Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:49:40Z : No. of bitstreams: 1 machado_bfmt_me_botib.pdf: 809978 bytes, checksum: dfad13979717e24ed1396c50d10ae323 (MD5) / Esta dissertação encontra-se dividida em introdução geral e 3 capítulos, sendo estes no formato de manuscritos a serem enviados para publicação em 3 periódicos distintos. Considerando a crescente utilização dos produtos naturais, especialmente dos obtidos a partir de plantas, objetivou-se estudar a ação antibacteriana de 27 óleos essenciais de uso em aromaterapia, sobre linhagens de Staphylococcus aureus (n=10), Escherichia coli (n=9), e Pseudomonas aeruginosa (n=9), isoladas de casos clínicos humanos, utilizando a metodologia dos discos (difusão) e determinação da concentração inibitória mínima (CIM) (diluição) em Mueller Hinton Ágar (Capítulo I). Verificou-se que as linhagens de S. aureus foram mais susceptíveis que as de Gram negativas, sendo que os valores de CIM90% foi de 0,21mg/mL para os óleos de pimenta negra (Piper nigrum) e tea tree (Melaleuca alternifolia) e 26,52mg/mL para o óleo de copaíba (Copaíba officinalis). Para E. coli, o óleo de canela (Cinnamomum cassia) foi o mais efetivo, com 2,0 mg/mL para CIM90% enquanto para P. aeruginosa o valor foi de 8,29 mg/mL com cravo da índia (Syzigium aromaticum). Utilizando valores de CIM obtidos in vitro foram selecionados 5 óleos (cravo da índia-Syzygium aromaticum, gerânio-Pelargonium graveolens, lavanda -Lavandula angustifolia, palmarosa-Cymbopogon martini e tea tree-Melaleuca alternifolia) e novamente sobre linhagens de Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa, foi verificada a ação antibacteriana através da diluição individual de cada óleo em água e salina visando redução na contagem bacteriana em função do tempo (Capítulo II). Tanto nos ensaios em água quanto salina, verificou-se que o perfil de sensibilidade das linhagens bacterianas aos óleos essenciais foram próximos entre si, porém significativamente distintos comparados aos ensaios controles... / This thesis is divided into general introduction and three chapters, which are in the format of manuscripts to be submitted for publication in three separate journals. Considering the increasing use of natural products, especially those obtained from plants, aimed to study the antibacterial activity of 27 essential oils used in aromatherapy, on Staphylococcus aureus (n=10), Escherichia coli (n=9), and Pseudomonas aeruginosa (n=9), isolated from human clinical cases, using the methodology of the disks (diffusion) and determination of minimum inhibitory concentration (MIC) (dilution) on Mueller Hinton Agar (Chapter I). It was found that the strains of S. aureus were more susceptible than the Gram negative, and the values of MIC90% was 0.21 mg/mL for the oils of black pepper (Piper nigrum) and tea tree (Melaleuca alternifolia) and 26.52 mg/mL for oil Copaiba (Copaiba officinalis). For E. coli strains, the oil of cinnamon (Cinnamomum cassia) was the most effective, with 2.0 mg/mL for MIC 90% while for P. aeruginosa, the value was 8.29 mg/mL with clove (Syzigium aromaticum). Using MIC values obtained in vitro were selected five oils (cloves-Syzygium aromaticum, geranium-Pelargonium graveolens, lavender- Lavandula angustifolia, palmarosa-Cymbopogon martini and tea tree-Melaleuca alternifolia) and the bacteria Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa, antibacterial activity was checked by dilution of individual oil and saline water in order to reduce the bacterial count in function of time (Chapter II). Both tests in saline and water, it was found that the sensitivity of bacterial strains to essential oils were close together, but were significantly different compared to control tests. Essential oils have demonstrated the potential inhibitor of the three bacterial strains, and the results were different from those obtained in vitro-ágar with Gram negative... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-29. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:13:46Z : No. of bitstreams: 1 000866649.pdf: 1623813 bytes, checksum: 7a365c7b113a6cb2107156da7f33dbc3 (MD5) / A dermatite atópica é uma doença de pele alérgica, inflamatória e pruriginosa que acomete cães geneticamente predispostos. A característica mais comum é o prurido que exerce impacto significativo na qualidade de vida do animal bem como do seu proprietário. A interleucina-31 (IL-31) é uma citocina envolvida com o grau de prurido nas alergopatias, enquanto a filagrina (FLG) é uma proteína relacionada com a adequada queratinização e hidratação do estrato córneo. O intuito desse estudo foi padronizar e quantificar a técnica de imunohistoquímica (IHQ) para IL-31 e filagrina e associa-las ao grau de prurido e restauração de barreira cutânea na dermatite atópica antes e após o tratamento tópico com repositor de lipídeos na epiderme. Todos os cães foram provenientes do atendimento clínico do Hospital Veterinário da FMVZ- Unesp Botucatu-SP. Sobre a IL-31 não houve diferença significativa entre sua expressão quando comparadas as regiões dorsal e axilar de cães normais. Quando comparamos a expressão da IL-31 entre cães com dermatite atópica e saudáveis foi possível notar maior expressão de IL-31 em cães com dermatite atópica. Quando comparamos os cães com dermatite atópica antes e após aplicação do repositor de lipídeos na epiderme a expressão da IL-31 diminuiu significativamente após a aplicação. Em se tratando da proteína filagrina não foi encontrada diferença significativa entre sua expressão quando comparadas a região axilar e cervical de cães saudáveis, o mesmo ocorreu entre essas regiões em cães com dermatite atópica antes do tratamento e após o tratamento, quando comparados de maneira isolada. Quando comparamos as regiões axilar e cervical dos cães com dermatite atópica antes e após o tratamento não houve o aumento da expressão da proteína filagrina como o esperado. Houve diferença significativa entre as regiões cervical e axilar de cães com dermatite atópica quando comparados... / Atopic dermatitis is an allergic, inflammatory and pruritic skin disease affecting genetically predisposed dogs. The most common feature is cutaneous rash that significantly impacts the animals' and owners' quality of life. Interleukin-31 (IL-31) is a cytokine involved in the degree of itching in allergies, while filaggrin (FLG) is a protein associated with adequate hydration and keratinization of the stratum corneum. The purposes of this study were to standardize the technique of immunohistochemistry (IHC) for IL-31 and filaggrin and to quantify and associate them to the degree of itching and skin barrier recovery in dogs with atopic dermatitis before and after topical treatment for lipids restitution in the epidermis. All dogs came from the clinical care of the Veterinary Hospital of FMVZ- Unesp Botucatu. There was no significant difference on the expression of IL-31 between samples obtained either from the dorsal or axillary regions of healthy dogs. When atopic dermatitis and healthy animals were compared, expression of IL-31 was noticeable higher in atopic dermatitis animals. IL-31 quantification in the atopic dermatitis animals evidenced significantly lower expression after the use of skin lipids complex in the epidermis. In the case of filaggrin protein, there was no significant difference between its expression when the axillary and cervical sites were compared both in healthy dogs and atopic dermatitis dogs and also when atopic dermatitis dogs were compared before and after treatment. Nevertheless significant difference in fillagrin levels was observed between the cervical and axillary regions of atopic dermatitis dogs when compared to healthy dogs; filagrina levels in healthy animals were larger than in atopic dermatitis dogs. IL-31 results suggest that this cytokine is involved in the physiology of atopic pruritus and that restitution of the skin epidermal barrier is essential so that we can control the pruritus and immunological...

