para caracterizar a atividade anti-Candida do Ctn[15-34] foram realizados ensaios para determinar atividade fosfolipásica, a curva do tempo de morte, e técnicas de citometria de fluxo. O dano à membrana plasmática foi estimado com base na quantidade de produto gerada pela atividade fosfolipásica após tratamento do lípido 4N3OBA (substrato) com Ctn[15-34]; a 10 μM pode ser observado um grande aumento na atividade fosfolipásica em comparação com os lipídeos não tratados, e tratados com 5 μM. A análise das curvas de tempo de morte das células tratadas com Ctn[15-34] e AMB, mostrou que eles não reduziram o número de UFCs da mesma forma, sugerindo que Ctn[15-34] e AMB poderiam ter diferentes mecanismos de ação contra C .albicans. Ctn[15-34] promoveu rompimento da membrana celular, assim como outros peptídeos 10 antimicrobianos (PAMs), em leveduras. Além disso, a via de morte celular da C. albicans detectada por citometria após o tratamento com peptídeo foi a necrose, o que confirmou ainda mais a capacidade de dano da membrana celular por Ctn[15-34]. Juntos, Ctn e seus fragmentos são promissores para o tratamento de doenças fúngicas, e o Ctn[15-34] é um candidato muito valioso para o futuro desenvolvimento de um peptídeo antifúngico, que pode ser aplicado sozinho ou em combinação com um antibiótico padrão como a AMB

FIGUEIREDO, Aline Almeida. Efeito do anticorpo anti-TNF-α, infliximabe, sobre a mucosite intestinal experimental induzida por irinotecano. 2011. 78 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-17T15:11:23Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_aafigueiredo.pdf: 1221927 bytes, checksum: 46b7f36820f65565f5d4297568a389be (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-17T15:11:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_aafigueiredo.pdf: 1221927 bytes, checksum: 46b7f36820f65565f5d4297568a389be (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-17T15:11:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_aafigueiredo.pdf: 1221927 bytes, checksum: 46b7f36820f65565f5d4297568a389be (MD5) Previous issue date: 2011 / Introduction: Intestinal mucositis (IM) is a common limiting side effect of anticancer therapy with irinotecan. Previous studies have reported the involvement of cytokines, such as TNF-α, IL-1β e IL-18 in the pathogenesis of irinotecan-induced IM, besides demonstrating that nonselective inhibitors of cytokines such as pentoxifylline, attenuate chemotherapy-induced IM. The role of cytokines is well established in the context of inflammatory bowel disease. It is used in clinical practice treatments that target inflammatory cascade components, for example, the anti-TNF monoclonal antibody, infliximab, which has a beneficial effect in the treatment of Crohn’s disease, rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis. There is a lack of information regarding the effect of selective cytokine target therapy on anticancer drug toxicity. Aims: To investigate the protective role of a selective TNF-α inhibitor, infliximab, on irinotecan-induced IM. Methods: C57BL6 mice were divided into groups (n=5-9) and treated for 4 days with saline (5 mL/kg, i.p.) or irinotecan (75 mg/kg/4 days, i.p) or were given infliximabe (5 mg/kg, e.v, single dose) 1 hour before the first irinotecan injection. Body weight and mortality were assessed daily. On the 5th day the diarrhea was evaluated using scores and the blood was collected for white blood cell count (WBC). After euthanasia, samples of duodenum was collected for myeloperoxydase assay, tissue IL-1β dosage, western blot (WB) of the inducible nitric oxide synthase, morphometric analysis and in vitro evaluation of duodenal contractility. Results: Irinotecan induced IM demonstrated by the significant (p<0,05) increase in diarrhea, decrease in length and area of the villi increased MPO