Muito se tem investido em pesquisa na compreensão dos processos e fenômenos envolvidos nas respostas imunes às infecções e, principalmente, no desenvolvimento de recursos e tecnologias a fim favorecer os avanços no tratamento da sepse. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos anti-inflamatórios das células-tronco mesenquimais (MSCs) quando administradas por duas diferentes vias: intraperitoneal (IP) e intravenosa (IV), determinando qual a melhor via de traramento, em modelo experimental murino de sepse. Foram utilizados 31 camundongos da linhagem C57Bl/6 para padronização do modelo de Ligadura e Perfuração do Ceco (CLP). Após os experimentos de estabelecimento do modelo, outros 60 animais foram distribuídos em nove grupos: grupo CONTROLE, grupo sepse sem tratamento (SEPSE), grupo SHAM, grupo sepse com administração de PBS via IV (SEPSE PBS IV), grupo sham com administração de PBS via IV (SHAM PBS IV), grupo sham com administração de MSCs via IV (SHAM MSC IV), grupo sham com administração de MSCs via IP (SHAM MSC IP), grupo sepse com administração de MSCs via IP (SEPSE MSC IP) e grupo sepse com administração de MSCs via IV (SEPSE MSC IV). Transcorridas 6 horas da indução da sepse pelo modelo CLP, padronizado com oclusão total do ceco seguida de uma única punctura com agulha 18G, os animais receberam o tratamento de acordo com o grupo que compunham. Após 24 horas do procedimento cirúrgico, procedeu-se a eutanásia dos animais para coleta dos órgãos, sangue e fluidos peritoneais. As amostras foram analisadas quanto aos parâmetros histológicos, hematológicos e inflamatórios, respectivamente. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que: 1) O modelo CLP padronizado com oclusão total do ceco e uma punctura com agulha 18G induziu sepse aguda nos animais; 2) A administração das MSCs via IP foi atenuadamente mais eficaz na redução da concentração de leucócitos hematológicos e no quadro de trombocitopenia instalado nos animais com sepse induzida; 3) A injeção IP das MSCs diminuiu, com maior eficiência, a infiltração de células inflamatórias na região abdominal dos animais doentes. 4) As citocinas IL-6, TNF-α e IL- 10 obtiveram queda de suas concentrações séricas com a terapia nos animais dos grupos submetidos à indução da sepse. 5) O tratamento com MSCs melhorou o grau de peritonite, necrose e ulcerações observadas na histologia do ceco dos animais, com melhores resultados encontrados no grupo SEPSE MSC IP. / Much has been invested on research regarding comprehension of the processes and phenomena that are involved in immune responses to infections and mainly on resources and technologies development in order to support advances in the treatment of sepsis. This study has been performed in order to evaluate the anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells (MSCs) when administered by two different routes: intraperitoneal (IP) and intravenous (IV), to determine which is the best treatment route, in an experimental murine model of sepsis. Thirty-one C57Bl/6 strain mice have been used to standardize the Cecal Ligation and Perforation (CLP) model. After the establishment of CLP, 60 animals were allocated into nine groups: CONTROL group, sepsis group without treatment (SEPSE), SHAM group, sepsis group with intravenously administration of PBS (SEPSE PBS IV), sham group with intravenously administration of PBS (SHAM PBS IV), sham group with intravenously administration of MSCs (SHAM MSC IV), sham group with intraperitoneal administration of MSCs (SHAM MSC IP), sepsis group with intraperitoneal administration of MSCs (SEPSE MSC IP), and sepsis group with intravenously administration of MSCs (SEPSE MSC IV). 6 hours after the induction of sepsis by CLP model, standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle, the animals received the treatment according to the group they belonged to. 24 hours after the surgical procedure the animals were sacrificed in order to get the organs, blood and peritoneal fluid. The samples were analyzed for histological, haematological and inflammatory parameters, respectively. Basing on the results it was concluded that:1) The CLP model standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle induced acute sepsis in the animals; 2) The intraperitoneal administration of MSCs was slightly better in reducing the hematological concentration of leukocytes and the installed picture of thrombocytopenia in sepsis groups; 3) the intraperitoneal injection of MSCs decreased, with greater efficiency, the inflammatory cells infiltration in the abdominal cavity of sepsis groups. 4) The IL-6, TNF-α and IL-10 cytokines had their serum concentrations decline with therapy, in the groups subjected to induction of sepsis. 5) Treatment with MSCs improved the severity of peritonitis, necrosis and ulceration observed in cecum histology, with better results in the SEPSIS MSC IP group.

