Visceral leishmaniasis or kala-azar is a zoonotic disease of domestic and wild canids, caused by the protozoan Leishmania chagasi and transmitted between dogs and man by the vector Lutzomyia longipalpis. The purpose of this research was to analize the spatial distribution of human and canine cases of visceral leishmaniasis in Aracaju, Sergipe from 2005 to 2012; characterize a nitric oxide resistant and susceptible isolates of L. chagasi from dogs in Aracaju, performing proteomic analysis of it by bidimensional electrophoresis and checking their interaction between dog and fox macrophages. In the analysis of the spatial distribution of the disease during the study period, there were 2060 canine and 110 human cases. It was found that the neighborhoods, Zona de Expansão and Mosqueiro, peripheral areas with lower population densities, recent occupation, poor urban infrastructure, had a number of significant human and canine cases. In Dezoito do Forte, Santos Dumont and America neighborhoods, were isolated nitric oxide resistant Leishmania in dogs and in humans, which could confirm the dog as a source of infection for humans and maybe could confirmation that disease in dogs precedes the occurrence of the disease in humans. Infection of fox macrophages by strains of L. chagasi, revealed that the macrophages control the infection rapidly regardless of whether the strain is resistant or not to nitric oxide. This result corroborates the fact that wild canids such as foxes, have an important role in the sylvatic cycle of visceral leishmaniasis, serving as a reservoir for the disease and rarely displaying clinical forms of the disease, unlike the domestic dog. Proteomic analysis was performed in promastigotes in logarithmic and stationary phase showing a difference in the expression of many proteins in both the promastigote growth phases. As an interesting fact we observed an over-expression of a cytosolic malate dehydrogenase and that it may probably be related to an intrinsic resistance of this isolate to nitric oxide. Related to resistance to nitric oxide, overexpression of trypanothione peroxidase was constant at all stages of the growth curve. Also observed was the overexpression of a calpain that may be responsible for inducing greater susceptibility to antimonials and lower susceptibility to miltefosine. / A leishmaniose visceral (LV) ou calazar é uma zoonose de canídeos silvestres e domésticos, causada pelo protozoário Leishmania chagasi e transmitida entre os canídeos e destes ao homem pelo vetor Lutzomyia longipalpis. Os objetivos deste estudo são analisar a distribuição temporo-espacial de casos de leishmaniose visceral canina e humana em Aracaju, Sergipe de 2005 a 2012; avaliar e comparar a regulação de macrófagos de cão e de raposas na infecção por isolados de L. chagasi através do índice de infecção de macrófagos, e realizar análise proteômica das fases de crescimento logarítmica e estacionária de promastigotas de isolados de L. chagasi resistentes e susceptíveis ao óxido nítrico, através da técnica de eletroforese bidimensional. Na análise da distribuição espacial da doença aconteceram 2060 casos caninos e 110 casos humanos. Foi verificado que os bairros da Zona de Expansão e Mosqueiro, áreas periféricas, com mais baixas densidades populacionais, ocupação recente, baixa renda e infraestrutura urbana pouco presente, tiveram um número de casos caninos e humanos expressivos. Nos bairros Dezoito do Forte, Santos Dumont e América, foram isoladas Leishmania resistentes ao óxido nítrico de cães e humanos, o que poderia confirmar o cão como fonte de infecção para o homem e, talvez, uma confirmação que a doença em cães pode preceder a ocorrência da doença em humanos. A infecção de macrófagos de raposa por cepas de L. chagasi resistentes e susceptíveis ao óxido nítrico, revelou que esses controlam rapidamente a infecção independentemente se a cepa é resistente ou não ao óxido nítrico. Este resultado corrobora o fato de que os canídeos silvestres, como as raposas, têm um papel importante no ciclo silvestre da leishmaniose visceral, servindo de reservatório para a doença e raramente apresentando a forma clínica da doença, diferente do cão doméstico. Foi realizada a análise proteômica de promastigotas em fase logarítmica e em fase estacionária revelando uma diferença na expressão de várias proteínas em ambas as fases de crescimento do promastigota. Como fato mais interessante observou-se um aumento acentuado na expressão de uma malato desidrogenase citosólica e que provavelmente apresenta relação com a resistência intrínseca deste isolado ao óxido nítrico. Relacionada com a resistência ao óxido nítrico, um aumento na expressão da tripanotiona peroxidase foi constante em todas as fases de curva de crescimento. Também foi observado um aumenta na expressão de uma calpaína que poderia ser responsável por induzir susceptibilidade maior aos antimoniais e menor susceptibilidade à miltefosina.