Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-04T16:49:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1298895 bytes, checksum: 72e4c92a5bd8740f6d06d50d7527f588 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T16:49:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1298895 bytes, checksum: 72e4c92a5bd8740f6d06d50d7527f588 (MD5) Previous issue date: 2015-03-05 / O setor suinícola brasileiro tem enfrentado nos últimos anos, barreiras para exportação da carne, principalmente relacionadas a questões sanitárias e ao bem-estar animal. Em relação às questões sanitárias, grande destaque tem sido dado às parasitoses intestinais causadas por helmintos e às falhas no processo de vermifugação decorrentes da resistência a antiparasitários. Portanto, é crescente a necessidade de se estudar o perfil epidemiológico dos parasitas que acometem os animais e a partir daí avaliar estratégias de controle alternativos e sustentáveis.O objetivo desse trabalho foi avaliar métodos alternativos de controle para Ascaris suum na produção de suínos. O trabalho foi dividido em quatro estudos, realizados em etapas distintas. No primeiro objetivou-se avaliar a epidemiologia do A. suum em rebanhos suinícolas localizado na micro-região de Ponte Nova, na Zona da Mata de Minas Gerais - Brasil. No segundo ensaio, foi avaliada a constituição fitoquímica do extrato aquoso produzido a partir das folhas da planta Piptadenia gonoacantha, sua açãosobre helmintos Panagrellussp. e sobre os parâmetros bioquímicos, hematológicos e histológicos de camundongos tratados por 10 dias consecutivos com diferentes doses do extrato.No terceiro, foram avaliadas soluções saturadas preparadas com quatro sais diferentes (NaCl, MgSO 4 , NaNO 3, ZnSO 4 ) e uma solução de açúcar, na realização da técnica de OPG (técnica de McMaster) em fezes de suínos, contaminadas com ovos de A. suum. E por último avaliou-se a atividade ovicida in vitro de diferentes concentrações de clamidósporos e de diferentes isolados fúngicos de Pochonia chlamydosporia(VC1 e VC4) sobre ovos de A. suum.Para o estudo epidemiológico,foram avaliados 108.073 fígados de suínos, abatidos durante o período de janeiro de 2011 a junho de 2013, quanto à presença de lesões hepáticas decorrentes da migração larval deA. suum, sendo9,75% (10.535 ixanimais) positivos.O levantamento epidemiológico demonstrou ineficiência dos protocolos de vermifugação utilizados e necessidade do desenvolvimento de xestratégiasalternativas de controle para este parasita na produção. No estudo com a planta, a análise fitoquímica revelou a presença de flavonóides, compostos fenólicos, taninos, antraquinona, saponinas, cumarinas, heterosídeos e cardiotônicos. A atividade anti-helmíntica in vitro de diferentes preparações do extrato aquoso foi demonstrada e sua alta eficácia justifica a sua utilização no controle de helmintos gastrointestinais de animais. De acordo com os parâmetros avaliados, a mesma se mostrou segura e com baixa toxicidade, possibilitando o avanço para a realização de estudos clínicos, a fim de comprovar possíveis benefícios em um programa de controle alternativo e sustentável para as parasitoses que acomentem os suínos.No terceiro trabalho, as cinco soluções estudadas foram capazes de flutuar ovos, sendo que a solução de nitrato de sódio (densidade 1.20) foi mais eficiente do que as demais (1533,33), e as soluções de açúcar e sulfato de zinco foram as que recuperaram menor quantidade de ovos. Na utilização de clamidósporos do P. chlamydosporia (VC1 e VC4) para a destruição de ovos de A. suum, in vitro, o maior efeito sobre os ovos, ou seja, efeito tipo 2, ocorreu na concentração de 1.000 clamidósporos por placa, apresentando 20.0% (VC4) e 7,33% (VC1) de ovos danificados.Estratégias alternativas e promissoras existem para detecção e controle de A. suum na produção de suínos. Contudo, mais testes devem ser realizados com a finalidade de aprimorar tais alternativas para que as mesmas possam ser utilizadas a campo, de maneira segura, dentro de um sistema intensivo de produção de suínos. / The Brazilian pig industry has faced in recent years, barriers to export of meat, mainly related to health issues and animal welfare. With regard to health issues, great emphasis is being given to intestinal helminth parasites and failures deworming process arising from resistance to these antiparasitic drugs. Therefore, there is a growing need to study the epidemiology of parasites that affect animals and from there to evaluate alternative and sustainable control strategies.The aim of this study was to evaluate alternative control methods to Ascaris suum in swine production. The work was divided into four studies carried out in different stages. The first objective was to evaluate the epidemiology of A. suum in pig herds located in Ponte Nova micro-region, the Zona da Mata of Minas Gerais - Brazil. In the second assay, was evaluated the phytochemistryconstitution of the aqueous extract made from the leaves of the plant Piptadenia gonoacantha, its action on helminthes Panagrellus sp. and on biochemical, hematological and histological parameters of mice treated for 10 consecutive days with different dosages of extract. In the third, saturated solutions prepared with four different salts were evaluated (NaCl, MgSO 4 , NaNO 3 , ZnSO 4 ) and a sugar solution, in performing the FEC technique (McMaster technique) in