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-16. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:59Z : No. of bitstreams: 1 000865259.pdf: 3255498 bytes, checksum: 5ab3f0da34d9a2202c8baaada085b6cc (MD5) / A Nanoskin® é uma película de celulose bacteriana produzida pela bactéria Acetobacter xylinum,por meio de um processo biotecnológico. É composta por uma rede de nanofibrilas cuja estrutura cria uma extensa superfície, a qual permite a retenção de grande quantidade de água e importantes modificações em seu formato, sem perder suas características estruturais. Objetivo: visando acrescentar novas possibilidades para a reconstrução da pálpebra, em seus folhetos profundo ou superficial, o presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de avaliar se a película de Nanoskin® poderia ser uma opção. Método: foram utilizadas 40 cobaias, do sexo masculino, que receberam fragmentos de Nanoskin® na região dorsal, em dois estudos, um direcionado para a utilização da Nanoskin nos tecidos profundos, quando o biomaterial foi colocado no subcutâneo e outro no qual a Nanoskin foi colocada na superfície da pele. Em ambos os estudos foram utilizados dois tipos de Nanoskin: grupo 1 (G1), no qual foi utilizada película de Nanoskin® (2X2 cm) sem recobrimento de gelatina no subcutâneo ou na superfície da pele e o grupo 2 (G2), que recebeu implante de Nanoskin® (2X2 cm) com revestimento de gelatina no subcutâneo e na superfície da pele. O grupo controle foi obtido com colocação de enxerto de pele de espessura total no tamanho de 2X2 cm, contíguo ao implante de Nanoskin®, em todos os animais de G1 e de G2 do experimento que estudou o biomaterial na superfície da pele. Cinco animais de cada grupo foram eutanasiados em quatro momentos experimentais: 7 dias (M1), 30 dias (M2), 90 dias (M3) e 180 dias (M4). Foram realizadas avaliações morfométricas do implante das lâminas histológicas, exame histológico e exame ultraestrutural. Resultados: a Nanoskin® quando implantada no subcutâneo não foi encontrada em um animal de M3 e em cinco animais de M4. Nos momentos M3, M4 e M5, houve separação entre as suas lamelas. Houve... / The Nanoskin® is a bacterial cellulose film produced by the bacteria Acetobacter xylinum by means of a biotechnological process. It is composed by a network of nanofibrils whose structure creates a large surface area, which allows the retention of a large amount of water and significant changes in its shape without losing its structural characteristics. Purpose: aiming to add new possibilities for the reconstruction of the eyelid, in its superficial or deep lamellae, this study was developed in order to assess whether the Nanoskin® film could be an option. Method: 40 male guinea pig were used, that received Nanoskin® fragments in the dorsal region, in two studies, one directed to the use of Nanoskin® in deep tissue when the biomaterial was placed subcutaneously and another in which the Nanoskin® was placed on skin surface. In both studies we used two types of Nanoskin: group 1 (G1), which was used Nanoskin® film (2x2 cm) without gelatin coating on the subcutaneous or on the skin surface, and Group 2 (G2), which received Nanoskin® implant (2X2 cm) with gelatin coating on the subcutaneous and on the skin surface. The control group was obtained with full-thickness skin graft placement on the size of 2X2 cm Nanoskin® adjacent to the implant in all animals in G1 and G2 experiment that studied the biomaterial on the surface of the skin. Five animals from each group were euthanized at four experimental times: 7 days (M1), 30 days (M2), 90 days (M3) and 180 days (M4). Morphometric assessments of the implant and the histological slides were held, histological and ultrastructural examination. Results: the Nanoskin® when implanted subcutaneously was not found in one animal from M3 and in five animals from M4. In moments M3, M4 and M5, there was separation between their lamellae . There was a significant inflammation at the beginning of the experiment which reduced the following times, and formation of a pseudocapsule around the ...