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmaniasis is a complex of parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and transmitted to humans and other vertebrate hosts through the bite of an infected phlebotomine insect. Currently, all drugs used in the treatment of this disease have low efficacy, high toxicity and are associated with parasitic resistance. In this sense, scientific research that indicates a new compounds with leishmanicidal activity are quite promising. The objective of this study was to evaluate in vitro the leishmanicidal activity of the crude ethanol extract of C. blanchetianus on L. amazonensis and L. infantum as well as their toxic and immunomodulator effect on murine macrophages. Promastigotes in the logarithmic growth phase were subjected to treatment with different concentrations of the extract for 24 and 72 hours at 26ºC, and the viability was measured by the method of Alamar Blue . A greater inhibition was observed in L. amazonensis with an IC50 of 73.6 μg/ml in 24 hours of incubation and 42.6 μg/ml at 72 hours. In L. infantum extract showed an IC50 of 208.7 μg/ml in 24 hours and 108.9 μg/ml at 72 hours. Regarding the reduction of viability, L. amazonensis showed a death percentage of 68.8% with 100 μg/ml of the extract after 24 hours of treatment and approximately 100% after 72 hours, whereas for L. infantum this level of inhibition was not seen with 250 μg/ml of the extract. For the analysis of antiamastigota activity, infected macrophages were treated with different concentrations of the extract and incubated for 72h at 37° C, and the rate of infection was determined by staining method with hematologic pigment and counts in optical microscopy. It was found a higher dose-dependent inhibition in L. amazonensis with an IC50 of 3.10 μg/ml. In L. infantum there was a lower activity of the extract which present an IC50 of 8.83 μg/ml. At lower concentration tested (3 μg/ml) there was a reduction in the viability of L. amazonensis around 44%, while in L. infantum, this level of inhibition was only observed with 7 μg/ml of extract. The cytotoxicity was performed on murine macrophages incubated with different concentrations of the extract for 72 hours at 37°C and the viability was measured by Alamar Blue method. The LD50 observed was 83.79 μg/ml and the selectivity index calculated was 27 to L. amazonensis and 9.5 for L. Infantum, revealing a higher toxicity of the extract in the parasites than in macrophages.Treatment with the extract not modulated the macrophage for nitric oxide synthesis, as verified by Griess reaction. However, interfered in the morphology of promastigote forms, being observed parasites with a rounded body and/or double scourge. Therefore, the data presented in this study indicate that the ethanol extract of C. blanchetianus presents leishmanicidal activity on promastigote and amastigote forms of L. amazonensis and L. infantum, being more effective against the species L. amazonensis, especially on the amastigote form, without causing, however, toxicity to the host cell. / A leishmaniose é um complexo de doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania e transmitidas ao ser humano e outros hospedeiros vertebrados por meio da picada de um inseto flebotomíneo infectado. Atualmente, todos os medicamentos utilizados no tratamento dessa doença apresentam baixa eficácia, alta toxicidade e estão associados à resistência parasitária. Nesse sentido, pesquisas científicas que indiquem novos compostos com atividade leishmanicida são bastante promissoras. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro a atividade leishmanicida do extrato etanólico bruto de C. blanchetianus sobre L. amazonensis e L. infantum, bem como o seu efeito tóxico e imunomodulador sobre macrófagos murinos. Promastigotas na fase logarítmica de crescimento foram submetidos ao tratamento com diferentes concentrações do extrato por 24 e 72 horas a 26ºC, e a viabilidade foi mensurada por meio do método de Alamar Blue . Uma maior inibição foi vista em L. amazonensis com um IC50 de 73,6 μg/ml em 24 horas de incubação e de 42,6 μg/ml em 72 horas. Em L. infantum o extrato apresentou um IC50 de 208,7 μg/ml em 24 horas e de 108,9 μg/ml em 72 horas. Em relação à redução da viabilidade, L. amazonensis apresentou um percentual de morte de 68,8%, com 100 μg/ml do extrato, em 24 horas de tratamento e aproximadamente 100% em 72 horas, enquanto que em L. infantum este nível de inibição só foi visto com 250 μg/ml do extrato. Para a análise da atividade antiamastigota, macrófagos infectados foram tratados com diferentes concentrações do extrato e incubados por 72h a 37ºC, e o índice de infecção foi determinado por coloração com corante hematológico e contagem em microscopia óptica. Verificou-se uma inibição dose-dependente maior em L. amazonensis com um IC50 de 3,10 μg/ml. Em L. infantum houve uma menor atividade do extrato que apresentou um IC50 de 8,83 μg/ml. Na menor concentração testada (3 μg/ml) houve uma redução na viabilidade de L. amazonensis por volta de 44%, enquanto que em L. infantum, este nível de inibição só foi observado com 7 μg/ml do extrato. A avaliação da citotoxicidade foi realizada em macrófagos murinos, incubados com diferentes concentrações do extrato por 72h a 37ºC e a viabilidade foi mensurada pelo método de Alamar Blue . O LD50 observado foi de 83,79 μg/ml e o Índice de Seletividade calculado foi de 27 para L. amazonensis e 9,5 para L. Infantum, revelando uma maior toxicidade do extrato nos parasitos do que nos macrófagos. O tratamento com o extrato não modulou o macrófago para a síntese de óxido nítrico, como verificado pela Reação de Griess. Contudo, interferiu na morfologia das formas promastigotas, sendo observados parasitos com corpo arredondado e/ou flagelo duplo. Portanto, os dados apresentados nesse estudo indicam que o extrato etanólico de C. blanchetianus apresenta atividade leishmanicida sobre as formas promastigota e amastigota de L. amazonensis e L. infantum, sendo mais efetivo frente à espécie L. amazonensis, principalmente sobre a forma amastigota, sem causar, no entanto, toxicidade à célula hospedeira.