pig faeces, infected with Ascaris suumeggs. Finally, was evaluated the in vitro ovicidal activity of different concentrations of chlamydospores and different fungal isolates of P. chlamydosporia (VC1 and VC4) on A. suum eggs. For epidemiological evaluation, were evaluated 108 073 pigs slaughtered during the period January 2011 to June 2013, when possible liver damage due to the presence of A. suum and 9.75% (10,535 animals) were positive for the injury.The epidemiological survey showed inefficiency of used worming protocols and the need to develop and / or review of control strategies for this parasite in production. In the study with the plant,phytochemical analysis revealed the presence of flavonoids, phenolics, tannins, anthraquinone, saponins, coumarins, and cardiotonic glycosides.According to xithese parameters the same proved to be safe and low toxicity, enabling breakthrough for conducting clinical studies in order to demonstrate possible benefits and hence its use as a tool within an alternative control program and sustainable control for parasites that acomentem pigs. The anthelmintic activity in vitro of the aqueous extract was demonstrated its high efficacy and justifies its use in the control of gastrointestinal helminths of animals.In third study all five solutions were capable of floating eggs, and sodium nitrate solution (density 1.20) was more effective than the others (1533.33), and sugar and zinc sulfate solutions were to recover the smaller amount of eggs. When using chlamydospores of the fungus P. chlamydosporia (VC1 and VC4) for the destruction of Ascaris suum eggs in vitro the greatest effect on the eggs, or type 2 effect occurred at a concentration of 1.000 chlamydospores per plate, with 20.0% (VC4) and 7.33% (VC1) of damaged eggs. Alternative and promising strategies exist for detection and control of Ascaris suum in swine production. However further tests should be performed, in order to enhance such alternatives so that they can be used in the field safely within an intensive system of pig production.

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer / Coorientador: Karina dos Santos Paduan / Banca: Reinaldo José da Silva / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Rui Seabra Ferreira Junior / Banca: Lúcio André Viana Dias / Resumo: Hepatozoon spp. são os protozoários intracelulares mais frequentemente encontrados em serpentes. Tendo em vista a variedade de formas parasitando tais animais e as divergências dos dados encontrados em literatura, o objetivo deste estudo foi tentar separar espécies de Hepatozoon de serpentes, testando oligonucleotídeos que amplifiquem regiões genômicas menos conservadas, detectando diferenças entre as espécies, bem como realizar as caracterizações morfológicas, morfométricas e moleculares de Hepatozoon spp. de serpentes naturalmente infectadas. Para tal, foram utilizadas serpentes doadas ao Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos (CEVAP) da Universidade Estadual Paulista de Botucatu que, em exames de rotina, mostraram-se positivos para tais parasitas. O sangue foi coletado por punção da veia caudal, foram confeccionados esfregaços sanguíneos e uma alíquota foi congelada a -20°C, para posterior extração do DNA. As caracterizações morfológicas e morfométricas foram realizadas utilizando um software especializado para análise de imagens. Dos 215 espécimes investigados, foram eleitos cinco exemplares de Crotalus durissus terrificus, nos quais foi visualizado um tipo de gamonte em cada espécime. Pela análise morfológica e morfométrica, estes gamontes foram agrupados em três populações. As alterações provocadas por tais parasitas, nas hemácias, também foram analisadas. Para a caracterização molecular das espécies de Hepatozoon através de sequenciamento genético, foram testados sete pares de oligonucleotídeos que amplificam regiões distintas do gene rDNA utilizando-se a técnica da PCR. Os testes realizados apontaram os pares de oligonucleotídeos HepF300/Hep900 e HEMO1/HEMO2 como eficientes em amplificar e caracterizar regiões genômicas Hepatozoon spp. de serpentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatozoon spp. are the most frequent intracellular protozoa found in snakes. Given the variety of forms parasitizing these animals and differences of the data found in literature, the aim of this study was to attempt to separate Hepatozoon species of snakes, testing oligonucleotides that amplify less reliable genomic regions, detecting differences among species, as well as perform the morphological, morphometric and molecular characterization of Hepatozoon spp. of naturally infected snakes. For this purpose, were used snakes donated to Center for the Study of Venoms and Venomous Animals of the São Paulo State University/Botucatu (CEVAP) that, in routine were detected positive for such parasites. Blood was collected by the tail vein puncturing, blood smears were prepared and an aliquot was frozen at -20° C for subsequent DNA extraction. The morphological and morphometric characterization were performed by using a specialized image analysis software. Of the 215 investigated animals, five specimens of Crotalus durissus terrificus were elected, in which were found five parasitic forms that, by morphometric analysis, were grouped into three populations. The changes caused by these parasites in red blood cells