A infecção por Mycoplasma (M.) hyopneumoniae é responsável por perdas econômicas significativas na suinocultura, causando uma pneumonia crônica que normalmente afeta clinicamente suínos de crescimento e terminação. Considerando-se a importância das matrizes de menor ordem de parto na transmissão de M. hyopneumoniae e que uma grande quantidade de leitoas é introduzida nos planteis anualmente, este projeto teve como objetivo compreender aspectos pouco conhecidos da dinâmica de infecção de M. hyopneumoniae em leitoas de reposição. O primeiro estudo avaliou a dinâmica e persistência da infecção por M. hyopneumoniae em leitoas em condições naturais de campo. Quarenta e quatro leitoas foram selecionadas aos 20 dias de idade (ddi) e a detecção de M. hyopneumoniae por PCR foi avaliada mensalmente por suabe de laringe, resultando em um total de 12 coletas. Além disso, 220 leitões filhos dessas matrizes foram amostrados um dia antes do desmame para avaliação da transmissão vertical. Os resultados deste estudo demonstraram que o início da detecção ocorreu aos 110 ddi e um aumento significativo foi observado aos 140 ddi (p<0,05). Ao desmame, apenas 2,3% das fêmeas foi positiva e não foram detectados leitões desmamados positivos. Adicionalmente, 77,2% das leitoas foi detectada positiva por um a três meses, 4,6% por quatro a cinco meses e 18,2% nunca foi detectada positiva, indicando a presença de subpopulações de animais negativos em granjas positivas. Em um segundo estudo, avaliou-se a detecção de M. hyopneumoniae por PCR em leitoas de reposição interna e a variabilidade genética entre granjas foi avaliada por MLVA (Multiple Locus Variable-number tandem repeats Analysis). Um total de 298 leitoas provenientes de três multiplicadoras positivas foram selecionadas e coletadas uma vez para realização de ELISA e duas a três vezes para PCR em um estudo longitudinal. Ainda, a transmissão vertical foi avaliada em 425 leitões pré-desmame. Aos 150 ddi, 47 a 67,4% das leitoas foi detectada positiva por PCR, decréscimos foram observados até a última amostragem nas três granjas avaliadas (p<0,05), e nenhum leitão foi positivo pré-desmame. Ainda, 30,7% das leitoas não foi detectada positiva em nenhuma nas amostragens e os resultados de MLVA indicaram um ampla variabilidade genética de M. hyopneumoniae em leitoas aos 150 ddi. No terceiro estudo, 210 leitoas de reposição negativas para M. hyopneumoniae introduzidas em três granjas positivas foram selecionadas e avaliadas longitudinalmente por PCR e ELISA com o objetivo de comparar dois tipos de fluxo de aclimatação (all-in all-out ou fluxo contínuo). Ainda, a variabilidade genética foi analisada por MLVA. Observou-se um aumento significativo (p<0,05) nas prevalências de leitoas positivas para M. hyopneumoniae por PCR na segunda coleta e um decréscimo ao longo do tempo independentemente do tipo de fluxo de aclimatação utilizado. Os resultados de ELISA revelaram que as três granjas avaliadas tiveram um aumento significativo na prevalência de leitoas positivas da primeira para a segunda coleta (p<0,05), que se manteve alta até o fim do experimento. Ainda, baixa variabilidade genética de M. hyopneumoniae foi observada por MLVA. Um quarto estudo também foi conduzido com o objetivo de avaliar a absorção e detecção de M. hyopneumoniae utilizando-se suabes de nylon flocados e de ponta de rayon. Os resultados deste experimento indicaram uma maior absorção e uma maior detecção de M. hyopneumoniae por PCR (p<0,05) utilizando-se suabes de nylon flocados. / Mycoplasma (M.) hyopneumoniae infection is responsible for important economic losses to pig production, causing a chronic pneumonia that usually affects growing and finishing pigs. Regarding the importance of low parity dams on M. hyopneumoniae transmission and that a high proportion of gilts is introduced in the farms every year, this project aimed to better understand unknown aspects about the infection dynamics of M. hyopneumoniae in replacement gilts. The first study assessed the dynamics and persistence of M. hyopneumoniae infection in gilts in natural conditions. Forty-four gilts were selected at 20 days of age (doa) and M. hyopneumoniae detection was evaluated using laryngeal swabs for PCR testing every month, resulting in 12 samplings. Additionally, 220 piglets born from the selected dams were sampled one day prior to weaning to evaluate vertical transmission. The results of this study showed that the first detection occurred at 110 doa and a significant increase was observed at 140 doa (p<0.05). A small proportion (2.3%) of positive gilts was detected one day prior to weaning and no piglets were detected positive at the same sampling moment. Moreover, 77.2% of the gilts was detected positive for one to three months, 4.6% for four to five months, and a lack of detection was observed in 18.2% of the gilts, indicating the presence of negative subpopulations in positive farms. A second study assessed the M. hyopneumoniae detection in self-replacement gilts longitudinally. A total of 298 gilts from three positive multiplier farms were selected and sampled once for ELISA testing and two or three times for PCR. Moreover, vertical transmission was evaluated in 425 piglets one day prior to weaning, and the genetic variability within farms was assessed in gilts by MLVA (Multiple Locus Variablenumber tandem repeats Analysis). The prevalence of positive gilts at 150 doa ranged from 47 to 67.4% within farms by PCR, decreases were observed up to the last sampling in all farms (p<0.05), and no positive piglets were detected prior to weaning. A lack of detection was observed in 30.7% of the gilts during the study, and high genetic variability was detected within farms. In the third study, 210 M. hyopneumoniae negative purchased gilts were introduced in three farms with two types of acclimation flow (all-in all-out or continuous flow). The gilts were selected for ELISA and PCR testing in a longitudinal study, which aimed to compare the infection dynamics regarding the type of flow. Also, genetic variability was assessed by MLVA. The results showed a significant increase (p<0.05) in the prevalence of M. hyopneumoniae positive gilts by PCR in the second sampling, and a decrease over time regardless the type of flow. The ELISA results revealed a significant increase in the prevalence of positive gilts in the three farms (p<0.05) from the first to the second sampling, which remained high up to the completion of the study. Moreover, limited genetic variability of M. hyopneumoniae was observed by MLVA testing. A fourth study was also performed, which aimed to assess the absorption and detection of M. hyopneumoniae using two types of swabs (nylon-flocked and rayon-bud). The results indicated a higher absorption and M. hyopneumoniae detection by PCR using nylon-flocked swabs (p<0.05).