Submitted by JORGE LUIS ALVAREZ GÓMEZ null (jorgeluisalgo@hotmail.com) on 2016-09-30T08:45:24Z No. of bitstreams: 1 DISERTAÇAO MESTRADO JLAG 29_09_16.docx.pdf: 14985307 bytes, checksum: 2a43232024785aafb3f29376d44310e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-09-30T13:41:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alvarezgomez_jl_me_jabo.pdf: 14985307 bytes, checksum: 2a43232024785aafb3f29376d44310e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-30T13:41:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alvarezgomez_jl_me_jabo.pdf: 14985307 bytes, checksum: 2a43232024785aafb3f29376d44310e4 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Tradicionalmente um enxerto é realizado em um leito receptor coberto por tecido de granulação saudável, e na atualidade, as células tronco mesenquimais representam uma excelente alternativa para estimular a cicatrização de feridas agudas e crônicas. Sendo assim, este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos de células tronco mesenquimais xenógenas na cicatrização de auto-enxertos cutâneos em leito receptor sem tecido de granulação de coelhos. Foram utilizados 60 coelhos, divididos em três grupos de 20 pacientes. O primeiro grupo (GIL) e o segundo (GIV) receberam tratamento de 2 x106 células tronco , por vias intralesional e intravenosa respetivamente, enquanto o grupo controle (GC) recebeu apenas o auto-enxerto cutâneo. Na avaliação macroscópica, enxertos dos grupos GIL e GIV apresentaram melhor coloração comparado com o grupo controle, no entanto, na avaliação microscópica as variáveis inflamação, reepitelização, necrose e neovascularização não mostraram diferencia significativa entre os três grupos (p>0,05). Conclusão: a reepitelização dos auto-enxertos cutâneos em malha em leito receptor desprovido de tecido de granulação em coelhos (Oryctolagus cuniculus ) provavelmente não precisam de técnica adjuvante para estimular a cicatrização. A versatilidade da malha permite uma aderência estável ao leito receptor, e através das fendas criadas permite a eliminação da secreção inflamatória, evitando assim a presença de seroma e garantindo a nutrição e revascularização do enxerto. / Traditionally, a graft is performed in a healthy granulation tissue bed, although nowadays, the mesenchymal stem cells represent an excellent alternative to stimulate wound healing in a recipient bed without a healthy granulation tissue bed. Thus, this study aimed to evaluate the effects of mesenchymal stem cells xenogeneic at the healing of skin autografts in a recipient bed without granulation tissue in rabbits. A total of 60 rabbits were divided into three groups of 20 patients. The first (GIL) and the second group (GIV) were treated with 2x106 intralesional and intravenous stem cells respectively; meanwhile the control group (CG) received only skin autograft. At the macroscopic examination, the grafts GIL and GIV groups showed better color than the control group, however, microscopic evaluation of the variables: inflammation, re-epithelization, necrosis and angiogenese showed no significant difference among the three groups (p>0,05). Conclusion: reepithelialization of meshed skin autografts from recipient bed without granulation tissue in rabbits (Oryctolagus cuniculus) probably does not need an adjuvant technique to stimulate wound healing. The versatility of the mesh allows a stable adherence to the recipient bed, and through the created slits allows the evacuation of inflammatory secretion, avoiding the presence of seroma and providing nutrition and graft revascularization.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-02Bitstream added on 2014-06-13T20:19:04Z : No. of bitstreams: 1 nascimento_sm_me_araiq.pdf: 2513485 bytes, checksum: 3687c4c4c8aaef5a5668ed797b952c8a (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O peeling químico consiste na aplicação de um ou mais agentes esfoliantes para obter, primeiramente, destruição e posterior regeneração de parte da epiderme e derme. O peeling de fenol é o método mais profundo de peeling químico, onde o agente penetra na epiderme, causando sua necrose e induzindo reação inflamatória controlada não só na epiderme como também na derme, estimulando a síntese de colágeno, determinante no processo de rejuvenescimento facial. O presente trabalho envolveu diversas etapas. A primeira foi a determinação da composição da formulação comercialmente utilizada, análise realizada com o auxílio das técnicas de Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas (CG-MS), Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) e Ressonância Magnética Nuclear de Carbono 13 (C13-RMN), chegando à composição de fenol a 50% e ácido salicílico a 13% em etanol. Foram realizados ensaios biológicos preliminares com camundongos (Mus musculus) para aprendizado do manuseio e observação dos efeitos macroscópicos do peeling. Foram realizados ensaios com coelhos (Oryctolagus cunniculus), onde foram selecionados alguns marcadores de toxicidade para a determinação de toxicidade aguda cardíaca, hepática e renal. Para todos os grupos experimentais os testes forneceram resultados