Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-12-18T13:43:03Z No. of bitstreams: 1 2014_FabieniTiemyMenezesOkiyama.pdf: 1068633 bytes, checksum: 4392f55c77685b9ac6e3975585b0b5ae (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-12-29T19:23:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_FabieniTiemyMenezesOkiyama.pdf: 1068633 bytes, checksum: 4392f55c77685b9ac6e3975585b0b5ae (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-29T19:23:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_FabieniTiemyMenezesOkiyama.pdf: 1068633 bytes, checksum: 4392f55c77685b9ac6e3975585b0b5ae (MD5) / Problemas relativos a lesões e insuficiência cardíaca são preocupantes, bem como as modificações morfológicas inerentes a esta afecção. No anseio da retratação de dados inovadores e aplicáveis a anatomia cardíaca foi a motivação da escolha do zebrafish (Danio rerio) como modelo de pesquisa. Acrescido ainda das suas diversas qualidades morfofuncionais e principalmente a sua capacidade de regeneração cardíaca. Utilizou-se 10 peixes, entre machos e fêmeas para a preparação histológica do seu tecido cardíaco. Quantificou-se a densidade de cardiomiócitos, tecido conjuntivo e fibras de colágeno tipo I e tipo III, coradas pela coloração Picrosirius Red. Todos os parâmetros comparados entre átrio (AT) e ventrículo (VT) houve diferença estatística, provavelmente pela diferença de tamanho entre suas camadas. O átrio de machos e fêmeas juntos (GT) apresentou maior densidade de núcleo de cardiomiócitos no átrio (6,93% ± 0,51) que no ventrículo (3,84% ± 0,20), e maior densidade de miocárdio no ventrículo (68,77% ± 1,25) que o no átrio (60,30% ± 2,44). O ventrículo de GT (8,02% ± 0,61) apresentou menor densidade de tecido conjuntivo que o átrio (24,50% ± 1,35), sendo que machos (átrio:22,80% ± 1,74 e ventrículo:13,47% ± 1,08) apresentaram maior densidade no ventrículo e menor no átrio que fêmeas (átrio: 27,96% ± 1,97 e ventrículo:4,63% ± 0,29). Ainda no grupo GT, a densidade de fibras tipo I no átrio foi menor comparado às fibras do tipo III (4,28% ± 1,20 e 5,68% ± 1,90, respectivamente), e maior no ventrículo (3,22% ± 0,89 e 0,14% ± 0,05, respectivamente) assim como em outras espécies. Possivelmente essa diferença está ligada a fatores hormonais e comportamentais tanto no tecido conjuntivo quanto no colágeno. Com base nos resultados encontrados abre-se o leque dentro destes parâmetros para estudos futuros relacionados à espécie estudada. ___________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Problems relating to injuries and heart failure are troubling as well as morphological changes inherent in this condition. Longing in the retraction of innovative and applicable data cardiac anatomy was the motivation of the choice of the zebrafish (Danio rerio) as a research model. Plus its various morphological and functional qualities, and especially its ability to cardiac regeneration. Ten fish were used between males and females for histological preparation of their cardiac tissue. Quantified the density of cardiomyocytes, connective tissue and collagen type I and type III fibers, stained by Picrosirius red. All parameters comparing atrium (AT) and ventricular (VT) was no statistical difference, probably due to the size difference between its layers. The atrium of males and females together (GT) showed higher core density lobby (6.93% ± 0.51) than in the ventricle (3.84 ± 0.20%), and higher density of the ventricular myocardium (68, 77% ± 1.25) than in the atrium (60.30% ± 2.44). The GT ventricle (8.02 ± 0.61%) showed lower density of connective tissue that the atrium (24.50 ± 1.35%) and males (atrium: 22.80% ± 1.74 and ventricle: 13.47% ± 1.08) showed higher density in the ventricle and lower in females (atrium: 27.96% ± 1.97 and ventricle: 4.63% ± 0.29). Also in GT, the density of fibers type I in the atrium was lower compared to the fibers of type III (4.28% ± 1.20 and 5.68 ± 1.90%) and higher in the ventricle (3, 22% ± 0.89 and 0.14 ± 0.05%) as well as other species. Possibly this difference is linked to hormonal and behavioral factors in both the connective tissue and the collagen. Based on these results opens up the range within these parameters for future studies related to the species studied.

Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica é uma das formas mais comuns de doença hepática crônica no mundo ocidental. A taurina é um aminoácido que apresenta atividade antioxidante e, por isso, pode ser uma terapia promissora nessa hepatopatia. Objetivo: Avaliar o efeito da taurina na esteatose hepática induzida por tioacetamida em Danio rerio. Métodos: Os animais foram divididos em 4 grupos (n=288): controle (Ctrl - 20 μL de solução salina), taurina (TAU – 1000 mg/kg), tiaoacetamida (TAA – 300 mg/kg) e com coadministração de taurinatioacetamida (TAU+TAA – 1000 mg/kg + 300 mg/kg). A TAA foi injetado por via intraperitoneal, 3 vezes por semana, durante 2 semanas. A expressão de mRNA, histologia, lipoperoxidação e atividade de enzimas antioxidantes foram avaliadas no tecido hepático e o conteúdo de triglicerídeos foi medido no soro. Resultados: A injeção de TAA induziu esteatose, a qual foi confirmada por métodos histológicos. A lipoperoxidação mostrou ser maior no grupo TAA (0.89 ± 0.06 nmol/mg de proteína) em comparação com o grupo TAU+TAA (0.50 ± 0.01 nmol/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da superóxido dismutase (SOD) no grupo TAU+TAA (5.95 ± 0.40 U SOD/mg de proteína) foi aumentada quando comparada com o grupo TAA (4.14 ± 0.18 U SOD/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da catalase e os triglicerídeos séricos não apresentaram alteração. A expressão de mRNA da Sirtuína 1 (0,5 vezes) e do receptor 2 de adiponectina (0,39 vezes) foram menores nos grupos TAA do que no grupo Ctrl (P<0.05). A expressão de mRNA do TNF-α foi 6,4 vezes maior no grupo TAA que no grupo Ctrl. A expressão de Sirtuina1 foi 2,6 vezes maior na TAU+TAA do que no grupo TAA. Conclusão: A taurina parece melhorar a esteatose hepática, reduzindo o estresse oxidativo e aumentando a expressão da Sirtuina 1. / Background: Nonalcoholic fatty liver disease is one of the most prevalent forms of chronic liver disease in the Western world. Taurine is a amino acid with antioxidants proprieties that may be a promising therapy for treating this disease. Aim: To evaluate the effect of taurine on hepatic steatosis induced by thioacetamide in Danio rerio. Methods: Animals were divided into 4 groups (n=288): control (20 μl of saline solution), taurine (1000 mg/kg), thioacetamide (300 mg/kg) and with coadministration of taurine-thioacetamide group (1000 mg/kg plus 300 mg/kg). Thioacetamide was injected intraperitoneally three times a week for 2 weeks. The mRNA expression, lipoperoxidation, antioxidant enzymatic activity and histological analyses were evaluated in the liver and the triglyceride content was assessed in the serum. Results: Thioacetamide injection induced steatosis, as indicated by histological analyses. The lipoperoxidation showed significant lipid damage in the thioacetamide group (0.89 ± 0.06 nmol/mg of protein) compared to the taurinethioacetamide group (0.50 ± 0.01 nmol/mg of protein) (P < 0.001). Superoxide dismutase (SOD) activity in the taurine-thioacetamide group (5.95 ± 0.40 SOD/mg of protein) was significantly increased compared to the thioacetamide group (4.14 ± 0.18 U SOD/mg of protein) (P < 0.001). The mRNA expression of SIRT1 (0.5-fold) and Adiponectin receptor 2 (0.39-fold) were lower in the thioacetamide group than the control (P < 0.05). TNF-α mRNA expression was 6.4-fold higher in the thioacetamide group than control (P < 0.05). SIRT1 mRNA expression was 2.6-fold higher in the taurine-thioacetamide group than in the thioacetamide group. Conclusion: Taurine seems to improve hepatic steatosis by reducing oxidative stress and increasing SIRT1 expression.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337735.pdf: 10736659 bytes, checksum: 42e8e2ea8991b610be6a882697f3ee00 (MD5) Previous issue date: 2015 / A formação de vasos sanguíneos compreende processos fundamentaisna embriogênese, ocorrendo inicialmente por vasculogênese, seguidapor angiogênese. Falhas no equilíbrio fisiológico entre indutores pró- eantiangiogênicos podem contribuir com processos fisiopatológicos,referidos como doenças angiogênicas. Plantas medicinais como o Cissusverticillata L., sobre a qual foram reportadas ações antirreumática eantiinflamatória; hipoglicemiante; vasoconstrictora e antimitótica, sãoutilizadas pela medicina popular, no Brasil. Foram estudados os efeitosdos extratos foliares aquoso (EACv) e hidroalcóolico (EHCv) dessaespécie sobre a formação de vasos, por meio de ensaios in vivo(embriões de Gallus domesticus e Danio rerio; camundongos adultos daespécie Mus musculus). E in vitro (com células endoteliais da veiaumbilical humana-HUVEC). Os resultados mostram a presença deflavonoides na composição dos extratos, e ação antioxidante (29-59%).In vivo os extratos, isoladamente ou associados a FGFb ou VEGF-A,retardaram o crescimento dos embriões de D. rerio e G. domesticus, enestas espécies inibiram a vasculogênese e a angiogênese nasmembranas vitelínica e corioalantóica. Os extratos isolados não inibirama angiogênese em camundongos adultos, mas nos três modelos aassociação de extratos+FGFb ou VEGF-A foi capaz de reverter o efeitoangiogênico destes fatores. Em células HUVEC os extratos de C.verticillata reduziram a viabilidade celular e o brotamento vascularestimulado por FGFb e VEGF-A. No entanto, a não efetividade sobremecanismos de proliferação, migração, tubulogênese e modulação deVEGFR2, apontam a necessidade de estudos adicionais paradeterminação dos alvos moleculares do EACv e EHCv. à possívelconcluir que estes inibem vasculogênese e angiogênese embrionária, eque tais ações estariam relacionadas à inibição da viabilidade e aobloqueio do brotamento angiogênico sobre células endoteliais, bemcomo à capacidade dos EACv e EHCv de reverterem a potente atividadede fatores de crescimento angiogênicos, verificados no presente estudo.<br> / Abstract : The formation of blood vessels includes fundamental processes inembryogenesis, taking place through the vasculogenesis, followed ofangiogenesis. Failures in the physiological balance between pro- andantiangiogenic inductors can contribute to pathophysiological processesreferred as angiogenic diseases. Medicinal plants such as Cissusverticillata L. have been reported are used in folk medicine in Brazil asantirheumatic, anti-inflammatory hypoglycemic, vasoconstrictor andantimitotic actions. The effects of aqueous (AECv) and hydroalcoholic(HECv) leaf extracts of C. verticillata on the blood vessels formationwere studied by assaying in vivo (of Gallus domesticus and Danio rerioembryos as well in adults mice of Mus musculus). In vitro, assays withendothelial cells from human umbilical vein (HUVEC) experimentalmodels. The findings show the presence of flavonoids in both extractscomposition and also an antioxidant action (29-59%). Whenadministered in vivo the extracts, alone or associated with FGF orVEGF-A, have slowed the embryonic growth of D. rerio and G.domesticus, and (in this last species) inhibited vasculogenesis andangiogenesis in the yolk and chorioallantoic membranes. The extractsalone did not inhibited advanced angiogenesis, in M. musculus adults,however, in the three animal models the association of extracts + FGFbor VEGF-A was capable to reverse the angiogenic effect of theseexogenous growth factors. There was verified a decrease in cell viabilityand the vascular sprouting as stimulated by FGFb and VEGF-A, inHUVEC. However, the non-effectiveness of important angiogenicmechanisms, such as proliferation and cell migration; tubulogenesis andVEGFR2 receptor modulation, indicate that more studies in order todetermine the molecular targets of the extracts remains to be performed.In conclusion, the findings show that the extracts inhibit embryonicvasculogenesis and angiogenesis, and also that such actions are possiblyrelated with decrease of viability and the blockade of angiogenicsprouting on the endothelial cells, as well the capacity of both extracts toreverse the potent activity of angiogenic growth factors, as observed inthe present study.