Estratégias para minimizar o efeito do balanço energético negativo (BEN) em vacas leiteiras vêm sendo estudadas constantemente no passar dos anos, pois o período de transição é caracterizado por grande estresse metabólico. O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros metabólicos, produtivos e reprodutivos em vacas da raça Holandesa após a aplicação de drench no pós-parto imediato e 24 h após, como alternativa para minimizar o BEN e proporcionar melhor desempenho produtivo e reprodutivo aos animais. Foram utilizadas 129 vacas, 64 no grupo 1 (1ª e 2ª lactação) e 65 no grupo 2 (≥ 3ª lactação), distribuídas em: verão (n= 63) e inverno (n= 66) e região da Serra Gaúcha (Fazenda A, n= 48) e Planato Médio (Fazenda B, n= 81). Foram coletadas amostras de sangue para obtenção de soro e plasma e determinação de β-hidroxibutirato (BHB) com sistema Abbot Precision Xtra. Foi medido o escore de condição corporal e a temperatura corporal, e realizado acompanhamento de controle leiteiro para avaliar produção e composição de leite. Foi realizada ultrassonografia ovariana para avaliação de ciclicidade ovárica e primeira ovulação pós-parto. O tratamento drench provocou uma tendência a diminuir os valores de BHB sérico no período experimental, sendo que, no período de verão essa diminuição foi significativa na Fazenda A. Na Fazenda B, nas semanas 3 e 4, o tratamento com drench aumentou significativamente a produção de leite nos grupos 1 e 2. A exceção foi no grupo 1 no período de verão, onde o efeito foi negativo. Também na Fazenda B, o tratamento com drench teve efeito positivo no percentual de gordura nas vacas do grupo 1 e efeito negativo nas vacas do grupo 2. Parâmetros reprodutivos não tiveram interações significativas. Em conclusão, o tratamento com drench preveniu a ocorrência de cetose subclínica, aumentou a produção leiteira no inverno e no verão em vacas de 3 ou mais lactações e também aumentou o percentual de gordura no leite em vacas de uma ou duas lactações. / Strategies to minimize the effect of negative energy balance (NEB) in dairy cows are being studied constantly over the years, since the transition period is characterized by excessive metabolic stress. The present study had the objective to evaluate metabolic, productive and reproductive parameters in dairy cows after application of drench in the immediate postpartum period and 24 hours after as an alternative to minimize NEB providing better productive and reproductive performance of animals. 129 cows, 64 were used in group 1 (1st and 2nd lactation ) and 65 in group 2 ( ≥ 3rd lactation ), distributed in: summer ( n = 63 ) and winter ( n = 66 ) and Serra Gaucha (Farm A, n = 48) and Planato Médio (Farm B, n = 81 ) . Blood samples were collected to obtain serum and plasma and determination of β-hydroxybutyrate (BHB) with the Abbott Precision Xtra system . Body condition score and body temperature, were also obtained by milk information system to evaluate production and milk composition was measured. Ovarian ultrasonography was performed for evaluation of cyclicity and days to first ovulation postpartum. The drench treatment had a trend towards significance in the reduction of mean serum BHB during the experimental period, whereas in the summer period this decrease was significant in farm A. On farm B at weeks 3 and 4, drench significantly increased milk production in groups 1 and 2. Except for group 1 during the summer, where the effect was negative. Also on farm B, drench had a positive effect on fat percentage in cows of group 1 and negative effect on cows in group 2. Reproductive parameters showed no significant interactions. In conclusion, drench prevented the occurrence of subclinical ketosis, increased milk production during winter and during summer in cows of third or more lactation and also increased of milk fat percentage in cows of first and second lactations.