activity, increased IL-1β dosage and expression of iNOS and intestinal smooth muscle over-contractility when compared with saline treated group. The group treated with irinotecan also presented leucopenia, when compared with control group. The group treated with infliximab previously to irinotecan showed a significant improvement of inflammatory parameters (MPO activity, IL-1β, expression of iNOS), when compared withn irinotecan-treated group. However, animal weight loss, mortality and gut disfunction (diarrhea and intestinal contractility) were not affected by infliximab treatment (p>0,05). Conclusion: The results suggest for the first time the proeminent anti-inflammatory effect of the target therapy anti-TNF-α with infliximab on irinotecan-induced IM. However, such treatment did not alter the survival and did not protect against intestinal dysfunction in irinotecan-induced IM. Additionally accentuated leukopenia induced by irinotecan, which can increase the risk of infections. / Introdução: A mucosite intestinal (MI) é um efeito colateral comum e limitante da quimioterapia com irinotecano. Estudos sugerem a participação de citocinas, como TNF-α, IL-1β e IL-18 na fisiopatologia da MI, além de demonstrar que inibidores não seletivos de citocinas, como pentoxifilina, atenuam a MI por irinotecano. O papel das citocinas está bem estabelecido no âmbito das doenças inflamatórias intestinais, inclusive com utilização de tratamentos visando inibir seletivamente componentes da casacata inflamatória, como, por exemplo, o anticorpo monoclonal anti-TNFα, infliximabe, que tem um efeito benéfico comprovado no tratamento da doença de Crohn, artrite reumatóide e espondilite anquilosante. Há escassos estudos na literatura de terapia alvo anti-citocinas inflamatórias no contexto da mucosite intestinal induzida por quimioterápico. Objetivo: Avaliar o papel do Infliximabe sobre as alterações inflamatórias e disfunção intestinal associados à MI induzida por Irinotecano. Métodos: Camundongos C57BL6 foram divididos em grupos (n=5-9) e tratados por 4 dias com salina (5 mlkg, i.p) ou irinotecano (75 mgkg, i.p) ou pré-tratados com infliximabe (5 mgkg, e.v, dose única) 1 hora antes da primeira injeção de irinotecano. O peso e mortalidade foram avaliados diariamente. No 5o dia avaliou-se a diarréia por escores, o leucograma e, após sacrifício, coletou-se o duodeno para dosagem da atividade de mieloperoxidase (MPO) e de IL-1β, expressão de óxido nítrico sintase induzida (iNOS), análise de escores histopatológicos, morfometria e contratilidade in vitro ao carbacol. Resultados: Os animais tratados com irinotecano apresentaram mucosite intestinal, evidenciada por aumento significativo (p<0,05) nos escores de diarréia, diminuição do comprimento e área do vilo, aumento da atividade de MPO, aumento no nível tecidual de IL-1β e de expressão de iNOS e hipercontratilidade da musculatura lisa duodenal, além de terem apresentado leucopenia, quando comparado com o grupo tratado com salina. O grupo de animais que recebeu infliximabe previamente ao tratamento com irinotecano apresentou melhora significativa (p<0,05) nos parâmetros inflamatórios avaliados (atividade de MPO, nível tecidual de IL-1β, expressão de iNOS), comparado com o grupo tratado apenas com irinotecano. Contudo, a perda ponderal, a mortalidade e a disfunção intestinal (diarréia e contratilidade intestinal in vitro) não foram afetadas pelo tratamento com infliximabe (p>0,05). Conclusões: Os resultados mostram o proeminente efeito antiinflamatório da terapia anti TNF-α com infliximabe na MI induzida por irinotecano. Tal droga, no entanto, não foi capaz de alterar a sobrevida e de proteger contra a disfunção na MI experimental por irinotecano. Adicionalmente, acentuou a leucopenia induzida pelo irinotecano, o que pode aumentar o risco de complicações infecciosas.