Submitted by PPG Biotecnologia Farmac?utica (mpbf@pucrs.br) on 2017-10-05T18:16:51Z No. of bitstreams: 1 DAIANE_BRIDI-DIS.pdf: 2089124 bytes, checksum: c80421954ce799cf7f5b1206f22ec59a (MD5) / Rejected by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br), reason: Devolvido devido ? falta de capa institucional no arquivo PDF, e a publica??o est? cadastrada como "tese" on 2017-10-06T13:39:56Z (GMT) / Submitted by PPG Biotecnologia Farmac?utica (mpbf@pucrs.br) on 2017-10-18T11:48:05Z No. of bitstreams: 1 DAIANE_BRIDI-DIS.pdf: 2205656 bytes, checksum: 0d6301199a5443bf6ca3d070c2d27d6e (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-10-20T12:39:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DAIANE_BRIDI-DIS.pdf: 2205656 bytes, checksum: 0d6301199a5443bf6ca3d070c2d27d6e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-20T12:43:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DAIANE_BRIDI-DIS.pdf: 2205656 bytes, checksum: 0d6301199a5443bf6ca3d070c2d27d6e (MD5) Previous issue date: 2017-08-11 / Glyphosate has become the most widely used herbicide in the world, due to the wide scale adoption of resistant crops, after its introduction in 1996. Glyphosate can be used alone, but is commonly used as an active ingredient of the Roundup? herbicide. This herbicide contains several adjuvants in addition to glyphosate, which may promote an unknown e.g. toxicity Polioxietilenamida (POEA). Zebrafish is gaining popularity in behavioral research, because of its physiological similarity to mammals, ease of manipulation, robust performance, low cost, external fertilization, transparency of embryos larval stages and rapid development. The aim of this study was to evaluate the effects of glyphosate and Roundup? on behavioral and morphological parameters in zebrafish larvae and adult. Zebrafish larvae at 3 days post-fertilization (dpf) and adults were exposed to glyphosate (0.01, 0.065, and 0.5 mg/L) and Roundup? (0.01, 0.065, and 0.5 mg/L) for 96 hours. Immediately after the treatment, behavioral parameters such as locomotor activity and aversive behavior and morphology for the larvae and locomotion, agressive behavior and memory for the adults were analyzed. Zebrafish larvae, the results indicated that there were significant differences in the locomotor activity and aversive behavior by glyphosate and Roundup? when compared to the control. However, there was a decrease in distance traveled and the time spent in zone without stimulation for exposed larvae at doses of glyphosate and Roundup?. A significant decrease in body lenght was observed for larvae exposed to Roundup? in all concentrations tested. Our findings demonstrated that glyphosate and Roundup? exposure reduced the distance traveled, the mean speed and the line crossings in the highest concentration of glyphosate (0.5 mg / L) and 0.065 and 0.5mg/L Roundup? in animals adults. We verified that Roundup?-treated adult zebrafish showed a significant impairment in memory. Our results showed that glyphosate and Roundup? had an effect on agressive behavior. Our findings demonstrated that the effects of isolated and commercial forms of glyphosate promoted differences on locomotion, behavior and morphology of the treated animal, suggesting similar mechanisms of toxicity and cellular response. / O glifosato tornou-se o herbicida mais utilizado no mundo, devido ? ado??o ampla de culturas resistentes, ap?s sua introdu??o em 1996. O glifosato pode ser usado sozinho, mas ? comumente utilizado como ingrediente ativo do herbicida Roundup?. Este herbicida cont?m v?rios adjuvantes, tal como a Polioxietilenamida (POEA), que podem promover uma toxicidade desconhecida. O peixe-zebra est? ganhando popularidade na pesquisa comportamental, devido ? similaridade fisiol?gica com os mam?feros, facilidade de manipula??o, baixo custo, fertiliza??o externa, transpar?ncia de embri?es nos est?gios larvais e desenvolvimento r?pido. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do glifosato e do Roundup? sobre par?metros comportamentais e morfol?gicos em peixe-zebra no est?gio larval e adulto. As larvas com 3 dias p?s-fertiliza??o (dpf) e adultos foram expostos ao glifosato (0,01, 0,065 e 0,5 mg/L) e Roundup? (0,01, 0,065 e 0,5 mg/L) por 96 horas. Imediatamente ap?s o tratamento, realizamos a an?lise de par?metros comportamentais, como atividade locomotora, comportamento aversivo e morfologia para larvas e locomo??o, comportamento agressivo e mem?ria aversiva para adultos. Nas larvas houveram diferen?as significativas na atividade locomotora e comportamento aversivo nos animais tratados com glifosato e Roundup? quando comparado ao controle. Foi observada uma diminui??o na dist?ncia percorrida e na resposta aversiva nas larvas expostas ao glifosato e Roundup?. Observou-se uma diminui??o significativa no comprimento corporal das larvas expostas ao Roundup? em todas as concentra??es testadas. Nossos resultados demonstraram que a exposi??o ao glifosato ou Roundup? reduziu a dist?ncia percorrida, a velocidade m?dia e o n?mero de cruzamentos na maior concentra??o de glifosato (0,5mg/L) e 0,065 e 0,5mg/L de Roundup? em animais adultos. Verificamos que peixe-zebra adulto tratado com Roundup? apresentou um comprometimento significativo na mem?ria. Nossos resultados demostraram que o glifosato e o Roundup? tiveram efeito sobre o comportamento agressivo. Assim, nossos achados demonstraram que os efeitos das formas isoladas e comerciais de glifosato promoveram diferen?as na locomo??o, comportamento e morfologia do animal tratado, sugerindo mecanismos semelhantes de toxicidade e resposta celular.