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_sabrina_pires_capa.pdf: 403567 bytes, checksum: 5752dd89517a54f40cd0632e1db1c1c6 (MD5) Previous issue date: 2007-03-30 / The blowflies are the first insects to compose the faunistic succession of human cadavers, thus helping to determine the postmortem interval (PMI). However, failing to consider larval post-feeding dispersal can compromise medical-criminal inquiries. In order to investigate the relationship between post- feeding Lucilia sericata larvae and their weight, radial dispersion and depth, an artificial arena was built simulating the natural environment. We observed a difference in mean pupal weight between males (30.28mg) and females (32.35mg). We also observed that the majority of pupae were recovered a distance of 33 to 45cm from the center of the arena, and at a depth of 6 to 8cm from the surface. However, we observed no differences in radial dispersion and depth of pupation between males, females or unviable individuals. Correlation analysis between weight and distance (r = 0.246) and between weight and depth (r = 0.321) was directly proportional, suggesting that heavier pupae dispersed farther and deeper than lighter pupae. The experiment also allowed us to conclude that a circular arena permitted larval dispersion all directions. / Os dípteros califorídeos são os primeiros indivíduos a compor a sucessão faunística dos cadáveres humanos auxiliando assim na estimativa do intervalo pós- morte. Porém, a não consideração da dispersão pós-alimentar de larvas pode comprometer as investigações médico-criminais. Diante disto uma arena circular, simulando o ambiente natural, foi montada em laboratório a fim de verificar-se a dispersão larval radial pós-alimentar de Lucilia sericata, tentando assim estabelecer relações entre as variáveis peso, distância e profundidade de enterramento na arena. Os resultados demonstraram que a maioria das pupas foram recuperadas a uma profundidade compreendida entre 6cm e 8cm e a uma distância entre 33cm e 45cm do centro da arena. Não houve diferenças significativas quanto a propagação e profundidade de enterramento de machos, fêmeas e indivíduos inviáveis. Com relação ao peso, verificou-se que a média das fêmeas (x = 32,35mg) foi superior a dos machos (x = 30,28mg). A análise de correlação entre peso e distância percorrida (r = 0,246) e entre peso e profundidade (r = 0,321) foi diretamente proporcional, ou seja pupas mais pesadas propagaram e se aprofundaram mais. O experimento permitiu ainda concluir que uma arena circular possibilita o deslocamento das larvas em todas as direções.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_ana_lucia_recuero.pdf: 1024878 bytes, checksum: c121b797ab6a81b00fcaa6a96bab6b13 (MD5) Previous issue date: 2007-06-29 / The objectives of this study were to describe the prevalence and risk factors for G. lamblia infection in calves up to 12 months of age and children up to 12 years old in 30 dairy farms of Municipality from Capão do Leão,RS,as well as to compare analytically three diagnostic methods.Fresh fecal samples were randomly collected from 148 calves and 22 children.Feces were examined for the presence of G.lamblia by using two conventional tests of microscopic examination as Faust and Ritchie and a commercially available immunoenzymatic assay (RIDASCREEN ® Giárdia,R- Biopharm AG)to detect G.lamblia specific coproantigen.Data describing herd management practices,age,gender,breed and fecal consistency were gathered to assess potential risk factors associated with shedding.The overall prevalence for G. lamblia was 70.0%to the farms;23.6%to the calves and 13.6%to the children. Calves that were 1 4 months of age were 13.87 (95%CI,2.48 296.38;=0.001) times more likely to be shedding G.lamblia than calves with more than 4 months of age.Farms that were the waste water to less than 40 m to the well,were 3.38 (95% CI,1.15 9.86;P =0.01)times more likely to be calves with G.lamblia than farms that were the waste water to more than 40 m to the well.Farms that were the waste water in a more elevated plane that the well,were 2.35 (95%CI;1.08 5.24;=0.02) times more likely to be calves with G.lamblia than farms with waste water in a inferior plane to the well.The others parasites found in calves were Eimeria 83.1%;Strongylus 64.9%;Moniezia 10,8%,Toxocara 4.7%and Trichuris 2.0%.In children,only Entamoeba coli 18.2%and Endolimax nana 4.5%.Based on the results of these three tests,using ELISA as gold standard,analysis indicated that in calves,Faust Sensitivity (Se) 65.5%,Specifcity (Sp)95,0%;Predictive positive value (Ppv)76.0%;Predictive negative value (Pnv)91.9%;Accuracy (A)89.2%and a substantial Kappa (K) coefficient of correlation of 0.638.The Ritchie s technique was:(Se=48.3%, Sp=100,0%;Ppv=100.0%;Pnv=88.8%;A=89.9%)and a moderated K coefficient of correlation of 0.60.If accepted the positives results to Faust and/or Ritchie: (Se=72.4%;Sp=95.0%;Ppv=77.8%;Pnv=93.4%;A=90.5%)and a substantial K coefficient of correlation of 0.691.It was conclude in this study that the use of in parallel tests,increased the sensibility in detection of G.lamblia and If consideration is to be given to reducing the risk of infection with this parasite,management must be a top priority,especially in water quality,waste water careful with appropriated localization and health practices with younger animals and children / Os objetivos deste trabalho foram descrever a prevalência e fatores de risco para a infecção por Giardia lamblia em terneiros até 12 meses de idade e em crianças até 12 anos em 30 propriedades leiteiras do Município do Capão do Leão,RS,bem como comparar analiticamente três métodos de diagnóstico.Amostras de fezes recentes foram aleatoriamente coletadas de 148 terneiros e 22 crianças.As fezes foram examinadas para a presença de G.lamblia usando dois testes convencionais de exame microscópico como Faust e Ritchie e um ensaio imunoenzimático comercial (RIDASCREEN ® Giardia ,R-Biopharm AG)para detectar coproantígeno específico de G.lamblia .Foram recuperados dados descritivos de práticas de manejo,idade, gênero,raça e consistência fecal para identificar os principais fatores de risco associados com a disseminação.A prevalência geral para G.lamblia foi de 70,0% para as propriedades,23,6%para os terneiros e 13,6%para as crianças.Os terneiros que se encontravam na faixa etária de 1 a 4 meses foram 13,87 (95%CI, 2,48 296.38;=0.001)vezes mais prováveis de disseminarem G.lamblia do que terneiros com mais de 4 meses.Propriedades onde a fossa se localizava a menos de 40 m do poço tiveram 3,38 (95%CI,1.15 9.86;P=0.01)vezes mais probabilidade de possuírem terneiros com G.lamblia do que propriedades onde a fossa se localizava a mais de 40 m do poço.Propriedades onde a fossa se localizava em um plano mais elevado do que o poço apresentaram 2,35 (95%CI;1.08 5,24;P=0.02) vezes mais chances de contarem com terneiros disseminadores de G.lamblia do que propriedades onde a fossa se localizava em um plano inferior ao poço.Outros parasitos encontrados em terneiros foram Eimeria 83.1%;Strongyloidea 64.9%;Moniezia 10,8%,Toxocara 4.7%e Trichuris 2.0%.Em crianças,somente Entamoeba coli 18.2%e Endolimax nana 4.5%.Baseados nos resultados dos três testes,usando o ELISA como padrão ouro,as análises indicaram para terneiros que os parâmetros do método de Faust foram de 65,5%de Sensibilidade (S);95,0%de Especificidade (E);76.0%de Valor Preditivo ositivo (Vpp);91.9%de Valor Preditivo negativo (Vpn);89.2%de Acurácia (A)e um substancial coeficiente de correlação K de 0.638.O método de Ritchie apresentou:(S=48,3%,E=100,0%;Vpp=100.0%;Vpn=88.8%;A=89.9%)e um moderado coeficiente de correlação K de 0.60.Considerando os resultados positivos para Faust e/ou Ritchie,encontrou-se:(S=72.4%;E=95,0%;Vpp=77.8%; Vpn=93.4%;A=90.5%)e um substancial k de 0,691.Concluiu-se com este estudo que a utilização de testes em paralelo aumentou a sensibilidade na detecção de G lamblia e que na busca de considerações para reduzir os fatores de risco para a infecção deste parasito,as maiores prioridades são qualidade da água,localização apropriada da fossa e práticas de saúde para as crianças e animais jovens.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_sabrina_freitas.pdf: 1992341 bytes, checksum: e2903ed40e8e2476de47f5ebd7b9fc26 (MD5) Previous issue date: 2008-04-23 / The extracts of vegetal origin have been largely studied with the aim of obtaining an efficient and ecologically viable alternative to the control of plagues.The study of substances with selective deterrent bioactivity that affects insect s behavior, development and reproductive output is extremely important to avoid the problems caused by non selective chemical insecticides.Based in the importance of Musca domestica L.(Diptera,Muscidae)due to its high potential of carrying pathogens,its occurrence in high populations and in the lack of studies about the effects of vegetal extracts over insects,the present study was carried out with the objective of evaluating the deterrent bioactivity of aqueous extracts of Eucalyptus sp. L'Hér. (Myrtaceae)and Melia azedarach L.(Meliaceae)over larvae of M. domestica and the influence of the aqueous extract of M. azedarach on the oviposition behavior of this insect.To evaluate the influence of the aqueous extracts of Eucalyptus sp.and M. azedarach on larvae of M. domestica... / Os extratos de origem vegetal têm sido amplamente estudados visando se obter uma alternativa eficaz e ecologicamente viável para o controle de pragas.O estudo de substâncias com bioatividade deterrente seletiva,que atuem sobre o comportamento,desenvolvimento e performance reprodutiva dos insetos,é de extrema importância,a fim de se evitar os problemas causados pelo uso de inseticidas químicos não seletivos.Baseado na importância de Musca domestica L. (Diptera,Muscidae)devido ao alto potencial de veiculação de patógenos e ocorrência em altas populações,e na carência de estudos sobre os efeitos de extratos vegetais sobre os insetos,realizou se o presente estudo,com o objetivo de avaliar a bioatividade deterrente de extratos aquosos de Eucalyptus sp. L'Hér. (Myrtaceae)e Melia azedarach L.