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Estudo de metabolismo da Saccharomyces cerevisiae para produção de glutationa utilizando melaço de beterraba / Study of Saccharomyces cerevisiae metabolism grown to produce glutathione using beet molasses

Paixão, Julliana Nazareth Vieira da 27 August 2018 (has links)
Submitted by Onia Arantes Albuquerque (onia.ufg@gmail.com) on 2018-10-05T12:19:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Julliana Nazareth Vieira da Paixão - 2018.pdf: 2604867 bytes, checksum: 481898097e5087fcd08aed45af874a4c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-10-05T14:14:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Julliana Nazareth Vieira da Paixão - 2018.pdf: 2604867 bytes, checksum: 481898097e5087fcd08aed45af874a4c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-05T14:14:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Julliana Nazareth Vieira da Paixão - 2018.pdf: 2604867 bytes, checksum: 481898097e5087fcd08aed45af874a4c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-08-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Glutathione is classified as a linear, water-soluble tripeptide, consisting of glutamic acid, L-cysteine and glycine being obtained through the synthesis of consecutive enzymatic reactions, which has innumerable intracellular metabolic functions, its main function is to avoid the cellular oxidation. Recent studies, indicate that GSH’s (glutathione) function disorder, is involved by the etiology of some diseases such as: liver cirrhosis, pulmonary, gastrointestinal, inflammation in the pancreas, diabetes, neurodegenerative diseases, among others. In addition, GSH stands out in the environmental area as an important biological parameter, had been being one of the most important indicators of oxidative stress. Considering these factors, the aim of the present research is to evaluate the glutathione production by Saccharomyces cerevisiae using agroindustry’s residues. Supplying better conditions to determinate glutathione production. By means of a CCD (Central composite design) 22 with four central points and four-star points, begetting twelve experiments, the fermentation tests were carried out. In the twelve batch experiments, the concentration of sucrose present in beet molasses (61 – 139 g. L- 1) and ammonium sulfate (NH4)2SO4 (1 – 12 g. L- 1) had been varied as a source of nitrogen. In order to settled the cellular concentration, sucrose, ethanol, glycerol, acetic acid (g. L-1) and glutathione (g. L- 1), aliquots of each experiment were withdrawn every 12 hours until the end of the fermentation process with 48 hours, carried out the proper of analyzed each metabolites. From the results obtained, a mathematical model had been established, in which, was predicted the behavior of cell growth and the fermentation products yield, with reference the relation by the best conditions for the glutathione formation presented. In addition, the qPCR(Real-time Polymerase Chain Reaction) technique was applied, to evaluate the efficiency of GSH1 and GSH2 genes. The best result had been observed with 24 hours of fermentation 7,61 g.L-1of glutathione formation which, in the experimental concentration condition of 61 g. L-1 of sucrose present in molasses and 6.5 g.L-1 of ammonium sulfate. / A glutationa é um tripeptídeo linear, hidrossolúvel, formado por ácido glutâmico, L-cisteína e glicina sendo obtido através da síntese de consecutivas reações enzimáticas. Possui inúmeras funções metabólicas intracelulares, tendo como principal função evitar a oxidação celular. Estudos recentes indicam que o transtorno da função GSH (glutationa) está comprometido na etiologia de algumas doenças, tais como, cirrose hepática, pulmonares, gastrintestinais, inflamações no pâncreas, diabetes, doenças neurodegenerativas, entre outras. Além disso, a GSH destaca-se na área ambiental como um importante parâmetro biológico, sendo um dos mais importantes indicadores do estresse oxidativo. Tendo em vista estes fatores, o objetivo do presente trabalho é realizar a avaliação da produção de glutationa por Saccharomyces cerevisiae utilizando resíduo agroindustrial. Para melhor determinação da condição de produção de glutationa. Através de um DCCR (Delineamento Composto Central Rotacional) 22 com pontos axiais e quatro pontos centrais, totalizando doze experimentos, foram realizados ensaios fermentativos. Nos doze experimentos realizados em batelada, variaram-se a concentração de sacarose presente no melaço de beterraba (61 – 139 g.L-1) e do sulfato de amônio (NH4)2SO4 (1 – 12 g.L-1) como fonte de nitrogênio. Para a determinação da concentração celular, sacarose, etanol, glicerol, ácido acético (g.L-1) e glutationa (g.L-1) alíquotas de cada experimento foram retirados a cada 12 horas até o fim do processo fermentativo com 48 horas, com o intuito de realizar as devidas análises dos metabólitos. A partir dos resultados gerados, um modelo matemático foi estabelecido, no qual prediz o comportamento do crescimento celular e da formação de produto desta fermentação em relação às melhores condições apresentadas para formação de glutationa. Ademais, foi utilizada a técnica de qPCR (Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real) para avaliar a eficiência dos genes GSH1 e GSH2. O melhor resultado foi obtido em 24 horas de fermentação foi a formação de 7,61g.L-1 de glutationa na condição experimental de concentração de 61 g. L-1 de sacarose presente no melaço e 6,5g.L-1 de sulfato de amônio.
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Estimativa da vida útil de hambúrguer de Carpa capim por meio de análise de sobrevivência, cut-off point e espectroscopia de infravermelho próximo / Shelf life estimation of grass carp hamburger through survival analysis, cut-off point and near-infrared spectroscopy