DIAS, Françoise Parahyba. Estudo do hidróxido de cálcio associado ou não à clorexidina como medicação intracanal de dentes permanentes necrosados. 2010. 67 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-08T14:02:58Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_fpdias.pdf: 1392115 bytes, checksum: 1e1713e3aaae1ed082705976cef2733f (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-01T13:38:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_fpdias.pdf: 1392115 bytes, checksum: 1e1713e3aaae1ed082705976cef2733f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-01T13:38:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_fpdias.pdf: 1392115 bytes, checksum: 1e1713e3aaae1ed082705976cef2733f (MD5) Previous issue date: 2010 / Aware that the main objective of endodontic treatment is the removal of microorganisms and the prevention of re-infection inside the root canal, and that the infections are polymicrobial and difficult to eliminate, the biomechanical preparation is essential for disinfection, though it is unable to eradicate all microorganisms. The intracanal medication is used as an adjunct to treatment, reducing the endodontic microbiota, and favoring the repair of periapical lesions. However, this dissertation consists of two papers and it is proposed, through a written review, to examine and discuss the intracanal medications most frequently used at present in endodontics - calcium hydroxide and chlorhexidine. Further, through research, to evaluate the antibacterial effect of biomechanical preparation and a calcium hydroxide based paste containing or not 2% chlorhexidine, as intracanal medication in the treatment of necrotic teeth after trauma, as well as to verify the presence of the microorganisms Fusobacterium nucleatum and black-pigmented bacilli inside the root canal of teeth. According to the inclusion criteria, the sample consisted of 14 incisors necrotic after trauma. The microbiological samples were acquired before (S1) and after biomechanical preparation (S2), after intracanal medication (S3) and 72 hours after removal of medication (S4). Selected at random, eight patients used calcium hydroxide as intracanal medication and six patients the calcium hydroxide based paste containing 2% chlorhexidine. The samples were collected sequentially, inserting three sterile absorbent paper cones with a diameter compatible with the root canal, and after a minute the paper points were removed and placed in a tube containing a reduced transport fluid, and sent to the laboratory for microbiological evaluation. The results were analyzed by the Friedman, Conover-Inman and Kruskal-Wallis tests (p <0.05). Microorganisms were found in 100 % of root canals in the initial samples (S1), while in S2 were detected in only 3 out of the 14 samples (21.4 %), resulting in a reduction in the number of colony forming units, a statistically significant result (p <0.001) between S1 and S2. No statistically significant reduction was observed when comparing S2 with S3, S2 with S4, and S3 with S4, regardless of the medication used. It was found that in S1, there was a predominance of Gram-positive cocci - 8 out of 14 (57.1 %) and Gram-negative cocci - 9 out of 14 (64.3 %). In S2 only Gram-positive bacterial morphotypes were detected, in 3 out of 14 samples (21.4 %) of Gram-positive cocci and 2 out of 14 (14.3%) of Gram-positive bacilli. The microorganisms Fusobacterium nucleatum found in 8 of the 14 samples (57.1%) and the black-pigmented bacilli found in 3 of the 14 (21.4%) of the initial samples, and were found in only one out of 6 (16.1%) samples taken after the use of calcium hydroxide. It was concluded that mechanical preparation of necrotic teeth after trauma, using 2.5% NaOCl, plays its role in significantly reducing the microbiota of root canals, but the calcium hydroxide, or the calcium hydroxide based paste containing 2% chlorhexidine, have a limited antibacterial effect, not being able to prevent the re-growth of bacteria after its use as an intracanal medication. / Ciente de que o principal objetivo do tratamento endodôntico consiste na eliminação de microorganismos e evitar a reinfecção dentro do canal radicular, e que as infecções são polimicrobianas e difíceis de serem eliminadas, o preparo biomecânico além de ser primordial para a desinfecção, é incapaz de erradicar todos os microorganismos. Então, utiliza-se da medicação intracanal como coadjuvante ao tratamento, reduzindo a microbiota endodôntica e favorecendo o reparo da lesão periapical. Contudo, esta dissertação é constituída de dois artigos e propõe-se, mediante uma revisão de literatura, apresentar e discutir as medicações intracanais mais utilizadas atualmente na Endodontia – hidróxido de cálcio e clorexidina, e, por meio de uma pesquisa, avaliar