Muito se tem investido em pesquisa na compreensão dos processos e fenômenos envolvidos nas respostas imunes às infecções e, principalmente, no desenvolvimento de recursos e tecnologias a fim favorecer os avanços no tratamento da sepse. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos anti-inflamatórios das células-tronco mesenquimais (MSCs) quando administradas por duas diferentes vias: intraperitoneal (IP) e intravenosa (IV), determinando qual a melhor via de traramento, em modelo experimental murino de sepse. Foram utilizados 31 camundongos da linhagem C57Bl/6 para padronização do modelo de Ligadura e Perfuração do Ceco (CLP). Após os experimentos de estabelecimento do modelo, outros 60 animais foram distribuídos em nove grupos: grupo CONTROLE, grupo sepse sem tratamento (SEPSE), grupo SHAM, grupo sepse com administração de PBS via IV (SEPSE PBS IV), grupo sham com administração de PBS via IV (SHAM PBS IV), grupo sham com administração de MSCs via IV (SHAM MSC IV), grupo sham com administração de MSCs via IP (SHAM MSC IP), grupo sepse com administração de MSCs via IP (SEPSE MSC IP) e grupo sepse com administração de MSCs via IV (SEPSE MSC IV). Transcorridas 6 horas da indução da sepse pelo modelo CLP, padronizado com oclusão total do ceco seguida de uma única punctura com agulha 18G, os animais receberam o tratamento de acordo com o grupo que compunham. Após 24 horas do procedimento cirúrgico, procedeu-se a eutanásia dos animais para coleta dos órgãos, sangue e fluidos peritoneais. As amostras foram analisadas quanto aos parâmetros histológicos, hematológicos e inflamatórios, respectivamente. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que: 1) O modelo CLP padronizado com oclusão total do ceco e uma punctura com agulha 18G induziu sepse aguda nos animais; 2) A administração das MSCs via IP foi atenuadamente mais eficaz na redução da concentração de leucócitos hematológicos e no quadro de trombocitopenia instalado nos animais com sepse induzida; 3) A injeção IP das MSCs diminuiu, com maior eficiência, a infiltração de células inflamatórias na região abdominal dos animais doentes. 4) As citocinas IL-6, TNF-α e IL- 10 obtiveram queda de suas concentrações séricas com a terapia nos animais dos grupos submetidos à indução da sepse. 5) O tratamento com MSCs melhorou o grau de peritonite, necrose e ulcerações observadas na histologia do ceco dos animais, com melhores resultados encontrados no grupo SEPSE MSC IP. / Much has been invested on research regarding comprehension of the processes and phenomena that are involved in immune responses to infections and mainly on resources and technologies development in order to support advances in the treatment of sepsis. This study has been performed in order to evaluate the anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells (MSCs) when administered by two different routes: intraperitoneal (IP) and intravenous (IV), to determine which is the best treatment route, in an experimental murine model of sepsis. Thirty-one C57Bl/6 strain mice have been used to standardize the Cecal Ligation and Perforation (CLP) model. After the establishment of CLP, 60 animals were allocated into nine groups: CONTROL group, sepsis group without treatment (SEPSE), SHAM group, sepsis group with intravenously administration of PBS (SEPSE PBS IV), sham group with intravenously administration of PBS (SHAM PBS IV), sham group with intravenously administration of MSCs (SHAM MSC IV), sham group with intraperitoneal administration of MSCs (SHAM MSC IP), sepsis group with intraperitoneal administration of MSCs (SEPSE MSC IP), and sepsis group with intravenously administration of MSCs (SEPSE MSC IV). 6 hours after the induction of sepsis by CLP model, standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle, the animals received the treatment according to the group they belonged to. 24 hours after the surgical procedure the animals were sacrificed in order to get the organs, blood and peritoneal fluid. The samples were analyzed for histological, haematological and inflammatory parameters, respectively. Basing on the results it was concluded that:1) The CLP model standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle induced acute sepsis in the animals; 2) The intraperitoneal administration of MSCs was slightly better in reducing the hematological concentration of leukocytes and the installed picture of thrombocytopenia in sepsis groups; 3) the intraperitoneal injection of MSCs decreased, with greater efficiency, the inflammatory cells infiltration in the abdominal cavity of sepsis groups. 4) The IL-6, TNF-α and IL-10 cytokines had their serum concentrations decline with therapy, in the groups subjected to induction of sepsis. 5) Treatment with MSCs improved the severity of peritonitis, necrosis and ulceration observed in cecum histology, with better results in the SEPSIS MSC IP group.