negativos, mostrando a ausência de toxicidade. Ensaios de mimetização in vitro da reação ocorrente na pele, com o acompanhamento por Cromatografia em Camada Delgada (CCD), não forneceram resultados satisfatórios. Para a caracterização da pele e o entendimento do mecanismo de ação do peeling, foram realizados ensaios com camundongos (Mus musculus), onde foram utilizadas as técnicas de Histologia, Espectrometria Raman por Transformada de Fourier (FT-Raman) e Tomografia por Coerência Óptica (OCT). / Chemical peeling consists of the application on the skin of one or more exfoliating agents to obtain first destruction and then regeneration of part of the epidermis and dermis. The phenol peel is the deepest peeling method, where the agent of the peeling penetrates in the epidermis, causing a controlled wound and determining the cutaneus renewal after the synthesis of new collagen fibers. The present work involved various stages. The first was the determination of the composition of the trade sample, using Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS), High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Nuclear Magnetic Ressonance of the Nucleus C13 (13C-NMR), concluding that it is composed by 50% phenol, 13% salicylic acid in ethanol. Preliminary biological assays were performed with mice (Mus musculus) with the aim of learning the techniques of handling and the observation of the macro effects of the peeling. Rabbits (Oryctolagus cunniculus) were used to other assays, where some toxicity markers were selected and analysed to determine acute heart, liver and kidney toxicity. For all the experimental groups the results were negative. For the skin characterization and the comprehension of the action mechanism of the peeling, assays were performed with mice (Mus musculus), where it was taken into account the analysis of Histology, Fourier Transform Infrared Spectrometry (FT-Raman) and Optical Coherence Tomography (OCT)

Made available in DSpace on 2016-01-15T01:05:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000477024-Texto+Completo-0.pdf: 18287406 bytes, checksum: a76247b63c9874ac8f9c628b100c9e0b (MD5) Previous issue date: 2015 / Dendritic cells (DCs) are the major antigen-presenting cells. They provide three main signals to fully activate T cells. Signal one is when the complex peptide:MHC (p:MHC) expressed by DC is recognized by T cell receptor; signal two is the expression of co-stimulatory molecules from the B7 family (CD80 and CD86). The third signal consists in the cytokines produced by DCs, which will bias the quality of T cell response. Once one of this signal is blocked/interrupted, T cells are not fully activated. T cells are involved in the eradication of pathogens, but also in the pathogenesis of several disorders and, strategies that modulate signal two are being used to treat these disorders. Novel therapies that inhibit the second signal (checkpoint blockade) or T cell modulation by these molecules have being used/tested to manage tumors, autoimmune disorders and transplant rejection. Our group demonstrated that the M. tuberculosis protein DnaK (prokaryote Hsp70) has an immunosuppressive role on DCs, and can suppress rejection in a murine skin allograft model. Nevertheless, the molecular mechanism involved in this response need to be further elucidated. In the present work, we demonstrated that the treatment of murine DC with DnaK could decrease the basal levels TNF-α, IFN-γ and MCP-1 produced by these cells. This modulation was concomitant with a downregulation of the transcription factors C/EBPβ and C/EBPδ in a TLR2-ERK-STAT3-IL-10-dependent way. Beyond the signal three, DnaK could also downregulate the expression of MHC II (signal one) and CD86 (signal theree) on DCs, through the induction of a molecule called MARCH1. We developed an-situ treatment of skin grafts with DnaK prior the transplant. We observed that this treatment prolongs allograft survival with a decreased alloimmunity, and this dependent on MARCH1.The molecular pathway TLR2-ERK-STAT3-IL-10 was required for MARCH1 induction by DnaK. Moreover, we found that DnaK modulates a specific skin migratory DC – the CD103+ DCs. This is the major subset involved in skin allograft rejection. We tested in which innate receptors DnaK could bind and found that DnaK could not bind directly on TLR2, but in the LOX-1 and Siglec-E receptor, in a LOX-1/Siglec-E/TLR2 complex. Finally, from the data obtained we patented a new formulation and method to treat allografts prior the transplantation. Thus, DnaK tolerizes dendritic cells through the modulation of the three signals required