o efeito antibacteriano do preparo biomecânico e de uma pasta à base de hidróxido de cálcio associada ou não à clorexidina a 2 %, como medicação intracanal, no tratamento de dentes necrosados após trauma, bem como verificar a presença dos microorganismos Fusobacterium nucleatum e bacilo pigmentado negro no interior do canal radicular desses dentes. De acordo com os critérios de inclusão, a amostra constituiu-se de 14 incisivos necrosados após trauma. As coletas microbiológicas foram adquiridas após a abertura coronária (C1), preparo biomecânico (C2), medicação intracanal (C3) e 72h depois da retirada da medicação (C4). Mediante sorteio, oito pacientes utilizaram como medicação intracanal o hidróxido de cálcio e seis pacientes a pasta de hidróxido de cálcio associada à clorexidina a 2 %. As coletas foram realizadas introduzindo sequencialmente três cones de papel absorvente estéril, de diâmetro compatível com o do canal radicular, no interior deste por aproximadamente um minuto e transferidas para um tubo contento um fluido reduzido para transporte e levadas ao laboratório para processamento microbiológico. Os resultados foram avaliados pelos testes Friedman, Conover-Inman e Kruskall-Wallis (p<0.05). Os microorganismos foram encontrados em 100 % dos canais radiculares, das amostras iniciais (C1), enquanto na C2 foram detectados em apenas 3/14 (21.4 %) das amostras, resultando numa redução do número de unidades formadoras de colônias, estatisticamente significante (p<0.001) entre C1 e C2. O mesmo não ocorreu quando comparados C2 com C3, C2 com C4 e C3 com C4, independentemente da medicação. Foi constatada em C1 a predominância de cocos Gram-positivos (8/14) e negativos (9/14), representando 57.1 % e 64.3 %, respectivamente. Na C2 só foram detectados morfotipos bacterianos positivos, num total de 3/14 (21,4 %) de cocos Gram-positivos e 2/14 (14.3 %) de bacilos Gram-positivos. O microorganismo Fusobacterium nucleatum e o bacilo pigmentado negro foram observados em 8/14 (57.1 %) e 3/14 (21.4 %), respectivamente, das amostras iniciais, sendo apenas o primeiro encontrado em 1/6 (16.1 %) amostras, após a utilização do hidróxido de cálcio. Concluiu-se que o preparo biomecânico de dentes necrosados após trauma, utilizando NaOCl a 2.5 %, desempenha seu papel em reduzir significantemente a microbiota dos canais radiculares, porém o hidróxido de cálcio ou a sua associação com clorexidina a 2 % possuem efeito antibacteriano limitado, não sendo capazes de prevenir o recrescimento de bactérias após seu uso como medicação intracanal.

CAMPOS, Mirela Andrade. Avaliação do efeito antibacteriano da medicação intracanal à base de hidróxidos de cálcio associado ou não à clorexidina 1% no tratamento de dentes necrosados após trauma. 2010. 61 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-15T11:52:45Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_macampos.pdf: 1163800 bytes, checksum: 3a0a608b6767784bf6ceb1e5f2838483 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T15:58:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_macampos.pdf: 1163800 bytes, checksum: 3a0a608b6767784bf6ceb1e5f2838483 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T15:58:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_macampos.pdf: 1163800 bytes, checksum: 3a0a608b6767784bf6ceb1e5f2838483 (MD5) Previous issue date: 2010 / The goals of this dissertation are study of sodium hypochlorite and chlorhexidine as irrigants, through a literature review, evaluate and quantify, by means of bacterial culture, the antibacterial effect of biomechanical preparation and pulp-based hydroxide calcium with or without 1% chlorhexidine on bacteria in root canals of permanent teeth after necrotic injury, as well as verifying the presence of microorganisms Fusobacterium nucleatum and Black Pigmented Bacillus in these teeth. The sample consisted of 13 teeth, totaling 11 patients. Microbiological samples were taken after the coronal opening (A1), after root canal preparation (A2), followed by the use of intracanal dressing (A3) and 72 hours of the removal of the medication (A4). The samples were collected sequentially introducing three sterile absorbent paper cones inside the root canal for one minute. In A1, 100% of samples were positive, and the average colony forming units (CFU) of 7.7 x 104. In the second collection (A2), 5 / 13 samples were positive, with an average of 1.7 x 103 CFUs. After use of the medication (A3), 4 / 13 samples were positive, averaging 3.3 x 103 CFUs. A4, 6 / 13 samples were positive, with an average of 1 x 104 CFUs. Between A1 x A2, A3 and A1 x A1 x A4, we observed a reduction of CFUs was statistically significant (p <0.001). We were unable to observe a statistically significant difference (p> 0.05) among the other