O enriquecimento ambiental oferece estímulos sensoriais, sociais e cognitivos possibilitando ao animal bem-estar e comportamentos mais próximos ao seu natural. Alterações ambientais podem gerar mudanças de expressão gênica, bem como de comportamento. Assim, o primeiro objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de diferentes protocolos de enriquecimento ambiental sobre o perfil comportamental do peixe-zebra (Danio rerio) adulto. Utilizando pedras ao fundo do aquário, plantas artificiais e os animais em cardume, foram montados três protocolos de enriquecimento ambiental. O “Protocolo 1” foi desenhado para avaliar se um ambiente enriquecido com os componentes básicos de complexidade por sete dias já induziria alterações no comportamento do peixe-zebra. Os resultados obtidos com o teste de open tank demonstraram que os animais do grupo ambiente enriquecido (AE) apresentaram um perfil locomotor diferenciado, com redução de distância percorrida total e velocidade média, quando comparado com animais do grupo ambiente padrão (AP). Entretanto, esta diferença se deve a uma instabilidade comportamental apresentada pelo grupo AP através do aumento de distância percorrida no fundo do aquário. Não foram observadas alterações no comportamento tipo ansiedade e preferência social entre os grupos. Desse modo, desenhamos o “Protocolo 2” a fim de avaliar se a reposta comportamental se manteria durante uma exposição mais longa (quatorze dias) ao enriquecimento ambiental. Entretanto, a diferença no perfil locomotor entre os grupos não foi apresentada neste protocolo. Com esses resultados, demonstrou-se a intensidade do estresse provocado pela simples troca entre aquários idênticos utilizados normalmente em biotérios, necessitando uma ambientação mínima de duas semanas no aquário moradia antes da realização de testes comportamentais Por último, realizamos a avaliação do “Protocolo 3”, com o intuito de estudar se a renovação de itens da complexidade do enriquecimento ambiental dentro do período quatorze dias teria alteração nos resultados já observados. Os animais do grupo AE não apresentaram diferença no perfil comportamental geral mesmo com a inserção de novos objetos, entretanto, houve uma redução de distância percorrida no fundo do aparato. Em peixe-zebra, estudos já demonstraram a indução da plasticidade neuronal e aumento na proliferação neuronal quando submetidos a protocolos de enriquecimento. No modelo de roedores, muitos dos efeitos do enriquecimento ambiental são relacionados ao aumento de neurogênese adulta e de ramificação dendrítica, bem como alteração da funcionalidade de alguns sistemas de neurotransmissores, como o glutamatérgico. Assim, a segunda parte dessa dissertação teve como objetivo a análise da expressão proteica de um dos transportadores vesiculares de glutamato, o vGluT2, em animais expostos aos protocolos citados anteriormente Os vGluTs são expressos em regiões dendríticas dos neurônios e quanto maior sua expressão proteica, maior é a densidade de vesículas sinápticas presentes. Os dados obtidos demonstram que essa resposta é relacionada a consolidação e habituação dos peixes a essa condição por um período mais prolongado no protocolo de enriquecimento ambiental (Protocolo 2). Neste trabalho, foi demonstrado que o protocolo de enriquecimento ambiental altera a resposta comportamental do peixe-zebra adulto, mantendo-a mais regular do que a dos controles e isso, provavelmente, é decorrente da estimulação de processos direcionados a resposta ao estresse da novidade, bem como de vias relacionadas com a adaptabilidade. Ademais, demonstramos que a habituação por um protocolo mais longo à condição de um ambiente enriquecido é mais importante para desencadear o aumento de expressão proteica de vGluT2 em cérebro de peixe-zebra. / Environmental enrichment offers social, sensory and cognitive stimuli making possible animal welfare and behavior closer to its natural. Environmental alterations can generate changes in gene expression as well as in behavior. Thus, first aim of this study was to evaluate the influence of different environmental enrichment protocols in adult zebrafish’s (Danio rerio) behavioral profile. Considering items more commonly described in the literature (stones at tank bottom, artificial plants and shoal), we designed three enriched environment protocols. “Protocol 1” was developed to evaluate if an enriched environment with basics components of complexity for seven days already induce behavior alterations in zebrafish. Results obtained with open tank test demonstrated that animals submitted to environmental enrichment (EE) presented differentiated locomotor profile by a reduction of total distance travelled and average speed when compared with animals in the standard environment (SE). However, this difference was due to a behavioral instability presented by animals of SE group reflected in an increase of distance travelled in last two minutes of the test. There were not alterations in anxiety-like behavior and social preference between the groups. In this way, the “Protocol 2” was designed to evaluate whether these behavioral responses in open tank test remain in a longer exposure (fourteen days) to environmental enrichment. However, the difference in locomotor profile was not significant between groups. With the results of these two first protocols, the intensity of stress provoked by a simple change of