were also analyzed. For the molecular characterization of Hepatozoon species through genetic sequencing, were tested seven pairs of primers that amplify different regions of the rDNA gene using the PCR technique. Only the primers HepF300/Hep900 and HEMO1/HEMO2 were efficient in amplifying and characterizing genomic regions of snakes Hepatozoon spp.. The best results were achieved when the sequences amplified from the both primers were analyzed together and the results were associated with the morphology and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O papel dos Zoológicos nos programas de conservação aumentou significantemente nas últimas décadas e a manutenção da saúde dos animais cativos é essencial para garantir o sucesso desses programas. Entretanto, aves mantidas em zoos sofrem de infecções por parasitas, principalmente hemosporídeos, e podem perecer em quase todo o mundo. Estudos para determinar a ocorrência e diversidade desses parasitas, com o objetivo de entender melhor sua influência na condição física das aves em cativeiro, são necessários. Em um estudo de quase quatro anos, nós investigamos a positividade de Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. nas aves cativas do Parque Zoológico de São Paulo, o maior zoológico da América Latina e o quarto do mundo. Métodos moleculares e morfológicos foram usados para detectar e identificar esses parasitas. A positividade geral de hemosporídeos nos indivíduos examinados foi 12,6%. Os parasitas foram detectados, sobretudo, através do diagnóstico molecular, indicando que muitas espécies podem abrigar infecções subclínicas. Em um estudo amplo, nós testamos animais de 17 Ordens, 29 Famílias, e 122 espécies, detectando indivíduos positivos em 64,7%, 48,3% e 27%, respectivamente. Aves da Família Anatidae foram as mais frequentemente infectadas. As infecções com parasitas do gênero Plasmodium foram predominantes quando comparadas aquelas com parasitas do gênero Haemoproteus. No total, 14 linhagens de cytb de Plasmodium spp., incluindo P. nucleophilum e P. elongatum, e 2 linhagens de cytb de Haemoproteus spp., foram registradas. Dessas linhagens, 8 foram descritas pela primeira vez. Uma dessas linhagens foi notavelmente generalista quanto às espécies hospedeiras, enquanto outras se restringiram a parasitar espécies de uma mesma Família. Estes resultados mostram que entre os animais cativos dos zoos, além dos pinguins, existem várias espécies em risco de contrair malária. A presença de Haemosporida pode ser difícil de eliminar, mas é possível reduzir a taxa de infecção tratando os animais positivos, enquanto os mantêm em instalações livres de mosquitos. Protocolos de quarentena precisam ser utilizados se o animal for transferido entre instituições. O presente estudo é o primeiro inquérito de hemosporídeos realizado em aves cativas de diferentes Ordens, e enfatiza a necessidade de incluir, na gestão e criação desses animais no cativeiro, práticas para o controle desses parasitas. / The role of Zoos in conservation programs has increased significantly in last decades and maintenance of the health of captive animals is essential to guarantee the success of these programs. However, birds kept in zoos suffer from infections by parasites, mainly haemosporidians, and can perish almost everywhere in the world. Studies to determine the occurrence and diversity of these parasites, aiming to better understand its influence in the fitness of the captive birds, are necessary. In a study over four years, we investigated the positivity of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. in the captive birds from the São Paulo Zoo, the largest zoo in Latin America and the fourth in the world. Molecular and morphological methods were used for detecting and identifying these parasites. The overall positivity of haemosporidians in the examined birds was 12.6%. Parasites were mostly detected by the molecular diagnosis, indicating that many bird species may harbour subclinical infections. In a very wide study, we tested animals from 17 Orders, 29 Families, and 122 different species, detecting positive individuals in 64.7%, 48.3% and 27%, respectively. Birds from the Anatidae Family were the most commonly infected animals. Infections with parasites of the genus Plasmodium were predominant when compared to those of the genus Haemoproteus. In total, 14 cytb lineages of Plasmodium spp., including P. nucleophilum and P. elongatum, and 2 cytb lineages of Haemoproteus spp., were recorded in this study. From these lineages, 8 were described for the first time. One of these lineages was markedly generalist regarding the host species while others infected just species within the same Family. These results show that among the captive animals in the zoos, besides the penguins, there are many species at risk of acquiring malaria. The presence of Haemosporida could be difficult to eliminate, but it is possible to reduce the infection rate by treating the positive animals, while keeping them in facilities free from mosquitoes. Protocols of quarantine must be implemented whenever an animal is transferred between institutions. The present study is the first survey of haemosporidians carried out with captive birds from different Orders, and emphasizes the necessity of applying, in management and husbandry of animals in captivity, practices to control these parasites.