(Meliaceae)sobre larvas de M. domestica e a influência do extrato aquoso de M. azedarach sobre o comportamento de oviposição desse inseto.ara avaliar a influência dos extratos aquosos de Eucalyptus sp.e M. azedarach sobre larvas de M. domestica foram utilizadas as concentrações de 5 e 10%,sendo estabelecidas três réplicas para cada tratamento,além do grupo controle.Foram utilizadas 50 larvas de primeiro estádio de M. domestica para cada réplica,sendo os extratos aquosos oferecidos junto ao substrato de alimentação das larvas,utilizando se água para o grupo controle.As larvas foram acompanhadas até atingirem o estágio de pupa e emergência dos adultos,sendo estimado o período larval;mortalidade larval;período pupal;peso das pupas;mortalidade pupal;razão sexual;peso das fêmeas;número de ovos;investimento reprodutivo;morfometria da asa e tamanho da tíbia e mortalidade total.Com exceção das variáveis,período larval e pupal,que tiveram uma redução significativa no tratamento com extrato aquoso a 10%,o fitoextrato de Eucalyptus sp.não influenciou significativamente nas variáveis analisadas,não interferindo no desenvolvimento de M. domestica or outro lado,o extrato aquoso de M. azedarach em ambas as concentrações, provocou aumento do período larval,redução de peso das pupas e das fêmeas, redução de tamanho das fêmeas,diminuição do número de ovos e investimento reprodutivo,maior mortalidade,além de redução do período pupal na concentração de 5%,exercendo bioatividade negativa sobre características biométricas e morfométricas,promovendo a redução da performance reprodutiva.A influência do extrato aquoso de M. azedarach a 10%no comportamento de oviposição de M. domestica foi estimada através da oferta simultânea e independente do fitoextrato em sítios de oviposição,sendo estabelecidas três réplicas para cada tratamento.Os resultados revelaram que tanto na oferta isolada como na oferta simultânea,houve redução significativa do número de ovos,aumento do período de pré oviposição,do tempo letal médio e da longevidade das fêmeas,na tentativa de cumprir a performance reprodutiva,demonstrando a bioatividade deterrente dessa planta.

Nós isolamos e seqüenciamos genes que codificam Catepsina L-like em diversos isolados de T.rangeli de humano, mamíferos silvestres e Rhodnius spp., do centro e sul da América. Análises filogenéticas de seqüências que codificam a proteína madura de T. rangeli, outras espécies de Trypanosoma e Leishmania e duas espécies de bodonídeos, posicionaram T.rangeli próximo a T.cruzi de acordo com a ordem de divergência determinada em filogenias baseadas em SSUrDNA. Uma análise de 17 seqüências do domínio catalítico de CatL-like de isolados representativos da diversidade filogenética e distribuição geográfica de T. rangeli, apoiaram as mesmas linhagens filogenéticas previamente definidas. Seqüências do gene CatL-like também foram usados para padronizar ensaios de PCR para diagnóstico de T. cruzi e T. rangeli. Além disso, um método de genotipagem por PCR multiplex segregou os isolados de T. rangeli nas principais linhagens previamente estabelecidas. Este é o primeiro estudo usando um gene codificador de proteína para comparar isolados de T. rangeli de linhagens distintas. / We have isolated and sequenced genes encoding cathepsin L-like (CatL-like) cysteine proteases from isolates of T. rangeli from human, wild mammals and Rhodnius spp., from Central and South America. Phylogenetic analysis of sequences encoding the mature CatL-like enzymes from T. rangeli (Rangelipain), other Trypanosoma and Leishmania species, and two species of bodonids, positioned T. rangeli closest to T. cruzi corroborating the same order of divergence showed in phylogenies based on SSU rDNA. Analysis of 17 sequences of the catalytic domains of CatL-like genes isolates representative of the phylogenetic diversity and geographical range of T.rangeli supported previously defined phylogenetic lineages. Sequences of CatL-like genes were used to standardize PCR assays for the diagnosis of T. rangeli and T. cruzi, and a genotyping method of multiplex-PCR distributed of isolates of T. rangeli in the major phylogenetic lineages previously established. This is the first study using protein-encoding genes to compare isolates from T. rangeli of distinct lineages.