to activate T cells. We believe that consists an innovative strategy to treat inflammatory disorders, rejection, asthma and sepsis. / Células dendríticas (DCs) são as principais células apresentadoras de antígenos e fornecem três sinais principais para a ativação completa das células T. O primeiro sinal consiste na apresentação do complexo peptídeo:MHC; o segundo sinal é a expressão de moléculas co-estimulatórias da família B7, como o CD80 e CD86, e o terceiro consiste no conjunto de citocinas produzidas pelas DCs que irão moldar o tipo de resposta T que será gerada. Uma vez que algum desses dois sinais é interrompido as células T não são ativadas de forma completa e, ainda, podem entrar em anergia ou apoptose. As células T estão envolvidas não apenas em respostas de defesa, mas também em uma série de patologias, e estratégias que visam sua ativação ou inibição vem sendo usadas no manejo dessas doenças. Terapias que visam a inibição do segundo sinal (checkpoint blockade) ou a modulação das células T pelas moléculas co-inibitórias tem sido testadas e utilizadas para tumores, autoimunidade e transplantes. Nosso grupo demonstrou que a proteína DnaK (Hsp70 procariótica) de M. tuberculosis tem papel imunossupressor em células dendríticas e in vivo, podendo diminuir a rejeição de transplantes cutâneos em camundongos. Porém, os mecanismos envolvidos nessa resposta ainda precisam ser elucidados. No presente trabalho, mostramos que a DnaK foi capaz de diminuir a expressão basal de TNF-α, IFN-γ e MCP-1 em DCs de camundongos. Essa modulação foi concomitante com a diminuição de dois fatores de transcrição – C/EBPβ e C/EBPδ – de maneira dependente da via molecular TLR2-ERK-STAT3-IL-10 nas DCs. Além do terceiro sinal, a DnaK pode modular a expressão dos níveis de MHC II (primeiro sinal) e CD86 (segundo sinal) nas DCs, através da indução de uma molécula chave chamada MARCH1. Em um modelo murino de aloenxerto cutâneo, o tratamento local com a DnaK, antes do transplante, prolongou a sobrevida do enxerto e diminuiu a aloimunidade de maneira dependente de MARCH1.A indução de MARCH1 pela DnaK foi dependente da via molecular TLR2-ERK-STAT3-IL-10 nas DCs. Além disso, demonstramos que a DnaK modula exclusivamente um subtipo de DC migratório da pele – as DCs CD103+. Também observamos que esse subtipo de DC é o principal subtipo celular envolvido na rejeição de transplantes de pele, gerando um conceito biológico novo nessa área. Mapeamos os receptores inatos nos quais a DnaK pode se ligar. Testamos dez receptores inatos e vimos que essa proteína não se liga diretamente no TLR2, mas sim nos receptores LOX-1 e Siglec-E, formando o complexo LOX-1/Siglec-E/TLR2. Finalmente, a partir dos dados obtidos nessa tese, formulamos uma composição e um método para a modulação do enxerto antes da realização do transplante, e depositamos uma patente junto ao INPI. Portanto, a DnaK pode tolerizar as células dendríticas através da modulação dos três sinais necessários para a ativação das células T. Acreditamos que essa estratégia pode ser utilizada no tratamento de patologias inflamatórias, incluindo a rejeição a transplantes.

Made available in DSpace on 2016-06-02T12:30:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000478920-Texto+Completo-0.pdf: 4958315 bytes, checksum: 38858f11b57077cc60813c0fa01390dd (MD5) Previous issue date: 2016 / The gastrin-releasing peptide (GRP) and its receptor (GRPR) were recently identified as specific components of pruritus, suggesting an important pharmacological potential for this system; however, the mechanisms underlying GRP/GRPR activity remain undefined. Herein, we evaluated GRPR localization and downstream signaling pathways. Our data show that GRP directly activates small-size capsaicin-sensitive DRG neurons, an effect that translates into transient calcium flux and membrane depolarization. Expression profile revealed that PI3KΎ is downstream of the GRP/GRPR axis, observed by GRP-induced Akt phosphorylation in ex vivo naive mouse spinal cords and in GRPR transiently expressing HEK293 cells. However, ex vivo mouse spinal cord stimulation by GRP failed to induce the activation of MAP-kinases, namely ERK 1/2 and p38. Intrathecal GRP administration led to intense scratching behavior, an effect significantly reduced by either GRPR antagonism or the PI3KΎ inhibition. We assessed whether the GRP/GRPR system is involved in chronic itching using the dry skin model and found that GRPR blockade or PI3KΎ inhibition reversed the scratching. We also found that p-Akt and GRPR are co-expressed in the spinal cord and in DRG neurons from dry skin mice, and that