Resumo: As enteroparasitoses comumente afetam o equilíbrio orgânico dos animais de estimação, sendo isto particularmente preocupante em relação aos cães, devido ao intimo contato destes com o homem. As técnicas coproparasitológicas usualmente utilizadas na rotina laboratorial para detecção de parasitoses gastrintestinais são indispensáveis para o diagnóstico e por conseqüência para determinar a necessidade de tratamento dos animais infectados. Neste estudo objetivou-se avaliar a ocorrência de helmintoses e protozooses em cães domiciliados e sua associação com faixa etária, sexo e raça, bem como a eficiência dos Métodos Willis- Mollay, Faust, Sedimentação e Exame Direto quanto a recuperação de ovos e oocistos de parasitos gastrintestinais da espécie canina. Foram processadas 401 amostras fecais, sendo que em 300 foi efetuada a Técnica de Kinyoun para pesquisa de Cryptosporidium spp. Os parasitos encontrados foram Ancylostoma spp. em 53,1%, Toxocara canis em 20,7%, Cystoisospora ohioensis em 15,7%, Trichuris vulpis em 3,7%, Dipylidium caninum em 2,5%, Cryptosporidium spp. em 1,33% e Taenia spp. em 1,0% das amostras. A positividade para Ancylostoma spp. não foi influenciada pelas variáveis raça, sexo e idade. Houve diferença estatisticamente significativa para T. canis e C. ohioensis nos cães com até seis meses de idade quando comparados a animais acima de seis meses (P<0,0001). Quanto a variável sexo houve associação apenas com o ascarídeo T. canis com maior ocorrência nos machos quando comparado as fêmeas (P = 0,0243). A associação da presença das formas evolutivas dos parasitos com raça dos cães não foi estatisticamente significativa. / Abstract: The enteroparasitoses generally affect the organic equilibrium of pets, being particularly worrying referring to dogs, due to intimate contact with the human being. The techniques coproparasitologics usually used in laboratorial routines for detection of gastroenteric parasitoses are indispensable for the diagnosis and consequence to determine the necessary of infected animals treatment. In this study we evaluated the occurrence of helminthoses and protozooses in dogs and its association with age, sex and race, as well as the efficiency of Willis-Mollay, Faust, Sedimentation and exam Direct methods. It was processed 401 fecal samples, being accomplished in 300 parts, the technique of Kinyoun for directed research of Cryptosporidium spp. The parasite found were Ancylostoma spp. (53.1%), Toxocara canis (20.7%), Cystoisospora ohioensis (15.7%), Trichuris vulpis (3.7%), Dipylidium caninum (2.5%), Cryptosporidium spp. (1.33%) and Taenia spp. (1.0%). There was a statistically significant difference for T. canis and C. ohioensis in dogs up to six months old (P<0,0001). The occurrence of T. canis was statistically bigger in males when compared to females (P=0,0243). The association of parasites with race was not statistically significant. Of the four dogs (1.33%) positives for Cryptosporidium spp., only one presented a semi liquid consistence faeces and light dehydration (5 to 7%), having this animal age superior to six months old, with simultaneous infection for Ancylostoma spp. The Willis-Mollay was more efficient in the diagnosis of Ancylostoma spp. and T. canis eggs. The Direct method was least efficient. The techniques were statistically the same as the occurrence of the C. ohioensis oocysts. / Orientador: Silvia Helena Venturoli Perri / Coorientador: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Solange Maria Gennari / Mestre

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: A Leishmaniose visceral em cães é descrita como uma doença de caráter crônico na qual os principais sintomas são perda progressiva de peso, caquexia, lesões dermatológicas, e recentemente, a doença tem sido relacionada com quadros neurológicos. Um total de 41 cães portadores de leishmaniose visceral, foram divididos em dois grupos. O primeiro composto por cães sem sintomas neurológicos (n=31) e o segundo grupo composto por cães com sintomas neurológicos (n=10). Amostras de encéfalo foram coletadas e armazenadas em formalina tamponada, para realização de imunoistoquímica para a pesquisa de formas amastigotas da Leishmania sp., linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+ e macrófagos. Não foram observadas formas amastigotas de Leishmania sp. Linfócitos T CD3+ estavam presentes em 24/31 (77,4%) dos cães sem sintomas neurológicos e em todos os cães do segundo grupo (p=0,0011). Linfócitos T CD4+ e CD8+ raramente foram observados, apresentando imunomarcação para CD4+ em 10/41 (24,3%) dos cães e em metade dos animais do grupo neurológico (p=0,0090). A presença de CD8+ foi detectada em 4/10 (40%) dos cães com doenças neurológicas (p=0,0021). Macrófagos foram observados em 38/41 (92,6%) cães, sem diferença estatística significante entre os dois grupos (p= 0,7664) / Abstract: Visceral leishmaniasis in dogs is described as a chronic disease whose main symptoms are progressive weigth loss, dermatologic lesions and, recently, the disease has been associated to neurologic disorders in dogs. A total of 41 Leishmania chagasi infected dogs were divided into two groups. The first composed of dogs without neurological signs (n=31) and the second by dogs with neurological disorders (n=10). Brain samples were collected, stored in 10% buffered formalin and subjected to immunohistochemical examination for amastigotes forms of Leishmania sp, CD3+, CD4+ and CD8+ T lymphocytes and macrophages. Imunnohistochemistry not revealed amastigote any forms of Leishmania sp. CD3+ T lymphocytes were present in 24/31 (77,4%) dogs without neurological signs and in all dogs from the second group (p=0.0011). CD4+ and CD8+ were rarely observed, with CD4+ immunostaining in 10/41 (24,3%) dogs, from which half of them had neurological disease (p=0.0090). The presence of CD8+ was detected only in 4/10 (40%) dogs from neurological group (p=0.0021). Macrophages were detected in 38/40 (92,6%) dogs, without significant differences between groups (p=0.7664) / Mestre