Estratégias para minimizar o efeito do balanço energético negativo (BEN) em vacas leiteiras vêm sendo estudadas constantemente no passar dos anos, pois o período de transição é caracterizado por grande estresse metabólico. O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros metabólicos, produtivos e reprodutivos em vacas da raça Holandesa após a aplicação de drench no pós-parto imediato e 24 h após, como alternativa para minimizar o BEN e proporcionar melhor desempenho produtivo e reprodutivo aos animais. Foram utilizadas 129 vacas, 64 no grupo 1 (1ª e 2ª lactação) e 65 no grupo 2 (≥ 3ª lactação), distribuídas em: verão (n= 63) e inverno (n= 66) e região da Serra Gaúcha (Fazenda A, n= 48) e Planato Médio (Fazenda B, n= 81). Foram coletadas amostras de sangue para obtenção de soro e plasma e determinação de β-hidroxibutirato (BHB) com sistema Abbot Precision Xtra. Foi medido o escore de condição corporal e a temperatura corporal, e realizado acompanhamento de controle leiteiro para avaliar produção e composição de leite. Foi realizada ultrassonografia ovariana para avaliação de ciclicidade ovárica e primeira ovulação pós-parto. O tratamento drench provocou uma tendência a diminuir os valores de BHB sérico no período experimental, sendo que, no período de verão essa diminuição foi significativa na Fazenda A. Na Fazenda B, nas semanas 3 e 4, o tratamento com drench aumentou significativamente a produção de leite nos grupos 1 e 2. A exceção foi no grupo 1 no período de verão, onde o efeito foi negativo. Também na Fazenda B, o tratamento com drench teve efeito positivo no percentual de gordura nas vacas do grupo 1 e efeito negativo nas vacas do grupo 2. Parâmetros reprodutivos não tiveram interações significativas. Em conclusão, o tratamento com drench preveniu a ocorrência de cetose subclínica, aumentou a produção leiteira no inverno e no verão em vacas de 3 ou mais lactações e também aumentou o percentual de gordura no leite em vacas de uma ou duas lactações. / Strategies to minimize the effect of negative energy balance (NEB) in dairy cows are being studied constantly over the years, since the transition period is characterized by excessive metabolic stress. The present study had the objective to evaluate metabolic, productive and reproductive parameters in dairy cows after application of drench in the immediate postpartum period and 24 hours after as an alternative to minimize NEB providing better productive and reproductive performance of animals. 129 cows, 64 were used in group 1 (1st and 2nd lactation ) and 65 in group 2 ( ≥ 3rd lactation ), distributed in: summer ( n = 63 ) and winter ( n = 66 ) and Serra Gaucha (Farm A, n = 48) and Planato Médio (Farm B, n = 81 ) . Blood samples were collected to obtain serum and plasma and determination of β-hydroxybutyrate (BHB) with the Abbott Precision Xtra system . Body condition score and body temperature, were also obtained by milk information system to evaluate production and milk composition was measured. Ovarian ultrasonography was performed for evaluation of cyclicity and days to first ovulation postpartum. The drench treatment had a trend towards significance in the reduction of mean serum BHB during the experimental period, whereas in the summer period this decrease was significant in farm A. On farm B at weeks 3 and 4, drench significantly increased milk production in groups 1 and 2. Except for group 1 during the summer, where the effect was negative. Also on farm B, drench had a positive effect on fat percentage in cows of group 1 and negative effect on cows in group 2. Reproductive parameters showed no significant interactions. In conclusion, drench prevented the occurrence of subclinical ketosis, increased milk production during winter and during summer in cows of third or more lactation and also increased of milk fat percentage in cows of first and second lactations.

Muito se tem investido em pesquisa na compreensão dos processos e fenômenos envolvidos nas respostas imunes às infecções e, principalmente, no desenvolvimento de recursos e tecnologias a fim favorecer os avanços no tratamento da sepse. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos anti-inflamatórios das células-tronco mesenquimais (MSCs) quando administradas por duas diferentes vias: intraperitoneal (IP) e intravenosa (IV), determinando qual a melhor via de traramento, em modelo experimental murino de sepse. Foram utilizados 31 camundongos da linhagem C57Bl/6 para padronização do modelo de Ligadura e Perfuração do Ceco (CLP). Após os experimentos de estabelecimento do modelo, outros 60 animais foram distribuídos em nove grupos: grupo CONTROLE, grupo sepse sem tratamento (SEPSE), grupo SHAM, grupo sepse com administração de PBS via IV (SEPSE PBS IV), grupo sham com administração de PBS via IV (SHAM PBS IV), grupo sham com administração de MSCs via IV (SHAM MSC IV), grupo sham com administração de MSCs via IP (SHAM MSC IP), grupo sepse com administração de MSCs via IP (SEPSE MSC IP) e grupo sepse com administração de MSCs via IV (SEPSE MSC IV). Transcorridas 6 horas da indução da sepse pelo modelo CLP, padronizado com oclusão total do ceco seguida de uma única punctura com agulha 18G, os animais receberam o tratamento de acordo com o grupo que compunham. Após 24 horas do procedimento cirúrgico, procedeu-se a eutanásia dos animais para coleta dos órgãos, sangue e fluidos peritoneais. As amostras foram analisadas quanto aos parâmetros histológicos, hematológicos e inflamatórios, respectivamente. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que: 1) O modelo CLP padronizado com oclusão total do ceco e uma punctura com agulha 18G induziu sepse aguda nos animais; 2) A administração das MSCs via IP foi atenuadamente mais eficaz na redução da concentração de leucócitos hematológicos e no quadro de trombocitopenia instalado nos animais com sepse induzida; 3) A injeção IP das MSCs diminuiu, com maior eficiência, a infiltração de células inflamatórias na região abdominal dos animais doentes. 4) As citocinas IL-6, TNF-α e IL- 10 obtiveram queda de suas concentrações séricas com a terapia nos animais dos grupos submetidos à indução da sepse. 5) O tratamento com MSCs melhorou o grau de peritonite, necrose e ulcerações observadas na histologia do ceco dos animais, com melhores resultados encontrados no grupo SEPSE MSC IP. / Much has been invested on research regarding comprehension of the processes and phenomena that are involved in immune responses to infections and mainly on resources and technologies development in order to support advances in the treatment of sepsis. This study has been performed in order to evaluate the anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells (MSCs) when administered by two different routes: intraperitoneal (IP) and intravenous (IV), to determine which is the best treatment route, in an experimental murine model of sepsis. Thirty-one C57Bl/6 strain mice have been used to standardize the Cecal Ligation and Perforation (CLP) model. After the establishment of CLP, 60 animals were allocated into nine groups: CONTROL group, sepsis group without treatment (SEPSE), SHAM group, sepsis group with intravenously administration of PBS (SEPSE PBS IV), sham group with intravenously administration of PBS (SHAM PBS IV), sham group with intravenously administration of MSCs (SHAM MSC IV), sham group with intraperitoneal administration of MSCs (SHAM MSC IP), sepsis group with intraperitoneal administration of MSCs (SEPSE MSC IP), and sepsis group with intravenously administration of MSCs (SEPSE MSC IV). 6 hours after the induction of sepsis by CLP model, standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle, the animals received the treatment according to the group they belonged to. 24 hours after the surgical procedure the animals were sacrificed in order to get the organs, blood and peritoneal fluid. The samples were analyzed for histological, haematological and inflammatory parameters, respectively. Basing on the results it was concluded that:1) The CLP model standardized with total occlusion followed by a single cecal puncture with a 18G needle induced acute sepsis in the animals; 2) The intraperitoneal administration of MSCs was slightly better in reducing the hematological concentration of leukocytes and the installed picture of thrombocytopenia in sepsis groups; 3) the intraperitoneal injection of MSCs decreased, with greater efficiency, the inflammatory cells infiltration in the abdominal cavity of sepsis groups. 4) The IL-6, TNF-α and IL-10 cytokines had their serum concentrations decline with therapy, in the groups subjected to induction of sepsis. 5) Treatment with MSCs improved the severity of peritonitis, necrosis and ulceration observed in cecum histology, with better results in the SEPSIS MSC IP group.

O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é responsável por diferentes síndromes que afetam principalmente bovinos em todo o mundo, causando grandes perdas econômicas. A principal medida de controle desta infecção é a detecção e retirada dos animais persistentemente infectados (PI) do rebanho. O presente trabalho analisou a infecção persistente por este vírus em um rebanho bovino de gado de corte, vacinado com vacina inativada contra BVDV tipo 1 e localizado no Município de Viamão, Rio Grande do Sul, de novembro de 2007 a maio de 2009. Para a triagem de animais PI, amostras de soro, sangue com EDTA e fragmentos de orelhas foram coletadas principalmente de animais com idade entre 2-3 meses. Os testes utilizados compreenderam o isolamento viral, a transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RT-PCR), a imuno-histoquímica (IHQ) e a sorologia pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). De 1300 animais da propriedade, coletou-se 179 amostras e em 6 se identificou a infecção persistente pelo BVDV tipo 2 não citopático (ncp). Os principais sinais clínicos verificados na propriedade englobavam nascimento de bezerros fracos, grande número de animais com retardo no crescimento e catarata congênita uni e bilateral. As principais lesões observadas em 5 animais necropsiados consistiam de aumento dos linfonodos mesentéricos, evidenciação das placas de Peyer e em um animal verificou-se pododermatite com lesões crostosas no plano nasal e na região periocular. Os achados microscópicos caracterizavam-se principalmente por infiltrado mononuclear na lâmina própria do intestino delgado e rarefação linfoide com infiltrado histiocitário nos centrofoliculares de linfonodos e nas placas de Peyer. A demonstração do antígeno viral nos 5 animais avaliados ocorreu principalmente em: queratinócitos da epiderme , no epitélio de folículos pilosos e células dendríticas da derme de orelhas e pele; histiócitos e em linfócitos dos linfonodos; células foliculares da tireoide; no citoplasma de neurônios e em menor escala, em células da micróglia no córtex cerebral e no hipocampo. A análise de pools de soro de animais suspeitos pelo RT-PCR em conjunto com a avaliação imuno-histoquímica de biópsia de orelhas mostraram bons resultados e podem ser úteis como método de triagem de infecções persistentes em rebanhos, inclusive em animais menores de 6 meses de idade por não sofrerem interferência de anticorpos maternos. A retirada e eliminação dos animais PI surtiram efeitos positivos na propriedade, entretanto novas coletas devem ser realizadas em 2010. / Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is