p-Akt levels are increased in these animals, an effect prevented by GRPR blockade. The intradermal injection of GRP also triggers scratching behavior, which was significantly decreased after treatment with PI3KΎ inhibitor. The itching response was also induced by the intrathecal injection of an Akt activator. Altogether, these findings are highly suggestive that GRPR is expressed by the peripheral and central terminals of DRG nociceptive afferents, which transmit itch via the PI3KΎ/Akt pathway. / O peptídeo liberador de gastrina (GRP) e seu receptor (GRPR) foram recentemente identificados como componentes específicos do prurido, com importante potencial farmacológico; no entanto, os mecanismos intracelulares que medeiam a atividade do sistema GRP/GRPR permanecem desconhecidos. O presente estudo avaliou a localização do GRPR e as vias de sinalização downstream ativadas por este receptor. Os dados obtidos mostram que o GRP ativa diretamente neurônios de pequeno diâmetro do DRG, sensíveis a capsaicina, um efeito demonstrado pelo fluxo transitório de cálcio e pela despolarização da membrana. O perfil de expressão observado sugere que a PI3KΎ é ativada downstream ao sistema GRP/GRPR, como indicado pela fosforilação de Akt (marcador de atividade de PI3KΎ) induzida por GRP, em medulas de camundongos ex vivo e, em células HEK293 transfectadas com GRPR. Contudo, a aplicação de GRP em medulas de camundongos, ex vivo, não parece depender da ativação das MAP-quinases, ERK1/2 ou p38. A injeção intratecal de GRP leva a um comportamento de coçar intenso, que é significativamente reduzido por antagonistas de GRPR ou pela inibição farmacológica de PI3KΎ.Para avaliar se o sistema GRP/GRPR estaria envolvido no prurido crônico, foi empregado o modelo de pele seca em camundongos. Neste paradigma experimental, o bloqueio de GRPR ou de PI3KΎ reverteu o comportamento de coçar. Os dados obtidos também mostram que p-Akt e GRPR estão co-localizados na medula espinhal e em neurônios do DRG de animais com pele seca e, que os níveis de p-Akt estão aumentados nesses animais, um efeito que foi prevenido pelo bloqueio de GRPR. A injeção intradérmica de GRP também induziu o comportamento de coçar, que foi significativamente reduzido após o tratamento com inibidor de PI3KΎ. Finalmente, foi demonstrado que a injeção intratecal de um ativador de Akt foi capaz de induzir coceira em camundongos. O conjunto de resultados obtidos sugere que o GRPR é expresso por terminais periféricos e centrais de neurônios nociceptivos do DRG, transmitindo o prurido através da ativação da via PI3KΎ/Akt.

Orientador: André Luiz Fraga Briso / Coorientador: Vanessa Rahal / Banca: Renato Herman Sundefeld / Banca: Fabiano Carlos Marson / Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar a penetração trans-amelodentinária do peróxido de hidrogênio (PH) aplicados em dentes bovinos pigmentados com chá preto em diferentes intensidades. Divisão dos grupos: GI imerso durante 6 dias em água destilada; GII imerso em uma infusão de 1,6 g de chá preto para 100 mL de água destilada; GIII imerso em uma infusão de 1,6 g de chá preto para 10 mL de água destilada. Para quantificar a penetração de H2O2, as amostras foram colocadas em câmaras pulpares artificiais (CPAs) e submetidas a um tratamento clareador com PH a 38%, uma vez por semana durante 3 semanas. Após o tratamento clareador, a solução tampão de acetato de CPAs, com a enzima da peroxidase foi avaliada num espectrofotômetro de reflexão. A penetração trans-amelodentinária de PH e os valores de L* obtidos em T1, T2 e T3 foram submetidos ao teste estatísticos de Kruskal-Wallis e Friedman. Em T1, a difusão de H2O2 no GI foi mais elevada do que em GII e GIII. Nos outros tempos de avaliação, os valores de penetração no GII e GIII aumentaram e permaneceram semelhantes. Os valores L* aumentaram significativamente em todos os grupos no T1. No T2, os valores L* foram maiores no GI, e os valores em GII e GIII foram semelhantes entre si. No último tempo, o GIII apresentou os menores valores de L*. A pigmentação pode influenciar a redução da penetração trans-amelodentinária de H2O2 no início do tratamento clareador. / Abstract: This study aimed to evaluate the transenamel and transdentinal penetration of H202 applied to bovine teeth that were pigmented with black tea at different intensities. Groups division: G I - immersed for 6 days in distilled water; G II - immersed in an infusion of 1.6 g of black tea per 100 mL distilled water; G III - immersed in an infusion of 1.6 g black tea per 10 mL distilled water. To quantify the penetration of H202, the specimens were placed