O papel dos Zoológicos nos programas de conservação aumentou significantemente nas últimas décadas e a manutenção da saúde dos animais cativos é essencial para garantir o sucesso desses programas. Entretanto, aves mantidas em zoos sofrem de infecções por parasitas, principalmente hemosporídeos, e podem perecer em quase todo o mundo. Estudos para determinar a ocorrência e diversidade desses parasitas, com o objetivo de entender melhor sua influência na condição física das aves em cativeiro, são necessários. Em um estudo de quase quatro anos, nós investigamos a positividade de Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. nas aves cativas do Parque Zoológico de São Paulo, o maior zoológico da América Latina e o quarto do mundo. Métodos moleculares e morfológicos foram usados para detectar e identificar esses parasitas. A positividade geral de hemosporídeos nos indivíduos examinados foi 12,6%. Os parasitas foram detectados, sobretudo, através do diagnóstico molecular, indicando que muitas espécies podem abrigar infecções subclínicas. Em um estudo amplo, nós testamos animais de 17 Ordens, 29 Famílias, e 122 espécies, detectando indivíduos positivos em 64,7%, 48,3% e 27%, respectivamente. Aves da Família Anatidae foram as mais frequentemente infectadas. As infecções com parasitas do gênero Plasmodium foram predominantes quando comparadas aquelas com parasitas do gênero Haemoproteus. No total, 14 linhagens de cytb de Plasmodium spp., incluindo P. nucleophilum e P. elongatum, e 2 linhagens de cytb de Haemoproteus spp., foram registradas. Dessas linhagens, 8 foram descritas pela primeira vez. Uma dessas linhagens foi notavelmente generalista quanto às espécies hospedeiras, enquanto outras se restringiram a parasitar espécies de uma mesma Família. Estes resultados mostram que entre os animais cativos dos zoos, além dos pinguins, existem várias espécies em risco de contrair malária. A presença de Haemosporida pode ser difícil de eliminar, mas é possível reduzir a taxa de infecção tratando os animais positivos, enquanto os mantêm em instalações livres de mosquitos. Protocolos de quarentena precisam ser utilizados se o animal for transferido entre instituições. O presente estudo é o primeiro inquérito de hemosporídeos realizado em aves cativas de diferentes Ordens, e enfatiza a necessidade de incluir, na gestão e criação desses animais no cativeiro, práticas para o controle desses parasitas. / The role of Zoos in conservation programs has increased significantly in last decades and maintenance of the health of captive animals is essential to guarantee the success of these programs. However, birds kept in zoos suffer from infections by parasites, mainly haemosporidians, and can perish almost everywhere in the world. Studies to determine the occurrence and diversity of these parasites, aiming to better understand its influence in the fitness of the captive birds, are necessary. In a study over four years, we investigated the positivity of Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. in the captive birds from the São Paulo Zoo, the largest zoo in Latin America and the fourth in the world. Molecular and morphological methods were used for detecting and identifying these parasites. The overall positivity of haemosporidians in the examined birds was 12.6%. Parasites were mostly detected by the molecular diagnosis, indicating that many bird species may harbour subclinical infections. In a very wide study, we tested animals from 17 Orders, 29 Families, and 122 different species, detecting positive individuals in 64.7%, 48.3% and 27%, respectively. Birds from the Anatidae Family were the most commonly infected animals. Infections with parasites of the genus Plasmodium were predominant when compared to those of the genus Haemoproteus. In total, 14 cytb lineages of Plasmodium spp., including P. nucleophilum and P. elongatum, and 2 cytb lineages of Haemoproteus spp., were recorded in this study. From these lineages, 8 were described for the first time. One of these lineages was markedly generalist regarding the host species while others infected just species within the same Family. These results show that among the captive animals in the zoos, besides the penguins, there are many species at risk of acquiring malaria. The presence of Haemosporida could be difficult to eliminate, but it is possible to reduce the infection rate by treating the positive animals, while keeping them in facilities free from mosquitoes. Protocols of quarantine must be implemented whenever an animal is transferred between institutions. The present study is the first survey of haemosporidians carried out with captive birds from different Orders, and emphasizes the necessity of applying, in management and husbandry of animals in captivity, practices to control these parasites.