Marques, Caroline 07 December 2016 (has links)
CAPES; CNPq / O consumo de pescado no Brasil está abaixo da média mundial e isso se deve a fatores econômicos, culturais e também à baixa disponibilidade desse alimento. Para estimular o consumo, devido ao alto valor nutricional desse tipo de carne, uma das estratégias é transformar o pescado em um produto prático, como o hambúrguer. Entretanto, em decorrência do pH próximo a neutralidade e da alta atividade de água, o pescado e seus derivados possuem uma vida útil limitada, dependendo das condições de armazenamento. Um dos parâmetros mais questionáveis da estabilidade desse produto é a oxidação lipídica, reação que ocorre até mesmo em baixas temperaturas. Sabe-se que a qualidade sensorial de um produto é fundamental para o consumidor na hora da compra e do consumo. Uma vez que o acompanhamento sensorial da vida útil leva tempo e considerável investimento, a Espectroscopia de Infravermelho Próximo (NIR) entra como técnica instrumental rápida, não destrutiva e recente, para o mesmo fim, a qual consegue analisar vários parâmetros da amostra ao mesmo tempo. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi estimar a vida útil de hambúrgueres de Carpa capim por meio de análise de sobrevivência e cut-off point, além da utilização do NIR para construção de modelos de predição de vida útil pelo método dos mínimos quadrados parciais (PLS).O hambúrguer foi elaborado com filés de Carpa capim moídos e lavados (lavagem básica), embalados a vácuo e armazenados sob refrigeração durante 30 dias. Uma equipe sensorial foi selecionada e treinada para avaliar o ranço nas amostras de hambúrguer por meio de análise discriminativa triangular, análise estatística de variância (ANOVA), gráfico de valor F e box plots. A avaliação físico-química da matéria-prima mostrou adequação com a legislação vigente para frescor (pH e bases voláteis totais N-BVT); apresentou baixo teor de lipídios e alto conteúdo proteico. A caracterização do produto verificou que o hambúrguer de Carpa capim está de acordo com a legislação quanto ao teor de lipídios e proteína, com valor semelhante ao dos filés para o valor calórico. As análises de referência para o NIR apontaram que o Índice de iodo e a atividade de água (Aw) não foram capazes de diferenciar os hambúrgueres durante o armazenamento; já as Substâncias Reativas do Ácido Tiobarbitúrico (TBARS) e o pH apresentaram resultados que corroboram as mudanças ocorridas na matriz hambúrguer. A rancidez foi observada pela equipe sensorial treinada e também verificada pela análise de TBARS, as quais tiveram crescimento exponencial, com coeficientes de correlação superiores a 0,95. Modelos robustos por meio do PLS foram obtidos com o NIR para os parâmetros ranço, TBARS e pH, resultado que não se repetiu para o Índice de iodo, Aw e cor. A análise de sobrevivência determinou o final da vida útil do hambúrguer de Carpa Capim em 17 dias, já para o cut-off point apontou 15 dias. Ambas as metodologias mostraram-se eficientes para estimativa da vida útil do produto analisado, ao contrário do NIR que subestimou a data da vida útil, gerando diferenças de 56 a 76% e não se mostrou eficiente para a estimativa considerando os valores preditos pelo modelo gerado para o defeito ranço. / The fish consumption in Brazil is below the world average and this is due to economic, cultural factors and also to the low availability of this food. To stimulate consumption, due to the high nutritional value of this type of meat, one of the strategies is to turn the fish into a convenient product, such as hamburger. However, due to the pH close to neutrality and the high water activity, fish and fish products have a limited shelf life, depending on storage conditions. One of the questionable parameters about the stability of this product is the lipid oxidation reaction, which occurs even at low temperatures. It is known that the sensory quality of a product is critical to the consumer at the moment of acquisition and consumption. Once the sensory monitoring of the shelf life takes time and considerable investment, the Near Infrared spectroscopy (NIR) comes as a fast instrumental technique, nondestructive and recent, with the same purpose, which can access multiple parameters from the sample at the same time. Thus, the objective of this study was to estimate the shelf life of grass carp burgers through survival analysis and cut-off point, in addition to the use of NIR to build shelf life prediction models by the Partial Least Squares (PLS) method. The burger was made with grass carp fillets ground and washed (basic washing), vacuum packed and stored under refrigeration for 30 days. A sensory panel was selected and trained to evaluate rancidity in hamburger samples by means of triangular discriminative analysis, variance statistical analysis (ANOVA), F value chart and box plots. The physical-chemical evaluation of raw materials showed adequacy with current legislation for freshness (pH and total volatile bases TVB-N); presented low lipid content and high protein content. The characterization of the product verified that the burger complies with the legislation on the lipid and protein content, with a caloric value similar to the fillets. The reference analyzes for NIR pointed out that the iodine index and water activity (Aw) were not able to differentiate the burgers during storage; the Thiobarbituric Acid Reactive Substances (TBARS) and the pH presented results corroborating the changes in the burger matrix. The rancidity was observed by the trained sensory panel and also verified by TBARS analysis, where both had exponential growth, with correlation coefficients greater than 0.95. Robust models were obtained through PLS using the NIR to rancidity, TBARS and pH parameters, a result not repeated for iodine index, Aw and color. Survival analysis determined the end of shelf life of grass carp grass burger in 17 days and the cut-off point in 15 days. Both methods were effective to estimate the shelf life of the product, unlike the NIR that underestimated the end date, generating differences ranging from 56 to 76%, not efficient for this estimative, considering the values predicted by the model generated for the defect rancidity.

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