responsible for different syndromes that affect mainly cattle worldwide, causing important economic losses. The main control measure for this infection is the detection and removal of all persistently animals infected (PI) from the herd. This study examined the persistent infection for this virus in a beef cattle herd, vaccinated with killed vaccine against BVDV type 1, located in the county of Viamão, Rio Grande do Sul, southern Brazil, from november 2007 to may 2009. For the screening of PI animals, serum, blood with EDTA and fragments of ears were collected mainly from animals aged between 2-3 months. Tests used were viral isolation, reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), immunohistochemistry (IHC) and serology by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). From 1300 animals, 179 samples were collected and 6 were identified as persistent infected for BVDV type 2 non-cytopathic (ncp). The most important clinical signs observed on the farm were birth of weak calves, many animals with growth retardation and unilateral or bilateral cataract. The main gross lesions observed at the necropsy of 5 animals were enlargement of mesenteric lymph nodes and Peyer's patches, and in one case, pododermatitis with crusted lesions on nasal planum and periocular region. The microscopic findings were characterized mostly by mononuclear infiltrate in the lamina propria primarily in small intestine and lymphoid depletion with histiocytic infiltrate in follicular centers of lymph nodes and Peyer's patches. In 5 animals evaluated the viral antigen was more frequently demonstrated in epidermal keratinocytes, epithelium of hair follicles and dendritic cells of the dermis of the ears and skin, histiocytes and lymphocytes in lymph nodes, thyroid follicular cells, in the cytoplasm of neurons and to a lesser extent, in glial cells in the cerebral cortex and hippocampus. The analysis of pools of serum from animals suspected by RT-PCR together with immunohistochemical analysis of ears biopsy showed good results and can be useful as screening method for persistent infections in cattle, including animals under 6 months age, because they not suffer interference from maternal antibodies. The removal and elimination of PI animals had positive effects on the property, however new collection should be carried out in 2010.

O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é responsável por diferentes síndromes que afetam principalmente bovinos em todo o mundo, causando grandes perdas econômicas. A principal medida de controle desta infecção é a detecção e retirada dos animais persistentemente infectados (PI) do rebanho. O presente trabalho analisou a infecção persistente por este vírus em um rebanho bovino de gado de corte, vacinado com vacina inativada contra BVDV tipo 1 e localizado no Município de Viamão, Rio Grande do Sul, de novembro de 2007 a maio de 2009. Para a triagem de animais PI, amostras de soro, sangue com EDTA e fragmentos de orelhas foram coletadas principalmente de animais com idade entre 2-3 meses. Os testes utilizados compreenderam o isolamento viral, a transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RT-PCR), a imuno-histoquímica (IHQ) e a sorologia pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). De 1300 animais da propriedade, coletou-se 179 amostras e em 6 se identificou a infecção persistente pelo BVDV tipo 2 não citopático (ncp). Os principais sinais clínicos verificados na propriedade englobavam nascimento de bezerros fracos, grande número de animais com retardo no crescimento e catarata congênita uni e bilateral. As principais lesões observadas em 5 animais necropsiados consistiam de aumento dos linfonodos mesentéricos, evidenciação das placas de Peyer e em um animal verificou-se pododermatite com lesões crostosas no plano nasal e na região periocular. Os achados microscópicos caracterizavam-se principalmente por infiltrado mononuclear na lâmina própria do intestino delgado e rarefação linfoide com infiltrado histiocitário nos centrofoliculares de linfonodos e nas placas de Peyer. A demonstração do antígeno viral nos 5 animais avaliados ocorreu principalmente em: queratinócitos da epiderme , no epitélio de folículos pilosos e células dendríticas da derme de orelhas e pele; histiócitos e em linfócitos dos linfonodos; células foliculares da tireoide; no citoplasma de neurônios e em menor escala, em células da micróglia no córtex cerebral e no hipocampo. A análise de pools de soro de animais suspeitos pelo RT-PCR em conjunto com a avaliação imuno-histoquímica de biópsia de orelhas mostraram bons resultados e podem ser úteis como método de triagem de infecções persistentes em rebanhos, inclusive em animais menores de 6 meses de idade por não sofrerem interferência de anticorpos maternos. A retirada e eliminação dos animais PI surtiram efeitos positivos na propriedade, entretanto novas coletas devem ser realizadas em 2010. / Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is responsible for different syndromes that affect mainly cattle worldwide, causing important economic losses. The main control measure for this infection is the detection and removal of all persistently animals infected (PI) from the herd. This study examined the persistent infection for this virus in a beef cattle herd, vaccinated with killed vaccine against BVDV type 1, located in the county of Viamão, Rio Grande do Sul, southern Brazil, from november 2007 to may 2009. For the screening of PI animals, serum, blood with EDTA and fragments of ears were collected mainly from animals aged between 2-3 months. Tests used were viral isolation, reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), immunohistochemistry (IHC) and