equal tanks, normally utilized in facilities, was demonstrated. This also presented the necessity of a minimum of two weeks of habituation in home tank, before conducting any behavioral test Finally, we realized the evaluation of “Protocol 3” in order to study if a renovation of enriched environment items of complexity within the period of fourteen days would change results already observed. Animals of EE group showed no difference in general behavioral profile even with the insertion of new objects in environment, similarly to that observed in Protocol 2, however a reduction of distance travelled was presented by these animals, reflecting a little of Protocol 1. In zebrafish, some studies have already demonstrated the induction of neuronal plasticity and increase of neuronal proliferation when animals were submitted to enriched environment protocols. In rodent models, many of effects of environmental enrichment are related to increased adult neurogenesis and dendritic branching, as well as alteration of functionality of some neurotransmitter system was known – like glutamatergic. Thus, second part of this dissertation had as objective the analyses of protein expression of one of the vesicular glutamate transporter (vGluT), the vGluT2, in those three enriched environment protocols cited previously by Western Blotting technique The vGluTs were expressed in neuronal dendritic regions and more its expression, more density of synaptic vesicles presents in analyzed region. Data obtained demonstrated that the increase of immunocontent of vGluT2 is related with consolidation and habituation of fish to this condition for a longer period in environmental enrichment (Protocol 2). In this study, there was demonstrated that environmental enrichment alters the adult zebrafish’s behavioral response, keeping it more regular than the control group (SE) and, probably, this is due to stimulation of process directed to stress response of novelty as well as of pathways related to adaptability. In addition, we have demonstrated that habituation to the condition by a longer protocol of enriched environment is more important to trigger the increase of vGluT2 protein expression in total brain of adult zebrafish.

Orientador: Ana Marisa Fusco-Almeida / Coorientador: Rondinelli Donizetti Herculano / Banca: Sergio Luiz de Souza Salvador / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Jean Leandro dos Santos / Banca: Janaina Habib Jorge / Resumo: O aumento na incidência de infecções fungicas tem progredido significativamente e dados epidemiológicos mostram que as leveduras do gênero Candida são as principais responsáveis pelas micoses em humanos. A terapêutica para o tratamento dos processos infecciosos causados por fungos tem encontrado uma série de problemas, como a crescente evolução da resistência aos antimicrobianos, o número restrito de fármacos disponíveis e os efeitos colaterais. Neste contexto, faz-se necessário o desenvolvimento de antifúngicos mais eficazes e menos tóxicos. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi o de realizar a síntese e verificar a atividade antifúngica de derivados nitrofuranos contra células planctônicas e biofilmes de cepas padrão de Candida spp., bem como analisar os efeitos tóxicos destes compostos em modelos alternativos ao uso de mamíferos. Realizou-se a síntese e caracterização físico-química de derivados nitrofuranos. Estes tiveram sua sensibilidade testada contra células planctônicas e biofilmes de Candida spp. nos tempos de 6, 24 e 48 horas. Além disso, foram realizados ensaios de citotoxicidade dos derivados nitrofuranos, bem como ensaios de toxicidade em Galleria mellonella, Danio rerio (zebrafish) e Caenorhabditis elegans. Os resultados obtidos mostraram que os compostos L7CF 113 e L7CF165 foram os que apresentaram melhor atividade antifúngica. Os biofilmes de C. albicans, C. krusei e C. glabrata formados em 6 horas apresentaram atividade metabólica reduzida quando em... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The increase in the incidence of fungal infections has progressed significantly and epidemiological data show that yeasts of the genus Candida are the main responsible for the mycoses in humans. Therapy for the treatment of infectious processes caused by fungi has encountered a number of problems, such as the increasing evolution of antimicrobial resistance, the limited number of drugs available and the side effects. In this context, the development of more effective and less toxic antifungal agents is necessary. The objective of the present study was to perform the synthesis and to verify the antifungal activity of nitrofuran derivatives against planktonic cells and biofilms of references strains of Candida spp., as well as to analyze the toxic effects of these compounds in alternative models to the use of mammals. The physicochemical synthesis and characterization of nitrofuran derivatives was carried out. These had their sensitivity tested against planktonic cells and biofilms of Candida spp. at times of 6, 24 and 48 hours. In addition, cytotoxicity assays of nitrofuran derivatives as well as toxicity assays were performed in Galleria mellonella, Danio rerio (zebrafish) and Caenorhabditis elegans. The results obtained showed that the compounds L7CF 113 and L7CF 165 showed the best antifungal activity. The biofilms of C. albicans, C. krusei and C. glabrata formed in 6 hours showed reduced metabolic activity when in contact with the compounds L7CF 113 and L7CF 165 in concentrations equal to or greater than 62.50 μg / mL. The biofilms of C. albicans, C. glabrata, C. krusei, C. parapasilosis and C.tropicalis, formed at 24 and 48 hours, presented reduced metabolic activity for compound L7CF 113 and L7CF 165 in concentrations equal to or greater than 125 μg / mL. The cytotoxicity assays... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Coorientador: Emerson Ferreira Queiroz / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Cristiano Soleo de Funari / Resumo: A espécie Tetrapterys mucronata (Malpighiaceae), uma das espécies ocasionalmente utilizados na Ayahuasca, despertou há algum tempo o interesse do grupo de pesquisa NuBBE para a realização do estudo químico e avaliação das atividades biológicas devido a sua utilização nos rituais religiosos conhecidos como "Santo Daime". Este estudo revelou resultados interessantes nos ensaios preliminares voltados para a identificação de potenciais inibidores de acetilcolinesterase, e mostrou que a espécie T. mucronata tem alcaloides e compostos fenólicos como principais constituintes químicos. Estes resultados levaram ao estudo de outras espécies de Tetrapterys ainda sem estudo químico, incluindo espécies que pertenciam a esse gênero e recentemente foram reclassificados como Niedenzuella, como no caso da Niedenzuella multiglandulosa, espécie selecionada para esta pesquisa de mestrado. Esta espécie é conhecida devido aos efeitos tóxicos que causam a morte de rebanhos bovinos, e de outros mamíferos, em geral, causando prejuízos substanciais na balança comercial brasileira. Este trabalho tem como objetivo a busca de compostos tóxicos presentes nas folhas de Tetrapterys multiglandulosa. Essa espécie foi selecionada por serem relatados na literatura surtos de intoxicação do gado (em 2004 e 2005) em áreas altamente infestadas pela planta, causando morte de vacas e aborto de bezerros no estado do Mato Grosso do Sul. Estudos recentes encontrados na literatura indicam a presença de monofluoracetato (... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tetrapterys mucronata (Malpighiaceae) species, one of the species occasionally used in Ayahuasca, has become of interest of NuBBE research group to perform a chemical study for an evaluation of the biological activities due to its use in religious rituals known as "Santo Daime". This study revealed interesting results in preliminary assays aiming to identify acetylcholinesterase potential inhibitors, and that this species has alkaloids and phenolic compounds as its major chemical compounds. These results led our research group to study other species from Tetrapterys genus without further chemical studies, including species that used to belong to this genus and that recently has changed to Niedenzuella genus, such as Niedenzuella multiglandulosa, the selected species for this master's research. This species is known for causing toxic effects that may cause death in cattle and other mammals in general, causing substantial losses in Brazilian trade balance. The objective of this research is to search for toxic compounds in Niedenzuella multiglandulosa leaves. This species was chosen for having reports in the literature of outbreaks of cattle intoxication (in 2004 and 2005) in which the pasture was highly infested with it, causing death of cows and led to abortion of calves in Mato Grosso do Sul state. Recent studies found in the literature indicate the presence of monofluoracetate (MFA), a well-known toxic substance, in this species, but so far there were no phytochemical and to... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-01-20T13:03:11Z No. of bitstreams: 1 2015_AndreSantosLeonardo.pdf: 1556117 bytes, checksum: 4e296b434783a231f7ba6e7ccbaab1cf (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-01-26T15:23:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_AndreSantosLeonardo.pdf: 1556117 bytes, checksum: 4e296b434783a231f7ba6e7ccbaab1cf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-26T15:23:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_AndreSantosLeonardo.pdf: 1556117 bytes, checksum: 4e296b434783a231f7ba6e7ccbaab1cf (MD5) / O Danio rerio é amplamente utilizado em estudos relacionados ao coração e por isso torna-se importante o conhecimento a respeito da morfologia desse órgão nestes peixes. Este estudo teve como objetivo avaliar as densidades numérica e volumétrica de cardiomiócitos (Nv(c) e Vv(c), respectivamente), densidade volumétrica de interstício(Vv(i)), além das quantidades e distribuições de tecido conjuntivo e vasos no miocárdio em diferentes idades. Para isto, foram analisados 65 peixes, machos e fêmeas, com idades entre 12-18 meses, durante treze semanas. Houve a partir da semana VIII uma diminuição significativa na densidade numérica de cardiomiócitos e na quantidade de vasos, com aumento na quantidade de tecido conjuntivo, além de um aumento significativo na densidade volumétrica de interstício entre as duas primeiras e duas últimas semanas. Comparando os animais da semana I com os da semana XIII, observou-se uma diminuição significativa de 20,7% na densidade numérica de cardiomiócitos e de 13,6% nos vasos, enquanto ocorreu um aumento significativo no conjuntivo de 17,8% e 12% na densidade volumétrica de interstício. Foi verificado que ao longo da idade estudada que não houve alteração significativa na densidade volumétrica de cardiomiócitos. Os resultados deste estudo proporcionam a descrição de componentes do coração do Danio rerio ao longo do tempo, estabelecendo