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer / Coorientador: Karina dos Santos Paduan / Banca: Reinaldo José da Silva / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Rui Seabra Ferreira Junior / Banca: Lúcio André Viana Dias / Resumo: Hepatozoon spp. são os protozoários intracelulares mais frequentemente encontrados em serpentes. Tendo em vista a variedade de formas parasitando tais animais e as divergências dos dados encontrados em literatura, o objetivo deste estudo foi tentar separar espécies de Hepatozoon de serpentes, testando oligonucleotídeos que amplifiquem regiões genômicas menos conservadas, detectando diferenças entre as espécies, bem como realizar as caracterizações morfológicas, morfométricas e moleculares de Hepatozoon spp. de serpentes naturalmente infectadas. Para tal, foram utilizadas serpentes doadas ao Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP) da Universidade Estadual Paulista de Botucatu que, em exames de rotina, mostraram-se positivos para tais parasitas. O sangue foi coletado por punção da veia caudal, foram confeccionados esfregaços sanguíneos e uma alíquota foi congelada a -20°C, para posterior extração do DNA. As caracterizações morfológicas e morfométricas foram realizadas utilizando um software especializado para análise de imagens. Dos 215 espécimes investigados, foram eleitos cinco exemplares de Crotalus durissus terrificus, nos quais foi visualizado um tipo de gamonte em cada espécime. Pela análise morfológica e morfométrica, estes gamontes foram agrupados em três populações. As alterações provocadas por tais parasitas, nas hemácias, também foram analisadas. Para a caracterização molecular das espécies de Hepatozoon através de sequenciamento genético, foram testados sete pares de oligonucleotídeos que amplificam regiões distintas do gene rDNA utilizando-se a técnica da PCR. Os testes realizados apontaram os pares de oligonucleotídeos HepF300/Hep900 e HEMO1/HEMO2 como eficientes em amplificar e caracterizar regiões genômicas Hepatozoon spp. de serpentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatozoon spp. are the most frequent intracellular protozoa found in snakes. Given the variety of forms parasitizing these animals and differences of the data found in literature, the aim of this study was to attempt to separate Hepatozoon species of snakes, testing oligonucleotides that amplify less reliable genomic regions, detecting differences among species, as well as perform the morphological, morphometric and molecular characterization of Hepatozoon spp. of naturally infected snakes. For this purpose, were used snakes donated to Center for the Study of Venoms and Venomous Animals of the São Paulo State University/Botucatu (CEVAP) that, in routine were detected positive for such parasites. Blood was collected by the tail vein puncturing, blood smears were prepared and an aliquot was frozen at -20° C for subsequent DNA extraction. The morphological and morphometric characterization were performed by using a specialized image analysis software. Of the 215 investigated animals, five specimens of Crotalus durissus terrificus were elected, in which were found five parasitic forms that, by morphometric analysis, were grouped into three populations. The changes caused by these parasites in red blood cells were also analyzed. For the molecular characterization of Hepatozoon species through genetic sequencing, were tested seven pairs of primers that amplify different regions of the rDNA gene using the PCR technique. Only the primers HepF300/Hep900 and HEMO1/HEMO2 were efficient in amplifying and characterizing genomic regions of snakes Hepatozoon spp.. The best results were achieved when the sequences amplified from the both primers were analyzed together and the results were associated with the morphology and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Cleber Galvão Ferreira / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Resumo: Triatoma garciabesi, Triatoma guasayana, Triatoma patagonica e Triatoma sordida constituem o subcomplexo T. sordida, triatomíneos que podem veicular Trypanosoma cruzi e determinar doença de Chagas em humanos. Assim devido a importância epidemiológica foi conduzido este estudo que pode contribuir para o controle vetorial. A filogênese do subcomplexo T. sordida foi conduzido por meio de estudos do processo mediano do pigóforo, genitália externa feminina, histologia de ovos, morfometria de ovos e morfometria geométrica de asas. Também se utilizou dos marcadores moleculares CO1, Cyt b, 16S e 28S. Os resultados obtidos corroboram as descrições da literatura e fornecem novos parâmetros para a caracterização das quatro espécies do subcomplexo T. sordida, bem como das relações filogenéticas da subfamília Triatominae. O estudo do processo mediano do pigóforo de T. garciabesi, T. guasayana e T. sordida por meio de MEV não mostrou diferenças entre as três espécies. A genitália externa feminina de T. garciabesi, T. guasayana, T. patagonica e T. sordida observadas por MEV, apresentaram diferenças que possibilitam distinguir essas espécies. O estudo morfológico dos ovos por meio de MEV possibilitou descrever as características do exocório das quatro espécies, mas apresentou pouca eficácia para discriminação. O estudo histológico revelou diferenças na constituição tissular dos exocórios das quatro espécies. O estudo morfométrico de ovos mostrou que as variáveis de comprimento e abertura... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Triatoma garciabesi, Triatoma guasayana Triatoma patagonica and Triatoma sordida are the subcomplex T. sordida, triatomine bugs that can serve Trypanosoma cruzi and determine Chagas disease in humans. So because of the epidemiological importance was conducted this study may contribute to the control of these vectors. . So because of the epidemiological importance was conducted this study can contribute to the vector control. The phylogeny of the subcomplex T. sordida was conducted by the morphology of the median process pygophore, external female genitalia, histology eggs, morphometry eggs and geometric morphometric wings. Molecular markers were also used CO1, Cyt b, 16S, 28S, ITS1 and ITS2. The results corroborate the descriptions of literature and provide new parameters for the characterization of the four species of T. sordida subcomplex and the phylogenetic relationships of Triatominae. The study of median process of pygophore of T. garciabesi, T. guasayana and T. sordida by means of SEM showed no differences between the three species. The female external genitalia of T. garciabesi, T. guasayana, T. patagonica and T. sordida observed by SEM showed differences that make it possible to distinguish these species. The morphological study of eggs by SEM The morphological study of eggs by SEM enabled possible to describe the characteristics of the exochorion of the four species, but was not very effective for discrimination. The Histological study reveals differences in tissue constitution of the four species exochorion. The morphometric study of eggs show that the variables of length and opercular opening eggs feature significant differences between species, the variable width was not significant. By morphometry of the wings was possible to differentiate the species... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O papel dos Zoológicos nos programas de conservação aumentou significantemente nas últimas décadas e a manutenção da saúde dos animais cativos é essencial para garantir o sucesso desses programas. Entretanto, aves mantidas em zoos sofrem de infecções por parasitas, principalmente hemosporídeos, e podem perecer em quase todo o mundo. Estudos para determinar a ocorrência e diversidade desses parasitas, com o objetivo de entender melhor sua influência na condição física das aves em cativeiro, são necessários. Em um estudo de quase quatro anos, nós investigamos a positividade de Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. nas aves cativas do Parque Zoológico de São Paulo, o maior zoológico da América Latina e o quarto do mundo. Métodos moleculares e morfológicos foram usados para detectar e identificar esses parasitas. A positividade geral de hemosporídeos nos indivíduos examinados foi 12,6%. Os parasitas foram detectados, sobretudo, através do diagnóstico molecular, indicando que muitas espécies podem abrigar infecções subclínicas. Em um estudo amplo, nós testamos animais de 17 Ordens, 29 Famílias, e 122 espécies, detectando indivíduos positivos em 64,7%, 48,3% e 27%, respectivamente. Aves da Família Anatidae foram as mais frequentemente infectadas. As infecções com parasitas do gênero Plasmodium foram predominantes quando comparadas aquelas com parasitas do gênero Haemoproteus. No total, 14 linhagens de cytb de Plasmodium spp., incluindo P. nucleophilum e P. elongatum, e 2 linhagens de cytb de Haemoproteus spp., foram registradas. Dessas linhagens, 8 foram descritas pela primeira vez. Uma dessas linhagens foi notavelmente generalista quanto às espécies hospedeiras, enquanto outras se restringiram a parasitar espécies de uma mesma Família. Estes resultados mostram que entre os animais cativos dos zoos, além dos pinguins, existem várias espécies em risco de contrair malária. A presença de Haemosporida pode ser difícil de eliminar, mas é possível reduzir a taxa de infecção tratando os animais positivos, enquanto os mantêm em instalações livres de mosquitos. Protocolos de quarentena precisam ser utilizados se o animal for transferido entre instituições. O presente estudo é o primeiro inquérito de hemosporídeos realizado em aves cativas de diferentes Ordens, e enfatiza a necessidade de incluir, na gestão e criação desses animais no cativeiro, práticas para o controle desses parasitas. / The role of Zoos in conservation programs has increased significantly in last decades and maintenance of the health of captive animals is essential to guarantee the success of these programs. However, birds kept in zoos suffer from infections by parasites, mainly haemosporidians, and can perish almost everywhere in the world. Studies to determine the occurrence and diversity of these parasites, aiming to better understand its influence in the fitness of the captive birds, are necessary. In a study over four years, we investigated the positivity of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. in the captive birds from the São Paulo Zoo, the largest zoo in Latin America and the fourth in the world. Molecular and morphological methods were used for detecting and identifying these parasites. The overall positivity of haemosporidians in the examined birds was 12.6%. Parasites were mostly detected by the molecular diagnosis, indicating that many bird species may harbour subclinical infections. In a very wide study, we tested animals from 17 Orders, 29 Families, and 122 different species, detecting positive individuals in 64.7%, 48.3% and 27%, respectively. Birds from the Anatidae Family were the most commonly infected animals. Infections with parasites of the genus Plasmodium were predominant when compared to those of the genus Haemoproteus. In total, 14 cytb lineages of Plasmodium spp., including P. nucleophilum and P. elongatum, and 2 cytb lineages of Haemoproteus spp., were recorded in this