serology by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). From 1300 animals, 179 samples were collected and 6 were identified as persistent infected for BVDV type 2 non-cytopathic (ncp). The most important clinical signs observed on the farm were birth of weak calves, many animals with growth retardation and unilateral or bilateral cataract. The main gross lesions observed at the necropsy of 5 animals were enlargement of mesenteric lymph nodes and Peyer's patches, and in one case, pododermatitis with crusted lesions on nasal planum and periocular region. The microscopic findings were characterized mostly by mononuclear infiltrate in the lamina propria primarily in small intestine and lymphoid depletion with histiocytic infiltrate in follicular centers of lymph nodes and Peyer's patches. In 5 animals evaluated the viral antigen was more frequently demonstrated in epidermal keratinocytes, epithelium of hair follicles and dendritic cells of the dermis of the ears and skin, histiocytes and lymphocytes in lymph nodes, thyroid follicular cells, in the cytoplasm of neurons and to a lesser extent, in glial cells in the cerebral cortex and hippocampus. The analysis of pools of serum from animals suspected by RT-PCR together with immunohistochemical analysis of ears biopsy showed good results and can be useful as screening method for persistent infections in cattle, including animals under 6 months age, because they not suffer interference from maternal antibodies. The removal and elimination of PI animals had positive effects on the property, however new collection should be carried out in 2010.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-03Bitstream added on 2014-06-13T20:30:49Z : No. of bitstreams: 1 machado_lp_me_botfmvz.pdf: 341603 bytes, checksum: b779869a2fd113691f68f4c66bf1832f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The objective of this study was to evaluate the oxidative erythrocyte metabolism in equines submitted to exercise on high-speed treadmill and the effect of vitamin E supplementation. Eight adults Arabian horses, males and females, were divided: control group (CG) and group supplemented with vitamin E (EG), (1000 UI/animal/day). All the equines were submitted to exercise with two incremental tests (T1 and T2). Exercise protocol for two tests started with 1.8m/s for 5 min, 4m/s for 3 min, 6m/s for 2 min and right after, periods of 1 min, challenging the equines with increasing speeds until the animals had no condition to keep the exercise on a treadmill inclined at 7%. Between the tests, a training protocol was performed for 20 days. Blood samples were taken before, during, and until 120 hours after exercise to determine erytrogram, erythrocyte reduced glutathione (GSH), superoxide dismutase (SOD), methemoglobin, erythrocyte osmotic fragility (EOF), total plasmatic protein (TPP), seric malondialdehyde (MDA) and vitamin E, seric enzymatic activity of aspartate aminotransferase (AST) and creatine kinase (CK), blood lactate and bloodgas. The results were compared by non-parametric Mann-Whitney and Friedman tests. Although differences were detected in only a few variables, it was possible to see increase in erytrogram and TPP by spleenic contraction and/or decrease of the plasma volume, and increase the erythrocyte volume by swelling. Sport anemia was observed between 24h and 120h after the exercise. The methemoglobin was compatible with the physiological levels and the EOF increased during the exercise in both groups. The MDA elevation confirm the liperoxidation by exercise effect, less intense EG by the supplementation with vitamin E. The exercise also induced increase of AST and CK enzymes, increase of blood lactate and metabolic acidosis.

Orientador : Aguemi Kohayagawa / Banca: Alexandre Secorun Borges / Banca: Maria Adriana Machado Loba e Silva / Abstract: The objective of this study was to evaluate the oxidative erythrocyte metabolism in equines submitted to exercise on high-speed treadmill and the effect of vitamin E supplementation. Eight adults Arabian horses, males and females, were divided: control group (CG) and group supplemented with vitamin E (EG), (1000 UI/animal/day). All the equines were submitted to exercise with two incremental tests (T1 and T2). Exercise protocol for two tests started with 1.8m/s for 5 min, 4m/s for 3 min, 6m/s for 2 min and right after, periods of 1 min, challenging the equines with increasing speeds until the animals had no condition to keep the exercise on a treadmill inclined at 7%. Between the tests, a training protocol was performed for 20 days. Blood samples were taken before, during, and until 120 hours after exercise to determine erytrogram, erythrocyte reduced glutathione (GSH), superoxide dismutase (SOD), methemoglobin, erythrocyte osmotic fragility (EOF), total plasmatic protein (TPP), seric malondialdehyde (MDA) and vitamin E, seric enzymatic activity of aspartate aminotransferase (AST) and creatine kinase (CK), blood lactate and bloodgas. The results were compared by non-parametric Mann-Whitney and Friedman tests. Although differences were detected in only a few variables, it was possible to see increase in erytrogram and TPP by spleenic contraction and/or decrease of the plasma volume, and increase the erythrocyte volume by swelling. Sport anemia was observed between 24h and 120h after the exercise. The methemoglobin was compatible with the physiological levels and the EOF increased during the exercise in both groups. The MDA elevation confirm the liperoxidation by exercise effect, less intense EG by the supplementation with vitamin E. The exercise also induced increase of AST and CK enzymes, increase of blood lactate and metabolic acidosis. / Mestre