Orientador: Alvimar Jose da Costa / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Welber Daniel Zanetti Lopes / Resumo: Os objetivos específicos do presente trabalho foram diagnosticar espécies de nematódeos resistentes à ivermectina de alta concentração (3,15% e 3,5%) por meio de necropsias parasitológicas realizadas em bovinos procedentes de oitos municípios dos estados de Minas Gerais, São Paulo e Rio Grande do Sul; avaliar comparativamente as eficácias terapêuticas de duas formulações contendo altas concentrações de ivermectina 3,15% (630 mcg/Kg) e 3,5% (700 mcg/Kg), contra nematódeos parasitos de bovinos naturalmente infectados; fornecer subsídios para um melhor conhecimento sobre a distribuição da resistência de nematódeos à ivermectina, em diferentes regiões do Brasil. Para isto foram utilizados 108 animais, naturalmente infectados, os quais foram selecionados pelas médias de três pré-contagens (-3,-2 e -1) de ovos por grama de fezes (OPG), divididos em grupos experimentais, constituídos por seis repetições. Quatorze dias pós-tratamento (DPT), os animais foram eutanasiados e necropsiados. Resistência à ivermectina 3,15% (630 mcg/Kg) e 3,5% (700 mcg/Kg) foi diagnosticada obtendo eficácia terapêutica insuficientemente efetiva (<90%) pelas médias aritméticas ou 1000 espécimes sobreviveram nos grupos tratados, dentre as quais: Haemonchus placei (0,0-89,27%), Cooperia punctata (0,0-26,46%), Cooperia pectinata (0,0-90,16%), Cooperia spatulata (21,82-71,50%), Trichostrongylus axei (82,23%), Oesophagostomum radiatum (54,93-83,33%) e Trichuris discolor (64,71-82,58%); Considerando apenas os resultados analisados estatisticamente referentes aos oito experimentos realizados (116 necropsias) pode-se inferir que a resistência à ivermectina, em altas concentrações (630 e 700 μg/Kg) está amplamente disseminada, sobretudo nas espécies Haemonchus placei, Cooperia punctat... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The specific objectives of the present study were to diagnose high concentration ivermectin (3,15% and 3,5%) resistance in nematodes through parasitological necropsies conducted in bovines originating from eight cities from the states of Minas Gerais, São Paulo and Rio Grande do Sul; evaluate, by comparison, the therapeutic efficacies of two formulations containing high concentrations of ivermectin, respectively 3,15% (630 mcg/Kg) and 3,5% (700 mcg/Kg), against nematodes parasitizing naturally infected bovines; provide aid for a better knowledge about the distribution of ivermectin resistance in nematodes throughout different regions of Brazil. To achieve these goals 108 naturally infected animals were used, all selected using the average of three EPG counts (-3, -2 and -1), divided in experimental groups consisting of six repetitions. Fourteen days after treatment all animals were euthanized and necropsied. Resistance to 3,15% ivermectin (630 mcg/Kg) and 3,5% ivermectin (700 mcg/Kg) was diagnosed by obtaining insufficient therapeutical efficacy (< 90%) when analyzing arithmetic means or by finding at least 1000 specimens that survived in the treated groups, amongst which, Haemonchus placei (0,0-89,27%), Cooperia punctata (0,0-26,46%), Cooperia pectinata (0,0-90,16%), Cooperia spatulata (21,82-71,50%), Trichostrongylus axei (82,23%), Oesophagostomum radiatum (54,93-83,33%) e Trichuris discolor (64,71-82,58%). Considering only the statistically analyzed results related to the eight experiments conducted (116 necropsies) it can be inferred that resistance to high concentration ivermectin (630 and 700 μg/Kg) is highly disseminated, specially in Haemonchus placei, Cooperia punctata, Cooperia pectinata, Cooperia spatulata, Trichostrongylus axei, Oesophagostomum radiatum and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Jane Megid / Banca: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Banca: Edviges Maristela Pituco / Resumo: O trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de roedores silvestres e outros mamíferos selvagens de pequeno e médio porte como reservatório do vírus vaccínia, bem como determinar os possíveis fatores de risco associados à prevalência de portadores de anticorpos contra Orthopoxvirus em vacas leiteiras e outros animais domésticos, animais selvagens e em humanos. Para tanto, questionário epidemiológico foi aplicado a 47 propriedades rurais distribuídas ao longo dos municípios de Torre de Pedra (com registros oficiais de surtos por VACV afetando rebanhos leiteiros e ordenhadores), Bofete e Anhembi (sem registros oficias de surtos) a fim de levantar dados sobre o estado sanitário de cada propriedade e possíveis fatores de risco. Amostras de sangue e soro foram coletadas, após autorização prévia, de vacas, cavalos, carneiros, suínos, cães e gatos, também dos produtores rurais e seus familiares, e dos animais