study. From these lineages, 8 were described for the first time. One of these lineages was markedly generalist regarding the host species while others infected just species within the same Family. These results show that among the captive animals in the zoos, besides the penguins, there are many species at risk of acquiring malaria. The presence of Haemosporida could be difficult to eliminate, but it is possible to reduce the infection rate by treating the positive animals, while keeping them in facilities free from mosquitoes. Protocols of quarantine must be implemented whenever an animal is transferred between institutions. The present study is the first survey of haemosporidians carried out with captive birds from different Orders, and emphasizes the necessity of applying, in management and husbandry of animals in captivity, practices to control these parasites.

Membros do gênero Rhinebothroides são parasitas exclusivos de potamotrigonídeos, elasmobrânquios de água doce endêmicos da região Neotropical. Atualmente, seis espécies são reconhecidas para este gênero dentre as oito espécies nominais disponíveis. A taxonomia de Rhinebothroides é convoluta, pois a maioria de suas espécies são diagnosticadas por caracteres morfométricos e merísticos definidos por estudos que desconsideram a variabilidade intraespecífica destas linhagens. A ampla distribuição de algumas espécies, bem como seus padrões generalistas de especificidade padrão este discrepante em relação à tetrafilídeos marinhos sugere a existência de complexos de espécies que requerem melhor refinamento taxonômico. Este estudo visa refinar a taxonomia de um destes complexos Rhinebothroides freitasi, no qual estão inseridas outras 3 especies nominais (R. campbelli, R. circularisi, R. venezuelensis) cujas circunscrições são ambíguas. Neste estudo, partiuse da premissa de que a conjunção de dados moleculares e morfológicos pode elucidar a taxonomia deste complexo. Com este objetivo, dados moleculares para os genes 28S, ITS1 e COI foram compilados para 57 haplótipos de Rhinebothroides representando todas as espécies válidas para o gênero e a ampla distribuição biogeográfica no gênero nas bacias hidrográficas brasileiras. A otimização direta das sequências nucleotídicas destes haplótipos concatenadas com outros 26 terminais que incluem linhagens de tetrafilídeos marinhos e de água doce, resultou em cinco clados de Rhinebothroides que possuem morfologia congruente com a série tipo de cinco espécies nominais. Desta forma, este estudo reconhece cinco espécies de Rhinebothroides como válidas: R. glandularis, R. freitasi, R. moralarai, R. scorzai e R. venezuelensis. Dentre as espécies do complexo R. freitasi, os dados morfológicos compilados para ~ 400 indivíduos permitiu delimitar os níveis de variabilidade morfológica de R. freitasi e R. venezuelensis. A representatividade biogeográfica e de hospedeiros contemplada neste estudo revela que, ao contrário das linhagens de tetrafilídeos marinhos, membros de Rhinebothroides possuem baixa especificidade aos seus hospedeiros. / Members of Rhinebothroides are parasites of the Neotropical freshwater stingrays of the family Potamotrygonidae. To date, six species are recognized for the genus within which there are eight nominal species available. The taxonomy of Rhinebothroides is confusing, since most of its species are currently diagnosed by morphometric and meristic characters that have been defined by studies that disregarded the intraspecific variability of its lineages. The widespread distribution of some species, as well as their relaxed host specificity pattern which differs from what has been documented for marine tetraphyllideans suggests the existence of species complexes that require taxonomic refinement. This study aims at refining the taxonomy of one of these complexes Rhinebothroides freitasi, in which are included other three nominal species (R. campbelli, R. circularisi, R. venezuelensis) circumscribed ambiguously. In this study, it has been assumed that the combination of molecular and morphological data can shed some light on the taxonomic status of this complex. Within this framework, molecular data were compiled for 28S, ITS1, and COI for 57 haplotypes of Rhinebothroides representing all currently valid species within the genus and their biogeographical distribution along the major Brazilian river basins. The direct optimization of nucleotide sequences from these haplotypes, simultaneously analised with 26 terminals which included marine and freshwater lineages of tetraphyllideans, generated a phylogenetic hypothesis that recognized five major clades within Rhinebothroides. Each of these clades are morphologically congruent with the type series of five nominal species. Therefore, this study recognizes five valid species within Rhinebothroides: R. glandularis, R. freitasi, R. moralarai, R. scorzai, and R. venezuelensis. Within the R. freitasi complex, the compiled morphological data for ~ 400 specimens provided a robust assessment of intraspecific variability for R. freitasi and R. venezuelensis. The biogeographic and host extensive sampling available for this study reveals that members of Rhinebothroides show low host specificity, as opposed to the marine tetraphyllidean lineages.