parâmetros quantitativos que podem auxiliar no entendimento dos mecanismos morfofuncionais atuantes nesse órgão. / The zebrafish is widely used in studies related to the heart and therefore becomes important to know about the morphology of this organ in this fish. This study aimed to evaluate the numerical and volumetric densities of cardiomyocytes (Nv(c) and Vv(c), respectively), the volumetric density of interstitium (Vv(i)), besides of amounts and distribution of connective tissue and vessels in the myocardium at different ages. Sixty five fishes, males and females, aged 12-18 months were analyzed for thirteen weeks. There was a significant decrease in the numerical density of cardiomyocytes and vessels, with increased amount of connective tissue from week VIII, and a significant increase in volume density of interstitium between the first two and last two weeks. Comparing the animals of week I with the week XIII, there was a significant decrease of 20.7% in the numerical density of cardiomyocytes and 13.6% in the vessels, whereas there was a significant increase of 17.8% in connective tissue and 12% in volume density of interstitium. It was verified that throughout studied age no significant change in the volume density of cardiomyocytes. The results of this study provide a description of the components of the Danio rerio heart establishing quantitative parameters that can help understand the morphological and functional mechanisms that operate in this organ.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-02-03T12:07:14Z No. of bitstreams: 1 2015_LeticiaBatelliOliveira.pdf: 1067248 bytes, checksum: 3f41835c5e057ac8ca47216c3b8f4f22 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-02-05T12:20:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LeticiaBatelliOliveira.pdf: 1067248 bytes, checksum: 3f41835c5e057ac8ca47216c3b8f4f22 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-05T12:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LeticiaBatelliOliveira.pdf: 1067248 bytes, checksum: 3f41835c5e057ac8ca47216c3b8f4f22 (MD5) / O fígado é um órgão essencial e realiza várias atividades vitais, como metabolização, síntese e armazenamento. Este trabalho teve como objetivo descrever a macroscopia e microscopia do fígado do zebrafish e suas modificações temporais em treze semanas. Foram utilizados quarenta e seis (46) peixes da espécie Danio rerio, adultos, vinte e sete (27) fêmeas e dezenove (19) machos. Sete peixes foram eutanasiados para avaliação macroscópica e três peixes eutanasiados semanalmente durante treze semanas para avaliação microscópica. Realizou-se técnica histológica de rotina e as lâminas foram coradas com Hematoxilina/Eosina e Ácido Periódico de Schiff (PAS). Semanalmente, foram determinadas as densidades volumétricas (Vv(h)) e numérica (Nv(h)) dos hepatócitos e a intensidade de vacuolização. O fígado localizou-se na cavidade celomática ventralmente à bexiga natatória, apresentou coloração levemente amarronzado e estava dividido em três lobos hepáticos. Microscopicamente, era constituído por hepatócitos que formavam uma dupla camada celular ao redor de sinusóides. A coloração do citoplasma dos hepatócitos nos machos foi mais eosinofílica e nas fêmeas basofílica. Não foi observada a formação de tríades portais e células fagocitárias. A vesícula biliar apresentava epitélio de transição e os ductos biliares epitélio simples cúbico. As densidades volumétrica e numérica dos hepatócitos durante as treze semanas não apresentaram diferença estatística, mas a correlação entre esses parâmetros foi positiva. A vacuolização foi devido a presença de glicogênio. O fígado de zebrafish possui particularidades macro e microestruturais e quantitativamente tem grande capacidade de adaptação do número e volume de hepatócitos em resposta às necessidades fisiológicas do animal naquele momento. / Liver is an essential organ and performs a number of vital activities such as metabolism, synthesis and storage. This research aimed to describe macroscopically and microscopically the liver of zebrafish and the liver temporal changes in thirteen weeks. We used forty six (46) fishes Danio rerio, adults, twenty seven (27) females and nineteen (19) males. Seven fishes were euthanized for macroscopic analyses and three fishes were euthanized weekly for thirteen weeks for microscopic analyses. It was conducted routine histological technique and the slides were stained with Hematoxylin/Eosin and periodic acid-Schiff (PAS). Weekly, it was determined volumetric (Vv(h)) and numerical (Nv(h)) densities of hepatocytes and intensity of vacuolization. The liver was located in the coelomic cavity ventrally to swim bladder, showed slightly brownish and was divided into three hepatic lobes. Microscopically, the liver consisted of hepatocytes arranged as a double cell layer around sinusoids. The staining of the cytoplasm of hepatocytes in males was more eosinophilic and basophilic than in females. Formation of portal triads and phagocytic cells were not found. The gallbladder had transitional epithelium and biliary ducts were composed by simple cubic epithelium. The volume and numerical density of hepatocytes during thirteen weeks showed no statistical difference, but the correlation between these parameters was positive. The vacuolization was due glycogen. The zebrafish liver has macro and microstructural features and quantitatively has great ability to adapt in volume and number of hepatocytes in response to the physiological needs.