selvagens capturados em cada propriedade. Foram conduzidas análises sorológicas através das técnicas de vírus neutralização (para amostras de soro humano e de animais domésticos) e teste de neutralização pela redução da formação de placas (para amostras de animais selvagens). Os resultados mostram baixa positividade entre os animais selvagens e alta positividade entre domésticos e humanos, sugerindo que algumas espécies domésticas como cães e cavalos podem representar possíveis reservatórios além de apontar fatores de risco como a fonte de água e animais selvagens de hábitos ribeirinhos, como futuros alvos de estudo sobre as formas de disseminação do vírus vaccínia / Abstract: This work aimed analyze the potential of wild rodents and others wild mammals as vaccinia virus reservoir, as well as to determine the risk factors associated to orthopoxvirus antibodies prevalence in milking cows and other domestic animals, wild animals and humans. An epidemiological questionnaire was applied to 47 farms distributed among Torre de Pedra, Bofete and Anhembi, to obtain data about sanitary situation of the farms and possible risk factors. Blood samples were collected from cows, horses, sheep, swine, dogs and cats, also from milker and their family, and from wild animals trapped in each farm. Serologic analyzes were proceeded using virus neurtalization (for humans and domestic animals samples) and Plaque Reduction Neutralization Test (for wild animals). The results showed low percentage of positivity in wild animals and high positivity between humans and domestic animals, suggesting other possible reservoirs like dogs and horses as possible reservoirs and source of water and riparian wild animals as risk factor for VACV infection opening new targets for future studies about Vaccinia virus dissemination / Mestre

Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Matias Pablo Juan Szabó. / Banca: Mirela Tinucci Costa. / Banca: Odilon Vidotto / Banca: Rodrigo Martins Soares / Resumo: Este estudo foi realizado objetivando-se detectar e identificar a presença de material genômico de agentes pertencentes à Família Anaplasmataceae em 55 cães com inclusões citoplasmáticas encontrados em células leucocitárias granulocíticas, monocíticas e plaquetas, compatíveis com infecção por Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, A. phagocytophilum, A. platys ou Neorickettsia risticii. A ocorrência natural de Babesia canis também foi avaliada pois vetor Rhipicephalus sanguineus, é o principal carrapato encontrado em cães no Brasil. Também objetivou-se realizar, através da utilização de técnicas de Seqüenciamento de um fragmento do gene 16S rRNA, a caracterização parcial dos fragmentos das amostras positivas encontradas neste estudo, e comparar as seqüências dos fragmentos obtidos com as seqüências apresentadas previamente no GenBank, iniciando a realização de estudos filogenéticos das seqüências encontradas. Amostras de sangue foram colhidas de 25 e 30 cães atendidos nos Hospitais Veterinários da Universidade Estadual Paulista-Unesp, Câmpus de Jaboticabal-SP e Universidade para o Desenvolvimento do Estado e da região do Pantanal-UNIDERP, Campo Grande- MS, respectivamente. Dentre as inclusões citoplasmáticas encontradas neste estudo foi observado uma grande diversidade na morfologia, tamanho, coloração e localização das inclusões. DNA de agentes Família Anaplasmataceae foram detectados em 45/55 das amostras sangüíneas examinadas (81,8%), sendo destas 32 (58,18%) e 13 (23,63%) positivas para Ehrlichia canis e Anaplasma platys, respectivamente. Dez animais que foram incluídos neste estudo por apresentarem inclusões citoplasmáticas foram negativos quando uma segunda confecção de esfregaço de papa leucocitária corada pelo Giemsa foi realizada, e também... (Resumo completo, clicar aesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the natural occurrence of Anaplasmataceae agents (Ehrlichia canis, E. chaffeensis, E. ewingii, A. phagocytophilum, A. platys and Neorickettsia risticii) using molecular techniques. For this purpose a group of fifty-five supposedly infected dogs from two different Brazilian states (São Paulo and Mato Grosso do Sul) that showed suggestive Anaplasmataceae agent intracitoplasmic inclusions in white blood cells and platelets were analysed. The natural occurrence of Babesia canis was also evaluated, because its vector is also Brazilian dog tick, Rhipicephalus sanguineus. Sequencing of a partial phragment of 16S rRNA gene from the positive samples were performed to conduct phylogenetic study. The evaluated blood cells of the studied dog population displayed a wide variety in shapes, sizes, stain pattern and localization of the inclusions. Anaplasmataceae DNA were amplified in 45/55 (81.8%) examined blood samples. Thirty-two samples were positive for E. canis (58.18%) and thirteen for Anaplasma platys (23.63%). Ten animals were negative by PCR and an analyses of a second Buffy coat smear. The obtained nucleotide sequences were analysed for similarity of the 16S rRNA gene sequence using Blast with other sequences available in the GenBank database. The sequences obtained from E. canis positive were closely related to E. canis from Spain (Acession number AY 394465) presenting an identity percentage of between 94.82% and 99.67%. Sequences from Anaplasma sp and Anaplasma platys positive samples were closely related to A. platys from Venezuela (Genbank Acession number AF 399917) presenting an identity betwwen 96.52% and 99.69%, and A. platys from Spain (Genbank Acession number AY 530 806\0 presenting... (Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Resumo: O uso indiscriminado de anti-helmínticos tem resultado no surgimento de parasitas com resistência aos princípios ativos existentes no mercado. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo avaliar in vitro o potencial antiparasitário de extratos vegetais sobre ovos e larvas do parasita gastrintestinal de ovinos, Haemonchus contortus e do parasita de ratos Strongyloides venezuelensis. Os extratos vegetais de Carapa guianensis, Hura crepitans, Lippia sidoides, Mentha piperita e Piper tuberculatum, produzidos em diferentes instituições de pesquisa, foram analisados quimicamente e testados in vitro pelos testes de inibição de eclodibilidade (EHT) e de desenvolvimento larvar (TDL) em H. contortus. A ação anti-helmíntica do extrato de P. tuberculatum (150 e 250 mg.Kg-1 de peso corporal) foi avaliada em Rattus norvegicus infectados experimentalmente com S. venezuelensis. No EHT, as CL50 e CL90 (concentrações letais que matam 50 e 90% dos ovos) dos extratos foram as seguintes: 0,031 e 0,09 mg.ml-1 para P. tuberculatum, 0,04 e 0,13 mg.ml-1 para L. sidoides, 0,037 e 0,10 mg.ml-1 para M. piperita, 2,16 e 17,13 mg.ml-1 para H. crepitans e 2,03x10-6 e 1,22x10-12 mg.ml-1 para C. guianensis. No TDL, as CL50 e CL90 (concentrações letais que matam 50 e 90% das larvas) foram respectivamente: 0,02 e 0,031 mg.ml-1 para P. tuberculatum, 0,002 e 0,04 mg.ml-1 para L. sidoides, 0,018 e 0,03 mg.ml-1 para M. piperita, 0,36 e 0,91 mg.ml-1 para H. crepitans e 17,65 e 1,890 mg.ml-1 para C. guianensis. O extrato de P. tuberculatum apresentou as seguintes substâncias: (Z)-piplartina, (E)-piplartina, 8,9-dihidropiplartina, piperina, 10,11-dihidropiperina; 5,6 dihidropiperlongumina e pelitorina. Os principais compostos dos óleos essenciais foram: timol (76,6%) para L. sidoides, mentol (27,5%) para M. piperita e ácido oléico (46,8%) para C. guianensis. Em relação ao teste in vivo, ambas as doses do extrato... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The indiscriminate use of anthelmintics has resulted in the establishment of parasite resistance. Thus, this study aimed to evaluate the in vitro antiparasitic effect of plant extracts on Haemonchus contortus of sheep and in vivo on rats infected with Strongyloides venezuelensis. The plant extracts from Piper tuberculatum, Lippia sidoides, Mentha piperita, Hura crepitans and Carapa guianensis, produced in different research institutions, were chemically analyzed and evaluated through the egg hatch test (EHT) and larval development test (LDT) in H. contortus. P. tuberculatum (150 and 250 mg.Kg-1 of body weight) was evaluated for its anthelmintic action in Rattus norvegicus experimentally infected with S. venezuelensis. In the EHT, the LC50 and LC90 (letal concentration that kill 50 and 90% of the eggs) from extracts were respectively as follow: 0.031 and 0.09 mg.ml-1 for P. tuberculatum, 0.04 and 0.13 mg.ml-1 for L. sidoides, 0.037 and 0.10 mg.ml-1 for M. piperita, 2.16 and 17.13 mg.ml-1 for H. crepitans and 2.03x10-6 and 1.22x10-12 mg.ml-1 for C. guianensis. In the LDT, the LC50 and LC90 (letal concentration that kill 50 and 90% of the larvae)were respectively: 0.02 and 0.031 mg.ml-1 for P. tuberculatum, 0.002 and 0.04 mg.ml-1 for L. sidoides, 0.018 and 0.03 mg.ml-1 for M. piperita, 0.36 and 0.91 mg.ml-1 for H. crepitans and 17.65 and 1890 mg.ml-1 for C. guianensis. The extract from P. tuberculatum showed the following substances: piperamides as (Z)-piplartine, (E)-piplartine, 8.9-dihydropiplartine, piperine, 10.11-dihydropiperine; 5.6 dihydropiperlongumine and pellitorine. The major compounds of the essential oils were thymol (76.6%) for L. sidoides, menthol (27.5%) for M. piperita and oleic acid (46.8%) for C. guianensis. Regarding the in vivo test, both doses of P. tuberculatum extract did not cause any significant reduction (P>0.05) in worm burden and egg count... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Coorientador: Ana Carolina de Souza Chagas / Banca: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Mestre