samples. We conclude that chemo-mechanical performs its antibacterial function by significantly reducing the number of micro-organisms from the main channel, but calcium hydroxide and its association with chlorhexidine 1% had no statistically significant difference, having an antibacterial effect limited not being able to prevent bacterial growth after its use as an intracanal medication. / Tem-se como objetivo desta dissertação estudar o hipoclorito de sódio e a clorexidina como soluções irrigadoras, através de uma revisão de literatura, e avaliar e quantificar, por meio de cultura bacteriana, o efeito antibacteriano do preparo biomecânico e de pasta à base de hidróxido de cálcio associada ou não a clorexidina 1 % sobre bactérias presentes em canais radiculares de dentes permanentes necrosados após trauma, bem como verificar a presença dos microorganismos Fusobacterium nucleatum e bacilo pigmentado negro (BPN) nestes dentes. A amostra consistiu de 13 dentes, totalizando 11 pacientes. As amostras microbiológicas foram coletadas após a abertura coronária (A1), depois do preparo biomecânico (A2), seguido da utilização do curativo de demora (A3) e 72h de procedida à remoção da medicação intracanal (A4). As amostras foram coletadas introduzindo-se sequencialmente três cones de papel absorvente estéril no interior do canal radicular por um minuto. Em A1, 100% das amostras foram positivas para presença de bactérias, sendo a média de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) de 7.7 x 104. Na segunda coleta (A2), apenas 5/13 amostras foram positivas, com média de UFCs de 1.7 x 103. Após o uso da medicação intracanal (A3), 4/13 amostras foram positivas, com média de 3.3 x 103 UFCs. Em A4, 6/13 amostras foram positivas, com média de 1 x 104 UFCs. Entre A1 x A2, A1 x A3 e A1 x A4, observou-se uma redução de UFCs estatisticamente significante (p<0.001). Não se pôde observar diferença estatisticamente significante (p>0.05) entre as demais amostras. Conclui-se que o preparo químico-mecânico desempenha sua função antibacteriana ao reduzir significativamente o número de micro-organismos do canal principal, porém o hidróxido de cálcio e sua associação com clorexidina 1% não tiveram diferença estatística significante, possuindo um efeito antibacteriano limitado, não sendo capazes de prevenir o crescimento de bactérias após seu uso como medicação intracanal.

TNF-Liganden liegen primär in membranständiger Form mit trimerer Struktur vor und die meisten von ihnen können sekundär durch Metalloproteasen in lösliche trimere Liganden prozessiert werden. Während membranständige Formen der TNF-Liganden ihre korrespondierenden Rezeptoren aktivieren können, sind die löslichen Varianten einzelner TNF-Liganden unterschiedlich aktiv beziehungsweise inaktiv an den korrespondierenden Rezeptoren, obwohl sie ebenfalls zur Bindung in der Lage sind. Dies konnte bereits in Studien für TNF und TRAIL gezeigt werden. Die Unterschiede zwischen löslichen Varianten und der membranständigen Form des Liganden betreffen sowohl die Rezeptorselektivität als auch den Aktivierungsgrad am Rezeptor bis hin zu völliger Inaktivität der löslichen Form. Unterschiede finden sich jedoch nicht nur hinsichtlich der Aktivität, sondern auch in der Interaktion des Liganden mit dem Rezeptor. Für die membranständige und die lösliche Form von FasL konnten Unterschiede in der Notwendigkeit intrazellulärer Signalmoleküle bei der Ausbildung Ligand-induzierter Rezeptorsignalcluster gezeigt werden. Für die lösliche und membranständige Form des CD40L werden eine unterschiedliche Rezeptorinternalisierung und eine unterschiedliche Rekrutierung von TRAF-Molekülen angenommen. Bisherige Arbeiten zur Untersuchung der Rezeptor-Ligand-Interaktion stützen sich meist auf lösliche Varianten von TNF-Liganden, die durch artifizielle Multimerisierung oder Antikörper-induzierte Quervernetzung sekundär aktiviert werden müssen. Um für die Untersuchung der Rezeptor-Ligand-Interaktion in Zukunft realitätsnähere Bedingungen zu schaffen, sollten im Rahmen dieser Arbeit multifunktionelle Fusionsproteine des membranständigen FasL und CD40L hergestellt und charakterisiert werden. Die Fusionsproteine wurden im Rahmen der Klonierung so konstruiert, dass von der aminoterminalen Seite beginnend eine GST-Domäne, ein Flag-Tag, ein YFP-Tag und abschließend die vollständige membranständige Form des Liganden (FasL oder CD40L) aneinander gefügt wurden. In FACS-Analysen konnte sowohl die Funktion des YFP-Tag als auch die korrekte Expression des Liganden an der Zelloberfläche durch spezifische Antikörperfärbung nachgewiesen werden. Die funktionelle Aktivität der Liganden wurde durch IL-8-Induktion gezeigt, die eine Aktivierung des NF&#61547;B-Signalweges durch die GST-Fusionsproteine des membranständigen FasL