in artificial pulp chambers (APCs) and submitted to bleaching treatment with 38% H2O2, once per week for 3 weeks. After bleaching treatment, the acetate buffer solution of APCs with peroxidase enzyme was evaluated in a reflection spectrophotometer. The transenamel and transdentinal penetration of H2O2 and the L* values obtained in T1, T2, and T3 were subjected to KruskalWallis and Friedman statistical tests. At T1, the H2O2 diffusion in G I was higher than that in G II and G III. At the other evaluation times, the penetration values in G II and G III increased and remained similar. The L* values increased significantly in all groups at T1. At T2, the L values were higher in G I, and the values in G II and G III were similar to each other. At the end of the experiment, G III showed the lowest L* values. The pigmentation level did not affect the penetration of H2O2 through the enamel and dentin, and the bleaching agent effectively changed the color of the teeth. / Mestre

Orientador: Alexandre Secorun Borges / Banca: Carlos Alberto Hussni / Banca: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Luiz Claudio Nogueira Mendes / Banca: Paulo Henrique Jorge da Cunha / Resumo: Este estudo foi realizado para caracterizar os achados dermatológicos, oftalmológicos e morfológicos da pele de cavalos com Astenia Dérmica Regional Hereditária Equina (HERDA) e padronizar um ensaio de "High Resolution Melting" (HRM), para determinar a ocorrência de heterozigotos. As avaliações e a padronização do HRM foram realizadas em cinco cavalos afetados (GA) e cinco não afetados (GC). Adicionalmente, cinco animais heterozigotos (GH) foram utilizados para padronizar o HRM. A ocorrência de heterozigotos foi determinada em 690 animais. Diversas regiões da pele foram mensuradas com cutímetro no GA e GC. Biópsias de pele foram submetidas aos exames histopatológico e ultraestrutural. Avaliação histopatológica foi realizada por dois patologistas. O exame oftalmológico incluiu, além das avaliações rotineiras, aferição dos diâmetros da córnea, paquimetria e biometria. Foi extraído DNA do sangue colhido do GA, GC, GH e de 690 cavalos e o HRM foi validado. Observou-se menor espessura de pele no GA. A sensibilidade e especificidade do diagnóstico histopatológico da pele dependeram do avaliador e da região, respectivamente. Foram observados menor espessura e maior curvatura e diâmetros da córnea no GA. O HRM apresentou elevadas acurácia e precisão. A frequência de heterozigotos foi de 4,7%. Apesar do padrão regional dos sinais dermatológicos, a diminuição da espessura da pele não é regional. Para o diagnóstico histopatológico, recomenda-se realizar biópsia de pele no pescoço, garupa ou dorso. A relevância clínica dos achados oftalmológicos deve ser investigada. O ensaio de HRM padronizado será útil na seleção dos acasalamentos, visando minimizar a ocorrência da doença / Abstract: The present study was conducted to characterize the dermatological, ophthalmological, and morphological findings from horses affected with Hereditary Equine Regional Dermal Asthenia (HERDA) and to standardize a High Resolution Melting (HRM) genotyping assay to determine the frequency of carriers. The evaluations and HRM standardization were performed in five affected (AG) and five non-affected (CG) horses. Additionally, five heterozygous (HG) horses were used to HRM standardization. The frequency of carriers was determined in 690 horses. Several skin regions of both groups were measured with a cutimeter Skin biopsies were submitted to histopathological and ultrastructural evaluations. Histopathological evaluation was performed by two pathologists. Ophthalmology included, besides the routine evaluations, corneal diameters measurement, pachymetry, and biometry. HRM was validated using purified DNA from blood samples of the AG, CG, HG and 690 horses. Skin thickness decrease was observed in the AG. Histopathological sensitivity and specificity to diagnose HERDA was dependent on the evaluator and region, respectively. HERDA horses exhibited decreased corneal thickness and increased corneal curvature and corneal diameters. The HRM assay resulted in high accuracy and precision. The estimated carrier frequency was 4.7%. Despite of the regional pattern of the dermatological signs, the decrease of skin thickness from HERDA horses is not regional. Skin samples of the neck, croup or back are recommended to diagnose HERDA. The relevance of the ocular findings should be further investigated. The standardized HRM assay will be useful in the management of breeding programs to minimize the occurrence of this disease / Doutor