A hiperprolinemia é uma doença metabólica que pode ser causada por dois distintos erros inatos do metabolismo da prolina. A hiperprolinemia tipo I ocorre por uma deficiência na enzima prolina oxidase, enquanto que a hiperprolinemia tipo II é causada pela ausência da atividade da enzima Δ1-pirrolino-5-carboxilato desidrogenase. Os pacientes afetados por essa doença geralmente apresentam manifestações neurológicas, tais como convulsões, déficit cognitivo e retardo mental. Além disso, tem sido descrita uma associação entre a hiperprolinemia moderada e doenças psiquiátricas. Entretanto, os mecanismos neuroquímicos relacionados a esses sintomas neurológicos ainda são pouco compreendidos. Portanto, no presente estudo, investigamos o efeito da exposição aguda e crônica à prolina sobre parâmetros comportamentais em peixe-zebra, tais como: atividade locomotora, ansiedade e interação social. Além disso, avaliamos o efeito in vivo e in vitro da prolina sobre a atividade da acetilcolinesterase (AChE), bem como sobre a atividade e expressão gênica das ectonucleotidases em cérebro de peixe-zebra. Para os estudos in vivo, os animais foram expostos a duas concentrações de prolina (1,5 e 3,0 mM) durante 1 hora ou 7 dias (tratamento agudo e crônico, respectivamente). Para os ensaios in vitro, diferentes concentrações de prolina foram testadas (variando de 3,0 a 1000 μM). A exposição aguda à prolina não promoveu alterações significativas nos parâmetros bioquímicos e comportamentais analisados. Entretanto, a exposição crônica à prolina na concentração de 1,5 mM provocou um aumento na atividade locomotora do peixe-zebra, caracterizada pelo aumento no número de linhas cruzadas (47%), na distância total percorrida (29%) e na velocidade média (33%). Um aumento significativo no tempo gasto na parte superior do aquário (91%) também foi observado após esse mesmo tratamento, o que pode ser interpretado como um comportamento ansiolítico. A prolina na concentração de 1,5 mM também induziu o déficit de interação social (78%), quando comparado ao grupo controle. Além disso, exposição crônica aumentou significativamente a atividade da AChE em ambos os grupos tratados (34% e 39%). Esse mesmo tratamento também aumentou a hidrólise de ATP em ambas as concentrações testadas (14% e 22%, respectivamente), enquanto que a hidrólise de ADP e AMP aumentou apenas na concentração de 3,0 mM (21% e 17%, respectivamente). A expressão gênica da E-NTPDase3 aumentou em ambos os grupos tratados após a exposição crônica à prolina, enquanto que a E-NTPDase1 teve seus níveis de transcritos aumentados apenas na concentração de 3,0 mM. A prolina, quando avaliada in vitro, não promoveu alterações significativas nas atividades das ectonucleotidase e da AChE. Por fim, demonstramos, ainda, que as alterações comportamentais e o aumento da atividade da AChE induzidos pela prolina foram completamente revertidos pela administração aguda de um antipsicótico atípico (sulpirida), mas não por um típico (haloperidol). Em conjunto, estes dados demonstram que a exposição crônica à prolina induz alterações comportamentais, bem como aumenta a atividade da AChE e catabolismo de nucleotídeos em cérebro de peixe-zebra. Esses achados podem contribuir, pelo menos em parte, para uma melhor compreensão dos mecanismos relacionados às manifestações neurológicas verificadas em pacientes hiperprolinêmicos, como os transtornos psicóticos e cognitivos. Além disso, este estudo pode facilitar o uso do peixe-zebra como modelo experimental para o estudo de erros inatos do metabolismo que afetam o sistema nervoso central. / Hyperprolinemia is a metabolic disease that may be caused by two distinct inborn errors of proline metabolism. Hyperprolinemia type I occurs by a deficiency in proline oxidase, while the hyperprolinemia type II is caused by an absence of Δ1-pyrroline-5-carboxylic acid dehydrogenase. Patients affected by this disease usually present neurological manifestations, such as seizures, cognitive impairment, and mental retardation. Moreover, an association between psychiatry disorders and moderate hyperprolinemia has been reported. However, the mechanisms related to these neurological symptoms still remain poorly understood. Therefore, in the present study, we investigated the effect of short- and long-term proline exposure on behavioral parameters in zebrafish, such as locomotor activity, anxiety, and social interaction. In addition, we evaluated the in vivo and in vitro effects of proline on acetylcholinesterase (AChE) activity, as well as on ectonucleotidase activities and gene expression in zebrafish brain. For the in vivo studies, animals were exposed at two proline concentrations (1.5 and 3.0 mM) during 1 hour or 7 days (short- or long-term treatments, respectively). For the in vitro assays, different proline concentrations (ranging from 3.0 μM to 1000 μM) were tested. Short-term proline exposure did not promote significant changes on the behavioral and biochemical parameters analyzed. Long-term exposure at 1.5 mM proline caused an increase in locomotor activity in zebrafish, characterized by an increase in the number of line crossings (47%), in the total distance traveled (29%), and in the mean speed (33%). A significant increase in the time spent in the upper portion of the test tank was also observed after the same treatment (91%), which may be interpreted as an indicator of anxiolytic behavior. Proline at 1.5 mM also induced social interaction impairment (78%), when compared to the untreated group. Moreover, long-term proline exposure significantly increased AChE activity for both treated groups (34% and 39%). This treatment also increased ATP catabolism in both concentrations tested (14% and 22%, respectively), whereas ADP and AMP hydrolysis were increased only at 3.0 mM proline (21% and 17%, respectively). The gene expression of E-NTPDase3 increased in both treated groups after long-term proline, whereas E-NTPDase1 transcript levels increased only at concentration of 3.0 mM. Proline, when assessed in vitro, did not promote significant changes on AChE and ectonucleotidase activities. At last, we demonstrated the proline-induced behavioral changes and increase in AChE activity were completely reversed by acute administration of an atypical antipsychotic drug (sulpiride), but not by a typical (haloperidol). Altogether, these data demonstrate that long-term proline exposure induces behavioral changes as well as increases AChE activity and nucleotide catabolism in zebrafish brain. These findings may contribute, at least in part, to better understand the mechanisms related to the neurological manifestations observed in hyperprolinemic patients, such as the psychotic and cognitive dysfunctions. Moreover, this study might facilitate the use of the zebrafish as experimental model for studying inborn errors of amino acid metabolism that affect the central nervous system.