und des membranständigen CD40L beweist. Im Rahmen von Immunopräzipitationen wurde die Möglichkeit der Detektion der Fusionsproteine über ihr Flag-Tag getestet. Für das in GST-pull-down-Assays genauer untersuchte membranständige GST-Flag-YFP-CD40L-Fusionsprotein gelang eine Koimmunopräzipitation mit dem im Rezeptorkomplex gebundenen TRAF2. Für dieses in der Signaltransduktion des CD40 entscheidende Molekül konnte seine transiente Interaktion mit dem Rezeptorsignalkomplex sowie eine Veränderung in der Assoziation an den Rezeptor durch TNF-abhängige TRAF1-Induktion gezeigt werden. Im Zusammenhang der mit der Rezeptoraktivierung oftmals gleichgesetzten Bildung von Rezeptorsignalclustern durch den entsprechenden TNF-Liganden war die Beobachtung interessant, dass das Konstrukt GST-Flag-YFP-CD40L im Gegensatz zum analog konstruierten GST-Flag-YFP-FasL nicht in der Lage war, Signalcluster des korrespondierenden Rezeptors zu erzeugen, aber dennoch fähig war, eine Rezeptoraktivierung zu bewirken. Hinsichtlich der Untersuchung von Unterschieden in der Rezeptor-Ligand-Interaktion von löslichen und membranständigen Formen sind für FasL und CD40L noch viele Fragen offen, die beispielsweise auch die Stabilität von Rezeptorsignalclustern betreffen. Die in dieser Arbeit erzeugten und charakterisierten multifunktionellen Fusionsproteine sollten helfen, neue Erkenntnisse bezüglich der molekularen Grundlagen der Rezeptor-Ligand-Interaktion zu erzielen. / TNF ligands primary are membranous ligands with a trimeric structure and the most of them can be cleaved to soluble trimeric forms by metalloproteases secondarily. While membranous forms of TNF ligands can activate their corresponding receptors, soluble variants ot some TNF ligands are insufficient for full activity or totally inactive. Nevertheless these variants are able to bind the corresponding receptor properly. This already could be shown in experiments with TNF and TRAIL. The differences between soluble variants and the membranous form of TNF ligands concern their receptor selectivity as well as their degree of activity at the receptor. There also are differences regarding the interaction itself between ligand and receptor. Comparing the membranous and the soluble form of Fas ligand there could be shown differences in terms of dependency for intracellular signaling moleculs regarding the formation of ligand induced clustering of the receptor. The soluble and the membranous form of CD40 ligand are supposed to have differences in receptor internalization and recruting of TRAF molecules. Previous research concentrating on receptor ligand interactions often is based on soluble variants of TNF ligands that have to be activated by artificial multimerization or antibody dependent aggregation. To provide more realistic conditions for the analysis of receptor ligand interactions, multifunctional fusionproteins of the membranous Fas ligand and the membranous CD40 ligand should be developed and characterized in this dissertation. Starting from the N-terminal end the fusionproteins contain a GST-domain, a Flag-tag, a YFP-tag and the complete membranous form of the ligand. In FACS analysis the activity of the YFP-tag as well as the correct expression of the ligand on the cell membrane could be demonstrated by specific antibody staining. The functional activity of the ligand itself has been shown by IL-8-induction, that proves the sucessful activation of the NF&#61547;B signaling pathway by GST-fusionproteins of the membranous Fas ligand and the membranous CD40 ligand. In the context of immunoprecipitations the possibility of detection of the fusionproteins by Flag-tag has been tested. Concerning the GST-pull-down-assays of the fusionprotein GST-Flag-YFP-CD40L a coimmunoprecipitation with the intracellular adaptor protein TRAF2 could be shown. A transient interaction of TRAF2 with the receptor signaling complex as well as a change of its association with the receptor by TNF-induced TRAF1 upregulation also could be demonstrated. In context with the formation of high molecular receptor clusters that are often equated with receptor activation the observation was interesting that GST-Flag-YFP-CD40L in contrast to the analogous constructed GST-Flag-YFP-FasL could not induce signalling cluster of the corresponding receptor, but still was able to induce receptor activation. Regarding the analysis of differences in receptor ligand interaction between soluble and membranous forms of Fas ligand and CD40 ligand there are still many questions that have to be answered, e.g. in terms of stability of induced receptor clustering. The multifunctional fusionproteins provided by this dissertation shall contribute to gain new findings in respect of molecular fundamentals of the receptor ligand interaction.